生物有機肥複合益生菌劑及其製備方法
2023-10-31 02:17:02 2
專利名稱：生物有機肥複合益生菌劑及其製備方法
技術領域：
本發明涉及生物有機肥複合益生菌劑及其製備方法，屬於農業應用、城鎮綠化和環保等領域。
背景技術：
畜禽糞便、農作物秸稈、城鎮生活垃圾以及園林植物廢棄物是幹擾世界環境和人們健康的直接來源。又由於長期不合理的使用化學肥料，造成部分農田營養成分比例失調， 導致農田生態環境、土壤理化特性和區系土壤微生物受到不同程度的破壞，在一定程度上危及到農產品的安全和人們的生活質量。而生物有機肥不僅提供植物生長所需要養分，補充土壤區系微生物的同時，還能有效的改良土壤板結、防止土壤鹽鹼化、減少化肥用量等特點。因此，生物有機肥在實現世界環境與生態可持續發展方面發揮重要的作用。近年來，隨著農業技術的發展和市場經濟的繁榮，生物有機肥行業也迅速發展起來，特別是在畜禽糞便堆肥方面，國內興辦了很多企業；同時也掀起了以農作物秸稈、城鎮生活垃圾以及園林植物廢棄物為原料腐熟堆肥研究的熱潮。目前多採用自然條件下或加入腐熟菌劑的堆肥發酵。自然條件下，腐熟發酵周期長，不利用產業化生產。加入腐熟菌劑能有效的縮短發酵腐熟周期，提高生產效率，但是生產出的產品不符合生物有機肥的標準。因為添加的腐熟菌劑與土壤微生物菌群不一致，所以土壤區系微生物菌群得不到補充；另外， 雖然有些腐熟菌劑含有土壤微生物菌群中的菌種，但是目前多採用造粒前添加益生菌劑的生產工藝，由於高溫造粒會將這些有益微生物菌群殺死。因此，總達不到生物有機肥國標要求的有效活菌數0. 2億個/克)。
發明內容
本發明的目的是提供一種生物有機肥複合益生菌劑。本發明的另一個目的是提供一種生物有機肥複合益生菌劑的製備方法。本發明生物有機肥複合益生菌劑的製備方法，由下列步驟組成 A、菌種復活
採用微生物假單胞菌(Pseudomonas putida) GSICC 31605、紫色變異鏈黴菌 (Sti^ptomyces violovariabilis) GSICC 41915、根瘤菌(Rhizobium sp. ) GSICC 31813、 褐色球形固氮菌(Azotobacter chroococcum) GSICC 30112、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)GSICC 32828、解澱粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens )GSICC 32826、 賭狀芽孢桿菌(Bacillus cereus) GSICC 32815、地衣芽孢桿菌(Bacillus subtilis) GSICC 3(^85、韋氏芽孢桿菌(Bacillus weihenst印hanensis)GSICC 3沘44、膠凍樣芽孢桿菌(Bacillus mucilaginosus) GSICC 30250、蘇雲金芽抱桿菌(Bacillus thuringiensis) GSICC 32807、魯酵母(Saccharomyces rouxii) GSICC 51930、灰色鏈黴菌鏽色變種 (Streptomyces griseus var. ferrugineus) GSICC 41920、細黃鏈黴菌(treptomyces microflavus) GSICC 41903，以上14種微生物均在甘肅省工業微生物菌種保藏中心(GSMSC)購得。由於菌種長時間保藏於4°C菌種庫中，因此在使用前要進行復活。具體復活方法 取上述14種微生物，在室溫放置1-2天後，分別轉接到裝有復活培養基的試管中，28-30°C 培養5天，就得到活化菌種。本方法用現有細菌培養基可以完成，但效果不是最佳，最佳的菌種復活培養基的重量配比為馬鈴薯20%，葡萄糖2%，牛肉膏0. 3%，蛋白腖1%，氯化鈉0. 5%，瓊脂1. 5%，餘量為水。具體製作取馬鈴薯，去皮、切成塊煮沸30min，然後用200目紗布過濾，再加入上述其他原料，補足水，待瓊脂溶化後分裝試管，121°C滅菌30min。B、混合接種與發酵
將活化好的菌種採用混合接種方法，按照假單胞菌紫色變異鏈黴菌根瘤菌褐色球形固氮菌枯草芽孢桿菌解澱粉芽孢桿菌蠟狀芽孢桿菌地衣芽孢桿菌韋氏芽孢桿菌膠凍樣芽孢桿菌蘇雲金芽孢桿菌魯酵母灰色鏈黴菌鏽色變種細黃鏈黴菌為1-5 1-5 1-5 1-5 1-5 1-5 :1_5 :1_5 :1_5 :1_5 :1_5 :1_5 :1_5 :1_5 的比例接種到 500mL 液體種子培養基中，在，轉速200轉/分的搖床上培養，發酵2-4天；
然後進行擴大發酵，在發酵過程中，14種微生物自動調節菌群比例，經過種子發酵和生產發酵，14種微生物菌群的比例達到最佳微生態平衡狀態，發揮微生物之間最佳的協同作用。首先將菌種轉接到5L液體種子培養基中，在觀_301、轉速200轉/分的搖床上培養， 發酵2-4天；然後將菌種再轉接到50L液體種子培養基中，溫度28-30°C，轉速200轉/分， 發酵2-4天；最後將菌種輸送到500L發酵罐培養基中，溫度，轉速200轉/分，發酵3-5天，可以得到液體複合益生菌劑；
500mL.5L.50L液體種子培養基的重量配比為馬鈴薯20%，葡萄糖2%，牛肉膏0. 3%，蛋白腖1%，氯化鈉0. 5%，具體製作取200g去皮的馬鈴薯，切成塊煮沸30min，然後用200目紗布過濾，再加入上述其他原料補足水，121°C滅菌30min。500L發酵罐培養基的重量配比為糖蜜3-5%，牛肉膏0. 3%，蛋白腖1%，氯化鈉 0. 5%，硫酸鎂0. 05%,磷酸二氫鉀0. 05%,硝酸鉀0. 1%，加水補足500L,調pH值為6. 8-7. 4。C、固體複合益生菌劑的製備
將B得到液體複合益生菌劑與5噸的風化煤(購自新疆天棗源龜茲生物技術有限責任公司)混合均勻，堆放3-5天，然後在55°C烘乾，即可製成固態型粉末，該固體複合益生菌劑活菌數彡30億個/克。用本發明方法就可以製得生物有機肥複合益生菌劑，本發明終產品可保藏6個月。本發明菌劑的使用方法可以配合生物堆肥、有機化肥和復混肥等使用，可以做底肥，也可做追加肥。菌劑與復配肥按照1:100質量比，混合均勻後，底肥施肥量約為 30-40kg/畝，追加肥施肥量約為5-10kg/畝。也可在復配肥生產後，按照按照1:100質量比添加，然後包裝，即成生物有機肥。該生物有機肥保質期6個月，做底肥使用，施肥量約為 30-40kg/畝，追加肥施肥量約為5-10kg/畝。本發明添加的有益微生物菌種具有以下功能
1)褐色球形固氮菌、根瘤菌、灰色鏈黴菌鏽色變種等微生物，具有固定氮素能力，可以減少化學氮肥的用量；2)韋氏芽孢桿菌、灰色鏈黴菌鏽色變種、假單胞菌等微生物，能降解土壤中的農藥殘留和水體汙染物；
3)紫色變異鏈黴菌、膠凍樣芽孢桿菌、灰色鏈黴菌鏽色變種等微生物，能分解土壤中的有機磷，轉化無效磷、鉀等，有利於植物對元素的吸收；
4)蠟狀芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌等微生物，能降解土壤中的矽酸鹽，還原硝酸鹽，改善土壤板結等問題；
5)解澱粉芽孢桿菌、魯酵母等微生物，能耐受鹽鹼土壤，而且能夠代謝鹽鹼成份，從而改良土壤的鹽鹼度；
6)細黃鏈黴菌、灰色鏈黴菌鏽色變種、紫色變異鏈黴菌等微生物，能分泌植物所需激素，促進植物生長、結實，提高產量；
7)細黃鏈黴菌、灰色鏈黴菌鏽色變種、枯草芽孢桿菌、解澱粉芽孢桿菌、蘇雲金芽孢桿菌等微生物，能分泌一些抗生素或產芽孢，可提高作物的抗病性，減少農藥用量。本發明複合益生菌劑含有14種有效菌株，通過混合接種，使其自動調節各種微生物比例，已達到最佳的微平衡狀態。此狀態下，它們協同作用最強。本發明根據土壤微生物生態特性，有針對性的補給土壤短缺有益微生物菌群，配合生物堆肥使用，使生物有機肥有效活菌數達到國標要求，本發明的複合益生菌劑能夠改良土壤、改善土壤貧瘠、板結，降解農藥汙染，防止土壤鹽鹼化，促進植物生長、提高作物產量和抗病性、減少化肥用量等方面發揮重要作用，同時製備方法簡單，易於操作，適合大規模生產和應用。
具體實施例方式下面的實施例可以進一步說明本發明，但不以任何方式限制本發明。在具體實施之前，首先從甘肅省工業微生物菌種保藏中心(GSMSC)獲取14支菌種的斜面。由於菌種長時間保藏於4°C菌種庫中，因此在使用前要進行復活。具體復活方法 從保藏中心取到以上菌種，在室溫放置1-2天後，分別轉接到試管斜面，28-30°C培養5天， 就得到活化菌種。IL菌種復活培養基配方馬鈴薯200g，葡萄糖20g，牛肉膏3g，蛋白腖10g，氯化鈉 5g，瓊脂15g。具體製作取200g去皮的馬鈴薯，切成塊煮沸30min，然後用200目紗布過濾，再加入上述其他原料，待瓊脂溶化後補足水至1L，分裝試管，121°C滅菌30min。實施例1
將活化好的菌種採用混合接種方法，按照假單胞菌紫色變異鏈黴菌根瘤菌褐色球形固氮菌枯草芽孢桿菌解澱粉芽孢桿菌蠟狀芽孢桿菌地衣芽孢桿菌韋氏芽孢桿菌膠凍樣芽孢桿菌蘇雲金芽孢桿菌魯酵母灰色鏈黴菌鏽色變種細黃鏈黴菌 =1:1:1:1:1:1:1:1:1:1:1:1:1:1 比例混合接種到500mL液體種子培養基中，在28°C、轉速200轉/分的搖床上培養，發酵2天。然後轉接到5L 二級種子搖瓶中，在觀！、轉速 200轉/分的搖床上培養，發酵2天。再轉接到50L種子罐中，溫度^°C，轉速200轉/分， 發酵2天。將種子罐的菌種輸送到500L發酵罐中，溫度^°C，轉速200轉/分，發酵3天， 得到液體複合益生菌劑。將得到液體複合益生菌劑與5噸的風化煤混合均勻，堆放3天，然後在55°C烘乾，即可製成固態型粉末，該固體複合益生菌劑有效活菌數為30億個/克。500mL液體種子培養基(一級種子搖瓶培養基)馬鈴薯100g，葡萄糖10g，牛肉膏 1.58，蛋白腖58，氯化鈉2.58。具體製作取IOOg去皮的馬鈴薯，切成塊煮沸30min，然後用200目紗布過濾，再加入上述其他原料補足水，121°C滅菌30min。5L液體種子培養基配方(二級種子搖瓶培養基)馬鈴薯1000g，葡萄糖100g，牛肉膏15g，蛋白腖50g，氯化鈉25g。具體製作取IOOOg去皮的馬鈴薯，切成塊煮沸30min，然後用200目紗布過濾，再加入上述其他原料補足水，121°C滅菌30min。50L液體種子培養基配方(種子罐培養基)馬鈴薯10000g，葡萄糖1000g，牛肉膏 150g，蛋白腖500g，氯化鈉250g。具體製作取IOOOOg去皮的馬鈴薯，切成塊煮沸30min， 然後用200目紗布過濾，再加入上述其他原料補足水，在種子罐中滅菌。500L發酵罐培養基組成及質量含量為糖蜜3%，即15000g ；牛肉膏0. 3%，即 1500g ；蛋白腖1%，即5000g ；氯化鈉0. 5%，即2500g ；硫酸鎂0. 05%,即250g ；磷酸二氫鉀 0. 05%，即250g ；硝酸鉀0. 1%，即500g ；加水補足500L，調節pH值為6. 8。實施例2
改變實施例1中的發酵時間和溫度，即一級液體種子、二級液體種子、種子罐和擴大培養的發酵溫度有改變為30°C，發酵時間有2天延長為3天，同時將糖蜜濃度從3%提高至5%。將得到液體複合益生菌劑與5噸的風化煤混合均勻，堆放時間也有3天延長為5 天。此條件下製成固態型粉末，該固體複合益生菌劑有效活菌數為38億個/克。液體種子培養基配方與實施例1相同。500L發酵罐培養基組成及質量含量為糖蜜5%，即25000g ；牛肉膏0. 3%，即 1500g ；蛋白腖1%，即5000g ；氯化鈉0. 5%，即2500g ；硫酸鎂0. 05%,即250g ；磷酸二氫鉀 0. 05%，即250g ；硝酸鉀0. 1%，即500g ；加水補足500L，調節pH值為6. 8。實施例3
改變實施例1中發酵培養基的PH6. 8為pH7. 4，發酵溫度和發酵時間與實施例2相同。 即，按照假單胞菌紫色變異鏈黴菌根瘤菌褐色球形固氮菌枯草芽孢桿菌解澱粉芽孢桿菌蠟狀芽孢桿菌地衣芽孢桿菌韋氏芽孢桿菌膠凍樣芽孢桿菌蘇雲金芽孢桿菌 魯酵母灰色鏈黴菌鏽色變種細黃鏈黴菌=1:1:1:1:1:1:1:1:1:1:1:1:1:1的比例接種， 一級液體種子、二級液體種子、種子罐和擴大培養的發酵溫度為30°C，發酵時間為3天，pH 值為7. 4，糖蜜濃度3%，堆放時間5天。此條件下製成固態型粉末，該固體複合益生菌劑有效活菌數為35億個/克。液體種子培養基配方與實施例1相同。500L發酵罐培養基組成及質量含量為糖蜜3%，即15000g;牛肉膏0.3%，即 1500g ；蛋白腖1%，即5000g ；氯化鈉0. 5%，即2500g ；硫酸鎂0. 05%,即250g ；磷酸二氫鉀 0. 05%，即250g ；硝酸鉀0. 1%，即500g ；加水補足500L,調節pH值為7. 4。實施例4
改變實施例3中糖蜜濃度為5%，並按照假單胞菌紫色變異鏈黴菌根瘤菌褐色球形固氮菌枯草芽孢桿菌解澱粉芽孢桿菌蠟狀芽孢桿菌地衣芽孢桿菌韋氏芽孢桿菌膠凍樣芽孢桿菌蘇雲金芽孢桿菌魯酵母灰色鏈黴菌鏽色變種細黃鏈黴菌 =1:1:1:1:1:1:1:1:1:1:1:1:1:1的比例接種，一級液體種子、二級液體種子、種子罐和擴大培養的發酵溫度為^°C，發酵時間為3天，PH值為7. 4，糖蜜濃度5%，堆放時間5天。此條件下製成固態型粉末，該固體複合益生菌劑有效活菌數為34億個/克。液體種子培養基配方與實施例1相同。500L發酵罐培養基組成及質量含量為糖蜜5%，即25000g ；牛肉膏0. 3%，即 1500g ；蛋白腖1%，即5000g ；氯化鈉0. 5%，即2500g ；硫酸鎂0. 05%,即250g ；磷酸二氫鉀 0. 05%，即250g ；硝酸鉀0. 1%，即500g ；加水補足500L,調節pH值為7. 4。實施例5
調節接種比例，按照假單胞菌紫色變異鏈黴菌根瘤菌褐色球形固氮菌(AzotcAacter chroococcum)枯草芽孢桿菌解澱粉芽孢桿菌 (Bacillus amyloliquefaciens )蠟狀芽孢桿菌地衣芽孢桿菌韋氏芽孢桿菌膠凍樣芽孢桿菌蘇雲金芽孢桿菌魯酵母灰色鏈黴菌鏽色變種細黃鏈黴菌 =5:5:5:5:5:5:5:5:5:5:5:5:5:5的比例進行接種，其它發酵條件與實施例2相同，S卩，一級液體種子、二級液體種子、種子罐和擴大培養的發酵溫度為30°C，發酵時間為3天，pH值為 6. 8，糖蜜濃度5%，堆放時間5天。此條件下製成固態型粉末，該固體複合益生菌劑有效活菌數為37億個/克。液體種子培養基配方與實施例1相同。500L發酵罐培養基組成及質量含量為糖蜜5%，即25000g ；牛肉膏0. 3%，即 1500g ；蛋白腖1%，即5000g ；氯化鈉0. 5%，即2500g ；硫酸鎂0. 05%,即250g ；磷酸二氫鉀 0. 05%，即250g ；硝酸鉀0. 1%，即500g ；加水補足500L，調節pH值為6. 8。實施例6
改變實施例5發酵培養集的pH為7. 4，其它條件均與實施例5相同，即按照假單胞菌 紫色變異鏈黴菌根瘤菌褐色球形固氮菌(AzotcAacter chroococcum)枯草芽孢桿菌 解澱粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens )蠟狀芽孢桿菌地衣芽孢桿菌韋氏芽孢桿菌膠凍樣芽孢桿菌蘇雲金芽孢桿菌魯酵母灰色鏈黴菌鏽色變種細黃鏈黴菌 =5:5:5:5:5:5:5:5:5:5:5:5:5:5的比例進行接種，一級液體種子、二級液體種子、種子罐和擴大培養的發酵溫度為30°C，發酵時間為3天，pH值為7. 4，糖蜜濃度5%，堆放時間5天。 此條件下製成固態型粉末，該固體複合益生菌劑有效活菌數為37. 5億個/克。液體種子培養基配方與實施例1相同。500L發酵罐培養基組成及質量含量為糖蜜5%，即25000g;牛肉膏0.3%，即 1500g ；蛋白腖1%，即5000g ；氯化鈉0. 5%，即2500g ；硫酸鎂0. 05%,即250g ；磷酸二氫鉀 0. 05%，即250g ；硝酸鉀0. 1%，即500g ；加水補足500L，調節pH值為7. 4。實施例7
接種量與實施例5相同，其它發酵條件與實施例1相同，即按照假單胞菌紫色變異鏈黴菌根瘤菌褐色球形固氮菌(AzotcAacter chroococcum)枯草芽孢桿菌解澱粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens )蠟狀芽孢桿菌地衣芽孢桿菌韋氏芽孢桿菌膠凍樣芽孢桿菌蘇雲金芽孢桿菌魯酵母灰色鏈黴菌鏽色變種細黃鏈黴菌 =5:5:5:5:5:5:5:5:5:5:5:5:5:5的比例進行接種，一級液體種子、二級液體種子、種子罐和擴大培養的發酵溫度為^°C，發酵時間為2天，pH值為6. 8，糖蜜濃度3%，堆放時間3天。 此條件下製成固態型粉末，該固體複合益生菌劑有效活菌數為31億個/克。
液體種子培養基配方與實施例1相同。500L發酵罐培養基組成及質量含量為糖蜜3%，即15000g ；牛肉膏0. 3%，即 1500g ；蛋白腖1%，即5000g ；氯化鈉0. 5%，即2500g ；硫酸鎂0. 05%,即250g ；磷酸二氫鉀 0. 05%，即250g ；硝酸鉀0. 1%，即500g ；加水補足500L，調節pH值為6. 8。實施例8
發酵培養基與實施例6相同，發酵條件與實施例1相同。即按照假單胞菌紫色變異鏈黴菌根瘤菌褐色球形固氮菌(AzotcAacter chroococcum)枯草芽孢桿菌解澱粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens )蠟狀芽孢桿菌地衣芽孢桿菌韋氏芽孢桿菌膠凍樣芽孢桿菌蘇雲金芽孢桿菌魯酵母灰色鏈黴菌鏽色變種細黃鏈黴菌 =5:5:5:5:5:5:5:5:5:5:5:5:5:5的比例進行接種，一級液體種子、二級液體種子、種子罐和擴大培養的發酵溫度為^°C，發酵時間為2天，pH值為7. 4，糖蜜濃度5%，堆放時間3天。 此條件下製成固態型粉末，該固體複合益生菌劑有效活菌數為32億個/克。液體種子培養基配方與實施例1相同。500L發酵罐培養基組成及質量含量為糖蜜5%，即25000g ；牛肉膏0. 3%，即 1500g ；蛋白腖1%，即5000g ；氯化鈉0. 5%，即2500g ；硫酸鎂0. 05%,即250g ；磷酸二氫鉀 0. 05%，即250g ；硝酸鉀0. 1%，即500g ；加水補足500L,調節pH值為7. 4。實施例9
培養條件與實施例2相同，接種比例不同。即按照假單胞菌紫色變異鏈黴菌 根瘤菌褐色球形固氮菌(AzotcAacter chroococcum)枯草芽孢桿菌解澱粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens )蠟狀芽孢桿菌地衣芽孢桿菌韋氏芽孢桿菌膠凍樣芽孢桿菌蘇雲金芽孢桿菌魯酵母灰色鏈黴菌鏽色變種細黃鏈黴菌 =1:1:1:2:2:2:3:3:3:4:4:4:5:5的比例進行接種，一級液體種子、二級液體種子、種子罐和擴大培養的發酵溫度為30°C，發酵時間為3天，pH值為6. 8，糖蜜濃度5%，堆放時間5天。 此條件下製成固態型粉末，該固體複合益生菌劑有效活菌數為38億個/克。液體種子培養基配方與實施例1相同。500L發酵罐培養基組成及質量含量為糖蜜5%，即25000g ；牛肉膏0. 3%，即 1500g ；蛋白腖1%，即5000g ；氯化鈉0. 5%，即2500g ；硫酸鎂0. 05%,即250g ；磷酸二氫鉀 0. 05%，即250g ；硝酸鉀0. 1%，即500g ；加水補足500L，調節pH值為6. 8。以上實施例的實驗結果表明
1、混合接種量和PH值的變化，對複合益生菌劑總有效活菌數的影響不大。2、發酵時間和發酵培養基糖蜜的濃度，對複合益生菌劑總有效活菌數的影響較大。3、發酵溫度對複合益生菌劑總有效活菌數有一定影響。4、在本發明條件內，複合益生菌劑總有效活菌數> 30億個/克。以下實施例是將實施例1得到的複合益生菌劑與牛糞堆肥混合使用效果。實用例1 複合益生菌劑在黃瓜上的應用效果
菌劑與牛糞堆肥按照1:100質量比，混合均勻，塑料大棚黃瓜底肥施肥量為畝。 對照為牛糞堆肥，塑料大棚黃瓜底肥施肥量為畝。在黃瓜生長、結實過程中，觀察植株生長、藥害情況，分析霜酶病、枯萎病病情，計算病情指數、防病效果和增產效果。結果表明試驗組黃瓜霜酶病病指15. 8%，對照組黃瓜霜酶病病指25%，病情減輕36. 8% ；試驗組黃瓜枯萎病病株率8%，對照組黃瓜枯萎病病株率20. 5%，病情減輕60. 9%。另外，驗組黃瓜比對照組提前5天成熟。在提高黃瓜產量方面，試驗組明顯優於對照組，試驗組產量5500kg/ 畝，對照組產量4548kg/畝，驗組比對照組增收20. 9%。實用例2 複合益生菌劑在玉米上的應用效果
菌劑與牛糞堆肥按照1:100質量比，混合均勻。在甘肅省天水玉米試驗基地開展施肥效果試驗，底肥施肥量為40kg/畝。對照為牛糞堆肥，底肥施肥量為40kg/畝。孕穗期追肥添加實驗組複合益生菌劑與牛糞堆肥復配肥施肥量為^g/畝，對照為牛糞堆肥，施肥量為^g/畝。分析隨機取10株玉米，分析其生長發育，衡量指標葉面積指數(LAI)和株高(PH);玉米產量，衡量指標穗長、穗行數、百粒重等，結果見表1和表2。結果表明， 實驗組各項指標均優於對照組。表1 不同施肥對玉米葉面積指數和株高的影響
權利要求
1.一種生物有機肥複合益生菌劑的製備方法，其特徵在於它由下列步驟組成A、菌種復活採用14種微生物，即假單胞菌GSICC 31605、紫色變異鏈黴菌GSICC 41915、根瘤菌 GSICC 31813、褐色球形固氮菌GSICC 30112、枯草芽孢桿菌GSICC 32828、解澱粉芽孢桿菌GSICC 32826、賭狀芽孢桿菌GSICC 32815、地衣芽孢桿菌GSICC 3(^85、韋氏芽孢桿菌 GSICC 32844、膠凍樣芽孢桿菌GSICC 30250、蘇雲金芽孢桿菌GSICC 32807、魯酵母GSICC 51930、灰色鏈黴菌鏽色變種GSICC 41920、細黃鏈黴菌GSICC 41903，取上述14支菌種，在室溫放置1-2天後，分別再轉接到14個裝有復活培養基的試管中，28-30°C培養5天，就得到活化菌種；B、混合接種與發酵將活化好的菌種採用混合接種方法，按照假單胞菌紫色變異鏈黴菌根瘤菌褐色球形固氮菌枯草芽孢桿菌解澱粉芽孢桿菌蠟狀芽孢桿菌地衣芽孢桿菌韋氏芽孢桿菌膠凍樣芽孢桿菌蘇雲金芽孢桿菌魯酵母灰色鏈黴菌鏽色變種細黃鏈黴菌為1-5 1-5 1-5 1-5 1-5 1-5 :1_5 :1_5 :1_5 :1_5 :1_5 :1_5 :1_5 :1_5 的比例接種到 500mL 液體種子培養基中，在，轉速200轉/分的搖床上培養，發酵2-4天；然後轉接到5L液體種子培養基中，在^-30°C、轉速200轉/分的搖床上培養，發酵2-4天；再轉接到50L液體種子培養基中，溫度，轉速200轉/分，發酵2-4天；將種子罐的菌種輸送到500L 發酵罐培養基中，溫度，轉速200轉/分，發酵3-5天，可以得到液體複合益生菌劑；C、固體複合益生菌劑的製備將B步驟得到液體複合益生菌劑與5噸的風化煤混合均勻，堆放3-5天，然後在55°C烘乾，即可製成固態型粉末。
2.根據權利要求1所述的生物有機肥複合益生菌劑的製備方法，其特徵在於所述步驟 A中菌種復活培養基的重量配比為馬鈴薯20%、葡萄糖2%、牛肉膏0. 3%、蛋白腖1%、氯化鈉 0. 5%、瓊脂1. 5%，餘量為水。
3.根據權利要求1所述的生物有機肥複合益生菌劑的製備方法，其特徵在於所述步驟 B中液體種子培養基的重量配比為馬鈴薯20%、葡萄糖2%、牛肉膏0. 3%、蛋白腖1%、氯化鈉 0. 5%，餘量為水。
4.根據權利要求1所述的生物有機肥複合益生菌劑的製備方法，其特徵在於所述步驟 B中發酵罐培養基的重量配比為糖蜜3-5%、牛肉膏0. 3%、蛋白腖1%、氯化鈉0. 5%、硫酸鎂 0. 05%、磷酸二氫鉀0. 05%、硝酸鉀0. 1%，餘量為水。
5.根據權利要求2-4中任何一項所述製備方法製得的生物有機肥複合益生菌劑。
全文摘要
本發明公開了一種生物有機肥複合益生菌劑及其製備方法，步驟為將14支益生菌，假單胞菌、紫色變異鏈黴菌、根瘤菌、褐色球形固氮菌、枯草芽孢桿菌、解澱粉芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、韋氏芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌、蘇雲金芽孢桿菌、魯酵母、灰色鏈黴菌鏽色變種、細黃鏈黴菌活化培養後，按照1%-5%的比例混合接種到500mL液體種子培養基中，然後進行擴大培養，最後將菌種輸送到500L發酵罐中，溫度28-30℃，轉速200轉/分，發酵3-5天，可以得到液體複合益生菌劑。本發明製備的生物有機肥複合益生菌劑在發揮微生物生態優勢，改良土壤、促進植物生長、提高作物產量和抗病性、減少化肥用量等方面發揮重要作用。
文檔編號C12R1/10GK102229900SQ20111013156
公開日2011年11月2日 申請日期2011年5月20日 優先權日2011年5月20日
發明者周劍平, 季彬, 宗有祥, 王治業, 祁宏山, 祝英 申請人:周劍平, 祝英