一種NRP-1靶向PET分子探針及其製備方法和應用

2024-04-15 15:12:05

一種nrp-1靶向pet分子探針及其製備方法和應用
技術領域
1.本發明涉及一種nrp-1靶向pet分子探針及其製備方法和應用，屬於化學技術領域。


背景技術：

2.神經纖毛蛋白(nrps)是一種單次跨膜、非酪氨酸激酶多功能表面糖蛋白，存在於所有的脊椎動物中且結構高度保守。依據其功能和結合配體的特異性不同，nrps可分為神經纖毛蛋白-1(nrp-1)和神經纖毛蛋白-2(nrp-2)兩種亞型，其中，nrp-1主要表達於動脈和毛細血管內皮細胞中，而nrp-2主要表達於靜脈和淋巴管內皮細胞中。兩種nrps均能夠作為神經元粘附分子，在神經細胞導向、軸突生長方面發揮調控作用，並且，均被證實與血管生物學有關。除此以外，兩種nrps均能夠作為多功能蛋白，參與除血管生成和神經發育以外的多種生物過程，其中，nrp-1在腫瘤發生和免疫中也起重要作用。
3.鑑於nrp-1在多種腫瘤組織與免疫細胞上高表達，並且，能夠作為一個多功能受體，通過獨立或依靠其他配體分子的方式，在各種實體腫瘤、血液系統腫瘤及免疫學等方面中發揮重要作用，越來越多的研究以nrp-1作為重要的分子標誌物開展腫瘤診斷及抗腫瘤藥物的科學研究。當前，以nrp-1為靶點的藥物包括單克隆抗體、可溶性nrp-1類藥物、小分子多肽類藥物、信號素類藥物、rna幹擾技術等。其中，小分子多肽類藥物因易於合成及優化，選擇特異性強，用藥量少，具有優異的耐受性和有限性等優勢，逐漸成為nrp-1靶向藥物研究的熱點。但是，現有的以nrp-1為靶點的小分子多肽類藥物具有靶向特異性差、生物穩定性差和腫瘤特異性攝取低等問題。因此，亟需開發靶向特異性強、生物穩定性好且腫瘤特異性攝取率高的以nrp-1為靶點的小分子多肽類藥物。
4.分子影像技術(molecular imaging)是運用影像學手段顯示組織水平、細胞和亞細胞水平的特定分子，反映活體狀態下分子水平變化，對其生物學行為在影像方面進行定性和定量研究的科學。作為一種非侵入性活體成像技術，分子影像技術能夠在腫瘤發生解剖形態學改變前檢測出病變基因或蛋白水平的異常，提供活體內腫瘤標誌物的定量分析和實時評估，以指導疾病的早期診斷和個體化精準治療。因此，亟需開發一種靶向特異性強、靈敏度高的以nrp-1為靶點的小分子多肽類藥物，為nrp-1高表達的惡性腫瘤的早期診斷和療效評估提供指導。


技術實現要素：

5.為解決上述問題，本發明提供了一種以神經纖毛蛋白-1為靶點的分子探針，所述分子探針由nrp-1靶向肽、peg鏈(疊氮-四乙二醇-羧基)和放射性核素標記基團組成，具有如下所示結構：
[0006][0007]
其中，nrp-1靶向肽為clkadk(ck2)，r為放射性核素標記基團。
[0008]
在本發明的一種實施方式中，所述放射性核素標記基團為
68
ga、[
18
f]alf、
64
cu或
89
zr。
[0009]
在本發明的一種實施方式中，當放射性核素標記基團為
68
ga時，所述分子探針具有如下所示結構：
[0010][0011]
在本發明的一種實施方式中，所述分子探針的標記前體ntoa-peg
4-ck2具有如下所示結構：
[0012][0013]
本發明還提供了一種製備上述分子探針的方法，所述方法包含如下步驟：
[0014]
步驟一：合成nrp-1靶向肽clkadk(ck2)；
[0015]
步驟二：將peg-4與nrp-1靶向肽clkadk(ck2)經縮合、脫保護，得到化合物ck2-peg4；
[0016]
步驟三：將化合物ck2-peg4與nota-nhs在鹼性條件下經反應、脫保護，得到分子探
針的標記前體ntoa-peg
4-ck2；
[0017]
步驟四：對分子探針的標記前體ntoa-peg
4-ck2進行放射性核素標記，得到分子探針；
[0018]
所述nrp-1靶向肽clkadk具有如下所示結構：
[0019][0020]
所述化合物ck2-peg4具有如下所示結構：
[0021][0022]
在本發明的一種實施方式中，所述步驟一中，使用fmoc合成法合成nrp-1靶向肽clkadk；所述步驟二中，將fmoc保護的peg-4與nrp-1靶向肽clkadk經縮合、脫保護，得到化合物ck2-peg4；
[0023]
所述fmoc保護的peg-4具有如下所示結構：
[0024][0025]
本發明還提供了一種nrp-1靶向肽，所述nrp-1靶向肽的胺基酸序列如seq id no.1所示。
[0026]
本發明還提供了上述分子探針或上述nrp-1靶向肽在神經纖毛蛋白-1顯像中的應用，所述應用非疾病的診斷和治療目的。
[0027]
本發明還提供了一種靶向神經纖毛蛋白-1的顯像藥物，述顯像藥物含有上述分子探針或上述nrp-1靶向肽。
[0028]
本發明還提供了上述分子探針或上述nrp-1靶向肽在製備腫瘤顯像藥物中的應用。
[0029]
在本發明的一種實施方式中，所述顯像藥物用於腫瘤的早期診斷和療效評價。
[0030]
在本發明的一種實施方式中，所述腫瘤為nrp-1高表達的惡性腫瘤；所述nrp-1高表達的惡性腫瘤包括乳腺癌、腦膠質瘤、肺癌或胰腺癌中的至少一種。
[0031]
本發明還提供了一種靶向腫瘤的顯像藥物，所述顯像藥物含有上述分子探針或上述nrp-1靶向肽。
[0032]
在本發明的一種實施方式中，所述顯像藥物用於腫瘤的早期診斷和療效評價。
[0033]
在本發明的一種實施方式中，所述腫瘤為nrp-1高表達的惡性腫瘤；所述nrp-1高表達的惡性腫瘤包括乳腺癌、腦膠質瘤、肺癌或胰腺癌中的至少一種。
[0034]
本發明技術方案，具有如下優點：
[0035]
本發明提供了一種分子探針，所述分子探針由nrp-1靶向肽、peg鏈和放射性標記基團組成，具有以下優勢：
[0036]
第一，所述分子探針的nrp-1靶向肽clkadk(ck2)對nrp-1蛋白具有優異的靶向特異性(對nrp-1蛋白的結合常數為26.24
±
3.70nm)，並且，連接放射性核素配位基團nota後，ck2的生物活性幾乎不受影響(對nrp-1蛋白的結合常數為25.39
±
1.65nm)，因此，所述分子探針對nrp-1蛋白的靶向特異性好、靈敏度高，能夠在體外及體內有效區分nrp-1表達陰性和陽性表達腫瘤；
[0037]
第二，所述分子探針能夠快速(10min)到達腫瘤部位(腫瘤特異性攝取率高)，並在腫瘤處保持良好的顯像效果，且非特異性組織攝取低；
[0038]
第三，所述分子探針的體內生物半衰期短，並且，非靶組織中所述分子探針能夠通過腎臟排洩系統迅速排出體外，能夠獲得良好的腫瘤信噪比；
[0039]
第四，所述分子探針的體外穩定性好，在pbs和胎牛血清(fbs)中均能保持良好的生物穩定性，
[0040]
綜上，所述分子探針能夠通過pet成像對nrp-1高表達的惡性腫瘤(例如，乳腺癌)的早期診斷和療效評估提供指導，極具應用前景。
[0041]
進一步地，所述放射性核素標記基團為
68
ga；當放射性核素標記基團為
68
ga時，所述分子探針的合成方法簡單，並且，採用放射性半衰期短的核素
68
ga進行標記時，標記條件溫和，無需純化即可獲得高放射性產率和高放射性純度的分子探針，易於臨床應用。
附圖說明
[0042]
圖1：標記前體ntoa-peg
4-ck2高分辨質譜分析圖。
[0043]
圖2：標記前體ntoa-peg
4-ck2高效液相色譜分析圖。
[0044]
圖3：分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2放射性高效液相檢測圖。
[0045]
圖4：化合物ck2與nrp-1結合常數測定曲線。
[0046]
圖5：化合物nota-ck2與nrp-1結合常數測定曲線。
[0047]
圖6：化合物ck3與nrp-1結合常數測定曲線。
[0048]
圖7：分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2在pbs孵育0、0.5、1、2小時的穩定性hplc分析。
[0049]
圖8：分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2在胎牛血清(fbs)孵育0、0.5、1、2小時的穩定性hplc分析。
[0050]
圖9：mda-mb-231細胞和nci-h1299細胞中nrp-1表達的western blot檢測結果。
[0051]
圖10：分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2在mda-mb-231細胞和nci-h1299細胞中的攝取值。
[0052]
圖11：分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2在mda-mb-231和nci-h1299模型的micropet顯像結果。
[0053]
圖12：分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2在mda-mb-231和nci-h1299模型腫瘤和肌肉攝取的曲線。
[0054]
圖13：分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2在mda-mb-231和nci-h1299模型的腫瘤/肌肉靶本比。
[0055]
圖14：分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2在經sb-203580治療mda-mb-231模型的micropet顯像結果。
[0056]
圖15：分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2在經sb-203580治療mda-mb-231模型腫瘤和肌肉攝取的曲線。
[0057]
圖16：分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2在經sb-203580治療mda-mb-231模型的腫瘤/肌肉靶本比。
具體實施方式
[0058]
提供下述實施例是為了更好地進一步理解本發明，並不局限於所述最佳實施方式，不對本發明的內容和保護範圍構成限制，任何人在本發明的啟示下或是將本發明與其他現有技術的特徵進行組合而得出的任何與本發明相同或相近似的產品，均落在本發明的保護範圍之內。
[0059]
下述實施例中未註明具體實驗步驟或條件者，按照本領域內的文獻所描述的常規實驗步驟的操作或條件即可進行。所用試劑或儀器未註明生產廠商者，均為可以通過市購獲得的常規試劑產品。
[0060]
實施例1：一種以nrp-1為靶點的分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2
[0061]
本實施例提供了一種以nrp-1為靶點的分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2，以nrp-1為靶點的分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2由胺基酸序列如seq id no.1所示的nrp-1靶向肽clkadk(ck2)、peg鏈和放射性核素標記基團組成，具有如下所示結構：
[0062][0063]
實施例2：一種製備以nrp-1為靶點的分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2的方法
[0064]
本實施例提供了實施例1所述的以nrp-1為靶點的的分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2的製備方法，具體步驟如下：
[0065]
步驟一：用二氯甲烷衝洗砂芯漏鬥兩次，抽乾，在抽乾的砂芯漏鬥中加入2-氯三苯甲基氯樹脂(負載量為1.106mmol/g，271.25mg)，並加入10ml的二氯甲烷浸泡溶脹2-氯三苯甲基氯樹脂，浸泡溶脹10min後，抽乾；
[0066]
步驟二：向步驟一獲得的砂芯漏鬥中加入胺基酸fmoc-lys(boc)-oh(0.375mmol)，用10ml的dmf(n,n-二甲基甲醯胺)溶解，得到溶解液；在溶解液中加入dipea(n,n-二異丙基乙胺)(130μl，0.75mmol)調節溶解液的ph至8後，將溶解液在25℃下振蕩3h，振蕩完成後，抽乾溶劑；加入10ml dmf/ch3oh/dipea的混合溶液(dmf/ch3oh/dipea＝7：2：1，v/v/v)清洗濾餅，振蕩10min後抽濾，重複操作一次，以除去未反應的胺基酸；再用10ml dmf(hplc型)洗滌兩次，振蕩2min後抽濾；向砂芯漏鬥中加入10ml含20vt％哌啶的dmf溶液，振蕩10min後抽濾，重複操作三次，以脫掉胺基酸上的fmoc保護基團；再用10ml dmf(hplc型)清洗濾餅五次，以洗去多餘的哌啶；洗滌結束後，抽乾溶劑，取樣進行kaiser測試，試劑顏色顯示為深紫色，說明此時fomc基團已脫除，裸露出氨基，可連接下一個胺基酸；
[0067]
步驟三：在步驟二的基礎上，將fmoc-lys(boc)-oh(0.375mmol)依次替換為fmoc-asp(otbu)-oh(0.375mmol)、fmoc-ala-oh(0.375mmol)、fmoc-lys(boc)-oh(0.375mmol)、fmoc-leu-oh(0.375mmol)和fmoc-cys(trt)-oh(0.375mmol)，並重複步驟二的操作，得到nrp-1靶向肽clkadk(ck2)；
[0068]
所述nrp-1靶向肽clkadk(ck2)具有如下所示結構：
[0069][0070]
步驟四：向步驟三獲得的砂芯漏鬥中加入fmoc-peg
4-cooh(0.375mmol)和hbtu(苯並三氮唑-四甲基脲六氟磷酸鹽)(1mmol)，用10ml超幹dmf(n,n-二甲基甲醯胺)溶解，得到溶解液；在溶解液中加入dipea(n，n-二異丙基乙胺)(2mmol)調節溶解液的ph至8後，將溶解液在25℃下振蕩3h，振蕩完成後，抽乾溶劑；向砂芯漏鬥中加入10ml含20vt％哌啶的dmf溶液，振蕩10min後抽濾，重複操作三次，以脫掉胺基酸上的fmoc保護基團；向砂芯漏鬥中加入10ml含1vt％tfa(三氟乙酸)的ch2cl2溶液，得到混合液；將混合液在25℃下振蕩10min，振蕩完成後，濾出帶有化合物ck2-peg4的濾液，重複該操作，直至2-氯三苯甲基氯樹脂出現酒紅色且不褪色時停止；將收集到的濾液用旋轉蒸發儀除去溶劑，用冷乙醚(4℃)沉澱後，轉移至50ml離心管，離心吸除上清液；取沉澱乾燥，得到化合物ck2-peg4；
[0071]
所述fmoc-peg4-cooh具有如下所示結構：
[0072][0073]
所述化合物ck2-peg4具有如下所示結構：
[0074][0075]
步驟五：將化合物ck2-peg4(0.02mmol)和nota-nhs(0.06mmol)溶解於200μl的dmf
(n,n-二甲基甲醯胺)中，得到溶解液；在溶解液中加入dipea(n,n-二異丙基乙胺)(50μl，0.28mmol)調節溶解液的ph至8後，在氮氣的保護下，於25℃、150rpm下攪拌3h，得到反應液；將反應液用油泵旋幹，用冷乙醚(4℃)沉澱，於25℃下超聲30s後，轉移至50ml離心管，離心吸除上清液(離心前於-20℃放置10min)；取沉澱乾燥，得到化合物ntoa-peg
4-ck2-1；
[0076]
步驟六：將化合物ntoa-peg
4-ck2-1(0.02mmol)和2ml tfa(三氟乙酸)、80μl乙腈、80μltips(三異丙基矽烷)混合後，於25℃、150rpm下攪拌2h，得到反應液；將反應液用旋轉蒸發儀除去有機溶劑，用冷乙醚(4℃)沉澱後，轉移至50ml離心管，離心吸除上清液；取沉澱乾燥後，得到以nrp-1為靶點的分子探針的標記前體ntoa-peg
4-ck2；
[0077]
步驟七：使用1.4ml濃度為0.05m的hcl從
68
ge/
68
ga發生器(itg)中洗脫
68
ga離子，並與濃度為1.25m的naoac緩衝液混合以將ph值調節至4.0，得到混合物；將混合物直接轉移到含有10μg的以nrp-1為靶點的分子探針的標記前體ntoa-peg
4-ck2的5ml塑料管中，混勻後，將混合物在油浴鍋中於37℃孵育15min，得到以nrp-1為靶點的分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2。
[0078]
採用高分辨質譜和高效液相對標記前體ntoa-peg
4-ck2進行分析，分析結果見圖1和圖2。使用gabi nova放射性檢測器對[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2標記後反應液進行放射性hplc檢測，檢測結果見圖3。通過放射性產物峰面積/總峰面積計算[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2的放射化學純度(rcp)，計算結果為：標記所得產物的放射化學純度高於99％。
[0079]
經衰減校正後，通過放射性hplc檢測計算[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2的最終放射化學產率(rcy)，計算結果為：98％，通過摩爾活度(am)＝產物放射性活度/m(前體的摩爾質量)計算[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2的摩爾活度，計算結果為：21.92
±
2.06gbq/μmol。
[0080]
對比例1：一種nrp-1靶向環七肽clkadkakc(ck3)
[0081]
本對比例提供了一種nrp-1靶向環七肽clkadkakc(ck3)，nrp-1靶向環七肽clkadkakc(ck3)的胺基酸序列如seq id no.2所示，具有如下所示結構：
[0082][0083]
對比例2：一種製備nrp-1靶向環七肽clkadkakc(ck3)的方法
[0084]
本對比例提供了對比例1的nrp-1靶向環七肽clkadkakc(ck3)的製備方法參見文獻「feng gk,et al.spect and near-infrared fluorescence imaging of breast cancer with a neuropilin-1-targeting peptide.j control release.2014；192:236-42.」。
[0085]
實驗例1：以nrp-1為靶點的分子探針對nrp-1蛋白的結合常數實驗
[0086]
本實驗例提供了以nrp-1為靶點的分子探針對nrp-1蛋白的結合常數實驗，具體過程如下：
[0087]
使用mo-l018 red-tris-nta蛋白標記試劑盒(購自nanotemper technologies公司)，採用monolithnt.115微量熱泳動儀，分別對實施例2製得的nrp-1靶向肽clkadk(ck2)、化合物nota-ck2、對比例2製得的nrp-1靶向環七肽clkadkakc(ck3)與nrp-1蛋白(購自義翹神州公司)進行結合常數測定，結果如圖4～6所示。
[0088]
由圖4～6可以看出，nrp-1靶向肽clkadk(ck2)和化合物nota-ck2均對nrp-1蛋白具有優異的結合能力，結合常數分別為26.24
±
3.70nm和25.39
±
1.65nm；nrp-1靶向環七肽clkadkakc(ck3)雖然也和nrp-1靶向肽clkadk(ck2)一樣，也符合c末端規則，但其結合常數為867.27
±
1.77nm，此結果表明nrp-1靶向肽clkadk(ck2)和化合物nota-ck2對nrp-1蛋白具有更高的靶向特異性和結合能力。
[0089]
實驗例2：以nrp-1為靶點的分子探針的體外穩定性實驗
[0090]
本實驗例提供了以nrp-1為靶點的分子探針的體外穩定性實驗，具體過程如下：
[0091]
實驗一：將實施例2製得的以nrp-1為靶點的分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2與pbs緩衝液(ph 7.4，0.01m)以1：9的體積比混合，得到混合液；將混合液在37℃下孵育0、0.5、1、2h；孵育結束後，取孵育液使用gabi nova放射性檢測器進行放射性hplc分析，分析結果見
圖7。
[0092]
實驗二：將實施例2製得的以nrp-1為靶點的分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2與胎牛血清(fbs，購自bi公司)以1：9的體積比混合，得到混合液；將混合液在37℃下孵育0、0.5、1、2h；孵育結束後，取20μl孵育液，加入等體積乙腈，在12000g條件下高速離心5min使血清與蛋白分離，吸取上清液使用gabi nova放射性檢測器進行放射性hplc分析，分析結果見圖8。
[0093]
由圖7～8可知，分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2在pbs和胎牛血清中孵育2h後hplc圖譜的主峰比例始終大於95％，表明分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2具有良好的穩定性。
[0094]
實驗例3：以nrp-1為靶點的分子探針的細胞攝取實驗
[0095]
採用western blot法測定三陰性乳腺癌細胞mda-mb-231和肺癌細胞nci-h1299中nrp-1蛋白的表達，測定結果見圖9。從圖9中可以看出，mda-mb-231細胞和nci-h1299細胞分別為nrp-1陽性表達細胞株和nrp-1陰性表達細胞株，能夠用於以nrp-1為靶點的分子探針的靶向性研究模型。
[0096]
本實驗例使用mda-mb-231細胞和nci-h1299細胞提供了以nrp-1為靶點的分子探針的細胞攝取實驗，具體過程如下：
[0097]
將1
×
106個mda-mb-231細胞(nrp-1陽性細胞，購自上海中科院細胞庫)和nci-h1299細胞(nrp-1陰性細胞，購自上海中科院細胞庫)置於放免管中後，繼續在放免管中添加實施例2製得的以nrp-1為靶點的分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2(1μci/管)，在37℃水浴鍋中分別孵育0.5h、1h、1.5h和2h。孵育結束後，在放免管中加入500μl冷(4℃)的pbs緩衝液(ph＝7.4，0.01m)，4000r/min離心5min。離心後，重複上述操作一次，並用伽馬計數器進行計數檢測樣品的cpm值，細胞攝取％ad結果以細胞內的cpm與總劑量的cpm比值表示，檢測結果見圖10。
[0098]
從圖10可以看出，mda-mb-231細胞對分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2的攝取顯著高於nci-h1299細胞，表明分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2具有良好的靶向特異性。
[0099]
實驗例4：以nrp-1為靶點的分子探針的小鼠pet成像實驗
[0100]
本實驗例提供了以nrp-1為靶點的分子探針的小鼠pet成像實驗，具體過程如下：
[0101]
實驗一：將mda-mb-231細胞(nrp-1陽性細胞，購自上海中科院細胞庫)和nci-h1299細胞(nrp-1陰性細胞，購自上海中科院細胞庫)分別按照5
×
106個的劑量以皮下注射的方式植入雌性balb/c小鼠(5周齡，購自常州卡文斯實驗動物公司)的右前肢腋下；每隔一天監測腫瘤直徑，當腫瘤體積達到200.0
±
25.0mm3(腫瘤體積計算公式：1/2
×
長徑
×
短徑2)時，用含有2vt％異氟烷的氧氣以2l/min的流速麻醉小鼠；將小鼠的四肢與尾巴固定後，將溶解在100μl生理鹽水中的150μci的實施例2製得的以nrp-1為靶點的分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2通過尾靜脈注射；探針注射完畢後，立即執行60min的動態pet掃描，pet顯像結果見圖11；掃描完成後，使用osem3d/map算法將60min的pet成像結果分割成12幀圖像，每5min一幀，以實現對小鼠體內成像的實時分析；採用asipro軟體中感興趣區(roi)技術對探針在腫瘤和肌肉組織中的累積情況進行勾畫，分析結果見圖12，其中，分子探針在活體內各個組織中的攝取值以％id/ml(每毫升注射劑量百分比)表示；比較探針在腫瘤與肌肉中的攝取，研究探針在動物模型中的信噪比，分析結果見圖13。
[0102]
實驗二：將mda-mb-231細胞(nrp-1陽性細胞，購自上海中科院細胞庫)按照5
×
106個的劑量以皮下注射的方式植入雌性balb/c小鼠(5周齡，購自常州卡文斯實驗動物公司)
的右前肢腋下；每隔一天監測腫瘤直徑，當腫瘤體積達到150.0
±
25.0mm3(腫瘤體積計算公式：1/2
×
長徑
×
短徑2)時，對腫瘤進行化療藥物sb-203580(購自sigma-aldrich公司)治療，治療方案為：用藥劑量2mg/kg，尾靜脈注射，兩天一次，共治療5次，治療期間對腫瘤大小進行監測；治療結束後，用含有2vt％異氟烷的氧氣以2l/min的流速麻醉小鼠；將小鼠的四肢與尾巴固定後，將溶解在100μl生理鹽水中的150μci的實施例2製得的以nrp-1為靶點的分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2通過尾靜脈注射；探針注射完畢後，立即執行60min的動態pet掃描，對小鼠進行pet掃描，掃描結果如圖14所示；對治療腫瘤中探針的累積進行roi分析，如圖15所示；腫瘤/肌肉攝取比值如圖16所示。
[0103]
從圖11中可以清晰看出，分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2在mda-mb-231腫瘤中的攝取明顯高於nci-h1299腫瘤。圖12的roi分析表明，分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2在注射10min時腫瘤攝取最高，在mda-mb-231腫瘤和nci-h1299腫瘤中的攝取值分別為4.16
±
0.67％id/ml和1.03
±
0.27％id/ml，表明分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2具有良好的nrp-1靶向性。同時，圖13的腫瘤/肌肉靶本比顯示，分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2在mda-mb-231腫瘤中具有良好的信噪比，在注射60後最大靶本比可達5.22
±
0.1.8，對比nci-h1299腫瘤具有顯著性差異。
[0104]
從圖13中可以清晰看出，分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2在經sb-203580治療後的mda-mb-231腫瘤中的幾乎沒有顯像。圖15的roi分析表明，分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2在注射60min內腫瘤攝取與肌肉攝取相當，表明分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2在經sb-203580治療後的mda-mb-231中攝取較低。同時，圖16的腫瘤/肌肉靶本比也證實分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2在經sb-203580治療後的mda-mb-231腫瘤中無明顯攝取。結果表明分子探針[
68
ga]ntoa-peg
4-ck2可評價乳腺癌腫瘤治療效果。
[0105]
顯然，上述實施例僅僅是為清楚地說明所作的舉例，而並非對實施方式的限定。對於所屬領域的普通技術人員來說，在上述說明的基礎上還可以做出其它不同形式的變化或變動。這裡無需也無法對所有的實施方式予以窮舉。而由此所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處於本發明創造的保護範圍之中。