新降解劑綴合物的製作方法

2024-04-14 01:36:05

1.本公開提供了新降解劑(neodegrader)綴合物，其中新降解劑與結合部分綴合。還提供了包含所述綴合物的組合物。這些綴合物和組合物可用於治療有需要的受試者的癌症。


背景技術：

2.通過免疫調節醯亞胺藥物的有效性已證實蛋白質降解是一種治療策略。這些化合物具有與小腦蛋白(cereblon)(crbn)結合併促進由crl4
crbn e3泛素連接酶介導的底物蛋白的募集和泛素化的能力。據認為，免疫調節醯亞胺充當「分子膠」，作為疏水貼片填充結合界面，其重新編程連接酶和新底物之間的蛋白質相互作用。
3.儘管這些化合物作為癌症的新治療方法令人興奮，但迄今為止，它們僅限於用於血液系統惡性腫瘤，諸如多發性骨髓瘤和骨髓增生異常症候群(mds)。擴展可通過降解其他癌蛋白發揮作用的化合物庫(其中許多被認為是「不可成藥的」)是藥物開發的一個活躍領域。因此，持續需要能夠靶向這些替代癌蛋白並治療多種癌症的新化合物。


技術實現要素：

4.在某些方面，本公開提供了式(i)的綴合物：
[0005][0006]
或其藥學上可接受的鹽，其中：
[0007]
a為1至10的整數；
[0008]
a為苯基或c
4-c
10
環烷基環；
[0009]
u選自nh和cf2；
[0010]
r1獨立地選自氫和滷代基；
[0011]
x選自-nr
2-、＝c(ch3)-、-q-(ch2)
n-和-q(ch2)mq』(ch2)
n-；其中
[0012]
q和q』各自獨立地為o、s或n(r2)v；
[0013]
v為1或2；
[0014]
每個r2獨立地為氫或c
1-c6烷基；
[0015]
n為1至6的整數；
[0016]
m為2至6的整數；
[0017]
其中每個基團的左側連接到l並且右側連接到a；
[0018]
前提是當x為nh或-q-(ch2)
n-時，r1為滷代基；
[0019]
l為可切割接頭或不可切割接頭；並且
[0020]
bm為能夠特異性結合蛋白質的結合部分。
[0021]
在一些方面，結合部分為抗體、抗體片段或抗原結合片段。
[0022]
在一些方面，本公開提供了式(i)的綴合物，或其藥學上可接受的鹽，其中a為2至8的整數。
[0023]
在某些方面，本公開提供了式(i)的綴合物，或其藥學上可接受的鹽，其中l為不可切割接頭。在一些方面，l選自由以下組成的組
[0024][0025]
其中：
[0026]
p為1至10的整數；
[0027]
為與x的連接點；並且
[0028]
為與結合部分的連接點。
[0029]
在一些方面，l為
[0030][0031]
在一些方面，p為5。
[0032]
在某些方面，本公開提供了式(i)的綴合物，或其藥學上可接受的鹽，其中l為可切割接頭。在一些方面，可切割接頭可被蛋白酶切割。在一些方面，l選自由以下組成的組
[0033][0034]
其中：
[0035]
q為2至10的整數；
[0036]
z1、z2、z3和z4各自獨立地不存在或為l-或d-構型的天然存在的胺基酸殘基，前提是z1、z2、z3和z4中的至少兩者為胺基酸殘基；
[0037]
為與x的連接點；並且
[0038]
為與結合部分的連接點。
[0039]
在一些方面，z1、z2、z3和z4獨立地不存在或選自由以下組成的組：l-纈氨酸、d-纈氨酸、l-瓜氨酸、d-瓜氨酸、l-丙氨酸、d-丙氨酸、l-穀氨醯胺、d-穀氨醯胺、l-穀氨酸、d-穀氨酸、l-天冬氨酸、d-天冬氨酸、l-天冬醯胺、d-天冬醯胺、l-苯丙氨酸、d-苯丙氨酸、l-賴氨酸、d-賴氨酸和甘氨酸；前提是z1、z2、z3和z4中的至少兩者為胺基酸殘基。
[0040]
在一些方面，z1不存在或為甘氨酸；z2不存在或選自由以下組成的組：l-穀氨醯胺、d-穀氨醯胺、l-穀氨酸、d-穀氨酸、l-天冬氨酸、d-天冬氨酸、l-丙氨酸、d-丙氨酸和甘氨酸；z3選自由以下組成的組：l-纈氨酸、d-纈氨酸、l-丙氨酸、d-丙氨酸、l-苯丙氨酸、d-苯丙氨酸和甘氨酸；z4選自由以下組成的組：l-丙氨酸、d-丙氨酸、l-瓜氨酸、d-瓜氨酸、l-天冬醯胺、d-天冬醯胺、l-賴氨酸、d-賴氨酸、l-苯丙氨酸、d-苯丙氨酸和甘氨酸。
[0041]
在某些方面，l為
[0042][0043]
在一些方面，q為5。
[0044]
在某些方面，本公開提供了式(i)的綴合物，或其藥學上可接受的鹽，其中l為可生物還原接頭。在一些方面，l選自由以下組成的組
[0045][0046]
其中：
[0047]
q為2至10的整數；
[0048]
r、r』、r」和r
』」
各自獨立地選自氫、c
1-c6烷氧基c
1-c6烷基、(c
1-c6)2nc
1-c6烷基和c
1-c6烷基，或者，兩個偕r基團與它們所連接的碳原子一起可形成環丁基或環丙基環；
[0049]
為與x的連接點；並且
[0050]
為與結合部分的連接點。
[0051]
在某些方面，本公開提供了式(i)的綴合物，或其藥學上可接受的鹽，其中l為酸可切割接頭。在一些方面，l選自由以下組成的組
[0052][0053]
其中：
[0054]
q為2至10的整數；
[0055]
為與x的連接點；並且
[0056]
為與結合部分的連接點。
[0057]
在某些方面，本公開提供了式(i)的綴合物，或其藥學上可接受的鹽，其中l為點擊釋放接頭。在一些方面，l選自
[0058][0059]
其中：
[0060]
q為2至10的整數；
[0061]
為與x的連接點；並且
[0062]
為與結合部分的連接點。
[0063]
在某些方面，本公開提供了式(i)的綴合物，或其藥學上可接受的鹽，其中l為焦磷酸酶可切割接頭。在一些方面，l為
[0064][0065]
其中：
[0066]
q為2至10的整數；
[0067]
為與x的連接點；並且
[0068]
為與結合部分的連接點。
[0069]
在某些方面，本公開提供了式(i)的綴合物，或其藥學上可接受的鹽，其中l為β-葡萄糖醛酸酶可切割接頭。在一些實施方案中，l選自
[0070][0071]
其中：
[0072]
q為2至10的整數；
[0073]
‑‑‑‑
不存在或為鍵；
[0074]
為與x的連接點；並且
[0075]
為與結合部分的連接點。
[0076]
在某些方面，本公開提供了式(i)的綴合物，或其藥學上可接受的鹽，其中bm為抗體或其抗原結合部分。在一些方面，結合部分結合的蛋白質為表面抗原。
[0077]
在一些方面，表面抗原包括5t4、ace、adrb3、akap-4、alk、雄激素受體、aoc3、app、軸蛋白1、axl、b7h3、b7-h4、bcl2、bcma、bcr-abl、boris、bst2、c242、c4.4a、ca 125、ca6、ca9、caix、ccl11、ccr5、cd123、cd133、cd138、cd142、cd15、cd15-3、cd171、cd179a、cd18、cd19、cd19-9、cd2、cd20、cd22、cd23、cd24、cd25、cd27l、cd28、cd3、cd30、cd31、cd300lf、cd33、cd352、cd37、cd38、cd4、cd40、cd41、cd44、cd44v6、cd5、cd51、cd52、cd54、cd56、cd62e、cd62p、cd62l、cd70、cd71、cd72、cd74、cd79a、cd79b、cd80、cd90、cd97、cd125、cd138、cd141、cd147、cd152、cd154、cd326、cea、ceacam5、cftr、凝集因子、ckit、閉合蛋白3、閉合蛋白18.2、cldn6、clec12a、cll-1、cll3、c-met、crypto 1生長因子、cs1、ctla-4、cxcr2、cxorf61、細胞周期蛋白b1、cyp1b1、鈣粘蛋白-3、鈣粘蛋白-6、dll3、e7、ednrb、efna4、egfr、egfrviii、elf2m、emr2、enpp3、epcam、epha2、肝配蛋白a4、肝配蛋白b2、ephb4、erbb2(her2/neu)、erbb3、erg(tmprss2 ets融合基因)、etbr、etv6-aml、fap、fcar、fcrl5、fgfr1、fgfr2、fgfr3、fgfr4、flt3、葉酸受體α、葉酸受體β、folr1、fos相關抗原1、巖藻糖基gm1、gcc、gd2、gd3、globoh、gm3、gpc1、gpc2、gpc3、gp1oo、gpnmb、gpr20、gprc5d、gucy2c、havcr1、her2、
her3、hgf、hmi.24、hmwmaa、hpv e6、htert、人端粒酶逆轉錄酶、icam、icos-l、ifn-α、ifn-γ、igf-i受體、igll1、il-2受體、il-4受體、il-13ra2、il-1 1ra、il-1、il-12、il-23、il-13、il-22、il-4、il-5、il-6、幹擾素受體、整聯蛋白(包括α4、αvβ3、αvβ5、αvβ6、α1β4、α4β1、α4β7、α5β1、α6β4、α
iib
β3整聯蛋白)、整聯蛋白αv、腸羧基酯酶、kit、lage-1a、lair1、lamp-1、lck、豆莢蛋白(legumain)、lewisy、lfa-1(cd11a)、l-選擇素(cd62l)、lilra2、liv-1、lmp2、lrrc15、ly6e、ly6k、ly75、mad-ct-1、mad-ct-2、mage al、melana/martl、間皮素、ml-iap、msln、粘蛋白、muc1、muc16、mut hsp70-2、mycn、肌肉生長抑制素、na17、napi2b、nca-90、ncam、連接蛋白(nectin)-4、ngf、notch1、notch2、notch3、notch4、ny-br-1、ny-eso-1、鄰乙醯基-gd2、or51e2、oy-tes1、p53、p53突變體、panx3、pap、pax3、pax5、p-cad、pcta-1/半乳凝素8、pd-l1、pd-l2、pdgfr、pdgfr-β、磷脂醯絲氨酸、pik3ca、plac1、聚唾液酸、前列腺酶、前列腺癌細胞、前列腺素、銅綠假單胞菌、狂犬病毒、生存素和端粒酶、prss21、psca、psma、ptk7、rage-1、rankl、ras突變體、呼吸道合胞病毒、恆河猴因子、rhoc、ron、ror1、ror2、ru1、ru2、肉瘤易位斷點、sart3、slamf7、slc44a4、sle、slitrk6、精子蛋白17、1-磷酸鞘氨醇、ssea-4、ssx2、steap1、tag72、tarp、tcrβ、tem1/cd248、tem7r、腱生蛋白c、tf、tgf-1、tgf-β2、tnf-α、tgs5、tie 2、tim-1、tn ag、trac、trail-r1、trail-r2、trop-2、trp-2、trpv1、tshr、腫瘤抗原ctaa16.88、酪氨酸酶、upk2、vegf、vegfr1、vegfr2、波形蛋白、wt1、xage1、或它們的組合。
[0078]
在某些方面，表面抗原包括her2、cd20、cd38、cd33、bcma、cd138、egfr、fgfr4、gd2、pdgfr、tem1/cd248、trop-2、或它們的組合。
[0079]
在一些方面，bm為抗體，其中該抗體選自由以下組成的組：利妥昔單抗(rituximab)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、吉妥珠單抗(gemtuzumab)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、奧比妥珠單抗(obinutuzumab)、奧法木單抗(ofatumumab)、奧拉妥珠單抗(olaratumab)、安妥昔單抗(ontuximab)、伊沙妥昔單抗(isatuximab)、沙西妥珠單抗(sacituzumab)、u3-1784、達雷木單抗(daratumumab)、sti-6129、林妥珠單抗(lintuzumab)、humy9-6、貝蘭坦單抗(balantamab)、英達妥昔單抗(indatuximab)、西妥昔單抗(cetuximab)、迪努妥昔單抗(dinutuximab)、抗cd38 a2抗體、huat13/5抗體、阿侖單抗(alemtuzumab)、替伊莫單抗(ibritumomab)、託西莫單抗(tositumomab)、貝伐單抗(bevacizumab)、帕尼單抗(panitumumab)、曲美木單抗(tremelimumab)、替昔木單抗(ticilimumab)、卡妥索單抗(catumaxomab)、奧戈伏單抗(oregovomab)和維妥珠單抗(veltuzumab)。在一些方面，抗體為利妥昔單抗、曲妥珠單抗、帕妥珠單抗、or000213(humy9-6 igg4 s228p)、林妥珠單抗或吉妥珠單抗。
[0080]
在某些方面，本公開提供了式(i)的綴合物，或其藥學上可接受的鹽，其中：
[0081]
a為苯基；
[0082]
u為nh；
[0083]
r1為滷代基；並且
[0084]
x為-n(r2)v(ch2)mo(ch2)
n-；其中：
[0085]
v為1；
[0086]
m和n為2；並且
[0087]
r2為甲基。
[0088]
在某些方面，本公開提供了式(i)的綴合物，或其藥學上可接受的鹽，其中：
[0089]
a為苯基；
[0090]
u為nh；
[0091]
r1為滷代基；並且
[0092]
x為-n(r2)v(ch2)mo(ch2)
n-；其中：
[0093]
v為2；
[0094]
m和n為2；並且
[0095]
每個r2為甲基。
[0096]
在某些方面，本公開提供了式(i)的綴合物，或其藥學上可接受的鹽，其中：
[0097]
a為苯基；
[0098]
u為nh；
[0099]
r1為滷代基；並且
[0100]
x為-o(ch2)
n-；其中：
[0101]
n為2。
[0102]
在某些方面，本公開提供了式(i)的綴合物，或其藥學上可接受的鹽，其中：
[0103]
a為苯基；
[0104]
u為nh；
[0105]
r1為滷代基；並且
[0106]
x為-s(ch2)
n-；其中：
[0107]
n為2。
[0108]
在某些方面，本公開提供了式(i)的綴合物，或其藥學上可接受的鹽，其中：
[0109]
a為苯基；
[0110]
u為nh；
[0111]
r1為氫；並且
[0112]
x為
‑‑
nr
2-；其中：
[0113]
r2為甲基。
[0114]
在某些方面，本公開提供了式(i)的綴合物，或其藥學上可接受的鹽，其中：
[0115]
a為苯基；
[0116]
u為nh；
[0117]
r1為滷代基；並且
[0118]
x為
‑‑
nr
2-；其中：
[0119]
r2為氫。
[0120]
在某些方面，本公開提供了式(i)的綴合物，或其藥學上可接受的鹽，其中：
[0121]
a為苯基；
[0122]
u為nh；
[0123]
r1為氫；並且
[0124]
x為-c(ch3)＝。
[0125]
在某些方面，本公開提供了式(i)的綴合物，或其藥學上可接受的鹽，其中：
[0126]
a為c
4-c
10
環烷基環；
[0127]
u為nh；
[0128]
r1為氫；並且
[0129]
x為-n(r2)(ch2)mo(ch2)
n-；其中：
[0130]
n為1；
[0131]
m為2；並且
[0132]
r2為甲基。
[0133]
在某些方面，本公開提供了(ii)的化合物：
[0134][0135]
或其藥學上可接受的鹽，其中：
[0136]
a為苯基或c
4-c
10
環烷基環；
[0137]
r1獨立地選自氫和滷代基；
[0138]
u選自nh和cf2；並且
[0139]
r2選自-c(o)r3、-n(r4)2、-(ch2)noh、-(ch2)nsh、-(ch2)nn(r4)2、-(ch2)nq』(ch2)moh、-(ch2)nq』(ch2)msh和-(ch2)nq』(ch2)mn(r4)2；其中
[0140]
r3為氫或c
1-c6烷基；
[0141]
每個r4獨立地為氫或c
1-c6烷基；
[0142]
q』為o、s或nr4；
[0143]
n為1-6；並且
[0144]
m為2-5；
[0145]
前提是當r2為nh2、-(ch2)nnh2或-(ch2)noh時，則r1為滷代基。
[0146]
在某些方面，本公開提供了(iii)的化合物：
[0147][0148]
或其藥學上可接受的鹽。
[0149]
在某些方面，本公開提供了(iv)的化合物：
γ、igf-i受體、igll1、il-2受體、il-4受體、il-13ra2、il-11ra、il-1、il-12、il-23、il-13、il-22、il-4、il-5、il-6、幹擾素受體、整聯蛋白(包括α4、αvβ3、αvβ5、αvβ6、α1β4、α4β1、α4β7、α5β1、α6β4、α
iib
β3整聯蛋白)、整聯蛋白αv、腸羧基酯酶、kit、lage-1a、lair1、lamp-1、lck、豆莢蛋白、lewisy、lfa-1(cd11a)、l-選擇素(cd62l)、lilra2、liv-1、lmp2、lrrc15、ly6e、ly6k、ly75、mad-ct-1、mad-ct-2、mage al、melana/martl、間皮素、ml-iap、msln、粘蛋白、muc1、muc16、mut hsp70-2、mycn、肌肉生長抑制素、na17、napi2b、nca-90、ncam、連接蛋白-4、ngf、notch1、notch2、notch3、notch4、ny-br-1、ny-eso-1、鄰乙醯基-gd2、or51e2、oy-tes1、p53、p53突變體、panx3、pap、pax3、pax5、p-cad、pcta-1/半乳凝素8、pd-l1、pd-l2、pdgfr、pdgfr-β、磷脂醯絲氨酸、pik3ca、plac1、聚唾液酸、前列腺酶、前列腺癌細胞、前列腺素、銅綠假單胞菌、狂犬病毒、生存素和端粒酶、prss21、psca、psma、ptk7、rage-1、rankl、ras突變體、呼吸道合胞病毒、恆河猴因子、rhoc、ron、ror1、ror2、ru1、ru2、肉瘤易位斷點、sart3、slamf7、slc44a4、sle、slitrk6、精子蛋白17、1-磷酸鞘氨醇、ssea-4、ssx2、steap1、tag72、tarp、tcrβ、tem1/cd248、tem7r、腱生蛋白c、tf、tgf-1、tgf-β2、tnf-α、tgs5、tie 2、tim-1、tn ag、trac、trail-r1、trail-r2、trop-2、trp-2、trpv1、tshr、腫瘤抗原ctaa16.88、酪氨酸酶、upk2、vegf、vegfr1、vegfr2、波形蛋白、wt1、xage1、或它們的組合。
[0156]
在一些方面，表面抗原包括her2、cd20、cd38、cd33、bcma、cd138、egfr、fgfr4、gd2、pdgfr、tem1/cd248、trop-2、或它們的組合。
[0157]
在一些方面，bm為抗體，其中該抗體包括利妥昔單抗、曲妥珠單抗、吉妥珠單抗、帕妥珠單抗、奧比妥珠單抗、奧法木單抗、奧拉妥珠單抗、安妥昔單抗、伊沙妥昔單抗、沙西妥珠單抗、u3-1784、達雷木單抗、sti-6129、林妥珠單抗、humy9-6、貝蘭坦單抗、英達妥昔單抗、西妥昔單抗、迪努妥昔單抗、抗cd38 a2抗體、huat13/5抗體、阿侖單抗、替伊莫單抗、託西莫單抗、貝伐單抗、帕尼單抗、曲美木單抗、替昔木單抗、卡妥索單抗、奧戈伏單抗或維妥珠單抗。在一些方面，抗體為利妥昔單抗、曲妥珠單抗、帕妥珠單抗、or000213、林妥珠單抗或吉妥珠單抗。
[0158]
在某些方面，本公開提供了一種藥物組合物，其包含前述方面中任一項的綴合物或化合物或其藥學上可接受的鹽，以及一種或多種藥學上可接受的載劑。
[0159]
在某些方面，本公開提供了一種治療有需要的受試者的癌症的方法，該方法包括向受試者施用藥學上可接受量的前述方面中任一項的綴合物、化合物或組合物、或其藥學上可接受的鹽。在一些方面，癌症為乳腺癌、胃癌、淋巴瘤、急性髓性白血病、多發性骨髓瘤、頭頸癌、鱗狀細胞癌和/或肝細胞癌。
[0160]
在一些方面，該方法還包括在前述方面中任一項的綴合物或化合物或其藥學上可接受的鹽之前、之後或同時向受試者施用藥學上可接受量的附加劑。在一些方面，附加劑為細胞毒性劑或免疫應答調節劑。在一些方面，免疫應答調節劑為檢查點抑制劑。在一些方面，檢查點抑制劑包括pd-1抑制劑、pd-l1抑制劑、ctla-4抑制劑、tim3抑制劑和/或lag-3抑制劑。
[0161]
在某些方面，本公開提供了一種製備式(i)的綴合物，或其藥學上可接受的鹽的方法，該方法包括使結合部分與式(i-1)的化合物：
[0162][0163]
或其藥學上可接受的鹽反應，其中：
[0164]
a為1至10的整數；
[0165]
a為苯基或c
4-c
10
環烷基環；
[0166]
r1獨立地選自氫和滷代基；
[0167]
u選自nh和cf2；並且
[0168]
x選自-n(r2)
v-、＝c(ch3)-、-q-(ch2)
n-和-q(ch2)mq』(ch2)
n-；其中
[0169]
v為l或2；
[0170]
q和q』各自獨立地為o、s或nr2；
[0171]
每個r2獨立地為氫或c
1-c6烷基；
[0172]
n為1至6的整數；並且
[0173]
m為2至6的整數；
[0174]
其中每個基團的左側連接到l』並且右側連接到a；
[0175]
前提是當x為nh或-q-(ch2)
n-時，r1為滷代基；並且
[0176]
l'為與結合部分綴合的可切割或不可切割接頭前體。
[0177]
在一些方面，該方法還包括在與式(i-1)的化合物反應之前還原該結合部分。
[0178]
在一些方面，a為2至8的整數。
[0179]
在一些方面，l'為不可切割接頭前體。在一些方面，l』選自由以下組成的組
[0180][0181]
其中：
[0182]
p為1至10的整數；並且
[0183]
為與x的連接點。
[0184]
在一些方面，l』為
[0185][0186]
在一些方面，p為5。
[0187]
在某些方面，l』為可切割接頭前體。在一些方面，可切割接頭前體可被蛋白酶切割。在一些方面，l』選自由以下組成的組
[0188]
其中：
[0189]
q為2至10的整數；
[0190]
z1、z2、z3和z4各自獨立地不存在或為l-或d-構型的天然存在的胺基酸殘基，前提是z1、z2、z3和z4中的至少兩者為胺基酸殘基；並且
[0191]
為與x的連接點。
[0192]
在一些方面，z1、z2、z3和z4獨立地不存在或選自由以下組成的組：l-纈氨酸、d-纈氨酸、l-瓜氨酸、d-瓜氨酸、l-丙氨酸、d-丙氨酸、l-穀氨醯胺、d-穀氨醯胺、l-穀氨酸、d-穀氨酸、l-天冬氨酸、d-天冬氨酸、l-天冬醯胺、d-天冬醯胺、l-苯丙氨酸、d-苯丙氨酸、l-賴氨酸、d-賴氨酸和甘氨酸；前提是z1、z2、z3和z4中的至少兩者為胺基酸殘基。
[0193]
在某些方面，z1不存在或為甘氨酸；z2不存在或選自由以下組成的組：l-穀氨醯胺、d-穀氨醯胺、l-穀氨酸、d-穀氨酸、l-天冬氨酸、d-天冬氨酸、l-丙氨酸、d-丙氨酸和甘氨酸；z3選自由以下組成的組：l-纈氨酸、d-纈氨酸、l-丙氨酸、d-丙氨酸、l-苯丙氨酸、d-苯丙氨酸和甘氨酸；並且z4選自由以下組成的組：l-丙氨酸、d-丙氨酸、l-瓜氨酸、d-瓜氨酸、l-天冬醯胺、d-天冬醯胺、l-賴氨酸、d-賴氨酸、l-苯丙氨酸、d-苯丙氨酸和甘氨酸。
[0194]
在一些方面，l』為
[0195][0196]
在一些方面，q為5。
[0197]
在某些方面，l』為可生物還原接頭前體。在一些方面，l』選自由以下組成的組
[0198][0199]
其中：
[0200]
q為2至10的整數；
[0201]
r、r』、r」和r
』」
各自獨立地選自氫、c
1-c6烷氧基c
1-c6烷基、(c
1-c6)2nc
1-c6烷基和c
1-c6烷基，或者兩個偕r基團與它們所連接的碳原子一起可形成環丁基或環丙基環；並且
[0202]
為與x的連接點。
[0203]
在某些方面，l』為酸可切割接頭前體。在一些方面，l』選自由以下組成的組
[0204]
[0205]
其中：
[0206]
q為2至10的整數；並且
[0207]
為與x的連接點。
[0208]
在某些方面，l』為點擊釋放接頭前體。在一些方面，l』選自
[0209][0210]
其中：
[0211]
q為2至10的整數；並且
[0212]
為與x的連接點。
[0213]
在某些方面，l』為焦磷酸酶可切割接頭前體。在一些方面，l』為
[0214][0215]
其中：
[0216]
q為2至10的整數；
[0217]
為與x的連接點。
[0218]
在一些方面，l'為β-葡萄糖醛酸酶可切割接頭前體。在某些方面，l』選自
[0219][0220]
其中：
[0221]
q為2至10的整數；
[0222]
‑‑‑‑
不存在或為鍵；並且
[0223]
為與x的連接點。
[0224]
在一些方面，式(i-1)的化合物與結合部分反應，該結合部分包括抗體或其抗原結合部分。在一些方面，抗體或其抗原結合部分結合表面抗原。
[0225]
在某些方面，表面抗原包括5t4、ace、adrb3、akap-4、alk、雄激素受體、aoc3、app、軸蛋白1、axl、b7h3、b7-h4、bcl2、bcma、bcr-abl、boris、bst2、c242、c4.4a、ca 125、ca6、ca9、caix、ccl11、ccr5、cd123、cd133、cd138、cd142、cd15、cd15-3、cd171、cd179a、cd18、cd19、cd19-9、cd2、cd20、cd22、cd23、cd24、cd25、cd27l、cd28、cd3、cd30、cd31、cd300lf、cd33、cd352、cd37、cd38、cd4、cd40、cd41、cd44、cd44v6、cd5、cd51、cd52、cd54、cd56、cd62e、cd62p、cd62l、cd70、cd71、cd72、cd74、cd79a、cd79b、cd80、cd90、cd97、cd125、cd138、cd141、cd147、cd152、cd154、cd326、cea、ceacam5、cftr、凝集因子、ckit、閉合蛋白3、閉合蛋白18.2、cldn6、clec12a、cll-1、cll3、c-met、crypto 1生長因子、cs1、ctla-4、cxcr2、cxorf61、細胞周期蛋白b1、cyp1b1、鈣粘蛋白-3、鈣粘蛋白-6、dll3、e7、ednrb、efna4、egfr、egfrviii、elf2m、emr2、enpp3、epcam、epha2、肝配蛋白a4、肝配蛋白b2、ephb4、erbb2(her2/neu)、erbb3、erg(tmprss2 ets融合基因)、etbr、etv6-aml、fap、fcar、fcrl5、fgfr1、fgfr2、fgfr3、fgfr4、flt3、葉酸受體α、葉酸受體β、folr1、fos相關抗原1、巖藻糖基gm1、gcc、gd2、gd3、globoh、gm3、gpc1、gpc2、gpc3、gp1oo、gpnmb、gpr20、gprc5d、gucy2c、havcr1、her2、her3、hgf、hmi.24、hmwmaa、hpv e6、htert、人端粒酶逆轉錄酶、icam、icos-l、ifn-α、ifn-γ、igf-i受體、igll1、il-2受體、il-4受體、il-13ra2、il-1 1ra、il-1、il-12、il-23、il-13、il-22、il-4、il-5、il-6、幹擾素受體、整聯蛋白(包括α4、αvβ3、αvβ5、αvβ6、α1β4、α4β1、α4β7、
α5β1、α6β4、α
iib
β3整聯蛋白)、整聯蛋白αv、腸羧基酯酶、kit、lage-1a、lair1、lamp-1、lck、豆莢蛋白、lewisy、lfa-1(cd11a)、l-選擇素(cd62l)、lilra2、liv-1、lmp2、lrrc15、ly6e、ly6k、ly75、mad-ct-1、mad-ct-2、mage al、melana/martl、間皮素、ml-iap、msln、粘蛋白、muc1、muc16、mut hsp70-2、mycn、肌肉生長抑制素、na17、napi2b、nca-90、ncam、連接蛋白-4、ngf、notch1、notch2、notch3、notch4、ny-br-1、ny-eso-1、鄰乙醯基-gd2、or51e2、oy-tes1、p53、p53突變體、panx3、pap、pax3、pax5、p-cad、pcta-1/半乳凝素8、pd-l1、pd-l2、pdgfr、pdgfr-β、磷脂醯絲氨酸、pik3ca、plac1、聚唾液酸、前列腺酶、前列腺癌細胞、前列腺素、銅綠假單胞菌、狂犬病毒、生存素和端粒酶、prss21、psca、psma、ptk7、rage-1、rankl、ras突變體、呼吸道合胞病毒、恆河猴因子、rhoc、ron、ror1、ror2、ru1、ru2、肉瘤易位斷點、sart3、slamf7、slc44a4、sle、slitrk6、精子蛋白17、1-磷酸鞘氨醇、ssea-4、ssx2、steap1、tag72、tarp、tcrβ、tem1/cd248、tem7r、腱生蛋白c、tf、tgf-1、tgf-β2、tnf-α、tgs5、tie 2、tim-1、tn ag、trac、trail-r1、trail-r2、trop-2、trp-2、trpv1、tshr、腫瘤抗原ctaa16.88、酪氨酸酶、upk2、vegf、vegfr1、vegfr2、波形蛋白、wt1、xage1、或它們的組合。
[0226]
在一些方面，表面抗原包括her2、cd20、cd38、cd33、bcma、cd138、egfr、fgfr4、gd2、pdgfr、tem1/cd248、trop-2、或它們的組合。
[0227]
在一些方面，bm為抗體，其中該抗體包括利妥昔單抗、曲妥珠單抗、吉妥珠單抗、帕妥珠單抗、奧比妥珠單抗、奧法木單抗、奧拉妥珠單抗、安妥昔單抗、伊沙妥昔單抗、沙西妥珠單抗、u3-1784、達雷木單抗、sti-6129、林妥珠單抗、humy9-6、貝蘭坦單抗、英達妥昔單抗、西妥昔單抗、迪努妥昔單抗、抗cd38 a2抗體、huat13/5抗體、阿侖單抗、替伊莫單抗、託西莫單抗、貝伐單抗、帕尼單抗、曲美木單抗、替昔木單抗、卡妥索單抗、奧戈伏單抗或維妥珠單抗。在某些方面，抗體為利妥昔單抗、曲妥珠單抗、帕妥珠單抗、or000213、林妥珠單抗或吉妥珠單抗。
[0228]
在某些方面，本公開提供了一種用於由式(i-1)的化合物製備式(i)的綴合物的方法，其中：
[0229]
a為苯基；
[0230]
u為nh；
[0231]
r1為滷代基；並且
[0232]
x為-n(r2)v(ch2)mo(ch2)
n-；其中：
[0233]
v為1；
[0234]
m和n為2；並且
[0235]
r2為甲基。
[0236]
在一些方面：
[0237]
a為苯基；
[0238]
u為nh；
[0239]
r1為滷代基；並且
[0240]
x為-n(r2)v(ch2)mo(ch2)
n-；其中：
[0241]
v為2；
[0242]
m和n為2；並且
[0243]
每個r2為甲基。
[0244]
在某些方面：
[0245]
a為苯基；
[0246]
u為nh；
[0247]
r1為滷代基；並且
[0248]
x為-o(ch2)
n-；其中：
[0249]
n為2。
[0250]
在某些方面：
[0251]
a為苯基；
[0252]
u為nh；
[0253]
r1為滷代基；並且
[0254]
x為-s(ch2)
n-；其中：
[0255]
n為2。
[0256]
在一些方面：
[0257]
a為苯基；
[0258]
u為nh；
[0259]
r1為氫；並且
[0260]
x為
‑‑
nr
2-；其中：
[0261]
r2為甲基。
[0262]
在一些方面：
[0263]
a為苯基；
[0264]
u為nh；
[0265]
r1為滷代基；並且
[0266]
x為
‑‑
nr
2-；其中：
[0267]
r2為氫。
[0268]
在某些方面：
[0269]
a為苯基；
[0270]
u為nh；
[0271]
r1為氫；並且
[0272]
x為-c(ch3)＝。
[0273]
在一些方面：
[0274]
a為c
4-c
10
環烷基環；
[0275]
u為nh；
[0276]
r1為氫；並且
[0277]
x為-n(r2)(ch2)mo(ch2)
n-；其中：
[0278]
n為1；
[0279]
m為2；並且
[0280]
r2為甲基。
[0281]
在某些方面，式(i-1)的化合物為：
[0282]
附圖說明
[0283]
圖1描繪了代表性新降解劑綴合物針對bt-474細胞系的體外活性。x軸示出了對數抗體濃度(m)。y軸示出了當用曲妥珠單抗-l-p1(例如，曲妥珠單抗-化合物(ia))(三角形，實線)、單獨的曲妥珠單抗(三角形，虛線)、kadcyla(菱形)、單獨的新降解劑p1(十字形)和利妥昔單抗-l-p1(例如，利妥昔單抗-化合物(ia))(圓圈)處理時bt-474細胞的活力％。l為接頭。
[0284]
圖2描繪了代表性新降解劑綴合物針對bt-474細胞系的體外活性。x軸示出了對數抗體濃度(m)。y軸示出了當用帕妥珠單抗-l-p1(例如，帕妥珠單抗-化合物(ia))(三角形，實線)、單獨的帕妥珠單抗(三角形，虛線)、kadcyla(菱形)、單獨的新降解劑p1(十字形)和利妥昔單抗-l-p1(例如，利妥昔單抗-化合物(ia))(圓圈)處理時bt-474細胞的活力％。
[0285]
圖3描繪了代表性新降解劑綴合物針對bt-474癌細胞系的體外活性。x軸示出了對數抗體濃度(m)。y軸示出了當用曲妥珠單抗-l-p4(例如，曲妥珠單抗-化合物(ic))(三角形，實線)、曲妥珠單抗(三角形，虛線)、kadcyla(菱形)、單獨的新降解劑p4(十字形)和利妥昔單抗-l-p4(例如，利妥昔單抗-化合物(ic))(圓圈)處理時bt-474細胞的活力％。
[0286]
圖4描繪了代表性新降解劑綴合物針對bt-474細胞系的體外活性。x軸示出了對數抗體濃度(m)。y軸示出了當用帕妥珠單抗-l-p4(例如，帕妥珠單抗-化合物(ic))(三角形，實線)、帕妥珠單抗(三角形，虛線)、kadcyla(菱形)、單獨的新降解劑p4(十字形)和利妥昔單抗-l-p4(例如，利妥昔單抗-化合物(ic))(圓圈)處理時bt-474細胞的活力％。
[0287]
圖5描述了代表性新降解劑綴合物以不同的藥物:抗體比(dar)針對bt-474細胞系的體外活性。x軸示出了對數抗體濃度(m)。y軸示出了當用曲妥珠單抗-l-p1(例如，曲妥珠單抗-化合物(ia))dar 1.6(向上三角形，實線)、曲妥珠單抗-l-p3(例如，曲妥珠單抗-化合物(ib))dar 1.5(向下三角形，實線)、曲妥珠單抗-l-p4(例如，曲妥珠單抗-化合物(ic))dar 1.6(圓圈，實線)、曲妥珠單抗-l-p1(例如，曲妥珠單抗-化合物(id))dar 1.6(正方形，實線)、曲妥珠單抗-l-p1(例如，曲妥珠單抗-化合物(ia)dar 8(三角形，虛線)、曲妥珠單抗-l-p4(例如，曲妥珠單抗-化合物(ic))dar 8(實心圓圈，虛線)、(菱形，虛線)和曲妥珠單抗(圓圈，虛線)處理時bt-474細胞的活力％。
[0288]
圖6描繪了代表性新降解劑針對bt-474細胞系的體外活性。x軸示出了對數抗體濃度(m)。y軸示出了當用帕妥珠單抗-l-p1(例如，帕妥珠單抗-化合物(ia))dar 8(向上三角
形，實線)、帕妥珠單抗-l-p4(例如，帕妥珠單抗-化合物(ic))dar 8(向下三角形，實線)和(菱形，虛線)處理時bt-474細胞的活力％。
[0289]
圖7描繪了代表性新降解劑綴合物針對sk-br-3細胞系的體外活性。x軸示出了對數抗體濃度(m)。y軸示出了當用曲妥珠單抗-l-p1(例如，曲妥珠單抗-化合物(ia)(三角形，實線)、曲妥珠單抗(三角形，虛線)、kadcyla(菱形)、單獨的新降解劑p1(圓圈)和利妥昔單抗-l-p1(例如，利妥昔單抗-化合物(ia))(十字形)處理時sk-br-3細胞的活力％。
[0290]
圖8描繪了代表性新降解劑綴合物針對sk-br-3細胞系的體外活性。x軸示出了對數抗體濃度(m)。y軸示出了當用帕妥珠單抗-l-p1(例如，帕妥珠單抗-化合物(ia))(三角形，實線)、帕妥珠單抗(三角形，虛線)、kadcyla(菱形)、單獨的新降解劑p1(圓圈)和利妥昔單抗-l-p1(例如，利妥昔單抗-化合物(ia))(十字形)處理時sk-br-3細胞的活力％。
[0291]
圖9描繪了代表性新降解劑綴合物針對hl-60細胞系的體外活性。x軸示出了對數抗體濃度(m)。y軸示出了當用or000213-l-p1(例如，or000213-化合物(ia))(三角形)、(菱形)和曲妥珠單抗-l-p1(例如，曲妥珠單抗-化合物(ia))(圓圈)處理時hl-60細胞的活力％。
[0292]
圖10描繪了代表性新降解劑綴合物針對hl-60細胞系的體外活性。x軸示出了對數抗體濃度(m)。y軸示出了當用humy9-6(igg1)-l-p1(例如，humy9-6(igg1)-化合物(ia))dar 8(向上實心三角形，實線)、humy9-6(igg1)-l-p1)(例如，humy9-6(igg1)-化合物(id))dar 8(向下實心三角形，實線)、林妥珠單抗igg1-l-p1(例如，林妥珠單抗igg1-化合物(ia))dar 8(向上空心三角形，虛線)、林妥珠單抗igg1-l-p1(例如，林妥珠單抗igg1-化合物(id))dar 8(向下空心三角形，虛線)、or000213-l-p1(例如，or000213-化合物(ia))dar 8(正方形)和利妥昔單抗-l-p4(例如，利妥昔單抗-化合物(ic))(圓圈，虛線)處理時hl-60細胞的活力％。
[0293]
圖11描述了化合物(ia)的綴合物以不同的藥物:抗體比(dar)針對hl60細胞系的體外活性。x軸示出了對數抗體濃度(m)。y軸示出了當用humy9-6 igg1-l-p1(例如，humy9-6 igg1-化合物(ia))dar 1.9(向上三角形，實線)、humy9-6 igg1-l-p1(例如，humy9-6 igg1-化合物(ia))dar 3.9(向下三角形，實線)、humy9-6 igg1-l-p1(例如，humy9-6 igg1-化合物(ia))dar 5.5(菱形，實線)、humy9-6 igg1-l-p1(例如，humy9-6 igg1-化合物(ia))dar 8(正方形，實線)和利妥昔單抗-l-p4(例如，利妥昔單抗-化合物(ic))(圓圈，虛線)處理時hl-60細胞的活力％。
[0294]
圖12描述了化合物(ia)的綴合物以不同的藥物:抗體比(dar)針對hl60細胞系的體外活性。x軸示出了對數抗體濃度(m)。y軸示出了當用or000213-l-p1(例如，or000213-化合物(ia))dar 1.2(向上三角形，實線)、or000213-l-p1(例如，or000213-化合物(ia))dar 1.8(向下三角形，實線)、or000213-l-p1(例如，or000213-化合物(ia))dar 2.3(菱形，實線)、or000213-l-p1(例如，or000213-化合物(ia))dar 8(正方形，實線)和利妥昔單抗-l-p4(例如，利妥昔單抗-化合物(ic))(三角形，虛線)處理時hl-60細胞的活力％。
[0295]
圖13描繪了代表性新降解劑綴合物針對ramos細胞系的體外活性。x軸示出了對數抗體濃度(m)，並且y軸示出了當用利妥昔單抗-l-p4(例如，利妥昔單抗-化合物(ic))(向上三角形，實線)、利妥昔單抗-l-p1(例如，利妥昔單抗-化合物(ia))(向下三角形，實線)、利妥昔單抗(三角形、虛線)、單獨的新降解劑p1(十字形，虛線)、單獨的新降解劑p4(星形，虛
線)和曲妥珠單抗-l-p1(例如，曲妥珠單抗-化合物(ia))(圓圈，虛線)處理時ramos細胞的活力％。
[0296]
圖14描繪了代表性新降解劑綴合物針對daudi細胞系的體外活性。x軸示出了對數抗體濃度(m)，並且y軸示出了當用利妥昔單抗-l-p1(例如，利妥昔單抗-化合物(ia))(向上三角形，實線)、利妥昔單抗(三角形，虛線)和曲妥珠單抗-l-p1(例如，曲妥珠單抗-化合物(ia))(圓圈，虛線)處理時daudi細胞的活力％。
[0297]
圖15描繪了代表性新降解劑綴合物針對ramos細胞系的體外活性。x軸示出了對數抗體濃度(m)，並且y軸示出了當用利妥昔單抗-l-p4(例如，利妥昔單抗-化合物(ic))(向上三角形，實線)、利妥昔單抗-l-p1(例如，利妥昔單抗-化合物(ia))(向下三角形，實線)和單獨的新降解劑p1處理時ramos細胞的活力％。
[0298]
圖16描繪了代表性新降解劑綴合物針對nci-n87癌細胞系的體外活性。x軸示出了對數抗體濃度(m)。y軸示出了當用曲妥珠單抗-l-p1(例如，曲妥珠單抗-化合物(ia))(三角形，實線)、曲妥珠單抗(三角形，虛線)、kadcyla(菱形)、單獨的新降解劑p4(十字形)和利妥昔單抗-l-p1(例如，利妥昔單抗-化合物(ia))(圓圈)處理時nci-n87細胞的活力％。
[0299]
圖17描繪了代表性新降解劑綴合物針對nci-n87癌細胞系的體外活性。x軸示出了對數抗體濃度(m)。y軸示出了當用帕妥珠單抗-l-p1(例如，帕妥珠單抗-化合物(ia))(三角形，實線)、帕妥珠單抗(三角形，虛線)、kadcyla(菱形)、單獨的新降解劑p1(十字形)和利妥昔單抗-l-p1(例如，利妥昔單抗-化合物(ia))(圓圈)處理時nci-n87細胞的活力％。
[0300]
圖18描繪了代表性新降解劑綴合物在與人血清孵育3天後針對bt-474細胞系的體外活性。x軸示出了對數抗體濃度(m)。y軸示出了當用曲妥珠單抗-l-p1(例如，曲妥珠單抗-化合物(ia))(人血清)(向上三角形，實線)、帕妥珠單抗-l-p1(例如，帕妥珠單抗-化合物(ia))(人血清)(向下三角形，實線)、or000213-l-p1(例如，or000213-化合物(ia))(人血清)(圓圈，實線)、僅人血清(星形)、曲妥珠單抗-l-p1(例如，曲妥珠單抗-化合物(ia))(向上三角形，虛線)、帕妥珠單抗-l-p1(例如，帕妥珠單抗-化合物(ia))(向下三角形，虛線)和or000213-l-p1(例如，or000213-化合物(ia))(圓圈，虛線)處理時bt-474細胞的活力％。
[0301]
圖19描繪了代表性新降解劑綴合物在與小鼠血清孵育3天後針對bt-474細胞系的體外活性。x軸示出了對數抗體濃度(m)。y軸示出了當用曲妥珠單抗-l-p1(例如，曲妥珠單抗-化合物(ia))(小鼠血清)(向上三角形，實線)、帕妥珠單抗-l-p1(例如，帕妥珠單抗-化合物(ia))(小鼠血清)(向下三角形，實線)、or000213-l-p1(例如，or000213-化合物(ia))(小鼠血清)(圓圈，實線)、僅小鼠血清(星形)、曲妥珠單抗-l-p1(例如，曲妥珠單抗-化合物(ia))(向上三角形，虛線)、帕妥珠單抗-l-p1(例如，帕妥珠單抗-化合物(ia))(向下三角形，虛線)和or000213-l-p1(例如，or000213-化合物(ia))(圓圈，虛線)處理時bt-474細胞的活力％。
[0302]
圖20描繪了代表性新降解劑綴合物在小鼠中針對bt-474(her2+)腫瘤的體內活性。x軸示出了給藥後的天數。y軸示出了用媒介物(實心圓圈)、5mg/kg曲妥珠單抗-l-p1(例如，曲妥珠單抗-化合物(ia))(正方形)、5mg/kg利妥昔單抗-l-p1(例如，利妥昔單抗-化合物(ia))(三角形)和5mg/kg帕妥珠單抗-l-p1(例如，帕妥珠單抗-化合物(ia))(空心圓圈)給藥後的腫瘤體積(mm3)。
[0303]
圖21描繪了代表性新降解劑綴合物針對daudi(cd20+)腫瘤的體內活性。x軸示出
了給藥後的天數。y軸示出了用媒介物(實心圓圈)、5mg/kg曲妥珠單抗-l-p1(例如，曲妥珠單抗-化合物(ia))(正方形)、1mg/kg利妥昔單抗-l-p1(例如，利妥昔單抗-化合物(ia))(三角形)和5mg/kg利妥昔單抗-l-p1(例如，利妥昔單抗-化合物(ia))(空心圓圈)給藥後的腫瘤體積(mm3)。
[0304]
圖22描繪了代表性新降解劑綴合物針對hl-60(cd33+)腫瘤的體內活性。x軸示出了給藥後的天數。y軸示出了用媒介物(實心圓圈)、5mg/kg曲妥珠單抗-l-p1(例如，曲妥珠單抗-化合物(ia))(正方形)、1mg/kg or000213-l-p1(例如，or000213-化合物(ia))(三角形)和5mg/kg or000213-l-p1(例如，or000213-化合物(ia))(空心圓圈)給藥後的腫瘤體積(mm3)。
[0305]
圖23描繪了新降解劑綴合物針對hcc2157細胞系的體外活性。x軸示出了對數抗體濃度(m)，並且y軸示出了當用沙西妥珠單抗-l-p1(例如，沙西妥珠單抗-化合物(ia))(線1)、單獨的沙西妥珠單抗(線2)和單獨的新降解劑p1(線3)處理時hcc2157細胞的活力％。
[0306]
圖24描繪了新降解劑綴合物針對lp1細胞系的體外活性。x軸示出了對數抗體濃度(m)，並且y軸示出了當用huat 13/5-l-p1(例如，huat 13/5-化合物(ia))(線1)、單獨的huat 13/5(線2)和單獨的新降解劑p1(線3)處理時lp1細胞的活力％。
[0307]
圖25描繪了代表性新降解劑綴合物針對nci-h929(cd38+)腫瘤的體內活性。x軸示出了給藥後的天數。y軸示出了用媒介物(圓圈)、5mg/kg huat13/5-l-p1(例如，huat13/5-化合物(ia))(正方形)給藥後的腫瘤體積(mm3)。
具體實施方式
[0308]
本公開涉及式(i)的綴合物：
[0309][0310]
或其藥學上可接受的鹽，其中：
[0311]
a為1至10的整數；
[0312]
a為苯基或c
4-c
10
環烷基環；
[0313]
r1獨立地選自氫和滷代基；
[0314]
u選自nh和cf2；
[0315]
x選自-n(r2)
v-、＝c(ch3)-、-q-(ch2)
n-和-q(ch2)mq』(ch2)
n-；其中
[0316]
q和q』各自獨立地為o、s或n(r2)v；
[0317]
v為1或2；
[0318]
每個r2獨立地為氫或c
1-c6烷基；
[0319]
n為1至6的整數；
[0320]
m為2至6的整數；
[0321]
其中每個基團的左側連接到l並且右側連接到a；
[0322]
前提是當x為nh或-q-(ch2)
n-時，r1為滷代基；
[0323]
l為可切割接頭或不可切割接頭；並且
[0324]
bm為能夠特異性結合蛋白質的結合部分。在一些方面，結合部分為抗體、抗體片段或抗原結合片段。
[0325]
本發明還提供了與結合部分融合的上述化合物、包含該化合物或綴合物的組合物、或使用或製備該化合物或綴合物的方法。
[0326]
i.定義。
[0327]
為了更容易理解本說明書，首先定義某些術語。在整個詳細描述中闡述了附加定義。
[0328]
需要注意的是，術語「一個」或「一種」實體是指該實體中的一者或多者；例如，「核苷酸序列」被理解為代表一個或多個核苷酸序列。因此，術語「一個(或一種)」、「一個或多個」和「至少一個」在本文中可互換使用。還應注意，權利要求書可被起草以排除任何任選元素。因此，該陳述旨在用作使用與權利要求要素的敘述有關的排他性術語諸如「單獨地」、「僅」等或使用負面限制的先行基礎。
[0329]
此外，當在本文使用時，「和/或」應被視為兩個指定特徵或組分中的每一者與或不與另一者的具體公開。因此，本文在短語諸如「a和/或b」中使用的術語「和/或」旨在包括「a和b」、「a或b」、「a」(單獨)和「b」(單獨)。同樣，在短語諸如「a、b和/或c」中使用的術語「和/或」旨在包括以下方面中的每個方面：a、b和c；a、b或c；a或c；a或b；b或c；a和c；a和b；b和c；a(單獨)；b(單獨)；和c(單獨)。
[0330]
應當理解，每當在本文中用語言「包括」來描述方面時，還提供以「由
……
組成」和/或「基本上由
……
組成」描述的其他類似方面。
[0331]
除非另有定義，否則本文使用的所有技術和科技術語具有與本公開相關領域的普通技術人員通常所理解的相同含義。例如，concise dictionary of biomedicine and molecular biology,juo,pei-show,第2版,2002,crc press；the dictionary of cell and molecular biology,第3版,1999,academic press；和oxford dictionary of biochemistry and molecular biology,修訂板,2000,oxford university press，為本領域技術人員提供了本公開中使用的許多術語的通用詞典。
[0332]
單位、前綴和符號以其syst
é
me international de unites(si)可接受的形式表示。數值範圍包括限定該範圍的數字。在列舉值的範圍的情況下，應當理解，在該範圍的列舉的上限和下限之間的每個中間整數值及其每個分數以及這些值之間的每個子範圍也被具體公開。任何範圍的上限和下限可獨立地包括在該範圍內或從該範圍排除，並且包括任一限值、不包括限值或包括兩個限值的每個範圍也涵蓋在本公開內。因此，本文所列舉的範圍被理解為該範圍內的所有值的簡寫，包括所列舉的端點。例如，1至10的範圍被理解為包括來自由1、2、3、4、5、6、7、8、9和10組成的組的任何數字、數字的組合或子範圍。
[0333]
在明確列舉值的情況下，應當理解，與所列舉的值大致相同數量或量的值也在本
公開的範圍內。在公開組合的情況下，該組合的元素的每個子組合也被具體公開並且在本公開的範圍內。相反，在單獨公開不同元素或元素組的情況下，也公開了它們的組合。在公開的任何元素被公開為具有多個替代物的情況下，由此還公開了其中每個替代物被單獨排除或與其他替代物的任何組合的該公開的實例；公開的多於一個元素可具有此類排除，並且由此公開具有此類排除的元素的所有組合。
[0334]
如本文所用，術語「dar」是指綴合物的藥物抗體比，它是與每種抗體連接的新降解劑-接頭複合物的平均數。在某些方面，本文所述的綴合物的dar為1至10。在一些方面，本文所述的綴合物的dar為1至8。在一些方面，本文所述的綴合物的dar為1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10。
[0335]
如本文所用，術語「抗體」也指全長免疫球蛋白分子或全長免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有抗原結合位點的分子，該抗原結合位點免疫特異性結合感興趣靶標的抗原或其部分，此類靶標包括但不限於癌細胞或產生與自身免疫疾病相關的自身免疫抗體的細胞。本文公開的免疫球蛋白可為免疫球蛋白分子的任何類型(例如，igg、ige、igm、igd和iga)、類別(例如，igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2)或亞類。免疫球蛋白可源自任何物種。然而，在一個方面，免疫球蛋白為人、鼠或兔來源。
[0336]
術語「單結構域抗體」，也稱為納米抗體，是由分子量為約12kda至約15kda的單個單體可變抗體結構域組成的抗體片段。單體抗體可基於重鏈可變結構域或輕鏈。單結構域抗體的實例包括但不限於vhh片段和v
nar
片段。
[0337]「抗體片段」包含完整抗體的一部分，通常為其抗原結合區或可變區。抗體片段的實例包括fab、fab』、f(ab』).sub.2和fv片段；雙體；線性抗體；由fab表達文庫產生的片段、抗獨特型(抗id)抗體、cdr(互補決定區)和上述免疫特異性結合癌細胞抗原、病毒抗原或微生物抗原中的任一種的表位結合片段、單鏈抗體分子；以及由抗體片段形成的多特異性抗體。
[0338]「完整抗體」為包含抗原結合可變區以及輕鏈恆定結構域(cl)和重鏈恆定結構域ch1、ch2和ch3的抗體。恆定結構域可為天然序列恆定結構域(例如人天然序列恆定結構域)或其胺基酸序列變體。
[0339]
如本文所用，術語「單克隆抗體」是指從基本上同質抗體的群體獲得的抗體，即構成該群體的各個抗體是相同的，除了可能以微量存在的可能的天然存的突變。單克隆抗體是高度特異性的，針對單一抗原位點。此外，與包括針對不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體製劑相反，每種單克隆抗體針對抗原上的單個決定簇。除了它們的特異性之外，單克隆抗體的優勢在於它們可不受其他抗體汙染地合成。修飾語「單克隆」指示從基本上同質的抗體群體獲得的抗體的特性並且不應解釋為需要通過任何特定方法產生該抗體。例如，根據本公開使用的單克隆抗體可通過雜交瘤方法製備，或者可通過重組dna方法製備。「單克隆抗體」也可從噬菌體抗體文庫中分離。
[0340]
本文的單克隆抗體具體包括「嵌合」抗體，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與源自特
定物種或屬於特定抗體類別或亞類的抗體中的對應序列相同或同源，而鏈的其餘部分與源自另一物種或屬於另一抗體類別或亞類的抗體中的對應序列相同或同源，以及此類抗體的片段，只要它們表現出期望的生物學活性即可。本文感興趣的嵌合抗體包括「靈長類化」抗體，其包含源自非人靈長類(例如，舊大陸猴(old world monkey)、猿等)的可變結構域抗原結合序列和人恆定區序列。
[0341]
已採用各種方法產生單克隆抗體(mab)。雜交瘤技術是指產生單一類型抗體的克隆細胞系，使用各種物種的細胞，包括小鼠(鼠類)、倉鼠、大鼠和人。另一種製備mab的方法是使用基因工程，包括重組dna技術。由這些技術製成的單克隆抗體包括嵌合抗體和人源化抗體。嵌合抗體組合了來自多於一種物種的dna編碼區。例如，嵌合抗體的可變區可源自小鼠並且恆定區源自人。人源化抗體主要來自於人，儘管它包含非人部分。像嵌合抗體一樣，人源化抗體可包含完全人恆定區。但與嵌合抗體不同，可變區可部分源自人。人源化抗體的非人合成部分通常來自鼠抗體中的cdr。在任何情況下，這些區域對於抗體識別和結合特定抗原是至關重要的。雖然可用於診斷和短期治療，但在不增加有害免疫原性應答的情況下不能長期向人施用鼠抗體。這種應答稱為人抗小鼠抗體(hama)，當人免疫系統將鼠抗體識別為外來物並對其進行攻擊時就會發生這種應答。hama應答可導致中毒性休克甚至死亡。
[0342]
嵌合抗體和人源化抗體通過使施用抗體的非人部分最小化來降低hama應答的可能性。此外，嵌合和人源化抗體可以具有激活次級人體免疫應答的附加益處，諸如抗體依賴性細胞毒性。
[0343]
完整抗體可具有一種或多種「效應功能」，其是指可歸因於抗體fc區(天然序列fc區或胺基酸序列變體fc區)的那些生物學活性。抗體效應功能的實例包括c1q結合；補體依賴性細胞毒性；fc受體結合；抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(adcc)；吞噬作用；細胞表面受體(例如，b細胞受體；bcr)的下調等。
[0344]
根據完整抗體的重鏈恆定結構域的胺基酸序列，可將其歸為不同的「類別」。有五種主要類別的完整抗體：iga、igd、ige、igg和igm，並且這些中的幾種可被進一步劃分成「亞類」(同種型)，例如，igg1、igg2、igg3、igg4、iga和iga2。對應於不同抗體類別的重鏈恆定結構域分別稱為α、δ、ε、γ和μ。不同類別免疫球蛋白的亞基結構和三維構型是眾所周知的。
[0345]
本文使用的術語「約」意指大致、粗略、大約或在其範圍內。當術語「約」與數值範圍結合使用時，其通過延伸所闡述數值的上下邊界來修飾該範圍。一般來講，術語「約」用於修飾偏差為例如上或下(更高或更低)10％的所述值的上下數值。
[0346]
術語「施用(administration、administering)」及其語法變體是指通過藥學上可接受的途徑將組合物諸如本公開的ev(例如，外來體)引入受試者。通過包括瘤內、口服、肺內、鼻內、胃腸外(靜脈內、動脈內、肌內、腹膜內或皮下)、直腸、淋巴內、鞘內、眼周或局部的任何合適的途徑將組合物諸如本公開的ev(例如，外來體)引入受試者。施用包括自我施用和他人施用。合適的施用途徑允許組合物或劑發揮其預期功能。例如，如果合適的途徑是靜脈內，則通過將組合物或劑引入受試者的靜脈來施用組合物。
[0347]
如本文所用，術語「抗體」涵蓋天然或部分或全部合成產生的免疫球蛋白及其片段。該術語還涵蓋具有與免疫球蛋白結合結構域同源的結合結構域的任何蛋白質。「抗體」還包括包含特異性結合和識別抗原的免疫球蛋白基因或其片段的框架區的多肽。術語抗體的使用意在包括完整抗體、多克隆、單克隆和重組抗體、它們的片段，並且還包括單鏈抗體、
人源化抗體、鼠抗體、嵌合抗體、鼠-人、鼠-靈長類、靈長類-人單克隆抗體、抗獨特型抗體、抗體片段，例如scfv、(scfv)2、fab、fab'和f(ab')2、f(ab1)2、fv、dab和fd片段、雙抗體和抗體相關多肽。抗體包括雙特異性抗體和多特異性抗體，只要它們表現出期望的生物學活性或功能。在本公開的一些方面，生物學活性分子為抗體或包含其抗原結合片段的分子。
[0348]
術語「抗體-藥物綴合物」和「adc」可互換使用，指與治療劑(本文有時稱為劑、藥物或活性藥物成分)連接(例如，共價連接)的抗體。在本公開的一些方面，生物學活性分子為抗體-藥物綴合物。
[0349]
如本文所用，術語「大約」在應用於一個或多個感興趣的值時，是指與所述參考值類似的值。在某些方面，術語「大約」是指在任一方向(大於或小於)上落在所述參考值的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更小內的值的範圍，除非另有說明或從上下文中明顯看出(除非該數字將超過可能值的100％)。
[0350]「保守胺基酸取代」是胺基酸殘基被具有類似側鏈的胺基酸殘基替換。本領域已定義了具有類似側鏈的胺基酸殘基家族，包括鹼性側鏈(例如，賴氨酸、精氨酸、組氨酸)、酸性側鏈(例如，天冬氨酸、穀氨酸)、不帶電荷的極性側鏈(例如，甘氨酸、天冬醯胺、穀氨醯胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非極性側鏈(例如，丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸)、β-支鏈側鏈(例如，蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸)和芳族側鏈(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)。因此，如果多肽中的一個胺基酸被來自相同側鏈家族的另一個胺基酸替換，則這種取代被認為是保守的。在另一個實施方案中，胺基酸串可被側鏈家族成員的順序和/或組成不同而結構上類似的串保守替換。
[0351]
如本文所用，術語「保守的」分別指多核苷酸序列或多肽序列的核苷酸或胺基酸殘基，它們是在被比較的兩個或更多個序列的相同位置上未發生改變的那些。相對保守的核苷酸或胺基酸是在比出現在序列中其他地方的核苷酸或胺基酸更相關的序列中保守的那些。
[0352]
在某些方面，如果兩個或更多個序列彼此100％相同，則稱它們為「完全保守的」或「相同的」。在一些方面，如果兩個或更多個序列彼此至少約70％相同、至少約80％相同、至少約90％相同或至少約95％相同，則稱它們為「高度保守的」。在一些方面，如果兩個或更多個序列彼此至少約30％相同、至少約40％相同、至少約50％相同、至少約60％相同、至少約70％相同、至少約80％相同、至少約90％相同或至少約95％相同，則稱它們是「保守的」。序列保守性可應用於多核苷酸或多肽的整個長度，或者可應用於其部分、區域或特徵。
[0353]
如本文所用，術語「連接」和「綴合」可互換使用，各自指包含新降解劑和結合部分的兩個或更多個部分的共價或非共價連接。在一些方面，連接或綴合可包括接頭。
[0354]
術語「胺基酸序列變體」是指具有在某種程度上不同於天然序列多肽的胺基酸序列的多肽。通常，胺基酸序列變體將與天然抗體的至少一個受體結合結構域或與天然受體的至少一個配體結合結構域具有至少約70％的序列同一性，並且典型地，它們將與此類受體或配體結合結構域具有至少約80％、更典型地至少約90％的序列同源性。胺基酸序列變體在天然胺基酸序列的胺基酸序列中的某些位置具有取代、缺失和/或插入。胺基酸以常規名稱、一字母和三字母代碼命名。
[0355]「序列同一性」被定義為在比對序列和引入缺口(如果必要)以實現最大序列同一性百分比後胺基酸序列變體中相同的殘基的百分比。用於比對的方法和電腦程式是本領
域眾所周知的。一個此類電腦程式是由genentech,inc.編寫的「align 2」，該程序於1991年12月10日與用戶文檔一起提交給united states copyright office,washington,d.c.20559。
[0356]
術語「fc受體」或「fcr」用於描述與抗體的fc區結合的受體。示例性fcr為天然序列人fcr。此外，fcr可以是結合igg抗體(γ受體)的fcr並且包括fcγri、fcγrii和fcγriii亞類的受體，包括這些受體的等位基因變體和替代性剪接形式。fcγrii受體包括fcγriia(一種「抑制受體」)和fcγriib(一種「抑制受體」)，它們具有類似的胺基酸序列，主要區別在於其細胞質結構域。激活受體fcγriia含有在其細胞質結構域中的基於免疫受體酪氨酸的激活基序(itam)。抑制受體fcγriib含有在其細胞質結構域中的基於免疫受體酪氨酸的抑制基序(itim)。本文中的術語「fcr」涵蓋了其他fcr，包括將在將來被識別的那些。該術語還包括負責將母體igg轉移至胎兒的新生兒受體fcrn。
[0357]「補體依賴性細胞毒性」或「cdc」是指在補體的存在下分子裂解靶標的能力。補體激活途徑由補體系統的第一組分(c1q)結合到與同源抗原複合的分子(例如抗體)而啟動。為了評估補體激活，可進行cdc測定。
[0358]「天然抗體」通常為由兩條相同的輕(l)鏈和兩條相同的重(h)鏈組成的約150,000道爾頓的異四聚體糖蛋白。每條輕鏈通過一個共價二硫鍵與重鏈相連，而不同免疫球蛋白同種型的重鏈之間二硫鍵的數量各不相同。每條重鏈和輕鏈也具有規則間隔的鏈內二硫橋。每條重鏈具有在一端的一個可變結構域(vh)，隨後是多個恆定結構域。每條輕鏈具有在一端的可變結構域(vl)並且在其另一端的恆定結構域。輕鏈的恆定結構域與重鏈的第一恆定結構域對準，並且輕鏈可變結構域與重鏈的可變結構域對準。認為特定的胺基酸殘基在輕鏈和重鏈可變結構域之間形成界面。
[0359]
術語「可變」是指在抗體之間可變結構域的某些部分在序列上有很大差異，並且用於每種特定抗體對其特定抗原的結合和特異性。然而，可變性在抗體的整個可變結構域中並非均勻分布。它集中在輕鏈和重鏈可變結構域兩者中稱為高變區的三個區段中。可變結構域的更高度保守的部分稱為框架區(fr)。天然重鏈和輕鏈的可變結構域各自包含四個fr，它們主要採用由三個高變區連接的β-摺疊構型，這些高變區形成連接β摺疊結構的環並且在一些情況下形成β-摺疊結構的一部分。每條鏈中的高變區通過fr非常接近的保持在一起，並且與來自另一條鏈的高變區一起為抗體的抗原結合位點的形成作出貢獻。恆定結構域不直接參與抗體與抗原的結合，但表現出各種效應功能，諸如抗體依賴性細胞毒性(adcc)中抗體的參與。
[0360]
當在本文中使用時，術語「高變區」是指負責抗原結合的抗體的胺基酸殘基。高變區通常包含來自「互補決定區」或「cdr」的胺基酸殘基(例如，輕鏈可變結構域中的殘基24-34(l1)、50-56(l2)和89-97(l3)以及重鏈可變結構域中的殘基31-35(hl)、50-65(h2)和95-102(h3)；kabat等人，同上)和/或來自「高變環」的那些殘基(例如，輕鏈可變結構域中的殘基26-32(l1)、50-52(l2)和91-96(l3)以及重鏈可變結構域中的殘基26-32(h1)、53-55(h2)和96-101(h3))。「框架區」或「fr」殘基為除本文所定義的高變區殘基之外的那些可變結構域殘基。
[0361]
抗體的木瓜蛋白酶消化產生兩個相同的抗原結合片段，稱為「fab」片段，每個片段具有單一抗原結合位點，和殘餘的「fc」片段，其名稱反映了其易於結晶的能力。胃蛋白酶處
理產生f(ab』)2片段，其具有兩個抗原結合位點並且仍然能夠交聯抗原。
[0362]「fv」是包含完全抗原識別和抗原結合位點的最小抗體片段。該區域由緊密非共價締合的一條重鏈可變結構域和一條輕鏈可變結構域的二聚體組成。正是以這種每個可變結構域的三個高變區相互作用的構型限定了vh-vl二聚體表面上的抗原結合位點。這六個高變區共同賦予抗體抗原結合特異性。然而，即便是單一可變結構域(或僅包含對抗原具有特異性的三個高變區的fv的一半)也具有識別和結合抗原的能力，儘管其親和力低於整個結合位點。
[0363]
fab片段也含有輕鏈的恆定結構域和重鏈的第一恆定結構域(ch1)。fab』片段與fab片段的不同之處在於在重鏈ch1結構域的羧基末端添加了幾個殘基，包括來自抗體鉸鏈區的一個或多個半胱氨酸。本文中將其中恆定結構域的半胱氨酸殘基帶有至少一個游離硫醇基的fab'稱為fab'-sh。f(ab』)2抗體片段最初是作為fab』片段對產生的，它們之間具有鉸鏈半胱氨酸。抗體片段的其他化學偶聯也是已知的。
[0364]
基於其恆定結構域的胺基酸序列，來自任何脊椎動物物種的抗體的「輕鏈」可被歸為兩種明顯不同的類型(稱為κ(.κ.)和λ(.λ.))中的一種。
[0365]「單鏈fv」或「scfv」抗體片段包含抗體的vh和vl結構域，其中這些結構域存在於單個多肽鏈中。fv多肽還可包含在vh和vl結構域之間的多肽接頭，該多肽接頭使得scfv能夠形成用於抗原結合的期望結構。
[0366]
術語「雙抗體」是指具有兩個抗原結合位點的小抗體片段，這些片段包含在同一多肽鏈(vh-vl)中與可變輕結構域(vl)連接的可變重結構域(vh)。通過使用太短而無法在同一條鏈上的兩個結構域之間配對的接頭，這些結構域被迫與另一條鏈的互補結構域配對並產生兩個抗原結合位點。
[0367]「人源化」形式的非人(例如，嚙齒類動物)抗體為含有來源於非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗體。人源化是將鼠抗原結合信息轉移至非免疫原性人抗體受體的方法，並且已產生了許多治療上有用的藥物。人源化方法一般通過將所有六個鼠互補決定區(cdr)轉移到人抗體框架上而開始。這些cdr移植的抗體通常不保留它們對抗原結合的原始親和力，並且事實上，親和力經常嚴重受損。除cdr外，還必須併入所選擇的非人抗體框架殘基以維持正確的cdr構象。已顯示將關鍵小鼠框架殘基轉移至人受體以支持移植的cdr的結構構象可恢復抗原結合和親和力。在大多數情況下，人源化抗體是其中來自受體高變區的殘基被來自非人物種(供體抗體)諸如小鼠、大鼠、兔或非人靈長類的具有期望特異性、親和力和能力的高變區殘基替換的人免疫球蛋白(受體抗體)。在一些情況下，人免疫球蛋白的框架區(fr)殘基被對應的非人殘基替換。此外，人源化抗體可包含受體抗體或供體抗體中未發現的殘基。進行這些修飾以進一步完善抗體性能。一般來講，人源化抗體將包含基本上所有的至少一個且通常兩個可變結構域，其中所有或基本上所有的高變環對應於非人免疫球蛋白的那些並且所有或基本上所有的fr為人免疫球蛋白序列的那些。人源化抗體任選地還將包含免疫球蛋白恆定區(fc)的至少一部分，通常人免疫球蛋白的免疫球蛋白恆定區的至少一部分。
[0368]「分離的」抗體是已從其天然環境的組分中鑑定、分離和/或回收的抗體。其天然環境的汙染成分是會干擾抗體的診斷或治療用途的物質，並且可能包括酶、激素和其他蛋白質或非蛋白質溶質。在某些方面，抗體將被純化(1)至通過lowry方法測定的大於95重量％、
或大於重量99％的抗體，(2)通過使用氣相蛋白質測序儀足以獲得至少15個n-端或內部胺基酸序列殘基的程度，或(3)通過sds-page在還原或非還原條件下使用考馬斯藍或銀染色達到均一性。分離的抗體包括重組細胞內的原位抗體，因為抗體天然環境中的至少一種成分將不存在。然而，通常通過至少一個純化步驟來製備分離的抗體。
[0369]「癌症」是指以體內異常細胞不受控制的生長為特徵的一大類各種疾病。不受調控的細胞分裂和生長導致惡性腫瘤的形成，這些惡性腫瘤侵襲鄰近組織，並且還可通過淋巴系統或血流轉移到身體的遠處部位。如本文所用，「癌症」是指原發性、轉移性和復發性癌症。
[0370]
如本文所用，術語「免疫應答」是指脊椎動物內針對外來因子的生物學應答，該應答保護生物體抵抗這些因子和由它們引起的疾病。免疫應答由免疫系統的細胞(例如，t淋巴細胞、b淋巴細胞、自然殺傷(nk)細胞、巨噬細胞、嗜酸性粒細胞、肥大細胞、樹突細胞或嗜中性粒細胞)和由這些細胞中的任何細胞或肝臟產生的可溶性大分子(包括抗體、細胞因子和補體)的作用介導，其導致選擇性靶向、結合、損害、破壞和/或消除脊椎動物體內的入侵病原體、感染病原體的細胞或組織、癌細胞或其他異常細胞、或在自身免疫或病理性炎症的情況下正常人細胞或組織。免疫反應包括例如t細胞(例如效應t細胞或th細胞，諸如cd4
+
或cd8
+
t細胞)的激活或抑制，或treg細胞的抑制。如本文所用，術語「t細胞」和「t淋巴細胞」是可互換的並且是指由胸腺產生或加工的任何淋巴細胞。在一些方面，t細胞為cd4+t細胞。在一些方面，t細胞為cd8+t細胞。在一些方面，t細胞為nkt細胞。
[0371]「受試者」包括任何人或非人動物。術語「非人動物」包括但不限於脊椎動物諸如非人靈長類、綿羊、狗和嚙齒類動物諸如小鼠、大鼠和豚鼠。在一些方面，受試者為人。術語「受試者」和「患者」在本文中可互換使用。
[0372]
術語「治療有效量」或「治療有效劑量」是指提供期望生物學、治療和/或防預結果的劑(例如，本文公開的新降解劑或新降解劑綴合物)的量。該結果可以是疾病的體徵、症狀或病因中的一種或多種的減少、改善、緩和、減輕、延遲和/或緩解，或生物學系統的任何其他期望的改變。關於實體瘤，有效量包括足以引起腫瘤縮小和/或降低腫瘤生長速率(例如抑制腫瘤生長)或預防或延遲其他不需要的細胞增殖的量。在一些方面，有效量是足以延遲腫瘤發展的量。在一些方面，有效量是足以預防或延遲腫瘤復發的量。因此，可以一次或多次施用來施用有效量。例如，有效量的組合物可例如(i)減少癌細胞的數量；(ii)減小腫瘤大小；(iii)在一定程度上抑制、延緩、減緩並能阻止癌細胞向周圍器官的浸潤；(iv)抑制(即在一定程度上減緩並能阻止腫瘤轉移；(v)抑制腫瘤生長；(vi)預防或延遲腫瘤的發生和/或復發；和/或(vii)在一定程度上緩解與癌症相關的一種或多種症狀。
[0373]
在一些方面，「治療有效量」是經臨床證明顯著減少癌症諸如晚期實體瘤或減緩癌症諸如晚期實體瘤的進展(消退)的新降解劑或新降解劑綴合物的量。治療劑促進疾病消退的能力可使用本領域技術人員已知的多種方法諸如在臨床試驗期間在人受試者中、在預測人中功效的動物模型系統中、或通過在體外測定中測定該劑的活性來評估。
[0374]
如本文所用，術語「護理標準」是指被醫學專家接受為對某種類型疾病的適當治療並被醫療保健專業人員廣泛使用的治療方法。該術語可與以下術語中的任一種互換使用：「最佳實踐」、「標準醫療護理」和「標準療法」。
[0375]
舉例來說，「抗癌劑」促進受試者的癌症消退或預防腫瘤的進一步生長。在某些方
面，治療有效量的藥物促進癌症消退至消除癌症的程度。
[0376]
關於治療的術語「有效」和「有效性」包括藥理有效性和生理安全性。藥理有效性是指藥物促進患者癌症消退的能力。生理安全性是指由施用藥物引起的在細胞、器官和/或生物體水平上的毒性水平或其他不良生理效應(副作用)。
[0377]
如本文所用，術語「免疫檢查點抑制劑」是指完全或部分減少、抑制、幹擾或調節一種或多種檢查點蛋白的分子。檢查點蛋白調節t細胞的激活或功能。許多檢查點蛋白是已知的，諸如ctla-4及其配體cd80和cd86以及pd-1及其配體pd-l1和pd-l2。pardoll,d.m.,nat rev cancer 12(4):252-64(2012)。這些蛋白質負責t細胞應答的共刺激或抑制相互作用。免疫檢查點蛋白調節和維持自身耐受性以及生理免疫應答的持續時間和幅度。免疫檢查點抑制劑包括抗體或來源於抗體。
[0378]
術語「治療(treat或treatment)」是指治療性治療和防預性或預防性措施，其中目的是預防或減緩(減輕)不希望的生理變化或疾患，諸如癌症的發展或擴散。出於本公開的目的，有益的或期望的臨床結果包括但不限於症狀的緩解、疾病程度的減輕、疾病狀態的穩定(即，不惡化)、疾病進展的延遲或減緩、疾病狀態的改善或緩和、以及消除(無論是部分的還是全部的)，無論是可檢測的還是不可檢測的。「治療」還可意指與不接受治療的預期生存期相比延長生存期。需要治療的那些包括已患有病症或疾患的那些，以及易於患病症或疾患的那些或要預防病症或疾患的那些。
[0379]
ii.新降解劑
[0380]
本公開提供了式(ii)的新降解劑：
[0381][0382]
或其藥學上可接受的鹽，其中：
[0383]
a為苯基或c
4-c
10
環烷基環；
[0384]
u選自nh和cf2；
[0385]
r1獨立地選自氫和滷代基；
[0386]
r2選自-c(o)r3、-n(r4)2、-(ch2)noh、-(ch2)nsh、-(ch2)nn(r4)2、-(ch2)nq』(ch2)moh、-(ch2)nq』(ch2)msh和-(ch2)nq』(ch2)mn(r4)2；其中
[0387]
r3為氫或c
1-c6烷基；
[0388]
每個r4獨立地為氫或c
1-c6烷基；
[0389]
q』為o、s或nr4；
[0390]
n為1-6；並且
[0391]
m為2-5；
[0392]
前提是當r2為nh2、-(ch2)nnh2或-(ch2)noh時，則r1為滷代基。
[0393]
在某些方面，本公開提供了式(ii)的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中：
[0394]
a為苯基環或c
4-c
10
環烷基環；
[0395]
u為nh；
[0396]
r1選自氫和滷代基；
[0397]
r2選自-(ch2)nq』(ch2)mn(r4)2、-(ch2)noh、-(ch2)nsh、-n(r4)2和-c(o)r3；其中：
[0398]
m為2；
[0399]
n為2；
[0400]
q』為-o-；
[0401]
r3為甲基；並且
[0402]
每個r4獨立地選自氫和甲基；
[0403]
前提是當r2為nh2或-(ch2)noh時，則r1為滷代基。
[0404]
如本文所用，術語「c
1-c6烷氧基」，如本文所用，是指通過氧原子連接到母體分子部分的c
1-c6烷基基團。
[0405]
如本文所用，術語「c
1-c6烷氧基c
1-c6烷基」是指通過c
1-c6烷基基團連接到母體分子部分的c
1-c6烷氧基基團。
[0406]
如本文所用，術語「c
1-c6烷基」是指衍生自含有一至六個碳原子的直鏈或支鏈飽和烴的基團。
[0407]
如本文所用，術語「c
4-c
10
環烷基」是指具有四至十個碳原子和零個雜原子的飽和單環烴環系統。環烷基的代表性實例包括但不限於環丁基、環戊基和環己基。含有七至十個原子的環烷基可以是單環或稠合、螺環或橋接雙環結構。
[0408]
如本文所用，術語「滷代基」是指f、cl、br或i。
[0409]
在一些方面，式(ii)的新降解劑為選自由以下組成的組的化合物：
[0410][0411]
在一些方面，式(ii)的新降解劑為
[0412][0413]
在一些方面，式(ii)的新降解劑為
[0414][0415]
在一些方面，式(ii)的新降解劑為
[0416][0417]
在一些方面，式(ii)的新降解劑為
[0418][0419]
在一些方面，式(ii)的新降解劑為
[0420][0421]
在一些方面，式(ii)的新降解劑為
[0422][0423]
在一些方面，式(ii)的新降解劑為
[0424]
[0425]
在一些方面，式(ii)的新降解劑為
[0426][0427]
在一些方面，本公開提供了式(ii)的新降解劑或其藥學上可接受的鹽，其中a為苯基；u為nh；r1為滷代基；並且r2為-(ch2)nq』(ch2)mn(r4)2，其中m和n為2，q』為o，一個r4為氫並且其他為甲基。
[0428]
在一些方面，本公開提供了式(ii)的新降解劑，其中a為苯基；u為nh；r1為滷代基；並且r2為-(ch2)nq』(ch2)mn(r4)2，其中m和n為2，q』為o，並且每個r4為甲基。
[0429]
在一些方面，本公開提供了式(ii)的新降解劑，其中a為苯基；u為nh；r1為滷代基；並且r2為-(ch2)noh，其中n為2。
[0430]
在一些方面，本公開提供了式(ii)的新降解劑，其中a為苯基；u為nh；r1為滷代基；並且r2為-(ch2)nsh，其中n為2。
[0431]
在一些方面，本公開提供了式(ii)的新降解劑，其中a為苯基；u為nh；r1為氫；並且r2為-n(r4)2，其中一個r4為氫並且其他為甲基。
[0432]
在一些方面，本公開提供了式(ii)的新降解劑，其中a為苯基；u為nh；r1為滷代基；並且r2為-n(r4)2，其中每個r4為氫。在一些方面，本公開提供了式(ii)的新降解劑，其中a為苯基；r1為氫；並且r2為-c(o)r3，其中r3為甲基。
[0433]
在一些方面，本公開提供了式(ii)的新降解劑，其中a為c
4-c
10
環烷基環；u為nh；r1為氫；並且r2為-(ch2)nq』(ch2)mn(r4)2，其中m和n為2，q』為o，一個r4為氫並且其他為甲基。
[0434]
iii.新降解劑綴合物
[0435]
本公開提供了本文公開的一種或多種新降解劑與結合部分的綴合物。這些綴合物可通過與小腦蛋白(crbn)結合、促進由crl4
crbn e3泛素連接酶介導的底物蛋白的募集和泛素化來降解蛋白質。這些劑充當「分子膠」，填充結合界面作為疏水貼片，其重新編程連接酶和新底物之間的蛋白質相互作用。
[0436]
在一些方面，本公開提供了(i)的化合物，
[0437]
[0438]
或其藥學上可接受的鹽，其中：
[0439]
a為1至10的整數；
[0440]
a為苯基或c
4-c
10
環烷基環；
[0441]
r1選自氫和滷代基；
[0442]
u選自nh和cf2；
[0443]
x選自-nr
2-、＝c(ch3)-、-q-(ch2)
n-和-q(ch2)mq』(ch2)
n-；其中：
[0444]
q和q』各自獨立地為o、s或nr2；
[0445]
r2為氫或c
1-c6烷基；
[0446]
n為1至6的整數；
[0447]
m為2至6的整數；
[0448]
其中每個基團的左側連接到l並且右側連接到a；
[0449]
前提是當x為nh或-q-(ch2)
n-時，r1為滷代基；
[0450]
l為可切割接頭或不可切割接頭；並且
[0451]
bm為結合部分。
[0452]
在一些方面，u為nh。
[0453]
在一些方面，本文所述的新降解劑綴合物具有針對腫瘤細胞系的體外抗增殖活性。在一些方面，包含新降解劑和結合部分的新降解劑綴合物具有比單獨的新降解劑或單獨的結合部分高至少約50％、至少約60％、至少約70％、至少約80％、至少約90％、至少約95％或至少約100％的體外抗增殖活性。在一些方面，包含新降解劑和結合部分的新降解劑綴合物具有比單獨的新降解劑或單獨的結合部分高至少約2倍、至少約3倍、至少約4倍、至少約5倍、至少約6倍、至少約7倍、至少約8倍、至少約9倍、至少約10倍的體外抗增殖活性。
[0454]
在一些方面，本文所述的新降解劑綴合物具有針對bt-474乳腺癌細胞系的體外抗增殖活性，例如與單獨的新降解劑或單獨的結合部分相比針對bt-474乳腺癌細胞系的更高的抗增殖活性。在一些方面，本文所述的新降解劑綴合物具有針對sk-br-3乳腺癌細胞系的體外抗增殖活性，例如與單獨的新降解劑或單獨的結合部分相比針對sk-br-3乳腺癌細胞系的更高的抗增殖活性。在一些方面，本文所述的新降解劑綴合物具有針對nci-n87胃癌細胞系的體外抗增殖活性，例如與單獨的新降解劑或單獨的結合部分相比針對nci-n87胃癌細胞系的更高的抗增殖活性。在一些方面，本文所述的新降解劑綴合物具有針對daudi淋巴瘤細胞系的體外抗增殖活性，例如與單獨的新降解劑或單獨的結合部分相比針對daudi淋巴瘤細胞系的更高的抗增殖活性。在一些方面，本文所述的新降解劑綴合物具有針對hl-60急性髓性白血病細胞系的體外抗增殖活性，例如與單獨的新降解劑或單獨的結合部分相比針對hl-60急性髓性白血病細胞系的更高的抗增殖活性。在一些方面，本文所述的新降解劑綴合物具有針對ramos非霍奇金淋巴瘤細胞系的體外抗增殖活性，例如與單獨的新降解劑或單獨的結合部分相比針對ramos非霍奇金淋巴瘤細胞系的更高的抗增殖活性。在一些方面，本文所述的新降解劑綴合物能夠在存在人血清的情況下維持其抗增殖活性。本文所述的新降解劑綴合物可用於治療癌症。
[0455]
iii.a.接頭
[0456]
本公開的新降解劑可經由接頭與結合部分連接。如本文所用，術語「接頭」是指能夠將結合部分(bm)連接到式(i)的化合物中的基團x的任何化學部分。
[0457]
在某些方面，接頭可含有異雙官能團。在本公開中，術語「異雙官能團」是指將接頭連接到結合部分的化學部分，其中接頭是結合部分的一部分。異雙官能團的特徵在於在化學部分的任一端具有不同的反應性基團。與「bm」的連接可通過化學或酶促綴合或兩者的組合來實現。化學綴合涉及結合部分表面上可接近的胺基酸殘基與異雙官能團上的反應柄的受控反應。化學綴合的實例包括但不限於賴氨酸醯胺偶聯、半胱氨酸偶聯和通過基因工程併入的經由非天然胺基酸的偶聯，其中具有期望反應柄的非天然胺基酸殘基安裝在「bm」上。在酶促綴合中，酶介導接頭與結合部分上可接近的氨基殘基的偶聯。酶促綴合的實例包括但不限於使用分選酶的轉肽、使用微生物轉穀氨醯胺酶的轉肽和n-聚糖工程化。化學綴合和酶促綴合也可順序使用。例如，酶促綴合也可用於在「bm」上安裝獨特的反應柄，以用於隨後的化學綴合。
[0458]
在一些方面，異雙官能團選自：
[0459][0460]
其中
[0461]
為與接頭的剩餘部分的連接點；並且
[0462]
為與bm的連接點。
[0463]
在某些方面，接頭「l」為不可切割的。如本文所用，術語「不可切割接頭」是能夠以穩定、共價方式將結合部分連接到新降解劑並且不屬於本文定義為「可切割接頭」的類別的任何化學部分。因此，不可切割接頭基本上對酸誘導的切割、光誘導的切割、生物還原性切割、肽酶誘導的切割、酯酶誘導的切割和二硫鍵切割有抗性。「基本上對切割有抗性」是指在至少80％、優選地至少85％、更優選地至少90％、甚至更優選地至少95％、並且最優選地至少99％的抗體新降解劑綴合物群體中的接頭中或鄰接接頭的化學鍵保持為不可被酸、光不穩定切割劑、生物還原劑、肽酶、酯酶、或切割可切割接頭中的化學鍵(例如，二硫鍵)的化學或生理化合物切割，持續用上述劑中的任一種處理數小時至數天。在某些方面，在新降解劑和/或結合部分可保持活性的條件下，接頭對酸誘導的切割、光誘導的切割、生物還原性切割、酶促切割等不敏感。由不可切割接頭生成的adc分解代謝物含有來自抗體的殘餘胺基酸。這些分解代謝物可在它們被遞送到的靶細胞中發揮獨特和意想不到的特性。
[0464]
本領域普通技術人員將容易地區分不可切割接頭與可切割接頭。
[0465]
不可切割接頭的實例包括但不限於smcc(4-(n-馬來醯亞胺甲基)環己烷-1-甲酸琥珀醯亞胺酯)接頭、琥珀醯亞胺硫醚接頭和諸如以下的接頭：
[0466][0467]
其中：
[0468]
p為1至10的整數；
[0469]
為與x的連接點；並且
[0470]
為與結合部分的連接點。
[0471]
在一些方面，接頭為：
[0472][0473]
在一些方面，p為5。
[0474]
在某些方面，接頭可以是可切割的。在一些方面，在新降解劑和/或結合部分可保持活性的條件下，接頭可對酸誘導的切割、光誘導的切割、生物還原性切割、酶促切割等敏感。
[0475]
在一些方面，可切割接頭可被酶促切割。在一些方面，可切割接頭可被蛋白酶、肽酶、酯酶、β-葡萄糖醛酸酶、糖苷酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、焦磷酸酶或脂肪酶切割。
[0476]
在一些方面，可切割接頭可被蛋白酶切割。蛋白酶的實例包括但不限於組織蛋白酶b、vagp四肽等。
[0477]
在某些方面，可切割接頭含有肽。在一些方面，肽為接頭的切割位點，從而在暴露於細胞內蛋白酶諸如溶酶體酶時促進藥物的釋放。肽可被設計和優化以通過特定酶進行酶促切割，該特定酶例如腫瘤相關的蛋白酶、組織蛋白酶b、c和d或纖溶酶蛋白酶。具有兩個胺基酸的肽的實例包括但不限於丙氨酸-丙氨酸(ala-ala)、纈氨酸-丙氨酸(val-ala)、纈氨酸-瓜氨酸(vc或val-cit)、丙氨酸-苯丙氨酸(af或ala-phe)、苯丙氨酸-賴氨酸(fk或phe-lys)、苯丙氨酸-高賴氨酸(phe-homolys)和n-甲基-纈氨酸-瓜氨酸(me-val-cit)。具有三個胺基酸的肽的實例包括但不限於甘氨酸-纈氨酸-瓜氨酸(gly-val-cit)、天冬氨酸-纈氨酸-瓜氨酸(asp-val-cit)、丙氨酸-丙氨酸-天冬醯胺(ala-ala-asn)、丙氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸(ala-phe-lys)、甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸(gly-gly-phe)和甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(gly-gly-gly)。具有四個胺基酸的肽的實例包括但不限於甘氨酸-甘氨酸-纈氨酸-瓜氨酸(gly-gly-val-cit)和甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸(gly-gly-phe-gly)。上述胺基酸
組合也可以相反的順序存在(即cit-val)。
[0478]
本公開的肽可包含胺基酸殘基的l-或d-異構體。術語「天然存在的胺基酸」是指ala、asp、asx、cit、cys、glu、phe、glx、gly、his、ile、lys、leu、met、asn、pro、gln、arg、ser、thr、val、trp和tyr。「d
‑」
表示具有「d」(右旋)構型的胺基酸，與天然存在的(「l
‑」
)胺基酸的構型相反。本文所述的胺基酸可商購(sigma chemical co.,advanced chemtech)或使用本領域已知的方法合成。
[0479]
在某些方面，接頭(「l」)為選自以下的蛋白酶可切割接頭
[0480][0481]
其中：
[0482]
q為2至10的整數；
[0483]
z1、z2、z3和z4各自獨立地不存在或為l-或d-構型的天然存在的胺基酸殘基，前提是z1、z2、z3和z4中的至少兩者為胺基酸殘基；
[0484]
為與x的連接點；並且
[0485]
為與結合部分的連接點。
[0486]
在一些方面，z1、z2、z3和z4獨立地不存在或選自由以下組成的組：l-纈氨酸、d-纈氨酸、l-瓜氨酸、d-瓜氨酸、l-丙氨酸、d-丙氨酸、l-穀氨醯胺、d-穀氨醯胺、l-穀氨酸、d-穀氨酸、l-天冬氨酸、d-天冬氨酸、l-天冬醯胺、d-天冬醯胺、l-苯丙氨酸、d-苯丙氨酸、l-賴氨酸、d-賴氨酸和甘氨酸；前提是z1、z2、z3和z4中的至少兩者為胺基酸殘基。
[0487]
在一些方面，z1不存在或為甘氨酸；z2不存在或選自l-穀氨醯胺、d-穀氨醯胺、l-谷
氨酸、d-穀氨酸、l-天冬氨酸、d-天冬氨酸、l-丙氨酸、d-丙氨酸和甘氨酸；z3選自l-纈氨酸、d-纈氨酸、l-丙氨酸、d-丙氨酸、l-苯丙氨酸、d-苯丙氨酸和甘氨酸；並且z4選自l-丙氨酸、d-丙氨酸、l-瓜氨酸、d-瓜氨酸、l-天冬醯胺、d-天冬醯胺、l-賴氨酸、d-賴氨酸、l-苯丙氨酸、d-苯丙氨酸和甘氨酸。
[0488]
在一些方面，l為
[0489][0490]
在一些方面，q為5。
[0491]
在某些方面，l為焦磷酸酶可切割接頭。
[0492]
在一些方面，l為焦磷酸酶可切割接頭，其為：
[0493][0494]
其中：
[0495]
q為2至10的整數；
[0496]
為與x的連接點；並且
[0497]
為與結合部分的連接點。
[0498]
在某些方面，l為β-葡萄糖醛酸酶可切割接頭。
[0499]
在一些方面，l為選自以下的β-葡萄糖醛酸酶可切割接頭：
[0500][0501]
其中：
[0502]
q為2至10的整數；
[0503]
‑‑‑‑
不存在或為鍵；
[0504]
為與x的連接點；並且
[0505]
為與結合部分的連接點。
[0506]
在一些方面，接頭為可生物還原的。可生物還原接頭利用細胞內區室相對於血漿的還原電位的差異。腫瘤細胞的細胞質中存在的還原型穀胱甘肽比正常細胞的細胞質中存在的還原型穀胱甘肽高出1000倍，並且腫瘤細胞還含有可有助於細胞區室減少的酶。接頭在體循環期間保持綴合物完整，並被細胞內高濃度的穀胱甘肽選擇性切割，在腫瘤部位處由無毒前藥釋放活性藥物。
[0507]
在一些方面，l是選自以下的可生物還原接頭：
[0508][0509]
其中：
[0510]
q為2至10的整數；
[0511]
r、r』、r」和r
』」
各自獨立地選自氫、c
1-c6烷氧基c
1-c6烷基、(c
1-c6)2nc
1-c6烷基和c
1-c6烷基，或者，兩個偕r基團與它們所連接的碳原子一起可形成環丁基或環丙基環；
[0512]
為與x的連接點；並且
[0513]
為與結合部分的連接點。
[0514]
在某些方面，接頭為酸可切割的。酸可切割接頭被特別設計成在血液循環的中性ph下保持穩定，但在細胞區室的酸性環境中發生水解並釋放細胞毒性藥物。
[0515]
在一些方面，l為選自以下的酸可切割接頭
[0516][0517]
其中：
[0518]
q為2至10的整數；
[0519]
為與x的連接點；並且
[0520]
為與結合部分的連接點。
[0521]
在某些方面，其中l為點擊釋放接頭，其中新降解劑的釋放由四嗪或相關化合物化學觸發。
[0522]
在某些方面，l為選自以下的點擊釋放接頭
[0523][0524]
其中：
[0525]
q為2至10的整數；
[0526]
為與x的連接點；並且
[0527]
為與結合部分的連接點。
[0528]
iii.b.結合部分
[0529]
本公開提供了與結合部分綴合的新降解劑。如本文所用，術語「結合部分」是指識別並結合細胞表面標誌物或受體的任何分子。在某些方面，結合部分結合蛋白質，不限於多肽部分。結合部分除了將新降解劑靶向特定的細胞、組織或位置外，還可具有某些治療作用，諸如針對靶細胞或途徑的抗增殖(細胞抑制和/或細胞毒性)活性。在某些方面，結合部分可包含或可被工程化以包含至少一個化學反應性基團諸如羧酸、胺、硫醇或化學反應性胺基酸部分或側鏈。在一些方面，結合部分可包含對於給定靶細胞群體的靶向部分，其與細胞表面分子，諸如細胞表面受體或抗原結合或複合。在與受體特異性結合或複合後，細胞允許攝取靶向部分或新降解劑綴合物，然後將其內化到細胞中。
[0530]
在一些方面，基團「bm」可為可特異性結合細胞表面分子的部分。在一些方面，基團「bm」可為與細胞表面受體或抗原結合的肽或蛋白質。
[0531]
在某些方面，基團「bm」可為抗體、抗體片段或抗原結合片段。抗體為由能夠識別和結合特異性抗原的免疫系統所生成的蛋白質。靶抗原通常具有由多種抗體上的cdr識別的許多結合位點，也稱為表位。特異性結合不同表位的每種抗體具有不同的結構。因此，一種抗原可具有多於一種對應抗體。本文的術語「抗體」以最廣義使用，並且具體涵蓋單克隆抗體、單結構域抗體、多克隆抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)和抗體片段，只要它們表現出期望的生物學活性即可。抗體可為鼠抗體、人抗體、人源化抗體、嵌合抗體或源自其他物種的抗體。
[0532]
可與新降解劑綴合的單克隆抗體是針對特定抗原決定簇(例如癌細胞抗原、病毒抗原、微生物抗原、蛋白質、肽、碳水化合物、化學物質、核酸或其片段)的抗體的同質群體。可通過使用本領域已知的任何技術來製備針對感興趣抗原的單克隆抗體(mab)，這些技術通過培養中的連續細胞系產生抗體分子。這些技術包括但不限於雜交瘤技術、人b細胞雜交瘤技術和ebv-雜交瘤技術。此類抗體可以是任何免疫球蛋白類別，包括igg、igm、ige、iga和igd以及它們的任何亞類。產生在本公開中使用的mab的雜交瘤可在體外或體內培養。
[0533]
有用的單克隆抗體包括但不限於人單克隆抗體、人源化單克隆抗體、抗體片段或嵌合人-小鼠(或其他物種)單克隆抗體。人單克隆抗體可通過本領域已知的多種技術中的
任一種來製備。
[0534]
抗體也可以是雙特異性抗體。製備雙特異性抗體的方法是本領域已知的。全長雙特異性抗體的傳統生產基於兩個免疫球蛋白重鏈-輕鏈對的共表達，其中兩條鏈具有不同的特異性。由於免疫球蛋白重鏈和輕鏈的隨機分配，這些雜交瘤(四源雜交瘤(quadromas))產生10種不同抗體分子的潛在混合物，其中僅一種具有正確的雙特異性結構。通常使用親和色譜法步驟進行的正確分子的純化相當麻煩，並且產物產率低。
[0535]
根據不同的方法，將具有期望結合特異性的抗體可變結構域(抗體-抗原結合位點)與免疫球蛋白恆定結構域序列融合。融合可與免疫球蛋白重鏈恆定結構域(包括鉸鏈、c.sub.h2和c.sub.h3區的至少一部分)進行。第一重鏈恆定區(c.sub.h1)可含有輕鏈結合所必需的位點，存在於至少一個融合體中。將具有編碼免疫球蛋白重鏈融合體和(如果需要)免疫球蛋白輕鏈的序列的核酸插入單獨的表達載體中，並共轉染到合適的宿主生物體中。當用於構建的三條多肽鏈的不等比率提供最佳產率時，這在各方面提供了調整三條多肽片段的相互比例的極大靈活性。然而，當至少兩條多肽鏈以相等比率表達導致高產率時或當比率沒有特別意義時，可將兩條或所有三條多肽鏈的編碼序列插入一個表達載體中。
[0536]
雙特異性抗體可具有在一個臂中的帶有第一結合特異性的雜合免疫球蛋白重鏈，並且在另一臂中的雜合免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(提供第二結合特異性)。這種不對稱結構有利於從不需要的免疫球蛋白鏈組合中分離出期望的雙特異性化合物，因為僅一半雙特異性分子中存在免疫球蛋白輕鏈提供了簡便的分離方式。使用此類技術，可製備雙特異性抗體，用於在如本文所定義的疾病的治療或預防中與新降解劑綴合。
[0537]
雜合或雙功能抗體可以是生物學來源的，即通過細胞融合技術，或化學來源的，尤其是用交聯劑或二硫橋形成劑，並且可包含完整抗體或其片段。
[0538]
抗體可以是免疫特異性結合癌細胞抗原、病毒抗原或微生物抗原的抗體的功能活性片段、衍生物或類似物，或結合腫瘤細胞或基質的其他抗體。在這方面，「功能活性」是指片段、衍生物或類似物能夠引發抗-抗獨特型抗體，該抗-抗獨特型抗體識別與片段、衍生物或類似物所源自的抗體所識別的抗原相同的抗原。具體地，在示例性方面，免疫球蛋白分子的獨特型的抗原性可通過缺失特異性識別抗原的cdr序列的c-端的框架和cdr序列來增強。為了確定哪些cdr序列結合抗原，含有cdr序列的合成肽可通過本領域已知的任何結合測定方法用於與抗原的結合測定。
[0539]
其他有用的抗體包括抗體片段，諸如但不限於：f(ab')2片段，其含有可變區、輕鏈恆定區和重鏈ch1結構域，其可通過胃蛋白酶消化抗體分子產生；和fab片段，其可通過還原f(ab')2片段的二硫橋生成。其他有用的抗體為抗體的重鏈和輕鏈二聚體，或其任何最小片段，諸如fvs或單鏈抗體(sca)，或具有與抗體相同特異性的任何其他分子。
[0540]
另外，可使用標準重組dna技術製備的重組抗體，諸如包含人和非人部分的嵌合和人源化單克隆抗體，是有用的抗體。嵌合抗體是其中不同部分源自不同動物物種的分子，諸如具有源自鼠單克隆的可變區和人免疫球蛋白恆定區的那些。人源化抗體是來自非人物種的抗體分子，其具有來自非人物種的一個或多個互補決定區(cdr)和來自人免疫球蛋白分子的框架區。此類嵌合和人源化單克隆抗體可通過本領域已知的重組dna技術產生。
[0541]
可使用不能表達內源免疫球蛋白重鏈和輕鏈基因但可表達人重鏈和輕鏈基因的轉基因小鼠來生產完全人抗體。用所選擇的抗原例如本公開的多肽的全部或一部分以正常
方式免疫轉基因小鼠。可使用常規雜交瘤技術獲得針對該抗原的單克隆抗體。轉基因小鼠攜帶的人免疫球蛋白轉基因在b細胞分化期間重新排列，隨後發生類別轉換和體細胞突變。因此，使用此類技術，可能產生治療上有用的igg、iga、igm和ige抗體。關於用於生產人抗體的這種技術的概述，參見lonberg和huszar(1995,int.rev.immunol.13:65-93)。其他人抗體可從例如abgenix,inc.(freemont,calif.)和genpharm(san jose,calif.)商購獲得。
[0542]
可使用稱為「指導選擇」的技術來生成識別所選擇的表位的完全人抗體。在該方法中，使用所選擇的非人單克隆抗體，例如小鼠抗體，來指導選擇識別相同表位的完全人抗體。人抗體也可使用本領域已知的各種技術產生，包括噬菌體展示文庫。
[0543]
抗體可以是抗體或其功能活性片段的融合蛋白，例如其中抗體通過共價鍵(例如肽鍵)在n-端或c-端與不是抗體的另一種蛋白質(或其部分，諸如蛋白質的至少10、20或50個胺基酸部分)的胺基酸序列融合。抗體或其片段可在恆定結構域的n-端處與其他蛋白質共價連接。
[0544]
抗體包括經修飾的類似物和衍生物，即通過任何類型分子的共價連接，只要此類共價連接允許抗體保持其抗原結合免疫特異性。例如，但不作為限制，抗體的衍生物和類似物包括例如通過糖基化、乙醯化、聚乙二醇化、磷酸化、醯胺化、通過已知的保護/封閉基團衍生化、蛋白水解切割、連接到細胞抗體單元或其他蛋白質等已被進一步修飾的那些。許多化學修飾中的任一種都可通過已知技術進行，這些技術包括但不限於特異性化學切割、乙醯化、甲醯化、在衣黴素存在下的代謝合成等。另外，類似物或衍生物可含有一個或多個非天然胺基酸。
[0545]
新降解劑綴合物中的抗體可包括在與fc受體相互作用的胺基酸殘基中具有修飾(例如，取代、缺失或添加)的抗體。特別地，抗體包括在被鑑定為參與抗fc結構域和fcrn受體之間相互作用的胺基酸殘基中具有修飾的抗體。對癌細胞抗原免疫特異性的抗體可從例如genentech(san francisco,calif.)商購獲得或通過本領域技術人員已知的任何方法(諸如例如，化學合成或重組表達技術)產生。編碼對癌細胞抗原免疫特異性的抗體的核苷酸序列可例如從genbank資料庫或類似的資料庫、文獻出版物或通過常規克隆和測序獲得。
[0546]
在某些方面，新降解劑綴合物的抗體可以是單克隆抗體，例如鼠單克隆抗體、嵌合抗體或人源化抗體。在一些方面，抗體可以是抗體片段，例如fab片段。
[0547]
用於治療或預防癌症的已知抗體可與本文所述的新降解劑綴合。對癌細胞抗原免疫特異性的抗體可商購獲得或通過本領域技術人員已知的任何方法(諸如例如，重組表達技術)產生。編碼對癌細胞抗原免疫特異性的抗體的核苷酸序列可例如從genbank資料庫或類似的資料庫、文獻出版物或通過常規克隆和測序獲得。可用於治療癌症的抗體的實例包括但不限於用於治療轉移性乳腺癌患者的人源化抗her2單克隆抗體；rituxan.rtm.(利妥昔單抗；genentech)，其為一種用於治療非霍奇金淋巴瘤患者的嵌合抗cd20單克隆抗體；ovarex(奧戈伏單抗；altarex corporation,ma)，其為一種用於治療卵巢癌的鼠抗體；panorex(依決洛單抗(edrecolomab)，glaxo wellcome,nc)，其為一種用於治療結直腸癌的鼠igg.sub.2a抗體；西妥昔單抗erbitux(西妥昔單抗，imclone systems inc.,ny)，其為一種用於治療表皮生長因子陽性癌症諸如頭頸癌的抗egfr igg嵌合抗體；vitaxin(埃達珠單抗(etaracizumab)，medimmune,inc.,md)，其為一種用於治療肉瘤的人源化抗體；campath i/h(阿侖單抗，leukosite,ma)，其為一種用於治療慢性淋巴細胞白血病(cll)的人源化
igg.sub.l抗體；smart mi95(protein design labs,inc.,ca)，其為一種用於治療急性髓性白血病(aml)的人源化抗cd33 igg抗體；lymphocide(依帕珠單抗(epratuzumab)，immunomedics,inc.,nj)，其為一種用於治療非霍奇金淋巴瘤的人源化抗cd22 igg抗體；smart id 10(protein design labs,inc.,ca)，其為一種用於治療非霍奇金淋巴瘤的人源化抗hla-dr抗體；oncolym(techniclone,inc.,ca)，其為一種用於治療非霍奇金淋巴瘤的放射性標記的鼠抗hla-dr10抗體；allomune(biotransplant,ca)，其為一種用於治療霍奇金病或非霍奇金淋巴瘤的人源化抗cd2mab；avastin(貝伐單抗，genentech,inc.,ca)，其為一種用於治療肺癌和結直腸癌的抗vegf人源化抗體；依帕珠單抗(immunomedics,inc.,nj和amgen,ca)，其為一種用於治療非霍奇金淋巴瘤的抗cd22抗體；和ceacide(immunomedics,nj)，其為一種用於治療結直腸癌的人源化抗cea抗體。
[0548]
可用於新降解劑綴合物的其他抗體包括但不限於曲妥珠單抗、吉妥珠單抗、帕妥珠單抗、奧比妥珠單抗、奧法木單抗、達雷木單抗、sti-6129、林妥珠單抗、humy9-6、貝蘭坦單抗、英達妥昔單抗、迪努妥昔單抗、抗cd38 a2抗體、huat 13/5h3s抗體、替伊莫單抗、託西莫單抗、帕尼單抗、曲美木單抗、替昔木單抗、卡妥索單抗和維妥珠單抗。在某些方面，抗體選自利妥昔單抗、曲妥珠單抗、帕妥珠單抗、or000213、林妥珠單抗和吉妥珠單抗。
[0549]
可用於新降解劑綴合物的其他抗體包括但不限於針對以下抗原的抗體：ca125(卵巢)、ca15-3(癌)、ca19-9(癌)、l6(癌)、lewis y(癌)、lewis x(癌)、甲胎蛋白(癌)、ca 242(結直腸)、胎盤鹼性磷酸酶(癌)、前列腺特異性抗原(前列腺)、前列腺酸性磷酸酶(前列腺)、表皮生長因子(癌)、mage-1(癌)、mage-2(癌)、mage-3(癌)、mage-4(癌)、抗轉鐵蛋白受體(癌)、p97(黑素瘤)、muc1-klh(乳腺癌)、cea(結直腸)、gp100(黑素瘤)、mart1(黑素瘤)、psa(前列腺)、il-2受體(t細胞白血病和淋巴瘤)、cd20(非霍奇金淋巴瘤)、cd52(白血病)、cd33(白血病)、cd22(淋巴瘤)、人絨毛膜促性腺激素(癌)、cd38(多發性骨髓瘤)、cd40(淋巴瘤)、粘蛋白(癌)、p21(癌)、mpg(黑素瘤)和neu致癌基因產物(癌)。一些特定的有用的抗體包括但不限於br96 mab(trail,p.a.等人science(1993)261,212-215)、br64(trail,p a等人cancer research(1997)57,100-105)、針對cd40抗原的mab諸如s2c6 mab(francisco,j.a.等人cancer res.(2000)60:3225-3231)、針對cd70抗原的mab諸如1f6 mab，以及針對cd30抗原的mab諸如ac10。可使用許多其他與腫瘤相關抗原結合的內化抗體，並已對其進行了綜述。
[0550]
本發明綴合物可結合的其他抗原包括但不限於5t4、ace、adrb3、akap-4、alk、雄激素受體、aoc3、app、軸蛋白1、axl、b7h3、b7-h4、bcl2、bcma、bcr-abl、boris、bst2、c242、c4.4a、ca 125、ca6、ca9、caix、ccl11、ccr5、cd123、cd133、cd138、cd142、cd15、cd15-3、cd171、cd179a、cd18、cd19、cd19-9、cd2、cd20、cd22、cd23、cd24、cd25、cd27l、cd28、cd3、cd30、cd31、cd300lf、cd33、cd352、cd37、cd38、cd4、cd40、cd41、cd44、cd44v6、cd5、cd51、cd52、cd54、cd56、cd62e、cd62p、cd62l、cd70、cd71、cd72、cd74、cd79a、cd79b、cd80、cd90、cd97、cd125、cd138、cd141、cd147、cd152、cd154、cd326、cea、ceacam5、cftr、凝集因子、ckit、閉合蛋白3、閉合蛋白18.2、cldn6、clec12a、cll-1、cll3、c-met、cripto蛋白、cs1、ctla-4、cxcr2、cxorf61、細胞周期蛋白b1、cyp1b1、鈣粘蛋白-3、鈣粘蛋白-6、dll3、e7、ednrb、efna4、egfr、egfrviii、elf2m、emr2、enpp3、epcam、epha2、肝配蛋白a4、肝配蛋白b2、ephb4、erbb2(her2/neu)、erbb3、erg(tmprss2 ets融合基因)、etbr、etv6-aml、fap、fcar、
fcrl5、fgfr1、fgfr2、fgfr3、fgfr4、flt3、葉酸受體α、葉酸受體β、folr1、fos相關抗原1、巖藻糖基gm1、gcc、gd2、gd3、globoh、gm3、gpc1、gpc2、gpc3、gp1oo、gpnmb、gpr20、gprc5d、gucy2c、havcr1、her2、her3、hgf、hmi.24、hmwmaa、hpv e6、htert、人端粒酶逆轉錄酶、icam、icos-l、ifn-α、ifn-γ、igf-i受體、igll1、il-2受體、il-4受體、il-13ra2、il-1 1ra、il-1、il-12、il-23、il-13、il-22、il-4、il-5、il-6、幹擾素受體、整聯蛋白(包括α4、αvβ3、αvβ5、αvβ6、α1β4、α4β1、α4β7、α5β1、α6β4、αiibβ3整聯蛋白)、整聯蛋白αv、腸羧基酯酶、kit、lage-1a、lair1、lamp-1、lck、豆莢蛋白、lewisy、lfa-l(cd11a)、l-選擇素(cd62l)、lilra2、liv-1、lmp2、lrrc15、ly6e、ly6k、ly75、mad-ct-1、mad-ct-2、mage al、melana/martl、間皮素、ml-iap、msln、粘蛋白、muc1、muc16、mut hsp70-2、mycn、肌肉生長抑制素、na17、napi2b、nca-90、ncam、連接蛋白-4、ngf、notch1、notch2、notch3、notch4、ny-br-1、ny-eso-1、鄰乙醯基-gd2、or51e2、oy-tes1、p53、p53突變體、panx3、pap、pax3、pax5、p-cad、pcta-1/半乳凝素8、pd-l1、pd-l2、pdgfr、pdgfr-β、磷脂醯絲氨酸、pik3ca、plac1、聚唾液酸、前列腺酶、前列腺癌細胞、前列腺素、銅綠假單胞菌、狂犬病毒、生存素和端粒酶、prss21、psca、psma、ptk7、rage-1、rankl、ras突變體、呼吸道合胞病毒、恆河猴因子、rhoc、ron、ror1、ror2、ru1、ru2、肉瘤易位斷點、sart3、slamf7、slc44a4、sle、slitrk6、精子蛋白17、1-磷酸鞘氨醇、ssea-4、ssx2、steap1、tag72、tarp、tcrβ、tem1/cd248、tem7r、腱生蛋白c、tf、tgf-1、tgf-β2、tnf-α、tgs5、tie 2、tim-1、tn ag、trac、trail-r1、trail-r2、trop-2、trp-2、trpv1、tshr、腫瘤抗原ctaa16.88、酪氨酸酶、upk2、vegf、vegfr1、vegfr2、波形蛋白、wt1和/或xage1。
[0551]
和與抗原呈遞細胞相關的抗原諸如cd40、ox40l、endoglin、dec-205、4-1bbl、cd36、cd36、cd204、marco、dc-sign、clec9a、clec5a、dectin 2、clec10a、cd206、cd64、cd32a、cd1a、hvem、cd32b、pd-ll、bdca-2、xcr-1和ccr2結合的抗體也可與新降解劑綴合。
[0552]
新降解劑綴合物的抗體可結合在激活淋巴細胞上表達的受體或受體複合物兩者。受體或受體複合物可包含免疫球蛋白基因超家族成員、tnf受體超家族成員、整聯蛋白、細胞因子受體、趨化因子受體、主要組織相容性蛋白、凝集素或補體控制蛋白。合適的免疫球蛋白超家族成員的非限制性實例是cd2、cd3、cd4、cd8、cd 19、cd22、cd28、cd79、cd90、cd 152/ctla-4、pd-1和icos。合適的tnf受體超家族成員的非限制性實例是cd27、cd40、cd95/fas、cd134/ox40、cd137/4-1bb、tnf-r1、tnfr-2、rank、taci、bcma、骨保護素、apo2/trail-r1、trail-r2、trail-r3、trail-r4和apo-3。合適的整聯蛋白的非限制性實例是cd11a、cd11b、cd11c、cd18、cd29、cd41、cd49a、cd49b、cd49c、cd49d、cd49e、cd49f、cd 103和cd 104。合適的凝集素的非限制性實例是c型、s型和i型凝集素。
[0553]
在一些方面，可用於本公開的抗體包括但不限於3f8、8h9、阿巴伏單抗(abagovomab)、阿昔單抗(abciximab)阿比妥珠單抗(abituzumab)、阿澤奇單抗(abrezekimab)、阿布利單抗(abrilumab)、阿西妥單抗(actoxumab)、阿達木單抗(adalimumab)阿德木單抗(adecatumumab)、阿杜卡單抗(aducanumab)、阿伐斯單抗(afasevikumab)、阿非莫單抗(afelimomab)、阿夫土珠單抗(afutuzumab)、阿拉西單抗(alacizumab)、ald518、阿侖單抗阿利若單抗(alirocumab)阿妥莫單抗(altumomab)、阿馬妥昔單抗(amatuximab)、馬安那莫單抗
(anatumomab)、安德西昔單抗(andecaliximab)、拉安土單抗(anetumab)、阿尼弗洛單抗(anifrolumab)、安魯金珠單抗(anrukinzumab)、阿波立珠單抗(apolizumab)、阿普盧妥單抗(aprutumab)、阿西莫單抗(arcitumomab)阿斯萬卡單抗(ascrinvacumab)、阿賽珠單抗(aselizumab)、阿替妥珠單抗(atidortoxumab)、阿替麗珠單抗(atlizumab)(託珠單抗(tocilizumab)、)、阿特珠單抗(atezolizumab)阿丁努單抗(atinumab)、阿託若單抗(atorolimumab)、阿維魯單抗(avelumab)(bavencio)、阿妥昔珠單抗(azintuxizumab)、貝蘭坦單抗、巴平紐珠單抗(bapineuzumab)、巴斯利昔單抗(basiliximab)巴維妥昔單抗(bavituximab)、bcd-100、貝妥莫單抗(bectumomab)貝格羅單抗(begelomab)、貝蘭他單抗(belantamab)、貝利木單抗(belimumab)貝馬妥珠單抗(bemarituzumab)、本瑞珠單抗(benralizumab)貝美克單抗(bermekimab)、貝薩利單抗(bersanlimab)、柏替木單抗(bertilimumab)、貝索單抗(besilesomab)貝伐單抗(bevacizumab)貝茲羅妥單抗(bezlotoxumab)比西單抗(biciromab)比馬古單抗(bimagrumab)、比麥克珠單抗(bimekizumab)、泊特埃單抗(birtamimab)、比伐妥珠單抗(bivatuzumab)、博萊斯魯單抗(bleselumab)、博納吐單抗(blinatumomab)、布朗土維單抗(blontuvetmab)、布羅索珠單抗(blosozumab)、泊庫昔珠單抗(bococizumab)、布拉茲庫單抗(brazikumab)、本妥昔單抗(brentuximab)、布利埃克單抗(briakinumab)、布羅達魯單抗(brodalumab)(siliq
tm
)、布羅路西珠單抗(brolucizumab)(波替妥珠單抗(brontictuzumab)、布洛蘇單抗(burosumab)卡比拉珠單抗(cabiralizumab)、卡波拉西珠單抗(caplacizumab)卡米丹單抗(camidanlumab)、坎立珠單抗(camrelizumab)、卡納單抗(canakinumab)坎妥珠單抗(cantuzumab)、卡波米單抗(capromab)、卡路單抗(carlumab)、卡魯圖昔單抗(carotuximab)、卡妥索單抗(catumaxomab)cbr96、cc49、賽德麗珠單抗(cedelizumab)、西米普利單抗(cemiplimab)色古土珠單抗(cergutuzumab)、西利單抗(certrelimab)、賽託珠單抗(certolizumab)、西妥昔單抗(cetuximab)賽必妥單抗(cibisatamab)、次妥珠單抗(cirmtuzumab)、西他妥珠單抗(citatuzumab)、西昔妥單抗(cixutumumab)、卡拉扎齊珠單抗(clazakizumab)、克立昔單抗(clenoliximab)、克利伐單抗(clivatuzumab)、可瑞妥單抗(codrituzumab)、考非妥珠單抗(cofetuzumab)、庫特妥單抗(coltuximab)、可那妥木單抗(conatumumab)、康昔珠單抗(concizumab)、考韋昔單抗(cosfroviximab)、cr6261、克裡尼珠單抗(crenezumab)、立贊利珠單抗(crizanlizumab)克羅特度單抗(crotedumab)、庫薩圖珠單抗(cusatuzumab)、達昔妥珠單抗(dacetuzumab)、達利珠單抗(daclizumab)達魯妥珠單抗(dalotuzumab)、達匹立珠單抗(dapirolizumab)、達瑞妥
木單抗(daratumumab)德克特立克單抗(dectrekumab)、德姆茨單抗(demcizumab)、狄寧妥珠單抗(denintuzumab)、狄諾塞單抗(denosumab)地帕西珠單抗(depatuxizumab)、德爾羅妥單抗(derlotuximab)、地莫單抗(detumomab)、迪扎米珠單抗(dezamizumab)、定妥昔單抗(dinutuximab)迪利達伏單抗(diridavumab)、多馬格羅珠單抗(domagrozumab)、多塔利單抗(dostarlimab)、阿託度單抗(dorlimomab)、多立珠單抗(dorlixizumab)、杜茲妥單抗(drozitumab)、ds-8201、度立格土單抗(duligotuzumab)、度匹魯單抗(dupilumab)多伏羅單抗(durvalumab)多斯替妥單抗(dusigitumab)、艾克麥昔單抗(ecromeximab)、伊庫麗單抗(eculizumab)埃巴單抗(edobacomab)、依決洛單抗(edrecolomab)依法珠單抗(efalizumab)伊芬古單抗(efungumab)埃德魯單抗(eldelumab)、依來努單抗(elezanumab)、依戈妥單抗(elgemtumab)、依羅妥珠單抗(elotuzumab)伊斯立莫單抗(elsilimomab)、尹瑪克妥珠單抗(emactuzumab)、依帕魯單抗(emapalumab)依米妥珠單抗(emibetuzumab)、伊米昔珠單抗(emicizumab)恩泊妥單抗(enapotamab)、依瓦妥珠單抗(enavatuzumab)、恩伏妥單抗(enfortumab)恩莫單抗(enlimomab)、恩波妥珠單抗(enoblituzumab)、恩其珠單抗(enokizumab)、恩替肯單抗(enoticumab)、恩昔妥昔單抗(ensituximab)、伊匹土莫單抗(epitumomab)、依普奈珠單抗(eptinezumab)(依帕珠單抗(epratuzumab)、厄侖努單抗(erenumab)厄麗珠單抗(erlizumab)、厄妥索單抗(ertumaxomab)依塔珠單抗(etaracizumab)伊替吉單抗(etigilimab)、埃託裡珠單抗(etrolizumab)、埃維那庫單抗(evinacumab)、埃佛羅庫單抗(evolocumab)艾韋單抗(exbivirumab)、凡諾來索單抗(fanolesomab)伐拉立莫單抗(faralimomab)、法瑞昔單抗(faricimab)、法利珠單抗(farletuzumab)、伐司努單抗(fasinumab)、fbta05、凡維珠單抗(felvizumab)、凡扎金努單抗(fezakinumab)、菲巴土珠單抗(fibatuzumab)、菲克妥珠單抗(ficlatuzumab)、弗吉妥姆單抗(figitumumab)、菲瑞伏單抗(firivumab)、弗蘭伏單抗(flanvotumab)、福來替庫單抗(fletikumab)、弗圖珠單抗(flotetuzumab)、芬託麗珠單抗(fontolizumab)佛拉魯單抗(foralumab)、佛拉韋單抗(foravirumab)、瑞瑪奈珠單抗(fremanezumab)弗萊索立木單抗(fresolimumab)、弗洛西單抗(frovocimab)、夫盧維單抗(frunevetmab)、弗爾蘭努單抗(fulranumab)、弗土昔單抗(futuximab)、格爾坎珠單抗(galcanezumab)加利昔單抗(galiximab)、甘妥單抗(gancotamab)、加尼單抗(ganitumab)、甘騰納單抗(gantenerumab)、加維立莫單抗(gavilimomab)、格迪伏單抗(gedivumab)、吉妥珠單抗(gemtuzumab)、吉沃克珠單抗(gevokizumab)、吉維單抗(gilvetmab)、吉西魯單抗(gimsilumab)、吉瑞妥昔單抗(girentuximab)、戈姆妥姆單抗
(glembatumumab)、高利單抗(golimumab)高米立昔單抗(gomiliximab)、古賽爾庫單抗(guselkumab)humy9-6、or000213、伊利尤單抗(ianalumab)、伊巴麗珠單抗(ibalizumab)ibi308、異貝莫單抗(ibritumomab)、伊庫克單抗(icrucumab)、伊達魯昔珠單抗(idarucizumab)依法妥珠單抗(ifabotuzumab)、伊戈伏單抗(igovomab)(indimacis-125)、伊達珠單抗(iladatuzumab)、imab362、尹馬魯單抗(imalumab)、依瑪利單抗(imaprelimab)、英西單抗(imciromab)尹戈妥珠單抗(imgatuzumab)、英卡拉庫單抗(inclacumab)、英達妥昔單抗(indatuximab)、英杜斯妥單抗(indusatumab)、英比立珠單抗(inebilizumab)、英利昔單抗(infliximab)英特妥姆單抗(intetumumab)、伊諾莫單抗(inolimomab)、奧英妥珠單抗(inotuzumab)、iomab-b、伊匹單抗(ipilimumab)、伊瑞妥姆單抗(iratumumab)、伊薩土昔單抗(isatuximab)伊卡利單抗(iscalimab)、艾司妥單抗(istiratumab)、伊託立珠單抗(itolizumab)、伊賽克珠單抗(ixekizumab)克立新單抗(keliximab)、拉貝珠單抗(labetuzumab)(cea-cide
tm
)、拉妥珠單抗(lacnotuzumab)、拉迪拉珠單抗(ladiratuzumab)、蘭帕麗珠單抗(lampalizumab)、蘭納德魯單抗(lanadelumab)蘭多格柔珠單抗(landogrozumab)、拉普立土昔單抗(laprituximab)、拉韋昔單抗(larcaviximab)、勒布立克珠單抗(lebrikizumab)、勒梅爾索單抗(lemalesomab)、蘭達麗珠單抗(lendalizumab)、冷維單抗(lenvervimab)、蘭茲魯單抗(lenzilumab)、勒德立木單抗(lerdelimumab)、勒隆利單抗(leronlimab)、來索伏單抗(lesofavumab)、萊妥珠單抗(letolizumab)、來沙木單抗(lexatumumab)、利比韋單抗(libivirumab)、立法妥珠單抗(lifastuzumab)、力格立珠單抗(ligelizumab)、立羅妥單抗(lilotomab)、林妥珠單抗、利魯單抗(lirilumab)、羅德昔珠單抗(lodelcizumab)、洛吉維特單抗(lokivetmab)、隆卡妥昔單抗(loncastuximab)、羅沃妥珠單抗(lorvotuzumab)、羅妥昔珠單抗(losatuxizumab)、魯卡妥姆單抗(lucatumumab)、魯立珠單抗(lulizumab)、魯米昔單抗(lumiliximab)、魯姆妥珠單抗(lumretuzumab)、魯帕妥單抗(lupartumab)、魯替珠單抗(lutikizumab)、馬帕木單抗(mapatumumab)、馬戈妥昔單抗(margetuximab)、馬斯塔昔單抗(marstacimab)、馬司莫單抗(maslimomab)、馬妥珠單抗(matuzumab)、馬弗瑞立木單抗(mavrilimumab)、麥泊麗珠單抗(mepolizumab)麥特麗珠單抗(metelimumab)、米拉妥珠單抗(milatuzumab)、米恩瑞土莫單抗(minretumomab)、米立單抗(mirikizumab)、米維妥昔單抗(mirvetuximab)、米妥莫單抗(mitumomab)、莫妥昔單抗(modotuximab)、莫拉利珠單抗(molalizumab)、莫加木珠單抗(mogamulizumab)莫羅立木單抗(morolimumab)、莫蘇妥珠單抗(mosunetuzumab)、莫維珠單抗(motavizumab)莫昔妥木單抗(moxetumomab)莫羅單抗(muromonab)-cd3(orthoclone )、納考洛單抗(nacolomab)、那米魯單抗(namilumab)、納布妥木單抗(naptumomab)、那拉土昔單抗(naratuximab)、納魯特單抗(namatumab)、那他珠單抗(natalizumab)那維西珠單抗(navicixizumab)、
那維單抗(navivumab)、那昔妥單抗(naxitamab)、奈巴庫單抗(nebacumab)、奈昔木單抗(necitumumab)奈莫麗珠單抗(nemolizumab)、neod001、奈瑞利莫單抗(nerelimomab)、奈維克單抗(nesvacumab)、尼塔奇單抗(netakimab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)尼塞韋單抗(nirsevimab)、尼韋單抗(nivolumab)、諾非特姆單抗(nofetumomab)、歐比託昔單抗(obiltoxaximab)歐濱妥珠單抗(obinutuzumab)、歐卡妥珠單抗(ocaratuzumab)、歐克裡珠單抗(ocrelizumab)奧度莫單抗(odulimomab)、奧法木單抗(ofatumumab)歐妥單抗(olaratumab)奧來魯單抗(oleclumab)、侖達利珠單抗(olendalizumab)、歐羅克珠單抗(olokizumab)、奧馬珠單抗(omalizumab)奧博妥單抗(omburtamab)、oms721、安爾昔珠單抗(onartuzumab)、翁特珠單抗(ontecizumab)、安妥昔珠單抗(ontuxizumab)、奧瓦利單抗(onvatilimab)、歐匹昔努單抗(opicinumab)、莫奧珠單抗(oportuzumab)、歐瑞格木單抗(oregovomab)(ovarex)、奧替庫單抗(orticumab)、奧特裡希珠單抗(otelixizumab)、奧替利單抗(otilimab)、奧特託珠單抗(otlertuzumab)、歐克賽魯單抗(oxelumab)、歐贊尼珠單抗(ozanezumab)、歐宙拉裡珠單抗(ozoralizumab)、帕吉昔單抗(pagibaximab)、帕利珠單抗(palivizumab)帕姆麗魯單抗(pamrevlumab)、帕尼單抗(panitumumab)潘可單抗(pankomab)、潘諾巴庫單抗(panobacumab)、帕色妥珠單抗(parsatuzumab)、帕斯卡麗珠單抗(pascolizumab)、帕束妥昔珠單抗(pasotuxizumab)、帕特克麗珠單抗(pateclizumab)、帕特妥單抗(patritumab)、pdr001、派姆單抗(pembrolizumab)、排姆妥姆單抗(pemtumomab)派拉克珠單抗(perakizumab)、帕妥珠單抗(pertuzumab)培克珠單抗(pexelizumab)、匹狄立珠單抗(pidilizumab)、匹伐珠單抗凡多汀(pinatuzumab vedotin)、並妥木單抗(pintumomab)、普拉庫魯單抗(placulumab)、普羅扎立珠單抗(plozalizumab)(polivy)、普來魯單抗(prezalumab)、普羅扎立珠單抗(plozalizumab)、泊咖麗珠單抗(pogalizumab)、泊尼珠單抗(ponezumab)、珀韋昔單抗(porgaviximab)、普拉森單抗(prasinezumab)、普利扎麗珠單抗(prezalizumab)、普立昔單抗(priliximab)、普利託昔單抗(pritoxaximab)、普託木單抗(pritumumab)、pro 140、奎麗珠單抗(quilizumab)、雷克妥木單抗(racotumomab)、雷德妥單抗(radretumab)、瑞非韋魯單抗(rafivirumab)、拉潘西珠單抗(ralpancizumab)、雷莫蘆單抗(ramucirumab)、雷奈維單抗(ranevetmab)、蘭尼單抗(ranibizumab)雷韋加利單抗(ravagalimab)、拉瓦利單抗(ravulizumab)瑞西巴庫單抗(raxibacumab)、來凡尼珠單抗(refanezumab)、瑞加韋單抗(regavirumab)、regn-eb3、瑞拉利單抗(renatlimab)、瑞妥魯單抗(remtolumab)、萊斯利珠單抗(reslizumab)利妥木單抗(rilotumumab)、利努庫單抗(rinucumab)、利散珠單抗(risankizumab)利妥昔單抗利伐巴珠單抗(rivabazumab)、rmab、羅妥木單抗(robatumumab)、羅萊度單抗(roledumab)、洛米奇單抗(romilkimab)、羅
莫索珠單抗(romosozumab)榮塔立珠單抗(rontalizumab)、羅曼妥珠單抗(rosmantuzumab)、羅皮妥珠單抗(rovalpituzumab)、羅伐麗珠單抗(rovelizumab)洛利昔珠單抗(rozanolixizumab)、魯匹麗珠單抗(ruplizumab)(antova)、sa237、沙斯妥珠單抗(sacituzumab)、薩摩利珠單抗(samalizumab)、沙馬妥單抗(samrotamab)、薩立魯單抗(sarilumab)薩特利珠單抗(satralizumab)、沙妥莫單抗噴地肽(satumomab pendetide)、蘇金單抗(secukinumab)塞魯單抗(selicrelumab)、色瑞班妥單抗(seribantumab)、色託新西單抗(setoxaximab)、賽圖蘇單抗(setrusumab)、司韋單抗(sevirumab)、sgn-cd19a、shp647、西羅妥珠單抗(sibrotuzumab)、司伐立木單抗(sifalimumab)、斯妥昔單抗(siltuximab)、辛土珠單抗(simtuzumab)、西普麗珠單抗(siplizumab)、司曲妥單抗(sirtratumab)、司魯庫單抗(sirukumab)、索非妥珠單抗(sofituzumab)、索拉珠單抗(solanezumab)、索立託單抗(solitomab)、索尼普茲珠單抗(sonepcizumab)、索土珠單抗(sontuzumab)、斯巴達利珠單抗(spartalizumab)、司他莫魯單抗(stamulumab)、sti-6129、硫索單抗(sulesomab)舒他伏單抗(suptavumab)、舒利單抗(sutimlimab)、舒維組單抗(suvizumab)、蘇託舒單抗(suvratoxumab)、塔巴魯單抗(tabalumab)、他卡斯珠單抗(tacatuzumab)(afp-)、他度珠單抗(tadocizumab)、他拉可妥珠單抗(talacotuzumab)、他利珠單抗(talizumab)、塔姆土維單抗(tamtuvetmab)、他尼珠單抗(tanezumab)、泰普利莫單抗(taplitumomab paptox)、他瑞妥單抗(tarextumab)、他韋利單抗(tavolimab)、特非巴珠單抗(tefibazumab)阿替莫單抗(telimomab)、特利妥珠單抗(telisotuzumab)、特西度魯單抗(tesidolumab)、特拉昔單抗(tetraxetan)、特土羅單抗(tetulomab)、特納妥姆單抗(tenatumomab)、替奈昔單抗(teneliximab)、特普妥姆單抗(teprotumumab)特普麗珠單抗(teplizumab)、特澤佩魯單抗(tezepelumab)、tgn1412、替布利珠單抗(tibulizumab)、替西木單抗(ticilimumab)替卡妥珠單抗(tigatuzumab)、替米古珠單抗(timigutuzumab)、替莫魯單抗(timolumab)、替拉戈單抗(tiragolumab)、替古妥單抗(tiragotumab)、替雷利珠單抗(tislelizumab)、替索土單抗(tisotumab)、泰澤坦(tiuxetan)、替爾達珠單抗(tildrakizumab)tnx-650、託珠單抗(tocilizumab)(阿替麗珠單抗(atlizumab)、)、託木妥昔單抗(tomuzotuximab)、託羅麗珠單抗(toralizumab)、託薩妥昔單抗(tosatoxumab)、託西莫單抗(tositumomab)託韋妥單抗(tovetumab)、曲羅金努單抗(tralokinumab)、曲妥珠單抗trbs07、特咖麗珠單抗(tregalizumab)、特姆單抗(tremelimumab)、特弗格魯單抗(trevogrumab)、圖庫斯珠單抗(tucotuzumab)、妥韋單抗(tuvirumab)、烏妥薩珠單抗(urtoxazumab)、優特克單抗(ustekinumab)烏立妥昔單抗(ublituximab)、烏克普魯單抗(ulocuplumab)、烏魯單抗(urelumab)、烏託米魯單抗(utomilumab)、凡達西單抗(vadastuximab)、瓦那利單抗(vanalimab)、萬多妥珠單抗(vandortuzumab)、萬替克單抗(vantictumab)、萬古珠單抗(vanucizumab)、伐利昔單抗
(vapaliximab)、伐利蘇單抗(varisacumab)、伐立魯單抗(varlilumab)、伐特麗珠單抗(vatelizumab)、維多麗珠單抗(vedolizumab)、維妥珠單抗(veltuzumab)、維帕莫單抗(vepalimomab)、維森庫單抗(vesencumab)、衛斯理珠單抗(visilizumab)沃巴麗珠單抗(vobarilizumab)、沃羅斯昔單抗(volociximab)沃樂利珠單抗(vonlerolizumab)、伏派利單抗(vopratelimab)、沃斯妥珠單抗(vorsetuzumab)、伏妥莫單抗(votumumab)、伏那吉珠單抗(vunakizumab)、賽土珠單抗(xentuzumab)、xmab-5574、扎魯土木單抗(zalutumumab)(humex-egfr)、扎木單抗(zanolimumab)(humax-cd4)、扎土昔單抗(zatuximab)、澤妥珠單抗(zenocutuzumab)、齊拉木單抗(ziralimumab)、佐妥昔單抗(zolbetuximab)或阿佐莫單抗(zolimomab)。
[0554]「結合」分子靶標或感興趣的抗原的抗體是能夠以足夠的親和力結合該抗原以使得該抗體可用於靶向表達該抗原的細胞的抗體。
[0555]
在本公開中，基團「bm」可與多於一個新降解劑綴合。在一些方面，「bm」可與1至10個新降解劑綴合。在一些方面，「bm」可與1至9個新降解劑綴合。在一些方面，「bm」可與1至8個新降解劑綴合。在一些方面，「bm」可與1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個新降解劑綴合。在一些方面，「bm」可與7或8個新降解劑綴合。在一些方面，「bm」可與5個新降解劑綴合。在一些方面，「bm」可與6個新降解劑綴合。在一些方面，「bm」可與7個新降解劑綴合。在一些方面，「bm」可與8個新降解劑綴合。在一些方面，「bm」可與9個新降解劑綴合。
[0556]
iv.組合物及使用方法
[0557]
本文所述的綴合物和/或化合物可以是藥學上可接受的鹽的形式。在一些方面，此類鹽衍生自無機或有機酸或鹼。
[0558]
合適的酸加成鹽的實例包括乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡萄糖庚酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸酯、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基-丙酸酯、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽和十一烷酸鹽。
[0559]
合適的鹼加成鹽的實例包括銨鹽、鹼性金屬鹽(諸如鈉鹽和鉀鹽)、鹼土金屬鹽(諸如鈣鹽和鎂鹽)、具有有機鹼的鹽(諸如二環己基胺鹽、n-甲基-d-葡糖胺)和具有胺基酸(諸如精氨酸、賴氨酸等)的鹽。
[0560]
例如，berge列出了以下fda批准的市售的鹽：陰離子乙酸根、苯磺酸根(besylate、benzenesulfonate)、苯甲酸根、碳酸氫根、酒石酸氫根、溴離子、依地酸鈣(乙二胺四乙酸根)、樟腦磺酸根(camsylate、camphorsulfonate)、碳酸根、氯離子、檸檬酸根、二鹽酸鹽、依地酸根(乙二胺四乙酸根)、乙二磺酸根(1,2-乙二磺酸根)、依託酸根(月桂基硫酸根)、乙磺酸根(esylate、ethanesulfonate)、富馬酸根、葡庚糖酸鹽(gluceptate、glucoheptonate)、葡糖酸根、穀氨酸根、對羥乙醯氨基苯胂酸根(glycollylarsanilate)(對羥乙醯氨基苯胂酸根(glycollamidophenylarsonate))、己基間苯二酚酸酯、海巴明(n,n
』‑
二(脫氫樅基)乙二胺)、氫溴酸根、鹽酸根、羥基萘甲酸根、碘離子、羥乙基磺酸根(2-羥基乙磺酸根)、乳酸根、乳糖醛酸根、蘋果酸根、馬來酸根、扁桃酸根、甲磺酸根(mesylate、methanesulfonate)、甲基溴化物、甲基硝酸根、甲基硫酸根、粘酸根、萘磺酸根(2-萘磺酸根)、硝酸根、雙羥萘酸
根(pamoate、embonate)、泛酸根、磷酸根/二磷酸根、聚半乳糖醛酸根、水楊酸根、硬脂酸根、次乙酸根、琥珀酸根、硫酸根、鞣酸根、酒石酸根、8-氯茶鹼根(teoclate、8-chlorotheophyllinate)和三乙基碘根(triethiodide)；有機陽離子苄星(n n
』‑
二苄基乙二胺)、氯普魯卡因、膽鹼、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(n-甲基葡糖胺)和普魯卡因；以及金屬陽離子鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉和鋅。
[0561]
berge另外列出了以下非fda批准的市售(美國以外)的鹽：陰離子己二酸根、藻酸根、氨基水楊酸根、脫水亞甲基檸檬酸根、檳榔鹼、天冬氨酸根、硫酸氫根、丁基溴、樟腦酸根、二葡糖酸根、二氫溴酸根、二琥珀酸根、甘油磷酸根、半硫酸根、氫氟酸根、氫碘酸根、亞甲基雙(水楊酸根)、萘二磺酸根(1,5-萘二磺酸根)、草酸根、果膠酸根、過硫酸根、苯乙基巴比妥酸根、苦味酸根、丙酸根、硫氰酸根、甲苯磺酸根和十一烷酸根；有機陽離子苯乙胺(n-苄基苯乙胺)、克立咪唑(1-對氯苄基-2-吡咯啉-1
』‑
基甲基苯並咪唑)、二乙胺、哌嗪和氨丁三醇(三(羥甲基)氨基甲烷)；以及金屬陽離子鋇和鉍。
[0562]
包含本文所述的新降解劑綴合物的藥物組合物還可包含合適的載劑、賦形劑和助劑，它們可根據施用模式而不同。
[0563]
在一些方面，藥物組合物可被配製成合適的腸胃外劑型。所述配製物可通過本領域已知的各種方法製備。藥物組合物可直接施用到血流中、肌肉中或直接施用到器官中。適合的腸胃外施用的方式包括靜脈內、動脈內、腹膜內、鞘內、心室內、尿道內、胸骨內、顱內、肌內和皮下。用於腸胃外施用的合適裝置包括針式注射器、無針注射器和輸注技術。
[0564]
腸胃外組合物通常為水溶液，其可含有賦形劑諸如鹽、碳水化合物和緩衝劑。然而，該組合物也可被配製成無菌的非水溶液或乾燥形式，以與合適的媒介物諸如無菌無熱原水聯合使用。
[0565]
在無菌條件下，例如通過凍幹製備腸胃外組合物，可使用本領域技術人員熟知的標準技術容易地完成。
[0566]
用於腸胃外施用的組合物可被配製成立即釋放和/或改進釋放。改進釋放配製物包括延遲釋放、持續釋放、脈衝釋放、控制釋放、靶向釋放和程序化釋放。因此，組合物可被配製成固體、半固體或觸變液體，用於作為提供活性劑的改進釋放的植入儲庫施用。
[0567]
腸胃外配製物可與腸胃外劑型中使用的其他合適的藥學上可接受的賦形劑諸如但不限於防腐劑混合。
[0568]
在另一方面，藥物組合物可被配製成合適的口服劑型，諸如片劑、膠囊、散劑、丸劑、混懸液、溶液、乳劑等。可存在其他合適的載劑，諸如崩解劑、稀釋劑、螯合劑、粘結劑、助流劑、潤滑劑、填充劑、膨脹劑、抗粘附劑等。
[0569]
口服劑型配製物也可含有其他合適的藥物賦形劑，諸如甜味劑、媒介物/潤溼劑、著色劑、調味劑、防腐劑、增粘/增稠劑等。
[0570]
本文所述的新降解劑綴合物可用於治療各種癌症。本公開的某些綴合物在功效表達、藥代動力學(例如，吸收、分布、代謝、排洩)、溶解度(例如，水溶性)、與其他藥物的相互作用(例如，藥物代謝酶抑制作用)、安全性(例如，急性毒性、慢性毒性、遺傳毒性、生殖毒性、心臟毒性、致癌性、中樞毒性)和/或穩定性(例如，化學穩定性、對酶的穩定性)方面可為優越的，並且可用作藥物。
[0571]
本公開的新降解劑綴合物可用作：藥物，諸如用於預防或治療疾病的劑，所述疾病
例如癌症-例如結直腸癌(例如，結直腸癌、直腸癌、肛門癌、家族性結直腸癌、遺傳性非息肉性結直腸癌、胃腸間質瘤)、肺癌(例如，非小細胞肺癌、小細胞肺癌、惡性間皮瘤)、間皮瘤、胰腺癌(例如，胰腺導管癌、胰腺內分泌腫瘤)、咽癌、喉癌、食道癌、胃部/胃癌症(例如，乳頭狀腺癌、粘液性腺癌、腺鱗癌)、十二指腸癌、小腸癌、乳腺癌(例如，浸潤性導管癌、非浸潤性導管癌、炎性乳腺癌)、卵巢癌(例如，卵巢上皮癌、性腺外生殖細胞腫瘤、卵巢生殖細胞腫瘤、卵巢低惡性潛能腫瘤)、睪丸腫瘤、前列腺癌(例如，激素依賴性前列腺癌、非激素依賴性前列腺癌、去勢抵抗性前列腺癌)、肝癌(例如，肝細胞癌、原發性肝癌、肝外膽管癌)、甲狀腺癌(例如，甲狀腺髓樣癌)、腎癌(例如，腎細胞癌(例如，透明細胞腎細胞癌)、腎盂和輸尿管移行細胞癌)、子宮癌(例如，宮頸癌、子宮體癌、子宮肉瘤)、妊娠絨癌、腦腫瘤(例如，髓母細胞瘤、神經膠質瘤、松果體星形細胞瘤、毛細胞星形細胞瘤、瀰漫性星形細胞瘤、間變性星形細胞瘤、垂體腺瘤)、視網膜母細胞瘤、皮膚癌(例如，基底細胞瘤、惡性黑素瘤)、肉瘤(例如，橫紋肌肉瘤、平滑肌肉瘤、軟組織肉瘤、梭形細胞肉瘤)、惡性骨腫瘤、膀胱癌、血液/血癌(例如，多發性骨髓瘤、白血病(例如，急性骨髓性白血病)、惡性淋巴瘤、霍奇金病、慢性骨髓增生性疾病)、不明原發癌；癌症生長抑制劑；癌症轉移抑制劑；凋亡促進劑；用於治療癌前病變(例如，骨髓增生異常症候群)的劑；等等。
[0572]
在某些方面，本公開的新降解劑綴合物可用作用於乳腺癌、胃癌、卵巢癌、子宮癌、肺癌、胰腺癌、肝癌、淋巴瘤或血液癌症的藥物。
[0573]
此外，本公開的新降解劑綴合物可與非藥物療法同時使用。確切地說，綴合物可與非藥物療法諸如(1)手術，(2)使用血管緊張素ii等的高血壓化療，(3)基因療法，(4)熱療，(5)冷凍療法，(6)雷射燒灼和(7)放射療法組合。
[0574]
例如，通過在上述手術等之前或之後使用本公開的新降解劑綴合物，可提供諸如預防抗性出現、延長無病生存期、抑制癌症轉移或復發、延長壽命等效果。
[0575]
此外，可能將使用本公開的新降解劑綴合物的治療與以下支持性療法組合：(i)對於各種感染性疾病的併發症，施用抗生素(例如，β-內醯胺類諸如頭孢替安(pansporin)等，大環內酯類諸如克拉黴素等)，(ii)施用高熱量輸血、胺基酸製劑或一般維生素製劑以改善營養不良，(iii)施用嗎啡以緩解疼痛，(iv)施用藥劑以改善副作用諸如噁心、嘔吐、厭食、腹瀉、白細胞減少、血小板減少、血紅蛋白濃度降低、脫髮、肝病、腎病、dic、發熱等和(v)施用用於抑制癌症的多重耐藥性的藥劑等。
[0576]
在一些方面，本公開的新降解劑或新降解劑綴合物可與標準護理療法例如一種或多種治療劑(例如，抗癌劑和/或免疫調節劑)組合使用。因此，在某些方面，一種治療本文公開的腫瘤的方法包括將本公開的新降解劑或新降解劑綴合物與一種或多種附加治療劑組合施用。在一些方面，本公開的新降解劑或新降解劑綴合物可與一種或多種抗癌劑組合使用，使得可靶向免疫途徑的多個元件。在一些方面，抗癌劑包括免疫檢查點抑制劑(即，阻斷通過特定免疫檢查點途徑的信號傳導)。可用於本發明方法的免疫檢查點抑制劑的非限制性實例包括ctla-4拮抗劑(例如，抗ctla-4抗體)、pd-1拮抗劑(例如，抗pd-1抗體、抗pd-l1抗體)、tim-3拮抗劑(例如，抗tim-3抗體)或它們的組合。在本技術的組合治療部分中詳細公開了綜合且非限制性的組合治療列表。
[0577]
在一些方面，本公開的新降解劑或新降解劑綴合物在施用附加治療劑之前或之後施用於受試者。在其他方面，本公開的新降解劑或新降解劑綴合物與附加治療劑同時施用
於受試者。在某些方面，本公開的新降解劑或新降解劑綴合物和附加治療劑可作為在藥學上可接受的載劑中的單一組合物同時施用。在其他方面，本公開的新降解劑或新降解劑綴合物和附加治療劑作為單獨的組合物同時施用。
[0578]
在一些方面，可用本公開的新降解劑或新降解劑綴合物治療的受試者為非人動物，諸如大鼠或小鼠。在一些方面，可治療的受試者為人。
[0579]
v.製備新降解劑和組合物的方法
[0580]
本公開提供了一種製備新降解劑綴合物的方法，該方法包括使結合部分與式(i-1)的化合物：
[0581][0582]
或其藥學上可接受的鹽反應，其中：
[0583]
a為苯基或c
4-c
10
環烷基環；
[0584]
r1獨立地選自氫和滷代基；
[0585]
u選自nh和cf2；
[0586]
x選自-nr
2-、＝c(ch3)-、-q-(ch2)
n-和-q(ch2)mq』(ch2)
n-；其中
[0587]
q和q』各自獨立地為o、s或nr2；
[0588]
r2為氫或c
1-c6烷基；
[0589]
n為1至6的整數；
[0590]
m為2至6的整數；並且
[0591]
其中每個基團的左側連接到l』並且右側連接到a；前提是當x為nh或-q-(ch2)
n-時，r1為滷代基；
[0592]
l'為與所述結合部分綴合的可切割或不可切割接頭前體。
[0593]
如本文所述，接頭前體含有連接到結合部分的異雙官能團。
[0594]
在一些方面，l'為不可切割接頭前體。在一些方面，l』選自由以下組成的組
[0595][0596]
其中：
[0597]
p為1至10的整數；並且
[0598]
為與x的連接點。
[0599]
在一些方面，l』為
[0600][0601]
在一些方面，p為5。
[0602]
在某些方面，l』為可切割接頭前體。
[0603]
在一些方面，接頭前體可被蛋白酶切割。在一些方面，接頭前體選自由以下組成的組
[0604][0605]
其中：
[0606]
q為2至10的整數；
[0607]
z1、z2、z3和z4各自獨立地不存在或為l-或d-構型的天然存在的胺基酸殘基，前提是z1、z2、z3和z4中的至少兩者為胺基酸殘基；
[0608]
並且
[0609]
為與x的連接點。
[0610]
在一些方面，z1、z2、z3和z4獨立地不存在或選自由以下組成的組：l-纈氨酸、d-纈氨酸、l-瓜氨酸、d-瓜氨酸、l-丙氨酸、d-丙氨酸、l-穀氨醯胺、d-穀氨醯胺、l-穀氨酸、d-穀氨酸、l-天冬氨酸、d-天冬氨酸、l-天冬醯胺、d-天冬醯胺、l-苯丙氨酸、d-苯丙氨酸、l-賴氨酸、d-賴氨酸和甘氨酸；前提是z1、z2、z3和z4中的至少兩者為胺基酸殘基。
[0611]
在一些方面，z1不存在或為甘氨酸；z2不存在或選自由以下組成的組：l-穀氨醯胺、d-穀氨醯胺、l-穀氨酸、d-穀氨酸、l-天冬氨酸、d-天冬氨酸、l-丙氨酸、d-丙氨酸和甘氨酸；z3選自由以下組成的組：l-纈氨酸、d-纈氨酸、l-丙氨酸、d-丙氨酸、l-苯丙氨酸、d-苯丙氨酸和甘氨酸；並且z4選自由以下組成的組：l-丙氨酸、d-丙氨酸、l-瓜氨酸、d-瓜氨酸、l-天冬醯胺、d-天冬醯胺、l-賴氨酸、d-賴氨酸、l-苯丙氨酸、d-苯丙氨酸和甘氨酸。
[0612]
在一些方面，l』為
[0613][0614]
在一些方面，q為5。
[0615]
在一些方面，l』為可生物還原接頭前體。在一些方面，可生物還原接頭前體選自由以下組成的組
[0616][0617]
其中：
[0618]
q為2至10的整數；
[0619]
r、r』、r」和r
』」
各自獨立地選自氫、c
1-c6烷氧基c
1-c6烷基、(c
1-c6)2nc
1-c6烷基和c
1-c6烷基，或者，兩個偕r基團與它們所連接的碳原子一起可形成環丁基或環丙基環；並且
[0620]
為與x的連接點。
[0621]
在某些方面，l』為酸可切割接頭前體。在一些方面，l』選自由以下組成的組
[0622][0623]
其中：
[0624]
q為2至10的整數；並且
[0625]
為與x的連接點。
[0626]
在某些方面，l』為點擊釋放接頭前體。在一些方面，l』選自
[0627][0628]
其中：
[0629]
q為2至10的整數；並且
[0630]
為與x的連接點。
[0631]
在某些方面，l』為焦磷酸酶可切割接頭前體。在一些方面，l』為
[0632][0633]
其中：
[0634]
q為2至10的整數；
[0635]
為與x的連接點。
[0636]
在某些方面，l'為β-葡萄糖醛酸酶可切割接頭前體。在一些方面，l』選自
[0637][0638]
其中：
[0639]
q為2至10的整數；
[0640]
‑‑‑‑
不存在或為鍵；並且
[0641]
為與x的連接點。
[0642]
在一些方面，式(i-1)的化合物選自
[0643][0644]
在一些方面，結合部分在其與式(i-1)的化合物反應之前被預處理。在某些方面，使式(i-1)的化合物與結合部分反應，該結合部分包括抗體或其抗原結合部分。在結合部分為抗體的方面，抗體可在與式(i-1)的化合物反應之前被預處理以還原鏈間二硫鍵。
[0645]
實施例
[0646]
一般合成方法和中間體
[0647]
本公開的化合物可由本領域普通技術人員根據本公開和本領域的知識和/或通過參考下文所示的方案和合成實施例來製備。示例性合成路線在以下方案和實施例中闡述。應當理解，在以下方案和實施例中出現的變量(例如「r」基團)應獨立於在本技術其他地方出現的那些來閱讀。本領域普通技術人員將容易理解下文所示的方案和實施例如何說明本文所述化合物的製備。
[0648]
方案中使用的縮寫通常遵循本領域中使用的約定。說明書和實施例中使用的化學縮寫定義如下：「thf」代表四氫呋喃；「dmf」代表n,n-二甲基甲醯胺；「me」代表甲基；「bu」代表丁基；「fa」代表甲酸；「pe」代表石油醚；「meoh」代表甲醇；「etoh」代表乙醇；「dcm」代表二氯甲烷；「boc」或「boc」「tfa」代表三氟乙酸；「dmso」代表二甲亞碸；「etoac」代表乙酸乙酯；「oac」代表乙酸酯；「dppf」代表1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵；「dba」代表二亞苄基丙酮；「cdi」代表1,1'-羰基二咪唑；「tbaf」代表四丁基氟化銨；「tbsc1」代表叔丁基二甲基氯矽烷；「et2o」代表乙醚；「acn」代表乙腈；「h」代表小時；「min」代表分鐘；「rt」代表室溫或保留時間(上下文將決定)；「aq.」代表含水，「sat.」代表飽和；「min」代表分鐘；「hobt」代表1-羥基苯並三唑水合物；「hatu」代表1-[雙(二甲基氨基)亞甲基]-1h-1,2,3-三唑並[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸鹽或n-[(二甲基氨基)-1h-1,2,3-三唑並-[4,5-b]吡啶-1-基亞甲基]-n-甲基甲銨六氟磷酸鹽n-氧化物；「diea」和「iprnet
2」代表二異丙基乙胺；「et3n」和「tea」代表三乙胺。
[0649][0650]
方案1：化合物(ia)的製備
[0651][0652]
實施例1：化合物(ia)的合成
[0653][0654]
步驟1：化合物2的合成
[0655]
在0℃下在氮氣氣氛下向2-氯-4-硝基苯基)乙酸(化合物1，5.00g，23.19mmol，1.00當量)於thf(75.00ml)中的攪拌溶液中滴加bh
3-me2s(10m的thf溶液)(5.80ml，58.0mmol，2.50當量)。將所得混合物在70℃下在氮氣氣氛下攪拌2h。將混合物冷卻至室溫。
將所得混合物減壓濃縮。將殘餘物通過矽膠柱色譜法(pe:etoac＝1:1)純化，得到2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(3g，64％)，為黃色固體。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.26(d,j＝4.0hz,1h),8.10-8.05(m,1h),7.50(d,j＝8.0hz,1h),3.99-3.91(m,2h),3.16-3.09(m,2h)。
[0656][0657]
步驟2：化合物3的合成
[0658]
向2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(化合物2，5.00g，24.800mmol，1.00當量)和2-溴乙酸叔丁酯(29.0ml，148.28mmol，8.00當量)於甲苯(150.00ml)中的攪拌溶液中添加bu4nhso4(6.74g，19.84mmol，0.80當量)。在40min內在0℃下向上述混合物中滴加naoh(5m的h2o溶液)(500.00ml)。將所得混合物在25℃下再攪拌2h。將所得混合物用etoac(3x500ml)萃取。將合併的有機層用鹽水(400ml)洗滌並經無水na2so4乾燥。過濾後，將濾液減壓濃縮。將殘餘物通過矽膠柱色譜法(pe:etoac＝4:1)純化，得到2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙酸叔丁酯(8g，65％)，為黃色油狀物。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.23(d,j＝4.0hz,1h),8.10-8.04(m,1h),7.60(d,j＝8.0hz,1h),4.09(s,2h),3.83-3.80(m,2h),3.17-3.14(m,2h),1.45(s,9h)。
[0659][0660]
步驟3：化合物4的合成
[0661]
在室溫下向2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙酸叔丁酯(化合物3，8.00g，16.14mmol，1.00當量，63.7％)於dcm(80.00ml)中的攪拌溶液中滴加tfa(16.00ml)。將所得混合物在室溫下攪拌1h。
[0662]
將所得混合物真空濃縮。將所得混合物用水(500ml)稀釋。將混合物用etoac(3x500ml)萃取。將合併的有機層用鹽水(200ml)洗滌，經無水na2so4乾燥。過濾後，將濾液減壓濃縮。這產生[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙酸(6.5g，粗品)，為黃色油狀物。lcms(esi)：517(2m-h)-[0663][0664]
步驟4：化合物5的合成
[0665]
在室溫下向[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙酸(化合物4，6.30g，21.84mmol，1.00當量，90％)和hatu(12.46g，32.76mmol，1.50當量)於dmf(65.00ml)中的攪拌溶液中滴加ch3nh2.hcl(1.77g，26.21mmol，1.20當量)和diea(15.20g，117.8mmol，4.00當量)。將所得混合物在室溫下攪拌2h。將所得混合物用水稀釋。將所得混合物用etoac(2x100ml)萃取。將合併的有機層用鹽水(50ml)洗滌，經無水na2so4乾燥。過濾後，將濾液減壓濃縮。將殘餘物通過矽膠柱色譜法(dcm:meoh＝10:1)純化，得到2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]-n-甲基乙
醯胺(10g，純度:50％，產率：84％)，為黃色油狀物。lcms(esi)：273.28(m+h)
+
[0666][0667]
步驟5：化合物6的合成
[0668]
在室溫下在氮氣氣氛下向2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]-n-甲基乙醯胺(化合物5，3.3g，12.10mmol，1.00當量)於thf(35.00ml)中的攪拌溶液中滴加bh
3-thf(1m的thf溶液)(12.10ml，12.10mmol，1.00當量)。將所得混合物在70℃下在氮氣氣氛下攪拌2h。將反應用meoh淬滅。將殘餘物用1n hcl酸化至ph 6。將所得混合物用etoac(20ml)萃取。將水相用飽和nahco3(飽和水溶液)鹼化至ph 8。將所得混合物用etoac(3x100ml)萃取，用鹽水(50ml)洗滌並經無水na2so4乾燥。過濾後，將濾液減壓濃縮。這產生[2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙基](甲基)胺(2.5g，80％)，為黃色油狀物。lcms(esi)：259.26(m+h)
+
[0669][0670]
步驟6.化合物7的合成
[0671]
在25℃下向[2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙基](甲基)胺(化合物6，2.50g，9.69mmol，1.00當量)和boc2o(2.53g，11.6mmol，1.20當量)於thf(40ml)中的攪拌溶液中滴加tea(1.17g，11.6mmol，1.20當量)。將混合物在25℃下攪拌2h。將所得混合物真空濃縮。將殘餘物通過矽膠柱色譜法(dcm:meoh＝5:1)純化，得到n-[2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙基]-n-甲基氨基甲酸叔丁酯(1.70g，50％)，為黃色油狀物。lcms(esi)：359.36(m+h)
+
[0672][0673]
步驟7：化合物8的合成
[0674]
在25℃下向n-[2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙基]-n-甲基氨基甲酸叔丁酯(化合物7，1.70g，4.74mmol，1.00當量)和nh4cl(750mg，14.2mmol，3.00當量)於etoh(85ml)和h2o(17ml)中的攪拌溶液中添加fe(1.3g，23.7mmol，5.00當量)。將混合物在80℃下攪拌2h。將混合物冷卻至室溫。將所得混合物過濾，並將濾餅用etoh(3x50ml)洗滌。將濾液減壓濃縮。將殘餘物通過矽膠柱色譜法(pe:etoac＝4:1)純化，得到n-[2-[2-(4-氨基-2-氯苯基)乙氧基]乙基]-n-甲基氨基甲酸叔丁酯(900mg，58％)，為黃色油狀物。lcms(esi)：329.33(m+h)
+
[0675][0676]
步驟8：化合物9的合成
[0677]
在25℃下向n-[2-[2-(4-氨基-2-氯苯基)乙氧基]乙基]-n-甲基氨基甲酸叔丁酯(化合物8，500mg，1.52mmol，1.00當量)於thf(10ml)中的攪拌溶液中滴加雙光氣(601mg，3.04mmol，2.00當量)。將混合物在25℃下攪拌1h。將所得混合物真空濃縮並再溶解於dmf
二氧代吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基丁醯胺基]戊醯胺基]苯基]甲基4-硝基苯基碳酸酯(279mg，0.38mmol，1.00當量)。將反應混合物在40攝氏度下在氮氣氣氛下攪拌12小時。將反應冷卻至室溫後，將反應用水(30ml)淬滅。將所得混合物用dcm(3x30ml)萃取。將合併的有機層用水(2x30ml)、鹽水(30ml)洗滌，經na2so4乾燥。過濾後，將濾液真空濃縮至幹。將殘餘物通過反相柱(c18，流動相a：0.1％fa的水溶液，b：acn)純化。將收集的級分真空濃縮至幹。將粗產物(60mg)通過製備型hplc用以下條件(柱：xselect csh obd柱30x150mm 5um，n；流動相a：水(0.1％fa)，流動相b：acn；流速：60ml/min；梯度:33b在7min內至50b；220nm；rt1：5.27min)純化。將收集的級分凍幹，得到n-[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙氧基)乙基]-n-甲基氨基甲酸[4-[(2s)-5-(氨基甲醯基氨基)-2-[(2s)-2-[6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基丁醯胺基]戊醯胺基]苯基]甲酯(23.8mg，5％)，為白色固體。lcms(esi):1126.11(m+h)
+
.1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.99(s,1h),10.00(s,1h),8.88(s,1h),8.12-8.08(m,1h),7.85-7.81(m,2h),7.70-7.67(m,2h),7.60-7.58(m,1h),7.51(s,1h),7.47-7.44(m,1h),7.28-7.25(m,2h),7.18-7.12(m,2h),7.00(s,2h),6.90(br s,1h),5.97-5.95(m,1h),5.42(s,2h),5.12-5.05(m,1h),4.98(s,2h),4.42-4.32(m,4h),4.18-4.15(m,1h),3.56-3.40(m,4h),3.37-3.36(m,3h),3.05-2.90(m,3h),2.89-2.85(m,5h),2.72-2.55(m,2h),2.40-2.33(m,2h),2.25-2.15(m,2h),2.00-1.87(m,2h),1.74-1.57(m,2h),1.50-1.42(m,5h),1.22-1.10(m,3h),0.85-0.80(m,6h)。
[0684][0685]
方案2：化合物(ib)的製備
[0686][0687]
實施例2：化合物(ib)的合成
[0688][0689]
步驟1：化合物11的合成
[0690]
在25℃下在氮氣氣氛下向4-溴-2-(溴甲基)苯甲酸甲酯(化合物10，20.0g，64.8mmol，1.00當量)和3-氨基哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽(10.64g，83.0mmol，1.28當量)於dmf(80ml)中的攪拌混合物中滴加tea(22.4ml,162.2mmol，2.50當量)。將混合物在25℃下攪拌16h。隨後在25℃下依次添加h2o(60ml)、acoh(23ml)和et20(60ml)。將混合物在25℃下攪拌2h。將沉澱的固體通過過濾收集並用et2o(60ml)洗滌。這產生3-(5-溴-1-氧代-3h-異吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮(9.0g，42％)，為淡藍色固體。lcms(esi)：323.32(m+h)+
[0691][0692]
步驟2：化合物12的合成
[0693]
在25攝氏度下在氮氣氣氛下向3-(5-溴-1-氧代-3h-異吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮(化合物11，1.00g，3.09mmol，1.00當量)和dppf(51mg，0.093mmol，0.03當量)於dmf(8ml)中的攪拌混合物中添加zn(oac)2(170mg，0.928mmol，0.30當量)、zn(cn)2(545mg，4.64mmol，1.50當量)和pd2(dba)3(28mg，0.031mmol，0.01當量)。將最終的反應混合物在120℃下用微波輻射照射2h。將混合物冷卻至室溫並過濾。將濾餅用meoh(3x30ml)洗滌。將濾液減壓濃縮。使殘餘物經受快速色譜法(矽膠，80g，dcm:meoh＝10:1)，得到期望的產物2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-腈(400mg，47％)，為棕色固體。lcms(esi)：270(m+h)
+
[0694][0695]
步驟3：int1的合成
[0696]
在25℃下向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-腈(化合物12，3.0g，11.14mmol，1.00當量)和hcl(12m)(3.6ml)於meoh(25ml)中的攪拌混合物中添加pto2(1.25g，5.5mmol，0.49當量)。使用氫氣球在氫氣氣氛下將混合物在室溫下氫化16h。將所得混合物過濾，並將濾餅用meoh(2x30ml)洗滌。將濾液減壓濃縮。將所得固體用dcm:meoh(3:1)(3x30ml)洗滌並乾燥。這產生3-[5-(氨基甲基)-1-氧代-3h-異吲哚-2-基]哌啶-2,6-二酮(2.5g，80％)，為灰色固體。lcms(esi):274(m+h)
+
.1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.02(s,
1h),8.15(s,1h),7.98(d,j＝8.4hz,1h),7.89(d,j＝8.4hz,1h),5.16-5.11(m,1h),4.52(d,j＝17.2hz,1h),4.40(d,j＝17.2hz,1h),2.96-2.90(m,1h),2.60-2.54(m,1h),2.43-2.34(m,1h),2.06-1.96(m,1h)
[0697][0698]
步驟4：化合物14的合成
[0699]
在0℃下在氮氣氣氛下向(2-氯-4-硝基苯基)乙酸(化合物13，5.00g，22.50mmol，1.00當量)於thf(75ml)中的攪拌溶液中滴加bh
3-me2s(10m的thf溶液)(5.60ml，56mmol，2.50當量)。將混合物在70℃下攪拌2h。將所得混合物真空濃縮。將殘餘物上樣到矽膠柱上並用pe/etoac(5:1)洗脫，得到2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(4.44g，88％)，為黃色固體。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.26(d,j＝4.0hz,1h),8.10-8.05(m,1h),7.50(d,j＝8.0hz,1h),3.99-3.91(m,2h),3.16-3.09(m,2h)
[0700][0701]
步驟5：化合物15的合成
[0702]
在25℃下向2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(化合物14，4.44g，22.02mmol，1.00當量)和咪唑(4.50g,66.06mmol，3.00當量)於dmf(50.00ml)中的攪拌混合物中添加tbsc1(6.97g，46.25mmol，2.10當量)。將混合物在25℃下攪拌16h。將所得混合物用水(100ml)稀釋。將所得混合物用etoac(3x100ml)萃取。將合併的有機層用鹽水(3x100ml)洗滌，經無水na2so4乾燥。過濾後，將濾液減壓濃縮。將殘餘物上樣到矽膠柱上並用pe/etoac(10:1)洗脫，得到叔丁基[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]二甲基矽烷(6.6g，90％)，為無色油狀物。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.24(s,1h),8.06-8.04(m,1h),7.46(d,j＝8.4hz,1h),3.89-3.86(m,2h),3.06-0.04(m,2h),0.85(s,9h),0.04(s,6h)。
[0703][0704]
步驟6：化合物16的合成
[0705]
向叔丁基[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]二甲基矽烷(化合物15，5.70g，18.05mmol，1.00當量)和fe(10.08g，180.45mmol，10.00當量)於etoh(110ml)/水(55ml)中的混合物中添加nh4cl(9.65g，180.45mmol，10當量)。將混合物在80℃下攪拌2h。將混合物冷卻至室溫。將所得混合物過濾，並將濾餅用etoh(3x50ml)洗滌。將濾液減壓濃縮。將殘餘物用水(100ml)稀釋並用etoac(50mlx3)萃取。將合併的有機層經無水硫酸鈉乾燥並真空蒸發至幹，得到4-[2-[(叔丁基二甲基甲矽烷基)氧基]乙基]-3-氯苯胺(5.2g，粗品)，為淡棕色的油狀物。lcms(esi)：286.29(m+h)
+
[0706]
[0707]
步驟7：化合物17的合成
[0708]
在0攝氏度下在氮氣下向4-[2-[(叔丁基二甲基甲矽烷基)氧基]乙基]-3-氯苯胺(化合物16，200.00mg，0.70mmol，1.00當量)和tea(141mg，1.40mmol，2.00當量)於dmf(3ml)中的溶液中滴加cdi(113mg，0.70mmol，1.00當量)的dmf(1ml)溶液。將所得混合物在25℃下攪拌1小時。然後將上述溶液和tea(141mg，1.40mmol)滴加到3-[5-(氨基甲基)-1-氧代-3h-異吲哚-2-基]哌啶-2,6-二酮(int1，192mg，0.70mmol，1.00當量)於dmf(2ml)中的溶液中。相同的反應重複兩次。將所得混合物在25℃下攪拌1小時。將反應用水(20ml)稀釋，用etoac(20mlx3)萃取。將合併的有機層用水、鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥並在真空中蒸發至幹。將殘餘物用矽膠柱(dcm:meoh＝10:1)純化，得到1-(4-[2-[(叔丁基二甲基甲矽烷基)氧基]乙基]-3-氯苯基)-3-[[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]脲(170mg，21％)，為白色固體。lcms(esi)：585.59(m+h)+
[0709][0710]
步驟8：新降解劑p3的合成
[0711]
在0℃下向1-(4-[2-[(叔丁基二甲基甲矽烷基)氧基]乙基]-3-氯苯基)-3-[[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]脲(化合物17，170.00mg，0.29mmol，1.00當量)於thf(2.00ml)中的溶液中添加tbaf(1n的thf溶液，0.58ml，0.58mmol，2.00當量)。將所得混合物在25攝氏度下攪拌8小時。將反應用製備型tlc(dcm:meoh＝10:1)純化，得到147mg粗1-(3-氯-4-(2-羥基乙基)苯基)-3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代異吲哚啉-5-基)甲基)脲，為白色固體。lcms(esi)：471.47(m+h)
+
[0712][0713]
步驟9：化合物19的合成
[0714]
將2-甲基-2-硫烷基丙-1-醇(化合物18，1.4g，13.2mmol，1.00當量)和5-硝基-2-[(5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基]吡啶(化合物120，2.05g，6.67mmol，0.50當量)添加到二氯甲烷(3.50ml)和meoh(3.50ml)溶劑的混合物中。將所得混合物在15℃下攪拌。然後分批添加二氧化錳(2.29g，26.2mmol，2當量)。將所得混合物在15℃下攪拌15min。lcms跡線顯示反應已完成。將反應蒸發至幹並將殘餘物通過反向快速色譜法用以下條件純化：柱，c18矽膠；流動相，acn的水溶液(0.1％nh4hco3)，30min內10％至100％梯度；檢測器，uv 254nm。將收集的級分真空濃縮至幹，得到2-甲基-2-[(5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基]丙-1-醇(2.2g，58％)，為黃色固體。lcms(esi)：261(m+h)
+
。
[0715]
[0716]
步驟10：化合物20的合成
[0717]
向2-甲基-2-[(5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基]丙-1-醇(化合物20，1.0g，3.84mmol，1.00當量)於無水dcm(30ml)中的溶液中分批添加meso2na(1.57g，15.4mmol，4.00當量)和碘(1.95g，7.68mmol，2.00當量)。將反應混合物在45℃下攪拌24h。將混合物濃縮，並將殘餘物通過矽膠柱色譜法(tlc:pe:ea＝3:1，rf＝0.60；在石油醚中0％-35％etoac)純化，得到2-(甲磺醯基硫烷基)-2-甲基丙-1-醇(80mg，10％)，為黃色油狀物。1h nmr(400mhz,cd3c1):δ3.50(s,2h),3.33(s,3h),2.16(br s,1h),1.47(s,6h)。
[0718][0719]
步驟11：化合物(ib)的合成
[0720]
向1-[3-氯-4-(2-羥基乙基)苯基]-3-[[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]脲(新降解劑p3，200.00mg，0.42mmol，1.00當量)和tea(129mg，1.26mmol，3.00當量)於dmf(4ml)中的溶液中添加cdi(138mg，0.84mmol，2.00當量)於dmf(1ml)中的溶液。將反應混合物在室溫下攪拌2小時。將反應用水(50ml)稀釋並用etoac(20mlx3)萃取。將合併的有機層用水(20mlx3)、鹽水(20ml)洗滌，經硫酸鈉乾燥並在真空中蒸發至幹，得到粗產物(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙基咪唑-1-甲酸酯，200mg)，為淡黃色固體。在室溫下向粗產物(100.00mg，0.18mmol，1.00當量)和c
s2
co3(115mg，0.35mmol，2.00當量)於dmf(8ml)中的溶液中滴加2-(甲磺醯基硫烷基)-2-甲基丙-1-醇(化合物20，59mg，0.32mmol，1.80當量)的dmf(2ml)溶液。將反應在15℃下攪拌22小時。將反應用etoac(50ml)和冰冷的水(100ml)稀釋。分離出有機層。將水相用etoac(30mlx3)萃取。將合併的有機層用鹽水(30mlx3)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥並在真空中蒸發至幹，得到粗產物(150mg)，為黃色固體。將粗產物用製備型hplc(柱：xselect csh obd柱30x150mm 5um；流動相a：水(0.1％fa)，流動相b：acn；流速：60ml/min；梯度：7min內38b至58b；220nm；rt1：5.12min)純化。將收集的級分凍幹，得到1-[3-氯-4-[2-([[2-(甲磺醯基硫烷基)-2-甲基丙氧基]羰基]-氧基)乙基]苯基]-3-[[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]脲(15.7mg，11％)，為白色固體。lcms(esi):681.68(m+h)
+
.1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.99(s,1h),8.86(s,1h),7.70(d,j＝2.4hz,1h),7.51(s,1h),7.44(d,j＝8.0hz,1h),7.24-7.17(m,1h),6.87-6.84(m,1h),5.76(s,2h),5.13-5.11(m,1h),4.42-4.40(m,2h),4.32-4.28(m,4h),3.54(s,3h),3.00-2.87(m,3h),2.62-2.58(m,1h),2.44-2.34(m,1h),2.01-1.95(m,1h),1.45(s,6h)。
[0721][0722]
方案3：化合物(ic)的製備
[0723][0724]
實施例3：化合物(ic)的合成
[0725][0726]
步驟1：化合物23的合成
[0727]
在0℃下在氮氣氣氛下向(2-氨基苯基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物22，300mg，1.35mmol，1.00當量)於dmf(20ml)中的攪拌溶液中滴加cdi(218mg，1.35mmol，1.00當量)和tea(68mg，1.35mmol，1.00當量)。將混合物在0℃下攪拌2h。向上述混合物中分批添加3-[5-(氨基甲基)-1-氧代-3h-異吲哚-2-基]哌啶-2,6-二酮(int1，368mg，1.35mmol，1.00當量)。將所得混合物在75℃下攪拌過夜。然後將反應混合物冷卻至室溫。將所得混合物用水(30ml)淬滅並用dcm(3x30ml)萃取。將合併的有機層用鹽水(30ml)洗滌，經無水na2so4乾燥，過濾並減壓濃縮。將殘餘物通過矽膠柱色譜法(dcm/meoh＝10:1)純化，得到n-[2-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]-n-甲基
氨基甲酸叔丁酯(300mg，42％)，為白色固體。lcms(esi)：522(m+h)
+
[0728][0729]
步驟2.新降解劑p4的合成
[0730]
在0℃下向n-[2-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]-n-甲基氨基甲酸叔丁酯(化合物23，300mg，1.00當量)於dcm(20ml)中的攪拌溶液中添加tfa(5ml)。將混合物在0℃下攪拌2h。將所得混合物真空濃縮。將粗產物通過反相用以下條件(c18，流動相a：水(0.1％fa)，流動相b：acn；流速：60ml/min)純化。將收集的級分真空濃縮，得到3-[[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]-1-[2-(甲基氨基)苯基]脲(210mg，87％)，為白色固體。lcms(esi):422(m+h)
+
.1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ10.99(s,1h),7.69(d,j＝7.8hz,1h),7.60(s,1h),7.53(s,1h),7.45(d,j＝8.4hz,1h),7.26-7.24(m,1h),6.99-6.93(m,1h),6.76-6.72(m,1h),6.60-6.55(m,2h),5.14-5.08(m,1h),5.00-4.85(br s,1h),4.48-4.28(m,4h),2.92-2.82(m,1h),2.70(s,3h),2.62-2.57(m,1h),2.49-2.41(m,1h),2.02-1.95(m,1h)。
[0731][0732]
步驟3.化合物(ic)的合成
[0733]
在室溫下在氮氣氣氛下向3-[[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]-1-[2-(甲基氨基)苯基]脲(p4，150.00mg，0.36mmol，1.00當量)、2,6-二甲基吡啶(76mg，0.71mmol，2.00當量)和hobt(96mg，0.71mmol，2.00當量)於dmf(3.00ml)中的攪拌混合物中添加[4-[(2s)-5-(氨基甲醯基氨基)-2-[(2s)-2-[6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基丁醯胺基]戊醯胺基]苯基]甲基4-硝基苯基碳酸酯(394mg，0.53mmol，1.50當量)。將反應混合物通過反向快速色譜法用以下條件純化：柱，c18矽膠；流動相，流動相a：水(0.1％fa)，流動相b：acn；)，得到粗產物(60mg)，為白色固體。將粗產物(60mg)通過製備型hplc用以下條件(柱：xselect csh obd柱30x150mm 5um，n；流動相a：水(0.1％fa)，流動相b：acn；流速：60ml/min；梯度：7min內24b至44b；220nm；rt1：6.33；rt2：)純化。將收集的級分凍幹，得到n-[2-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]-n-甲基氨基甲酸[4-[(2s)-5-(氨基甲醯基氨基)-2-[(2s)-2-[6-(2,5-二
氧代吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基丁醯胺基]戊醯胺基]苯基]甲酯(18.1mg，5％)，為白色固體。lcms(esi):1020(m+h)
+
.1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.99(s,1h),9.96(s,1h),8.19-8.06(m,3h),7.79(d,j＝8.8hz,1h),7.70(d,j＝8.0hz,1h),7.53-7.41(m,5h),7.20-7.05(m,4h),7.00(s,2h),6.95-6.90(m,1h),5.95(br s,1h),5.41(s,2h),5.18-4.89(m,3h),4.44-4.20(m,5h),4.19-4.17(m,1h),3.09(s,3h),3.07-2.85(m,3h),2.22-2.02(m,2h),2.00-1.85(m,2h),1.71-1.25(m,10h),1.20-1.12(m,3h),0.84-0.80(m,6h)
[0734]
方案4示出了化合物(id)如何由新降解劑p1製備。
[0735][0736]
方案4：化合物(id)的製備
[0737]
化合物(id)的合成
[0738]
在室溫下向1-(3-氯-4-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙基]苯基)-3-[[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]脲(p1，40.00mg，0.076mmol，1.00當量)和6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)己酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(25.00mg，0.081mmol，1.07當量)於dmf(2.00ml)中的攪拌混合物中滴加diea(20.00mg，0.16mmol，2.04當量)。將所得混合物在室溫下在氮氣氣氛下攪拌3h。將所得混合物用水(30ml)淬滅，並用dcm(3x30ml)萃取。將合併的有機層用水(30ml)、鹽水(30ml)洗滌，經na2so4乾燥。過濾後，將濾液真空濃縮至幹。將殘餘物通過以下條件純化：柱：sunfire c18 obd prep柱，100um，19mm x 250mm；流動相a：水(0.05％tfa)，流動相b：acn；流速：25ml/min；梯度：8.5min內25b至55b；220nm；rt1：8min；將收集的級分凍幹，得到n-[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]-氨基甲醯基)氨基]苯基]乙氧基)乙基]-6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)-n-甲基己醯胺(化合物(id)，24mg，43％)，為白色固體。lcms:(es,m/s):721,723(m+h)
+
；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.99(s,1h),8.78(s,1h),7.70-7.66(m,2h),7.51(s,1h),7.41(d,j＝9.6hz,1h),7.18-7.16(m,2h),7.00(d,j＝5.6hz,2h),6.85-6.80(m,1h),5.12-5.05(m,1h),4.42-4.33(m,5h),3.39-3.36(m,3h),2.91-2.76(m,7h),2.68-2.52(m,1h),2.48-2.35(m,1h),2.33-2.20(m,3h),2.05-1.95(m,1h),1.48-1.44(m,5h),1.28-1.12(m,3h)。
[0739]
方案5a和5b示出了如何製備新降解劑p1與替代性三肽接頭的複合物。
[0740][0741]
方案5a：新降解劑p1-三肽接頭複合物的合成
[0742][0743]
方案5b：新降解劑p1-三肽接頭複合物的合成(續)
[0744]
方案6a和6b示出了如何製備新降解劑p1與β-葡萄糖醛酸苷的複合物。
[0745][0746]
方案6a：新降解劑p1-β-葡萄糖醛酸苷接頭複合物的合成
[0747]
步驟1.化合物25的合成
[0748]
在室溫下向3-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]-丙酸(化合物24，5.00g，16.06mmol，1.00當量)在socl2(25ml)中的攪拌混合物中。將所得混合物在80℃下攪拌16h。通過lcms可檢測到期望的產物(與meoh的衍生物，ms＝326)。lcms指示反應完成。將所得混合物真空濃縮，得到n-(3-氯-3-氧代丙基)氨基甲酸9h-芴-9-基甲酯(化合物25，7.5g，粗品)，為黃色油狀物。粗產物不經進一步純化直接用於下一步。1h-nmr分析指示其為期望的產物(與meoh的衍生物)。1h-nmr(300mhz,cdcl3)δ7.81-7.77(m,2h),7.63-7.59(m,2h),7.46-7.40(m,2h),7.40-7.31(m,2h),5.33(s,1h),4.42(d,j＝3.0hz,2h),4.24(t,j＝6.0hz,1h),3.74-3.67(m,3h),3.50(d,j＝3.0hz,2h),2.59(t,j＝6.0hz,2h)。
[0749]
步驟2.化合物28的合成
[0750]
在室溫下在n2氣氛下向4-甲醯基-2-硝基酚(化合物27，4.21g，25.19mmol，1.00當量)和ag2o(7.00g，30.20mmol，1.20當量)於acn(100ml，190.24mmol，75.00當量)中的攪拌溶液中分批添加化合物26(10.00g，25.17mmol，1.00當量)。將所得混合物在室溫下在n2氣氛下攪拌過夜。lcms指示反應完成。將所得混合物過濾，將濾餅用dcm(50mlx3)洗滌。將濾液減壓濃縮。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用pe/ea(pe:ea＝1:2)洗脫，得到(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-(4-甲醯基-2-硝基苯氧基)噁烷-2-甲酸甲酯(化合物28，10.5g，86％)，為白色固體。1h-nmr分析指示其為期望的產物。lcms(es,m/z)：484[m+1]
+
。1h-nmr(300mhz,cdcl3)δ10.00(s,1h),8.34(s,1h),8.13-8.09(m,1h),7.52(d,j＝3.0hz,1h),5.47-5.29(m,4h),4.37-4.35(m,1h),3.75-3.73(m,3h),2.17-2.06(m,9h)。
[0751]
步驟3.化合物29的合成
[0752]
在rt下在n2氣氛下向(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-(4-甲醯基-2-硝基苯氧基)噁烷-2-甲酸甲酯(化合物28，6.00g，12.41mmol，1.00當量)於meoh(50ml)中的攪拌溶液中分批添加nabh4(0.47g，12.42mmol，1.00當量)。將所得混合物在室溫下在n2氣氛下攪拌2h。lcms指示反應完成。將反應在室溫下用水淬滅。將所得物通過na2so4乾燥。將所得混合物過濾，將濾餅用dcm洗滌。將所得混合物真空濃縮，得到(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-[4-(羥基甲基)-2-硝基苯氧基]噁烷-2-甲酸甲酯(化合物29，5.5g，91％)，為固體。lcms(es,m/z)：486[m+h]+。
[0753]
步驟4.化合物30的合成
[0754]
在室溫下向(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-[4-(羥基甲基)-2-硝基苯氧基]噁烷-2-甲酸甲酯(化合物29，5.50g，11.33mmol，1.00當量)於ea(60ml)中的攪拌混合物中分批添加pd/c(1.10g，10％)。將所得混合物在室溫下在h2氣氛下攪拌16h。lcms指示反應完成。將所得混合物過濾，將濾餅用dcm和meoh洗滌，將濾液真空濃縮，得到(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-[2-氨基-4-(羥基甲基)苯氧基]噁烷-2-甲酸甲酯(化合物30，4.0g，77％)，為固體。粗產物不經進一步純化直接用於下一步。lcms(es,m/z)：456[m+h]
+
。
[0755]
步驟5.化合物31的合成
[0756]
在0℃下在n2氣氛下向(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-[2-氨基-4-(羥基甲基)苯氧基]噁烷-2-甲酸甲酯(化合物30，1.00g，2.19mmol，1.00當量)和nahco3(0.20g，2.40mmol，1.1當量)於thf(10ml)中的攪拌溶液中分批添加化合物25(0.87g，2.62mmol，1.20當量)。將所得混合物在0℃下在n2氣氛下攪拌6h。lcms指示反應完成。將反
應在室溫下用水淬滅。將所得混合物用dcm萃取。將合併的有機層減壓濃縮。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用pezea(ea＝100％)洗脫，得到(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-[2-(3-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]-丙醯胺基)-4-(羥基甲基)苯氧基]噁烷-2-甲酸甲酯(化合物31，1.1g，66％)，為淡黃色固體。lcms(es,m/z)：749[m+h]
+
。
[0757]
步驟6.化合物33合成
[0758]
在0℃下在n2氣氛下向(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-[2-(3-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙醯胺基)-4-(羥基甲基)苯氧基]噁烷-2-甲酸甲酯(化合物31，1.50g，2.00mmol，1.00當量)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(化合物32，0.68g，2.24mmol，1.12當量)於dmf(15ml)中的攪拌混合物中分批添加diea(0.52g，4.01mmol，2.00當量)。將所得混合物在室溫下在氮氣氣氛下攪拌過夜。lcms指示反應完成。將反應混合物通過反向快速色譜法用以下條件純化：柱，c18矽膠；流動相，acn的水溶液(0.1％fa)，40min內10％至90％梯度；檢測器，uv 254nm。將收集的級分在真空中濃縮至幹，得到(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-[2-(3-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙醯胺基)-4-[[(4-硝基苯氧基羰基)氧基]甲基]苯氧基]噁烷-2-甲酸甲酯(化合物33，1.4g，48％)，為黃色固體。lcms(es,m/z)：914[m+h]
+
。
[0759][0760]
方案6b：新降解劑p1-β-葡萄糖醛酸苷接頭複合物的合成
[0761]
步驟7.化合物34合成
[0762]
在室溫下在n2氣氛下向(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-[2-(3-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙醯胺基)-4-[[(4-硝基苯氧基羰基)氧基]甲基]苯氧基]噁烷-2-甲酸甲酯(化合物33，1.00g，1.09mmol，1.00當量)和1-(3-氯-4-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙基]苯基)-3-[[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]脲(新降解劑p1，0.58g，1.09mmol，1.00當量)於dmf(10ml)中的攪拌混合物中分批添加hobt(1.18g，8.72mmol，8.00當量)和2,4-二甲基吡啶(1.07g，8.72mmol，8.00當量)。將所得混合
物在室溫下在n2氣氛下攪拌16h。lcms指示反應完成。將所得混合物用於進一步純化。將殘餘物通過反向快速色譜法用以下條件純化：柱，c18矽膠；流動相，acn的水溶液(0.1％fa)，40min內10％至80％梯度；檢測器，uv 254nm。將收集的級分真空濃縮，得到(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-[4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)氨基甲醯基]氧基)甲基]-2-(3-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙醯胺基)苯氧基]噁烷-2-甲酸甲酯(化合物34，800mg，56％)，為固體。lcms(es,m/z)：1302[m+h]
+
。
[0763]
步驟8.化合物35合成
[0764]
在室溫下在n2氣氛下向(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-[4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)氨基甲醯基]氧基)甲基]-2-(3-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙醯胺基)苯氧基]噁烷-2-甲酸甲酯(化合物34，800.00mg，0.61mmol，1.00當量)於thf(80ml)中的攪拌混合物中分批添加hc1(6n，80ml)。將所得混合物在50℃在氮氣氣氛下攪拌3h。lcms指示反應完成。將所得混合物真空濃縮。將殘餘物通過反向快速色譜法用以下條件純化：柱，c18矽膠；流動相，acn的水溶液(0.1％fa)，40min內0％至80％梯度；檢測器，uv 254nm。將收集的級分凍幹，得到(2s,3s,4s,5r,6s)-6-[4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)氨基甲醯基]氧基)甲基]-2-(3-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙醯胺基)苯氧基]-3,4,5-三羥基噁烷-2-羧酸(化合物35，230mg，32％)，為白色固體。lcms(es,m/z)：1162[m+h]
+
。
[0765]
步驟9.化合物36的合成
[0766]
在室溫下在氮氣氣氛下向(2s,3s,4s,5r,6s)-6-[4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)氨基甲醯基]氧基)甲基]-2-(3-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙醯胺基)苯氧基]-3,4,5-三羥基噁烷-2-羧酸(化合物35，230mg，0.2mmol，1.00當量)於dmf(2ml)中的攪拌溶液中分批添加哌啶(0.4ml)。將所得混合物在室溫下在氮氣氣氛下攪拌10min。lcms指示反應完成。將所得混合物直接用於通過製備型hplc用以下條件進一步純化(柱：xselect csh prep c18 obd柱，19x250mm，5um；流動相a：水(0.05％tfa)，流動相b：acn；流速：25ml/min；梯度：7min內20b至40b；220nm；rt 1：5.78min)，得到(2s,3s,4s,5r,6s)-6-[2-(3-氨基丙醯胺基)-4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]-乙氧基)乙基](甲基)氨基甲醯基]氧基)甲基]苯氧基]-3,4,5-三羥基噁烷-2-羧酸(化合物36，35mg,18％)，為白色固體。lcms(es,m/z)：940[m+h]+。
[0767]
步驟10.化合物(ie)的合成
[0768]
在室溫下在氮氣氣氛下向(2s,3s,4s,5r,6s)-6-[2-(3-氨基丙醯胺基)-4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)氨基甲醯基]氧基)甲基]苯氧基]-3,4,5-三羥基噁烷-2-羧酸(化合物36，30mg，0.03mmol，1.00當量)於dmf(3ml)中的攪拌溶液中分批添加diea(13mg，0.10mmol，3.00當量)和化合物37(30mg，0.10mmol，3.00當量)。將所得混合物在室溫
下在氮氣氣氛下攪拌1h。lcms指示反應完成。將所得混合物通過製備型hplc用以下條件(柱：xselect csh obd柱30x150mm 5um，流動相a：水(0.1％fa)，流動相b：acn；流速：60ml/min；梯度：10min內21b至36b；220nm；rt1：11.15min)純化。將收集的級分凍幹，得到(2s,3s,4s,5r,6s)-6-[4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙氧基)乙基]-(甲基)氨基甲醯基]氧基)甲基]-2-[3-[6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)己醯胺基]丙醯胺基]苯氧基]-3,4,5-三羥基噁烷-2-羧酸(化合物(ie)，10.5mg，28％)，為白色固體。lcms(es,m/z):1133[m+h]
+
.1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ10.9(s,1h),9.13(s,1h),8.16(s,1h),7.92-7.68(m,4h),7.52(s,1h),7.44(d,j＝3,0hz,1h),7.18-6.99(m,7h),5.76(s,1h),5.20-5.10(m,2h),4.98(br s,2h),4.76-4.74(m,1h),4.42-4.33(m,4h),3.65(br s,1h),3.58-3.54(m,5h),3.35(d,j＝6hz,2h),2.90-2.83(m,7h),2.57-2.55(m,3h),2.45-2.30(m,1h),2.02-1.98(m,4h),1.48-1.42(m,5h),1.40-1.20(m,3h)。
[0769]
方案7示出了如何製備新降解劑p6與肼接頭的複合物。
[0770][0771]
方案7：新降解劑p6-腙接頭複合物的合成
[0772]
步驟1.化合物38的合成
[0773]
在室溫下向4-氨基苯乙酮(化合物37，100mg，0.73mmol，1.00當量)於thf(2.00ml)中的攪拌溶液中滴加雙光氣(0.40ml)。將所得混合物在0℃下攪拌30min。將所得混合物真空濃縮。將所得固體再溶解於dmf(1.50ml)中。在室溫下向攪拌溶液中滴加3-[5-(氨基甲基)-1-氧代-3h-異吲哚-2-基]哌啶-2,6-二酮(int1，200mg，0.73mmol，1.00當量)的dmf(3.00ml)和tea(0.50ml)溶液。將所得混合物在0℃下攪拌1h。lcms指示反應完成。向混合物中添加水(5ml)並用ch2cl2(3x10ml)萃取。將有機層真空濃縮。將殘餘物通過反向快速色譜法用以下條件純化：柱，c18矽膠；流動相，acn的水溶液(0.05％tfa)，35min內10％至50％梯度；檢測器，uv 254nm。將收集的級分濃縮至幹，得到1-(4-乙醯基苯基)-3-[[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]脲(化合物38，80mg，25％)，為淡黃色固體。lcms:(es.m/z)：435[m+1]
+
。
[0774]
步驟2.化合物(if)的合成
[0775]
將1-(4-乙醯基苯基)-3-[[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]脲(化合物38，80.00mg，0.18mmol，1.00當量)和6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)己醯肼三
氟乙酸(75mg，1.20當量)於甲醇(5.00ml)中的混合物在50攝氏度下攪拌過夜。將混合物冷卻至室溫。lcms指示反應完成。將沉澱的固體通過過濾收集並用meoh(2x5ml)洗滌。將粗固體通過反向快速色譜法用以下條件純化：c18柱；流動相，acn的水溶液(0.1％fa)，30min內10％至50％梯度；檢測器，uv 254nm。將收集的級分用dcm(3x5ml)萃取並真空濃縮。這產生3-[[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]-1-[4-[(1e)-1-[[6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)己醯胺基]亞氨基]乙基]苯基]脲(化合物(if)，4.4mg，3.7％)，為灰白色固體。lcms:(es.m/z):642[m+1]
+
.1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.99(s,1h),10.26-10.15(m,1h),8.82(s,1h),7.69-7.62(m,3h),7.52-7.43(m,4h),7.01-6.99(m,2h),5.13-5.09(m,1h),4.42-4.33(m,4h),2.98-2.82(m,1h),2.62-2.58(m,2h),2.20-2.12(m,2h),1.58-1.51(m,6h),1.26-1.09(m,6h)
[0776]
方案8示出了如何製備新降解劑p2與季胺接頭的複合物。
[0777][0778]
方案8：新降解劑p2-季胺接頭複合物的合成
[0779]
步驟1.化合物40的合成
[0780]
在n2下在0℃下向n-[(1s)-1-[[(1s)-4-(氨基甲醯基氨基)-1-[[4-(羥基甲基)苯基]氨基甲醯基]丁基]氨基甲醯基]-2-甲基丙基]-6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)己醯胺(化合物39，100mg，0.18mmol，1.00當量)於dmf(2ml)中的攪拌溶液中滴加socl2(20mg，0.18mmol，1當量)的dcm(2ml)溶液。將所得混合物在0℃下攪拌1h。lcms指示反應完成。將反應混合物用冰冷的水(20ml)稀釋，用dcm(10ml*3)萃取，將合併的有機層用水(10ml)、鹽水(10ml)洗
滌，經無水硫酸鈉乾燥並真空濃縮至幹，得到n-[(1s)-1-[[(1s)-4-(氨基甲醯基氨基)-1-[[4-(氯甲基)苯基]-氨基甲醯基]丁基]氨基甲醯基]-2-甲基丙基]-6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)己醯胺(化合物40，80mg，53％)的產物，為白色固體。lcms(es,m/z)：591,593[m+h]
+
[0781]
步驟2.化合物42的合成
[0782]
在0℃下向(2-氯-4-硝基苯基)乙酸(化合物41，8.60g，39.9mmol，1.00當量)於thf(130ml)中的攪拌混合物中滴加bh
3-me2s(10.00ml，105.4mmol，2.64當量)。將所得混合物在70℃下在氮氣氣氛下攪拌4h。tlc(pe:ea＝1:2)指示反應完成。使混合物冷卻至室溫。將所得混合物真空濃縮。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用pe/etoac(1:1)洗脫，得到2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(化合物42，7.7g，96％)，為黃色固體。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.27(d,j＝4.0hz,1h),8.11-8.07(m,1h),7.53(d,j＝8.0hz,1h),3.99(t,j＝8.0hz,2h),3.15(t,j＝8.0hz,2h)。
[0783]
步驟3.化合物43的合成
[0784]
在0℃下向2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(化合物42，7.70g，38.2mmol，1.00當量)和2-溴乙酸叔丁酯(57.74g，296.0mmol，7.75當量)於甲苯(70ml)中的攪拌混合物中分批添加bu4nhso4(10.37g，30.6mmol，0.80當量)。在30h內在0℃下向上述混合物中滴加naoh(15.00g，375.0mmol，9.82當量)的h2o溶液(90ml)。將所得混合物在室溫下再攪拌4h。tlc(pe:ea＝3:1)指示反應完成。將所得混合物用etoac(3x200ml)萃取。將合併的有機層用鹽水(200ml)洗滌，經無水na2so4乾燥。過濾後，將濾液減壓濃縮。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用pe/etoac(5:1)洗脫，得到2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙酸叔丁酯(化合物43，12.2g,91％)，為黃色油狀物。1h nmr(300mhz,cdcl3)δ8.20(d,j＝4.0hz,1h),8.07-8.03(m,1h),7.61(d,j＝8.1hz,1h),4.11(s,2h),3.83(t,j＝8.1hz,2h),3.16(t,j＝8.1hz,2h),1.45(s,9h)。
[0785]
步驟4.化合物44的合成
[0786]
在0℃下向2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙酸叔丁酯(化合物43，12.20g，38.6mmol，1.00當量)於dcm(120ml)中的攪拌混合物中滴加tfa(20ml)。將所得混合物在室溫下攪拌4h。lcms指示反應完成。將所得混合物減壓濃縮。這產生[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙酸(化合物44，8.4g,83％)，為黃色固體。lcms:(es,m/s):517(2m-h)-1
h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.64(s,1h),8.20(d,j＝4.0hz,1h),8.11-8.08(m,1h),7.72(d,j＝8.0hz,1h),4.06(s,2h),3.74(t,j＝8.0hz,2h),3.06(t,j＝8.0hz,2h)。
[0787]
步驟5.化合物45的合成
[0788]
在0℃下在氮氣氣氛下向[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙酸(化合物44，8.40g，32.35mmol，1.00當量)和hatu(19.19g，50.47mmol，1.56當量)於dmf(80ml)中的攪拌混合物中添加ch3nh2.hc1(2.69g，39.79mmol，1.23當量)和diea(17.31g，133.93mmol，4.14當量)。將所得混合物在室溫下在氮氣氣氛下攪拌4h。lcms指示反應完成。將反應用水/冰淬滅。將所得混合物用dcm(3x50ml)萃取。將合併的有機層用鹽水(50ml)洗滌，經無水na2so4乾燥。過濾後，將濾液減壓濃縮。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用(dcm:meoh＝10:1)洗脫，得到2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]-n-甲基乙醯胺(化合物45，7.2g,81％)，為黃色油狀物。lcms:(es,m/s)：273,275(m+h)
+
[0789]
步驟6.化合物46的合成
[0790]
在室溫下向2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]-n-甲基乙醯胺(化合物45，7.20g，26.40mmol，1.00當量)於thf(70ml)中的攪拌混合物中滴加bh
3-thf(10m的thf溶液，52.0ml，520.0mmol，20當量)。將所得混合物在70℃下攪拌4h。lcms指示反應完成。使混合物冷卻至室溫。將反應用meoh淬滅。將殘餘物用1n hc1酸化至ph 6。將所得混合物用etoac(20ml)萃取。將水相用飽和nahco3(飽和水溶液)鹼化至ph 8。將所得混合物用etoac(3x100ml)萃取，用鹽水(50ml)洗滌並經無水na2so4乾燥。過濾後，將濾液減壓濃縮。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用(dcm:meoh＝8:1)洗脫，得到[2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙基](甲基)胺(化合物46，5.4g,79％)，為黃色固體。lcms:(es,m/s):259,261(m+h)
+
；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.26(d,j＝4.0hz,1h),8.15-8.12(m,1h),7.73(d,j＝8.0hz,1h),3.72(t,j＝8.0hz,2h),3.61(t,j＝8.0hz,2h),3.10(t,j＝8.0hz,2h),2.87(t,j＝8.0hz,2h),2.40(s,3h)。
[0791]
步驟7.化合物47的合成
[0792]
在室溫下向[2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙基](甲基)胺(化合物46，4.00g，15.46mmol，1.00當量)和boc2o(3.80g，17.41mmol，1.13當量)於thf(20.00ml)中的攪拌混合物中滴加nahco3(4.00g，47.61mmol，3.08當量)的h2o溶液(20.00ml)。將所得混合物在室溫下攪拌過夜。lcms指示反應完成。將所得混合物用etoac(3x20ml)萃取。將合併的有機層用鹽水(20ml)洗滌，經無水na2so4乾燥。過濾後，將濾液減壓濃縮。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用(dcm:meoh＝12:1)洗脫，得到n-[2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙基]-n-甲基氨基甲酸叔丁酯(化合物47，4.8g，77％)，為黃色固體。
[0793]
lcms:(es,m/s):359,361(m+h)
+
；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.24(d,j＝4.0hz,1h),8.13-8.10(m,1h),7.67(d,j＝8.0hz,1h),4.05-4.00(m,1h),3.69(t,j＝8.0hz,2h),3.50(t,j＝8.0hz,2h),3.28(t,j＝8.0hz,2h),3.07(t,j＝8.0hz,2h),2.75(s,3h),1.36(s,9h)。
[0794]
步驟8.化合物48的合成
[0795]
在室溫下向n-[2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙基]-n-甲基氨基甲酸叔丁酯(化合物47，5.60g，15.6mmol，1.00當量)於etoh(112.00ml)中的攪拌混合物中添加nh4cl(2.50g，46.74mmol，2.99當量)的h2o溶液(12.00ml)和fe(4.40g，78.79mmol，5.05當量)。將所得混合物在80℃下攪拌3h。lcms指示反應完成。使混合物冷卻至室溫。將所得混合物減壓濃縮。將所得混合物用dcm(3x30ml)萃取。將合併的有機層用鹽水(30ml)洗滌，經無水na2so4乾燥。過濾後，將濾液減壓濃縮。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用(dcm:meoh＝10:1)洗脫，得到n-[2-[2-(4-氨基-2-氯苯基)乙氧基]乙基]-n-甲基氨基甲酸叔丁酯(化合物48，4.2g，81％)，為黃色油狀物。lcms:(es,m/s):329,331(m+h)
+
；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ6.96(d,j＝8.0hz,1h),6.59(d,j＝4.0hz,1h),6.46-6.43(m,1h),5.18(br s,2h),3.50-3.45(m,4h),3.29-3.26(m,2h),2.75-2.71(m,5h),1.38(s,9h)。
[0796]
步驟9.化合物49的合成
[0797]
在0℃下在氮氣氣氛下向n-[2-[2-(4-氨基-2-氯苯基)乙氧基]乙基]-n-甲基氨基甲酸叔丁酯(化合物48，100mg，0.30mmol，1.00當量)於thf(3ml)中的溶液中添加lia1h4(92mg，2.43mmol，8.00當量)的thf溶液(2ml)。將所得混合物在室溫下攪拌16小時。五個反應平行進行。lcms指示反應完成。然後將反應用1n naoh(10ml)淬滅，過濾，真空濃縮至幹並
1.25(m,2h),0.98-0.96(m,6h)。
[0802]
方案9a和9b示出了如何製備新降解劑p13與含肽接頭的複合物。
[0803][0804]
方案9a：新降解劑p13-肽接頭複合物的合成
[0805][0806]
方案9b：新降解劑p13-肽接頭複合物的合成
[0807]
方案10示出了式(ih)的化合物的合成。
[0808][0809]
方案10：新降解劑p1-β-葡萄糖醛酸苷接頭複合物(化合物(ih))的合成
[0810]
步驟1.化合物63的合成
[0811]
在室溫下向3-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙酸(化合物62，5.00g，16.06mmol，1.00當量)的攪拌混合物中添加socl2(25ml)。將所得混合物在80℃下攪拌16h。通過lcms可檢測到期望的產物(與meoh的衍生物，ms＝326)。lcms指示反應完成。將所得混合物真空濃縮，得到n-(3-氯-3-氧代丙基)氨基甲酸9h-芴-9-基甲酯(化合物63，7.5g，粗品)，為黃色油狀物。粗產物不經進一步純化直接用於下一步。1h nmr分析指示其為期望的產物(與meoh的衍生物)。1h-nmr(300mhz,cdcl3)δ7.81-7.77(m,2h),7.63-7.59(m,2h),7.46-7.40(m,2h),7.40-7.31(m,2h),5.33(s,1h),4.42(d,j＝3.0hz,2h),4.24(t,j＝6.0hz,1h),3.74-3.67(m,3h),3.50(d,j＝3.0hz,2h),2.59(t,j＝6.0hz,2h)。
[0812]
步驟2.化合物66的合成
[0813]
在室溫下在n2氣氛下向4-甲醯基-2-硝基酚(化合物65，4.21g，25.19mmol，1.00當
量)和ag2o(7.00g，30.20mmol，1.20當量)於acn(100ml，190.24mmol，75.00當量)中的攪拌溶液中分批添加(2s,3s,4s,5r,6r)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-溴噁烷-2-甲酸甲酯(化合物64，10.00g，25.17mmol，1.00當量)。將所得混合物在室溫下在n2氣氛下攪拌過夜。lcms指示反應完成。將所得混合物過濾，將濾餅用dcm(50ml x 3)洗滌。將濾液減壓濃縮。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用pe/ea(pe:ea＝1:2)洗脫，得到(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-(4-甲醯基-2-硝基苯氧基)噁烷-2-甲酸甲酯(化合物66，10.5g，86％)，為白色固體。1h-nmr分析指示其為期望的產物。lcms(es,m/z)：484[m+1]
+
。1h-nmr(300mhz,cdcl3)δ10.00(s,1h),8.34(s,1h),8.13-8.09(m,1h),7.52(d,j＝3.0hz,1h),5.47-5.29(m,4h),4.37-4.35(m,1h),3.75-3.73(m,3h),2.17-2.06(m,9h)。
[0814]
步驟3.化合物67的合成
[0815]
在室溫下在n2氣氛下向(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-(4-甲醯基-2-硝基苯氧基)噁烷-2-甲酸甲酯(化合物66，6.00g，12.41mmol，1.00當量)於meoh(50ml)中的攪拌溶液中分批添加nabh4(0.47g，12.42mmol，1.00當量)。將所得混合物在室溫下在n2氣氛下攪拌2h。lcms指示反應完成。將反應在室溫下用水淬滅。將所得物通過na2so4乾燥。將所得混合物過濾，將濾餅用dcm洗滌。將所得混合物真空濃縮，得到(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-[4-(羥基甲基)-2-硝基苯氧基]噁烷-2-甲酸甲酯，(化合物67，5.5g，91％)，為固體。lcms(es,m/z)：486[m+h]
+
。
[0816]
步驟4.化合物68的合成
[0817]
在室溫下向(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-[4-(羥基甲基)-2-硝基苯氧基]噁烷-2-甲酸甲酯(化合物67，5.50g，11.33mmol，1.00當量)於ea(60ml)中的攪拌混合物中分批添加pd/c(1.10g，10％)。將所得混合物在室溫下在h2氣氛下攪拌16h。lcms指示反應完成。將所得混合物過濾，將濾餅用dcm和meoh洗滌，將濾液真空濃縮，得到(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-[2-氨基-4-(羥基甲基)苯氧基]噁烷-2-甲酸甲酯(化合物68，4.0g，77％)，為固體。粗產物不經進一步純化直接用於下一步。lcms(es,m/z)：456[m+h]
+
。
[0818]
步驟5.化合物70的合成
[0819]
在0℃下在n2氣氛下向(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-[2-氨基-4-(羥基甲基)苯氧基]噁烷-2-甲酸甲酯(化合物68，1.00g，2.19mmol，1.00當量)和nahco3(0.20g，2.40mmol，1.1當量)於thf(10ml)中的攪拌溶液中分批添加n-(3-氯-3-氧代丙基)氨基甲酸9h-芴-9-基甲酯(化合物69，0.87g，2.62mmol，1.20當量)。將所得混合物在0℃下在n2氣氛下攪拌6h。lcms指示反應完成。將反應在室溫下用水淬滅。將所得混合物用dcm萃取。將合併的有機層減壓濃縮。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用pe/ea(ea＝100％)洗脫，得到(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-[2-(3-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙醯胺基)-4-(羥基甲基)苯氧基]噁烷-2-甲酸甲酯(化合物70，1.1g，66％)，為淡黃色固體。lcms(es,m/z)：749[m+h]
+
。
[0820]
步驟6.化合物72的合成
[0821]
在0℃下在n2氣氛下向(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-[2-(3-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙醯胺基)-4-(羥基甲基)苯氧基]噁烷-2-甲酸甲酯(化合物70，1.50g，2.00mmol，1.00當量)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(化合物71，0.68g，
2.24mmol，1.12當量)於dmf(15ml)中的攪拌混合物中分批添加diea(0.52g，4.01mmol，2.00當量)。將所得混合物在室溫下在氮氣氣氛下攪拌過夜。lcms指示反應完成。將反應混合物通過反向快速色譜法用以下條件純化：柱，c18矽膠；流動相，acn的水溶液(0.1％fa)，40min內10％至90％梯度；檢測器，uv 254nm。將收集的級分在真空中濃縮至幹，得到(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-[2-(3-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙醯胺基)-4-[[(4-硝基苯氧基羰基)氧基]甲基]苯氧基]噁烷-2-甲酸甲酯(化合物72，1.4g，48％)，為黃色固體。lcms(es,m/z)：914[m+h]
+
。
[0822]
步驟7.化合物73的合成
[0823]
在室溫下在n2氣氛下向(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-[2-(3-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙醯胺基)-4-[[(4-硝基苯氧基羰基)氧基]甲基]苯氧基]噁烷-2-甲酸甲酯(化合物72，1.00g，1.09mmol，1.00當量)和1-(3-氯-4-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙基]苯基)-3-[[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]脲(新降解劑p1，0.58g，1.09mmol，1.00當量)於dmf(10ml)中的攪拌混合物中分批添加hobt(1.18g，8.72mmol，8.00當量)和2,4-二甲基吡啶(1.07g，8.72mmol，8.00當量)。將所得混合物在室溫下在n2氣氛下攪拌16h。lcms指示反應完成。將所得混合物用於進一步純化。將殘餘物通過反向快速色譜法用以下條件純化：柱，c18矽膠；流動相，acn的水溶液(0.1％fa)，40min內10％至80％梯度；檢測器，uv 254nm。將收集的級分真空濃縮，得到(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-[4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)氨基甲醯基]氧基)甲基]-2-(3-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙醯胺基)苯氧基]噁烷-2-甲酸甲酯(化合物73(800mg，56％)，為固體。lcms(es,m/z)：1302[m+h]
+
。
[0824]
步驟8.化合物74的合成
[0825]
在室溫下在n2氣氛下向(2s,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-三(乙醯基氧基)-6-[4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)氨基甲醯基]氧基)甲基]-2-(3-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙醯胺基)苯氧基]噁烷-2-甲酸甲酯(化合物73(800.00mg，0.61mmol，1.00當量)於thf(80ml)中的攪拌混合物中分批添加hc1(6n，80ml)。將所得混合物在50℃在氮氣氣氛下攪拌3h。lcms指示反應完成。將所得混合物真空濃縮。將殘餘物通過反向快速色譜法用以下條件純化：柱，c18矽膠；流動相，acn的水溶液(0.1％fa)，40min內0％至80％梯度；檢測器，uv 254nm。將收集的級分凍幹，得到(2s,3s,4s,5r,6s)-6-[4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)氨基甲醯基]氧基)甲基]-2-(3-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙醯胺基)苯氧基]-3,4,5-三羥基噁烷-2-羧酸(化合物74，230mg，32％)，為白色固體。lcms(es,m/z)：1162[m+h]
+
。
[0826]
步驟9.化合物75的合成
[0827]
在室溫下在氮氣氣氛下向(2s,3s,4s,5r,6s)-6-[4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)氨基甲醯基]氧基)甲基]-2-(3-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙醯胺基)苯氧基]-3,4,5-三羥基噁烷-2-羧酸即化合物74(230mg，0.2mmol，1.00當量)於dmf(2ml)中
的攪拌溶液中分批添加哌啶(0.4ml)。將所得混合物在室溫下在氮氣氣氛下攪拌10min。lcms指示反應完成。將所得混合物直接用於通過製備型hplc用以下條件(柱：xselect csh prep cl8 obd柱，19x250mm，5um；流動相a：水(0.05％tfa)，流動相b：acn；流速：25ml/min；梯度：7min內20b至40b；220nm；rt1：5.78min)進一步純化，得到(2s,3s,4s,5r,6s)-6-[2-(3-氨基丙醯胺基)-4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)氨基甲醯基]氧基)甲基]苯氧基]-3,4,5-三羥基噁烷-2-羧酸(化合物75，35mg，18％)，為白色固體。lcms(es,m/z)：940[m+h]
+
。
[0828]
步驟10.化合物(ih)的合成
[0829]
在室溫下在氮氣氣氛下向(2s,3s,4s,5r,6s)-6-[2-(3-氨基丙醯胺基)-4-[({[2-(2-{2-氯-4-[({[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基}氨基甲醯基)氨基]苯基}乙氧基)乙基](甲基)氨基甲醯基}氧基)甲基]苯氧基]-3,4,5-三羥基噁烷-2-羧酸(化合物75，110mg，0.12mmol，1.00當量)和雙(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)戊二酸酯(化合物76，46mg，0.14mmol，1.2當量)於dmf(2.0ml)中的攪拌溶液中分批添加diea(30mg，0.23mmol，2.0當量)。將所得混合物在室溫下在氮氣氣氛下攪拌1h。lcms指示反應完成。將反應混合物通過製備型hplc用以下條件純化(柱：kinetexevo prep c18，30*150，5um；流動相a：水(0.05％tfa)，流動相b：acn；流速：60ml/min；梯度：7min內21％b至41％b，41％b；波長：254nm；rt1(min)：5.8。將收集的級分凍幹，得到(2s,3s,4s,5r,6s)-6-{4-[({[2-(2-{2-氯-4-[({[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基}氨基甲醯基)氨基]苯基}乙氧基)乙基](甲基)氨基甲醯基}氧基)甲基]-2-(3-{5-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-5-氧代戊醯胺基}丙醯胺基)苯氧基}-3,4,5-三羥基噁烷-2-羧酸(化合物(ih)，48mg，34％，為白色固體。lcms(es,m/z)：1151[m+h]
+
、1173[m+na]
+
。1h-nmr(300mhz,dmso-d6):12.80(br s,1h),10.98(s,1h),9.08(s,1h),8.79(s,1h),8.18(s,1h),7.96(s,1h),7.68-7.66(m,2h),7.51(s,1h),7.44(d,j＝8.1hz,1h),7.25-7.00(m,4h),6.82-6.80(m,1h),5.86(s,ih),5.39-5.30(m,2h),5.14-5.07(m,1h),4.97(s,2h),4.84(d,j＝7.2hz,1h),4.47-4.27(m,4h),3.90(d,j＝9.6hz,1h),3.56-3.48(m,4h),3.45-3.36(m,6h),2.95-2.80(m,8h),2.75-2.65(m,3h),2.62-2.55(m,2h),2.49-2.35(m,1h),2.21-2.16(m,2h),2.01-1.95(m,1h),1.85-1..80(m,2h)。
[0830][0831]
方案11：新降解劑p1-接頭複合物(化合物(ii))的合成
[0832]
步驟1.化合物76的合成
[0833]
在0℃下在氮氣氣氛下向1-(3-氯-4-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙基]苯基)-3-[[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]脲(化合物p1，180mg，0.34mmol，1.00當量)於dmf(8ml)中的攪拌溶液中分批添加tea(104mg，1.02mmol，3.0當量)和4-(氯磺醯基)-3-硝基苯甲酸(181mg，0.68mmol，2.00當量)。將所得混合物在0℃下在氮氣氣氛下攪拌4h。lcms指示反應完成。將所得混合物用於進一步純化。將殘餘物通過反向快速色譜法用以下條件純化：柱，c18矽膠；流動相，acn的水溶液(0.1％fa)，10min內10％至60％梯度；檢測器，uv 254nm。將混合物凍幹，得到4-[[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)氨磺醯基]-3-硝基苯甲酸(化合物76，70mg，27％)，為淡黃色固體。lcms(es,m/z)：757[m+1]
+
。
[0834]
步驟2化合物(ii)的合成
[0835]
在室溫下在氮氣氣氛下向4-[[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)氨磺醯基]-3-硝基苯甲酸(化合物76，60mg，0.08mmol，1.00當量)於dmf(6ml)中的攪拌混合物中分批添加hatu(45mg，0.12mmol，1.5當量)、1-(2-氨基乙基)吡咯-2,5-二酮鹽酸鹽(化合物77，17mg，0.10mmol，1.20當量)和diea(31mg，0.24mmol，3.0當量)。將所得混合物在室溫下在氮氣氣氛下攪拌4h。lcms指示反應完成。將殘餘物通過製備型hplc(柱：xbridge prep phenyl obd柱，19x150mm 5um 13nm；流動相a：水(0.05％tfa)，流動相b：acn；流速：25ml/min；梯度：10min內25b至43b；220nm；rt1：11.97min)純化。將收集的級分凍幹，得到4-[[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)氨磺醯基]-n-[2-(2,5-二氧代吡咯-1-基)乙基]-3-硝基苯甲醯胺(化合物(ii)，27mg，36％)，為白色固體。lcms(es,m/z)：879,881[m+h]。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ11.00(s,1h),9.01(t,j＝6.0hz,1h),8.82(s,1h),8.20(s,1h),8.11(s,2h),7.71-7.67(m,2h),7.52(s,1h),7.44(d,j＝3.0hz,1h),7.21-7.12(m,2h),7.02(s,2h),6.84(t,j＝6.0hz,1h),5.14-5.08(m,1h),4.48-4.28(m,4h),3.62-3.50(m,6h),3.40-3.28(m,2h),2.95-2.85(m,4h),2.80-2.73(m,2h),2.65-2.60(s,1h),2.41-2.27(m,1h),2.05-1.95(m,1h)。
[0836][0837]
方案12：新降解劑p1-ggfg接頭複合物(化合物(ij))的合成
[0838]
步驟1.化合物79的合成
[0839]
在室溫下在氮氣氣氛下向(2-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]-乙醯胺基)乙酸(化合物78，10.00g，28.22mmol，1.00當量)和pb(oac)4(15.02g，33.86mmol，1.20當量)於thf(300ml)和甲苯(100ml)中的攪拌混合物中滴加吡啶(2.59g，32.74mmol，1.16當量)。將所得混合物在80℃下在氮氣氣氛下攪拌過夜。lcms指示反應完成。使混合物冷卻至室溫。將所得混合物過濾，並將濾餅用乙酸乙酯(20ml)洗滌。將濾液減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙酸乙酯(20ml)中，用水、鹽水洗滌，經無水na2so4乾燥。過濾後，將濾液減壓濃縮。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用pe/etoac(1:4)洗脫，得到(2-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙醯胺基)乙酸甲酯(化合物79，6.5g,56％)，為白色固體。lcms(esi,ms)：391[m+na]
+
。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ7.80(d,j＝7.5hz,2h),7.62(d,j＝7.5hz,2h),7.45(t,j＝7.5hz,2h),7.36(d,j＝7.5hz,2h),7.18(br s,1h),5.48(br s,1h),5.28(d,j＝7.2hz,2h),4.48(d,j＝6.6hz,2h),4.26(t,j＝6.6hz,1h),3.93(d,5.4hz,2h),2.08(s,3h)。
[0840]
步驟2.化合物81的合成
[0841]
在0℃下在氮氣氣氛下向(2-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]-氨基]乙醯胺基)乙酸甲酯即化合物79(2.00g，5.43mmol，1.00當量)和2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(化合物3，3.20g，15.85mmol，2.92當量)於dcm(40ml)中的攪拌混合物中添加ppts(400mg，1.59mmol，0.29當量)。將所得混合物在45℃下在氮氣氣氛下攪拌過夜。通過lcms可檢測到40％的期望產物。使混合物冷卻至室溫。將反應用水/冰淬滅。將所得混合物用etoet(3x20ml)萃取。將合併的有機層用鹽水(30ml)洗滌，經無水na2so4乾燥。過濾後，將濾液減壓濃縮。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用pe/etoac(1:9)洗脫，得到n-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]甲基]氨基甲醯基)甲基]氨基甲酸9h-芴-9-基甲酯(化合物81，1.7g,55％)，為白色固體。lcms(esi,ms)：510,512[m+h]
+
。1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ8.58(t,j＝5.1hz,1h),8.22(dd,j＝12,2.4hz,1h),7.89(d,j＝7.5hz,1h),7.71-7.54(m,4h),7.43-7.29(m,4h),4.56(d,j＝6.9hz,2h),4.30-4.16(m,3h),3.70-3.61(m,4h),3.04(t,j＝6.3hz,2h)。
[0842]
步驟3.化合物82的合成
[0843]
在0℃下在氮氣氣氛下向n-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]甲基]氨基甲醯基)甲基]氨基甲酸9h-芴-9-基甲酯(化合物81，1.60g，3.14mmol，1.00當量)於dmf(5.0ml)中的攪拌混合物中分批添加哌啶(1.0ml)。將所得混合物在室溫下在氮氣氣氛下攪拌1h。lcms指示反應完成。將反應混合物通過反向快速色譜法用以下條件純化：柱，c18矽膠；流動相，acn的水溶液(0.05％tfa)，40min內0％至50％梯度；檢測器，uv 254nm。這產生2-氨基-n-[[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]甲基]乙醯胺(化合物82，750mg，76％)，為黃色油狀物。lcms(esi,ms)288[m+h]
+
,329[m+h+acn]
+
[0844]
步驟4.化合物83的合成
[0845]
在0℃下向2-氨基-n-[[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]-甲基]乙醯胺(化合物82，750mg，2.61mmol，1.00當量)和boc2o(580mg，2.66mmol，1.02當量)於dmf(10.00ml)中的攪拌混合物中滴加nahco3(477mg，5.68mmol，2.18當量)的h2o溶液(10.00ml)。將所得混合物在室溫下攪拌3h。lcms指示反應完成。將反應通過添加水(20ml)淬滅。將所得混合物用etoet(3x20ml)萃取。將合併的有機層用鹽水(20ml)洗滌，經無水na2so4乾燥。過濾後，將濾液減壓濃縮。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用pe/etoac(1:2)洗脫，得到n-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]甲基]氨基甲醯基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(化合物83，650mg,58％)，為黃色油狀物。lcms(esi,ms),388[m+h]
+
,332[m+h-56]
+
。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.21(d,j＝2.4hz,1h),8.04(d,j＝8.4hz,2h),7.46(d,j＝8.4hz,1h),7.05(br s,1h),5.25(br s,1h),4.73(d,j＝7.2hz,2h),3.81-3.73(m,4h),3.34-3.32(m,2h),3.08(t,j＝6.8hz,2h),1.42(s,9h)。
[0846]
步驟5.化合物84的合成
[0847]
在室溫下向n-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]甲基]-氨基甲醯基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(化合物83，650mg，1.68mmol，1.00當量)和fe(260mg，4.66mmol，2.78當量)於etoh(9.00ml)中的攪拌混合物中滴加nh4cl(910mg，17.01mmol，10.1當量)的h2o溶液(3.00ml)。將所得混合物在90℃下攪拌4h。lcms指示反應完成。使混合物冷卻至室溫。將所得混合物真空濃縮。將所得混合物用etoac(3x20ml)萃取。將合併的有機層用鹽水(20ml)洗滌，經無水na2so4乾燥。過濾後，將濾液減壓濃縮。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用pe/etoac(1:1)洗脫，得到n-[([[2-(4-氨基-2-氯苯基)乙氧基]甲基]-氨基甲醯基)甲基]氨基
甲酸叔丁酯(化合物84，500mg，83％)，為黃色固體。lcms(esi,ms)：358[m+h]
+
、380[m+na]
+
。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ7.02-6.96(m,2h),6.68(d,j＝2.4hz,1h),6.52-6.49(m,1h),5.29(br s,1h),4.74(d,j＝6.9hz,2h),3.80-3.78(m,2h),3.69-3.63(m,2h),2.88(t,j＝7.2hz,2h),1.45(s,9h)。
[0848]
步驟6.化合物86的合成
[0849]
在0℃下向3-[5-(氨基甲基)-1-氧代-3h-異吲哚-2-基]哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽(化合物85，398mg，1.28mmol，0.92當量)和cdi(450mg，2.78mmol，1.99當量)於dmf(5.00ml)中的攪拌混合物中添加tea(300mg，2.96mmol，2.12當量)。將所得混合物在室溫下攪拌2h。向上述混合物中分批添加n-[([[2-(4-氨基-2-氯苯基)乙氧基]甲基]氨基甲醯基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(化合物84，500mg，1.40mmol，1.00當量)和dmap(550mg，4.50mmol，3.22當量)。將所得混合物在60℃下再攪拌過夜。lcms指示反應完成。使混合物冷卻至室溫。將反應混合物通過反向快速色譜法用以下條件純化：柱，c18矽膠；流動相，acn的水溶液(0.1％fa)，30min內0％至50％梯度；檢測器，uv 254nm。這產生n-([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]-氨基甲醯基)氨基]苯基]乙氧基)甲基]氨基甲醯基]甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物86，550mg，60％)，為淺棕色固體。lcms(esi,ms)：657[m+h]
+
、601[m+h-56]
+
、557[m+h-100]
+
。
[0850]
步驟7.化合物87的合成
[0851]
在0℃下向n-([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙氧基)甲基]氨基甲醯基]甲基)-氨基甲酸叔丁酯(化合物86，530mg，0.80mmol，1.00當量)於dcm(5.00ml)中的攪拌混合物中添加tfa(1.00ml)。將所得混合物在0℃下攪拌30min。lcms指示反應完成。將所得混合物減壓濃縮。這產生2-氨基-n-[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙氧基)甲基]乙醯胺三氟乙酸(化合物87，(510mg，純度：64％，產率：60％)，為灰白色固體。lcms(esi,ms)：557[m+h-tfa]
+
[0852]
步驟8.化合物89的合成
[0853]
在0℃下向(2s)-2-[2-(2-氨基乙醯胺基)乙醯胺基]-3-苯基丙酸(化合物88，2.00g，7.16mmol，1.00當量)和nahco3(1.80g，21.41mmol，3.00當量)於h2o(40.00ml)中的攪拌混合物中滴加boc2o(1.86g，8.52mmol，1.20當量)的dmf溶液(40.00ml)。將所得混合物在室溫下攪拌過夜。lcms指示反應完成。將反應在室溫下用水淬滅。將所得混合物用etoet(3x50ml)萃取。將合併的有機層用鹽水(50ml)洗滌，經無水na2so4乾燥。過濾後，將濾液減壓濃縮。將殘餘物通過反向快速色譜法用以下條件純化：柱，cl8矽膠；流動相，acn的水溶液(0.05％tfa)，30min內5％至60％梯度；檢測器，uv 220nm。這產生(2s)-2-(2-[2-[(叔丁氧基羰基)氨基]乙醯胺基]乙醯胺基)-3-苯基丙酸(化合物89，1.8g，60％)，為白色半固體。lcms(esi,ms)：380[m+h]
+
、324[m+h-56]
+
。1hnmr:(300mhz,dmso-d6)δ8.17(d,j＝8.1hz,1h),7.93(t,j＝5.7hz,1h),7.31-7.20(m,5h),7.00(t,j＝6.0hz,1h),4.46-4.39(m,1h),3.78-3.67(m,2h),3.56(d,j＝5.7hz,2h),3.09-3.02(m,1h),2.92-2.73(m,1h),1.39(s,9h)。
[0854]
步驟9.化合物90
[0855]
在0℃下向(2s)-2-(2-[2-[(叔丁氧基羰基)氨基]乙醯胺基]-乙醯胺基)-3-苯基
基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙氧基)甲基]氨基甲醯基]甲基)氨基甲醯基]-2-苯基乙基]氨基甲醯基]甲基)氨基甲醯基]甲基]-6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)己醯胺(化合物(ik)，22.8mg，14％)，為灰白色固體。lcms(esi,ms)：1011[m+h]
+
。1hnmr:(400mhz,dmso-d6):δ10.95(s,1h),8.79(s,1h),8.51(t,j＝8,4hz,1h),8.29(t,j＝8.0hz,1h),8.12-8.01(m,3h),7.70-7.66(m,2h),7.44(s,1h),7.42(d,j＝8.0hz,1h),7.23-7.16(m,7h),6.99(s,2h),6.82(t,j＝8.0hz,1h),5.13-5.09(m,1h),4.55-4.28(m,7h),3.72-3.60(m,6h),3.55-3.51(m,2h),3.36-3.34(m,2h),3.05-3.00(m,1h),2.94-2.72(m,4h),2.62-2.54(m,1h),2.40-2.32(m,1h),2.12-2.05(m,2h),2.00-1.91(m,1h),1.50-1.38(m,4h),1.19-1.10(m,2h)
[0860]
[0861][0862]
方案13：新降解劑p14-aaa接頭複合物(化合物(ik))的合成
[0863]
步驟1.化合物94的合成
[0864]
在氮氣氣氛下向(2-氯-4-硝基苯基)乙酸(化合物93，24.00g，111.32mmol，1.00當量)於thf(240.00ml)中的攪拌溶液中滴加bh
3-me2s(28.00ml，295.23mmol，2.65當量)。將所得混合物在70℃下在氮氣氣氛下攪拌2小時。tlc(pe:etoac＝3:1)指示反應完成。冷卻至室溫後，將所得混合物真空濃縮。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用pe/etoac(3:1)洗脫，得到2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(化合物94，18.00g，80％)，為淡黃色固體。1h nmr(300mhz,cdcl3)δ8.27(s,1h),8.10-8.07(m,1h),7.52(d,j＝3hz,1h),3.96(t,j＝6hz,2h),3.13(t,j＝6hz,2h)。
[0865]
步驟2.化合物95的合成
[0866]
在室溫下在n2下向2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(化合物94，5.00g，24.80mmol，1.00當量)於dcm(100.00ml)中的攪拌溶液中分批添加nbs(6.62g，1.50當量)和pph3(9.76g，37.21mmol，1.50當量)。將所得混合物在室溫下在n2下攪拌過夜。tlc(pe:etoac＝10:1)指示反應完成。將反應真空濃縮至幹。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用pe/etoac(4:1)洗脫，得到1-(2-溴乙基)-2-氯-4-硝基苯(化合物95，5.10g，72％)，為紅色油狀物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.28(d,j＝2.4hz,1h),8.18(dd,j＝8.4,2.4hz,1h),7.73(d,j＝8.4hz,1h),3.79 4(t,j＝6.8hz,2h),3.38(t,j＝6.8hz,2h)。
[0867]
步驟3.化合物96的合成
[0868]
在室溫下在氮氣氣氛下向1-(2-溴乙基)-2-氯-4-硝基苯(化合物95，5.00g，18.90mmol，1.00當量)於dmf(50.00ml)中的溶液中添加硫代乙酸鉀(2.16g，18.90mmol，1.00當量)。將所得混合物在室溫下攪拌2小時。tlc(pe:etoac＝10:1)指示反應完成。將反應用水(600.00ml)稀釋，並用etoac(2000mlx3)萃取。將合併的有機層用水(200.00ml)、鹽水(200.00ml)洗滌，經無水na2so4乾燥並真空濃縮至幹，得到1-[[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙
基]硫烷基]乙烯酮(化合物96，4.50g，85％)，為紅色油狀物。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.24(d,j＝2.4hz,1h),8.07(dd,j＝8.4,2.4hz,1h),7.45(d,j＝8.4hz,1h),3.20-3.05(m,4h),2.34(s,3h)。
[0869]
步驟4.化合物97的合成
[0870]
在0℃下在n2下向1-[[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]乙烯酮(化合物96，2.00g，7.70mmol，1.00當量)於meoh(300.00ml)中的攪拌溶液中添加meona(6.93ml，37.33mmol，5.00當量，30％的meoh溶液)。將所得混合物在0℃下在n2下攪拌1h。tlc(pe:etoac＝10:1)指示反應完成。將反應用acoh淬滅至ph值為3-4。將所得混合物真空濃縮至幹。將殘餘物用dcm(50.00ml)稀釋並過濾。將濾液用製備型tlc(pe:etoac＝10:1)純化，得到2-(2-氯-4-硝基苯基)乙硫醇(化合物97，1.35g，72％)，為淡黃色油狀物。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.26(d,j＝2.4hz,1h),8.09(dd,j＝8.4,2.4hz,1h),7.45(d,j＝8.4hz,1h),3.14(t,j＝8.0hz,2h),2.85(dt,j＝8.0,7.2hz,2h),1.43(t,j＝7.2hz,1h)。
[0871]
步驟5.化合物99合成
[0872]
在室溫下在空氣氣氛下向(2s)-2-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙酸(化合物98，20.00g，64.24mmol，1.00當量)於dmf(200.00ml)中的攪拌溶液中添加tstu(25.18g，83.52mmol，1.30當量)和diea(16.60g，128.48mmol，2.00當量)。將所得混合物在室溫下攪拌1h。lcms指示反應完成。將反應用水(200.00ml)稀釋，用etoac(100.00mlx3)萃取。將合併的有機層用水(100.00ml)、鹽水(100.00ml)洗滌，經無水na2so4乾燥並在真空中濃縮至幹。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用(pe:etoac＝1:2)洗脫，得到(2s)-2-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(化合物99，25.00g，83％)，為白色固體。lcms(es,m/z)：431[m+na]
+
。
[0873]
步驟6.化合物100的合成
[0874]
向d-丙氨酸(1.09g，0.012mmol，1.00當量)和nahco3(3.09g，0.04mmol，3.00當量)於水(50.00ml)中的溶液中添加(2s)-2-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(化合物99，5.00g，12.24mmol，1.00當量)於dmf(50.00ml)中的溶液。將所得混合物在室溫下攪拌2h。lcms指示反應完成。將反應用2n hcl調節至ph值為2-3。將所得混合物用etoac(100.00mlx3)萃取，並將合併的有機層用鹽水(100.00mlx3)洗滌，經無水na2so4乾燥並真空濃縮至幹，得到(2r)-2-[(2s)-2-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]-氨基]丙醯胺基]丙酸(化合物100，4.00g，71％)，為白色固體。lcms(es,m/z：383[m+h]
+
[0875]
步驟7.化合物101的合成
[0876]
向甘氨酸(3.68g，48.97mmol，1.00當量)和nahco3(12.34g，146.89mmol，3.00當量)於水(200.00ml)中的溶液中添加(2s)-2-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(化合物99，20.00g，48.97mmol，1.00當量)於dmf(200.00ml)中的溶液。將反應在室溫下攪拌2h。lcms指示反應完成。將反應用2n hcl調節至ph值為2-3。將所得混合物用etoac(500.00mlx3)萃取，並將合併的有機層用鹽水(500.00ml)洗滌，經無水na2so4乾燥並在真空中濃縮至幹，得到[(2s)-2-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙醯胺基]乙酸(化合物101，15.00g,71％)，為白色固體。lcms(es,m/z)：369[m+h]
+
[0877]
步驟8.化合物102的合成
[0878]
將[(2s)-2-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙醯胺基]-乙酸(化合物101，
5.00g，13.57mmol，1.00當量)、pb(oac)4(7.22g，16.28mmol，1.20當量)和吡啶(1.29g，16.31mmol，1.20當量)於thf(300.00ml)/甲苯(100.00ml)中的溶液在n2下在80℃下攪拌16h。lcms指示反應完成。冷卻至室溫後，將反應過濾。將濾餅用thf(100.00ml)洗滌。將合併的有機層真空濃縮至幹。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用(pe:etoac＝l:2)洗脫，得到[(2s)-2-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙醯胺基]乙酸甲酯(化合物102，2.50g，45％)，為白色固體。lcms(es,m/z)：405[m+na]
+
。1h nmr(400mhz,氯仿-d)δ7.77(t,j＝7.6hz,2h),7.58(d,j＝7.6hz,2h),7.43
–
7.37(m,2h),7.36
–
7.29(m,2h),7.10(s,1h),5.24(d,j＝7.6hz,2h),4.51
–
4.35(m,2h),4.23-4.09(m,2h),2.04(s,3h),1.39(d,j＝6.8hz,3h)。
[0879]
步驟9.化合物103的合成
[0880]
在n2下在室溫下向[(2s)-2-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]-丙醯胺基]乙酸甲酯(化合物102，2.25g，5.88mmol，1.00當量)和2-(2-氯-4-硝基苯基)乙硫醇(化合物97，1.28g，5.88mmol，1.00當量)於dcm(120ml)中的攪拌溶液中添加tfa(0.27ml，2.37mmol，0.62當量)。將所得混合物在室溫下攪拌16小時。lcms指示反應完成。將反應在真空中濃縮至幹。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用(pe:etoac＝1:4)洗脫，得到n-[(1s)-1-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)氨基甲醯基]乙基]氨基甲酸9h-芴-9-基甲酯(化合物103，3.10g，90％)，為黃色固體。lcms(es,m/z)：540[m+h]
+
[0881]
步驟10.化合物104的合成
[0882]
在0℃下在n2下向n-[(1s)-1-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)氨基甲醯基]乙基]氨基甲酸9h-芴-9-基甲酯(化合物103，3.10g，5.74mmol，1.00當量)於dmf(155.00ml)中的溶液中添加哌啶(31.00ml)。將所得混合物在0℃下在n2下攪拌0.5h。lcms指示反應完成。將反應用水(600.00ml)稀釋。將所得混合物用etoac(200.00mlx3)萃取。將合併的有機層用鹽水(200.00ml)洗滌，經無水na2so4乾燥並真空濃縮至幹，得到3.00g粗產物。將粗產物通過矽膠柱色譜法再純化，用(dcm:meoh＝3:1)洗脫，得到(2s)-2-氨基-n-([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)丙烯醯胺，104(1.50g，78％)，為黃色油狀物。lcms(es,m/z)：318[m+h]
+
。
[0883]
步驟11.化合物105的合成
[0884]
在室溫下向(2s)-2-氨基-n-([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)-丙烯醯胺(化合物104，1.50g，4.72mmol，1.00當量)於dmf(75.00ml)中的溶液中添加nahco3(0.59g，7.08mmol，1.50當量)於h2o中的溶液(10.00ml)和boc2o(1.03g，4.72mmol，1.00當量)。將反應在室溫下攪拌1h。lcms指示反應完成。將反應用水(500.00ml)稀釋，用etoac(200.00mlx3)萃取。將合併的有機層用鹽水(200.00mlx3)洗滌，經無水na2so4乾燥並真空濃縮至幹，得到n-[(1s)-1-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)氨基甲醯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物105，(1.82g，83)，為紅色油狀物。lcms(es,m/z)：418[m+h]
+
、318[m+h-100]
+
[0885]
步驟12.化合物106的合成
[0886]
將n-[(1s)-1-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]-甲基)氨基甲醯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物105，1.82g，4.36mmol，1.00當量)、鐵粉(2.43g，0.04mmol，10.00當量)和nh4cl(2.33g，0.04mmol，10.00當量)於etoh(100.00ml)/h2o(50.00ml)中的漿液在70
℃下攪拌2h。lcms指示反應完成。將反應過濾。將濾液真空濃縮至幹。將殘餘物用dcm(50.00ml)溶解並過濾。將濾液濃縮至幹並將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用(dcm:meoh＝13:1)洗脫，得到n-[(1s)-1-[([[2-(4-氨基-2-氯苯基)乙基]硫烷基]甲基)氨基甲醯基]乙基]-氨基甲酸叔丁酯(化合物106，1.20g，68％)，為黃色油狀物。lcms(es,m/z)：388[m+h]
+
[0887]
步驟13.化合物107
[0888]
在0℃下向3-[5-(氨基甲基)-1-氧代-3h-異吲哚-2-基]哌啶-2,6-二酮(int 1，352mg，1.29mmol，1.00當量)於dmf(5.00ml)中的攪拌溶液中添加cdi(209.00mg，1.29mmol，1當量)和tea(260mg，2.58mmol，2當量)。將所得混合物在0℃下攪拌2h。然後添加n-[(1s)-1-[([[2-(4-氨基-2-氯苯基)乙基]硫烷基]-甲基)-氨基甲醯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物106，500.00mg，1.29mmol，1.00當量)和dmap(472mg，3.87mmol，3.00當量)。將所得混合物在60℃下攪拌24h。lcms指示反應完成。冷卻至室溫後，將反應混合物通過反向快速色譜法用以下條件純化：柱，c18矽膠；流動相，acn的水溶液(0.1％fa)，30min內0％至60％梯度；檢測器，uv 254nm，得到n-[(1s)-1-([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]氨基甲醯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物107，450.00mg,48％)，為黃色固體。lcms(es,m/z)：687[m+h]
+
[0889]
步驟14.化合物108
[0890]
在室溫下向n-[(1s)-1-([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙基)硫烷基]-甲基]氨基甲醯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物107，440.00mg，0.64mmol，1.00當量)於dcm(22.00ml)中的攪拌溶液中添加tfa(2.20ml)。將所得混合物在室溫下攪拌0.5h。lcms指示反應完成。將反應真空濃縮至幹，得到(2s)-2-氨基-n-[[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙基)硫烷基]-甲基]丙醯胺三氟乙酸(化合物108，400.00mg，粗品)，為紅色油狀物。殘餘物不經進一步純化即用於下一步。lcms(es,m/z)：587[m+h-tfa]
+
[0891]
步驟15.化合物109的合成
[0892]
將(2r)-2-[(2s)-2-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]-氨基]丙醯胺基]丙酸(218mg，0.57mmol，1.00當量)、hobt(77mg，0.57mmol，1.00當量)和hatu(216mg，0.01mmol，1.00當量)的溶液在室溫下在空氣中攪拌1小時，然後在室溫下添加(2s)-2-氨基-n-[[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]丙醯胺三氟乙酸(化合物108，400mg，0.57mmol，1.00當量)和diea(663mg，5.14mmol，9.00當量)。將反應在室溫下攪拌2h。lcms指示反應完成。將反應混合物通過反向快速色譜法用以下條件純化：柱，c18矽膠；流動相，acn的水溶液(0.05％tfa)，30min內0％至50％梯度；檢測器，uv 254nm，得到n-[(1s)-1-[[(1r)-1-[[(1s)-1-([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]氨基甲醯基)乙基]氨基甲醯基]乙基]氨基甲醯基]乙基]氨基甲酸9h-芴-9-基甲酯(化合物109，480.00mg，75％)，為綠色固體。lcms(es,m/z)：951[m+h]
+
[0893]
步驟16.化合物110
[0894]
在0℃下向n-[(1s)-1-[[(1r)-1-[[(1s)-1-([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]-乙基)硫烷基]甲基]
氨基甲醯基)乙基]氨基甲醯基]乙基]氨基甲醯基]乙基]氨基甲酸9h-芴-9-基甲酯(化合物109，110.00mg)於dmf(5.00ml)中的溶液中添加哌啶(1.00ml)。將所得混合物在0℃下攪拌0.5h。lcms指示反應完成。將反應混合物通過反向快速色譜法用以下條件純化：柱，c18矽膠；流動相，acn的水溶液(0.05％tfa)，40min內0％至60％梯度；檢測器，uv 254nm，得到(2s)-2-[(2r)-2-[(2s)-2-氨基丙醯胺基]丙醯胺基]-n-[[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]-苯基]乙基)硫烷基]甲基]丙烯醯胺(化合物110，80.00mg，60％)，為紅色固體。lcms(es,m/z)：729[m+h]
+
。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.00(br s,1h),8.53br(s,1h),8.24(d,j＝7.6hz,1h),8.10(br s,1h),7.69
–
7.62(m,2h),7.49(s,1h),7.42(d,j＝8.0hz,1h),7.26-7.13(m,3h),7.00(br s,1h),5.11-5.06(m,1h),4.45
–
4.36(m,3h),4.35
–
4.13(m,6h),2.90-2.83(m,3h),2.73-2.71(m,2h),2.05-1.90(m,1h),1.70-1.53(m,4h),1.22-1.17(m,6h),1.14
–
1.05(m,3h)。
[0895]
步驟17.化合物(ik)的合成
[0896]
在室溫下在空氣中向(2s)-2-[(2r)-2-[(2s)-2-氨基丙醯胺基]丙醯胺基]-n-[[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]丙烯醯胺(化合物110，63.00mg，0.09mmol，1.00當量)和6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)己酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(26mg，0.09mmol，1.00當量)於dmf(1.50ml，19.38mmol，224.36當量)中的溶液中添加diea(22.33mg，0.17mmol，2.00當量)。將反應在室溫下攪拌1h。將反應混合物通過反向快速色譜法用以下條件純化：柱：kinetex evo c18柱，30x150，5um；流動相a：xater(0.05％tfa)，流動相b：acn；流速：60ml/min；梯度：7min內23b至43b，254nm；rt1：6.58)。將收集的級分凍幹，得到n-[(1s)-1-[[(1r)-1-[[(1s)-1-([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]氨基甲醯基)乙基]氨基甲醯基]乙基]氨基甲醯基]乙基]-6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)己醯胺(化合物(ik)，16.10mg，20％)，為白色固體。lcms(es,m/z)：922,924[m+h]
+
。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.00(s,1h),8.80(s,1h),8.44-8.41(m,1h),8.15(d,j＝7.2hz,1h),8.03-8.00(m,2h),7.7-7.65(m,2h),7.51(s,1h),7.44(d,j＝8.0hz,1h),7.22-7.14(m,2h),6.98(s,2h),6.83-6.81(m,1h),5.13-5.08(m,1h),4.48-4.40(m,3h),4.29-4.17(m,6h),2.96-2.85(m,3h),2.75-2.70(m,2h),2.67-2.57(m,1h),2.40-2.33(m,1h),2.09-1.98(m,3h),1.52-1.45(m,5h),1.26-1.16(m,12h)。
[0897][0898][0899]
方案14：新降解劑p14-ggfg接頭複合物(化合物(il))的合成
[0900]
步驟1.化合物112的合成
[0901]
在室溫下在氮氣氣氛下向(2-氯-4-硝基苯基)乙酸(化合物111，5.00g，23.19mmol，1.00當量)於thf(50ml)中的攪拌溶液中分批添加bh
3-me2s(5.50ml，57.99mmol，
s,1h),5.48(br s,1h),5.28(d,j＝7.2hz,2h),4.48(d,j＝6.6hz,2h),4.26(t,j＝6.6hz,1h),3.93(d,5.4hz,2h),2.08(s,3h)。lcms(esi,ms)：391[m+na]
+
[0910]
步驟6.化合物118的合成
[0911]
在室溫下向(2-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙醯胺基)乙酸甲酯(化合物117，3.00g，8.14mmol，1.00當量)和2-(2-氯-4-硝基苯基)乙硫醇(化合物115，1.77g，8.13mmol，1.00當量))於dcm(300ml)中的溶液中添加tfa(0.56g，4.91mmol，0.60當量)。將所得混合物在60℃下攪拌16h。lcms指示反應完成。將反應真空濃縮至幹。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用(pe:etoac＝2:3)洗脫，得到n-[[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)氨基甲醯基]-甲基]氨基甲酸9h-芴-9-基甲酯(化合物118，3.7g，67％)，為灰白色固體。lcms(es,m/z)：526,528[m+h]
+
[0912]
步驟7.化合物119的合成
[0913]
在0℃下向n-[[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)氨基甲醯基]甲基]氨基甲酸9h-芴-9-基甲酯(化合物118，3.70g，7.03mmol，1.00當量)於dmf(40ml)中的溶液中添加哌啶(8ml)。將所得混合物在0℃下攪拌0.5h。lcms指示反應完成。將所得混合物用水(400ml)稀釋，用ea(200mlx 3)萃取。將合併的有機層用水(200ml)、鹽水(200ml)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥並真空濃縮至幹。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用(dcm:meoh＝10:1)洗脫，得到2-氨基-n-([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]-甲基)乙醯胺(化合物119，1.01g，40％)，為黃色油狀物。lcms(es,m/z)：304,306[m+h]
+
[0914]
步驟8.化合物120的合成
[0915]
在室溫下向2-氨基-n-([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)-乙醯胺(化合物119，1.00g，3.29mmol，1.00當量)於dmf(50ml)中的溶液中添加nahco3(0.33g，3.92mmol，1.20當量)於水(10ml)中的溶液、boc2o(0.72g，3.30mmol，1.00當量)。將所得混合物在室溫下攪拌1h。lcms指示反應完成。將反應用水(500ml)稀釋，用etoac(200ml x3)萃取。將合併的有機層用鹽水(200ml)洗滌，經無水na2so4乾燥並真空濃縮至幹。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用(pe:etoac＝1:3)洗脫，得到n-[[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)氨基甲醯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(化合物120，810mg，54％)，為白色固體。lcms(es,m/z)：404,406[m+h]
+
、304,306[m+h-100]
+
[0916]
步驟9.化合物121的合成
[0917]
在室溫下向n-[[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]-甲基)氨基甲醯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(化合物120，800.00mg，1.98mmol，1.00當量)於etoh(40)中的溶液中添加鐵粉(1106mg，19.81mmol，10.00當量)和nh4cl(1059mg，19.81mmol，10.00當量)於水(10ml)中的溶液。將所得混合物在70℃下攪拌2h。lcms指示反應完成。將反應過濾。將濾液真空濃縮至幹。將殘餘物用dcm(50.00ml)溶解並過濾。將濾液通過矽膠柱色譜法純化，用(dcm:meoh＝13:1)洗脫，得到n-[[([[2-(4-氨基-2-氯苯基)乙基]硫烷基]甲基)-氨基甲醯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(化合物121，610mg，74％)，為黃色油狀物。lcms(es,m/z)：374,376[m+h]
+
、374,376[m+h-100]
+
[0918]
步驟10.化合物122的合成
[0919]
在0℃下在空氣中向3-[5-(氨基甲基)-1-氧代-3h-異吲哚-2-基]哌啶-2,6-二酮(int 1，219mg，0.80mmol，1.00當量)於dmf(10ml)中的溶液中添加cdi(130mg，0.80mmol，
1.00當量)和tea(81mg，0.80mmol，1.00當量)。將所得混合物在室溫下攪拌2h。然後在室溫下在空氣中添加n-[[([[2-(4-氨基-2-氯苯基)乙基]硫烷基]-甲基)氨基甲醯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(化合物121，300mg，0.80mmol，1.00當量)和dmap(294mg，2.41mmol，3.00當量)。將所得混合物在60℃下攪拌48h。lcms指示反應完成。將所得混合物通過反向快速色譜法用以下條件純化：柱，c18矽膠；流動相，acn的水溶液(0.05％tfa)，30min內0％至60％梯度；檢測器，uv 254nm，得到n-[([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]-氨基甲醯基)氨基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]氨基甲醯基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(化合物122，270mg，49％)，為黃色固體。lcms(es,m/z)：673,675[m+h]
+
、573,575[m+h-100]
+
[0920]
步驟11.化合物-123的合成
[0921]
在0℃下在n2下向n-[([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]氨基甲醯基)甲基]-氨基甲酸叔丁酯(化合物122，250mg，0.37mmol)於1,4-二噁烷(12ml)中的溶液中添加hc1(4n的1,4-二噁烷溶液，6ml)。將反應在室溫下攪拌2h。lcms指示反應完成。將反應混合物真空濃縮至幹，得到2-氨基-n-[[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]乙醯胺(化合物123，260mg，粗品)，為棕色固體。lcms(es,m/z)：573,575[m+h-hc1]
+
[0922]
步驟12.化合物-125的合成
[0923]
將(2s)-2-[2-(2-氨基乙醯胺基)乙醯胺基]-3-苯基丙酸(化合物124，500mg，1.79mmol，1.00當量)和6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)己酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(552mg，1.79mmol，1.00當量)於dmso(5.00ml)中的溶液在室溫下在空氣中攪拌16h。lcms指示反應完成。將反應混合物通過反向快速色譜法用以下條件純化：柱，c18矽膠；流動相，acn的水溶液(0.1％fa)，30min內0％至60％梯度；檢測器，uv 220nm，得到(2s)-2-(2-[2-[6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)己醯胺基]乙醯胺基]乙醯胺基)-3-苯基丙酸(化合物125，760mg，83％)，為白色固體。lcms(es,m/z)：473[m+h]
+
[0924]
步驟13.化合物(ii)的合成
[0925]
在室溫下在空氣中向(2s)-2-(2-[2-[6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)己醯胺基]乙醯胺基]-乙醯胺基)-3-苯基丙酸(化合物125，175mg，0.37mmol，1.00當量)於dmf(5.00ml)中的溶液中添加hatu(141mg，0.37mmol，1.00當量)和hobt(50mg，0.37mmol，1.00當量)。將所得混合物在室溫下攪拌1h。然後添加2-氨基-n-[[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]-氨基甲醯基)氨基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]乙醯胺(化合物123，250mg，0.37mmol，1.00當量，85％)和diea(240mg，1.85mmol，5.00當量)。將所得混合物在室溫下攪拌1h。lcms指示反應完成。將反應混合物通過以下條件純化：柱:xselect csh prep c18 obd柱，19*250mm，5um；流動相a：水(0.05％fa)，流動相b：acn；流速：25ml/min；梯度：7min內30b至60b，254nm；rt1：6.67min，得到75mg粗產物。粗產物通過反向快速色譜法用以下條件再純化：柱：xbridge shield rp18 obd柱，19*250mm，10um；流動相a：水(0.1％fa)，流動相b：acn；流速：25ml/min；梯度：10min內25b至44b；254nm；rt1：10.52min。將收集的級分凍幹，得到化合物(il)(41.6mg，10％)，為白色固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.99(s,1h),8.79(s,1h),8.38(t,j＝6.0hz,1h),8.31(t,j＝6.0hz,
1h),8.12(d,j＝8.4hz,1h),8.06(t,j＝5.6hz,1h),8.01(t,j＝6.0hz,1h),7.70-7.66(m,2h),7.51(s,1h),7.44(d,j＝8.0hz,1h),7.25-7.21(m,5h),7.19-7.14(m,2h),6.99(s,2h),6.82(t,j＝6.0hz,1h),5.13-5.08(m,1h),4.47-4.40(m,4h),4.33-4.29(m,3h),3.76-3.70(m,3h),3.67-3.55(m,3h),3.38-3.36(m,2h),3.06-3.02(m,1h),2.91-2.86(m,3h),2.82-2.70(m,3h),2.62-2.57(m,1h),2.50-2.45(m,1h),2.10(m,2h),2.05-1.95(m,1h),1.50-1.44(m,4h),1.20-1.16(m,2h)。lcms(es,m/z)：1027,1029[m+h]
+
[0926]
[0927][0928]
方案15：新降解劑p14-aaa接頭複合物(化合物(im))的合成
[0929]
步驟1.化合物127的合成
[0930]
在氮氣氣氛下向(2-氯-4-硝基苯基)乙酸(化合物126，24.00g，111.32mmol，1.00當量)於thf(240.00ml)中的攪拌溶液中滴加bh
3-me2s(28.00ml，295.23mmol，2.65當量)。將所得混合物在70℃下在氮氣氣氛下攪拌2小時。tlc(pe:etoac＝3:1)指示反應完成。冷卻至室溫後，將所得混合物真空濃縮。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用pe/etoac(3:1)洗脫，得到2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(化合物127，18.00g，80％)，為淡黃色固體。1h nmr(300mhz,cd3c1)δ8.27(s,1h),8.10-8.07(m,1h),7.52(d,j＝3hz,1h),3.96(t,j＝6hz,2h),3.13(t,j＝6hz,2h)。
[0931]
步驟2.化合物128的合成
[0932]
在室溫下在n2下向2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(化合物127，5.00g，24.80mmol，1.00當量)於dcm(100.00ml)中的攪拌溶液中分批添加nbs(6.62g，1.50當量)和pph3(9.76g，37.21mmol，1.50當量)。將所得混合物在室溫下在n2下攪拌過夜。tlc(pe:etoac＝10:1)指示反應完成。將反應真空濃縮至幹。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用pe/etoac(4:1)洗脫，得到1-(2-溴乙基)-2-氯-4-硝基苯(化合物128，5.10g，72.31％)，為紅色油狀物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.28(d,j＝2.4hz,1h),8.18(dd,j＝8.4,2.4hz,1h),7.73(d,j＝8.4hz,1h),3.79(t,j＝7.2hz,2h),3.38(t,j＝7.2hz,2h)。
[0933]
步驟3.化合物129的合成
[0934]
在室溫下在氮氣氣氛下向1-(2-溴乙基)-2-氯-4-硝基苯(化合物128，5.00g，18.90mmol，1.00當量)於dmf(50.00ml)中的溶液中添加硫代乙酸鉀(2.16g，18.91mmol，1.00當量)。將所得混合物在室溫下攪拌2小時。tlc(pe:etoac＝10:1)指示反應完成。將反應用水(600.00ml)稀釋。將所得混合物用etoac(200.00ml*3)萃取。將合併的有機層用水(200.00ml)、鹽水(200.00ml*3)洗滌，經無水na2so4乾燥並真空濃縮至幹，得到1-[[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]乙烯酮(化合物129，4.50g，85％)，為紅色油狀物。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.24(d,j＝2.4hz,1h),8.07(dd,j＝8.4,2.4hz,1h),7.45(d,j＝8.4hz,1h),3.20-3.05(m,4h),2.34(s,3h)。
[0935]
步驟4.化合物130的合成
[0936]
在0℃下在n2下向1-[[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]乙烯酮(化合物129，2.00g，7.70mmol，1.00當量)於meoh(300.00ml)中的攪拌溶液中添加meona(6.93ml，37.33mmol，5.00當量，30％)。將所得混合物在0℃下在n2下攪拌1h。tlc(pe:etoac＝10:1)指示反應完成。將反應用acoh淬滅至ph值為3-4。將所得混合物真空濃縮至幹。將殘餘物用dcm(50.00ml)稀釋並過濾。將濾液用製備型tlc(pe:etoac＝10:1)純化，得到2-(2-氯-4-硝基苯基)乙硫醇(化合物130，1.35g，72％)，為淡黃色油狀物。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.26(d,j＝2.4hz,1h),8.09(dd,j＝8.4,2.4hz,1h),7.45(d,j＝8.4hz,1h),3.14(dd,j＝8.0,6.8hz,2h),2.85(dt,j＝8.0,7.2hz,2h),1.43(t,j＝8.0hz,1h)。
[0937]
步驟5.化合物132的合成
[0938]
在室溫下在空氣氣氛下向(2s)-2-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙酸(化合物131，20.00g，64.24mmol，1.00當量)於dmf(200.00ml)中的攪拌溶液中添加tstu(25.18g，83.52mmol，1.30當量)和diea(16.60g，128.48mmol，2.00當量)。將所得混合物在室溫下攪拌1h。lcms指示反應完成。將反應用水(200.00ml)稀釋，將所得混合物用etoac(100.00ml*3)萃取。將合併的有機層用水(100.00ml)、鹽水(100.00ml)洗滌，經無水na2so4乾燥並在真空中濃縮至幹。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用(pe:etoac＝1:2)洗脫，得到(2s)-2-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(化合物132，25.00g，83％)，為白色固體。lcms(es,m/z)：431[m+na]
+
[0939]
步驟6.化合物133的合成
[0940]
向甘氨酸(3.68g，48.97mmol，1.00當量)和nahco3(12.34g，146.89mmol，3.00當量)於水(200.00ml)中的溶液中添加(2s)-2-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(化合物132，20.00g，48.97mmol，1.00當量)於dmf(200.00ml)中的溶液。將反應在室溫下攪拌2h。lcms指示反應完成。將反應用2n hc1調節至ph值為2-3。將所得混合物用etoac(500.00ml*3)萃取，將合併的有機層用鹽水(500.00ml)洗滌，經無水na2so4乾燥並在真空中濃縮至幹，得到[(2s)-2-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙醯胺基]乙酸(化合物133，15.00g，71％)，為白色固體。lcms(es,m/z)：369[m+h]
+
[0941]
步驟7.化合物134的合成
[0942]
將[(2s)-2-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]-丙醯胺基]乙酸(化合物133，5.00g，13.57mmol，1.00當量)、pb(oac)4(7.22g，16.28mmol，1.20當量)和吡啶(1.29g，16.31mmol，1.20當量)於thf(300.00ml)/甲苯(100.00ml)中的溶液在n2下在80℃下攪拌16h。lcms指示反應完成。冷卻至室溫後，將反應過濾。將濾餅用thf(100.00ml)洗滌。將合併的有機層真空濃縮至幹。將殘餘物通過矽膠柱色譜法純化，用(pe:etoac＝1:2)洗脫，得到[(2s)-2-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]丙醯胺基]乙酸甲酯(化合物134，2.50g，45％)，為白色固體。lcms(es,m/z)：405[m+na]
+
。1h nmr(400mhz,氯仿-d)δ7.77-7.73(m,2h),7.58(d,j＝7.6hz,2h),7.43
–
7.37(m,2h),7.36
–
7.29(m,2h),7.10(s,1h),5.24(d,j＝7.6hz,2h),4.51
–
4.35(m,2h),4.22(t,j＝6.8hz,2h),2.04(s,3h),1.39(d,j＝6.8hz,3h)。
[0943]
步驟8.化合物135的合成
[0944]
在n2下在室溫下向[(2s)-2-[[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]-丙醯胺基]乙酸甲酯(化合物134，2.25g，5.88mmol，1.00當量)和2-(2-氯-4-硝基苯基)乙硫醇(化合物500，1.28g，5.88mmol，1.00當量)於dcm(120ml)中的攪拌溶液中添加tfa(0.27ml，2.376mmol，
0.62當量)。將所得混合物在40℃下攪拌16小時。lcms指示反應完成。將反應在真空中濃縮至幹，得到n-[(1s)-1-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)氨基甲醯基]乙基]氨基甲酸9h-芴-9-基甲酯(化合物135，3.10g，90％)，為黃色固體。lcms(es,m/z)：540,542[m+h]
+
。
[0945]
步驟9.化合物136的合成
[0946]
在0℃下在n2下向n-[(1s)-1-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)氨基甲醯基]乙基]氨基甲酸9h-芴-9-基甲酯(化合物135，3.10g，5.74mmol，1.00當量)於dmf(155.00ml)中的溶液中添加哌啶(31.00ml)。將所得混合物在0℃下在n2下攪拌0.5h。lcms指示反應完成。將反應用水(600.00ml)稀釋。將所得混合物用ea(200.00mlx3)萃取。將合併的有機層用鹽水(200.00ml)洗滌，經無水na2so4乾燥並真空濃縮至幹，得到3.00g粗產物。將粗產物通過矽膠柱色譜法再純化，用(dcm:meoh＝3:1)洗脫，得到(2s)-2-氨基-n-([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)丙烯醯胺(化合物136，1.50g,78％)，為黃色油狀物。lcms(es,m/z)：318,320[m+h]
+
。
[0947]
步驟10.化合物137的合成
[0948]
在室溫下在空氣中向(2s)-2-氨基-n-([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]-甲基)丙烯醯胺(化合物136，1.50g，4.72mmol，1.00當量)於dmf(75.00ml)中的溶液中添加nahco3(0.59g，7.08mmol，1.50當量)於h2o中的溶液(10.00ml)和boc2o(1.03g，4.72mmol，1.00當量)。將反應在室溫下攪拌1h。lcms指示反應完成。將反應用水(500.00ml)稀釋，用etoac(200.00mlx3)萃取。將合併的有機層用鹽水(200.00ml*3)洗滌，經無水na2so4乾燥並真空濃縮至幹，得到n-[(1s)-1-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)-氨基甲醯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物137，1.82g，83％)，為紅色油狀物。lcms(es,m/z)：418,420[m+h]
+
、318,320[m+h-100]
+
[0949]
步驟11.化合物138的合成
[0950]
將n-[(1s)-1-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]-硫烷基]甲基)氨基甲醯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物137，1.82g，4.36mmol，1.00當量)、鐵粉(2.43g，0.04mmol，10.00當量)和nh4cl(2.33g，0.04mmol，10.00當量)於etoh(100.00ml)/h2o(50.00ml)中的漿液在70℃下攪拌2h。lcms指示反應完成。將反應過濾。將濾液真空濃縮至幹。將殘餘物用dcm(50.00ml)溶解並過濾。將濾液通過矽膠柱色譜法純化，用(dcm:meoh＝13:1)洗脫，得到n-[(1s)-1-[([[2-(4-氨基-2-氯苯基)乙基]硫烷基]甲基)氨基甲醯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物138，1.20g，68％)，為黃色油狀物。lcms(es,m/z)：388,390[m+h]
+
、288,290[m+h-100]
+
[0951]
步驟12.化合物139的合成
[0952]
在0℃下向3-[5-(氨基甲基)-1-氧代-3h-異吲哚-2-基]哌啶-2,6-二酮(int 1，352mg，1.29mmol，1.00當量)於dmf(5.00ml)中的攪拌溶液中添加cdi(209.00mg，1.29mmol，1當量)和tea(260mg，2.58mmol，2當量)。將所得混合物在0℃下攪拌2h。然後添加n-[(1s)-1-[([[2-(4-氨基-2-氯苯基)乙基]硫烷基]-甲基)氨基甲醯基]-乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物138，500.00mg，1.29mmol，1.00當量)和dmap(472mg，3.87mmol，3.00當量)。將所得混合物在60℃下攪拌24h。lcms指示反應完成。冷卻至室溫後，將反應混合物通過反向快速色譜法用以下條件純化：柱，c18矽膠；流動相，acn的水溶液(0.1％fa)，30min內0％至60％梯度；
檢測器，uv 254nm，得到n-[(1s)-1-([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]氨基甲醯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物139，450.00mg，48％)，為黃色固體。lcms(es,m/z)：687,689[m+h]
+
、587,589[m+h-100]
+
[0953]
步驟13.化合物140的合成
[0954]
在室溫下向n-[(1s)-1-([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙基)硫烷基]-甲基]氨基甲醯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物139，440.00mg，0.64mmol，1.00當量)於dcm(22.00ml)中的攪拌溶液中添加tfa(2.20ml)。將所得混合物在室溫下攪拌0.5h。lcms指示反應完成。將反應真空濃縮至幹，得到(2s)-2-氨基-n-[[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]丙醯胺三氟乙酸(化合物140，400.00mg)，為紅色油狀物。lcms(es,m/z)：578,589[m+h-tfa]
+
[0955]
步驟14.化合物142的合成
[0956]
向l-纈氨酸(化合物141，0.50g，4.27mmol，1.00當量)於dmso(10ml)中的漿液中添加6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)己酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(1.32g，4.28mmol，1.00當量)和diea(1103mg，8.54mmol，2.00當量)。將所得混合物在室溫下攪拌4h。lcms指示反應完成。將反應混合物通過反向快速色譜法用以下條件純化：柱，c18矽膠；流動相，acn的水溶液(0.1％fa)，30min內0％至60％梯度；檢測器，uv 220nm，得到(2s)-2-[6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基丁酸(化合物142，1.2g，72％)，為棕色固體。lcms(es,m/z)：311[m+h]
+
[0957]
步驟15.化合物(im)的合成
[0958]
將(2s)-2-[6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基丁酸(化合物142，59mg，0.19mmol，1.00當量)、hobt(26mg，0.19mmol，1.00當量)和hatu(72mg，0.19mmol，1.00當量)於dmf(2ml)中的溶液在室溫下在空氣中攪拌1小時。然後在室溫下添加(2s)-2-氨基-n-[[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]丙醯胺三氟乙酸(化合物140，200mg，0.19mmol，1.00當量，66.70％)和diea(197mg，1.52mmol，8.00當量)。將反應混合物在室溫下攪拌2h。lcms指示反應完成。將所得混合物通過反向快速色譜法用以下條件純化：柱：ymc-actus triart c18，30mm x 150mm，5um；流動相a：水(0.1％fa)，流動相b：acn；流速：60ml/min；梯度：10min內28b至45b，254nm；rt1：9.67min。將收集的級分凍幹，得到n-[(1s)-1-[[(1s)-1-([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3h-異吲哚-5-基]甲基]氨基甲醯基)氨基]-苯基]乙基)硫烷基]甲基]氨基甲醯基)乙基]氨基甲醯基]-2-甲基丙基]-6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)己醯胺(化合物(im)，27.8mg，16％)，為白色固體。lcms(es,m/z)：879,881[m+h]
+
。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.99(s,1h),8.80(s,1h),8.47(t,j＝6.0hz,1h),8.03(d,j＝7.2hz,1h),7.78(d,j＝8.8hz,1h),7.70-7.66(m,2h),7.51(s,1h),7.44(d,j＝8.0hz,1h),7.21-7.14(m,2h),6.99(s,2h),6.82(t,j＝6.0hz,1h),5.13-5.10(m,1h),4.47-4.40(m,3h),4.33-4.29(m,3h),4.24(t,j＝7.2hz,1h),4.14(t,j＝6.8hz,1h),3.38-3.36(m,1h),2.97-2.90(m,1h),2.86(t,j＝7.6hz,2h),2.73-2.67(m,2h),2.62-2.57(m,1h),2.40-2.35(m,1h),2.20-2.05(m,2h),2.02-1.96(m,1h),1.95-1.88(m,1h),1.48-1.46(m,4h),
1.23-1.16(m,6h),0.83-0.78(m,6h)。
[0959]
實施例4：製備和表徵新降解劑綴合物的一般程序
[0960]
用30當量的三-(2-羧乙基)膦(tcep)處理抗體溶液，並在37℃下孵育1小時以還原鏈間二硫鍵。使用illustra nap柱(ge healthcare)將還原的抗體純化到50mm epps、5mm edta ph 7.0緩衝液中。
[0961]
綴合通過如下來實現：用添加作為在n,n-二甲基乙醯胺(dma)中的儲備溶液的12當量的接頭-新降解劑處理2-5mg/ml還原抗體在50mm epps、5mm edta ph 7.0中的溶液，使得dma的最終濃度為15％(v/v)。將所得反應混合物在4℃下放置過夜。將所得的新降解劑綴合物使用illustra nap柱(ge healthcare)純化到20mm琥珀酸鹽、8％蔗糖、0.01％tween-20ph 5.5中，並使用具有50kd截留分子量的amicon超離心濃縮器(millipore)濃縮。
[0962]
濃度和單體通過尺寸排阻色譜法確定，使用具有5μm顆粒的7.8x 300mm tskgel 3000swxl柱(tosoh bioscience)，用400mm高氯酸鈉、50mm磷酸鈉，5％(v/v)異丙醇流動相以0.5mg/ml運行30min等度洗脫。根據在214nm處檢測的抗體標準曲線定量新降解劑綴合物。
[0963]
使用具有2.5μm顆粒的4.6x35mm tskgel丁基-npr柱通過疏水相互作用色譜法確定藥物與抗體比(dar)。流動相a為1.5m硫酸銨、25mm磷酸鈉，ph 7.0。流動相b為25mm磷酸鈉ph 7.0、25％(v/v)異丙醇。將分析物在12min內用0％-100％b的線性梯度洗脫，流速為0.6ml/min，在214nm下進行檢測。
[0964]
使用具有2.5μm顆粒的4.6x250mm hisep柱(supelco)，通過混合模式色譜法確定游離接頭有效負荷。流動相a為100mm乙酸銨。流動相b為100％乙腈。將分析物在25min內用25％-40％b的梯度洗脫，然後在2min內以40％-100％b的梯度洗脫，流速為0.7ml/min。柱溫為35℃。使用在254nm處檢測的外部標準曲線定量游離接頭有效負荷。
[0965]
實施例5：用於新降解劑和新降解劑綴合物的體外抗增殖測定的一般程序1
[0966]
使用體外抗增殖測定來測量新降解劑綴合物抑制細胞生長的能力。將靶細胞以每孔1,500
–
5,000個細胞接種在100μl完全細胞生長培養基(對於大多數細胞系，rpmi 1640、10％胎牛血清和1％青黴素鏈黴素；對於bt-474，hybri-care培養基、1.5g/l碳酸氫鈉、10％胎牛血清和1％青黴素-鏈黴素；對於hl-60，rpmi 1640、20％胎牛血清和1％青黴素-鏈黴素)中。使用4倍連續稀釋將綴合物稀釋於完全細胞生長培養基中，並且每孔添加100μl。最終濃度通常在1x10-8
m至1.53x10-13
m或1x10-7
m至1.53x10-12
m的範圍內。將細胞在37℃溼潤的5％co2培養箱中孵育5天。通過比色wst-8測定(dojindo molecular technologies,inc.,rockville,md,us)確定剩餘細胞的活力。將wst-8添加到最終體積的10％，並將板在37℃溼潤的5％co2培養箱中孵育2-4小時。通過在多孔板讀數器中測量450nm處的吸光度(a450)來分析板。從所有值中減去僅具有培養基和wst-8的孔的背景a450吸光度。通過將每個經處理的樣品值除以具有未處理細胞的孔的平均值來計算活力百分比。對於每種處理，將活力百分比值相對於測試樣品濃度繪製在半對數圖中。ic50值是自動計算的。
[0967]
化合物(ia)和(ic)的曲妥珠單抗和帕妥珠單抗綴合物針對bt-474乳腺癌細胞系的抗增殖活性示於圖1-圖4中(每種新降解劑綴合物中的藥物:抗體比＝8)。針對bt-474細胞，發現抗體藥物綴合物kadcyla和未綴合的抗體曲妥珠單抗和帕妥珠單抗的活性比抗體新降解劑綴合物低》100倍，而發現非細胞結合對照新降解劑綴合物利妥昔單抗-化合物
(ia)和釋放的新降解劑p1和p4的活性低》1000倍。
[0968]
化合物(ia)和化合物(ic)的曲妥珠單抗和帕妥珠單抗綴合物針對bt-474乳腺癌細胞系的抗增殖活性示於圖5-圖6中(指定藥物:抗體比)。發現抗體藥物綴合物和未綴合的抗體曲妥珠單抗針對bt-474細胞的活性低於抗體新降解劑綴合物。
[0969]
化合物(ia)的曲妥珠單抗和帕妥珠單抗綴合物針對sk-br-3乳腺癌細胞系的抗增殖活性示於圖7和圖8中(在每種新降解劑綴合物中，藥物:抗體比＝8)。綴合的新降解劑與抗體藥物綴合物kadcyla具有類似的活性，而發現未綴合的抗體曲妥珠單抗和帕妥珠單抗的活性明顯低於新降解劑綴合物。發現非細胞結合對照新降解劑綴合物利妥昔單抗-化合物(ia)和釋放的新降解劑p1和p4針對sk-br-3細胞的活性顯著較低。
[0970]
化合物(ia)、(id)的or000213、humy9-6和林妥珠單抗iggl綴合物針對hl-60(急性髓性白血病)細胞系的抗增殖活性示於圖9-圖12中(未指定時藥物:抗體比＝8)。新降解劑綴合物顯示出針對細胞系具有與批准的劑類似的活性，而非細胞結合對照新降解劑綴合物曲妥珠單抗-化合物(ia和利妥昔單抗-化合物(id)的活性顯著較低。
[0971]
化合物(ia)和(ic)的利妥昔單抗綴合物針對ramos(非霍奇金淋巴瘤)細胞系的抗增殖活性示於圖13中(未指定時藥物:抗體比＝8)。未綴合的利妥昔單抗、非細胞結合對照新降解劑綴合物曲妥珠單抗-化合物(ia)和釋放的新降解劑p1和p4顯示出針對該細胞系的活性低於新降解劑綴合物。
[0972]
化合物(ia)和(ic)的利妥昔單抗綴合物針對daudi淋巴瘤細胞系的抗增殖活性示於圖14和圖15中(未指定時藥物:抗體比＝8)。未綴合的利妥昔單抗、非細胞結合對照新降解劑綴合物曲妥珠單抗-化合物(ia)和釋放的新降解劑p1顯示出針對該細胞系的活性低於新降解劑綴合物。
[0973]
化合物(ia)的曲妥珠單抗和帕妥珠單抗綴合物針對nci-n87胃癌細胞系的抗增殖活性示於圖16和圖17中(在每種新降解劑綴合物中，藥物:抗體比＝8)。綴合的新降解劑與抗體藥物綴合物kadcyla具有類似的活性，而發現未綴合的抗體曲妥珠單抗和帕妥珠單抗的活性明顯低於新降解劑綴合物。發現非細胞結合對照新降解劑綴合物利妥昔單抗-化合物(ia)和釋放的新降解劑p1針對nci-n87細胞的活性顯著較低。
[0974]
圖18示出了化合物(ia)的曲妥珠單抗和帕妥珠單抗綴合物在與人血清孵育三天後在bt-464乳腺癌細胞中的抗增殖活性相對於在不存在血清的情況下該綴合物的活性。如圖所示，新降解劑綴合物的活性在存在和不存在血清的情況下類似，顯示人血清不影響活性。非細胞結合對照新降解劑綴合物or000213-化合物(ia)針對該細胞系的活性低》1000倍。
[0975]
圖19示出了化合物(ia)的曲妥珠單抗和帕妥珠單抗綴合物在與小鼠血清孵育三天後在bt-464乳腺癌細胞中的抗增殖活性相對於在不存在血清的情況下該綴合物的活性。如圖所示，新降解劑綴合物的活性在存在和不存在血清的情況下類似，顯示小鼠血清不影響活性。非細胞結合對照新降解劑綴合物or000213-化合物(ia)針對該細胞系的活性低》1000倍。
[0976]
表1和表2示出了化合物(ia)、(ib)、(ic)和(id)的曲妥珠單抗綴合物和化合物(ia)和(ic)的帕妥珠單抗綴合物針對各種her2細胞系的ic50值。如表1所示，與未綴合的抗
體相比，新降解劑綴合物在bt-474細胞系中顯示出改善的活性，並且相對於釋放的有效載荷和抗體藥物綴合物kadcyla和也顯示出改善的活性。與未綴合的抗體相比，新降解劑綴合物還顯示出針對sk-br-3乳腺癌細胞系和nci-n87胃細胞系更好的活性。如表2所示，與未綴合的抗體或kadcyla相比，抗體新降解劑綴合物還具有針對snu-182肝細胞系的改善的活性。
[0977]
表1：抗her2新降解劑綴合物的ic50
[0978][0979]
表2：抗her2新降解劑綴合物的ic50
[0980]
[0981]
表3示出了抗體新降解劑綴合物在抗cd20細胞系中的活性。與未綴合抗體、非細胞結合對照新降解劑綴合物曲妥珠單抗-化合物i(a)和釋放的有效載荷相比，抗體新降解劑綴合物具有針對daudi和ramos淋巴細胞系的優異活性。
[0982]
表3：抗cd20新降解劑綴合物的ic50
[0983][0984]
表4示出了化合物(ia)和(id)的humy9-6和or000213綴合物以及化合物(ia)和(id)的林妥珠單抗iggl綴合物針對aml hl-60系的ic50值。如表4所示，新降解劑綴合物在hl-60細胞系中顯示出與相比相當的活性以及相比於非結合綴合物利妥昔單抗-化合物(ic)的改善的活性。
[0985]
表4：抗hl-60新降解劑綴合物的ic50
[0986][0987]
表5示出了與非細胞結合對照新降解劑綴合物or000213-化合物(ia)相比，曲妥珠單抗和帕妥珠單抗化合物(ia)綴合物在與人血清或小鼠血清孵育後針對bt-474乳腺癌細胞系的抗增殖活性。如表中所示，在人或小鼠血清中孵育的新降解劑的活性與未引入血清時的活性一致。
[0988]
表5：血清穩定性測試的ic50
[0989][0990]
實施例6：用於新降解劑和新降解劑綴合物的體外抗增殖測定的一般程序2
[0991]
細胞培養：細胞系得自美國典型培養物保藏中心(atcc，manassas,va,usa)或德意志微生物和細胞培養保藏中心(deutsche sammlung von mikroorganismen und zellkulturen,dsmz，braunschweig,germany)，並根據atcc或dsmz規定的培養條件進行維持。在進行實驗條件之前，將細胞解凍並在培養基中維持至少兩代。
[0992]
細胞毒性測定：對於貼壁細胞系，用基於無酶pbs的細胞解離緩衝液(gibco,usa)解離細胞，並根據細胞的倍增時間以適當的細胞密度鋪板在經組織培養處理的96孔平底聚苯乙烯板(costar,corning,usa)上。鋪板後18小時，用測試製品以100nm開始的適當濃度並以4倍連續稀釋度稀釋處理細胞。對於懸浮細胞系，在處理的同一天接種細胞並如上所述處理細胞。將貼壁細胞處理5天並且將懸浮細胞處理3天。使用細胞計數試劑盒-8(cck-8，dojindo laboratories,japan)評估細胞增殖，並使用promega glomax discover讀板器(promega,usa)獲得測量值。使用graphpad prism軟體(graphpad software,san diego,ca)分析數據。所有數據點從技術上的一式三份中獲得，並使用三個生物學重複驗證實驗。
[0993]
表6示出了新降解劑p1、p3和p4針對各種癌細胞系的活性。如表中所示，新降解劑針對每種細胞系都具有活性。
[0994]
表6：代表性新降解劑在各種癌細胞系中的ic50
[0995][0996]
表7示出了帕妥珠單抗-化合物(ia)綴合物和已知的抗體藥物綴合物針對各種乳腺癌細胞系的活性。如表中所示，帕妥珠單抗-化合物(ia)綴合物在所有報告的細胞系中活性更高
[0997]
表7：帕妥珠單抗-化合物(ia)綴合物在各種乳腺癌細胞系中的ic50
[0998][0999]
表8示出了帕妥珠單抗-化合物(ia)綴合物和已知的抗體藥物綴合物enhertu針對三種胃癌細胞系的活性。如表中所示，帕妥珠單抗-化合物(ia)綴合物在所有報告的細胞系中活性更高。
[1000]
表8：帕妥珠單抗-化合物i(a)綴合物在各種胃癌細胞系中的ic50
[1001][1002]
表9示出了or000213-化合物(ia)綴合物和已知的抗體藥物綴合物mylotarg針對各種急性髓性白血病細胞系的活性。如表中所示，or000213-化合物(ia)綴合物在幾種細胞系中具有更好的活性。
[1003]
表9：or000213-化合物i(a)綴合物在各種急性髓性白血病細胞系中的ic50
[1004][1005]
表10示出了三種抗cd38新降解劑綴合物針對各種多發性骨髓瘤細胞系的活性。如表中所示，綴合物在所有細胞系中具有良好的活性。
[1006]
表10：抗cd38新降解劑綴合物在多發性骨髓瘤細胞系中的ic50
[1007][1008][1009]
表11示出了抗cd 138新降解劑綴合物針對各種多發性骨髓瘤細胞系的活性。如表中所示，綴合物在所有細胞系中具有良好的活性。
[1010]
表11：抗cd38新降解劑綴合物在多發性骨髓瘤細胞系中的ic50
[1011][1012]
表12示出了抗bcma新降解劑綴合物針對各種多發性骨髓瘤細胞系的活性。如表中所示，綴合物在所有細胞系中具有良好的活性。
[1013]
表12：抗bcma新降解劑綴合物在多發性骨髓瘤細胞系中的ic50
[1014][1015]
表13示出了抗trop-2新降解劑綴合物針對各種癌細胞系的活性。如表中所示，綴合物在所有細胞系中具有良好的活性。
[1016]
表13：抗trop-2新降解劑綴合物在各種癌細胞系中的ic50
[1017][1018]
表14示出了抗fgfr4新降解劑綴合物對兩種癌細胞系的活性。如表中所示，綴合物在兩種細胞系中具有良好的活性，並且比單獨的us-1784抗體和未綴合的新降解劑具有更好的活性。
[1019]
表14：抗fgfr4新降解劑綴合物在各種癌細胞系中的ic50
[1020][1021]
表15示出了抗egfr新降解劑綴合物針對兩種滑膜肉瘤細胞系的活性。如表中所示，綴合物在兩種細胞系中具有良好的活性，並且比單獨的西妥昔單抗和未綴合的新降解劑具有更好的活性。
[1022]
表15：抗egfr新降解劑綴合物在滑膜肉瘤細胞系中的ic50
[1023]
[1024]
表16示出了抗pdgf-rα新降解劑綴合物對兩種癌細胞系的活性。如表中所示，綴合物在兩種細胞系中具有良好的活性。
[1025]
表16：抗pdgf-rα新降解劑綴合物在癌細胞系中的ic50
[1026][1027]
表17示出了抗tem1/cd248新降解劑綴合物針對橫紋肌肉瘤細胞系的活性。如表中所示，該綴合物針對該細胞系具有良好的活性。
[1028]
表17：抗tem1/cd248新降解劑綴合物在橫紋肌肉瘤細胞系中的ic50
[1029][1030]
實施例7：用抗her2抗體-新降解劑綴合物治療乳腺癌
[1031]
在免疫缺陷小鼠(fox chase cb17/icr-prkdc
scid
/icricocrl，charles river)中測試曲妥珠單抗-化合物(ia)綴合物和帕妥珠單抗-化合物(ia)綴合物。將1mm
3 bt474人乳腺癌碎片皮下植入小鼠右側腹。一旦腫瘤達到100
–
150mm3的平均大小，就向小鼠給藥抗her2抗體-新降解劑綴合物、非靶向新降解劑綴合物和媒介物對照。
[1032]
將曲妥珠單抗-化合物(ia)綴合物、利妥昔單抗-化合物(ia)綴合物和帕妥珠單抗-化合物(ia)綴合物的儲備溶液用媒介物稀釋以獲得0.5mg/ml給藥溶液，其以10ml/kg(0.2ml/20g小鼠)的給藥體積提供5mg/kg，根據每隻動物的體重進行調整。
[1033]
將小鼠分成4個治療組(n＝8/組),如下：1)媒介物；2)曲妥珠單抗-化合物(ia)綴合物(5mg/kg，iv，qd x 1)；3)利妥昔單抗-化合物(ia)綴合物(5mg/kg，iv，qd x 1)；4)帕妥珠單抗-化合物(ia)綴合物(5mg/kg，iv，qd x 1)。將所有測試製品以針對體重進行調整的體積(0.200ml/20g小鼠)作為單一劑量(qd x 1)靜脈內(i.v.)施用。
[1034]
每周兩次使用卡尺測量腫瘤，並且當每隻動物的腫瘤達到終點體積(1,000mm3)時或在研究的最後一天(第60天)，以先到者為準，對每隻動物實施安樂死。mtv(n)被定義為在研究的最後一天腫瘤尚未達到終點體積的剩餘數量(n)的動物的中值腫瘤體積。
[1035]
如圖20所示，與媒介物和非細胞結合對照新降解劑綴合物利妥昔單抗-化合物(ia)相比，帕妥珠單抗和利妥昔單抗綴合物提供隨時間較慢的腫瘤生長。
[1036]
實施例8：用抗cd20抗體-新降解劑綴合物治療非霍奇金淋巴瘤(nhl)
[1037]
在免疫缺陷小鼠(fox chasecb17/icr-prkdc
scid
/icricocrl，charles river)中測試利妥昔單抗-化合物(ia)綴合物。將1x107個daudi burkitt b細胞淋巴瘤細胞(ccl-213
tm
)皮下注射到小鼠的右側腹(0.1ml細胞懸浮液)。當腫瘤達到100-150mm3的平均大小時，向小鼠給藥抗-cd20抗體-新降解劑綴合物、非靶向新降解劑綴合物和媒介物對照。
[1038]
將曲妥珠單抗-化合物(ia)和利妥昔單抗-化合物(ia)的儲備溶液用媒介物稀釋以獲得0.5mg/ml和0.1mg/ml給藥溶液，其以10ml/kg(0.2ml/20g小鼠)的給藥體積提供5和
1mg/kg，根據每隻動物的體重進行調整。
[1039]
將小鼠分成4個治療組(n＝8/組)，如下：1)媒介物；2)曲妥珠單抗-化合物(ia)(5mg/kg，iv，qd x 1)；3)利妥昔單抗-化合物(ia)(1mg/kg，iv，qd x 1)；4)利妥昔單抗-化合物(ia)(5mg/kg，iv，qd x 1)。所有測試製品以針對體重進行調整的體積(0.200ml/20g小鼠)作為單一劑量(qd x 1)靜脈內(i.v.)施用。
[1040]
每周兩次使用卡尺測量腫瘤，並且當每隻動物的腫瘤達到終點體積(1,500mm3)時或在研究的最後一天(第45天)，以先到者為準，對每隻動物實施安樂死。mtv(n)被定義為在研究的最後一天腫瘤尚未達到終點體積的剩餘數量(n)的動物的中值腫瘤體積。
[1041]
如圖21所示，與1mg/kg劑量媒介物和非細胞結合對照新降解劑綴合物曲妥珠單抗-化合物(ia)相比，5mg/kg劑量的利妥昔單抗綴合物提供隨時間較慢的腫瘤生長。
[1042]
實施例9.用抗cd33抗體-新降解劑綴合物治療急性髓性白血病
[1043]
(aml)
[1044]
在無胸腺裸鼠(crl:nu(ncr)-foxnlnu，charles river)中測試or000213-化合物(ia)。將1x107個hl-60急性前髓細胞性白血病細胞(ccl-240
tm
)皮下注射到小鼠的右側腹(0.1ml細胞懸浮液)。一旦腫瘤達到100
–
150mm3的平均大小，就向小鼠給藥抗cd33抗體-新降解劑綴合物、非靶向新降解劑綴合物和媒介物對照。
[1045]
將曲妥珠單抗-化合物(ia)和or000213-化合物(ia)的儲備溶液用媒介物稀釋以獲得0.5mg/ml和0.1mg/ml給藥溶液，其以10ml/kg(0.2ml/20g小鼠)的給藥體積提供5和1mg/kg，根據每隻動物的體重進行調整。
[1046]
將小鼠分成4個治療組(n＝8/組)，如下：1)媒介物；2)曲妥珠單抗-化合物(ia)(5mg/kg，iv，qd x 1)；3)利妥昔單抗-化合物(ia)(1mg/kg，iv，qd x 1)；4)利妥昔單抗-化合物(ia)(5mg/kg，iv，qd x 1)。所有測試製品以針對體重進行調整的體積(0.200ml/20g小鼠)作為單一劑量(qd x 1)靜脈內(i.v.)施用。
[1047]
每周兩次使用卡尺測量腫瘤，並且當每隻動物的腫瘤達到終點體積(2,000mm3)時或在研究的最後一天(第45天)，以先到者為準，對每隻動物實施安樂死。mtv(n)被定義為在研究的最後一天腫瘤尚未達到終點體積的剩餘數量(n)的動物的中值腫瘤體積。
[1048]
如圖22所示，與媒介物相比，所有新降解劑綴合物提供隨時間較慢的腫瘤生長。
[1049]
實施例10.用抗cd38抗體-新降解劑綴合物治療多發性骨髓瘤
[1050]
在cb.17scid小鼠(cb17/icr-prkdcscid/icrlcocrl，charles river)中測試huat13/5-化合物(ia)。將50％matrigel中的1x107個nci-h929骨髓瘤細胞(crl-9068
tm
)皮下注射到小鼠的腋窩部位(0.1ml細胞懸浮液)。一旦腫瘤達到100
–
150mm3的平均大小，就向小鼠給藥抗cd38抗體-新降解劑綴合物和媒介物對照。
[1051]
將huat13/5-化合物(ia)的儲備溶液用媒介物稀釋以獲得0.5mg/ml給藥溶液，其以10ml/kg(0.2ml/20g小鼠)的給藥體積提供5mg/kg，根據每隻動物的體重進行調整。
[1052]
將小鼠分成2個治療組(n＝10/組)，如下：1)媒介物；2)huat13/5-化合物(ia)(5mg/kg，iv，qd x 1)。所有測試製品以針對體重進行調整的體積(0.200ml/20g小鼠)作為單一劑量(qd x 1)靜脈內(i.v.)施用。
[1053]
每周兩次使用卡尺測量腫瘤，並且當每隻動物的腫瘤達到終點體積(2,000mm3)時或在研究的最後一天(第45天)，以先到者為準，對每隻動物實施安樂死。mtv(n)被定義為在
研究的最後一天腫瘤尚未達到終點體積的剩餘數量(n)的動物的中值腫瘤體積。
[1054]
如圖25所示，與媒介物相比，5mg/kg劑量的huat13/5新降解劑綴合物提供隨時間較慢的腫瘤生長。
[1055]
應當理解，旨在使用具體實施方式部分而非發明內容及說明書摘要部分來解釋權利要求書。發明內容和說明書摘要部分可以闡述發明人所設想的本公開的一個或多個但不是全部的示例性方面，並且因此不旨在以任何方式限制本公開和所附權利要求。
[1056]
以上已藉助於示出了指定功能及其關係的實現的功能構建塊描述了本公開。為了便於描述，本文已任意定義了這些功能構建塊的邊界。只要指定的功能及其關係被適當地執行，就可定義替代的邊界。
[1057]
特定方面的前述描述將如此完全地揭示本發明的一般性質，以使他人可通過應用本領域的技術內的知識在不脫離本公開的一般概念的情況下容易地修改和/或改編此類特定方面以用於各種應用，而無需過度實驗。因此，基於本文所呈現的教導內容和指導內容，此類改編和修改旨在處於所公開的方面的等同物的含義和範圍內。應當理解，本文的措詞或術語是為了描述而不是限制的目的，使得本說明書的術語或措詞由技術人員根據教導內容和指導內容來解釋。
[1058]
本公開的廣度和範圍不應受上述示例性方面中的任一方面的限制，而應僅根據所附權利要求及其等同物來限定。