抑制β₁-腎上腺素受體抗體的突變雙環化受體肽的製作方法

2023-10-25 04:23:32

專利名稱：：抑制β1-腎上腺素受體抗體的突變雙環化受體肽的製作方法抑制β-腎上腺素受體抗體的突變雙環化受體肽本發明涉及包含能形成分子內鍵的僅兩個半胱氨酸殘基的新的β-AR同源環肽_突變體，涉及能形成這些環肽_突變體的線性肽，以及涉及編碼這些環肽_突變體和線性肽的核酸分子。而且，提供了包含所述核酸分子的載體和重組宿主細胞和產生公開的環肽-突變體的方法。進一步提供了包含本發明的肽、核酸分子、載體或宿主細胞的組合物。本發明還涉及利用本發明的肽的治療和診斷的手段、方法和用途以及用於檢測如抗-βf腎上腺素能受體抗體的抗_腎上腺素能受體抗體的手段、方法和用途。未知病因學的漸進性心臟擴大和泵衰竭被稱為「特發性」擴張性心肌病(DCM)(Richardson1996Circulation，93，841-842)。DCM是嚴重性心力衰竭的主要原因之一，年發病率為每一百萬人中有高達100例的患者，流行程度為每一百萬人中有300-400例患者(AHA報導2007)。編碼肌細胞結構蛋白的基因突變(Morita2005)和包括酒精、蒽環類抗生素和最近治療上使用的單克隆抗體(例如曲妥單抗)的若干心臟毒素約佔擴張性心肌病(DCM)病因的三分之一(Chien2000,FabrizioandRegan1994)。然而對剩下三分之二的病因學了解甚少。目前絕大部分的DCM被認為是源於導致急性心肌炎的初始(主要為病毒性的)感染，急性心肌炎在免疫系統活化時可進展為(慢性)自身免疫性心肌炎而導致心臟擴大和嚴重的充血性心力衰竭；後述的進展特別出現在伴隨如下(a)或(b)時(a)針對心臟功能所必需的獨特的肌細胞肌纖維膜蛋白或膜蛋白的自身抗體形成(Freedman2004，Jahns2006),(b)心肌慢性炎症和病毒持續存在(Kilhl2005)。這些最近的研究結果被DCM患者經常伴有細胞免疫和體液免疫兩者的改變這一事實(Jahns2006,Limas1997，Luppi1998,Mahrholdt2006)進一步鞏固。在這種情況下，初始的急性炎症反應可進展為一種輕度的炎症(MacLellan2003)，其促進異常的或誤導的對初次感染觸發劑的免疫應答(Freedman2004,Kuhl2005,MacLellanandLusis2003,Maekawa2007,Smulski2006)。在體液反應的環境下，已發現大多數DCM患者產生了針對包括下述的多種心臟抗原的交叉反應抗體和/或自身抗體線粒體蛋白(例如腺嘌呤核苷酸轉運體，硫辛醯胺和丙酮酸脫氫酶(Pohlner1997，Schultheiss1985，Schultheiss1988，Schulze1999))、肌纖維膜蛋白(例如肌動蛋白、層粘連蛋白、肌球蛋白、肌鈣蛋白(Caforio2002,Goser2006,Li2006,Neumann1990,Okazaki2003))和膜蛋白(例如細胞表面腎上腺素能或蕈毒能受體(Christ.2006，Fu1993，Jahns1999b,Magnussonl994)。然而看起來這些中只有幾個選擇的抗體自身能夠導致心肌組織損傷和誘導嚴重的充血性心力衰竭。另外，個體基因遺傳傾向(包括各自的人白細胞抗原(HLA)-和主要組織相容性複合物(MHC)-表型(Limas1996))也可能明顯地促進針對自體的免疫反應的易感性和疾病的表型表達(Limas2004，MacLellan2003)。諸如膜受體的肌細胞表面分子與病毒或細菌蛋白間的同源性被提議作為通過抗原模擬產生內源性心臟自身抗體的機制(Hoebeke1996,Mobini2004)。查加斯氏心臟病(Chagas』heartdisease)，一種慢性進展的炎性心肌病，是這一機制最顯著的實例之一(Elies1996，Smulski2006)。這一疾病起源於原生動物克氏錐蟲(Trypanosomacruzi)感染；在大約30%查加斯氏患者中，克氏錐蟲的核糖體Ρ2β蛋白與P1-腎上腺素受體(^1-AR)的第二細胞外環的N-末端半段間的分子模擬導致交叉反應抗體的產生(Ferrari1995)。因為來自DCM患者的受體-自身抗體優先地識別同一環的C-末端半段(Wallukat1995)，故推測這些抗體可能來源於P1-AR和迄今未鑑定出的病毒病原體(Magnusson1996)間的分子模擬。另一種導致內源性心臟自身抗體產生的可能更相關的機制為初次心臟損傷後伴隨「關鍵量」的抗原性決定子從肌細胞膜或細胞質中的(快速的或慢性的)釋放，這些抗原決定子原先不暴露於免疫系統。這種損傷最可能是發生在導致肌細胞凋亡或壞死的急性感染(心肌炎)、中毒或缺血性心臟疾病(心肌缺血)中(Caforio2002，Rose2001)。然後心肌自身抗原向免疫系統的呈遞誘發自身免疫反應，其在最壞的情況下導致免疫介導的永久性肌細胞損傷，這涉及細胞(例如T細胞)或體液(例如B細胞)免疫反應，或先天性和適應性免疫系統的共活化(Eriksson2003，Rose2001)。從病理生理學角度來看，將心臟特異性自身抗體的可能的有害性(例如誘導心肌病)與相應靶標的可及性和功能的關聯性聯繫起來是合理的。對自身抗體而言，肌細胞表面受體是可容易地接近的(0kaZaki2005)。兩種最有希望的候選物為心臟的βI-AR(代表心臟中佔優勢的腎上腺素受體亞型)和Μ2-毒蕈鹼性乙醯膽鹼受體，針對這兩種受體的自身抗體已在DCM患者中檢測到(Fu.1993，Jahns1999b，Matsui1995)然而抗毒蕈鹼的抗體(表現出對心臟M2乙醯膽鹼受體的類激動劑作用)主要與竇房水平的負性變時性效應有關(例如竇房結功能障礙，心房纖顫(Baba2004，Wang.1996))，激動性抗βfAR抗體與心室水平的嚴重心律失常的發生(Christ2001，Iwata2001a)以及與最終轉變為左心室增大和漸進性心力衰竭的(適應不良的)左心室肥大的發展(Iwata2001b,Jahns1999b，Khoynezhad2007)這兩者有關。這兩種自身抗體呈現出針對各自受體的第二細胞外環。為產生自身免疫應答，肌細胞膜蛋白(例如受體)必須降解成能與宿主的MHC或HLAII類分子形成複合物的小的寡肽(Hoebeke1996)。就人類β^AR而言，基於計算機的對潛在免疫原性胺基酸片段的分析顯示，該受體分子包含B-和T-細胞表位並可被自身抗體接近的唯一部分實際上是預測的第二細胞外受體環(P1-EC11)(Hoebeke1996)。這可以解釋第二環肽在不同的動物模型中用於產生P1-特異性受體抗體的成功應用(Iwata2001b,Jahns.2000,Jahns1996)。而且，在最近十年中，幾個研究組在不同的免疫測定(全細胞酶聯免疫吸附測定，免疫沉澱反應，免疫螢光)中已獨立地證實了抗體第二環優先地識別完整天然的βfAR，這表明它們是「構象的」(Hoebeke1996,Jahns2006)。功能測定揭示相同的抗體也影響受體功能，諸如細胞內cAMP-產生和/或cAMP-依賴性蛋白激酶(PKA)活性，提示它們可以作為P1-AR活性的變構調節劑(Jahns2000,Jahns2006)。也可通過Warne(2008Nature.DOI10.1038)分析β「AR的結構。按照Witebsky，s要求(Witebsky1957)，疾病的自身免疫病因學的間接證據需要鑑定觸發劑(例如作為病因的自身抗原)，以及誘導實驗性動物中針對自身抗原的免疫應答，其隨後必須發展為類似的疾病。然而，直接的證據需要自一動物向同一物種中另一動物轉移同源性致病抗體或自身反應T細胞來再現疾病(Rose1993)。為分析抗P1-AR抗體的致病潛力，Jahns等選擇了體內實驗方法，其滿足Witebsky對自身免疫性疾病直接證據的標準。通過針對β^EC1J人類與大鼠間100%序列同源性；間接證據)免疫近交系大鼠誘導DCM；然後通過大鼠抗「βrAR自身抗體」的等基因轉移在健康動物中再現疾病(直接證據)(Jahns2004)。動物發生漸進性左心室(LV)擴張和功能失調，LV壁增厚度的相對下降和βfAR的選擇性下調，這一特徵也可見於人類DCM(Lohse2003)。這些結果，結合體內抗體激動劑樣的短期效應(Jahns2004)，提示誘導的和轉移的心肌病表型這兩者主要歸因於通過刺激型抗βfAR抗體獲得的適度但持久的受體活化。基因或藥理學處理後所觀察到過量的和/或長期的P1-AR活化的心臟毒性效應而獲得的大量數據支持了這一假說(Engelhardt1999,Woodiwiss2001)。因此，現在可認為抗^-AR誘導的擴張性免疫性心肌病(DiCM)自身結合其他的已確定的諸如重症肌無力或Graves，疾病的針對受體的自身免疫性疾病(Freedman2004Hershko2005，Jahns2004，Jahns2006)yMt^IES#(pathogeneticdiseaseentity)。心臟自身抗體的臨床重要性難以評估，因為上述抗體作為天然免疫系統全部的一部分，在健康人群中也可以檢測到這種抗體的低滴定量(Rose2001)。然而，關於功能性活化的抗P1-AR抗體，先前來自Jahns等的數據顯示，如果使用基於以天然構象呈遞靶標(例如P1-AR)的細胞系統的篩選方法，抗βfAR抗體在健康個體中的流行程度是幾乎可以忽略的(<)(Jahns1999b)。通過利用後者的篩選方法，也可以在慢性瓣膜或高血壓性心臟病的患者中排除抗P1-AR自身抗體的出現(Jahns1999a)。相比之下，刺激性抗βfAR的流行程度在缺血性心肌病(ICM)中為約10%、在擴張性心肌病(DCM)中為約30%(Jahns1999b)，這顯著高於健康對照組，但是處於以前報導的關於DCM集合(33%到95%流行程度)較低的範圍(Limas1992，Magnusson1994，Wallukat1995)。似乎可以想像得到的是用於檢測功能性活化的抗P1-AR自身抗體的篩選方法的差異很可能造成了過去報導的流行程度的寬泛範圍(Limasl992)。實際上，只有很少部分的ELISA-確定的人抗^1-AR自身抗體能結合到位於細胞表面的天然h-AR，只有這一部分識別(如免疫螢光所確定的)和活化(如細胞的cAMP和/或PKA活性所確定的)表達在完整的真核細胞膜的AiB1-ARCJahns2000,Jahns1999b)。因此，以靶標天然構象呈遞靶標的細胞系統代表了在用於功能性相關抗P1-AR自身抗體的篩選中的基本工具(Nikolaev2007)。臨床上，DCM中抗βrAR自身抗體的存在顯示與更嚴重地降低的心臟功能(Jahns1999b)、更嚴重的室性心律失常的發生(Chiale2001)和心源性猝死的高發病率(Iwata2001a)有關。對比隨訪時間超過10年的抗體陽性和抗體陰性DCM患者所獲得的最新數據不但確定了在活化抗βfAR存在情況下室性心律失常的高患病率，而且揭示了抗體陽性預示幾乎增加了3倍的心血管死亡率-風險(St0rk2006)。總之，可獲得的臨床數據強調了DCM中功能性活化的抗i^-AR自身抗體的病理生理學的關聯性。目前普遍所接受的一種藥理學的策略為使用阻斷劑以減弱或甚至消除自身抗體介導的刺激性效應，至少如果阻斷劑確實能預防抗體誘導的P1-AR的活化(Freedman2004，Jahns2000,Matsui2001，Jahns2006)。實際上新的治療方法包括通過非選擇性的或選擇性的免疫吸附去除刺激性抗β^AROfershko2005，Wallukat2002)或抗β!-EC11抗體和/或自身產生抗β!-EC11的B細胞(即免疫耐受的誘導)的直接靶向作用(Anderton2001)。然而，因為免疫球蛋白耗竭後感染的風險性增加，出於安全考慮，非選擇性免疫吸附需要人IgG的取代物(Felix2000)，其有本領域中已知的取代的人蛋白的所有可能的副作用，包括嚴重過敏反應和死亡。WO01/21660公開了某些與β^AR的第一和第二環的表位同源的肽並建議將這些肽用於擴張性心肌病(DCM)的醫療幹預。即便W001/21660概略地提及可將肽進行修飾以保護它們免遭血清蛋白酶降解，例如通過環化作用，但沒有給出相應的實例和實施方案，也沒有所建議的肽對DCM進程或對受體-抗體滴定過程的任何體外或體內的影響。此外，WO01/21660中意圖採用上文提及的非選擇性的免疫吸附方法，其具有相應提及的風險。此外，相比之下，刺激性抗P1-EC11抗體的活性誘導後6周，使用新開發的^-EC11同源性環肽(例如β!-EC11-CPs)。β^EC11-CPs為包含3個半胱氨酸殘基的環肽並因此能形成分子內鍵，從而有個別地形成兩個分子內鍵的潛在性選擇(另外N末端和C末端間的環化作用)。β^EC11-CP顯著性減少了循環的抗β^EC11抗體的數量，有效地預防了心臟擴張和功能失調的發展(Boivin2005)。WO2006/103101中也公開了上文提及的β^EC11-CPst5結合現有技術，本發明潛在的技術問題是提供改進的和易於獲得的手段和方法，用於與抗β-AR抗體尤其是抗^^(^抗體相關的疾病的醫療幹預。所述技術問題是通過權利要求中表徵的實施方案的提供得以解決的。因此，在第一方面，本發明涉及β-AR同源性環肽-突變體(本文中也稱為環狀肽或環肽等)，具體涉及βrAR同源性環肽_突變體，即β!-EC11同源性環肽-突變體。這些環肽_突變體/環狀肽的結構的特徵在於能夠形成只有一個單獨的分子內二硫鍵。具體地，在第一方面，本發明涉及式I的環狀肽eyeIo(x-xh~Cys-x-xa-xb-xc-x-Cys-y-xj-x)(I),其中a)X為除Cys以外的胺基酸；b)h為1至15的任一整數；c)i為0至14的任一整數；d)x%Xb和Xc的一個為Pro；e)y為除Cys以外的胺基酸；和f)環狀肽由至少16個且最多25個胺基酸組成。如下文所討論的，特別優選的具體實施方案為式VII、IX、IX'、VI或VIII描述的具體環狀肽。本發明解決了上文確定的技術問題，因為如下文和所附的實施例所記載的，令人驚訝地發現含有僅兩個半胱氨酸的突變環狀肽也能夠抑制抗β-AR抗體，因此能夠用於抑制刺激性抗βrAR抗體，所述兩個半胱氨酸能形成一個確定的、單獨的分子內二硫鍵。此外，在本發明上下文中還令人驚訝地發現，在構象抗β-AR抗體的識別或清除以及抗體中和(即藥學)潛力兩個方面，本文描述和提供的具有環狀結構的肽突變體(例如環狀肽)都優於它們的線狀對應物。分別通過示例性地應用ELISA競爭性測定和功能性(cAMP)FRET-測定獲得這些研究結果。另外，能夠容易地獲得/製備、生物化學上表徵以及純化包含僅兩個半胱氨酸的本發明的環狀肽，所述兩個半胱氨酸能形成單個確定的、單獨的分子內二硫鍵。這在需要同一環肽異構體的純化部分時特別正確。在本發明的環境下，避免了包含具有不同分子內二硫鍵的環肽異構體的環肽異構體(即立體異構體)的混合物。如下文所記載的，因為這種避免，能夠獲得特異的純淨的醫學產品(符合GMP標準)，其包含均具有同一分子內二硫鍵的異構體。在本發明的上下文中以及如所附的實施例所描述的，還有一個令人驚訝的發現半胱氨酸殘基的一個與絲氨酸殘基交換的精確性顯著地決定了衍生於β!-EC11的環狀肽的抗體中和效價強度。具體地，如分別地在本文示例地和優選地公開的25-meric環肽(式VII/IX)的18位、在本文示例地和優選地公開的22-meric環肽(式IX)的17位或在本文示例地和優選地公開的18-meric環肽(式VI/VIII)的14位的Cys—Ser交換的Cys—Ser交換產生了具有極好的體外抗體中和以及藥理學效應(圖.4-11和27)的環肽，而令人驚訝地，分別在本文示例性公開的25-meric、22-meric或18-meric環狀肽的17、16或13位的Cys—Ser交換幾乎沒有抑制效應。既不能在它們作為抗體_清道夫的性能方面檢測到這種抑制效應，也不能在它們抑制功能性抗體效應的能力方面檢測到這種抑制效應，例如，如體外受體_刺激的中和作用所顯示的(例如圖.4-10)。在本發明中還有一個發現能夠通過包含22個胺基酸的第二環-同源環化肽獲得ECII-^1-AR結構域的近乎完美的空間模擬，所述22個胺基酸例如人βrAR公開的原始一級序列的21個胺基酸，即胺基酸200(R)到221(T)(根據Frielleetal.1987，PNAS84，pages7920-7924編號)加上一個額外的胺基酸殘基(例如甘氨酸(G))在222位上閉合合成環以形成22AA環肽。不受理論約束，環狀肽的心臟保護和免疫調節活性很大程度上取決於它們的構象。另外，在本發明中發現在(預測)的環閉合位點上(或其相應的位置上)導入最小的天然存在的胺基酸-甘氨酸使對抗βrAR自身抗體的結合增強，即明顯進一步增加了22ΑΑ肽與ECII-β「AR結構域的相似性。具體地，所附的實施例等顯示了cyc22AA環肽與其它較大的ECII-模擬環肽(例如cyc25AA肽)或較小的ECII-模擬環肽(例如cyclSAA肽)相比，具有顯著提高的體內抗體阻斷功效。對上述22AA環肽的計算機輔助模型研究證實了預測的第二細胞外環結構的極好的模擬，當與預測的天然第二細胞外環反向螺旋(也見於附圖24)相對比時，計算的差異在環肽基部(而不是預測的抗體結合位點)僅4.5埃(4.5人)大小。而且，本文和附加的實施例中顯示，特別是所述22AA環肽非常高效地降低了抗βrAR自身抗體的滴定度。因為存在於環狀22AA肽的三個半胱氨酸中的一個的取代允許剩餘的兩個半胱氨酸間引入增強的二硫鍵(作為第二」內部」環，經雙環化作用產生)，產生的環狀22AA環肽也代表了生物化學上明確定義的產物(也見於圖25和26)。還令人驚訝地發現在25位(25-meric環肽-突變體)或18(18-meric環肽-突變體)上的GlnoD-Glu交換沒有顯著地影響環肽的阻斷能力，與它們的長度無關；例如如圖6，7和9所顯示的25與18個胺基酸。下文的實施例也證明了本文所公開的環狀肽顯示了改進的特徵，例如與包含3個半胱氨酸殘基的肽相比(例如WO2006/103101中所公開的Cys/Cys環狀肽)。本發明環狀肽的改進特徵的實例有極佳的阻斷抗βrAR抗體的能力及根據GMP標準提高的可生產性。在本發明中，體外發現通常經體內試驗證實(圖12-16和28/29)。令人感興趣的是，Cys18,17sai4—Ser18,17sai4突變的環肽與其相應的線性肽相比的阻斷能力的差異甚至在體內更為顯著(圖5，7和14-16)。已建立的抗P1-腎上腺素的抗體誘導的自身免疫-心肌病大鼠模型(Jahns，2004)用於評價體內產生的^1-EC11同源的環肽突變體的功效。體內數據表明，公開的突變環肽(例如18AACys/Ser環肽)的功效可能同等地取決於給藥的劑量(圖14-16)。另外，體內實驗顯示突變環肽的抗體阻斷能力似乎沒有被胺基酸自25-meric到18-meric環肽的胺基酸數量的減少所影響；體外和體內數據顯示這兩個含有2個半胱氨酸的單個二硫鍵的25AACys/Ser或18AACys/Ser環肽突變體有極好的可比性。然而應該注意的是，1.Omg/kg25AA-mericCys/Ser及高劑量(即4.Omg/kgBw)18AACys/Ser突變體都導致了抗體_滴定度最初瞬間的增加從而使受體抗體滴定度對三分之一或四分之一環肽應用的顯著性減少延遲(治療的第三或第四個月)。1.0或2.Omg/kgBw劑量的18AACys/Ser環肽突變體均未發生這一現象(圖16B，C)。特別地，如本文所公開的ISmeric或25meric環狀肽給藥的動物未表現出異常的體徵，只檢測到給藥的肽的期待的效應，即抗P1-AR抗體阻斷作用。相應地，本文所提供的肽在應用的劑量方案未顯示出不良的副作用或毒性。這在本文中通過下述現象的顯示被進一步證實本發明的環狀肽對腎臟無毒性(未檢測到腎小球膜的機械性阻塞；圖23)。另夕卜，指示腎臟功能的常規實驗室參數在環狀肽應用12個月下仍然正常，與未治療的對照的動物相比沒有差異(圖22A，B)。本發明的突變的環肽的抗體阻斷能力不受肽長度的影響，只要肽不短於18個胺基酸，並不超過25個胺基酸。這一點通過肽的胺基酸數目自25到18的減少被示例性地證實。在18到25格胺基酸範圍內，本發明具有22個胺基酸的環狀肽是最有效的，因此具有22個胺基酸的環狀肽為特別優選的實施方案。這種特別優選的22mer環狀肽的實例顯示於式IX中。本發明的環肽突變體的優勢之一為_通過將一個特定的半胱氨酸(優選對應於βi-AR胺基酸序列的Cys216的Cys)突變為絲氨酸殘基並通過經由另一S-S的特異性環化方法加強獨特的可能的分子內S-S鍵形成-它們的構象限制(conformationalrestraint)是增加的。與本領域已知的肽相比，本發明的肽增加的抑制產生的分子較好地模擬在細胞表面上的第二、^(^環的天然構象中呈現的表位。諸如比索洛爾的β阻斷劑顯著降低了心率和血壓，所述β阻斷劑用於治療擴張性心肌病和其他由刺激性抗P1-AR抗體導致的疾病的領域。與此相比之下，本發明突變環肽的體內應用對肺臟功能、心率或血壓沒有負面影響(圖20和21)。另外，大量評價肝臟和腎臟功能的重要的實驗室參數沒有受到重複的環肽注射的影響(圖22a/b和23)。因此，本發明的環狀肽尤其適用於不然不能應用β阻斷劑治療的特殊患者組，例如已患有心動過緩的病人，或對那些因為禁忌症而不可能使β阻斷劑的患者(比如那些患有阻塞性肺疾病或低血壓的患者)。特別地，如所提及的，相比於利用衍生自仍含有3個半胱氨酸的P1-EC11W(環狀)肽(例如如在WO2006/103101中所公開的)的手段和方法，本發明的手段和方法的另外優勢是能夠避免環肽異構體混合物的形成。在包含3個或更多Cys殘基的肽的環化期間形成的不同環肽異構體混合物的生化表徵是費力的。因此，當利用包含3個或更多個Cys殘基的肽時，生產僅包含一種類型環肽異構體的純環狀肽部分耗費巨大的時間和財力。當在GMP標準下生產環狀肽時尤其這樣。與此相比之下，本發明的環狀肽作為同一異構體的純化部分可被容易地表徵和生產。這帶來了高度的再現性。本發明的肽的特別優勢是避免了必須被分離且通過複雜的測試進行表徵的異構體混合物，這樣最終省略了至少另外一步的生產步驟(分離和/或生化表徵)(也見於Sewald2002)。本發明尤其基於所附的實施例描述的實驗。在這些實施例中，β!-EC1125ΑΑ-環肽的17位或18位的半胱氨酸的一個被絲氨酸殘基取代(Cys17^si8-Ser17^s18突變)，從而可形成只有一個單獨的、單一分子內二硫鍵(S-S)(圖1)。像這樣的措施提供了減少副作用和保持或提高本發明的構建體的生物功效的潛能。與現有技術中形成異構體混合物的肽相比，可通過簡單、穩健和可高度重複的生產過程獲取本發明的環狀肽。這些能夠按比例的有效增加。而且這些過程避免了異構體混合物的分離，並適合GMP標準。附加的實施例提供了相應的生產/製備方法。在所附的實施例中，尤其通過引入「DGlu」突變(例如在環狀肽的(環)閉合位點引入；如圖2所示的Gln^DGlii突變)來實現本發明的肽的環化。而且，在本發明的另外的環肽突變體系列中，胺基酸數量自25AA減少到22AA，並進一步減少到18AA。這一措施提供了使構建體潛在的免疫副作用降低到最小的潛力。18AA環肽_突變體包含14位或13位上的半胱氨酸一絲氨酸交換(分別包含Cysl3-Serl4或Serl3-Cysl4突變環肽的18AA)，所述半胱氨酸一絲氨酸交換與例如在環狀肽的環閉合位點的(另外的)穀氨醯胺_交換/D-穀氨酸(GlneD-Glu突變)組合或不與其組合(圖2)。22AA環肽-突變體包含位置17上cysteine—serine交換(包含Cys16-Ser17的22AA)，選擇性地結合位置22上引入的甘氨酸殘基(環狀肽的可能的環閉合位點；圖24)。總之，本文提供的實驗性體外數據以及體內數據清楚地表明，所公開的突變環狀肽的抗體阻斷能力不受環肽胺基酸數量自25-meric到18-meric減少的影響，當使用的劑量為0.25至5.Omg/kgBw，尤其為1.0至2.Omg/kgBw時。體內外數據顯示了劑量在1.Omg/kgBw的包含2個半胱氨酸的單個二硫鍵的25AACys/Ser(式VII/IX)或18AACys/Ser(公式VI/VIII)的兩個環肽突變體有極好的可比性；圖16到21。然而，依照本發明，19到24AA的「中間」環狀肽顯示了增加的活性。具體地，依照本發明，22AA環狀肽顯示了增加的活性。上述「中間」環狀肽的優選實例為包含或由如式IX中所顯示的胺基酸殘基組成。而且，半胱氨酸殘基的一個與絲氨酸殘基交換(即Cys/Ser或Ser/Cys-突變體)的精確的性質顯著地決定了所公開的環狀肽的體外及體內的效價強度(圖6-10和14-16)。β-腎上腺素受體(β-AR)，特別是βr腎上腺素受體(βrAR)為本
技術領域：
所熟知。例如，人^1-AR(也稱為腎上腺素β-l-受體(ADRBl))的核酸和胺基酸序列(SEQIDNO.40)能夠從資料庫條目ΝΜ_000684或NP_000675獲取。已知β-ARs形成兩個在本文中稱為EC1和EC11或β(D-EC1和β(D-EC11的細胞外結構域。如上所述，本發明的環狀肽與β^EC11共享序列相似性，特別是與人^-AR的胺基酸片段DEARRCYNDPKCXDFV(SEQIDNO.33)或RAESDEARRCYNDPKCCDFVTNR(SEQIDNO.34)(分別為204-219位或200-222位的胺基酸)共享序列相似性，或者，特別是與人P1-AR的胺基酸片段DEARRCYNDPK(SEQIDN0.45)或ESDEARRCYNDPK(SEQIDNO.46)共享序列相似性。本文所使用的β-AR優選地指βr腎上腺素受體(βrAR)，更優選地是如上文所描述的人βrARo本文所提供的環狀肽具備至少一個選自以下的特徵a)能夠結合抗βr腎上腺素受體(βfAlOECn環的(自身)抗體；b)能夠抑制βrAR與抗βrAR的EC11環的(自身)抗體間的相互作用；c)模擬在βrAR的EC11環的天然構象中呈現的至少一個表位；d)能夠降低抗體介導的βfAR的活化。Warne(2008Nature.DOI10.1038)尤其分析了βI-AR的結構。如上文所提及的，本發明的環狀肽是由通式環(X-Xh-CyS-X-Xa-Xb-Xe-X-Cys-y-Xi-x)(式I)所確定的。在該式中，「y」可以是除Cys外的任一胺基酸殘基，優選地，「y」可以為除Pro和Cys外的任一胺基酸殘基。一般地，「y」可為任一胺基酸，只要這一胺基酸不會與文中所提供的環狀肽的另一胺基酸(例如與文中所提供的環狀肽的另一Cys)形成分子內鍵(例如二硫鍵)。優選地，「y」可為類似於Cys的任一胺基酸(即具有類似的化學結構和/或三維肽結構內類似的性能)，除外的情況是它不會與文中所提供的環狀肽的另一胺基酸(例如與文中所提供的環狀肽的另一Cys)形成分子內鍵(例如二硫鍵)。更優選地，「y」可以是除Cys外的任一極性胺基酸，如蘇氨酸Thr和絲氨酸Ser。最優選地，本文所提供的環狀肽中，「y」為Ser或Ser類似物。本文中「Ser類似物」表示具備與Ser具有相似的結構特徵的殘基，特別是胺基酸殘基。例如「Ser類似物」指的是具備與Ser的化學結構相似的和/或與Ser在三維肽結構中性能相似的(胺基酸)殘基。進一步的實例中，「y」也可為硒代半胱氨酸或其類似物。總之，像「除Cys外的任一胺基酸(殘基)」或「不同於Cys的胺基酸(殘基)」等的術語的意義都為本領域技術人員所熟知。具體地，如本發明自始至終所使用的，上述術語指的是任一胺基酸，只要這一胺基酸不與文中所提供的環狀肽的另一胺基酸(例如與文中所提供的環狀肽的另一Cys)形成分子內鍵(例如二硫鍵)。如所提及的，本發明環狀肽的一個主要特徵為它們包含能形成分子內鍵的僅兩個半胱氨酸。例如，上述環狀肽能夠通過用一個不同的胺基酸取代β^EC11的同源肽的第三個Cys來獲得。因此，待被取代的Cys為對應於βrECn的第二個或優選第三個Cys，其彼此直接鄰近(人βfAR的215位和216位胺基酸(也見於NP_000675和SEQIDNO.40)。本文中這兩個Cys殘基指的是如」Cys-Cys」，「Cys/Cys」，"Cys215-Cys216」或「Cys215/Cys216」寸Jο因此將產生的如文中所公開的合成突變肽或突變體稱為「Cys-Ser」，"Cys/Ser","Cys13,16sai7-Ser14,17或18」或"Cys13,16sSl7/Ser14,17sa18」突變肽或突變體或者「Ser-Cys」，「Ser/Cys」，「Ser13或17-Cys14或18」或「Ser13或17/Cys14或18」突變肽或突變體，這取決於哪個半胱氨酸Cys被取代以及突變肽包含多少個胺基酸。可選地，通過特定位置上具體胺基酸的交換的參照來確定如本文所公開的突變肽。然後，例如突變肽/突變體被稱為"Cys14,17或18—Ser14il7sai8」突變肽/突變體或"Cys13或17—Ser13g8l/'突變肽/突變體，分別取決於對應於βfAR的Cys216的Cys或對應於βrAR的Cys215的Cys是否被不同的胺基酸取代。指數「14，17或18」或「13或17」涉及本發明的示例性環狀肽中的位置。其中位置1對應於如式I，即環(2rXh-CyS-X-Xa-Xb-Xe-X-CyS-y-Xi-X)中所確定的第一個「X」。因此，使用的如"Cys13-Ser1/或「Cys13/Ser14」突變肽/突變體的術語與「Cys14—Ser14」突變肽/突變體具有同樣的意義，而且在具體實施例中，指的是本文所公開的ISmer肽。使用的如"Cys16-Ser1/'或「Cys16/Ser17」突變肽/突變體的術語與「Cys17—Ser17」突變肽/突變體具有同樣的意義，而且在一具體實例中，指的是本文所公開22mer肽。使用的如"Cys17-Ser18」或「CySl7/Ser18」突變肽/突變體的術語與"Cys18—Ser18"突變肽/突變體具有同樣的意義，而且在一具體實例中，指的是本文所公開的25mer肽。類似地，使用的如"Ser13-CyS14，，或「Ser13/CySl4」突變肽/突變體的術語與「Cys13—Ser13」突變肽/突變體具有同樣的意義，而且在一具體實例中，指的是本文所公開的ISmer肽，並且使用的如"Ser17-Cys18"或「Ser17/Cys18」的術語與"Cys17—Ser17"突變肽/突變體在具有同樣的意義，而且在一具體實例中，指的是本文所公開的25mer肽。上文所給出的示例性指數指的是分別在本文所公開的具體的18mer、22mer或25mer肽中所示的胺基酸的位置。在本發明中，給出的關於本文公開的環狀肽所示胺基酸位置的起始點為環狀肽線性主鏈的N-末端胺基酸(像式I中的第一個「X」，見於上文)。給出的關於本文公開的線性肽所示胺基酸位置的起始點為其N-末端胺基酸。如本文所提供的發現和附加的實施例展現了沒有任何半胱氨酸Cys突變的25AA，22AA和18AA環肽與環狀25AA，22AA或18AACys18,17gSl4—Ser18,17或14(Cys-Ser)突變體、而不是與環狀25AA或I8AACys17sai3—Ser17g8l3(Ser-Cys)突變體的可比性。還如上文所提及的，本發明的環狀肽的式中，h能夠是1至15的任一整數，優選為5至9的任一整數，和/或i能夠為0至14的任一整數，優選1至14，更優選0至6且甚至更優選1至6的任一整數。因此，h能夠為1，2，3，4，5，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15和/或i能夠為0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13或14。優選地，h為5，8或9和/或i為3，4或6。更優選地，h為8和/或i為4。在本發明特別優選的實施方案中，Xh代表特定胺基酸片段DEARR(SEQIDNO.35),AESDEARR(SEQIDNO.47)或RAESDEARR(SEQIDNO.36)和/或Xi代表特定胺基酸片段DFV(SEQIDNO.37)，DFVT(SEQIDNO.48)或DFVTNR(SEQIDNO.38)。在本發明更優選的實施方案中，xh代表特定胺基酸片段AESDEARR(SEQIDNO.47)和/或Xi代表特定胺基酸片段DFVT(SEQIDN0.48)。本發明的環狀肽(或其環狀部分)可以由至少18個胺基酸、且最多25個胺基酸組成。因此，本發明的環狀肽可以由18，19，20，21，22，23，24或25個胺基酸組成，其中特別地，優選18或25個胺基酸，且特別地，最優選22個胺基酸。在次優選的實施方案中，還考慮較小的肽，即包含16個或17個胺基酸的肽。在本發明中，特別優選的環狀肽為如下的肽長度為(21+1=)22個胺基酸，具有確定的取決於各自胺基酸組成的環狀分子的最大和最小尺寸，由來自人βι-腎上腺素受體的原始一級序列的21個胺基酸以及作為在假定環閉合位點(位置222)的？？「胺基酸的一個附加甘氨酸組成。不受理論約束時，結合抗βrAR抗體的環狀肽的一級結構(即胺基酸主鏈)的胺基酸數量進而長度對它們的生物學效應和/或成功/有效的生產是很關鍵的。長度為或超過26個胺基酸(一級結構)的肽可直接刺激(即不用載體蛋白)免疫活性T細胞並由此可以引發通過T細胞介導的B細胞刺激產生的抗βr受體抗體的不希望的異常增加。在將合成的產物溶解於水溶液中的生產過程和問題期間，例如用於靜脈或皮下注射，長度小於16個胺基酸(一級結構)的肽導致不希望的結晶。在本發明的次優選的實施方案中，也提供了屬於上文給出的式I的a)到f)定義的環狀肽，其只由16個胺基酸或甚至不太優選的只有17個胺基酸組成的環狀肽。上述次優選的非限定性實例為肽環(Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Tyr-Gln/DGlu)(如可由SEQIDNO.39中所示的胺基酸主鏈所形成的)。本文特別優選的是，所公開的環狀肽包含單個Pro。因此，特別優選的是，既不是本文所描述的式中的y也不是χ，除了恰好x%xb和f的一個外，不是Pro。式I(或其他的式)中所描述的胺基酸片段x%xb和f中，優選f為Pro。本文特別考慮的是，酸性胺基酸，如Asp或Glu，在本發明環狀肽中所包含的Pro之前。因此，優選的是，式I(或其他的式)中所示的Xb為酸性胺基酸，如Asp或Glu。具體地，當f為Pro時，xb可為酸性胺基酸，當Xb為Pro時，xa可為酸性胺基酸和當Xa為Pro時，式I(或其他的式)的位於Xa與第一個Cys間的χ可為酸性胺基酸。更具體地，本發明的環狀肽可由式Γ或I"所確定環(X1-Xh-Cys-X-Xa-Xb-Xc-X-Cys-Y-Xi-X)(I')；環(X111-Xh-Cys-X-Xa-Xb-Xc-X-Cys-Y-Xi-X)(I「)甚至更具體地，本發明的環狀肽可由公式Γ「或I"「所確定環(X1-Xh-Cys-X-Xa-Xb-Xc-X-Cys-Y-Xi-X11)(I『「)；環(X111-Xh-Cys-X-Xa-Xb-Xc-X-Cys-Y-Xi-Xiv)(I"「)。總之，如所提及的，式Γ和I'「中(和本文所示的其他式中)所示的X1和X11可為除了半胱氨酸以外的任一胺基酸。然而，特別地，當本發明的環狀肽的環閉合發生在&和X11間時，特別考慮的是，XjPX11是在「頭到尾(headtotail)」環化作用條件下能與彼此形成肽鍵的胺基酸。「頭到尾」環化作用為本領域技術人員所知(例如KatesandAlbericioSolidphasesynthesis,CRC-Press,2000；Williams,ChemicalApproachestotheSynthesisofPeptides,CRC-Press1997；BenoitonChemistryofPeptideSynthesis.CRC-Press,2005)並在實驗性部分給出其實施例。胺基酸可能的實例可為X1是甘氨酸、纈氨酸、蘇氨酸、絲氨酸和優選丙氨酸。胺基酸可能的實例可為X11是穀氨酸和優選穀氨醯胺。次優選地，X11也可以是Asp或Asn。最優選地，X1是ALa和X11是Gln或Glu(優選DGlu)。因此，本發明的環狀肽中，如式Γ和Γ〃所提及的X11可以為Gln或Glu，其中Glu也可為DGlu(D-Glu;D-穀氨酸)。然而，天然胺基酸在本文是優選的。因此，更優選地，X11為穀氨醯胺。基於本文所提供的教導和本領域的知識(例如Williams，ChemicalApproachestotheSynthesisofPeptides,CRC-Press1997；BenoitonChemistryofPeptideSynthesis.CRC-Press，2005)，本領域技術人員能夠挑選出適合作為本發明的式Γ和I'「的&和/或X11的胺基酸殘基。如所提及的，式I「和I「「中(和本文描述的其他式中)所描述的X111和Xiv可以是除了Cys以外的任一胺基酸。然而，具體當本發明的環狀肽的環閉合發生在X111和xIV間時，特別考慮的是，X111和xIV是在」頭到尾」環化作用條件下能與彼此形成肽鍵等的胺基酸。可為X111的胺基酸可能的實例是精氨酸。可為Xlv的可能的且最優選的胺基酸實例是甘氨酸或甘氨酸類似物。本文中的"Gly類似物」表示具有與甘氨酸類似的結構特徵的殘基，特別為胺基酸殘基。具體地，例如「Gly類似物」指的是與Gly殘基大小一樣的(或甚至更小的)(胺基酸)殘基。在本發明中令人驚訝地發現，具體地像位於「XIV」位置的Gly的小的(胺基酸)殘基導致本發明相應的環狀肽對βfAR的ECII模擬的改進。根據本文所提供的教導和本領域的知識(例如Williams，ChemicalApproachestotheSynthesisofPeptides,CRC-Press1997；Benoiton:ChemistryofPeptideSynthesis.CRC-Press,2005)，本領域技術人員能夠挑選出適合作為式1〃和1〃「的X111和/或xIV的胺基酸殘基。本文進一步特別優選的是，本發明的環狀肽缺乏Trp和/或His。因此，在本發明中特別考慮的是，式I到I"「中任一個所描述的X或y都不是Trp或His。而且，優選所提供的環狀肽沒有對水解作用或切割蛋白酶，例如像血清蛋白酶敏感的位點。術語「水解作用」和「(血清)蛋白酶」的含義都是本領域中所熟知的。本文所提供的肽也可描述為由與SEQIDNO.33(代表包含βrECn表位的野生型胺基酸片段)同源的胺基酸序列組成或包含與SEQIDN0.33同源的胺基酸序列的肽，其中(a)對應於SEQIDNO.33的位置13(或次優選的，對應於位置12)的胺基酸不是半胱氨酸，並且對應於SEQIDN0.33的位置6和12(或次優選的，對應於位置6和13)的胺基酸為半胱氨酸，(b)其中所述胺基酸序列不包含能在肽(即在與SEQIDN0.33同源的肽部分)中形成分子內鍵的另外的半胱氨酸，以及其中所述肽能夠發揮本發明的環狀肽的功能，例如能阻斷抗β「AR抗體，或者其中所述肽能形成這種環狀肽。任選地，本文所給出的關於公開的線性和/或環狀肽的結構的更多規定應用於本文，並作出必要的修改。這樣確定的肽由與SEQIDN0.33同源的16個胺基酸片段組成，一個或多個胺基酸位於N-末端和C-末端側翼，優選天然存在的胺基酸，如位於本文所給出的式Γ到I"「的位置1的「χ/』/「xm」和最後位置的「x」/「xIV」。在本發明中，尤其在(野生型)SEQIDN0.33中，術語「同源的」表示胺基酸水平上的一致性至少為18.75%，至少為37.5%，至少為50%，至少為56.25%，至少為62.5%，至少為68.75%，至少為75%，至少為81.25%，至少87.5%或93.75%，其中優選較高的數值。總之，術語「胺基酸」或「胺基酸殘基」的含義為本領域中已知的並相應地用於本文中。因此，需要注意的是當「胺基酸」為肽或蛋白的組分時，本文中所使用的術語「胺基酸」的意義與「胺基酸殘基」是一樣的。具體地，本文中提及的「胺基酸」或「胺基酸殘基」優選考慮為天然存在的胺基酸，更優選天然存在的L-胺基酸(除外上文提及的DGlu)。然而，儘管次優選地，本發明中的「胺基酸」或「胺基酸殘基」也可以為非天然存在(例如合成的)胺基酸，例如，像正亮氨酸或β-丙氨酸，或具體地就本文所描述的式的「y」而言，「y」為硒代半胱氨酸或其類似物。術語「酸性胺基酸」、「鹼性胺基酸」、「脂肪胺基酸」和「極性胺基酸」的含義也是本領域己知的(例如Stryer，Biochemie，SpectrumAkad.Verlag,1991,Item1.2·)。相應地這些術語的使用貫穿本發明始終。因此，本文給出的關於本發明的環狀肽的具體規定也適用本文。具體地，本文所使用的術語「酸性胺基酸」意指選自Asp，Asn,GlujPGln的胺基酸，優選Asp和Glu；本文所使用的術語「鹼性胺基酸」意指選自Arg，Lys和His的胺基酸，優選Arg和Lys；本文所使用的術語「脂肪胺基酸」意指選自Gly，Ala,Ser,Thr,Val,Leu,lie,Asp,Asn,Glu，Gin,Arg，Lys,Cys和Met的任一胺基酸；本文所使用的術語「極性胺基酸」意指選自Cys，Met,Ser，Tyr,Gin,Asn以及次優選的Trp的任一胺基酸。在本發明第一方面的更一般的實施方案中，本文所提供的環狀肽可以為式II，III或ΙΙΓ的環狀肽環(X1-X1-X1-X-X2-X2-Cys-X-Xa-Xb-Xc-X-Cys-Y-Xi-X11)(II)；環(X1-X2-X-X1-X-X1-X1-X-X2-X2-Cys-X-Xa-Xb-Xc-X-Cys-Y-Xi-X11)(III)；環(Xlllj2-X-X1-X-X1-X1-X-X2-X2-Cys-X-Xa-Xb-Xc-X-Cys-Y-Xi-Xiv)(III『),其中a)X1單獨地和獨立地選自酸性胺基酸；和/或b)X2單獨地和獨立地選自鹼性胺基酸。在本發明第一方面的更具體的實施方案中，本文所提供的環狀肽可為式IV，V或V'的環狀肽環(X1-X1-X1-X4-X2-X2-Cys-X3-Xa5-Xb-Xc-X2-Cys-Y-X1-X3-X3-X11)(IV)；環(X1-X2-X4-X1-X4-X1-X1-X4-X2-X2-Cys-X3-Xa5-Xb-Xc-X2-Cys-Y-X1-X3-X3-X4-X5-X2-Xπ)(V)；環(χΠΙ，^X4-X1-X4-X1-X1-X4-X2-X2-CyS-X3-Xa5-Xb-Xc-X2-CyS-Y-X1-X3-X3-X4-Xiv)(V)，其中a)X1單獨地和獨立地選自酸性胺基酸；b)X2單獨地和獨立地選自鹼性胺基酸；c)X3單獨地和獨立地選自Leu，lie，Val，Met，Trp，Tyr和Phe；d)X4單獨地和獨立地選自Ser，Thr，Ala和Gly；和/或e)X5單獨地和獨立地選自Gln和Asn。在本發明第一方面另外的實施方案中，環狀肽包含由式II或IV的第2-12或2_14位胺基酸所確定的胺基酸片段、由式III或V的第4-16或4-18位胺基酸所確定的胺基酸片段或由式ΙΙΓ或V'的第3-15或3-17位胺基酸所確定的胺基酸片段；在本發明第一方面的更一般的實施方案中，本文所提供的環狀肽可以為式II，III或ΙΙΓ的環狀肽。在本發明第一方面另外特定的實施方案中，本文所提供的環狀肽可以包含如下胺基酸片段aci-Glu-Ala-bas-bas-Cys-Tyr-neu-aci-neu-bas；aci-neu-aci-Glu-Ala-bas-bas-Cys-Tyr-neu-aci-neu-bas；aci-Glu-Ala-bas-bas-Cys-Tyr-neu-aci-neu-bas-Cys-Ser；或aci-neu-aci-Glu-Ala-bas-bas-Cys-Tyr-neu-aci-neu-bas-Cys-Ser,其中「aci」代表酸性胺基酸，「neu」代表中性胺基酸且「bas」代表鹼性胺基酸。上文兩個胺基酸片段的每一個胺基酸殘基也可以獨立地確定為如本文所提供的式I，II，III，III'，IV，V和V的任一個的相應胺基酸殘基。在本發明第一方面的另外具體的實施方案中，本文所提供的環狀肽可以包含如下胺基酸片段(aminoacidstretch)Asp-Xxx1-Xxx4-Arg-Arg-Cys-Xxx3-Asn-Asp-Pro-Lys(SEQIDNO.45)或Glu-Ser-Asp-Xxx1-Xxx4-Arg-Arg-Cys-Xxx3-Asn-Asp-Pro-Lys(SEQIDNO.46)。其中如上文所示的式所提及的，乂％被確定為『、」或「<，乂^被確定為「X」或「x3」和/或Xxx4被確定為「X」或「x4」。例如上述胺基酸片段可以為Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys(SEQIDNO.45)或Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys(SEQIDNO.46)。本文特別考慮的是，本發明環狀肽包含一個或多個由β^EC11攜帶的表位，例如像任一上文所提及的胺基酸片段(或所公開的包含這些胺基酸片段的環狀肽的部分)所攜帶的表位。在本文中，術語「表位」具體指與(自身)抗βrAR抗體結合的胺基酸片段。具體地，本發明中的表位由至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個或至少14個胺基酸組成。本領域技術人員處在推論β!-EC11的哪個特定胺基酸殘基促成(自身)抗β「AR抗體結合的表位的位置。因此，他能推出至少哪個特定胺基酸殘基必須包含在本發明的環狀肽中以確保這些肽結合(自身)抗P1-AR抗體。為此，可利用若干本領域中已知的手段和方法(例如，用於表位定位的手段和方法(像P印Sp0tsTM、BiaC0re、胺基酸掃描(像丙氨酸掃描))。根據本發明，非限定性環狀肽實例為選自以下的環狀肽a)由如SEQIDNO.41，43，1_4和17_20的任一個所示的胺基酸序列形成或可形成的環狀肽；b)由如SEQIDNO.42，44，9-12，25-28，49，50，53和54的任一個所示的核苷酸序列編碼的胺基酸序列形成或可形成的環狀肽；和c)由核苷酸序列編碼的胺基酸序列形成或可形成的環狀肽，由於遺傳密碼的簡併性，所述核苷酸序列不同於SEQIDN0.42，44，9-12，25-28，49，50，53和54的任一個所示的核苷酸序列。根據本發明的環狀肽中，特別優選那些為Cys-Ser突變肽的環狀肽，即對應於β!-EC11的第三個Cys(位於βrAR位置216的Cys)的Cys被Ser交換的環狀肽。上文給出的實例指的是這種特別優選的環狀肽。如所附加的實施所顯示的，這種環狀肽在抑制或診斷抗P1-AR抗體中特別有用。下文的式VI到IX'的任一個給出了上述示例性特別優選的環狀肽的特定結構環(Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Gly)(IX')；環(Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Va1-Gln)(VI)；環(Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-Gln)(VII)；環(Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Va1-DGlu)(VIII)；和環(Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-DGlu)(IX)0根據本發明，非限定性的次優選的環狀肽實例為選自以下的環狀肽a)由如SEQIDN0.5_8和21_24的任一個所示的胺基酸序列可形成或形成的環狀肽；b)由如SEQIDNO.13_16和29_32的任一個所示的核苷酸序列所編碼的胺基酸序列可形成或形成的環狀肽；和c)由核苷酸序列編碼的胺基酸序列可形成或形成的環狀肽，所述核苷酸序列由於遺傳密碼的簡併性不同於SEQIDNO.29-32任一個所示的核苷酸序列。下文的式X到XIII的任一個給出了上文示例性次優選的環狀肽的特定結構環(Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-VaI-Gln)⑴；環(Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-Gln)(XI)；環(Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-Va1-DGlu)(XII)；環(Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-DGlu)(XIII)。上述肽是本發明次優選的實施方案，因為如「Cys-Ser」突變肽(「Cys-Ser」環狀肽)的肽尤其是在體內的作用強於本文所確定的次優選的「Ser-Cys」突變肽(「Ser-Cys」環狀肽)。在本文中值得注意的是，本發明的環狀肽的最優選的實例特別為那些藥理學和/或診斷功能已在所附的實施例中被證實的環狀肽(例如式VI到IX'的任一個所表徵的那些)。可以理解的是，對於本發明的各種不同的肽，只要能保證相應肽的至少由一些確定的胺基酸殘基和它們的空間排列所確定的總體二級和三級結構，例如胺基酸序列主鏈的一級序列中的特定的柔韌性和變異性是可能的(例如見式I，上述)。基於本文所提供的教導，一方面，本領域技術人員容易發現本發明的肽的相應的變體。另一方面，本領域技術人員能測試本發明的肽的特定變異體是否仍具有期望的功能，例如特異性結合β-AR抗體的能力，因此而擁有相應的像本文所提供和描述的治療和診斷應用的醫學幹預的潛能。本文示例性提供和描述了上述測試，即相應的測定的實驗指南，，特別是在附加的實施例中。因此，本文也提供本文所公開和描述的肽的變體，只要是，首先這些變體仍有符合本發明的功能性活性，即作為抗β-AR抗體、特別作為抗βrECn的抗βi-AR抗體的結合配體的功能活性，更具體地作為P1-AR的阻斷劑的功能活性和甚至更優選在抑制P1-AR與針對β!-EC11的抗βrAR(更優選針對β!-EC11的自身-抗βrAR抗體)間的相互作用中的活性；和其次，當根據本發明的生產方法環化時，這些變體不會以異構體混合物的形式出現且不會形成異構體混合物。這些變體被考慮為含有僅兩個特定的半胱氨酸殘基，所述兩個殘基形成或能夠形成僅一個單獨的分子內鍵(例如二硫鍵)。在本發明的肽的變體中，例如考慮將所述肽的一個或多個胺基酸用另外的一個或多個天然存在或合成的胺基酸取代。在本文中，優選這一/這些胺基酸交換為保守的胺基酸交換，即取代胺基酸與被取代的胺基酸屬於同一類的胺基酸。例如，一個酸性胺基酸可被另一個酸性胺基酸所取代、一個鹼性胺基酸可被另一個鹼性胺基酸所取代，脂肪胺基酸可被另一個脂肪胺基酸所取代和/或一個極性胺基酸可被另一個極性胺基酸所取代。因此，本發明特別優選和提供的(環)肽的變體為如下變體其中至少一個酸性胺基酸被選自酸性胺基酸的不同的胺基酸所取代，至少有一個鹼性胺基酸被選自鹼性胺基酸的不同的胺基酸所取代，至少有一個極性胺基酸被選自極性胺基酸的不同的胺基酸所取代和/或至少有一個脂肪族胺基酸被選自脂肪族胺基酸的不同的胺基酸所取代(只要是滿足上文所提及的要求)。特別考慮的是，導致形成所公開的(環)肽的變體的胺基酸交換使得產生的變體的三級結構中的極性和電荷的形式實質上仍模擬相應的βrAR的EC11表位的三維結構。在本發明的(環)肽的變體方面，本文所確定的半胱氨酸也可被另外的胺基酸取代，只要這一取代仍可導致形成環肽中像二硫鍵那樣的單獨的分子內鍵，即環化期間異構體混合物形成的避免和/或βrAR的EC11的正確模擬。上述胺基酸尤其可能為非天然形成的胺基酸，像含有能形成二硫鍵的-SH基團的非天然形成的胺基酸。然而，本文優選的是，上文式I中所給出的Cys確實為天然形成的胺基酸，優選半胱氨酸自身。本領域中的技術人員也公認的是形成本發明的(環)肽的一個或幾個胺基酸可被修飾。與此相對應的是，本文所使用的任一胺基酸都可代表其修飾形式。例如，本文所使用的丙氨酸殘基可包含一個修飾的丙氨酸殘基。上述的修飾尤其可為甲基化或醯基化等，從而這種修飾或修飾的胺基酸優選包含在本發明中，只要這樣修飾的胺基酸，更具體地是包含所述這樣修飾的胺基酸的肽仍有本文所確定的功能性活性，比如作為抗P1-AR抗體的抑制劑的功能性活性，優選在抑制βrAR與抗體間相互作用方面的活性，更優選作為直接針對^1-AR的自身抗體。確定所述肽，即包含一個或幾個修飾的胺基酸的肽是否滿足這一要求的相應測定法為本領域中技術人員所知曉，其中包括那些本文、特別是在本文實施例部分描述的那些。本發明也提供了所公開的(環)肽的衍生物，諸如像鹽酸、硫酸、磷酸、蘋果酸、反丁烯二酸、枸櫞酸、tatratic酸、乙酸的生理學的有機酸和無機酸的鹽。如本文所使用的，自N末端到C末端顯示公開的肽序列，由此N末端在所描述的相應胺基酸序列的左側而C末端在所描述的相應胺基酸序列的右側。當提及環狀肽時，自對應於式I的左側到對應於公式I的右側顯示對應的序列。根據本發明，「環狀肽」或「環肽」等為在其胺基酸主鏈/一級胺基酸序列中通過具有共價特徵的至少一個、優選至少兩個、更優選恰好兩個分子內鍵在分子內形成分子環狀結構的肽。在本發明中，這一分子環狀結構的形成過程也稱為「環化」。在一具體優選的實施方案中，本發明的環狀肽有兩個具有共價特徵的分子內鍵，其中這些鍵中的一個為肽的N和C末端間的分子內鍵，所述肽為公開的環狀肽的胺基酸主鏈/一級胺基酸序列，另一個是位於該肽的兩個非末端的胺基酸間的分子內鍵合。如所提及的，這兩個非末端胺基酸可以是兩個Cys。通常，本發明的「環化」可以通過至少一個選自S-S鍵、肽鍵、諸如C-C或C=C的碳鍵、酯鍵、乙醚鍵、偶氮鍵、C-S-C鍵、C-N-C鍵和C=N-C鍵的共價結合的鍵發生。具體地，能通過肽的N末端胺基酸的NH2基團和肽的C末端胺基酸的COOH基團形成如本發明自始至終所提及的的肽鍵，所述肽形成所公開的環狀肽的胺基酸主鏈/一級胺基酸序列。優選地，形成所公開的環狀肽的胺基酸主鏈/一級胺基酸序列的肽的N和C末端間的分子內鍵是肽鍵，並且位於該肽的兩個非末端胺基酸間的分子內鍵為S-S鍵(例如二硫鍵)。在本發明中，在提供的環狀肽的胺基酸主鏈/一級胺基酸序列中的兩個Cys殘基間能形成在所述環狀肽中的分子內S-S鍵。在本發明的環狀肽內，不但可以形成上文提及的兩個特定的分子內共價鍵，而且在下述條件下還可以形成另外的分子內鍵保持本文所描述的環狀肽的功能和仍能容易地對環狀肽進行生化表徵，這例如意味著在相應的胺基酸主鏈/一級胺基酸序列的環化期間不會形成異構體混合物。例如，上述另外的分子內鍵為由組成胺基酸(constituentaminoacids)的NH2基團和C00H基團的側鏈形成的附加鍵。如本發明自始至終所使用的「胺基酸主鏈」或「一級胺基酸序列，，的術語一方面指的是環狀肽的結構組分或部分，其由它對應的胺基酸序列可形成或形成，。另一方面，這些術語指的是能通過環化作用形成本發明的環狀肽的線性的肽。在本發明第一方面的一個具體實施方案中，所提供的環狀肽為可通過如本文所提供的環狀肽的生產方法獲得的。上文所給出的定義也適用於這一具體提供的本發明的環狀肽。在本發明第一方面的一個具體實施方案中，也提供了這樣的肽，所公開的環狀肽通過這樣的肽可形成或形成。具體地，這些肽是形成或能夠形成本文公開的環狀肽的線性肽，即其胺基酸主鏈/一級胺基酸序列。總之，這種線性肽可為任一肽，其N和C末端的共價鍵產生如本發明中所公開的環狀肽。例如，這種線性肽可以是生產本發明的環狀肽的過程中的某種中間化合物，所述過程如本文所公開的生產環狀肽的方法。總之，在本發明中，本文所提供的線性肽的N和C末端可以是位於所公開的環狀肽的胺基酸主鏈中的直接相互鄰近處的任一胺基酸對。換句話說，本發明的環狀肽的環化(環閉合)通常發生在任一所述胺基酸對之間。技術人員容易發現這種特定的胺基酸對，其能夠有效地/適合作為本文所公開的線性肽的N和C末端，即其能夠有效地/適合作為參與本發明中所確定的環閉合/環化的胺基酸對。在一優選的但非限定性的實例中，本發明的線性肽的環化(環閉合)可以發生在Ala與Gin或Glu間，即這一線性肽的N末端胺基酸可為Ala，並且C末端胺基酸可為Gin或Glu。能形成本發明的環狀肽的這種線性肽的實例為SEQIDNO.1-4和次優選的SEQIDNO.5-8。在另一優選的但非限定性的實例中，本發明的線性肽的環化(環閉合)可以發生在Lys與Pro間，即這一線性肽的N末端胺基酸可為Lys且C末端胺基酸可為Pro。能形成本發明的環狀肽的這種線性肽的實例為SEQIDNO.17-20和次優選的SEQIDNO.21-24。在另一更優選的但非限定性的實例中，特別當所提供的為22mer環狀肽時，本發明的線性肽的環化(環閉合)可以發生在Arg與Gly間，即這一線性肽的N末端胺基酸可為Arg且C末端胺基酸可為Gly。能形成本發明的環狀肽的這種線性肽的實例為SEQIDNO.41。在另一更優選的但非限定性的實例中，特別當所提供的為22mer環狀肽時，本發明的線性肽的環化(環閉合)可以發生在Lys與Pro間，即這一線性肽的N末端胺基酸可為Lys且C末端胺基酸可為Pro。能形成本發明的環狀肽的這種線性肽的實例為SEQIDNO.43。除了它們的胺基酸主鏈之外，本發明的環狀肽還可以包含(例如共價結合的)(a)另外的取代基，像標記物、錨定基(像蛋白性膜錨定基)、標籤(像組氨酸標籤)等。合適的取代基和將它們添加到本發明的環狀肽的方法都為本領域中的技術人員所熟知。本文中的標記物的實例尤其包括螢光染料(像螢光素、若丹明、德克薩斯紅(TexasRed)等)、酶(像辣根過氧化物酶、3_半乳糖苷酶、鹼性磷酸酶)、放射性同位素(像32P、33P，35S、121I或123I、135I、124I、11C、150)、生物素、地高辛、膠體金屬、化學或生物發光化合物(像二氧烷酮基、魯米諾或吖啶酯)。可以與本發明的肽結合的特別考慮的一種標記物為屬於螢光染料的FRET對的螢光染料，例如GFP變體(例如GFP、eGFP、EYFP或ECFP)。可以利用各種用於標記生物分子的技術，這些技術為本領域中技術人員所熟知並被認為在本發明的範圍內並且尤其包含酶或生物素基團的共價偶聯，磷酸化作用，生物素(醯)化，隨機引物法，切口平移法，拖尾(利用末端轉移酶)法。這些技術例如在Tijssen，『『Practiceandtheoryofenzymeimmunoassays，，，BurdenandvonKnippenburg(Eds)，Volume15(1985)；「Basicmethodsinmolecularbiology」，DavisLG，DibmerMD，BatteyElsevier(1990)；Mayer,(Eds)"Immunochemicalmethodsincellandmolecularbiology，，AcademicPress，London(1987)；或在「MethodsinEnzymology」，AcademicPress,Inc.系列中有所描述。檢測方法包括，但不限於，放射自顯影法、螢光顯微法、直接和間接酶促反應等。取代基可直接或通過連接子與本發明的環狀肽結合(例如共價地)。技術人員容易地找到應用於本文中的合適的連接子。另一方面，本發明涉及包含編碼本發明中所公開的環狀肽的胺基酸主鏈/一級胺基酸序列的核苷酸序列的核酸分子。本發明也涉及包含編碼本文所提供和描述的線性肽的核苷酸序列的核酸分子。例如，這種核酸分子可以包含如SEQIDNO.42，44，9-12，25-28，49，50，53和54中的任一個或如次優選的SEQIDNO.13-16和29-32中的任一個所描述的核苷酸序列或由於遺傳密碼子的簡併性而與其有所不同的核苷酸序列。術語「核酸分子」、「核酸序列」和「核苷酸序列」等術語的意義為本領域所熟知並且相應地應用於本發明中。例如，當在本發明自始至終使用時，這些術語指所有天然存在形式的或重組產生的類型的核苷酸序列和/或核酸序列/分子以及指化學合成的核苷酸序列和/或核酸序列/分子。這些術語也包含核酸類似物和核酸衍生物，諸如，例如鎖DNA、PNA、寡聚核苷酸硫代磷酸酯和取代的寡聚核糖核苷酸。此外，這些術語還指包含核苷酸或核苷酸類似物的任一分子。優選地，「核酸分子」、「核酸序列，，和「核苷酸序列，，等術語指脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。「核酸分子」、「核酸序列」和「核苷酸序列」可通過本領域技術人員已知的合成化學方法學、或通過利用重組技術來製備，或者從天然來源中分離或通過其組合來製備。DNA和RNA可以任選地包含非天然的核苷酸並且可以為單鏈或雙鏈。「核酸分子」、「核酸序列」和「核苷酸序列」還指正義和反義DNA和RNA，即與DNA和/或RNA中的特定核苷酸序列互補的核苷酸序列。此外，「核酸分子」、「核酸序列」和「核苷酸序列」等術語可以指DNA或RNA或其雜交體或其在現有技術中已知的任一修飾物(例如參見US5525711，US4711955，US5792608或EP302175的修飾物的實例)。本發明的這些分子可為單鏈或雙鏈的、線性的或環狀的、天然或合成的，並且沒有任何大小的限制。例如，「核酸分子」、「核酸序列」和「核苷酸序列」可以為基因組的DNA、cDNA、mRNA、反義RNA、核酶或編碼上述RNA的DNA或嵌合體(Cole-StraussScience1996273(5280)1386-9)。它們可為質粒形式或病毒DNA或RNA的形式。「核酸分子」、「核酸序列」和「核苷酸序列」等還指寡聚核苷酸，其中包括現有技術中的任一修飾物，諸如硫代磷酸酯或肽核酸(PNA)。本文所提供的核酸分子特別用於生產本發明的環狀肽，例如通過本文所公開的相應的方法。另一方面，本發明還涉及包含如本文所公開和上文描述的核酸分子的載體。所述載體可為克隆性載體或表達性載體，例如噬菌體、質粒、病毒或逆轉錄病毒載體。逆轉錄病毒載體可以具有複製能力或為複製缺陷型。在後一種情況下，病毒增殖通常只發生在互補的宿主/細胞中。本文所提供的核酸分子可以連接到包含用於在宿主中增殖的選擇性標記物的特定載體。通常，在諸如磷酸鈣沉澱物或氯化銣沉澱物的沉澱物中，或在帶電荷的脂質的複合物中，或諸如富勒烯的碳基簇中引入質粒載體。如果載體為病毒，可以在應用於宿主細胞前利用合適的包裝細胞株將其在體外包裝。優選地，本發明的核酸分子可操作地連接到允許在原核或真核細胞或其分離的部分中表達的表達調控序列(例如在本文所公開的載體中)。所述多聚核苷酸的表達包括核酸分子的轉錄，優選將核酸分子轉錄為可翻譯的mRNA。確保在真核細胞中、優選在哺乳動物細胞中表達的調節元件為本領域技術人員所熟知。它們通常包含確保轉錄起始的調節序列和確保轉錄終止和轉錄物穩定的任選的多聚A信號。額外的調節元件可包括轉錄及翻譯增強子。允許真核宿主細胞內表達的可能的調節元件包含例如大腸桿菌中的lac、trp或tac啟動子，並且允許真核宿主細胞內表達的調節元件的實例有酵母中的A0X1或GAL1啟動子或哺乳動物和其它動物細胞中的CMV-，SV40-，RSV-啟動子(魯斯氏肉瘤)、CMV-增強子、SV40-增強子或珠蛋白內含子。除了負責轉錄起始的元件外，上述的調節元件還可以包括轉錄終止信號，諸如SV40-多聚-A位點或tk-多聚-A位點，多聚核苷酸的下遊區。在本文中，合適的表達載體諸如Okayama-BergcDNA表達載體pcDVl(Pharmacia)、pCDM8、pRc/CMV,pcDNAUpcDNA3(Invitrogen),pSPORTl(GIBCOBRL)是本領域已知的。優選地，所述載體為表達載體和/或基因轉移載體。衍生於諸如下述的病毒的表達載體可以用於將本發明的多聚核苷酸或載體遞運到靶向的細胞群逆轉錄病毒、腺病毒、牛痘病毒、腺相關病毒、皰疹病毒或牛乳頭瘤病毒。為本領域技術人員所熟知的方法可用於構建符合本發明的載體；例如參見Sambrook,MolecularCloningALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory(1989)N.Y.禾口Ausubel,CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenPublishingAssociates禾口WileyInterscience,N.Y.(1994)中所描述的技術。可選地，可將本發明的多聚核苷酸和載體重建到脂質體中以用於遞送到靶細胞。術語「其分離的部分」指能夠從本發明的載體轉錄或者轉錄和翻譯RNA的真核或原核細胞或組織的部分。所述部分包含RNA轉錄所需的蛋白或者RNA轉錄以及所述RNA翻譯為多肽所需的蛋白。例如，所述分離的部分可為真核細胞諸如網織紅細胞的核和胞漿部分。包含上述細胞或組織的分離的部分、用於轉錄和翻譯RNA的試劑盒可以商購，例如TNT網織紅細胞裂解物(TNTreticulolysate,Promega)。此外，像本發明的核酸分子，本文所提供和描述的載體也特別用於生產本發明的環狀肽，例如通過本文所公開的相應的方法。在另一方面，本發明涉及包含如本文所公開的核酸分子和/或載體的重組宿主細胞。在這一方面，本文所公開的核酸分子和/或載體尤其能用於基因工程宿主細胞，例如以表達和分離本文所公開的環狀肽的胺基酸主鏈/一級胺基酸序列，並由此表達和分離本發明的線性肽。上述宿主細胞可為原核或真核細胞；參見上文。出現在宿主細胞中的核酸分子或載體可被整合到宿主細胞的基因組或其仍保持在染色體外。宿主細胞可為任一原核或真核細胞，諸如細菌的、昆蟲的、真菌的、植物的、動物的、哺乳動物的或優選人類細胞。例如優選的真菌細胞為酵母屬那些、尤其是釀酒酵母種的那些，或者屬於菌絲真菌組的那些、例如若干青黴株或麴黴株。術語「原核的」意味著包括所有能被核酸分子轉化或轉染以用於表達本文所公開的環狀肽的胺基酸主鏈/一級胺基酸序列，從而表達本發明的線性肽的細菌。原核宿主可以包括革蘭氏陰性及革蘭氏陽性細菌諸如，例如大腸桿菌(E.coli)、鼠傷寒沙門氏菌(S.typhimurium)、粘質沙雷氏菌(Serratiamarcescens)和枯草桿菌(Bacillussubtilis)。利用本領域中技術人員所普遍知曉的任一技術，能夠將用於編碼本文所公開的環狀肽的胺基酸主鏈/一級胺基酸序列，從而編碼本發明的線性肽的核酸分子用於轉化或轉染宿主。製備融合的、可操作地連接的基因並在細菌或動物細胞中表達它們的方法為本領域中所熟知(Sambrook，見上文)。本文所描述的基因構建體和方法可用於在例如原核宿主中表達上文提及的胺基酸主鏈/一級胺基酸序列和線性肽。總之，促進插入的多聚核苷酸有效轉錄的包含啟動子序列的表達載體被用於與宿主的連接。表達載體代表性地包含複製起始點、啟動子和終止子及能夠提供轉化的細胞的表型選擇的特定基因。轉化的原核宿主能夠在發酵罐中生長，並能夠根據本領域中已知的技術培養轉化的原核宿主以實現最佳的細胞生長。然後能夠從生長培養基、細胞溶解物或細胞膜部分中分離表達的肽。微生物表達或以另外方式表達的肽的分離和純化可藉助任一常規方法諸如，例如製備型色譜分離法和諸如涉及單克隆或多克隆抗體使用的那些的免疫學分離法(Ausubel，CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenPublishingAssociatesandWileyInterscience,N.Y.(1994))。此外，像本文所描述和提供的核酸分子和載體，相應的宿主細胞也特別用於生產本發明的環狀肽，例如，通過文本所公開的相應的方法。然而在另一方面，本發明涉及生產本發明的環狀肽的方法，包括以下步驟a)⑴在使本文公開的環狀肽的胺基酸主鏈(或本發明的線性肽)表達的條件下培養本發明的重組宿主細胞，並且回收上述的胺基酸主鏈(或上述的本發明的線性肽)；或(ii)化學合成本文所公開的環狀肽的胺基酸主鏈(或本發明的線性肽)；以及b)使上述胺基酸主鏈(或上述線性肽)環化以形成本文所公開的環狀肽。上文所給出的關於術語「環化」的定義適用於此處，並可作必要的變化。在上文方法的具體背景下，術語「環化」的含義包括分子內鍵(二硫鍵)的形成和通過共價連接環狀肽主鏈的N末端和C末端產生的環閉合。本文給出的有關本發明的環狀肽、其胺基酸主鏈或相應的線性肽及有關本文所提供的宿主細胞方面的定義適用於此處，並可作必要的變化。如上文已提及的有關所提供的環狀肽和線性肽方面，在本發明的另一方面的優選實施方案中，待環化以產生本發明的環狀肽的胺基酸主鏈/線性肽的N末端胺基酸為Ala、Arg或Lys，並且相應的C末端胺基酸為GlruGly或Glu(DGlu也是可能的)或Pro。然而，如上文所提及的，也考慮其它的N和C末端的胺基酸，即在所公開的方法中也可以使用其它的環化(環閉合)位點。基於公知常識和如W02006/103101的現有技術(其公開了如何合成肽特別是環狀肽的通用方法)，本領域技術人員能夠容易地將本文所公開的生產環狀肽的方法付諸實施。另外，例如在附加的實驗部分(實施例1)中的本發明的教導提供了能夠實現的技術指導。在本發明的非限定性實施例1中，將環肽首先合成為其線性肽/胺基酸主鏈的形式(例如通過應用化學合成方法，比如芴甲氧羰基/叔丁基策略(Fmoc/tertbutylstrategy)(如WO2006/103101中所記載的；Chenff.C.andWhiteP.D.:FmocSolidPhasePeptideSynthesis,OxfordUniversityPress2003))，然後通過C末端的羧基基團與N末端胺基酸的氨基的縮合將其在主鏈中共價環化(「頭到尾」環化；KatesS.andAlbericioF.Solidphasesynthesis,CRC-Press,2000)。隨後，通過本領域已知的化學相互作用(e.g.BenoitonN.L.:ChemistryofPetideSynthesis.CRC-Press,2005)在能形成二硫鍵的線性肽的那兩個半胱氨酸殘基間形成二硫鍵(例如18mer肽的Cys7和Cys13間，22mer肽的Cys1(1和Cys16間，或者25mer肽的Cysn和Cys17間)。總之，在上文描述的方法的「環化」步驟中，待生產的環狀肽的線性主鏈的環閉合可在S-S鍵形成之前或之後完成。換句話說，肽胺基酸鏈的兩個半胱氨酸殘基間的S-S鍵可為所描述的生產過程的「環化」步驟的第一步而環閉合為第二步，或反之亦然。技術人員能發現這些具體方法的哪一種是適合給出的生產先決條件的方案。如上文所提及的，待生產的線性肽/環狀肽的胺基酸主鏈也可通過重組工程技術來生產。上述的技術在本領域中是熟知的(例如Sambrook，見上文)。特別地，也如上文所提及的，所述線性肽/胺基酸主鏈的這種生產方式可以利用本文公開和描述的核酸分子、載體和/或宿主細胞。相應地上文給出的定義也適用於此處，並可作必要的修改。肽合成的若干方法，特別是環狀肽的合成方法為本領域中是已知的(例如Williams,ChemicalApproachestotheSynthesisofPeptides,CRC-Press1997；Benoiton:ChemistryofPeptideSynthesis.CRC-Press，2005)。技術人員基於本文提供的教導，能夠容易地將現有技術知識適用於所公開的生產環狀肽的方法的特定要求。如上文已提及的，本發明還涉及通過上文所描述的方法可獲得的或獲得的環狀肽，而且也涉及通過上文所描述的方法可獲得的或獲得的作為某種中間產物(具體地，通過上文描述的方法的步驟a)可獲得的或獲得的產物)的相應的線性肽(相應的環狀肽的胺基酸主鏈/一級序列)。總之，本發明的環狀肽尤其可用於醫療幹預方法中。這種方法包括作為診斷試劑或在診斷試劑中的使用和用於生產治療疾病的藥物，或者在組合物中或作為組合物，優選藥物組合物、診斷組合物或診斷試劑盒的使用，優選用於抗0-AR抗體的檢測，更優選用於抗抗體的檢測。如所提及的，本文所確定或描述的抗體優選自身抗體。化合物，特別是本發明的環狀肽的非限定性用途和應用描述於本文中，例如在下文中。本發明還涉及包含本發明中所公開和提供的環狀或線性肽、核酸分子、載體或重組宿主細胞和任選的載體的組合物。在這一方面的一具體實施方案中，上述的組合物為藥物組合物，並且上述的載體為藥物可接受的載體。如本文所描述和確定的，本發明的組合物，特別是本發明的藥物組合物應用於治療、改善或預防時特別有用。因此，本發明的藥物組合物可以用於0-AR的活性增強的疾病的治療、改善和預防或用於治療帶有抗0-AR抗體的患者。而且，本發明的藥物組合物可以用於誘導患者的免疫耐受，特別是誘導患者對於內源性0rAR的免疫原片段的免疫耐受。除了包含至少一個本發明的環狀肽以外，所提供的(藥物)組合物可以包含兩個或多個(比如至少3個或至少5個)本發明的環狀肽。同樣地，根據本發明，不但一個，而且兩個或多個(比如至少3個或至少5個)上述的環狀肽可以給予需要醫療幹預的患者。因此上述一個以上的環狀肽的給藥可以是同時地或相繼地。而且，在一具體實施方案中，本發明涉及本文所公開的藥物組合物、醫療幹預的方法或用途或者環狀肽或藥物組合物，其中上述環狀肽與至少一個另外的藥物活性劑一起給藥或上述藥物組合物包含至少一個另外的藥物活性劑。上述至少一個另外的藥物活性劑可以是0受體阻斷劑，優選選擇性0-AR阻斷劑，例如，比如選自阿替洛爾、美託洛爾、奈比洛爾、比索洛爾等的日rAR阻斷劑。不受理論約束，因為3rAR同時通過像比索洛爾或美託洛爾的3阻斷劑上調，這種特定的組合通過本文所提供的環狀肽提供防禦抗體誘導的選擇性0「At下調的保護並且最終產生環狀肽和附加的0阻斷劑的協同效應。任選地包含在本發明的(藥物)組合物中或與本發明的(藥物)組合物或環狀肽一起給藥的載體可具體為藥物可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。上述載體為本領域中所熟知。技術人員容易地找出特別適合應用於本發明的載體。下文中，描述了若干非限定性給藥方案和相應合適的藥物可接受的載體的使用。對於經由皮下或靜脈內注射給予本發明的藥物組合物和/或環狀肽，本發明的化合物可在水溶液中配製，優選在生理性相容的緩衝液中，諸如Hank’s溶液、Ringer’s溶液或生理鹽水緩衝液。對於經黏膜或經肺給藥，在製劑中使用適於滲透屏障的滲透劑。上述滲透劑為本領域中所通常知曉的。使用藥物可接受的載體將本發明的化合物配製成適於全身給藥，即靜脈內/動脈內或皮下給藥的劑型或藥物組合物，這在本發明的範圍內。通過選擇正確的載體和合適的生產實踐，本發明的組合物，尤其是配製成溶液的那些，可以經胃腸外給藥，諸如經靜脈內注射。利用本領域中所熟知的藥物可接受的載體，可以容易地將化合物配製成適合於皮下或口腔給藥的劑型。上述載體使本發明的化合物能配製成為片劑、藥丸、膠囊、錠劑、液體、凝膠、糖漿、水漿、懸浮液等用於治療對象的口服。可以利用本領域中技術人員所熟知的技術，給予預期體內/細胞內給藥的本發明的化合物或包含化合物的藥物。例如，上述試劑可以包裹在脂質體內，然後如上文所描述的給藥。脂質體為內部含水的球狀脂質雙分子層。脂質體形成時存在於水溶液中的所有分子都被合併到水性內部。脂質體內容物既被保護免於與外部的(細胞)微環境接觸，而且因為脂質體與細胞膜融合，又能有效地被遞送到細胞表面附近。Janoff等擁有的U.S.PatentNo.4，880，635中公開了涉及脂質體的遞送系統。出版物和專利提供了脂質體藥物遞送技術的有用的描述。用於胃腸外和/或皮下給藥的包含本發明化合物的藥物組合物包括水溶形式的活性化合物的水溶液。另外，活性化合物的懸浮液可製備成合適的油性注射懸浮液。合適的親脂性溶劑或載體包括諸如芝麻油或蓖麻油的脂肪油，或諸如油酸乙酯或甘油三酯的合成性脂肪酸酯，或脂質體。水性注射懸浮液可以包含增加懸浮液粘性的化合物，諸如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇、右旋糖酐等。任選地，懸浮液也可包含合適的穩定劑或增加化合物的可溶性的試劑以允許製備高度濃縮溶液並使物質在有機體內持續緩慢釋放。本領域技術人員清楚的是，根據本發明，公開的藥物組合物或環狀肽可以以藥物/治療有效劑量給藥，這意味著達到給予的化合物的藥物/治療有效量。優選地，藥物/治療有效劑量指給予的化合物(活性成分)引起個體症狀改善或存活延長的量，這可由本領域技術人員藉助常規試驗來確定。需要注意的是，本發明待給藥的化合物的劑量方案將由主治醫生和臨床因素所決定。如醫學領域中所熟知的，對任一患者的劑量取決於許多因素，包括患者的體積、體表面積、年齡、待給藥的特定化合物、性別、給藥時間和途徑、一般健康狀況、和同時給予的其他藥物。本領域技術人員可意識到並能檢測根據本發明應用於醫學的化合物被給藥的相關劑量。如本文所顯示的，本文所提供的環狀肽的作用，即抗0fAR抗體的阻斷，可通過劑量依賴性方式來獲得。從而如本文所公開的Cys—Ser突變環肽的功效取決於閾值濃度(圖14.15和16B,C)。因此，特別地，公開的藥物組合物或環狀肽可以其存在如下濃度，即達到閾值濃度的方式給藥每kg體重至少0.05mg,優選每kg體重至少0.lmg，更優選為每kg體重0.lmg(100ug/kg)至每kg體重lOOmg，更優選為每kg體重lmg至每kg體重lOOmg和最優選為每kg體重lmg至每kg體重10mg。特別地，公開的藥物組合物或環狀肽的有效劑量可以為大約每kg體重lmg。通過相應的給藥應用方案，通常也考慮達到公開的藥物組合物或環狀肽的更高濃度。例如，如此的更高濃度可以為每kg體重至少2、3、4或5mg。優選每kg體重至少lmg或每kg體重至少2mg的濃度。本發明中應用的一個特別優選的非限定性給藥方案為每2周或4周皮下或靜脈注射。在本文中，需要注意的是，本文應用的大鼠模型中，1到4mg/kg的劑量每隔一個月靜脈注射可足以得到本發明的化合物的治療水平，而人類相應的劑量方案優選為約0.3-10mg/kg靜脈或皮下注射，更優選約l-10mg/kg靜脈或皮下注射，甚至更優選約l_5mg/kg靜脈或皮下注射。如本文所顯示的，公開的環狀肽的給藥最初可觸發短暫的相反的免疫反應，尤其當使用較高劑量時。長遠來看這種短暫的免疫反應可被使用的環狀肽的抗體滅活活性所抵消。這可能導致使用的環狀肽的作用降低，即抗3fAR抗體的清除減慢並由此導致(異常的)i^-AR活性的降低緩慢。本發明還涉及用於下述的方法a)治療、改善或預防0-AR活性增強、優選0rAR活性增強的疾病；b)治療以下患者具有抗日-AR、優選抗h-AR的抗體，或者患有或有發展為本文所公開的疾病的風險；或c)誘導免疫耐受，所述方法包括以下步驟給予需要這種醫療幹預的患者藥物活性量的本文所公開的環狀肽和/或藥物組合物，以及任選地藥物可接受的載體。本發明也涉及如本文所公開的環狀肽和藥物組合物，以及任選地藥物可接受的載體，用於a)治療、改善或預防0-AR活性增強、優選0rAR活性增強的疾病；b)治療以下患者具有抗日-AR、優選抗h-AR的抗體，或者患有或有發展為本文所公開的疾病的風險；或c)誘導免疫耐受。根據本發明待醫療幹預(治療、改善、預防或診斷)的疾病或如本文確定和描述的患者所患的疾病優選是那些其中i^-AR以非生理方式活化的疾病，更優選其中h-AR通過抗體、更優選通過抗h-AR的自身抗體活化的疾病。示例性地且優選地，根據本發明待醫療幹預的疾病或如本文確定和描述的患者所患的疾病包括，但不只限於心臟病類型。特別地，根據本發明待醫療幹預的心臟疾病或如本文所確定和描述的患者所患的心臟疾病可以包含但不限於感染性和非感染性心臟疾病、缺血性和非缺血性心臟疾病、炎症性心臟疾病和心肌炎、心臟擴張、特發性心肌病、(特發的)擴張性心肌病(DCM)、免疫性心肌病、心力衰竭和包括室性和/或室上性過早奪獲搏動及包括心房纖顫和/或心房撲動在內的任何房性心律失常的任何心律失常。換句話說，對於本發明的方法或環狀肽或藥物性組合物，本文給出的描述和定義中所提及的心臟疾病可以是選自下述的心臟疾病感染性和非感染性心臟疾病、缺血性和非缺血性心臟疾病、炎症性心臟疾病和心肌炎、心臟擴張、特發性心肌病(特發的)擴張性心肌病(DCM)、免疫性心肌病、心力衰竭和包括室性和/或室上性過早奪獲搏動及包括心房纖顫和/或心房撲動在內的任何房性心律失常的任何心律失常。需要注意的是，根據本發明待醫療幹預(治療、改善、預防或診斷)的最優選的疾病或如本文所確定和描述的患者所患的最優選的疾病為擴張性心肌病(DCM)，優選自發性擴張性心肌病。出於本發明的目的，「患者」的特定亞群為患有任一本文所描述的疾病的那些患者，更具體地為患有本文所描述的心臟疾病和同時具有抗0-ARs抗體、更優選抗f^-AR抗體的患者，其中抗體優選為自身抗體。根據本發明待醫療幹預(治療、改善、預防或診斷)的疾病或如本文所確定和描述的患者所患的疾病預期通過抗0-AR抗體、優選抗h-AR抗體被誘發。這些抗體優選為自身抗體。本文所提供的手段和方法在用於本文所確定的疾病的預防/防止時尤其有用。這意味著患者可應用本發明的環狀肽和/或藥物性組合物在本文所確定的疾病(症狀)發作前進行治療。例如，這一預防性治療在前述的診斷應用後，例如，所述診斷應用利用本文所提供的診斷手段和方法。因此，當診斷為具有發展為如本文所確定的疾病風險時，例如當檢測到抗0_AR(自身)抗體時，優選應用利用本發明的治療性手段和方法的預防性治療。在本文中，優選的「患者」為處於發展為如本文所確定的疾病風險中的患者。具體地，這一患者具有抗0-AR(自身)抗體、優選抗0rAR(自身)抗體，但還未患有如本文所確定的疾病或其症狀。本發明中免疫耐受的誘導可以考慮具體通過抑制抗0-AR分子的免疫原片段的抗體的產生來獲得，不受理論約束，這可歸因於對產生抗體的早期(成熟的)B細胞和記憶B細胞的抗原識別位點的阻斷。在本發明中，所提供的藥物性組合物或環狀肽特別用於治療、預防和/或改善在本文所確定的任一疾病和患者群或患者，包括在這些患者中利用上述的化合物檢測抗3-AR抗體。出於本發明的目的，「患者」，即待給藥本發明的化合物或患有本文所確定和描述的疾病或者預期依照本發明被診斷的那些，包括人類和其他的動物和有機體。從而本發明的化合物和方法可應用於或與包括診斷劑、診斷步驟和方法及分期步驟和方法在內的人類治療和獸醫應用有關。在一優選實施方案中，患者為哺乳動物，並且在最優選的實施方案中，患者為人類。本發明的突變環狀肽也可以用於製備治療、預防和/或改善如本文所確定的任一疾病和患者群/患者的藥物。本文就藥物組合物所述的內容也適用於本發明肽可以用於其生產的藥物。仍在另一方面，本發明涉及診斷試劑，其包含或是本發明的環狀肽或組合物，以及任選地至少一個另外的生物活性化合物。本文所公開的診斷劑優選包含或由本發明的突變肽組成，其中突變肽包含標記物。這種標記物可以選自包含放射性標記物和螢光標記物的組。相應的標記物是本領域技術人員已知的。如上文所給出的標記物的定義和描述應用於此，並可以作必要的修改。代表性地，肽為賦予診斷劑特異結合特徵的診斷劑的部分，優選結合抗0fAR抗體，而標記物賦予診斷劑信號特徵。除了標記的或未標記的本發明的突變肽以外，本發明的診斷劑可以包含另外的生30物活性化合物。這種另外的生物活性化合物可以是賦予診斷劑信號特徵的一種手段，尤其在本發明的突變肽未標記的情況下。例如，另外的生物活性化合物可以是抗體，優選單克隆抗體，更優選特異性結合本發明的突變肽的標記的抗體或結合由本發明的突變肽和抗3-AR抗體、優選抗0rAR抗體組成的複合物的標記的抗體。在另一方面，本發明涉及診斷本文所確定和描述的疾病的方法，其包含以下步驟a)利用本發明的環狀肽或組合物或診斷劑檢測抗0-AR的抗體(例如在樣品中)；和b)當上述抗體的滴定度增加時，診斷為上述疾病。在另一方面，本發明涉及利用本發明的突變肽、藥物組合物和藥物診斷能夠被治療的患者的方法。在該特定方法中也可使用利用本發明的化合物檢測針對0-AR的抗體(例如在樣品中)的步驟和/或考慮上述檢測步驟的結果是否提示本文所確定的疾病的步驟。如所提及的，當上述的抗0-AR抗體的滴定度增加時，即指示本文所確定的疾病或發展為本文所確定的疾病的風險。在另一方面，本發明涉及用於診斷如本文所確定的疾病(例如在樣品中)的如本文所提供和描述的環狀肽、組合物或診斷劑。同樣，通過抗3-AR抗體增加的滴定度指示本文所確定的疾病或發展為本文所確定的疾病的風險。在本發明中，術語「抗0-AR抗體增加的滴定度」意指抗0-AR抗體(例如在來自本發明待診斷的患者的樣品中)的滴定度高於健康對照患者的滴定度，所述健康對照患者也就是沒有患本文所確定的疾病的患者和/或沒有抗0-AR抗體的患者。如所提及的，健康患者中，抗0-AR抗體通常是幾乎或完全不存在的或不可檢測的。因此，本發明的「抗0-AR抗體增加的滴定度」優選指抗0-AR抗體的任何出現，即可檢測量的抗0-AR抗體的任何出現。根據本發明，合適的「樣品」包括，但並不限於，(a)生物或醫學樣品，例如像包含細胞或組織的樣品。例如這種樣品可以包含活檢組織的生物物質。「活檢組織」的含義為本領域中所知。例如，活檢組織包括主治醫生取自本文所描述的患者/個體的細胞或組織。示例性而非限定性的本發明中待分析的生物或醫學樣品為或衍生於血液、血漿、血白細胞、尿液、精液、痰液、腦脊液、淋巴或淋巴組織或細胞、肌細胞、心臟細胞、靜脈或動脈來源的細胞、神經細胞、脊髓來源的細胞、腦細胞、肝細胞、腎臟細胞、腸道來源的細胞、睪丸來源的細胞、泌尿生殖道來源的細胞、結腸細胞、皮膚、骨、骨髓、胎盤、羊水、毛髮、毛髮和/或毛囊、幹細胞(胚胎的、神經元的和/或其它的)或原代或永生性細胞系(淋巴細胞、巨噬細胞或細胞系)。根據本發明，優選的「樣品」為衍生於血液或血漿的那些。本文所確定的生物或醫學樣品也可以是或衍生於活檢組織，例如衍生於心臟組織、靜脈或動脈的活檢組織。在另一方面，本發明涉及診斷試劑盒，例如用於檢測針對0-AR的抗體的診斷試劑盒，包含本發明的環狀肽、組合物或診斷劑。根據本發明的試劑盒包含本發明所公開的至少一個化合物，例如像本發明的環狀或線性肽，本發明的核酸分子、載體或宿主細胞或本發明的組合物或診斷劑。在一具體實施方案中，試劑盒還包含說明書和/或用於試劑盒應用的緩衝液、和/或執行試劑盒用於或待用於的檢測反應的至少一個反應容器。在另一實施方案中，至少一個、一些或所有的用於與31上述試劑盒應用相關的試劑作為用於執行反應額部分存在，所述反應為試劑盒用於或待用於的反應。本發明的環狀肽、診斷試劑或試劑盒也可以應用於3fAR的檢測。因此，本發明的環狀肽、診斷劑或試劑盒具體用於鑑定/檢測細胞或組織表面的結合的抗h-AR抗體。例如，本發明的環狀肽、診斷劑或試劑盒可用於成像目的，像單光子發射斷層攝影術(SPECT)、MiBi、PET、磁共振斷層攝影術(MRI)或其他應用於醫學的診斷成像技術。由於1311_標記的CP-體內分布模式(圖30)，例如本發明的環狀肽、診斷劑可具體用作器官特異性示蹤劑。將本發明的化合物分別用作診斷劑和用於診斷方法中的一個特定方法是三步篩選法。例如這一方法包括使用本發明的環狀肽進行酶聯免疫吸附測定(ELISA)，以及確定表達天然人類0-AR的細胞中的免疫螢光和cAMP反應。公認的是，利用本發明的環狀肽，能夠同樣地進行前述的每一步驟用於上述抗體的檢測。由此基於功能活躍的抗Pi-AR抗體，篩選出大量患者，例如心力衰竭患者。結合這種(而且與本文所公開的其他的)診斷方法，功能活躍的抗0i-AR抗體的定義優選基於它們對受體介導的信號轉導的作用，即它們對細胞cAMP水平和對cAMP-依賴性蛋白激酶(PKA)的活性的作用。環AMP為包括0-AR家族在內的許多G蛋白偶聯受體的通用二級信使。它通過PKA、cAMP門控離子通道、磷酸二酯酶和cAMP直接活化的交換蛋白(稱為Epac1和2)發揮作用。現有技術描述了若干用於測定完整細胞中cAMP的螢光方法，其都可用於本發明的診斷方法中。與PKA的調節和催化亞基融合的綠色螢光蛋白(GFP)變體間的螢光共振能量偏移(FRET)已被描述用於研究神經元(HempelCM,VincentP,AdamsSR，TsienRY,SelverstonAI.Nature.1996;384:113-114)或心肌細胞(ZaccoloM，PozzanT.，Science.2002；295:1711-1715)中的cAMP的時空動力學。更近地，本領域中描述了單鏈螢光指示劑，其特徵在於具有與Epac蛋白的cAMP結合結構域直接融合的增強的藍綠色(CFP)或黃色(YFP)螢光蛋白，這可允許獲得敏感性更高和瞬時解析度更好的cAMP測定。在W02005/052186等中描述了這一系統。利用本發明的環狀肽或其他相應的化合物，這一系統能夠與本發明的任一診斷方法聯用。這一系統也能夠用於分析功能活躍的抗h-AR抗體的流行性，然而並不僅限於此。優選地，這一診斷方法應用於先前抗體驗明的DCM患者組群或任何待被評估的個體或疑似患有任一本文所描述疾病或有患任一本文所描述疾病風險的個體。診斷方法和篩選方法的另外步驟中，可分別評估和確定0阻斷劑抑制抗f^-AR抗體誘導的受體活化作用的能力。前述測定方法是有利的，因為它較簡單、耗時更少且同時披露或鑑定所有先前被認為抗h-ECn抗體陽性的DCM患者，所述測定方法為利用本發明的肽的如W02005/052186中所描述的基於FRET的方法。利用本發明的一種或幾種肽的基於FRET的診斷方法的該實施方案基於檢測抗體誘導的cAMP增加。總之，Epac-FRET篩選看起來代表了非常敏感的單步驟方法，其允許檢測直接針對人3rAR的活化的抗體。因此，本發明也涉及本發明的一種或幾種肽在Epac-FRET測定中的應用。更優選地，這種Epac-FRET測定用於診斷，甚至更優選地用於患有或疑似患有本文所描述的任一疾病的患者的診斷。鑑於上述，依照本發明，特別優選地使用或應用FRET技術，特別是基於FRET的檢測系統。在另一方面，本發明涉及用於檢測針對0-AR(例如在如本文所確定的樣品中)的抗體的方法，其包含上述待被檢測的抗體與本發明的環狀肽相接觸的步驟。在另一方面，本發明涉及用於檢測(例如在如本文所確定的樣品中)抗0-AR的抗體的如本文所公開的環狀肽、組合物或診斷劑。上述檢測抗體或環狀肽、組合物或診斷劑的方法特別用於應用在在本發明所提供和描述的診斷應用中。本申請自始至終中，下列的縮寫詞的含義如下Ab或ab抗體，Abs或或abs多個抗體，AR腎上腺素受體，EC3-AR的細胞外結構域，ECn3-AR的細胞外結構域II以及AA胺基酸。參考下文的非限定性的附圖和實施例進一步描述了本發明。圖1為顯示日rECn-25胺基酸(AA)環肽和突變的3rECn-25AA環肽(具有原始的Cys殘基(白球)或絲氨酸突變的半胱氨酸(黑球；分別為Cys/Ser或Ser/Cys)的黑環)的結構設計，以及顯示分別在210nm或220nm波長下檢測的高液壓液相色譜洗脫圖譜的圖。對含有3個Cys的0rECn-25AACys/Cys環肽，在Waters分離模塊(WatersSeparationModul)2690連同Waters雙A(WatersDualLambda)吸光度檢測器中進行高壓液相色譜；220nm處讀取吸光度。肽合成和環化後，將樣品溶解於水乙睛(ACN)中，然後力口載於流速為lml/minNuclosil100—5/C18柱(Macherey-NagelInc.，Germany；柱長250nm，管腔4mm)；然後在0.2%TFA存在下跑5%-60%ACN的分離梯度。殘餘微弱量的線狀3fECnISAA肽出現小峰，通常在14到16分鐘間，而含有31-ECII-25AACys/Cys環肽的部分在18分鐘到20分鐘出現。突變25AA環肽的高壓液相色譜的操作利用流速為lml/min的繼而在分離梯度為0.1%TFA中含5%到60%ACN的矽氧碳18柱(15iim，120A，長250mm，管徑4mm)走柱。含有環狀0fEC^jSAA突變體的部分通過紫外線吸收法(210nm)監測，並且顯示了在10.5分鐘(25AACys/Ser-突變體，左側)或16.5分鐘(25AASer/Cys，右側)出現的銳利的單洗脫峰。圖2為顯示突變的0fECnISAA或18AA環肽(具有原始的半胱氨酸殘基(白球)或絲氨酸突變的半胱氨酸(黑球；分別為半胱氨酸/絲氨酸或絲氨酸/半胱氨酸)，連同參與頭到尾閉合後一級環結構形成的胺基酸(閉合位點，Ala-DGlu，或Pro-Lys)的結構設計的圖。對於固相上合成環狀3fECn-lSAA(或31-ECII-25AA)肽，將具有側鏈保護基團的Fmoc-Glu-ODmab或其他Fmoc胺基酸合併到線性肽的C末端，所述保護基團可被選擇性以正交方式裂解掉。環狀肽從合成樹脂裂解下來產生肽醯胺(在D-Glu—Gin的情況下)且通過三氟乙酸/三乙丙基矽烷/乙烷二硫醇/水處理樹脂幾個小時來移除側鏈的保護性基團。圖3顯示了展現本發明的兩個線性肽(左側，分別為18AA半胱氨酸/絲氨酸和25AA半胱氨酸/半胱氨酸)和4個突變的環肽的高壓液相色譜洗脫圖譜的6個圖面，所有突變的環肽為具有Pro-Lys閉合位點的含有Gln的環肽。突變的25AA-或18AA-環肽的HPLC在Waters分離模塊以及紫外線吸收檢測儀中進行操作。讀取210nm處的吸光度。肽合成和環化後，將樣品溶解於水/5%乙睛(ACN)且加載於流速為lml/min的C18矽柱上(15μm,120A,柱長250mm，管腔4mm)；然後在0.1%TFA存在下跑5%-60%ACN的分離梯度。如它們的線性對應物所顯示的，包含環狀β^EC11-ISAA突變體的部分(上面一行，中間的圖面)(半胱氨酸/絲氨酸，14分鐘)，右側圖面(絲氨酸/半胱氨酸，16.5分鐘)；或^1-EC11ISAA突變體(下面一行，中間的圖面(半胱氨酸/絲氨酸，10.6分鐘)，右側圖面(絲氨酸/半胱氨酸，16.5分鐘)的部分在所示的時間點出現銳利的單洗脫峰。圖4為顯示具有DGlu環閉合的β!-EC11-ISAA環肽突變體(半胱氨酸/絲氨酸突變，白色柱；絲氨酸/半胱氨酸突變，右斜陰影線柱)阻斷能力的圖，顯示了利用含有3個半胱氨酸的線性25ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原的ELISA競爭性測定中，上述突變體與含有3個半胱氨酸的18ΑΑ環肽(黑色柱)相比的阻斷能力的在。描述了利用自12隻不同的免疫的抗體陽性大鼠血清分離出的IgG部分獲得的代表性結果。y軸代表使用的不同肽的阻斷功效，表示為血清與所示環肽預孵育後(12小時過夜，4°C旋轉培養箱)，阻斷的相對非阻斷的血清ELISA-反應的百分比。圖5為顯示了具有DGlu環閉合的P1-EC11-ISAA環肽突變體(半胱氨酸/絲氨酸突變，白色菱形；絲氨酸/半胱氨酸突變，黑色菱形)阻斷能力的圖，顯示了利用含有3個半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原的ELISA競爭性測定中，所述突變體與含有3個半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽(黑色方塊)相比的阻斷能力。利用取自抗體陽性的心肌病大鼠的單一代表性血清(圖4，4號大鼠)。Y軸代表通過ELISA所確定的特異性抗P1-EC11IgG抗體的濃度，χ軸對應於用於預孵育IgG部分(12h，4°C，旋轉培養箱)的線性或環狀肽的摩爾超出量，假定11化學計量(假定一個環狀(2.IKDa分子量(MM)或線性肽(3.OKDaMM)阻斷一個IgG抗體(150KDaMM))。圖6為顯示了利用螢光共振能量轉移(FRET)的方法，具有DGlu環閉合的βrECn-18AA環肽突變體對β！受體介導的信號轉導(功能性cAMP測定)的的阻斷能力的圖。將代表性大鼠(血清)(圖4，4號大鼠)的抗β^EC11IgG抗體與β^EC11-ISAA環肽突變體(半胱氨酸/絲氨酸突變，深藍(3)；絲氨酸/半胱氨酸雜合，淺藍(4))的預孵育(12h，4°C，旋轉培養箱)的效應與含有3個半胱氨酸的25AA半胱氨酸/半胱氨酸環肽(紅色(2))的效應或在無阻斷性肽存在情況下抗P1-EC11IgG抗體所獲得的結果對比(黑色⑴)。Y軸代表記錄的FRET發射信號的標準化的YFP/CFP比，χ軸對應於以秒計的記錄時間。圖7為在利用線性的含有3個半胱氨酸的25ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原的ELISA競爭性測定中，與從源自免疫的抗體陽性大鼠的78血清分離出的IgG預孵育後，繼續描述具有DGlu環閉合的環肽突變體的阻斷效應的圖。柱代表突變的P1-EC11ISAA環肽(半胱氨酸/絲氨酸突變，黑色柱；絲氨酸/半胱氨酸突變，白色柱)與含有3個半胱氨酸的18ΑΑ環肽(垂直陰影柱)、含有3個半胱氨酸的25ΑΑ環肽(水平陰影柱)或含有3個半胱氨酸的線性25ΑΑ肽(右斜線陰影柱)相比所獲得的結果。誤差棒顯示平均值的標準誤(士SEM)。y軸代表所用的不同肽的阻斷功效，表示為阻斷的相對未阻斷的血清ELISA-反應性的百分比。圖8為在利用η=82的經免疫抗體陽性大鼠的血清進行的ELISA競爭性測定中，繼續描述β^EC11ISAA環肽突變體(具有DGlu環閉合)的阻斷效應的圖。約95%的血清能被單獨的^-EC11ISAACys/Ser突變環肽(左側白色柱的上部示意的)有效阻斷，而約5%的血清被18AACys/Ser-和18AASer/Cys突變體(右側黑色柱的上部示意的後者)的兩者所阻斷。圖9為由兩個主要的(上面的和下面的)圖面組成的圖，顯示了在利用含有3個半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原的競爭性ELISA測定中，與自69隻不同的經免疫抗體陽性的大鼠分離的血清預孵育(12h，4°C，旋轉培養箱)後，具有Gln閉合位點的25AA和18AA環肽突變體及具有DGlu閉合位點的18AA環肽突變體的重新獲得的阻斷效應。上部圖面描述了優先與半胱氨酸/絲氨酸突變環肽反應(類型1反應，η=64)的大鼠血清，分別在cyc25AA(Gln)肽(左側)和eye18AA(Gln和DGlu)肽(右側)中。下部圖面描述了與半胱氨酸/絲氨酸和絲氨酸/半胱氨酸突變的環狀肽反應(類型2反應，η=5)的大鼠血清，同樣分別在用cyc25AA(Gln)肽(左側)和cycl8AA(Gln和DGlu)肽(右側)所獲得的結果中。兩個圖面中左側的前三個柱代表用(非突變的)含有3個半胱氨酸的25AA(Gln)環肽(黑色柱)和突變的βrECn-25AA(Gln)環肽(半胱氨酸/絲氨酸突變，白色柱；絲氨酸/半胱氨酸突變，水平陰影柱)所獲得的結果。兩個圖面中右側的五個柱代表用含有3個半胱氨酸的ISAA(Gln)環肽(黑色柱)與另外的含有2個半胱氨酸的突變18AA環肽(具有Gln閉合位點的18AA半胱氨酸/絲氨酸突變體，白色柱；具有DGlu閉合位點的18AA半胱氨酸/絲氨酸突變體，左斜線陰影柱(digonallylefthatchedcolumn)；具有Gln閉合位點的18AA絲氨酸/半胱氨酸突變體，右斜線陰影柱(diagonallyrighthatchedcolumn)；具有DGlu閉合位點的18AA絲氨酸/半胱氨酸突變體，垂直陰影柱)相比所獲得的結果。誤差棒代表平均值的標準誤(士SEM)。y軸代表所用的不同肽的阻斷功效，表示為阻斷的相對非阻斷的血清ELISA-反應的百分比。圖10為在用源自η=69經免疫抗體陽性大鼠的血清的競爭性ELISA測定中，繼續描述^1-EC11-ISAA(Gln)環肽突變體的阻斷能力的圖。約93%(η=64)的血清可被單獨的β!-EC11-ISAA半胱氨酸/絲氨酸突變的肽有效阻斷(左側白色柱的上部所示意的)，而約7%(η=5)的血清被18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸和18ΑΑ絲氨酸/半胱氨酸突變體(後者如右側黑色柱的上部所示意的)兩者所阻斷。圖11為在採用源自η=6隨機選取的經免疫抗體陽性大鼠的血清的競爭性ELISA測定中，繼續描述不同線性和環狀β^EC11肽的劑量依賴性(X軸，橫坐標特定肽的摩爾超出量的-倍數)阻斷能力的圖，表示為未阻斷的抗體滴定度的百分比(y軸，縱坐標)，所述肽包括25AA半胱氨酸/半胱氨酸線性肽(黑色方塊)、25AA半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體(白色方塊)、18AA半胱氨酸/半胱氨酸環肽(黑色菱形)、18AA半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體(白色菱形)和18AA半胱氨酸/絲氨酸線性肽突變體(垂直陰影菱形)。所有的血清被β!-EC11-ISAA半胱氨酸/絲氨酸突變環肽最有效地阻斷，其次是非突變的18ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸環肽和25ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變環肽。所有的環肽(具有或不具有突變)在抗體阻斷能力方面大大優於它們的線性對應物(P<0.005)。圖12為繼續描述不同線性和環狀h-EQjt在第一次免疫(和兩個隨後的3rECn/GST抗原加強，對應於預防方案)後3月開始，總共5次(預防性)應用的體內阻斷能力的圖。B1受體抗體的血清滴定度在每一肽注射前和注射後18-20小時(橫坐標，時間以月為單位)確定，並表示為免疫的未處理的大鼠的相應抗體滴定的百分比(y軸，縱坐標)。注射的肽為25AA半胱氨酸/半胱氨酸線性肽(黑色方塊)、25AA半胱氨酸/半胱氨酸環肽(白色方塊)、18AA半胱氨酸/半胱氨酸環肽(黑色菱形)、18AA半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體(白色菱形)以及18AA半胱氨酸/絲氨酸線性肽突變體(垂直陰影線菱形)。環狀肽在體內的功效也大大優於它們的線性對應物。抗體中和作用的最大效能的取得在l.Omg/kg體重(Bw)的非突變25AA半胱氨酸/半胱氨酸或18AA半胱氨酸/半胱氨酸環肽(在5次環肽注射後87.7士2%或89.9士3%降低，與未處理的免疫動物相比，皆P<0.005)，其次是18AA半胱氨酸/絲氨酸突變環肽(在5次環肽注射後54.5士2%降低；P<0.05)，而同一濃度的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽或線性18AA半胱氨酸/絲氨酸突變體無顯著的阻斷效應(在5次環肽注射後25.8士3%或4.5士11%降低，分別為P=0.16或P=0.8)。黑圈顯示作為參照的未定期處理的(每4周)免疫的動物的抗體滴定度，設定為100%。圖13顯示了用從免疫的抗^陽性心肌病的未處理的動物(^未處理的，黑色柱)的骨髓(左側柱)或脾臟(右側柱)製備的B細胞進行的ELISP0T測定的結果，與從預防性地用25AAECn半胱氨酸/半胱氨酸環肽(25cyc.Cys/Cys,垂直陰影柱)，18AAECn半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體(18cyc.Cys/Ser,右斜線陰影柱)，或線性18AAECn半胱氨酸/絲氨酸肽突變體(181in.Cys/Ser，水平陰影柱)處理的免疫的抗0工抗體陽性的心肌病的動物中分離出來的那些相比較。對於這一測定，利用0.05mol/lTris緩衝液pH9.4.中的特異性抗原(GST/0rECn-FP)包被ELIspot板並過夜，然後洗板三次並在37°C應用BSA阻斷3小時。繼而在37°C將板用來源於脾臟或骨髓的B細胞(培養於添加了10%胎牛血清(FCS)的RPMI1640/X-VIV0-15培養基中)孵育過夜保持每孔1X106到1X103細胞。12小時後去除B細胞並將結合有B細胞分泌性IgG的板洗滌若干次(PBS/0.5%Tween)，然後添加鹼性磷酸酶偶聯的抗大鼠IgG二抗(0.g/ml)以檢測結合的大鼠IgG。然後將板在37°C再孵育3小時，用PBS/0.5%Tween洗滌若干次，利用LMP/BICP51(lml每孔；」LMP」意為低熔點瓊脂糖，」BICP」意為5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸對甲苯胺鹽，藍色的染料)顯色允許對所獲得的藍色斑點定量，每一個斑點代表脾臟或骨髓細胞分泌的一個抗原特異性IgG。圖14為繼續描述帶有Gin閉合位點的25AA和18AA環肽突變體在第一次靜脈注射(i.v.)1.Omg/kg體重(Bw)到免疫的抗體陽性的大鼠中後所所測定的的體內阻斷效應的圖。在靜脈注射1.0或0.25mg/kgBw的所示的肽後18-20小時提取血清並利用含有3個半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原通過ELISA測定反應性。圖面中的第一組代表了用突變的含有2個半胱氨酸的25AA半胱氨酸/絲氨酸(穀氨醯胺)_環肽(第一組的上方所示意的，陰影化圓圈)處理的大鼠組(n=5)，第二和第三組代表了用兩種不同濃度的突變的18AA半胱氨酸/絲氨酸(穀氨醯胺)環肽(n=40，lmg/kgBw；n=9,0.25mg/kgBw，第二組上部描述的環狀肽圖，白色圓圈)處理的大鼠組，第四組代表了用突變的18AA絲氨酸/半胱氨酸(穀氨醯胺)環肽(lmg/kgBw，第四組的上部描述的環狀肽圖，黑色菱形)處理的n=4動物，第五組代表了靜脈注射含有兩個半胱氨酸的線性18AA半胱氨酸/絲氨酸(穀氨醯胺_)肽(第五組的上方描述的線性肽圖，黑色圓圈)所獲得的結果。每一組的長條和序號(框內(inboxes))代表靜脈注射肽前或注射肽後18-20小時(y軸)相應標示肽的阻斷能力的平均值，表示為血清ELISA免疫反應的百分比圖15為繼續描述帶有Gln閉合位點的25AA和18AA環狀肽突變體在第一次靜脈注射lmg/kgBw或0.25mg/kgBw到免疫的抗體陽性的大鼠後所確定的體內阻斷效應的圖。在靜脈注射各種肽後18-20小時後提取血清並利用含有3個半胱氨酸線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸作為抗原通過ELISA測定反應性。圖表描述了注射不同肽後取自抗體陽性免疫大鼠血清中特異性抗β！受體抗體滴定度的相對降低(或增加)以及顯示了靜脈注射肽前或注射肽後18-20小時相應標明肽的阻斷能力的平均值(y軸)，表示為血清的ELISA免疫反應的百分比。圖面右側的符號代表白色方塊，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(lmg/kgBw)；白色菱形，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(0.25mg/kgBw)；黑色菱形，18AA絲氨酸/半胱氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(lmg/kgBw)；水平陰影方塊，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變線性(穀氨醯胺)肽(lmg/kgBw)；黑色方塊，25AA半胱氨酸/絲氨酸突變的(穀氨醯胺)環肽(lmg/kgBw)0為了清楚，誤差棒沒有在圖中顯示。圖16A為繼續描述帶有Gln閉合位點的25AA和18AA環肽突變體體內阻斷效應的圖，這在將1.0mg/kgBw的所示肽總計9次靜脈注射到免疫的抗體陽性大鼠後所確定。每4周靜脈注射不同肽前和注射後18-20小時(橫坐標以月為時間的處理)提取血清並利用含有3個半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原通過ELISA測定反應性。圖表描述了注射不同肽後，來自抗體陽性的免疫大鼠血清中的特異性抗P1受體抗體滴定度的相對降低(或增加)，並顯示了以開始處理前初始ELISA免疫反應性的百分比表示的肽阻斷能力的相應的平均值(y軸，縱坐標)。符號表示黑色圓圈，未定期(每4周)處理的免疫的動物(n=9)；白色菱形，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(1.Omg/kgBw,η=20)；黑色正方形，25ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(1.Omg/kgBw,η=5)。圖16Β為繼續描述不同濃度的帶有Gln閉合位點的18ΑΑ環肽突變體，在總共9次靜脈注射0.25，1.0，2.0和4.Omg/kgBw到免疫抗體陽性大鼠後所確定的體內阻斷效應的圖，不考慮個別動物的環肽「應答器狀態(responder-state)」。每4周靜脈注射不同種肽前和注射後18-20小時(橫坐標以月為時間單位)提取血清並利用含有3個半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原通過ELISA測定反應性。圖表描述了注射所示的肽後，來自抗體陽性的免疫的大鼠血清中的特異性抗受體抗體滴定度的相對降低(或增加)，並顯示了以開始處理前初始ELISA免疫反應性的百分比表示的肽阻斷能力的相應的平均值(y軸，縱坐標)。符號表示黑色圓圈，未定期(每4周)處理的免疫的動物(n=9)；白色圓圈，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(0.25mg/kgBw,n=4)；白色菱形，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(1.Omg/kgBw,η=20)；垂直陰影化菱形，18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(2.0mg/kgBw,n=5)；黑色菱形，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(4.Omg/kgBw,η=9)。圖16C為繼續描述不同濃度的帶有Gln閉合位點的18ΑΑ環肽突變體，在總共9次靜脈注射0.25、1.0,2.0和4.Omg/kg體重(Bw)到免疫的抗體陽性大鼠後所確定的體內阻斷效應的圖，只考慮環肽敏感性「應答器」，這由如下確定在注射7次環肽後，動物具有的最大殘餘受體抗體水平等於或低於治療開始時的相應滴定度的80%(對比圖16c和圖16b的曲線，後者代表未選擇的動物的天然存在的多相應答)。如上文所描述的，提取血清並利用含有3個半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原通過ELISA測定反應性。圖表顯示，注射所示的肽後，來自抗體陽性的免疫的大鼠血清中的特異性抗β！受體抗體滴定度的相對降低，將阻斷能力表示為初始ELISA免疫反應性的百分比(y軸，縱坐標)°符號表示(粗體表示的應答器數)黑色圓圈，未定期(每4周)處理的免疫的動物(n=9)；白色圓圈，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(0.25mg/kgBw,η=3/4)；白色菱形，18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(1.Omg/kgBw,n=16/20)；垂直陰影化菱形，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(2.Omg/kgBw,η=2/5)；黑色菱形，18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(4.Omg/kgBw,η=6/9)。圖17Α為顯示了以下內容的圖=GSTZ^1-ECn-免疫的未治療的(黑色圓圈)與用標明的不同環肽(見圖例)治療的GST/I-EC11-免疫的動物通過超聲心動描記術(超聲心動圖系統可視聲學，VevO770(版本V2.2.3)，裝備有15-17.5MHz換能器)所確定的內部的收縮末期的和舒張末期的左心室直徑的時程(O到20月)，從而LVES/LVED為左心室收縮末期直徑和左心室舒張末期直徑。符號表示白色圓圈，未治療的0.9%NaCl注射的未免疫的對照動物(η=10)；黑色圓圈，未定期(每4周)治療的免疫動物(η=9)；白色菱形，18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(1.Omg/kgBw,η=20)；黑色方塊，25ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(1.Omg/kgBw,n=5)；白色方塊，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變線性(穀氨醯胺)肽(1.Omg/kgBw,η=5)ο圖17Β為類似的表現GSTZ^1-EC11-免疫的未治療的(黑色圓圈)與用不同濃度的18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體(見圖例)治療的βrECn-免疫的動物的內部收縮末期的和舒張末期的左心室直徑(LVES，LVED)的時程(O到20月)的圖。符號表示白色圓圈，未治療的0.9%NaCl注射的未免疫的對照動物(η=10)；黑色圓圈，未定期(每4周)治療的免疫的動物(η=9)；白色正方形，18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(0.25mg/kgBw,n=4)；白色菱形，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(1.Omg/kgBw,η=20)；垂直陰影化菱形，18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(2.Omg/kgBw,η=5)；黑色菱形，18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(4.Omg/kgBw，η=9)。圖18為顯示在GSTz^1-ECii-免疫的大鼠與0.9%NaCl注射的大鼠中的特異性抗β^EC11抗體的滴定度過程(O到9月)的圖，其中「β/』表示免疫的動物(根據本發明在用肽開始治療之前)，"NaCl對照」表示相應的NaCl注射的對照動物。圖19Α為描述通過超聲波心動描記術(超聲心動圖系統，見圖17a的圖例)所確定的以ml/min/g(體重)表示的「心指數(cardiacindex)，，(Cl)的時程(0到20月)圖。符號表示白色圓圈，未治療的0.9%NaCl注射的未免疫的對照動物(η=10)；黑色圓圈，未定期(每4周)治療的免疫的動物(η=9)；白色菱形，18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(1.Omg/kgBw,η=20)；黑色正方形，25ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(1.Omg/kgBw,η=5)；白色正方形，18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變線性(穀氨醯胺)肽(1.Omg/kgBw,η=5)。圖19Β為類似的顯示通過超聲波心動描記術(超聲心動圖系統見圖17a的圖例)所確定的以ml/min/g(體重)表示的「心指數」(Cl)的時程(O到20月)圖。符號表示白色圓圈，未治療的0.9%NaCl注射的未免疫的對照動物(η=10)；黑色圓圈，未定期(每4周)治療的免疫的動物(η=9)；白色正方形，18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(0.25mg/kgBw,n=4)；白色菱形，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(1.Omg/kgBw,η=20)；垂直陰影化菱形，18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽(2.Omg/kgBw,η=5)。圖20顯示在10個月的治療後治療性研究中所獲得的血液動力學參數的三組圖面(a，b，c)，具體地，第一組在第一組(a)的每一圖面的左側顯示了以每分鐘跳動(=bpm)為單位的心率(HF)，右側顯示了以mmHg為單位的LV收縮期血壓(LV壓)；第二組(b)的每一圖面的左側顯示了以mmHg/s為單位的收縮性(+dP/dt)以及右側顯示了以-mmHg/s為單位的舒張(-dP/dt)；第三組(c)表現了通過心導管檢查術所確定的以mmHg為單位的左心室舒張末期壓(LVEDP)。每一組中的左和右圖面分開用(左圖面，不同的肽均為1.Omg/kgBw)環狀18AA半胱氨酸/絲氨酸(右斜線線陰影柱，η=20動物)、線性半胱氨酸/絲氨酸突變體(水平陰影柱，η=5動物)和環25ΑΑCys/Ser突變體(豎直陰影柱，η=5動物)獲得的數據。右側圖面中的柱代表不同濃度的環狀18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變體所獲得的數據白色填充的黑色圓點柱對應於0.25mg/kgBw(η=4動物)，右斜線陰影柱對應於1.Omg/kgBw(η=10動物)，左斜線陰影柱對應於2.Omg/kgBw(η=5動物)以及黑色結構柱對應於4.Omg/kgBw(n=9動物)。每一圖面中的黑色和白色柱作為參照並對應於未定期(每4周)處理的免疫的動物(陽性對照，黑色，η=9)或0.9%NaCl注射的未免疫的對照動物(陰性對照，白色，η=10)。圖例中「βr未處理的」表示免疫的抗β！抗體陽性心肌病未處理的動物(η=9，黑色柱)，「對照」表示0.9%NaCl注射的對照組(η=10，白色柱)，「IScyc半胱氨酸/絲氨酸」表示在免疫9個月後利用標示的線性ISlin半胱氨酸/絲氨酸(n=5[1.Omg/kgBw]或環狀IScyc半胱氨酸/絲氨酸突變體(n=10[1.Omg/kgBw]或環狀25AA半胱氨酸/絲氨酸突變體(n=4[1.Omg/kgBw)治療性處理的免疫的抗β工抗體陽性心肌病動物。右側圖面描述了不同劑量的經靜脈內注射的P1-ECiiISAA半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體(分別為η=4；η=20[LOmg/kgBw],η=5[2.Omg/kgBw]，禾口η=9[4·Omg/kgBw])的效應。通過單因素方差分析(onewayANOVA)評估組間差異；n.s=無顯著性，<0.05,<0.005。圖21顯示了兩個圖面(a和b)，表現了來自如柱中的治療研究的動物的宏觀解剖學參數。上圖面(a)表現了以g/kg體重為單位的所示器官(自左到右為心臟，脾臟，右側腎臟，左側腎臟，肺臟和肝臟)的相對溼重，從而"P1-未處理的」表示免疫的抗^抗體陽性心肌病未處理的動物(η=9，黑色柱)，」對照」表示0.9%NaCl注射的對照組(η=10，白色柱)，「IScyc半胱氨酸/絲氨酸」表示在免疫9個月後利用標示的線性ISlin半胱氨酸/絲氨酸(η=5[1.Omg/kgBw]，水平陰影柱)或環狀IScyc半胱氨酸/絲氨酸突變體(η=20[1.Omg/kgBw]，斜線陰影柱)或環狀25AA半胱氨酸/絲氨酸肽突變體(n=4[1.Omg/kgBw]，垂直陰影柱)治療性處理的免疫的抗β工抗體陽性心肌病動物。下圖面(b)表現了免疫的抗β！陽性心肌病動物以g/kg體重表示的所示器官(自左到右為心臟，脾臟，右側腎臟，左側腎臟，肺臟和肝臟)的相對淨重，所述免疫的抗P1陽性心肌病動物在免疫9個月後利用所示劑量的β!-EC11ISAA半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體(n=4，白色填充黑色圓點柱；η=20[1·Omg/kgBw]，右斜線陰影柱，η=5[2.Omg/kgBw]，左斜線陰影柱；η=9[4.Omg/kgBw]，黑色結構柱)治療性處理，從而「βr未處理的」表示免疫的抗β！抗體陽性心肌病未治療的動物(η=9，黑色柱)，「對照」表示0.9%NaCl注射的對照組(η=10，白色柱)。腎臟R表示右側腎臟，腎臟L表示左側腎臟。通過單因素方差分析評估組間差異；n.s=無顯著性，*Ρ<0.05,**Ρ<0.005。圖22表現了10個月治療後在動物血清中測定的不同實驗室參數的兩個圖面(a和b)。兩個圖面中的"P1-未處理的」和「對照」分別地表示免疫抗^抗體陽性心肌病未處理的動物(η=5，黑色柱，陽性對照)和0.9%NaCl注射的對照組(η=6，白色柱，陰性對照)。上圖面(a)表現了免疫9個月後利用標明的線性ISlin半胱氨酸/絲氨酸(η=5[1.Omg/kgBw]，水平陰影柱)或環狀IScyc半胱氨酸/絲氨酸突變體(η=20[1.Omg/kgBw]，右斜線陰影柱)或環狀25AA半胱氨酸/絲氨酸肽突變體(η=4[1.Omg/kgBw]，垂直陰影柱)治療性處理免疫的抗β工抗體陽性心肌病動物的參數。下圖面(b)表現了免疫9個月後利用所示劑量的β!-EC11ISAA半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體(n=4，白色填充黑色圓點柱；η=20[1.Omg/kgBw]，右斜線陰影柱，n=5[2.Omg/kgBw]，左斜線陰影柱；η=9[4.Omg/kgBw]，黑色結構柱)治療性處理免疫的抗β！陽性心肌病動物的參數；Crea表示肌酸酐；GOT表示穀氨酸草醯乙酸轉氨酶；GPT表示穀氨酸丙酮酸轉氨酶；LDH表示乳酸脫氫酶。圖23表現了在靜脈注射1.Omg/kg體重(Bw)的標記的環肽到未免疫的0.9%NaCl處理的對照動物(左panel)或免疫的抗體陽性的心肌病路易斯鼠(550gBw)後德克薩斯紅(texasred)(螢光染料)標記的ISAAEC11半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體(「CP-1」)的分布模式。照片描述了德克薩斯紅標記的18AA半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體在腎臟(腎臟皮質區域的2μπι切片)中的亞細胞分布。這一圖像表明未觀察到本發明的環狀肽作用於腎臟的毒性和腎小球膜的機械性阻塞。圖24為描述突變的包含半胱氨酸的βrECn同源性環肽(白色小球代表胺基酸ΑΑ，並在每一個球中寫有相應的AA字母編碼)的示意圖。半胱氨酸分子和它們的取代物顯示為黑色小球。黑色粗體線代表二硫鍵的假定位置。左側描述人β工腎上腺素受體的EC11環的原始序列的示意圖；中間帶有位於假定的環閉合位點(位置222)上的Gly突變的環狀22AAECn同源肽。右圖面描述了包含僅兩個半胱氨酸(即位置209和215)的環狀22A肽突變體的實例。顯示了位於第216位的半胱氨酸的半胱氨酸/絲氨酸突變體(環狀ZZAiB1-EC1JtCys216一Ser216)ο給定的號碼指示了根據Frielleetal.1987，PNAS84，pages7920_7924胺基酸原始一級序列的編號。圖25顯示的兩個圖面表現了兩個環狀((22+1)=22AA肽的高壓液相色譜(HPLC)洗脫圖譜；第一個圖面對應本發明含有3個半胱氨酸的構建體cyc22AA半胱氨酸/半胱氨酸(25A)，且第二個圖面對應本發明含有2個半胱氨酸的突變cyc22AA半胱氨酸/絲氨酸(25B)，它們所有環肽都有一個Gly閉合位點。在裝備有雙波長UV吸收檢測器的HewlettPackardM^J1050yMffHPLC(AgilentTechnologiesGermanyGmbHjBoblingen)中操作HPLC，在216nm處讀取吸光度。肽合成和環化後，樣品溶解於H20/0.1%三氟酸(TFA)並加樣於流速為2ml/min的分析HPLC柱(WatersGmbH,Eschborn)XBridgeBEH130,C18,3，5μm(柱長50_，管腔4.6mm)；然後在0.1%TFA存在下自0%到75%乙睛(ACN)的分離梯度跑柱5分鐘。包含具有三個可自由地接近的半胱氨酸分子的環狀β1-ECII-22AA半胱氨酸/半胱氨酸肽的部分展現出典型的山峰狀的洗脫形式，提示了半胱氨酸消旋物的存在(25A，在2.6與3.8分鐘間洗脫)。相比之下，包含僅兩個半胱氨酸(通過另一強化的二硫鍵連接)的突變的環狀22AA肽在2.63出現銳利的單洗脫峰(cyc22AA半胱氨酸/絲氨酸，25B)。圖26顯示了通過質譜(MALDI)描述22AA_EC環狀肽特徵的兩個代表性圖面。第一個圖面對應包含3個半胱氨酸的構建體cyc22AA半胱氨酸/半胱氨酸(26A)，且第二個圖面對應本發明含有2個半胱氨酸的突變cyc22AA半胱氨酸/絲氨酸(26B)，它們所有環肽都有一個Gly閉合位點。圖面顯示了所示的環狀βrECn-22AA肽的代表性MALDI-示蹤。每一圖的縱坐標表示測量的信號強度(「a.u.」表示任意單位)，橫坐標指示分子量(表示為m/z)。26A對應cyc22AA半胱氨酸/半胱氨酸肽(2518.28m/z)和26B對應cyc22AA半胱氨酸/絲氨酸突變體((2502.31m/z)。MALDI分析通過利用裝備有Scout-26樣品載體的反射II質譜儀(BrukerDaltonicGmbH,Bremen)進行操作。在所有情況下在2200m/z分析簡單質子化的分子。圖27A和B描述了人β工腎上腺素受體的第二細胞外環(ECII)的不同的含有半胱氨酸的環肽變異體的體外阻斷能力(=中和作用)，這是通過ELISA測試在與標示的環肽一起過夜孵育後(12-14h，4°C)免疫的βrECn抗體陽性大鼠的η=6個體血清(27Α)所確定的。27Α中的柱代表所示的環肽的受體抗體阻斷功效，表示為未阻斷的抗體陽性大鼠血清所獲得的抗體-(ELISA-)信號的百分比。27Β中的柱代表每一環肽的平均阻斷功效，誤差棒表示士SEM。白色柱CyC18AA半胱氨酸/絲氨酸突變體(當通過雙側t檢驗測試其與未阻斷血清間的顯著性時，阻斷功效60.0士8.3%，P=0.0014)；垂直陰影柱cycl8AA半胱氨酸/半胱氨酸(阻斷功效66.1士7.0%，P=O.00025)；黑色柱cyc22AA半胱氨酸/半胱氨酸(阻斷功效82.0士5.0%，P=0.000046)；(右)斜線陰影柱cyc22AA半胱氨酸/絲氨酸突變體(阻斷功效74.9士5.0%，P=O.00026)；水平陰影柱cyc25AA半胱氨酸/半胱氨酸(阻斷功效73.4士5.0%，P=0.00011)。圖28A和B描述了在將不同構建體治療性地注射到自8個月定期免疫的大鼠(第一次=基礎免疫，其後是每4周一次的7次抗原加強免疫)時，人β工腎上腺素受體的第二細胞外環(ECII)的含有兩個半胱氨酸的18AA或22AA環肽突變體的體內阻斷能力(=中和作用)。顯示了4到5次後續的每4周一次的環肽注射的效應。圖28A描述了免疫的^1-EC11抗體陽性心肌病大鼠(每組動物數在圖例中給出)的每一處理組的平均值士SEM。圖28A顯示4次後續的環肽注射的平均效應，這由所示的構建體應用後20-22小時所確定。(柱)描述了每組注射後殘餘的受體抗體滴定度，表示為初始治療時(第8個月)抗體滴定度的百分比。誤差棒表示士SEM。柱中的號碼表示(後續的)每月注射的數。黑色柱未處理的抗體陽性的動物(總共8+4(=12)抗原加強免疫後的參考滴定度(對比治療開始時的滴定度)110.7士5.6%；η=5，陽性對照)。白色柱CyC18AA半胱氨酸/絲氨酸突變體，η=5動物(4次注射後殘餘的抗體滴定度，以治療開始時的滴定度的百分比表示當通過雙側t檢驗測試其與未處理的抗體陽性動物的抗體滴定度顯著性時，76.0士23.0%，P=0.44)。(右)斜線陰影柱cyc22AA半胱氨酸/絲氨酸突變體，η=8動物(以治療開始時的滴定度的百分比表示的4次注射後殘餘抗體滴定度9.0士2.2%，P=3.OXl(T)。圖28Β顯示了4次後續環肽注射後抗體滴定度的時程，這由應用所示的構建體之前和之後20-22小時所確定。值表示為與開始治療(第8個月)時確定的抗體滴定度相比，每次環肽注射後相應抗體滴定度的增加或減少的百分比。黑色圓圈未處理的抗體陽性動物(η=5，陽性對照)；白色正方形cycl8AA半胱氨酸/絲氨酸突變突變體，4次注射，η=5動物；黑色菱形cyc22AA半胱氨酸/絲氨酸突變突變體，4次注射，η=8動物。圖29Α為顯示了以下內容的圖=GSiyii1-EC11-免疫的未處理的動物(黑色圓圈)與用所示的不同環肽(見圖例)處理的GSTz^1-EC11-免疫的動物通過2D和M模式的超聲心動描記術(超聲心動圖系統可視聲學，VevO770(版本V2.2.3)，裝備有15-17.5MHz換能器)所確定的內部收縮末期的和舒張末期的左心室直徑(LVES，LVED)的時程(0到12月)，從而LVES/LVED為左心室收縮末期直徑和左心室舒張末期直徑。白色圓圈，未治療的0.9%NaCl注射的未免疫的對照動物(η=5)；黑色圓圈，未定期(每4周)治療的免疫的抗體陽性動物(η=6)；白色正方形，cyclSAA半胱氨酸/絲氨酸突變體(1.0mg/kgBw,η=5)；黑色菱形，cyc22AA半胱氨酸/絲氨酸突變(Gly)肽(1.Omg/kgBw,η=8)。圖29Β為描述通過2D和都卜勒超聲波心動描記術(超聲心動圖系統見上文)所確定的表示為ml/min/g(體重)的心指數(Cl)的時程(0到12月)的圖。白色圓圈，未治療的0.9%NaCl注射的未免疫的對照動物(η=5)；黑色圓圈，未定期(每4周)治療的免疫的抗體陽性動物(n=6)白色正方形，cyclSAA半胱氨酸/絲氨酸突變體(1.Omg/kgBw,η=5)；黑色菱形，cyc22AA半胱氨酸/絲氨酸突變(Gly)肽(1.Omg/kgBw,η=8)。圖30表現了將0.5-1.OMBq的jodinel31標記的18AAEC11半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體靜脈注射到未免疫的0.9%NaCl處理的對照動物(左圖面)和免疫的抗體陽性的Lewis大鼠(350-400gBw)後20分鐘，所示器官中累積的放射活性的模式。數值以每g器官溼重的初始注射的放射活性(ID)的百分比活性給出。下文的非限定性實施例對本發明進行了說明。實施例1突變環肽的合成本文所公開的只能形成單個獨立的二硫鍵的環肽的三個具體實例分別由18、22或25胺基酸(AA)=EC11-ISAA半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽、ECn_22AA半胱氨酸/絲氨酸突變(甘氨酸)環肽和ECn-25AA半胱氨酸/絲氨酸突變(穀氨醯胺)環肽組成。其一級序列與人P1-AR序列部分同源(分別為第204-219、200-220和200-222位胺基酸)。藉助通過線性肽的頭到尾環化及隨後另一(單個)二硫鍵穩定環化的步驟來限制構象柔性，18AA、22或25AA環肽突變體採取的構象更接近模擬存在於天然βrECn蛋白環表面的表位的構象。而且，經常將環化作為一種延長肽作用持續時間的工具，因為環狀肽通常比它們的線性對應物對蛋白水解作用更穩定。詳細地，環(K-18-P)環狀S-S，Cys/Ser突變體的肽序列為環-Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-VaI-Gln；環化可發生在Cys7和Cys13間(二硫鍵)及Ala1和Gln18間(環閉合)。詳細地，環(K-22-P)環狀S-S，Cys/Ser突變體的肽序列為環-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Gly；環化可發生在Cysltl和Cys16間(二硫鍵)及Arg1和Gly22間(環閉合)。詳細地，環(K-25-P)環狀S-S，Cys/Ser突變體的肽序列為環-Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-Gln；環化可發生在Cys11和Cys17間(二硫鍵)及Ala1和Gln25間(環閉合)。本發明的環肽突變體首先合成為線性肽，然後在胺基酸主鏈上藉助C末端羧基與N末端的氨基縮合共價地環化。隨後，在半胱氨酸殘基7和13(ISmer環肽)、半胱氨酸殘基10和16(22mer環肽)和半胱氨酸殘基11和17(25mer環肽)間形成二硫鍵。採用芴甲氧羰基叔丁基策略(Fmoc/tertbutylstrategy)通過逐步的固相肽合成進行線性肽的組裝。氯代三苯甲基作為啟始樹脂使用。第一個胺基酸(Fmoc-Pro-OH)在DMF中與DIEA偶聯，第二個在DMF中與PYB0P/H0BT/DIEA偶聯然後接下來的胺基酸在DMF中與二異丙基碳醯亞胺(diisopropylcarboimide),HOBT偶聯。通過UV檢測器在線監測肽的質量。以下描述了脫保護/偶聯(超過兩倍)操作方法表1脫保護/偶聯(超過兩倍)操作方法tableseeoriginaldocumentpage44*偶聯時間由Kaiser測試確定對於組裝，使用以下的胺基酸(提供ISmer環狀半胱氨酸/絲氨酸肽突變體作為示例)表2用於18mer環狀Cys/Ser肽突變體的F-moc合成的胺基酸tableseeoriginaldocumentpage44帶有反應性N末端氨基和C末端羧基基團的完全保護的肽通過六氟異丙醇/二氯甲烷的處理從樹脂中裂解下來。其後根據以下操作步驟在溶液中進行環化被保護的肽的「頭到尾」環化作用在高DMF稀釋液(IOmrnol線性肽/ILDMF)中用PyB0P/NaHC03進行。在3天後完成環化。DMF蒸餾後，用5%NaHCO3、水和純水洗滌肽。冷卻反應混合物，將肽除了半胱氨酸基團之外脫保護。然後，部分被保護的肽通過甲基叔丁基乙醚的沉澱作用而分離出來。粗製肽通過液態層析法進行預純化固定相矽膠C18，15ym，120A洗脫劑水乙腈和0.1%TFA檢測UV(2IOnm)在二甲基sulfoxyde(3%)存在的情況下，在水中(2mg/ML)進行二硫化物的環化。環化反應在3天後完成。利用上文所描述的條件通過HPLC純化肽。純度高於95%的部分合併在一起。肽在離子交換樹脂(Dowex1X2)上進行交換且將最終的溶液凍幹。肽內容物通過胺基酸分析來確定(Edman測序)。圖1、3、25和26中的HPLC洗脫圖清楚地顯示了銳利且輪廓分明的洗脫峰，其是由所有包含相同單個二硫鍵的突變環肽所獲得的，與包含3個半胱氨酸的18AACys13-Cys14,22AACys16-Cys17和25AACyS17-CyS18環肽所獲得的較大的(山峰樣)洗脫圖形成對比。下文所有的體外和體內研究都利用這些環肽突變體進行。實施例2體外ELISA競爭性測定利用包含3個半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原的ELISA競爭性測定中，不同數目的來源於免疫的抗體陽性大鼠的血清孵育(12h，4°C，旋轉孵育過夜)後，比較βrECn-18AA環肽突變體(具有額外D-Glu—Gln交換(例如環閉合位點上)的Cys13-Ser14或Ser13-Cys14突變)與包含3個半胱氨酸的25AA或18AA半胱氨酸/半胱氨酸環肽的阻斷能力。圖4，5和7-10顯示了利用本發明不同的環肽對η=12直到η=82免疫的抗體陽性大鼠血清實施測定的結果。令人驚奇地，自12隻不同免疫的抗體陽性大鼠血清分離出的IgG部分所獲得的結果顯示只有半胱氨酸/絲氨酸而不是絲氨酸/半胱氨酸環肽突變體能顯著性阻斷抗體結合β!-EC11抗原。18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變環肽的阻斷效應與包含3個半胱氨酸的^1-EC11-ISAA環肽的阻斷能力相比是相當的(在超過半數的被分析的血清η=8/12)甚或更有效(圖4)。這一發現通過劑量滴定法研究得以證實，劑量滴定法研究顯示了清楚的βrECn-18AA半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體的劑量依賴性阻斷效應，其在兩倍到八倍摩爾超出量(假定兩個環狀(2.IKDa分子量(MM))和線性肽(3.OkDaMM)的化學計量為11，考慮IgG分子的分子量為150kDa)在阻斷受體抗體方面持續明顯地優於其絲氨酸/半胱氨酸突變對應物或包含3個半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽(圖5)。圖7繼續描述在利用線性的包含3個半胱氨酸的25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原的ELISA競爭性測定中，不同環肽突變體在與自η=78免疫的抗體陽性大鼠分離出的IgG預孵育後的阻斷效應。相比於完全無效的環狀25ΑΑ或18ΑΑ絲氨酸/半胱氨酸突變體(分別為6士2%或1士2%;Ρ<5X10_3°或P95%;η=78)能被EC11-ISAA半胱氨酸/絲氨酸突變體有效阻斷(圖8)。利用ELISA競爭性測定(利用包含3個半胱氨酸的線性25ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原)分析具有穀氨醯胺_丙氨酸閉合位點或D-穀氨酸-丙氨酸閉合位點的環肽突變體在與從69隻不同的免疫的抗體陽性的大鼠中分離出的血清預孵育後的體外阻斷效應。結果顯示在圖9中。同樣，測試的大鼠血清存在兩種反應模式(類1/類型2)。血清的大部分(93%，圖9，上部圖面，類型1和圖10)可被25ΑΑ或18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變環肽(分別為69士2%或68士3%(Gln-閉合)/69士2%(D-Glu-閉合)非常有效地阻斷，這甚至優於相應的包含3個半胱氨酸的25ΑΑ或18ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸環肽(分別為65士2%或59士2%)，然而25ΑΑ或18ΑΑ絲氨酸/半胱氨酸突變體幾乎無抑制效應，與位於閉合位點的胺基酸無關(6士2%，25ΑΑ絲氨酸/半胱氨酸，P<5X10_3°；1士2%，具有穀氨醯胺閉合的18ΑΑ絲氨酸/半胱氨酸(Ρ<3.7Χ10—33)或1士2%，具有D-Glu閉合的18ΑΑ絲氨酸/半胱氨酸(P<6XIO"55)。血清的較小部分(7%，圖9，下部圖面，類型2和圖10)能被半胱氨酸/絲氨酸或絲氨酸/半胱氨酸突變肽類似地阻斷-儘管阻斷能力較小；另外，對於25AA和18AA環肽，突變體效應小於它們包含3個半胱氨酸的25AA或18AA半胱氨酸/半胱氨酸對應物。25AA或18AA半胱氨酸/絲氨酸突變環肽的阻斷能力分別為48士6%或50士8%(穀氨醯胺閉合)/47士5%(D-Glu閉合)，這都低於相應的包含3個半胱氨酸的25AA或18AA半胱氨酸/半胱氨酸環肽(分別為72士5%或67士6%)的阻斷能力；然而，在這些動物中，25AA或18AA絲氨酸/半胱氨酸突變體顯示的阻斷能力幾乎與半胱氨酸/絲氨酸突變體的阻斷能力相當(分別為37士7%25AA絲氨酸/半胱氨酸，P=0.22η.s.；47士3%具有穀氨醯胺的18ΑΑSer/Cys或33士5%，帶有D-Glu閉合的18ΑΑSer/CysP=O.7n.s.或P=0·08η·s.)。隨後，利用相同的競爭性ELISA測定分析不同線性和環狀β!-EC11肽的體外劑量依賴性阻斷能力(圖11)包括線性25ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸肽、環狀25ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸肽突變體、環狀18ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸肽、環狀18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸肽突變體和線性18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸肽突變體的試驗顯示，所有來自η=6隨機選取的免疫的抗體陽性大鼠的血清被β^EC11-ISAA半胱氨酸/絲氨酸突變環肽以劑量依賴方式最好地阻斷，其次是非突變的18AA半胱氨酸/半胱氨酸環肽和25AA半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體。所有環肽的抗體中和能力大大優於它們的線性對應物(有或無突變)(P<0.005；圖11)，18AA半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體使循環中游離的抗P1-EC11-抗體劑量依賴性降低8倍超出量的18AA半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體使循環中游離的抗β!-EC11-抗體降低53%，20倍超出量降低66%,80倍超出量降低大約85%。環狀18ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸或環狀25ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸肽的相應結果為46/30%[8倍超出量]，56/49%[20倍超出量]和在80倍超出量時的71/83%。線性肽的功效明顯地較小，線性25ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸和線性18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸肽使受體抗體滴定度的劑量依賴性降低僅24%[8倍超出量]、35%[20倍超出量]和在80倍超出量時的大約50%。此外，人βr腎上腺素受體的第二細胞外環(EC11)的不同環肽變異體的體外阻斷(=中和作用)能力利用在4°C孵育12-14小時後的免疫的β^EC11抗體陽性大鼠的血清進行測試。22ΑΑ環肽cyc22AACys/Cys(相對於未阻斷的血清的阻斷功效為82.0士5.0%,P=0.000046)和22AA環肽突變體cyc22AACys/Ser(阻斷功效為74.9士5.0%，P=0.00026)的體外阻斷功效甚至高於前面描述的包含3個半胱氨酸的環肽，即cyc25AA半胱氨酸/半胱氨酸(阻斷功效73.4士5.0%，P=0.00011)或cyclSAA半胱氨酸/半胱氨酸(相對於未阻斷的血清的阻斷功效為66.1士7.0%，P=0.00025；見圖27A/B)的阻斷能力。實施例3體外功能性FRET測定利用通過螢光共振能量轉移的方法測定β!-EC1125ΑΑ或18ΑΑ環肽突變體(在環閉合位點上有或無D-Glu/Gln)對β工受體介導的信號轉導(功能性cAMP測定)的阻斷能力進(圖6)。將與βrECn18AA環肽突變體(分別為半胱氨酸/絲氨酸或絲氨酸/半胱氨酸)預孵育(12小時，4°C，旋轉孵育器)的代表性大鼠的抗P1-EC11IgG抗體的效應與包含3個半胱氨酸的25AA半胱氨酸/半胱氨酸環肽的抑制效應相比或與未與阻斷性肽一起孵育的抗^1-EC11IgG抗體的效應相比較。記錄的FRET發射信號的標準化YFP/CFP比用於量化本發明的環肽突變體在阻斷抗體誘導的細胞的cAMP產生(以百分比)方面的效應，所述細胞的cAMP為瞬時Epacl轉染的穩定表達βrAR的人胚腎細胞(ΗΕΚ293_βi細胞)產生的。圖6中的χ軸對應於以秒(s)為單位的記錄時間。利用通過螢光共振能量轉移(FRET)的方法分析βrECn18AA環肽突變體對抗體誘導的β工腎上腺素的跨膜信號轉導刺激的抑制效應。同樣，在抑制可測量的功能性抗體效應(阻斷細胞內的CAMP增加)方面，環狀β!-EC11ISAA半胱氨酸/絲氨酸突變體也大大優於其絲氨酸/半胱氨酸對應物，甚至輕度比包含3個半胱氨酸的25ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸環肽更有效(圖6)。總之，本文所進行的測試的結果表明，突變的環肽的抗體阻斷能力沒有受到自25-meric到18-meric肽的胺基酸數目減少的影響。這些結果也顯示出25AA半胱氨酸/半胱氨酸和18AA半胱氨酸/半胱氨酸環肽與環狀25AA或18AA半胱氨酸/絲氨酸突變體，而不是與環狀25AA或18AA絲氨酸/半胱氨酸突變體-的極好的可比性。令人吃驚地，單個半胱氨酸殘基與絲氨酸殘基的交換的精確性顯著地確定了突變的肽的中和效能分別在位置18上(25AA環肽)或位置14上(18AA環肽)的Cys—Ser交換產生了具有極好的體外抗體中和和藥理學作用(圖6-10)，然而Cys17—Ser17或Cys13—Ser13突變體(分別為25AA或18AA肽)幾乎沒有阻斷效應，無論是在其為抗體清道夫的性能方面，還是在其抑制功能性抗體效應的能力方面(體外受體刺激的中和作用；圖6-10和實施例3)。第25(25AA環肽突變體)或18(18AA環肽突變體)位上的D-Glu/穀氨醯胺交換沒有顯著地影響環肽的阻斷能力，不管它們的長度如何(即25和18胺基酸相比；圖7-10)。實施例4動物模型，受體抗體的」體內」阻斷如果沒有相反的說明，用於這一實施例和本文所描述的其他任何實施例的動物模型為模擬人類的大鼠模型。分別在評價和測試之前，利用本發明的不同化合物，更特別地式VI,VII,VIII和IX的化合物以及對照如下文所描述的處理模擬人類的大鼠模型，所述對照為線性EC11-ISAA半胱氨酸/絲氨酸突變的(Gln18-)肽(胺基酸序列如下=Ala-Asp-Glu-AIa-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Gln)和線性非突變的包含3個半胱氨酸的ECn-25AA半胱氨酸/半胱氨酸(Gln25)肽(胺基酸序列如下=Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Cys-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-Gln)。在將1.Omg/kgBw的每一構建體靜脈注射到最近免疫的抗體陽性的大鼠(即，環肽用於一種」預防性」研究中)後，分析25AA和18AA半胱氨酸/絲氨酸突變環肽(帶有穀氨醯胺閉合位點)、18AA絲氨酸/半胱氨酸突變環肽和突變的線性18AA半胱氨酸/絲氨酸肽的體內阻斷效應，在最初免疫(以及在第2和3月的兩次加強)後3個月第一次應用環肽。加起來，在4周一次的間隔內給予不同構建體5次預防性應用，總是在每月一次持續的抗原加強後兩周。血清提取自靜脈注射後18-20小時並利用含有3個半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原的ELISA測定反應性(圖12)。第一次(預防性)體內環肽應用表明，1.Omg/kg體重(Bw)的非突變25AA半胱氨酸/半胱氨酸或18AA半胱氨酸/半胱氨酸環肽獲得了抗體中和作用的最高功效(與未治療的免疫的動物相比，5次環肽注射後降低87.7士2%或89.9士3%;都是P<0.005)，其次是18AA半胱氨酸/絲氨酸突變環肽(5次環肽注射後54.5士2%的降低；P<0.05)，然而同一濃度的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽或線性18AA半胱氨酸/絲氨酸突變體沒有顯著的阻斷效應(5次注射後抗體滴定度降低25.8士3%或4.5士11%，P=0.16或P=0.8；圖12)。所選擇的環肽處理的與未處理的免疫的大鼠(η=3)的骨髓和脾臟細胞製備物的ELIspot分析證實了這一發現。圖13顯示，特異性抗β^EC11抗體分泌細胞(ASC)的數目在脾臟和骨髓中(較低程度)的顯著減少只出現在用25ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸環肽或18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體處理的大鼠中(分別地η=3或4)，然而線性18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸肽突變體(η=3)(無論是在脾臟還是骨髓)都對ASC沒有作用。而且，在將每一構建體的首次靜脈劑量(S卩，1.Omg/kg體重(Bw))注射到長期免疫的抗β^EC11抗體陽性、呈現出心肌病的表型的大鼠中(h-ECn/GST抗原的每月1次免疫9個月後；圖14-16和17)，評價治療性使用的25AA和18AA半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體、18AA絲氨酸/半胱氨酸(穀氨醯胺)環肽和突變的線性18AA半胱氨酸/絲氨酸肽的體內阻斷效應。首次靜脈注射各種構建體後18-20小時提取血清並利用包含3個半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原的ELISA測定反應性。各種環肽在心肌病抗體陽性大鼠中的「治療性」應用顯示，18AA半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體(lmg/kg/Bw)相比於同一濃度的25AA半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體或功效明顯較低的18AA絲氨酸/半胱氨酸環肽突變體具有較高的體內阻斷能力(圖14和15)。此外，18AA半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體的體內功效大大優於線性18AA半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體的體內功效。然而當將環狀18AA半胱氨酸/絲氨酸突變體的應用劑量降低到0.25mg/kg體重(Bw)時，沒有獲得相應的受體抗體的降低，這提示環肽突變體的劑量和效應關係。突變的單個S-S環肽每4周注射到長期免疫的患有抗體誘導的免疫心肌病的大鼠中的反覆的治療性注射證實了單個S-S環肽突變體的一種「臨界最小劑量」和效應關係18AA半胱氨酸/絲氨酸環肽的0.25mg/kgBw劑量-雖然在一定程度上能夠清除受體抗體-在以下兩方面的功效明顯較小(1)達到的循環的受體抗體降低(甚至當只考慮環肽敏感性「應答器」，這由如下確定-J次環肽注射後動物具有的最大殘餘抗體水平等於或低於治療開始時的滴定度的80%(圖16b和c)，和⑵與1.0或2.Omg/kgBw劑量的18AA半胱氨酸/絲氨酸環肽相比較的所獲得的心臟保護效應(圖17b，19b，20和21b)。後兩者劑量在中和循環的受體抗體(圖16b和c)和逆轉抗體誘導的心肌病特徵(圖17b，19b,20和21b)兩方面的效力幾乎是等同的。然而將應用的劑量進一步增加到4.Omg/kgBw並沒有產生更高的功效，無論是抗體清除能力(圖16b和c)還是心肌保護性效應方面(圖17b，19b,20和21b)。肽注射時，未觀察到嚴重的局部或全身不良反應。此外，在各種突變環肽注射後，動物的心率和血壓都沒有受到影響(圖20a)。此外，沒有發生明顯的與環肽突變體應用相關的常規實驗室參數的改變(圖22a和b)。為了產生抗受體抗體，利用包含細菌穀胱甘肽-S-轉移酶的融合蛋白和人腎上腺素受體的第二細胞外環(GSTz^1-EC11)免疫動物。在利用本發明的突變環肽處理動物前，在每4周常規免疫6到8個月後觀察到漸進性擴張免疫心肌病(圖17)。所有免疫的動物產生了高滴定度的刺激性抗P1-EC11抗體。特異性抗β^EC11滴定度在每4周連續加強免疫動物的6到8個月間達到最大值，然而，NaCl注射的對照動物未產生特異性受體抗體(圖18)。上述的免疫的動物用於本發明的突變環肽應用中。在首次靜脈注射(i.v.)1.Omg/kgBw(對18AA半胱氨酸/絲氨酸環肽也為0.25mg/kg/Bw)到免疫的抗體陽性大鼠中後，確定25AA和18AA半胱氨酸/絲氨酸突變環肽(帶有穀氨醯胺閉合位點)的體內阻斷效應。血清提取自首次靜脈注射各種構建體後18-20小時並利用包含3個半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原的ELISA測定反應性。如所提及的，在首次靜脈注射(i.v.)1.Omg/kgBw的每一構建體到免疫的抗體陽性大鼠中後，分析25AA和18AA半胱氨酸/絲氨酸突變環肽(帶有穀氨醯胺閉合位點)、18AASer/Cys突變(Gln-)環肽和突變的線性18AA半胱氨酸/絲氨酸肽的體內阻斷效應。靜脈注射後18-20小時提取血清並利用包含3個半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原的ELISA測定反應性。體內數據證實了18AA半胱氨酸/絲氨酸突變環肽(lmg/kg/BW)相比於同一濃度的25AA半胱氨酸/絲氨酸突變體或效力明顯較小的18AA絲氨酸/半胱氨酸突變環肽具有較高的阻斷能力(圖14和15)。18AA半胱氨酸/絲氨酸環肽的體內功效也大大優於線性18AA半胱氨酸/絲氨酸肽的體內功效。在肽注射時，未觀察到嚴重的局部或全身不良反應。而且，在各種突變環肽注射後，動物的心率和血壓都沒有受到影響。然而體內數據也提示，18AACys/Ser突變的(Gln_)環肽的功效看起來也取決於應用的劑量；0.25mg/kg/Bw注射在抗體中和作用方面的功效低於同一構建體在lmg/kg/Bw濃度時所達到的功效(圖14和15)。實施例2和3所描述的體外發現普遍在體內得到證實(例如圖14-16)。有趣的是，半胱氨酸/絲氨酸突變環肽相比於線性肽的阻斷功效在體內的差異更明顯(圖5，7和14-16)。然而，體內數據也提示，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變環肽的功效可能同樣取決於應用的劑量(圖14-16)。所獲得的結果與單個S-S環肽突變體的(最小)劑量和效應關係是符合的相比於1.0或2.Omg/kgBw劑量，0.25mg/kg劑量的18AA半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體在達到的循環受體抗體的降低和達到的的心臟保護效應兩方面的功效大幅降低(圖14-16)。這些劑量在循環受體抗體的中和及抗體誘導的心肌病特徵的逆轉兩方面的功效是相等的(圖16-20)。然而應用劑量進一步增加到4mg/kgBw並沒有引起更高的功效-無論是關於抗體清除能力(圖16)還是關於體內心肌保護效應方面(圖17-21)。cyclSAA半胱氨酸/絲氨酸突變體的高劑量(=4mg/kgBw)沒有提高功效；反而，它導致抗體滴定度的短暫增加，只有在第三或第四次環肽注射後才使受體抗體滴定度顯著降低。最值得注意的是，在利用1.0或2.Omg/kgBw18AA半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體所獲得的最佳心臟保護作用的研究期間的逆轉抗體誘導的心肌病特徵方面也證實了不同注射濃度的cyclSAA半胱氨酸/絲氨酸突變環肽的抗體中和能力的效應(圖17B，19B，20，21B)。如所提及的，1.Omg/kgBw的25AA-meric半胱氨酸/絲氨酸及高劑量(=4.Omg/kgBw)的18AA-meric半胱氨酸/絲氨酸突變體導致抗體滴定度的短暫增加，與初始免疫反應符合，只有在第三或第四次環肽注射(治療第3或4個月；見圖16a和b)後才使受體抗體滴定度顯著降低。這一現象在1.O或2.Omg/kg劑量的18AA半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體沒有出現，導致治療9個月後抗體滴定度與治療開始時相應抗體滴定度的僅-37士13%(1.Omg/kg25AA半胱氨酸/絲氨酸環肽；P=0.36與免疫的未治療的動物相比)或39士14%(4.Omg/kg18AA半胱氨酸/絲氨酸環肽；P=0.24與免疫的未治療的動物相比)相比的更高的絕對降低(分別為1.Omg/kg:-59士14%或2.Omg/kg:_59士12%，P<0.0005與免疫的未治療的動物相比)。因此劑量為1.0或2.Omg/kgBw的cyclSAA半胱氨酸/絲氨酸肽在中和循環受體抗體方面(圖16b和c)和抗體誘導的心肌病特徵逆轉方面的研究期間的功效幾乎是相等的(圖17b、19b、20和21b)。另外，體內實驗表明，突變環肽的抗體阻斷能力看起來沒有受到胺基酸數目自25-meric到18-meric環肽減少的影響；體外和體內數據都表明了這兩種包含2個半胱氨酸的單個二硫鍵的25AA半胱氨酸/絲氨酸或18AA半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體極好的相似性(圖17a)。然而應該注意的是1.Omg/kg25AAmeric半胱氨酸/絲氨酸以及高劑量(即4.Omg/kgBw)的18AAmeric半胱氨酸/絲氨酸突變體引起抗體滴定度初始短暫的升高(圖16a和b)，從而將受體抗體滴定度的顯著降低推遲到第三或第四次環肽應用時(治療的第三或第四個月)。應用1.0或2.Omg/kgBw劑量的18AA半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體時未出現這一現象。人βi腎上腺素受體的第二細胞外環(EC11)的eye22AA半胱氨酸/絲氨酸突變體的體內阻斷(=中和)能力也通過「治療性」注射大鼠來測試並與所描述的cyclSAA半胱氨酸/絲氨酸突變體的效應相比較，所述大鼠已被定期免疫8個月(基礎免疫和隨後每4周的7次抗原加強，見圖28A/B)。在4到5次環肽每4周定期注射後，未治療的抗體陽性的動物中的滴定度增加到治療開始時數值的110.7士5.6%(η=5，陽性對照；與第8月的抗體滴定度相比，總共8+4(=12)次抗原應用後的參考滴定度)。相比之下，cyc22AA半胱氨酸/絲氨酸突變體(η=8動物)的4次注射使抗體滴定度降低到治療開始時抗體滴定度的9.0士2.2%(P=3.0X10_7，當通過雙側t檢驗測試與未治療的抗體陽性動物的抗體滴定度的顯著性時)。因此，cyc22AA突變體的體內功效與所描述的具有18個胺基酸長度的半胱氨酸/絲氨酸環肽突變體(cyclSAA半胱氨酸/絲氨酸；η=5動物)相比進一步地增強，其在4次注射後使抗體滴定度降低到治療開始時滴定度的76.0士23.0%(與未治療的抗體陽性動物相比P=0.44，n.s.；見圖28Α)。另外，治療4個月後的超聲心動圖的追蹤數據也顯示了cyc22AA突變體相比於cyclSAA半胱氨酸/絲氨酸突變體在關於體內心臟保護效應方面的優越性，這可由通過體內心臟保護效應通過利用可視聲學超聲心動圖系統(Vevo770,versionV2.2.3版本)；裝備有17.5MHz換能器)的二維和都卜勒超聲心動描記術所確定的左心室舒張末期(LVED)和左心室收縮末期(LVES)直徑的減小(圖29A)和「心指數」(Cl，以ml/min/g體重表示，見圖29B)的增加來評價。總之，因為ECII同源的環狀肽的心臟保護和免疫調節活性看起來在很大程度上取決於它們的構象，位於分子內的二硫鍵對於穩定和維持構建體的三維結構是必要的。環狀21+1(=22)AA肽中，保留的半胱氨酸(即在209位和215位的半胱氨酸，如果216位已被突變為絲氨酸)維持確定的分子內間距，這通過在(預測的)環閉合位點引入最小的天然存在的胺基酸-Gly進一步加強，以允許確定結構的分子內二硫鍵的形成。本發明涉及下文的核苷酸和胺基酸序列SEQIDNo.1與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(18AA；Cys14—Ser14)；環化可發生在Ala1和Gln18間Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-GInSEQIDNo.2與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(25AA；Cys18—Ser18)；環化可發生在Ala1和Gln25間Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-GlnSEQIDNo.3與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(18AA；Cys14—Ser14；Gln18—DGlu18)；環化可發生在Ala1和DGlu18間Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-DGluSEQIDNo.4與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(25AA；Cys18—Ser18；Gln25—DGlu25)；環化可發生在Ala1和DGlu25間Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-DGluSEQIDNo.5與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(18AA；Cys13—Ser13)；環化可發生在Ala1和Gln18間Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-Val-GInSEQIDNo.6與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(25AA；Cys17—Ser17)；環化可發生在Ala1和Gln25間Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-GlnSEQIDNo.7與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(18AA；Cys13—Ser13；Gln18—DGlu18)；環化可發生在Ala1和DGlu18間Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-Val-DGluSEQIDNo.8與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(25AA；Cys17—Ser17；Gln25—DGlu25)；環化可發生在Ala1和DGlu25間Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-DGluSEQIDNo.9編碼與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(18AA；Cys14—SeT14)的核苷酸序列gCIlgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagtgcSERgacttcgtccarSEQIDNo.10編碼與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(25AA；Cys18—Ser18)的核苷酸序列gCDcgggcggagagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagtgcSERgacttcgtcaccaaccggcarSEQIDNo.11編碼與人βfAR的EC11表位同源的胺基酸序列(I8AA；Cys14—Ser14；Gln18—DGlu18)的核苷酸序列gCIlgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagtgcSERgacttcgtcgarSEQIDNo.12編碼與人βfAR的EC11表位同源的胺基酸序列(25AA；Cys18—Ser18；Gln25—DGlu25)的核苷酸序列gCIlcgggcggagagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagtgcSERgacttcgtcaccaaccgggarSEQIDNo.13編碼與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(18AA；Cys13—Ser13)的核苷酸序列gCHgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagSERtgCgacttcgtccarSEQIDNo.14編碼與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(25AA；Cys17—Ser17)的核苷酸序列gCIlcgggcggagagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagSERtgcgacttcgtcaccaaccggcarSEQIDNo.15編碼與人βfAR的EC11表位同源的胺基酸序列(18AA；Cys13—Ser13；Gln18—DGlu18)的核苷酸序列gCIlgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagSERtgCgacttcgtcgarSEQIDNo.16編碼與人βfAR的EC11表位同源的胺基酸序列(25AA；Cys17—Ser17；Gln25—DGlu25)的核苷酸序列gCIlcgggcggagagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagSERtgcgacttcgtcaccaaccggSEQIDNo.17與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(18AA；Cys3—Ser3)；環化可發生在Lys1禾口Pro18間Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Gln-Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-ProSEQIDNo.18與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(25AA；Cys3—Ser3)；環化可發生在Lys1禾口Pro25間Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-Gln-Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-AIa-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-ProSEQIDNo.19與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(18AA；Cys3—Ser3；Gln7—DGlu7)；環化可發生在Lys1和Pro18間Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-DGlu-Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-ProSEQIDNo.20與人β「AR的EC11表位同源的胺基酸序列(25ΑΑ；Cys3—Ser3；Gln10—DGlu10)；環化可發生在Lys1和Pro25間Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-DGlu-Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-ProSEQIDNo.21與人β「AR的EC11表位同源的胺基酸序列(18ΑΑ；Cys2—Ser2)；環化可發生在Lys1禾口Pro18間Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-Val-Gln-Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-ProSEQIDNo.22與人βrAR的EC11表位(25AA；Cys2—Ser2)同源的胺基酸序列；環化可發生在Lys1禾口Pro25間Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-Gln-Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-AIa-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-ProSEQIDNo.23與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(18AA；Cys2—Ser2；Gln7—DGlu7)；環化可發生在Lys1和Pro18間Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-Val-DGlu-Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-ProSEQIDNo.24與人β「AR的EC11表位同源的胺基酸序列(25ΑΑ；Cys2—Ser2；Gln10—DGlu10)；環化可發生在Lys1和Pro25間Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-DGlu-Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-ProSEQIDNo.25編碼與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(18AA；Cys3—Ser3)的核苷酸序列aagtgcSERgacttcgtcCargCngacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccSEQIDNo.26編碼與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(25AA；Cys3—Ser3)的核苷酸序列aagtgCSERgacttcgtcaccaaccggCargCHcgggcggagagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccSEQIDNo.27編碼與人βfAR的EC11表位同源的胺基酸序列(18AA；Cys3-Ser3；Gln7-DGlu7)的核苷酸序列aagtgCSERgacttcgtcgargcngacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccSEQIDNo.28編碼與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(25AA；Cys3—Ser3；Gln10—DGlu10)的核苷酸序列aagtgCSERgacttcgtcaccaaccgggargcncgggcggagagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccSEQIDNo.29編碼與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(18AA；Cys2—Ser2)的核苷酸序列aagSERtgCgacttcgtcCargCngacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccSEQIDNo.30編碼與人βrAR的EC11表位(25AA；Cys2—Ser2)同源的胺基酸序列的核苷酸序列aagSERtgCgacttcgtcaccaaccggCargCncgggcggagagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccSEQIDNo.31編碼與人βrAR的EC11表位(18AA；Cys2—Ser2；Gln7—DGlu7)同源的胺基酸序列的核苷酸序列aagSERtgCgacttcgtcgargCllgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccSEQIDNo.32編碼與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(25AA；Cys2—Ser2；Gln10—DGlu10)的核苷酸序列aagSERtgCgacttcgtcaccaaccggg^rgCIlcgggcggagagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccSEQIDNo.33人βrAR的EC11表位攜帶部分的胺基酸序列(16AA；204到219位AA)DEARRCYNDPKCCDFVSEQIDNo.34人βfAR的EC11表位攜帶部分的胺基酸序列(23AA；200到222位AA)RAESDEARRCYNDPKCCDFVTNRSEQIDNo.35人βfAR的EC11表位的胺基酸序列DEARRSEQIDNo.36人β「AR的EC11表位(攜帶部分)的胺基酸序列RAESDEARRSEQIDNo.37人βrAR的EC11表位的胺基酸序列DFVSEQIDNo.38人βrAR的EC11表位的胺基酸序列DFVTNRSEQIDNo.39與人βfAR的EC11表位同源的胺基酸序列(16AA；Cys11—Ser11；N末端AA=Gln16或DGlu16)；環化可發生在Ala1和Gln16/DGlu16間Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Tyr-Gln/DGluSEQIDNo.40Ai^1-AR的胺基酸序列1mgagvlvlgasepgnlssaaplpdgaataarllvpasppasllppasespeplsqqwtag61mgllmalivllivagnvlvivaiaktprlqtltnlfimslasadlvmgllvvpfgativv121wgrweygsffcelwtsvdvlcvtasietlcvialdrylaitspfryqslltrararglvc181tvwaisalvsflpilmhwwraesdearrcyndpkccdfvtnrayaiassvvsfyvplcim241afvylrvfreaqkqvkkidscerrflggparppspspspvpapapppgpprpaaaaatap301langragkrrpsrlvalreqkalktlgiimgvftlcwlpfflanvvkafhrelvpdrlfv361ffnwlgyansafnpiiycrspdfrkafqgllccarraarrrhathgdrprasgclarpgp421ppspgaasddddddvvgatpparllepwagcnggaaadsdssldepcrpgfaseskvSEQIDNo.41與人βfAR的EC11表位同源的胺基酸序列(22AA；Cys17—Ser17)；環化可發生在Arg1和Gly22間Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-GlySEQIDNo.42編碼與人βfAR的EC11表位同源的胺基酸序列(22AA；Cys17—Ser17)的核苷酸序列CgggcggagagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagtgcSER.gacttcgtcaccGLYSEQIDNo.43與人βrAR的EC11表位(22AA；Cys3—Ser3)同源的胺基酸序列；環化可發生在Lys1禾口Pro22間Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Gly-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-ProSEQIDNo.44編碼與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(22AA；Cys3—Ser3)的核苷酸序列aagtgCSERgacttcgtcaccGLYCgggcggagagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccCCSEQIDNo.45人β「AR的EC11表位(攜帶部分)的胺基酸序列DEARRCYNDPKSEQIDNo.46人β「AR的EC11表位(攜帶部分)的胺基酸序列ESDEARRCYNDPKSEQIDNo.47人βrAR的EC11表位的胺基酸序列AESDEARRSEQIDNo.48人βrAR的EC11表位的胺基酸序列DFVTSEQIDNo.49編碼與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(19AA；Cys15—Ser15(18AA；Cys14-Ser14))的核苷酸序列gCIlagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagtgcSERgacttcgtccarSEQIDNo.50編碼與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(19AA；Cys15—Ser15(18AA；Cys14—Ser14)；Gln18—DGlu18)的核苷酸序列gCllagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagtgCSERgacttcgtcξΒΓSEQIDNo.51編碼與人P1-AR的EC11表位同源的胺基酸序列(19ΑΑ;Cys14—Ser14(18ΑΑ；Cys13-Ser13))的核苷酸序列gCllagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagSERtgCgacttcgtccarSEQIDNo.52編碼與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(19AA；Cys14—Ser14(18AA；Cys13—Ser13)；Gln18—DGlu18)的核苷酸序列gCHagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagSERtgCgacttcgtcgarSEQIDNo.53編碼與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(19AA；Cys3—Ser3(18AA；Cys3-Ser3))的核苷酸序列aagtgCSERgacttcgtcCargCHagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccSEQIDNo.54編碼與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(19AA；Cys3—Ser3(18AA；Cys3—Ser3)；Gln7—DGlu7)的核苷酸序列aagtgCSERgacttcgtcgargcnagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccSEQIDNo.55編碼與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(19AA；Cys2—Ser2(18AA；Cys2-Ser2))的核苷酸序列aagSERtgCgacttcgtcCargCUagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccSEQIDNo.56編碼與人βrAR的EC11表位同源的胺基酸序列(19AA；Cys2—Ser2(18AA；Cys2—Ser2)；Gln7—DGlu7)的核苷酸序列aagSERtgCgacttcgtcgargcnagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgacccc在核苷酸序列中，「SER」代表編碼Ser(絲氨酸)的任一核苷酸三聯體，即ten或agy；「GLY」代表編碼Gly(甘氨酸)的任一核苷酸三聯體，即ggn。η代表任一核苷酸，特別地a、c、g或t，y代表t或c以及r代表a或g。如本文所使用的，各種肽的序列的顯示自N末端到C末端，從而N末端在相應描述的胺基酸序列的左側且C末端在相應描述的胺基酸序列的右側。下面為本文使用的其它的縮寫詞胺基酸3-字母代碼1-字母代碼丙氨酸AlaA精氨酸ArgR天冬醯胺AsnN天冬氨酸AspD半胱氨酸CysC穀氨酸GluE穀氨醯胺GlnQ甘氨酸GlyG組氨酸HisH異亮氨酸lieI亮氨酸LeuL賴氨酸LysK甲硫氨酸MetM苯丙氨酸PheF脯氨酸ProP絲氨酸SerS蘇氨酸ThrT色氨酸TrpW酪氨酸TyrY纈氨酸ValV天冬醯胺或天冬氨酸AsxB穀氨醯胺或穀氨酸GlxZ亮氨酸或異亮氨酸XleJ未指明的或未知的胺基酸XaaX另外引用的參考文獻American,Heart,Association2007.Dallas；Heartdiseaseandstrokestatistics-2007update(心臟疾病和中風數據統計-2007年修正).Circulation115:e69_el71Anderton2001Immunology104:367_376Baba2004Eur.HeartJ.25:1108—1115Boivin2005Eur.J.HeartFail.4，suppl.124(104)Caforio2002Eur.J.HeartFail.4:411_417Chiale2001Circulation103:1765-1771Chien2000Oncol.279~17Christ2001J.Mol.Cell.Cardiol.33:1515_1525Christ2006J.Mol.CellCardiol.41:716_723Elies1996J.Immunol.157:4203_4211Engelhardt1999Proc.Natl.Acad.Sci.USA96:7059_7064Eriksson2003Nat.Med.91484-1490Fabrizio1994DrugsTher.889-94Felix2000J.Am.Coll.Cardiol.35:1590_1598Ferrari1995J.Exp.Med.18259-65Freedman2004J.Clin.Invest.113:1379—1382Fu1993J.Clin.Invest.91:1964-1968Goser2006Circulation114:1693—1702Hershko2005Ann.N.Y.Acad.Sci.1051:635_646Hoebeke1996Int.J.Cardiol.54:103—111Iwata2001aJ.Am.Coll.Cardiol.37:418_424Iwata2001bCirc.Res.88:578_586Jahns1996Eur.J.Pharmacol.316111-121Jahns1999aJ.Am.Coll.Cardiol.34:1545_1551Jahns1999bCirculation99:649_654Jahns2000J.Am.Coll.Cardiol.36:1280—1287Jahns2004J.Clin.Invest.113:1419_1429Jahns2006TrendsCardiovascMed1620~24Khoynezhad2007Eur.J.HeartFail.9:120_123Kuhl2005Circulation112:1965-1970Li2006177=8234-8240Limas1992Am.HeartJ.123:967_970Limas1996Int.J.Cardiol.54:113—116Limas1997Circulation951979-1980Limas2004Am.J.Cardiol.93:1189-1191Lohse2003Circ.Res.93:896_906Luppi1998Circulation98-.777-785MacLellan2003Nat.Med.9:1455—1456Maekawa2007Circulation115:5—8Magnusson1994Circulation89:2760_2767Magnusson1996Int.J.Cardiol.54:137-141Mahrholdt2006Circulation114:1581—1590Matsui1995Autoimmunity2185-88Matsui2001Autoimmunity43:217_220Mobini2004AutoimmunityRev.3:277_284Morita2005J.Clin.Invest.115:518_526Neumann1990J.Am.Coll.Cardiol.16:839_846Nikolaev2007J.Am.Coll.Cardiol.50:423_431Okazaki2003Nat.Med.91477-1483Okazaki2005TrendsMolMed11-.322-326Pohlner1997Am.J.Cardiol.80:1040-1045Rose1993Immunol.Today14:426_430Rose2001J.Clin.Invest.107:943_944Schultheiss1985J.Mol.CellCardiol.17:603_617Schultheiss1988J.Exp.Med.168:2102_2109Schulze1999Cardiovasc.Res.44:91_100Sewald2002Peptides=ChemistryandBiology,ffilley-VCH.Smulski2006FASEBJ.20:1396-1406Stork2006Am.HeartJ.152:697-704Wallukat1995J.Mol.CellCardiol.27:397_406Wallukat2002N.Engl.J.Med.3471806Wang1996BloodPressure3:25_27Witebsky1957J.Am.Med.Assoc.1641439-1447Woodiwiss2001Circulation103:155-160權利要求式I的環狀肽環(x-xh-Cys-x-xa-xb-xc-x-Cys-y-xi-x)(I)，其中a)X為除Cys以外的胺基酸；b)h為1至15的任一整數；c)i為0至14的任一整數；d)xa，xb和xc的一個為Pro；e)y為除Cys以外的胺基酸；和f)所述環狀肽由至少16個且最多25個胺基酸組成。2.如權利要求1所述的環狀肽，其中所述肽e)能夠結合抗3r腎上腺素受體(0fAR)的ECh環的(自身)抗體；f)能夠抑制3「AR與抗3rAR的ECn環的(自身)抗體之間的相互作用；g)模擬在0rAR的ECn環的天然構象中呈現的一個或多個表位；和/或h)能夠降低抗體介導的h-AR的活化。3.如權利要求1或2所述的環狀肽，其中y單獨地和獨立地選自極性胺基酸。4.如權利要求1至3中任一權利要求所述的環狀肽，其中y為絲氨酸或絲氨酸類似物。5.如權利要求1至4中任一權利要求所述的環狀肽，其中h為5，8或9。6.如權利要求1至5中任一權利要求所述的環狀肽，其中i為3，4或6。7.如權利要求1至6中任一權利要求所述的環狀肽，其為式I'或I"的環狀肽環(xI-xh-Cys-x-xa-xb-xc-x-Cys-y-xi-x)(I『)；環(xIII-xh-Cys-x-xa-xb-xc-x-Cys-y-xi-x)(I「)，其中xx為Ala，Gly，Val，Thr或Ser，且xni為Argo8.如權利要求1至7中任一權利要求所述的環狀肽，其為式I"『或I"「的環狀肽環(xI-xh-Cys-x-xa-xb-xc-x-Cys-y-xi-xII)(I「『)；環(xIII-xh-Cys-x-xa-xb-xc-x-Cys-y-xi-xIV)(I「「),其中xn為Gln，Glu，Asp或Asn，並且xIV為Gly或Gly類似物。9.如權利要求7或8所述的環狀肽，其中\為Ala。10.如權利要求7至9中任一權利要求所述的環狀肽，其中xn為Gin或Glu。11.如權利要求7至10中任一權利要求所述的環狀肽，其中xn為DGlu。12.如權利要求1至11中任一權利要求所述的環狀肽，其中f為Pro。13.如權利要求1至12中任一權利要求所述的環狀肽，其中xb為酸性胺基酸。14.如權利要求1至13中任一權利要求所述的環狀肽，其中y不是Pro和/或除xa，xb或xc外的x不是Pro。15.如權利要求1至14中任一權利要求所述的環狀肽，其為式II，III或III'的環狀肽環(xI-x1-x1-x-x2-x2-Cys-x-xa-xb-xc-x-Cys-y-xi-xII)(II)；環(xI-x2-x-x1-x-x1-x1-x-x2-x2-Cys-x-xa-xb-xc-x-Cys-y-xi-xII)(III)；環(xiii,2_x_xi_x_xi_xi_x_x2_x2_Cys-x-xa-xb-xc-x-Cys-y-xi-xIV)(III')其中a)X1單獨地和獨立地選自酸性胺基酸；和/或b)x2單獨地和獨立地選自鹼性胺基酸。16.如權利要求1至15中任一權利要求所述的環狀肽，其為式IV，V或V'的環狀肽環(X1-X1-X1-X4-X2-X2-Cys-X3-Xa5-Xb-Xc-X2-Cys-Y-X1-X3-X3-X11)(IV)；環(X1-X2-X4-X1-X4-X1-X1-X4-X2-X2-Cys-X3-Xa5-Xb-Xc-X2-Cys-Y-X1-X3-X3-X4-X5-X2-X11)(V)；環(xIiuWWH-Cys-X3-Xa5-Xb-Xc-X2-Cys-Y-X1-X3-X3-X4-X1v)(V,)，其中a)X1單獨地和獨立地選自酸性胺基酸；b)x2單獨地和獨立地選自鹼性胺基酸；c)X3單獨地和獨立地選自Leu，lie，Val，Met,Trp,Tyr和Phe；d)X4單獨地和獨立地選自Ser，Thr，Ala和Gly；和/或e)X5單獨地和獨立地選自Gln和Asn。17.如權利要求1至16中任一權利要求所述的環狀肽，其包含如下的胺基酸片段Asp-Xxx1-Xxx4-Arg-Arg-Cys-Xxx3-Asn-Asp-Pro-Lys；或Glu-Ser-Asp-Xxx1-Xxx4-Arg-Arg-Cys-Xxx3-Asn-Asp-Pro-Lys,其中Xxx1如權利要求la)、15a)和16a)中任一項所定義的，Xxx3如權利要求la)或16c)所定義的，和/或Xxx4如權利要求la)或16d)所定義的。18.如權利要求1至17中任一權利要求所述的環狀肽，其包含如下的胺基酸片段Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys；或Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lysο19.如權利要求1至18中任一權利要求所述的環狀肽，其為選自如下的環狀肽a)由如SEQIDNO.41，43，1-4和17-20的任一個所示的胺基酸序列形成或可形成的環狀肽；b)由如SEQIDNO.42，44，9-12，25-28，49，50，53和54的任一個所示的核苷酸序列編碼的胺基酸序列形成或可形成的環狀肽；c)由核苷酸序列編碼的胺基酸序列形成或可形成的環狀肽，所述核苷酸序列由於遺傳密碼的簡併性而不同於SEQIDNO.42，44，9-12，25-28，49，50，53和54的任一個所示的核苷酸序列；以及d)式VI到IX'中任一個的環狀肽環(Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Gly)(IX')；環(Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Gln)(VI)；環(Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-Gln)(VII)；環(Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-DGlu)(VIII)；環(Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-DGlu)(IX)。20.如權利要求19所述的環狀肽，其中至少一個酸性胺基酸被選自酸性胺基酸的不同的胺基酸所取代。21.如權利要求19或20所述的環狀肽，其中至少一個鹼性胺基酸被選自鹼性胺基酸的不同的胺基酸所取代。22.如權利要求19至21中任一權利要求所述的環狀肽，其中至少一個脂肪族胺基酸殘基被選自脂肪族胺基酸的不同的胺基酸所取代。23.如權利要求1至22中任一權利要求所述的環狀肽，其中環化通過至少一個共價結合的鍵發生，所述鍵選自S-S鍵、肽鍵、碳鍵諸如C-C或C=C、酯鍵、醚鍵、偶氮鍵、C-S-C鍵、C-N-C鍵和C=N-C鍵。24.如權利要求1至23中任一權利要求所述的環狀肽，其中環化通過至少兩個為S-S鍵和肽鍵的鍵發生。25.如權利要求23或24所述的環狀肽，其中所述S-S鍵通過所述肽的兩個半胱氨酸殘基形成。26.如權利要求23-25中任一權利要求所述的環狀肽，其中所述肽鍵通過N末端胺基酸的NH2基團和C末端胺基酸的COOH基團形成。27.如權利要求23-26中任一權利要求所述的環狀肽，其中附加的鍵通過組成胺基酸的NH2基團和COOH基團的側鏈形成。28.編碼如權利要求1至27中任一權利要求所述的環狀肽的胺基酸主鏈的核酸分子。29.如權利要求28所述的核酸分子，其包含在SEQIDNO.9_12，25-28，42和44任一個中所描述的核苷酸序列或由於遺傳密碼的簡併性而與之不同的核苷酸序列。30.載體，包含權利要求28或29所述的核酸分子。31.重組宿主細胞，包含權利要求28或29所述的核酸分子或權利要求30所述的載體。32.生產權利要求1至27中任一權利要求所述的環狀肽的方法，包含以下步驟a)(i)在使權利要求1至27中任一項所述的多肽的胺基酸主鍊表達的條件下，培養權利要求31所述的重組宿主細胞，並回收所述胺基酸主鏈；或化學合成權利要求1至27中任一項所述的多肽的胺基酸主鏈；以及b)使所述胺基酸主鏈環化以形成權利要求1至27中任一項所述的環狀肽。33.如權利要求32所述的方法，其中所述環化如權利要求23至27中任一權利要求所定義的。34.如權利要求33所述的方法，其中分別地所述N末端胺基酸為Ala或Arg，且所述C末端胺基酸為Gln或Glu或Gly，或者所述N末端胺基酸為Lys，且所述C末端胺基酸為Pro。35.如權利要求31所述的方法，其中Glu為DGlu。36.通過權利要求32至35中任一權利要求所述的方法可獲得的環狀肽。37.組合物，其包含權利要求1-27和36中任一權利要求的環狀肽、權利要求28或29的核酸分子、權利要求30的載體或權利要求31的重組宿主細胞，以及任選的載體。38.如權利要求37所述的組合物，其中所述組合物為藥物組合物，且所述載體為藥物可接受的載體。39.方法，其用於a)治療、改善或預防β腎上腺素受體(β-AR)活性增強的疾病；b)治療具有抗β-AR的抗體的患者；或c)誘導免疫耐受，所述方法包括下述步驟給予需要這種醫療幹預的患者藥物活性量的權利要求1至27和36中任一項所述的環狀肽和/或權利要求38所述的藥物組合物以及任選的藥物可接受的載體。40.如權利要求1至27和36中任一權利要求所述的環狀肽或權利要求38所述的藥物組合物，以及任選的藥物可接受的載體，其用於a)治療、改善或預防β-AR活性增強的疾病；b)治療具有抗β-AR抗體的患者；或c)誘導免疫耐受。41.如權利要求38至40中任一權利要求所述的藥物組合物、方法或環狀肽，其中所述環狀肽與至少一種另外的藥物活性劑一起給藥，或者所述藥物組合物包含至少一種另外的藥物活性劑。42.如權利要求41所述的藥物組合物、方法或環狀肽，其中所述至少一種另外的藥物活性劑為受體阻斷劑。43.如權利要求42所述的藥物組合物、方法或環狀肽，其中所述β-受體阻斷劑為選擇性β-AR阻斷劑。44.如權利要求43所述的藥物組合物、方法或環狀肽，其中所述選擇性β-AR阻斷劑為阿替洛爾、美託洛爾、奈比洛爾和比索洛爾。45.如權利要求39至44中任一權利要求所述的方法、環狀肽或藥物組合物，其中所述β腎上腺素受體活性增強的疾病為心臟疾病，或者其中所述患者患有心臟疾病。46.如權利要求45所述的方法或環狀肽或藥物組合物，其中所述心臟疾病選自感染性和非感染性心臟疾病、缺血性和非缺血性心臟疾病、炎症性心臟疾病和心肌炎、心臟擴張、特發性心肌病、(特發性)擴張性心肌病(DCM)、免疫性心肌病、心力衰竭和包括室性和/或室上性過早奪獲搏動及包括心房纖顫和/或心房撲動在內的任一房性心律失常的任一心律失常。47.如權利要求45或46所述的方法或環狀肽或藥物組合物，其中所述心臟疾病為(特發性)DCM。48.如權利要求39到47中任一權利要求所述的方法、環狀肽或藥物組合物，其中所述疾病由抗β-AR的抗體誘發。49.如權利要求39到44中任一權利要求所述的方法、環狀肽或藥物組合物，其中通過抑制抗β-AR抗體的產生獲得所述免疫耐受的誘導。50.如權利要求49所述的方法、環狀肽或藥物組合物，其中通過憑藉產生抗體的早期B細胞和記憶B細胞的抗原識別位點的阻斷來抑制抗β-AR抗體的產生而獲得所述免疫耐受的誘導。51.如權利要求39至50中任一權利要求所述的方法、環狀肽或藥物組合物，其中所述環狀肽或所述藥物組合物以達到每kg體重至少0.05mg所述環狀肽給藥。52.檢測(樣品中)抗β-AR抗體的方法，包含將權利要求1-27和36中任一權利要求所述的環狀肽與待檢測的所述抗體接觸的步驟。53.權利要求39至52中任一權利要求所述的方法、環狀肽或藥物組合物，其中所述β-AR%β「ARο全文摘要本發明涉及新的β-腎上腺素受體同源性環肽-突變體，其包含能形成分子內鍵的僅兩個半胱氨酸殘基，涉及能形成這些環肽-突變體的線性肽以及涉及編碼這些環肽-突變體和線性肽的核酸分子。而且，提供了包含上述的核酸分子的載體和重組體宿主細胞和產生公開的環肽-突變體的方法。還提供了包含本發明的肽、核酸分子、載體或宿主細胞的組合物。本發明也涉及利用本發明肽的治療和診斷的手段、方法和用途以及涉及用於檢測類似抗-β1-腎上腺素受體抗體的抗-β-腎上腺素受體抗體的手段、方法和用途。文檔編號A61K38/12GK101835793SQ200880112623公開日2010年9月15日申請日期2008年8月22日優先權日2007年8月24日發明者瓦勒瑞·耶恩斯,維亞徹斯拉韋·尼科萊維,羅蘭·耶恩斯,馬丁·羅瑟申請人:烏利班-馬克西姆利安大學