癌細胞凋亡的製作方法

2023-10-17 06:27:04 1

專利名稱：癌細胞凋亡的製作方法
技術領域：
本發明提供了用於治療癌症的藥物和方法，特別是一種使癌細胞凋亡的療法。更具體而言，本發明提供了通過凋亡來治療除黑素瘤以外的癌症的地塞米諾或其衍生物。
背景技術：
美國專利No. 4，876，276中公開的地塞米諾(dexanabinol)為1，1 二甲基庚基-(3S，4S)-7-羥基-Δ6-四氫大麻酚。地塞米諾是一種不影響精神狀態的大麻素 (carmabinoid)，之前已經證明其能夠在體外快速殺死黑素瘤細胞。國際專利申請W02009/007700描述了地塞米諾在治療黑素瘤癌細胞中的用途。其描述了地塞米諾的致凋亡作用，但沒有公開其作用機制，並且在當時也沒有完全理解該作用機制。因此，此前也就無法預見該藥物在用於除黑素瘤以外的其它癌細胞中的可應用性。 在該已有申請中，公開了地塞米諾是通過抑制黑素瘤細胞的核因子κ-B (NF κ B)，從而治療黑素瘤的。此外，也已經證明了地塞米諾在黑素瘤中既誘導凋亡，又抑制細胞的增殖。我們已經發現與僅通過與NFK B結合相比，地塞米諾的作用機制要更加複雜。與 WO 『700中預期的相比，本發明的創造性在於以下創新點由於對作用機制的新的認識，從而確定了地塞米諾能夠在其中誘導凋亡的其它類型的癌症。其具有複雜的結合屬性以及其它間接作用。這使我們認識到，地塞米諾出乎意料地在更多的癌症中起作用，而不僅僅是黑素瘤，並且其還具有所需的選擇性致凋亡作用。目前我們已經驚奇地發現，地塞米諾不僅在黑素瘤中有效，其在其它一些癌症中也有效。地塞米諾的至今未公開的結合屬性以及間接作用表明，其能夠在其他類型的癌症中有效地誘導凋亡，而不僅僅是黑素瘤。由於對地塞米諾的作用方式的新的認識，目前我們已經通過研究確定了那些對地塞米諾誘導的凋亡敏感的癌症。基於此，已經對相關的細胞系進行了檢測，並且已經證實了該推測。國際專利申請No. W003/077832描述了地塞米諾在降低癌細胞增殖中的用途。此外，還描述了該增殖的降低與炎症相關基因的調控有關。WO 『832僅提供了針對胰腺腫瘤和結腸直腸腫瘤的可能性證據。實驗結果表明， 「高達15 μ M的地塞米諾的存在對Aspc-I的增殖沒有影響，而在相同濃度下，Panc-I細胞的增殖被抑制26%」。其還指出，「通過調節促/抗炎介質而起作用的」地塞米諾「也許對某些類型的腫瘤的治療有效」。因此，雖然地塞米諾在癌症治療中的用途已被公開，但是本領域的技術人員可以理解，細胞增殖的減少可以通過防止癌的擴散或生長來降低癌症的影響，但是不會對癌本身有致命性地影響，因此，可以依靠(例如)外科手術技術或者其它化學療法來使得癌發生細胞凋亡。然而，雖然地塞米諾對炎症有效果、從而對細胞增殖有效果，但是沒有任何證據表明其具有任何凋亡作用。WO 『832承認其沒有清楚地了解地塞米諾的作用機制。其在第1頁第M至25行實際指出，「儘管如此，仍然不清楚大麻素類衍生物的某些治療效果的機制」。此外，WO 『832 描述了對於脊椎損傷導致的神經損傷、大腦局部缺血和神經退行性疾病(例如阿爾茲海默症和帕金森病)而言，地塞米諾和其它大麻素將是引人注意的治療候選物。就這點而言，可以容易地理解這些大麻素的任何凋亡作用將不是人們所希望的。現有技術暗示了地塞米諾可治療這些癌症，但並不是通過誘導凋亡而進行的。關鍵點在於選擇性凋亡的誘導，這是現有技術所預料不到的。發明概述本發明公開了一種導致癌細胞凋亡的化合物，這提供了一種特別有利的使癌細胞凋亡的療法，並且所述化合物減少了細胞增殖。已經公開了地塞米諾是一種非競爭性NMDA受體阻斷劑，除此以外，還表明其能夠抑制NF κ B。然而，目前我們已經令人驚奇地證明，地塞米諾能夠有效地結合於或間接地作用於大量至今仍不知道其與地塞米諾發生相互作用的蛋白質位點。這些蛋白質位點包括N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體、環氧合酶_2 (C0X-2)、腫瘤壞死因子α (TNF-α)和核因子-κ B (NF κ B)。之前已經報導了地塞米諾在這些位點具有活性。然而之前沒有報導的是，除在這些位點具有活性以外，地塞米諾還在以下位點具有活性，即，細胞周期蛋白依賴性激酶(例如，⑶Κ2/Α和⑶Κ5/ρ25)、組蛋白乙醯轉移酶(HAT) 和法尼基轉移酶。本發明進一步研究了作用機制，並且目前了解到，地塞米諾及其衍生物對很多癌細胞都有凋亡作用。因此，利用地塞米諾及其衍生物使除黑素瘤以外的癌細胞發生凋亡本身就是新穎的。由於發現地塞米諾可導致癌細胞的凋亡，因此，這提供了一種特別有利的療法，其可減少細胞增殖並且導致細胞凋亡。更詳細地，地塞米諾的已知的直接和間接的靶標為N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體地塞米諾原本被開發為神經保護劑。其神經保護作用是由於其能夠阻斷NMDA受體。它立體特異性地阻斷NMDA受體，這通過與這樣的位點發生相互作用，該位點接近但區別於非競爭性NMDA受體拮抗劑的位點，並區別於穀氨酸、甘氨酸和聚胺的識別位點。與其它一些非競爭性NMDA受體拮抗劑不同的是，地塞米諾不會產生影響精神狀態的效果，並且通常在人體中具有良好的耐受性。環氧合酶-2(C0X-2)地塞米諾具有與其NMDA受體阻斷能力無關的抗炎症以及抗氧化特性。該抗炎症活性與地塞米諾能夠減少由環氧合酶-2 (COX-幻產生的PGE2的分泌有關。C0X-2是環氧合酶異構體中的一種，其中所述環氧合酶異構體與花生四烯酸(AA)代謝為前列腺素(PG)和其它類花生酸有關，其中類花生酸是一個已知的表現出炎症性質並且與炎症有關的化合物家族。大多數常見的NSAID(非留族抗炎症藥物)通過對酶活性位點進行修飾來抑制COX 的活性，從而防止AA底物轉化為PGE2 (參見文獻Hinz B. et al，J. Pharm. Exp. Ther. 300 367-375,2002)。W02003/077832公開了地塞米諾所顯示出的PGE2抑制活性不是在C0X-2 酶活性的水平上，而是發生在基因調控的水平上。腫瘤壞死因子α (TNF-α )
已發現地塞米諾能夠阻斷TNF-α的產生或作用。這種抑制作用最可能發生在轉錄後的水平上。如國際專利申請W097/11668和W001/98289所公開的，已發現地塞米諾阻斷了 TNF- α的產生或作用。由於在頭部損傷模型中地塞米諾未影響TNF- α的mRNA水平，因此推測對細胞因子的抑制發生在轉錄後階段(參見文獻Siohami E. et al.，J. Neuroimmuno. 72 169-77，1997)。人TNF- α首先被翻譯成一個27kd的跨膜前體蛋白，其被TNF- α轉化酶(TACE)切割成17kd的分泌形式。在RT-PCR實驗的基礎上，Shoshany等人報導了地塞米諾對TNF- α 的mRNA沒有顯著影響，但是卻顯著降低了 TACE的mRNA水平，這支持了該藥物在分泌抑制的水平上發揮作用的假設。核因子κ B (NF κ B)有實驗證據表明，地塞米諾通過抑制IKB2的磷酸化和降解，來間接抑制核因子 κ B (NF κ B) οJuttler, E 等人 Q004) (Neuropharmacology 47(4) :580-92)提供了地塞米諾抑制NF κ B的證據。地塞米諾抑制了⑴NF- κ B抑制劑I κ B α的磷酸化和降解，以及NF- κ B 向細胞核的轉運；地塞米諾降低了⑵NF-K B的轉錄活性以及(3) NF-κ B靶基因腫瘤壞死因子-α和白細胞介素-6 (TNF- α和IL-6)的mRNA累積。地塞米諾的之前未知的靶標為細胞周期蛋白依賴性激酶⑶K2/A和⑶K5/p25直接檢測時，地塞米諾在抗⑶Κ2和⑶Κ5方面沒有顯著的直接活性。然而我們相信，在存在更多的可能介導該作用的細胞內網絡的情況下，CDK會受到間接的影響。組蛋白乙醯轉移酶(HAT)組蛋白乙醯轉移酶是一個已知的癌症靶標。沒有檢測數據表明地塞米諾是否在抗該靶標方面具有活性，但是在該靶標處具有預測活性，因此這將是有利的。法尼基轉移酶法尼基轉移酶是一個已知的癌症靶標。沒有檢測數據表明地塞米諾是否在抗該靶標方面具有活性，但是在該靶標處具有預測活性。本文描述了地塞米諾可作用於不止一種被認為在癌症和癌症治療中重要的蛋白。 在這些作用中，有些是直接的，而有些是間接的。有著重要意義的是，地塞米諾可作用於很多靶標，這使該化合物在一系列癌症中是有益的。細胞係數據表明，地塞米諾在乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、非小細胞肺癌和成膠質細胞瘤中是有效的。因此，根據本發明的第一個方面，我們提供了一種治療劑，該治療劑能夠同時、依次、或分別地作用於以下蛋白Ν-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)、環氧合酶-2(C0X-2)、腫瘤壞死因子α (TNF-α)、核因子-KB(NFkB)、細胞周期蛋白依賴性激酶(例如，⑶Κ2/Α和 CDK5/p25)、組蛋白乙醯轉移酶(HAT)和法尼基轉移酶。本發明的該方面尤其在以下方面是特別有益的其提供了用於結合上述蛋白的單一治療劑。應當理解，本發明的一個具體方面提供了地塞米諾或其衍生物，其用於同時、依次、或分別地作用於以下蛋白Ν-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)、環氧合酶-2(C0X-2)、腫瘤壞死因子α (TNF-α)、核因子-KB(NFkB)、細胞周期蛋白依賴性激酶(例如，⑶Κ2/Α和 ⑶Κ5/ρ25)、組蛋白乙醯轉移酶(HAT)和法尼基轉移酶。因此，根據本發明的另一方面，我們提供了一種能夠同時、依次、或分別地作用於以下蛋白Ν-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)、環氧合酶-2(C0X_2)、腫瘤壞死因子α (TNF-α )、 核因子-κ B (NF κ B)、細胞周期蛋白依賴性激酶(例如，⑶Κ2/Α和⑶Κ5/ρ25)、組蛋白乙醯轉移酶(HAT)和法尼基轉移酶的治療劑，該治療劑用於癌細胞的凋亡，其中，所述癌細胞選自原發癌、乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、非小細胞肺癌、成膠質細胞瘤、淋巴瘤、間皮瘤、肝癌、 肝內膽管癌、食道癌、胰腺癌、胃癌(stomach cancer)、喉癌、腦癌、卵巢癌、睪丸癌、宮頸癌、 口腔癌、咽癌、腎癌、甲狀腺癌(thyroid cancer)、子宮癌、膀胱癌、肝細胞癌、甲狀腺腫瘤 (thyroid carcinoma)、骨肉瘤、小細胞肺癌、白血病、骨髓瘤、胃腫瘤(gastric carcinoma) 和轉移癌中的一種或多種。如上文所述，地塞米諾可直接或間接地作用於上述蛋白質位點，這使得其成為一種用於多種癌細胞凋亡的合適的治療劑。根據本發明的另一方面，我們提供了地塞米諾或其衍生物，其用於使患者的癌發生凋亡，其中，所述癌選自胰腺癌、成膠質細胞瘤、胃腫瘤、食道癌、卵巢癌、腎癌和甲狀腺腫瘤中的一種或多種。根據本發明的另一方面，我們提供了地塞米諾或其衍生物，其用於使患者的癌發生凋亡，其中，所述癌選自原發癌、乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、非小細胞肺癌、成膠質細胞瘤、淋巴瘤、間皮瘤、肝癌、肝內膽管癌、食道癌、胰腺癌、胃癌、喉癌、腦癌、卵巢癌、睪丸癌、 宮頸癌、口腔癌、咽癌、腎癌、甲狀腺癌、子宮癌、膀胱癌、肝細胞癌、甲狀腺腫瘤、骨肉瘤、小細胞肺癌、白血病、骨髓瘤、胃腫瘤和轉移癌中的一種或多種。因此，地塞米諾或其衍生物應是治療有效量的。根據本發明，治療有效量應當指凋亡作用的有效量。除凋亡作用以外，根據(特別是)癌症的性質，地塞米諾或其衍生物還可以提供其它的治療癌症的特性，例如抑制腫瘤生成、抑制細胞增殖、誘導細胞毒性。從對地塞米諾及其衍生物的作用機制的描述中，應當認識到，根據本發明可對多種癌症進行凋亡作用方面的治療。可述及的具體的癌包括但不限於乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、非小細胞肺癌、成膠質細胞瘤、淋巴瘤、肝癌、肝內膽管癌、食道癌、胰腺癌、胃癌、喉癌、腦癌、卵巢癌、睪丸癌、宮頸癌、口腔癌、咽癌、腎癌、甲狀腺癌、子宮癌、膀胱癌和轉移癌。 可述及的更具體的癌包括選自胰腺癌、成膠質細胞瘤、胃腫瘤、食道癌、卵巢癌、腎癌和甲狀腺腫瘤中的一種或多種的癌。可述及的更具體的癌包括選自原發癌、乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、非小細胞肺癌、成膠質細胞瘤、淋巴瘤和轉移癌中的一種或多種的癌。因此，根據本發明的發生凋亡的癌細胞可以是癌變前的、惡性的、轉移性的、或者多重耐藥性的癌細胞， 以及它們的組合。特別的是，我們發現地塞米諾或其衍生物在轉移性癌細胞的凋亡中是有效的。根據本發明的另一方面，我們提供了地塞米諾或其衍生物在製備用於使患者的癌凋亡的藥物中的用途，其中，所述癌選自原發癌、乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、非小細胞肺癌、 成膠質細胞瘤、淋巴瘤、間皮瘤、肝癌、肝內膽管癌、食道癌、胰腺癌、胃癌、喉癌、腦癌、卵巢癌、睪丸癌、宮頸癌、口腔癌、咽癌、腎癌、甲狀腺癌、子宮癌、膀胱癌、肝細胞癌、甲狀腺腫瘤、骨肉瘤、小細胞肺癌、白血病、骨髓瘤、胃腫瘤和轉移癌中的一種或多種。在本發明的一個優選的實施方案中，提供了地塞米諾或其衍生物在製備用於使患者的癌凋亡的藥物中的用途，其中，所述癌選自胰腺癌、成膠質細胞瘤、胃腫瘤、食道癌、卵巢癌、腎癌和甲狀腺腫瘤中的一種或多種。在本發明的另一個優選的實施方案中，提供了地塞米諾或其衍生物在製備用於使患者的癌凋亡的藥物中的用途，其中，所述癌選自原發癌、 乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、非小細胞肺癌、成膠質細胞瘤、淋巴瘤和轉移癌中的一種或多種。根據本發明的這個方面，我們提供了如上文所述的用途，其中，對患者施用的地塞米諾或其衍生物的量足夠使地塞米諾的血漿濃度達到10 μ M至20 μ M。根據本發明的另一方面，我們提供了如上文所述的用途，其中，地塞米諾或其衍生物的量足以使治療劑的血漿濃度達到至少 ο μ Μ,並且在患者體內維持至少2小時。根據本發明的另一方面，我們提供了一種治療癌症的方法，其中，所述方法包括使癌凋亡，其包括向所需患者施用凋亡作用有效量的地塞米諾或其衍生物，其中，所述癌選自原發癌、乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、非小細胞肺癌、成膠質細胞瘤、淋巴瘤、間皮瘤、肝癌、肝內膽管癌、食道癌、胰腺癌、胃癌、喉癌、腦癌、卵巢癌、睪丸癌、宮頸癌、口腔癌、咽癌、腎癌、 甲狀腺癌、子宮癌、膀胱癌、肝細胞癌、甲狀腺腫瘤、骨肉瘤、小細胞肺癌、白血病、骨髓瘤、胃腫瘤和轉移癌中的一種或多種。在本發明的一個優選的實施方案中，提供了一種如上文所述的治療癌症的方法， 其中，所述癌選自胰腺癌、成膠質細胞瘤、胃腫瘤、食道癌、卵巢癌、腎癌和甲狀腺腫瘤中的一種或多種。在本發明的另一個優選的實施方案中，提供了一種治療如上文所述的原發癌、 乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、非小細胞肺癌、成膠質細胞瘤、淋巴瘤和轉移癌等癌症的方法。本發明尤其提供了一種治療癌症的方法，其中，所述方法包括使癌凋亡，其包括施用治療有效量的製劑，該製劑能夠同時、依次、或分別地直接或間接地作用於以下蛋白Ν-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)、環氧合酶-2(C0X_2)、腫瘤壞死因子α (TNF-α)、核因子-K B (NF κ B)、細胞周期蛋白依賴性激酶(例如⑶Κ2/Α和⑶Κ5/ρ25)、組蛋白乙醯轉移酶 (HAT)和法尼基轉移酶。本發明的這個方面尤其在以下方面是特別有益的其提供了一種方法，該方法包括施用作用於上述蛋白的單一治療劑。更具體而言，根據本發明的該方面的方法包括對需要施用該療法的患者施用治療有效量的地塞米諾或其衍生物。本發明的方法可包括施用足以抑制癌細胞的腫瘤生成的治療有效量的地塞米諾或其衍生物。可選的或除此以外的是，所述方法可包括施用足以在癌細胞中誘導細胞毒性的治療有效量的地塞米諾或其衍生物。可以向患者施用的治療劑(例如地塞米諾)的量，(尤其)可以根據癌症的性質、 癌症的嚴重性等進行改變。因此，例如，向患者施用的地塞米諾的治療有效量可足以使地塞米諾的血漿濃度達到10 μ M至20 μ Μ。更具體而言，所述方法可包括施用有效量的治療劑，例如地塞米諾或其衍生物， 所述有效量足以使治療劑的血漿濃度達到至少10 μ Μ，並且在患者體內維持至少2小時。我們還提供了一種同時、依次、或分別地作用於蛋白N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)、環氧合酶-2(C0X_2)、腫瘤壞死因子α (TNF-α)、核因子-κ B(NFkB)、細胞周期蛋白依賴性激酶(例如CDK2/A和CDK5/p25)、組蛋白乙醯轉移酶(HAT)和法尼基轉移酶的方法，該方法包括施用有效量的地塞米諾或其衍生物。根據本發明的另一方面，我們提供了一種包含地塞米諾或其衍生物的藥物組合物，其中，所存在的地塞米諾或其衍生物的量足以使地塞米諾的血漿濃度達到ΙΟμΜ至 20 μ Mo我們還提供了一種包含地塞米諾或其衍生物的藥物組合物，其中，地塞米諾或其衍生物的量足以使地塞米諾的血漿濃度達到至少10 μ Μ，並且在患者體內維持至少2小時。本發明預期，癌細胞可以是癌變前的、惡性的、原發的、轉移性的、或多重耐藥性的。可選的是，對癌症的治療可包括通過使有效量的地塞米諾或其衍生物與癌細胞相接觸，從而抑制癌細胞的腫瘤生成。抑制腫瘤生成還可以包括在癌細胞中誘導細胞毒性和/或細胞凋亡。此外，本發明的方法是有益的，尤其是因為與目前所使用的化療劑相比，其顯示出毒性的降低、副作用的減少和/或耐藥性的降低。可進一步預期的是，可以將第二治療劑和地塞米諾或其衍生物聯合提供至癌細胞，從而治療和/或抑制癌。第二治療劑可以包括化療劑、免疫治療劑、基因治療劑、或者放射治療劑。當根據本發明的治療方法中包含第二治療劑時，該第二治療劑可以分別、同時、 或依次與地塞米諾或其衍生物一起施用。雖然多種第二治療劑或者其它治療劑可用於與地塞米諾或其衍生物聯合使用，但是優選的是，第二治療劑或其它治療劑可選自由化療劑、免疫治療劑、基因治療劑和放射治療劑所組成的組中。本文所使用的術語「衍生物」應包括地塞米諾的任何通常已知的衍生物，例如(尤其是)溶劑化物。製備、純化和/或處理本文所述的化合物的相應溶劑化物可能是方便的或合乎需要的，其可以用於任何一種所述的用途/方法中。本文所使用的術語溶劑化物是指溶質(例如化合物或化合物的鹽)與溶劑的複合物。如果溶劑是水，則溶劑化物可以稱為水合物，例如，根據每分子底物中所存在的水分子的數量，可以為一水合物、二水合物、三水合物等。術語衍生物應尤其包括鹽。合適的地塞米諾的鹽是公知的，並且在現有技術中進行了描述。有機酸和無機酸以及鹼的鹽可以用於製備可藥用的鹽。所述酸包括但不限於氫氟酸、鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、硝酸、磷酸、檸檬酸、琥珀酸、馬來酸和棕櫚酸。所述鹼包括諸如氫氧化鈉和氫氧化銨這樣的化合物。本領域的技術人員熟知可以用於製備地塞米諾的可藥用季銨衍生物的季銨化劑。其包括但不限於碘甲烷和碘乙烷以及硫酸鹽。地塞米諾、其衍生物和/或它們的組合物本身是已知的，並且可以利用本領域技術人員已知的方法進行製備，或者可以通過商購獲得。特別是，美國專利No. 4，876，276公開了地塞米諾及其製備方法。根據本發明的另一方面，我們提供了如上文所述的地塞米諾或其衍生物的用途或者方法，其中，將地塞米諾或其衍生物以與可藥用的佐劑、稀釋劑、或載體形成的混合物的形式進行施用。根據(尤其是)待治療的癌症的性質，可以以多種方式施用地塞米諾或其衍生物。因此，可以局部、透皮、皮下、靜脈、或經口施用地塞米諾或其衍生物。我們尤其提供了地塞米諾或其衍生物的用途，或者治療方法，其包括局部施用地塞米諾或其衍生物。因此，在本發明的用途、方法和/或組合物中，可以以下形式提供化合物片劑、 膠囊、糖衣藥丸、栓劑、懸浮液、溶液、注射液(例如靜脈注射液、肌肉注射液、或腹膜內注射液)、植入劑、局部(例如透皮)製劑(例如，凝膠、乳劑、藥膏、氣霧劑、或聚合物體系)、或者吸入劑(例如氣霧劑或粉末製劑)。適合經口施用的組合物包括片劑、膠囊、糖衣藥丸、懸浮液、溶液和糖漿劑；適合對皮膚局部施用的組合物包括乳劑(例如水包油乳劑、油包水乳劑)、藥膏、 凝膠、洗劑、軟膏、潤膚劑、膠態分散體、懸浮液、乳液、油、噴霧劑、泡沫、摩絲等。適合局部施用的組合物還可以包括(例如)由脂類或專用洗滌劑製成的脂質體載體。其它的佐劑、稀釋劑、或載體的例子為用於片劑和糖衣藥丸的是填充劑，例如乳糖、澱粉、微晶纖維素、滑石和硬脂酸； 潤滑劑/助流劑，例如硬脂酸鎂和膠體二氧化矽；崩解劑，例如澱粉乙醇酸鈉和羧甲基纖維素鈉；用於膠囊的是預糊化澱粉或乳糖；用於口腔或可注射溶液或灌腸劑的是水、二醇類、醇類、甘油、植物油；用於栓劑的是天然油或氫化油，或者蠟。可以通過(例如)透皮給藥裝置或合適的媒介物，或者通過(例如)結合至緩釋膏藥的軟膏基質，來透皮施用所述的化合物或衍生物和/或它們的組合物，或者上述任何組合形式。這些裝置是有益的，這是因為與(例如)口服或靜脈注射藥物相比，它們可以延長治療期。透皮給藥裝置的例子可包括(例如)適於通過患者的皮膚釋放化合物或物質的膏藥、敷料、繃帶或石膏。本領域技術人員熟知可用於透皮遞送化合物或物質的材料和技術， 並且 GB2185187、US3249109、US3598122、US4144317、US4262003 和 US4307717 給出了示例性的透皮給藥裝置。下面僅通過實施例的方式對本發明進行說明。發明詳述實施例1用於評價地塞米諾對細胞系凋亡的作用的體外檢測試驗方法在M小時的時間點上，對3種黑素瘤細胞系(A375、G-361、^^6_4)、2種乳腺癌細胞系(MCF7、MDA-MB-231)、成纖維細胞(46BR. 1G1)、結腸癌(HCT116)、前列腺癌(PC-3)、 成膠質細胞瘤(U373)和非小細胞肺癌(NSCLC) (DMS-114)進行檢測。在37°C、5%溼CO2的條件下，在包含10% (ν/ν)加熱滅活的胎牛血清(得自英國的Sigma公司)和2mM L-穀氨酸的RPMI 1640培養基(得自英國的Sigma公司) 中，對上述細胞系進行培養。收集、洗滌細胞，將其重懸於生長培養基中，並進行計數 (Beckman-Coulter Vi-CELL XR)。以 1. 6 X IO5 細胞 /ml 至 2. 4X IO5 細胞 /ml 的濃度、 12. 5 μ 1/孔的等分試樣，將細胞鋪在384組織培養板的中間的240個孔中。向外周的孔中等份加入50 μ 1生長培養基。每種細胞系準備2板。在37°C、5%溼CO2的條件下將上述細胞板培養過夜。在生長培養基中製備2倍於檢測終濃度(125μΜ、31.3μΜ、7. 81μΜ、2. ΟΟμΜ、 0· 49 μ Μ、0· 12 μ Μ、0· 031 μ M和0. 008 μ Μ)的地塞米諾(DMS0的濃度在此稀釋梯度內保持恆定，為 0.5% )。使用順氯氨鉬作為陽性對照。檢測終濃度為10μ g/ml、2. 5μ g/ml、0. 63μ g/ml、 0. 156μ g/ml、0. 039 μ g/ml、0. 010μ g/ml、0. 002 μ g/ml 和 0. 0006μ g/ml。以每孔 12. 5μ 1 向板中加入地塞米諾或順氯氨鉬稀釋液，做6個重複。將12. 5 μ 1生長培養基加入培養基對照孔中。在37°C、5%溼(X)2的條件下將上述細胞板孵育M小時。使用Apo-ONE 均質半胱天冬蛋白酶-3/7檢測試劑盒檢測半胱天冬蛋白酶3/7 的水平。在加入半胱天冬蛋白酶底物1小時、2小時、3小時和4小時之後，利用FlexStation II384酶標儀檢測螢光。將上述4個時間點的讀板結果用於分析。使用CellTiter-Blue (Promega)試劑，在同一個板上對每種細胞系進行細胞存活性檢測平行實驗。簡言之，每孔加入25 μ 1 CellTiter-Blue (Promega)試劑。以500rpm震蕩細胞板1分鐘，之後將其在37°C、5% CO2中孵育4小時。禾Ij用FlexStation H384酶標儀 (激發波長570nm，發射波長600nm，截止波長590nm)檢測螢光。在同一個圖表中疊加顯示地塞米諾和順氯氨鉬的細胞毒性效應。結果圖 1-10 分別示出了 A375、G-361、W1C66-4、MCF7、MDA-MB-231、46BR· IGl、HCTl 16、 PC-3、U373和DMS-114細胞與順氯氨鉬或者地塞米諾共孵育M小時之後的凋亡誘導結果， 並且在表1中對該結果進行了總結。此外，還示出了細胞存活性的評價結果，其是採用顯示細胞毒性的CellTiter-Blue 檢測來進行檢測的。順氯氨鉬被用作陽性對照，除U373MG和MDA-MB231 (其顯示出了一定程度的對細胞毒性反應的抗性)以外，在所有細胞系中均觀察到了細胞毒性反應，其IC5tl值大約為 5-20 μ g/ml 0在DMS 114細胞和PC3細胞中觀察到不充分的劑量響應，因此不能夠確定它們的IC5tl值。由於不充分的劑量曲線(6-361、麗沈6-4和PC3)或者差的半胱天冬蛋白酶 3/7誘導結果(MDA-MB231、MCF-7、HCT116、DMS114和U373MG)，因此不易於對凋亡的誘導進行量化。總體而言，三種黑素瘤細胞系(A375、G-361和WM266-4)、結腸癌細胞系(HCT116) 以及成纖維細胞系G6BrlGl)對順氯氨鉬的細胞毒性效應最敏感，其誘導了凋亡的增加以及細胞存活性的降低。地塞米諾在大多數細胞系中誘導了細胞毒性反應，其IC5tl值在10-25 μ M的範圍內。由於不充分的劑量響應曲線(A375、G-361、PC3、46Br. IGl和DMS-114)或者不響應的細胞(MCF-HCT116和U373MG)，因此對所有的細胞系均未進行凋亡誘導的量化。凋亡的峰值響應發生在2. 5 μ M，並且在最高濃度為10 μ M時下降，這可能是由於細胞的溶解和損失造成的。總體而言，三種黑素瘤細胞系(A375、G-361和WlC66-4)、2種乳腺癌細胞系(MDA-MB231 和MCF7)以及前列腺癌細胞系(PC3M)對地塞米諾最敏感，而DMS 114和U373最不敏感。表1 結果數據總結
權利要求
1.一種治療劑，其能夠同時、依次、或分別地直接或間接地作用於以下蛋白 N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)；環氧合酶-2(C0X_2)；腫瘤壞死因子α (TNF- α )；核因子-K B(NFk B)；細胞周期蛋白依賴性激酶，例如⑶K2/A和⑶K5/p25 ；組蛋白乙醯轉移酶 (HAT)；和法尼基轉移酶。
2.根據權利要求1所述的治療劑，其中，所述治療劑為地塞米諾或其衍生物。
3.根據權利要求1或2所述的治療劑，其用於癌細胞的凋亡，其中，所述癌細胞選自原發癌、乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、非小細胞肺癌、成膠質細胞瘤、淋巴瘤、間皮瘤、肝癌、肝內膽管癌、食道癌、胰腺癌、胃癌、喉癌、腦癌、卵巢癌、睪丸癌、宮頸癌、口腔癌、咽癌、腎癌、甲狀腺癌、子宮癌、膀胱癌、肝細胞癌、甲狀腺腫瘤、骨肉瘤、小細胞肺癌、白血病、骨髓瘤、胃腫瘤和轉移癌中的一種或多種。
4.根據前述任意一項權利要求所述的治療劑，其用於癌細胞的凋亡，其中，所述癌細胞選自胰腺癌、成膠質細胞瘤、胃腫瘤、食道癌、卵巢癌、腎癌和甲狀腺腫瘤中的一種或多種。
5.根據權利要求1至3中任意一項所述的治療劑，其用於癌細胞的凋亡，其中，所述癌細胞選自原發癌、乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、非小細胞肺癌、成膠質細胞瘤、淋巴瘤和轉移癌中的一種或多種。
6.地塞米諾或其衍生物，其用於使患者的癌凋亡，其中，所述癌細胞選自原發癌、乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、非小細胞肺癌、成膠質細胞瘤、淋巴瘤、間皮瘤、肝癌、肝內膽管癌、食道癌、胰腺癌、胃癌、喉癌、腦癌、卵巢癌、睪丸癌、宮頸癌、口腔癌、咽癌、腎癌、甲狀腺癌、子宮癌、膀胱癌、肝細胞癌、甲狀腺腫瘤、骨肉瘤、小細胞肺癌、白血病、骨髓瘤、胃腫瘤和轉移癌中的一種或多種。
7.根據權利要求6所述的地塞米諾或其衍生物，其用於癌細胞的凋亡，其中，所述癌細胞選自胰腺癌、成膠質細胞瘤、胃腫瘤、食道癌、卵巢癌、腎癌和甲狀腺腫瘤中的一種或多種。
8.根據權利要求6所述的地塞米諾或其衍生物，其中，所述癌細胞選自原發癌、乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、非小細胞肺癌、成膠質細胞瘤、淋巴瘤和轉移癌中的一種或多種。
9.根據權利要求6至8中任意一項所述的地塞米諾或其衍生物，其具有足以使癌細胞凋亡的治療有效量。
10.根據權利要求6至9中任意一項所述的地塞米諾或其衍生物，其中，所述地塞米諾或其衍生物同時、依次、或分別地直接或間接地作用於以下蛋白Ν-甲基-D-天冬氨酸 (NMDA)；環氧合酶-2(C0X_2)；腫瘤壞死因子α (TNF- α )；核因子-κ B (NF κ B)；細胞周期蛋白依賴性激酶，例如⑶Κ2/Α和⑶Κ5/ρ25 ；組蛋白乙醯轉移酶(HAT)；和法尼基轉移酶。
11.根據權利要求6至10中任意一項所述的地塞米諾或其衍生物，其包括具有治療有效量的地塞米諾或其衍生物，所述治療有效量足以抑制癌細胞的腫瘤生成。
12.根據權利要求6至11中任意一項所述的地塞米諾或其衍生物，其與另外的治療癌症的治療劑組合。
13.根據權利要求12所述的地塞米諾或其衍生物，其與另外的治療癌症的治療劑組合，其中，所述另外的治療癌症的治療劑適於抑制腫瘤生成、抑制細胞增殖、或者誘導細胞毒性。
14.根據權利要求6至11中任意一項所述的地塞米諾或其衍生物，其中，待治療的所述的癌是癌變前的、惡性的、轉移性的、或者是多重耐藥性的，以及它們的組合。
15.根據權利要求14所述的地塞米諾或其衍生物，其中，所述癌症為一種或多種轉移癌。
16.一種治療癌症的方法，其中所述方法包括使癌凋亡，其包括施用治療有效量的製劑，該製劑能夠同時、依次、或分別地直接或間接地作用於以下蛋白N-甲基-D-天冬氨酸 (NMDA)；環氧合酶-2(C0X_2)；腫瘤壞死因子α (TNF- α )；核因子-κ B (NF κ B)；細胞周期蛋白依賴性激酶，例如CDK2/A和CDK5/p25 ；組蛋白乙醯轉移酶(HAT)；和法尼基轉移酶；其中，所述癌細胞選自原發癌、乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、非小細胞肺癌、成膠質細胞瘤、淋巴瘤、間皮瘤、肝癌、肝內膽管癌、食道癌、胰腺癌、胃癌、喉癌、腦癌、卵巢癌、睪丸癌、宮頸癌、 口腔癌、咽癌、腎癌、甲狀腺癌、子宮癌、膀胱癌、肝細胞癌、甲狀腺腫瘤、骨肉瘤、小細胞肺癌、白血病、骨髓瘤、胃腫瘤和轉移癌中的一種或多種。
17.根據權利要求16所述的方法，其用於癌細胞的凋亡，其中所述癌細胞選自胰腺癌、 成膠質細胞瘤、胃腫瘤、食道癌、卵巢癌、腎癌和甲狀腺腫瘤中的一種或多種。
18.根據權利要求16所述的方法，其中，所述癌細胞選自原發癌、乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、非小細胞肺癌、成膠質細胞瘤、淋巴瘤和轉移癌中的一種或多種。
19.根據權利要求16至18中任意一項所述的方法，所述方法包括施用單一的治療劑， 所述治療劑用於同時、依次、或分別地直接或間接地作用於以下蛋白Ν-甲基-D-天冬氨酸 (NMDA)；環氧合酶-2(C0X_2)；腫瘤壞死因子α (TNF- α )；核因子-κ B (NF κ B)；細胞周期蛋白依賴性激酶，例如⑶Κ2/Α和⑶Κ5/ρ25 ；組蛋白乙醯轉移酶(HAT)；和法尼基轉移酶。
20.根據權利要求16至19中任意一項所述的方法，其中，所述方法包括對需要這種治療的患者施用治療有效量的地塞米諾或其衍生物。
21.根據權利要求20所述的方法，其中，所述方法包括施用足以抑制癌細胞的腫瘤生成的治療有效量的地塞米諾或其衍生物。
22.根據權利要求20所述的方法，其中，所述方法包括施用足以在癌細胞中誘導細胞毒性的治療有效量的地塞米諾或其衍生物。
23.根據權利要求17所述的方法，其中，所述方法包括施用地塞米諾或其衍生物，其中，對患者施用的量足以使地塞米諾的血漿濃度達到10 μ M至20 μ Μ。
24.根據權利要求17所述的方法，其中，所述方法包括施用有效量的地塞米諾或其衍生物，其足以使治療劑的血漿濃度達到至少10 μ Μ，並且在患者體內維持至少2小時。
25.根據權利要求14或17所述的方法，其中，所述癌細胞是癌變前的、惡性的、轉移性的、或者多重耐藥性的、以及它們的組合。
26.根據權利要求17所述的方法，所述方法包括將地塞米諾或其衍生物分別、同時或者依次地與另外的治療癌症的治療劑或其衍生物聯合施用。
27.根據權利要求23所述的方法，其中聯合施用另外的治療癌症的治療劑，其中，所述另外的治療癌症的治療劑適於抑制腫瘤生成、抑制細胞增殖、或者誘導細胞毒性。
28.根據權利要求23所述的方法，其中，所述另外的治療劑包括化療劑、免疫治療劑、 基因治療劑或者放射治療劑。
29.一種方法，該方法同時、依次、或分別地直接或間接地作用於以下蛋白Ν-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)；環氧合酶-2 (C0X-2)；腫瘤壞死因子α (TNF- α )；核因子-K B(NFk B)；細胞周期蛋白依賴性激酶，例如⑶K2/A和⑶K5/p25 ；組蛋白乙醯轉移酶 (HAT)；和法尼基轉移酶；所述方法包括施用有效量的地塞米諾或其衍生物。
30.根據權利要求17所述的方法，其中，所述地塞米諾或其衍生物是經局部、透皮、皮下、靜脈、或口腔施用的。
31.根據權利要求27所述的方法，其中，所述地塞米諾或其衍生物是經局部施用的。
32.地塞米諾或其衍生物在製備用於使患者的癌凋亡的藥物中的用途，其中，所述癌細胞選自原發癌、乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、非小細胞肺癌、成膠質細胞瘤、淋巴瘤、間皮瘤、 肝癌、肝內膽管癌、食道癌、胰腺癌、胃癌、喉癌、腦癌、卵巢癌、睪丸癌、宮頸癌、口腔癌、咽癌、腎癌、甲狀腺癌、子宮癌、膀胱癌、肝細胞癌、甲狀腺腫瘤、骨肉瘤、小細胞肺癌、白血病、 骨髓瘤、胃腫瘤和轉移癌中的一種或多種。
33.根據權利要求32所述的用途，其中，所述癌細胞選自胰腺癌、成膠質細胞瘤、胃腫瘤、食道癌、卵巢癌、腎癌和甲狀腺腫瘤中的一種或多種。
34.根據權利要求32所述的用途，其中，所述癌細胞選自原發癌、乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、非小細胞肺癌、成膠質細胞瘤、淋巴瘤和轉移癌中的一種或多種。
35.根據權利要求32至34中任意一項所述的用途，其中，對患者施用的地塞米諾或其衍生物的量足以使地塞米諾的血漿濃度達到10 μ M至20 μ Μ。
36.根據權利要求四所述的用途，其中，地塞米諾或其衍生物的量足以使治療劑的血漿濃度達到至少10 μ Μ,並且在患者體內維持至少2小時。
37.一種包含地塞米諾或其衍生物的藥物組合物，其中，所存在的地塞米諾或其衍生物的量足以使地塞米諾的血漿濃度達到10 μ M至20 μ Μ。
38.一種包含地塞米諾或其衍生物的藥物組合物，其中，地塞米諾或其衍生物的量足以使地塞米諾的血漿濃度達到至少10 μ Μ,並且在患者體內維持至少2小時。
39.參照所附實施例，基本上如上文所述的化合物、方法、組合物、或其用途。
全文摘要
本發明描述了一種治療劑，其能夠同時、依次、或分別地直接或間接地作用於以下蛋白N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)、環氧合酶-2(COX-2)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、核因子-κB(NFκB)、細胞周期蛋白依賴性激酶(例如，CDK2/A和CDK5/p25)、組蛋白乙醯轉移酶(HAT)和法尼基轉移酶。本發明尤其描述了作為治療劑的地塞米諾，或其衍生物。
文檔編號A61P35/00GK102573833SQ201080040220
公開日2012年7月11日 申請日期2010年9月10日 優先權日2009年9月10日
發明者菲利普·麥基翁, 馬爾科姆·菲利普·揚 申請人:e-生物有限公司