抗磷脂抗體測定試劑以及抗梅毒螺旋體抗體測定試劑的製作方法

2023-08-07 23:40:06 1

專利名稱：：抗磷脂抗體測定試劑以及抗梅毒螺旋體抗體測定試劑的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種能夠準確度良好地進行梅毒感染的診斷而且長期貯存穩定性出色的抗磷脂抗體測定試劑，以及可以防止血清幹擾的發生從而可以準確度良好地進行梅毒感染的診斷的抗梅毒螺旋體抗體測定試劑。
背景技術：
：作為梅毒病原體的梅毒螺旋體(TreponemaPallidum)—旦感染生物，即產生針對該病原體的抗體和具有與磷脂反應性的抗體。抗磷脂抗體測定試劑是通過測定與血中的磷脂具有反應性的抗體的有無來判斷梅毒感染的試劑。以往，在抗磷脂測定中，進行使用判斷板的RPR卡片試驗(cardtest)等用手法，不過近年來，正在出售可以在生物化學自動分析裝置中適用的試劑(自動化試劑)。在該自動化試劑中，為了減輕患者的採血負擔，與用手法相比，大多以少量的血清測定。所以，試劑與血中的抗體的反應引起的抗原抗體反應量也變為少量。因而，在自動化試劑中，有時添加促進抗原抗體反應的增感劑。作為通常使用的增感劑，包括聚乙二醇、葡聚糖等。另外，作為抗磷脂抗體測定試劑中的增感劑，專利文獻1中顯示聚乙烯吡咯烷酮及支鏈澱粉是有效的。但是，這樣的增感劑雖然促進抗原抗體反應的效果出色，但在長期保存試劑的情況下穩定性存在問題，長期保存後，靈敏度降低，不能保持試劑性能。另一方面，作為梅毒病原體的梅毒螺旋體一旦感染生物，即產生針對該病原體的抗體。抗梅毒螺旋體抗體測定試劑是通過測定血中的抗梅毒螺旋體抗體的有無來判斷梅毒感染的試劑。以往，在抗梅毒螺旋體抗體測定中，進行利用血細胞凝集的TPHA等用手法，不過近年來，正在出售可以在生物化學自動分析裝置中適用的試劑(自動化試劑)。在該自動化試劑中，為了減輕患者的採血負擔，與用手法相比，大多以少量的血清測定。所以，試劑與血中的抗體的反應引起的抗原抗體反應量也變為少量。因而，在自動化試劑中，有時添加促進抗原抗體反應的增感劑。作為通常使用的增感劑，包括聚乙二醇、葡聚糖等。另外，作為抗梅毒螺旋體抗體測定試劑中的增感劑，專利文獻2公開了含有糖苷衍生物作為單體單元的水溶性聚合物及/或溶性共聚物是有效的。但是，這樣的增感劑雖然促進抗原抗體反應的效果出色，但不能以一部分標本得到正確的測定結果。具體而言，在標本為血清的情況下，通過使血清中內含的成分變動，發生給測定帶來不良影響的被稱為血清幹擾的現象，不能得到正確的測定結果，專利文獻1:日本特開平10-282096號公報專利文獻2:日本專利第2947600號公報
發明內容鑑於所述現狀，本發明的目的在於提供一種能夠準確度良好地進行梅毒感染的診斷而且長期貯存穩定性出色的抗磷脂抗體測定試劑，以及可以防止血清幹擾的發生，從而可以準確度良好地進行梅毒感染的診斷的抗梅毒螺旋體抗體測定試劑。本發明的抗磷脂抗體測定試劑是在梅毒感染的診斷中使用的抗磷脂抗體測定試劑，其中，內含載持有抗磷脂抗原的不溶性載體和共聚物，所述共聚物具有來自2-甲基丙烯醯氧基乙基磷醯膽鹼的鏈段和來自親水性單體的鏈段。另外，本發明的抗梅毒螺旋體抗體測定試劑是在梅毒感染的診斷中使用的抗梅毒螺旋體抗體測定試劑，其中，內含載持有抗梅毒螺旋體抗原的不溶性載體和共聚物，所述共聚物具有來自2-甲基丙烯醯氧基乙基磷醯膽鹼的鏈段和來自親水性單體的鏈段。以下詳述本發明。本發明人等進行了潛心研究，結果發現通過在抗磷脂抗體測定試劑中內含作為增感劑的具有來自2-甲基丙烯醯氧基乙基磷醯膽鹼的鏈段以及來自親水性單體的鏈段的共聚物，測定靈敏度提高，而且可以長期保持貯存穩定性，以至完成本發明的抗磷脂抗體測定試劑。本發明的抗磷脂抗體測定試劑內含具有來自2-甲基丙烯醯氧基乙基磷醯膽鹼的鏈段以及來自親水性單體的鏈段的共聚物(以下也簡稱為共聚作為所述親水性單體使用甲基丙烯酸的情況下，所述共聚物的結構如下述通式(1)所示。所述2-甲基丙烯醯氧基乙基磷醯膽鹼由於具有甲基丙烯醯基，所以可以與其他聚合性單體共聚。作為可以共聚的親水性單體，例如可以舉出甲基丙烯酸2-羥乙酯、(甲基)丙烯酸酯、(甲基)丙烯醯胺等(甲基)丙烯酸系單體等。作為所述親水性單體，沒有特別限定，例如可以舉出(甲基)丙烯酸、(甲基)丙烯醯胺等。其中，由於需要與血液成分中的蛋白質等發生靜電排斥，所以優選陽離子性的(甲基)丙烯酸。在此，(甲基)丙烯酸是指丙烯酸或甲基丙烯酸。作為所述共聚物中的所述來自2-甲基丙烯醯氧基乙基磷醯膽鹼的鏈段與來自親水性單體的鏈段的比，沒有特別限定，只要根據需要適當選擇即可，但優選摩爾比為5:53:7。如果所述來自2-甲基丙烯醯氧基乙基磷醯膽鹼的鏈段的比不到該比例，則有時不能有效地防止抗梅毒螺旋體抗體測定中的血清幹擾的發生。作為所述共聚物的重均分子量，沒有特別限定，優選下限為5000，優選上限為500萬。如果不到5000，則有時失去凝集促進效果，如果超過500萬，則在向試劑中添加時，粘性過於上升，有時重複性等變差。本發明的抗磷脂抗體測定試劑中的所述共聚物的含量的優選下限為0.1(w/v)優選上限為1.2(w/v)%。如果不到O.l(w/v)%，則有時不能有效地防止血清幹擾的發生，如果超過1.2(w/v)%，則試劑的粘性過於上升，有時重複性降低。更優選下限為0.2(w/v)%，更優選上限為0.8(w/v)%。本發明的抗磷脂抗體測定試劑含有載持有抗磷脂抗原的不溶性載體。作為所述抗磷脂抗原，例如優選為例如由心磷脂、卵磷脂以及膽固醇構成的脂質抗原。所述心磷脂優選使用從牛的心臟中純化而成的心磷脂，也可以為化學合成的心磷脂。所述卵磷脂優選使用從雞的蛋黃中純化而成的卵磷脂，但也可以使用卵磷脂的含量為6080%的蛋黃素。所述膽固醇可以為動物來源的膽固醇，也可以為化學合成的膽固醇。作為所述心磷脂、卵磷脂以及膽固醇的混合比，只要是具有能夠判斷梅毒感染的有無的性能的程度即可，沒有特別限定，相對心磷脂l，優選卵磷脂為812，膽固醇為15。作為所述不溶性載體，沒有特別限定，優選使用由具有苯基的聚合性單體及/或陰離子性的聚合性單體的聚合物所構成的物質。作為所述具有苯基的聚合性單體，沒有特別限定，例如可以舉出苯乙烯、二乙烯基苯、乙基苯乙烯、cc-甲基苯乙烯、對氯苯乙烯、氯甲基苯乙烯等。它們可以單獨使用，也可以並用。作為所述陰離子性的聚合性單體，沒有特別限定，例如可以舉出苯乙烯磺酸鹽、(甲基)丙烯酸、二乙烯基苯磺酸鹽、乙基苯乙烯磺酸鹽、a-甲基磺酸鹽等。作為這種情況下的鹽，沒有特別限定，例如可以舉出鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、銨鹽等。它們可以單獨使用，也可以並用兩種以上。其中，優選苯乙烯磺酸鹽及/或(甲基)丙烯酸。通過內含所述苯乙烯磺酸鹽及/或(甲基)丙烯酸，得到的不溶性載體自身成為具有良好的乳化力的物質。使用所述陰離子性的聚合性單體得到的不溶性載體成為具有表面電荷的物質，因此即使沒有乳化劑也可以在溶液中良好地分散。此外，如果在不溶性載體的懸浮液中存在乳化劑，則在使其載持脂質抗原從而成為抗磷脂抗體測定試劑的情況下，有時乳化劑會妨礙特異抗原抗體反應引起的高分子球狀體的凝集，或者根據情況不同而參與非特異反應，所以優選不含有乳化劑。使用由所述具有苯基的聚合性單體及陰離子性的聚合性單體的聚合物所構成的不溶性載體的情況下，作為各聚合性單體的共聚物成分的含量，沒有特別限定，相對所述具有苯基的聚合性單體的共聚物成分ioo重量份，陰離子性的聚合性單體的共聚物成分優選為50重量份以下。如果陰離子性的聚合性單體的共聚合部分超過50重量份，則得到的不溶性載體變有時得難以分散。更優選為30重量份以下。雖然所述不溶性載體具有表面電荷，但該表面電荷根據基於所述的作為共聚合成分的陰離子性的聚合性單體的情況和基於在聚合時使用的聚合引發劑的切片的陰離子的情況而不同。基於所述聚合引發劑的切片的陰離子的情況是指例如在使用過硫酸鉀等過硫酸鹽的情況下，作為切片的硫酸根(一osor)存在於共聚合粒子表面，該硫酸根逐漸接受加水分解而如下述式地改變的情況。—S03—+H20—-OH+HOSO,所述不溶性載體在成為懸浮液時優選表面電荷密度以陰離子的解離濃度表示為0.010.4|amol/m2。此外，所述懸浮液的介質是被用於免疫學測定試驗的介質，例如可以舉出水、生理鹽水、血清等。如果不到0.01pmol/m2，則粒子間的排斥力弱，所以有時會破壞不溶性載體自身具有的乳化力，如果超過0.4,ol/m2，則不溶性載體間的電排斥力變強，不發生自身凝集，是穩定的，但由於抗原抗體反應引起的凝集也被妨礙，所以有時不能高靈敏度地測定。另外，所述不溶性載體優選為粒徑0.10.7pm的球狀體。如果不到O.lpm，則凝集引起的光學變化量小，有時不能得到測定必需的高靈敏度，如果超過0.7)am，則粒子的凝集引起的光學變化量超過可測定區域，有時測定範圍變小。更優選下限為0.2pm，更優選為上限為0.5pm。作為聚合所述聚合性單體的方法，沒有特別限定，可以舉出使用聚合引發劑進行乳液聚合、懸浮聚合、種子聚合、分散聚合等的方法。作為所述聚合引發劑，沒有特別限定，例如可以舉出過硫酸鉀等過硫酸鹽等。作為在所述不溶性載體上載持所述抗磷脂抗原的方法，沒有特別限制，可以舉出通過以往公知的方法，利用物理及/化學鍵使其載持的方法等。本發明的抗磷脂抗體測定試劑可以通過使載持有所述抗磷脂抗原的不溶性載體和所述共聚物分散及溶解於同一介質而作為單液系的膠乳試劑使用，另外，也可以作為雙液系的試劑使用，所述雙液系試劑含有內含載持有所述抗磷脂抗原的不溶性載體的第1試劑和向介質中添加了所述共聚物的緩衝液而組成的第2試劑。作為所述介質沒有特別限定，例如可以舉出磷酸緩衝液、甘氨酸緩衝液、Tris鹽緩衝液、Good's緩衝液等。另外，作為所述介質的pH，沒有特別限定，優選下限為5.5，優選上限為8.5，更優選下限為6.5。也可以在所述單液系的膠乳試劑中進一步適當溶解牛血清白蛋白、蔗糖、氯化鈉、EDTA'2Na、表面活性劑等。另外，在用作所述膠乳試劑與溶液狀試劑的雙液系試劑的情況下，也可以分別適當溶解牛血清白蛋白、蔗糖、氯化鈉、EDTA'2Na、表面活性劑等。另外，作為所述牛血清白蛋白的濃度，沒有特別限定，優選下限為0.1%，優選上限為15%，更優選下限為1.0%，更優選上限為10.0%。通過使用本發明的抗磷脂抗體測定試劑，利用光學測定或目視觀察經與標本中的抗磷脂抗體發生抗原抗體反應而產生的凝集的程度，可以測定標本中的抗磷脂抗體。作為光學測定所述凝集的程度的方法，可以使用公知的方法，例如利用使用的不溶性載體的粒子的尺寸、濃度的選擇、反應時間的設定來測定散射光強度、吸收光度、透射光強度的增減。另外，還可以並用這些方法。此外，作為進行所述測定時的光的波長，優選為300900nm。作為在所述光學測定方法中使用的裝置，可以舉出能夠檢測散射光強度、透過光強度、吸光度等的光學儀器，只要是通常使用的生物化學自動分析機，就可以任意使用。作為目視觀察所述凝集的程度的方法，通常可以使用在判斷板上混合標本和本發明的抗磷脂抗體測定試劑，搖動混合液，然後判斷凝集的有無的方法等。此外，在觀察凝集的程度時，除了利用目視的方法以外，還可以使用用攝像機拍攝凝集狀態，實施圖像處理的方法。另外，本發明人等進行了潛心研究，結果發現通過在抗梅毒螺旋體抗體測定試劑中內含作為增感劑的具有來自2-甲基丙烯醯氧基乙基磷醯膽鹼的鏈段以及來自親水性單體的鏈段的共聚物，在測定血清中的抗梅毒螺旋體抗體的情況下，可以防止血清幹擾的發生從而準確度良好地進行抗梅毒螺旋體抗體的測定，以至完成本發明的抗梅毒螺旋體抗體測定試劑。本發明的抗梅毒螺旋體抗體測定試劑內含載持有針對梅毒的抗原的不溶性載體，以及具有來自2-甲基丙烯醯氧基乙基磷醯膽鹼的鏈段和來自親水性單體的鏈段的共聚物(以下也簡稱為共聚物)。作為所述親水性單體，使用甲基丙烯酸的情況下，所述共聚物的結構如下述通式(1)所示。formulaseeoriginaldocumentpage9本發明的抗梅毒螺旋體抗體測定試劑通過內含所述共聚物，即使在使用血清作為標本的情況下，也不會引起血清幹擾，可以得到正確的測定結果。此外，作為確認所述血清幹擾的方法，例如可以使用被稱為添加回收試驗的方法。所述添加回收試驗是如下所述的試驗，即將以高濃度內含作為被測定物質的抗原或抗體的標準物質添加至生理鹽水(沒有變動成分的血清的模型)，成為0.15%左右，求得添加前後的測定值的差，然後同樣地進行，向內含作為被測定物質的抗原或抗體的血清中添加標準物質，求得在添加前後的測定值的差，將在向生理鹽水中添加標準物質的情況下的測定值的差設為100%時的比例作為回收率算出，由此確認血清幹擾的發生。所述2-甲基丙烯醯氧基乙基磷醯膽鹼由於具有甲基丙烯醯基，所以可以與其他聚合性單體共聚。作為可以共聚的親水性單體，例如可以舉出甲基丙烯酸2-羥乙酯、(甲基)丙烯酸酯、(甲基)丙烯醯胺等(甲基)丙烯酸系單體等。作為所述親水性單體，沒有特別限定，例如可以舉出(甲基)丙烯酸、(甲基)丙烯醯胺等。其中，由於需要與血液成分中的蛋白質等發生靜電排斥，所以優選陽離子性的(甲基)丙烯酸。在此，(甲基)丙烯酸是指丙烯酸或甲基丙烯酸。作為所述共聚物中所述的來自2-甲基丙烯醯氧基乙基磷醯膽鹼的鏈段與來自親水性單體的鏈段的比，沒有特別限定，只要根據需要適當選擇即可，但優選摩爾比為5:53:7。如果所述來自2-甲基丙烯醯氧基乙基磷醯膽鹼的鏈段的比不到該比例，則有時不能有效地防止抗梅毒螺旋體抗體測定中的血清幹擾的發生。作為所述共聚物的重均分子量，沒有特別限定，優選下限為5萬，優選上限為500萬。如果不到5萬，則有時失去凝集促進效果，如果超過500萬，則在向試劑中添加時，粘性過於上升，有時重複性等變差。本發明的抗梅毒螺旋體抗體測定試劑中的所述共聚物的含量的優選下限為O.l(w/v)%，優選上限為1.2(w/v)%。如果不到O.l(w/v)%，則有時不能有效地防止血清幹擾的發生，如果超過1.2(w/v)%，則試劑的粘性過於上升，有時重複性降低。更優選下限為0.2(w/v)%，更優選上限為0.8(w/v)%。本發明的抗梅毒螺旋體抗體測定試劑除了所述共聚物以外還含有載持抗梅毒螺旋體抗原的不溶性載體。作為所述抗梅毒螺旋體抗原，例如優選使用來自梅毒螺旋體菌體的抗原。作為所述不溶性載體，沒有特別限定，例如可以舉出由聚苯乙烯、苯乙烯-苯乙烯磺酸鹽聚合物、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物、氯乙烯-丙烯酸酯共聚物、聚醋酸乙烯丙烯酸酯等構成的物質。作為所述不溶性載體的粒徑，根據使用的測定方法或測定儀器而不同，但優選下限為0.05pm，優選上限為l.O,。如果不到0.5(im，則凝集引起的光學變化量小，有時不能得到測定必需的高靈敏度，如果超過l.Opm，則膠乳粒子的凝集引起的光學變化量超過可測定區域，有時測定範圍變小。作為在所述不溶性載體上載持抗梅毒螺旋體抗原的方法，沒有特別限制，可以舉出通過公知的方法，利用物理、化學鍵使其載持的方法等。此外，此時使用的抗梅毒螺旋體抗原可以為菌體破碎物，也可以為純化物。另外，也可以使用1種利用基因重組技術人工合成的抗原，或組合1種以上的來使用。本發明的抗梅毒螺旋體抗體測定試劑可以通過使載持所述抗梅毒螺旋體抗原的不溶性載體和所述共聚物分散及溶解於同一介質而作為單液系的膠乳試劑使用，另外，也可以作為雙液系的試劑使用，所述雙液系試劑含有內含載持有所述抗梅毒螺旋體抗原的不溶性載體的第1試劑和向介質中添加了所述共聚物而成的緩衝液而組成的第2試劑。作為所述介質沒有特別限定，例如可以舉出磷酸緩衝液、甘氨酸緩衝液、Tris鹽緩衝液等。也可以在所述單液系的膠乳試劑中進一步適當溶解牛血清白蛋白、蔗糖、氯化鈉、EDTA，2Na、表面活性劑等。另外，在用作雙液系試劑的情況下，也可以分別適當溶解牛血清白蛋白、蔗糖、氯化鈉、EDTA'2Na、表面活性劑等。另外，作為所述牛血清白蛋白的濃度，沒有特別限定，優選下限為0.1%,優選上限為15%，更優選下限為1.0%，更優選上限為10.0%。通過使用本發明的抗梅毒螺旋體抗體測定試劑，利用光學測定或目視觀察經與標本中的抗梅毒螺旋體抗體發生抗原抗體反應而產生的凝集的程度，可以測定標本中的抗梅毒螺旋體抗體。使用本發明的抗梅毒螺旋體抗體測定試劑進行抗原抗體反應時的pH的優選上限為4.5，優選下限為10.0，更優選下限為6.0，更優選上限為8.0。另外，反應溫度的優選下限為O'C，優選上限為50'C，反應時間可以適當選擇。作為光學測定所述凝集的程度的方法，可以使用公知的方法，例如利用使用的不溶性載體的粒子的尺寸、濃度的選擇、反應時間的設定來測定散射光強度、吸收光度、透射光強度的增減。另外，還可以並用這些方法。此外，作為進行所述測定時的光的波長，優選為300900nm。作為在所述光學測定方法中使用的裝置，可以舉出能夠檢測散射光強度、透過光強度、吸光度等的光學儀器，只要是通常使用的生物化學自動分析機，就可以任意使用。作為目視觀察所述凝集的程度的方法，通常可以使用以下的方法，即在判斷板上混合標本和含有本發明的抗梅毒螺旋體抗體測定試劑的溶液，搖動混合液，然後判斷凝集的有無的方法等。此外，在觀察凝集的程度時，除了利用目視的方法以外，還可以使用利用攝像機拍攝凝集狀態，實施圖像處理的方法。利用本發明，可以提供能夠準確度良好地進行梅毒感染的診斷而且長期貯存穩定性出色的抗磷脂抗體測定試劑，以及可以防止血清幹擾的發生從而可以準確度良好地進行梅毒感染的診斷的抗梅毒螺旋體抗體測定試劑。圖1是表示使用實施例13、比較例13中的l.OR.U.的抗磷脂抗體標準液時的吸光度變化量的推移的曲線圖。圖2是表示使用實施例13、比較例13中的2.0尺.11.的抗磷脂抗體標準液時的吸光度變化量的推移的曲線圖。圖3是表示使用實施例13、比較例13中的4.0R,U.的抗磷脂抗體標準液時的吸光度變化量的推移的曲線圖。圖4是表示使用實施例13、比較例13中的8.011.U.的抗磷脂抗體標準液時的吸光度變化量的推移的曲線圖。圖5是表示使用實施例46、比較例46中的l.OR.U.的抗磷脂抗體標準液時的吸光度變化量的推移的曲線圖。圖6是表示使用實施例46、比較例46中的2.011.1;.的抗磷脂抗體標準液時的吸光度變化量的推移的曲線圖。圖7是表示使用實施例710、比較例716中的37T.U.的抗梅毒螺旋體抗體標準液時的吸光度變化量的推移的曲線圖。具體實施例方式(1)抗磷脂抗體測定試劑的配製按照下述順序，配製由第1試劑和第2試劑構成的雙液系的試劑。(1-1)第l試劑的配製在內含1%牛血清白蛋白(LotA:serologicals公司制)的磷酸緩衝液中，添加1.2重量X的用NaOH中和之後的利匹德爾(Lipidure)D02(日本油脂公司制，分子量55萬)，由此配製第l試劑。(1-2)第2試劑的配製直接使用MediAceRPR(積水化學工業公司制)膠乳液作為第2試劑。該膠乳液是在平均粒徑0.40CHim、磺酸基量0.38(imol/m2的聚苯乙烯膠乳中，敏化由心磷脂、卵磷脂以及膽固醇構成的脂質抗原而成的產物。(實施例2)(1-1)在第1試劑的配製中，在內含1%牛血清白蛋白(LotA:serologicals公司制)的磷酸緩衝液中，添加0.70重量％的用NaOH中和之後的利匹德爾D03(日本油脂公司制，分子量100萬)，由此配製第l試劑，除此以外，與實施例l同樣地進行，配製抗磷脂抗體測定試劑。(實施例3)O-l)在第1試劑的配製中，在內含1%牛血清白蛋白(LotA:serologicals公司制)的磷酸緩衝液中，添加0.45重量％的用NaOH中和之後的利匹德爾D05(日本油脂公司制，分子量100萬)，由此配製第l試劑，除此以外，與實施例l同樣地進行，配製抗磷脂抗體測定試劑。(比較例1)(1-1)在第1試劑的配製中，在內含1%牛血清白蛋白(LotA:serologicals公司制)的磷酸緩衝液中，代替利匹德爾D02而添加1.2重量％支鏈澱粉(林原公司制)，進行溶解，除此以外，與實施例1同樣地進行，配製抗磷脂抗體測定試劑。(比較例2)(1-1)在第1試劑的配製中，在內含1%牛血清白蛋白(LotA:serologicals公司制)的磷酸緩衝液中，代替利匹德爾D02而添加1.0重量％聚乙烯吡咯烷酮，進行溶解，除此以外，與實施例1同樣地進行，配製抗磷脂抗體測定試劑。(比較例3)(1-1)在第1試劑的配製中，在內含1%牛血清白蛋白(LotA:serologicals公司制)的磷酸緩衝液中，代替利匹德爾D02而添加2.0重量％葡聚糖(分子量50萬西格瑪公司制)，進行溶解，除此以外，與實施例1同樣地進行，配製抗磷脂抗體測定試劑。評價(1)對在實施例13及比較例13中得到的抗磷脂抗體測定試劑，進行以下評價。(1)配製後立即測定吸光度變化量作為抗磷脂抗體標準液，採取20]iLRPR標準血清(積水化學工業公司制，0.0、丄0、2.0、4.0及8服U,的5種濃度)，在其中混合第1試劑180pm，在37t:下保持適當時間，然後進一步添加第2試劑60|iL，攪拌。然後，測定在波長700nm下的從約80秒至300秒之間的吸光度的變化量，作為吸光度變化量(Aabs)。其中，吸光度測定使用自動分析裝置日立7170型。另外，R.U.是使用作為抗磷脂抗體測定試劑的MediAceRPR(積水化學工業公司制)測定血清時，表示來自梅毒感染的抗磷脂抗體的抗體效價的單位。結果如表l所示。tableseeoriginaldocumentpage15(2)貯存穩定性的評價在3(TC下保存第l試劑，然後進行(1)抗磷脂抗體標準液的測定，通過求得將剛配製後設為100%時的Aabs的降低率來評價貯存穩定性。通常抗磷脂抗體試劑被保存在21(TC下，但通過保存在3(TC下，作為加速試驗，可以評價貯存穩定性。此外，測定是配製開始5天後、15天後、18天後以及25天後進行。使用l.O、2.0、4.0以及8.010;.的抗磷脂抗體標準液時的結果分別如圖14所示。如圖i、圖2所示，可知在使用1.010;.或2.010;.的抗磷脂抗體標準液時，在25天後，使用支鏈澱粉、PVP、葡聚糖時的吸光度變化量降低1530%。另一方面，使用利匹德爾D02、D03以及D05時，只降低5%以內。(實施例4)(1-1)在第1試劑的配製中，在內含1%牛血清白蛋白(LotB)的磷酸緩衝液中，添加0.66重量％的用NaOH中和之後的利匹德爾D03(日本油脂公司制)，除此以外，與實施例1同樣地進行，配製抗磷脂抗體測定試劑。(實施例5)(1-1)在第1試劑的配製中，在內含1%牛血清白蛋白(LotC)的磷酸緩衝液中，添加0.66重量％的用NaOH中和之後的利匹德爾D03(日本油脂公司制)，除此以外，與實施例1同樣地進行，配製抗磷脂抗體測定試劑。(實施例6)'(1-1)在第1試劑的配製中，在內含1%牛血清白蛋白(LotD)的磷酸緩衝液中，添加0.66重量％的用NaOH中和之後的利匹德爾D03(日本油脂公司制)，除此以外，與實施例1同樣地進行，配製抗磷脂抗體測定試劑。(比較例4)(1-1)在第1試劑的配製中，在內含1%牛血清白蛋白(LotB)的磷酸緩衝液中，代替利匹德爾D02添加1.1重量X支鏈澱粉(林原公司制)，進行溶解，除此以外，與實施例1同樣地進行，配製抗磷脂抗體測定試劑。(比較例5)(1-1)在第1試劑的配製中，在內含1%牛血清白蛋白(LotC)的磷酸緩衝液中，代替利匹德爾D02添加1.1重量X支鏈澱粉(林原公司制)，進行溶解，除此以外，與實施例1同樣地進行，配製抗磷脂抗體測定試齊IJ。(比較例6)(1-1)在第1試劑的配製中，在內含1%牛血清白蛋白(LotD)的磷酸緩衝液中，代替利匹德爾D02添加U重量％支鏈澱粉(林原公司制)，進行溶解，除此以外，與實施例1同樣地進行，配製抗磷脂抗體測定試劑。評價(2)對在實施例46及比較例46中得到的抗磷脂抗體測定試劑，進行以下評價。(1)配製後立即測定消光度變化量作為抗磷脂抗體標準液，採取20pLRPR標準血清(積水化學工業公司制，0.0、1.0、2.0、4.0及8.0R,U.的5種濃度)，在其中混合第1試劑180|im，在37'C下保持適當時間，然後進一步添加第2試劑60nL，攪拌。然後，測定在波長700nm下從約80秒至300秒之間的吸光度的變化量，作為吸光度變化量(Aabs)。吸光度測定使用自動分析裝置日立7170型。此外，結果如表2所示。tableseeoriginaldocumentpage18(2)貯存穩定性的評價在3(TC下保存第l試劑，然後進行(1)抗磷脂抗體標準液的測定，通過求得將剛配製後設為100%時的Aabs的降低率來評價貯存穩定性。通常抗磷脂抗體試劑被保存在21(TC下，但通過保存在3(TC下，作為加速試驗，可以評價貯存穩定性。此外，測定時從配製開始7天後以及14天後進行。使用1.0以及2.011.1;.的抗磷脂抗體標準液時的結果分別如圖5、6所示。如圖5、6所示，在組合使用BSA的LotD和支鏈澱粉的情況下，在3(TC下保存14天之後可見大幅度的靈敏度的降低，但組合使用BSA的LotD和利匹德爾D03的情況下，只見靈敏度略微降低。因而，可以判斷，對於貯存穩定性而言，難以受到BSA引起的影響。(實施例7)(1)抗梅毒螺旋體抗體測定試劑的配製按照下述順序，配製由抗梅毒螺旋體抗原載持膠乳液形成的第1試劑和標本稀釋液組成的第2試劑構成的雙液系的抗梅毒螺旋體抗體測定試劑。(1-1)抗梅毒螺旋體抗原載持膠乳液的配製在平均粒徑0.40(Him的聚苯乙烯膠乳液(固體成分10(w/v)積水化學工業公司制)100|11中，添加在100mM磷酸緩衝液(pH7.4)中以150|ig/ml的蛋白濃度溶解的抗梅毒螺旋體抗原液400^1，在4'C下攪拌1小時。接著，添加內含l(w/v)%牛血清白蛋白(serologicals制；BSA，Lotl)的100mM磷酸緩衝液(pH7.4)2ml，攪拌1.5小時。將所得的液體在l(TC下，30分鐘、18000rpm下離心分離得到沉澱物，將該沉澱物在內含0.25(w/v)XBSA(Lotl)的100mM磷酸緩衝液(pH7.4)4ml中，使膠乳懸浮，由此配製抗梅毒螺旋體抗原載持膠乳液。(1-2)標本稀釋液的配製在內含1%BSA(Lotl)的lOOmM磷酸緩衝液(pH7.4)中添加0.2(w/v)利匹德爾(2-甲基丙烯醯氧基乙基磷醯膽鹼與甲基丙烯酸的共聚物分子量100萬；日本油脂公司制)。(實施例8)在實施例7的(1-1)抗梅毒螺旋體抗原載持膠乳液的配製中，在得到的沉澱物中添加內含0.25(w/v)%BSA(Lotl)的lOOmM磷酸緩衝液(pH7.4)5ml，同時在(1-2)標本稀釋液的配製中，添加0.6(w/v)%利匹德爾，除此以外，與實施例7同樣地進行，配製抗梅毒螺旋體抗體測定試劑。(實施例9)在實施例7的(1-1)抗梅毒螺旋體抗原載持膠乳液的配製中，在得到的沉澱物中添加內含0.25(w/v)%BSA(Lotl)的lOOmM磷酸緩衝液(pH7.4)12ml，同時在(1-2)標本稀釋液的配製中，添加1.0(w/v)%利匹德爾，除此以外，與實施例7同樣地進行，配製抗梅毒螺旋體抗體測定試劑。(比較例7)在實施例7的(1-2)標本稀釋液的配製中，在內含1XBSA(Lotl)的lOOmM磷酸緩衝液(pH7.4)中，代替利匹德爾添加1(w/v)%pGEMA(糖基乙基甲基丙烯酸酯的均聚物，平均分子量114萬，日本精化公司制)，除此以外，與實施例7同樣地進行，配製抗梅毒螺旋體抗體測定試劑。評價(3)(1)抗梅毒螺旋體抗體標準液的測定作為抗梅毒螺旋體抗體標準液，採取16pL梅毒陽性標準血清(積水化學工業公司制，5種濃度)，在其中混合樣本稀釋液175mL，在37。C下保持適當時間，然後添加抗梅毒螺旋體抗原載持膠乳液25pL，攪拌，然後，測定從約80秒至300秒之間的在波長700nm下的吸光度的變化量，作為吸光度變化量(Aabs)。測定使用自動分析裝置日立7170型。結果如表3所示。此外，T.U.是用作為抗梅毒螺旋體抗體測定試劑的MediAceTPLA(積水化學工業公司制)測定血清時，表示抗梅毒螺旋體抗體的抗體效價的單位，10T.U.以上為陽性。tableseeoriginaldocumentpage21如表4所示，可知在將利匹德爾用作反應促進劑的實施例79中，與各標本均將pGEMA用作反應促進劑的比較例7相比，添加回收率大幅度地改善。(實施例10)在實施例7的(1-2)標本稀釋液的配製中，使用BSA(Lot2)，除此以外，與實施例7同樣地進行，配製標本稀釋液。(實施例11)在實施例7的(1-2)標本稀釋液的配製中，使用BSA(Lot3)，除此以外，與實施例7同樣地進行，配製標本稀釋液。(實施例12)在實施例7的(1-2)標本稀釋液的配製中，使用BSA(Lot4)，除此以外，與實施例7同樣地進行，配製標本稀釋液。(比較例8)在實施例7的(1-2)標本稀釋液的配製中，使用BSA(Lot2)，除此以外，與比較例7同樣地進行，配製標本稀釋液。(比較例9)在實施例7的(1-2)標本稀釋液的配製中，使用BSA(Lot3)，除此以外，與比較例7同樣地進行，配製標本稀釋液。(比較例10)在實施例7的(1-2)標本稀釋液的配製中，使用BSA(Lot4)，除此以外，與比較例7同樣地進行，配製標本稀釋液。(比較例11)在實施例7的(1-2)標本稀釋液的配製中，在內含1^BSA(Lotl)的100mM磷酸緩衝液(pH7.4)中，代替利匹德爾添加1(w/v)%支鏈澱粉(林原制)，除此以外，與實施例7同樣地進行，配製抗梅毒螺旋體抗體測定試劑。(比較例12)在比較例11的(1-2)標本稀釋液的配製中，使用BSA(Lot2)，除此以外，與比較例ll同樣地進行，配製標本稀釋液。(比較例13)在比較例11的(1-2)標本稀釋液的配製中，使用BSA(Lot3)，除此以外，與比較例ll同樣地進行，配製標本稀釋液。(比較例14)在實施例7的(1-2)標本稀釋液的配製中，代替BSA(Lotl)在內含1%BSA(Lot2)的100mM磷酸緩衝液(pH7.4)中，代替利匹德爾添加0.1(w/v)%藻酸鈉(NacakiTesque制)，除此以外，與實施例7同樣地進行，配製抗梅毒螺旋體抗體測定試劑。(比較例15)在比較例14的(1-2)標本稀釋液的配製中，使用BSA(Lot3)，除此以外，與比較例14同樣地進行，配製標本稀釋液。(比較例16)在比較例14的(1-2)標本稀釋液的配製中，使用BSA(Lot4)，除此以外，與比較例14同樣地進行，配製標本稀釋液。評價(4)(1)貯存穩定性試驗對在實施例7、實施例1012以及比較例716中得到的抗梅毒螺旋體抗體測定試劑實施貯存穩定性試驗。在試劑剛製備後以及3(TC下保存標本稀釋液，然後用與評價(3)的(1)相同的方法，測定梅毒標準血清的37T.U.,求得將剛製備後的設為100%時的吸光度變化量的變化率，評價貯存穩定性。通常抗梅毒螺旋體抗體試劑被保存在21(TC下，但通過保存在3(TC下，作為加速試驗，可以評價貯存穩定性。此外，對實施例7、1012，在製備7天後、24天後進行測定。對比較例710，在製備14天後、31天後進行測定。對比較例1113，在製備11天後、20天後進行測定。對比較例1416，在製備5天後、14天後進行測定。結果如圖7所示。如圖7所示，在將利匹德爾作為反應促進劑的情況下，無論是BSA的哪一個批號，貯存穩定性均良好，而為其他反應促進劑的情況下，根據BSA的批號不同而有時貯存穩定性顯著變差。因而，在將利匹德爾作為反應促進劑的情況下，提供不僅準確度高而且貯存穩定性也出色的抗梅毒螺旋體抗體測定試劑成為可能。產業上的可利用性利用本發明，可以提供一種長期貯存穩定性出色、能夠進行梅毒感染的診斷的抗磷脂抗體測定試劑，以及可以防止血清幹擾的發生從而可以準確度良好地進行梅毒感染的診斷的抗梅毒螺旋體抗體測定試劑。權利要求1.一種抗磷脂抗體測定試劑，它是在梅毒感染的診斷中使用的抗磷脂抗體測定試劑，其特徵在於，含有載持有抗磷脂抗原的不溶性載體和共聚物，所述共聚物具有來自2-甲基丙烯醯氧基乙基磷醯膽鹼的鏈段和來自親水性單體的鏈段。2.根據權利要求l所述的抗磷脂抗體測定試劑，其特徵在於，抗磷脂抗原為由心磷脂、卵磷脂以及膽固醇構成的脂質抗原。3.根據權利要求1或2所述的抗磷脂抗體測定試劑，其特徵在於，不溶性載體為具有苯基的聚合性單體的聚合物及/或陰離子性的聚合性單體的聚合物，在成為懸浮液時表面電荷密度以陰離子的解離濃度表示為0.010.4pmol/m2而且為粒徑0.10.7pm的球狀體。4.一種抗梅毒螺旋體抗體測定試劑，它是在梅毒感染的診斷中使用的抗梅毒螺旋體抗體測定試劑，其特徵在於，含有載持有抗梅毒螺旋體抗原的不溶性載體和共聚物，所述共聚物具有來自2-甲基丙烯醯氧基乙基磷醯膽鹼的鏈段和來自親水性單體的鏈段。5.根據權利要求4所述的抗梅毒螺旋體抗體測定試劑，其特徵在於，抗梅毒螺旋體抗原為來自梅毒螺旋體菌體的抗原。全文摘要本發明的目的在於提供一種長期貯存穩定性出色、能夠進行梅毒感染的診斷等的抗磷脂抗體測定試劑，以及可以防止血清幹擾的發生從而準確度良好地進行梅毒感染的診斷的抗梅毒螺旋體抗體測定試劑。本發明是在梅毒感染的診斷中使用的抗磷脂抗體測定試劑，是含有載持有抗磷脂抗原的不溶性載體和共聚物的抗磷脂抗體測定試劑，所述共聚物具有來自2-甲基丙烯醯氧基乙基磷醯膽鹼的鏈段和來自親水性單體的鏈段。文檔編號G01N33/531GK101341408SQ20068004555公開日2009年1月7日申請日期2006年12月7日優先權日2005年12月7日發明者大田哲也,豔李,赤峰隆之申請人:積水醫療株式會社;日油株式會社