一種副乾酪乳桿菌、製劑及其在豬飼料中的應用的製作方法

2024-04-04 13:41:05

本發明涉及生物飼料
技術領域：
，具體涉及一種副乾酪乳桿菌、製劑及其在豬飼料中的應用。
背景技術：
：在養豬生產中，母豬承擔著繁殖仔豬和哺乳仔豬的重要任務，利用年限長，發揮作用大。但規模化豬場的母豬，常常出現便秘、食慾下降、產仔性能差、泌乳量少、仔豬成活率低等問題，嚴重影響養殖場的生產成績和經濟效益。乳酸菌具有調控動物腸道微生態平衡、促進營養物質消化吸收和促進機體健康的作用，合理飼用，可望提高母豬的綜合生產能力。副乾酪乳桿菌(lactobacillusparacasei)是乳酸桿菌屬(lactobacillus)中的種群之一，常應用於乳製品、保健食品、飲料、冰淇淋等生產。近幾年，農業部《飼料添加劑品種目錄(2013)》允許副乾酪乳桿菌應用於動物養殖，推動了在飼料養殖方面的應用。然而，有關副乾酪乳桿菌製劑、及其製備方法及在飼料養殖中的先進技術比較少，公開號為cn103070287a的專利申請「副乾酪乳桿菌發酵飼料及其製備方法、發酵設備和用途」，公開了副乾酪乳桿菌液體發酵和副乾酪乳桿菌固體發酵步驟，發酵飼料可減少斷奶仔豬腹瀉率、提高豬生長速度、改善飼料轉化利用效率；公開號為cn103039699b的專利申請「一種混合菌發酵飼料及其製備和應用方法」，公開了採用副乾酪乳桿菌cicc20296、枯草芽孢桿菌accc10619和釀酒酵母cicc32236，分別進行液體發酵培養，發酵液按體積比1:1:1混合後，再進行固體發酵培養，按一定比例添加到斷奶仔豬飼料中，提高了斷奶仔豬生產性能。以上專利中涉及的副乾酪乳桿菌主要用於發酵飼料的製備，其製備過程需要有發酵設備，發酵過程耗費的時間較長，生產操作較為繁瑣，目前尚未有涉及副乾酪乳桿菌的凍幹製劑製備方法，也沒有涉及到質量穩定的凍幹製劑直接按比例添加於飼料中且能提高母豬繁殖性能的方法。技術實現要素：本發明的一個目的在於針對生產實踐中的實際問題和需求，開發研製出一種新型的副乾酪乳桿菌，該副乾酪乳桿菌具有較強的耐酸、耐膽鹽和抑制有害細菌等特性。本發明的另一個目的在於提供由該副乾酪乳桿菌製備得到的副乾酪乳桿菌製劑及其製備方法。本發明的又一個目的在於提供所述副乾酪乳桿菌按比例直接添加到豬飼料中的應用。為實現本發明第一個目的提供一種副乾酪乳桿菌菌株，從健康仔豬中篩選出一株性能優良的副乾酪乳桿菌菌株，將該副乾酪乳桿菌菌株於2015年10月22日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵政編碼：100101)進行保藏，菌株名稱為副乾酪乳桿菌(lactobacillusparacasei)zlp019，保藏編號為：cgmccno.11532。所述副乾酪乳桿菌(lactobacillusparacasei)zlp019(cgmccno.11532)為革蘭氏陽性桿菌，單個或成對排列，無芽孢。在mrs平板培養基上菌落為乳白色不透明，圓形，隆起，邊緣整齊。本發明提供的副乾酪乳桿菌(lactobacillusparacasei)zlp019(cgmccno.11532)除具有上述生長特徵之外，還具有耐酸、耐膽鹽和抑菌特性，具體如下:1)所述副乾酪乳桿菌在ph＝2的環境中作用2小時的存活率為97.58％，4小時的存活率為76.22％，在ph為3和4的酸性環境中作用2小時的存活率達99％以上，4小時的存活率達85％以上。2)所述副乾酪乳桿菌在0.1％和0.2％的膽鹽環境中，37℃孵育3h，存活率分別為82.25％和56.08％。3)所述副乾酪乳桿菌對3種豬常見致病菌，如大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等有較強的抑制作用，抑菌圈直徑在17～27mm。本發明的第二個目的提供一種豬源副乾酪乳桿菌製劑，所述製劑含有副乾酪乳桿菌(lactobacillusparacasei)zlp019，保藏號為：cgmccno.11532。其中，優選地，所述副乾酪乳桿菌(lactobacillusparacasei)zlp019的活菌數可為1×1011cfu/g及以上。如上所述的豬源副乾酪乳桿菌製劑，可作為一種飼料添加劑使用。本發明還提供所述副乾酪乳桿菌製劑的製備方法，其為在液體發酵培養基中發酵副乾酪乳桿菌zlp019，將所述發酵液進行離心、乳化凍幹，製備成的凍乾粉為副乾酪乳桿菌製劑。優選地，所述的製備方法可具體包括如下步驟：(1)發酵培養：以1％的接種量將所述副乾酪乳桿菌zlp019接種於mrs液體培養基中，37℃培養16～24小時，如此活化2代後得到種子培養物；將種子培養物以1％的接種量接種於裝有液體培養基的發酵罐中，設定溫度37℃、轉速100rpm，維持恆定ph5.5，當發酵至14小時時開始補料，加入補料液，之後每隔2小時進行一次，共補料5次；當發酵液ph不再降低時，終止發酵，得到發酵液；(2)發酵液離心：將上述得到的發酵液離心，得到菌泥；(3)乳化凍幹：將步驟(2)得到的菌泥與1/3所述發酵液體積的凍幹保護劑混合，高剪切分散乳化機乳化後，分裝於冷凍盤中，厚度1.5～2.5cm，預凍3小時，設置真空冷凍乾燥機冷凝溫度-50℃、真空度10pa，凍幹24小時後，即得含副乾酪乳桿菌的凍幹製劑。優選地，所述液體培養基由如下濃度的物質組成：葡萄糖30g/l，蛋白腖10g/l，牛肉膏10g/l，乙酸鈉5g/l，酵母浸粉10g/l，k2hpo4·3h2o2g/l，檸檬酸氫二銨2g/l，mgso4·7h2o0.5g/l，mnso40.2g/l，吐溫-801ml/l，ph6.5，121℃滅菌15min備用。所述補料液為葡萄糖溶液，濃度為300g/l。優選地，所述凍幹保護劑為含有質量百分比濃度分別為14％的脫脂乳、8％的海藻糖、5％的糊精、1.5％的l-半胱氨酸、1％的穀氨酸鈉、0.5％的羧甲基纖維素鈉，其餘為水。本發明還提供了上述製備的豬源副乾酪乳桿菌製劑作為添加劑在飼料中的應用。優選地，應用於豬飼料中，更優選地，用於妊娠後期和哺乳階段母豬的飼料中。進一步，所述應用為在基礎日糧中添加副乾酪乳桿菌zlp019製劑，所述副乾酪乳桿菌zlp019在每千克母豬全價料中的活菌數為2×109cfu。本發明還提供了一種凍幹保護劑，其含有質量百分比濃度分別為14％的脫脂乳、8％的海藻糖、5％的糊精、1.5％的l-半胱氨酸、1％的穀氨酸鈉、0.5％的羧甲基纖維素鈉、70％的水。本發明的有益效果為：本發明的副乾酪乳桿菌(lactobacillusparacasei)zlp019，cgmccno.11532，具有良好的耐酸、耐膽鹽和抑菌特性。由該菌製成的凍幹製劑，可以直接作為添加劑添加到妊娠後期和哺乳階段的母豬飼料中，副乾酪乳桿菌zlp019在哺乳母豬全價飼料中的活菌數為2×109cfu/kg，哺乳母豬平均日採食量提高4.48％，便秘率降低8.51個百分點；哺乳仔豬平均日增重提高8.90％，斷奶成活率提高8.65個百分點，腹瀉率降低31.92個百分點；母豬糞便中有害細菌，如大腸桿菌數、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌的活菌數顯著減少。由此可見，副乾酪乳桿菌zlp019飼餵妊娠後期和哺乳階段的母豬，能夠提高母豬的繁殖性能，提高哺乳仔豬的日增重和斷奶成活率，還可減少糞便中有害細菌排放，有利於養殖環境友好。附圖說明圖1為副乾酪乳桿菌zlp019的菌落形態。圖2為副乾酪乳桿菌zlp019的16srrna基因進化樹圖譜。圖3為副乾酪乳桿菌zlp019的phes基因進化樹圖譜。圖4為副乾酪乳桿菌zlp019的生長曲線。具體實施方式下面結合實施例詳細介紹本發明，應理解，本發明要求保護的範圍不受所述具體實施方案的限制，本發明提供的具體實施例僅作為進一步說明本發明的例子，本領域技術人員參照本案說明書的描述對本發明的具體實施方式進行修改或者對部分技術特徵進行等同替換，這些無需創造性勞動的改進和替換也應落入本發明所附權利要求書的保護範圍之內。若未特別說明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規技術手段。實施例1副乾酪乳桿菌的分離篩選與鑑定選擇健康保育豬宰殺，無菌操作取出腸道、刮取腸黏膜，與無菌生理鹽水混勻，十倍稀釋至10-5、10-6、10-7，各取0.1ml塗布於mrs平板培養基上，厭氧罐法37℃培養24～48小時。從中挑取乳白色菌落進行初步篩選，凡是革蘭氏染色陽性、h2o2酶試驗陰性、接觸酶陰性的菌株可初步確定為乳酸菌，將初篩得到的菌株進行耐酸耐膽鹽、抑菌等特性分析試驗，最終篩選出一株性能優良的乳酸菌菌株zlp019，送至中國普通微生物菌種保藏中心(cgmcc)進行鑑定，經細胞形態學特徵、生理生化特性、16srrna序列和phes基因序列等試驗數據綜合分析表明，該菌鑑定為lactobacillusparacasei。zlp019為革蘭氏陽性桿菌，單個或成對排列，無芽孢。其在mrs平板培養基上的菌落特徵如附圖1所示，為乳白色不透明，圓形，隆起，邊緣整齊。該菌生理生化特性的鑑定結果見表1，16srrna基因序列如seqidno.1所示，phes基因序列如seqidno.2所示。通過對該菌的16srrna基因進行進化樹分析，其進化樹圖譜如圖2所示；對該菌的phes基因進行進化樹分析，其進化樹圖譜如圖3所示。上述結果表明，本發明提供的副乾酪乳桿菌(lactobacillusparacasei)zlp019不同於現有副乾酪乳桿菌，為新菌株。表1副乾酪乳桿菌zlp019的生理生化特徵實驗項目結果實驗項目結果實驗項目結果甘油-肌醇-菊糖+赤蘚醇-甘露醇+松三糖+d-阿拉伯糖-山梨醇+棉子糖-l-阿拉伯糖-α-甲基-d-甘露糖甙-2-酮基-葡萄糖酸鹽-d-核糖+α-甲基-d-葡萄糖甙-β-甲基-木糖甙-d-木糖-n-甲醯-葡糖胺+木糖醇-l-木糖-苦杏仁甙+阿東醇-糖原-熊果甙+d-松二糖+d-半乳糖+七葉靈+d-來蘇糖-d-葡萄糖+纖維二糖+d-塔格糖+d-果糖+麥芽糖+d-巖藻糖-d-甘露糖+乳糖-l-巖藻糖-l-山梨糖-蜜二糖-d-阿拉伯糖醇-l-鼠李糖-蔗糖+l-阿拉伯糖醇-衛矛醇+海藻糖+澱粉-註：:「+」，呈陽性；「-」，呈陰性。將該副乾酪乳桿菌菌株於2015年10月22日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵政編碼：100101)進行保藏，菌株名稱為副乾酪乳桿菌(lactobacillusparacasei)zlp019，保藏編號為cgmccno.11532。其中，mrs固體培養基配方：蛋白腖1g，牛肉膏1g，酵母膏0.5g，檸檬酸氫二胺0.2g，葡萄糖2g，k2hp040.2g，乙酸鈉0.2g，吐溫-800.1ml，硫酸鎂0.058g，硫酸錳0.02g，瓊脂2g，水100m1，ph6-6.5，121℃高壓滅菌15min。實施例2副乾酪乳桿菌的特性研究1、副乾酪乳桿菌的生長曲線將活化的實施例1獲得的副乾酪乳桿菌以1％的接種量接入mrs液體培養基，採用全自動微生物生長曲線分析儀檢測od600值，繪製生長曲線，其結果如圖2所示，其中橫坐標為培養時間，單位為小時，縱坐標為吸光度od600值。實驗結果表明，副乾酪乳桿菌在mrs培養基中生長迅速，在4h左右進入對數期，11h左右進入穩定期。2、耐酸性能測定將活化的副乾酪乳桿菌按1％接種量分別接入到ph為2、3和4的mrs液體培養基中，分別37℃保溫2、4和6h，以0h為對照，測定活菌數，計算存活率，結果見表2。表2副乾酪乳桿菌耐酸性能(％)結果說明，此副乾酪乳桿菌在ph＝2的酸性環境中作用2h的存活率為97.58％，4小時的存活率為76.22％；在ph為3和4的酸性環境中作用2小時的存活率均達到99％以上，作用4小時的存活率均達到85％以上。說明該副乾酪乳桿菌具有很強的耐酸性，能夠很好的耐受動物的胃酸環境。2、耐膽鹽性能測定將活化的副乾酪乳桿菌按1％接種量分別接入到含有0.1％、0.2％和0.3％豬膽鹽的mrs液體培養基中，37℃保溫3、6h，以0h的活菌數為對照，計算存活率，結果見表3。表3副乾酪乳桿菌耐膽鹽性能測定(％)結果說明，此菌在0.1％膽鹽環境中作用3h，其存活率為82.25％；在0.2％膽鹽的環境中作用3h，其存活率為56.08％；在0.3％的膽鹽濃度下作用3h，其存活率僅為10.47％。說明該副乾酪乳桿菌對於0.1％的膽鹽具有較高的耐受性。3、抑菌試驗採用牛津杯法，檢測副乾酪乳桿菌發酵液對3種常見的豬致病菌的抑菌效果，結果見表4。表4副乾酪乳桿菌抑菌試驗由結果可以看出，該乳酸菌對這3種有害細菌：大腸桿菌(c838901，可購自中國獸醫藥品監察所)、霍亂沙門氏菌(c78-4，可購自中國獸醫藥品監察所)、金黃色葡萄球菌(c56023，可購自中國獸醫藥品監察所)具有較強的抑制作用，抑菌圈直徑達到17～27mm。4、藥敏試驗對副乾酪乳桿菌進行了26種抗生素(oxoid藥敏紙片)的藥敏試驗，結果見表5。表5副乾酪乳桿菌藥敏試驗註：s為敏感；i為中度敏感；r為耐藥。由表5可以看出，該菌對氨苄西林、四環素、阿莫西林、阿奇黴素、多粘菌素e、頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢曲松、恩諾沙星、阿米卡星、慶大黴素、克林黴素、利福平、氟苯尼考、氯黴素等敏感，對氧氟沙星中度敏感，對新諾明、紅黴素、桿菌肽、頭孢氨苄、頭孢唑肟、環丙沙星、諾氟沙星、卡那黴素、鏈黴素、制黴菌素等抗生素有耐藥性。實施例3副乾酪乳桿菌製劑的製備1、副乾酪乳桿菌的發酵培養將實施例1得到的副乾酪乳桿菌(lactobacillusparacasei)zlp019(保藏號：cgmccno.11532)以1％的接種量接種於mrs液體培養基中，37℃培養16～24小時，如此活化2代後得到種子培養物；將種子培養物以1％的接種量接種於裝有30l液體培養基的50l發酵罐中，設定溫度37℃、轉速100rpm，維持恆定ph5.5，當發酵至14小時時開始補料，向發酵罐中一次加入200ml補料液，之後每隔2小時進行一次補料，共補料5次；當發酵液ph不再降低時，終止發酵。其中，液體培養基組成為：葡萄糖30g/l，蛋白腖10g/l，牛肉膏10g/l，乙酸鈉5g/l，酵母浸粉10g/l，k2hpo4·3h2o2g/l，檸檬酸氫二銨2g/l，mgso4·7h2o0.5g/l，mnso40.2g/l，吐溫-801ml/l，ph6.5，121℃滅菌15min備用。所述補料液為葡萄糖溶液，濃度為300g/l，115℃滅菌15min備用。2、發酵液離心將所述步驟1得到的發酵液在19000rpm條件下以管式離心機分離菌體，得到菌泥；3、凍幹製劑的製備將菌泥與1/3發酵液體積的凍幹保護劑混合，採用高剪切分散乳化機3000r/min乳化30min後進行凍幹，即得副乾酪乳桿菌凍幹製劑。其中，凍幹條件為將乳化後的菌懸液分裝於冷凍盤中，厚度1.5～2.5cm，預凍3小時，設置冷凝溫度-50℃、真空度10pa，凍幹時間24小時。其中，凍幹保護劑由如下質量百分比濃度的物質組成：脫脂乳14％、海藻糖8％、糊精5％、l-半胱氨酸1.5％、穀氨酸鈉1％、羧甲基纖維素鈉0.5％，其餘為水。用此配方，副乾酪乳桿菌的凍幹保護率可達88.20％。其中，凍幹保護率計算公式為：凍幹保護率(％)＝(凍幹後菌粉活菌數×凍幹後菌粉重量)/(凍幹前菌懸液活菌數×凍幹前菌懸液體積)×100。取製備好的副乾酪乳桿菌凍幹製劑，用無菌生理鹽水進行梯度稀釋後，採用mrs平板培養基培養測活菌數，測得凍乾粉中副乾酪乳桿菌的活菌數為1.20×1011cfu/g。4、副乾酪乳桿菌凍幹製劑貯存穩定性測定將上述製備的副乾酪乳桿菌凍幹製劑用鋁箔袋真空包裝，-18℃保存1個月、6個月、12個月後，取菌粉用無菌生理鹽水進行梯度稀釋後，採用mrs平板培養基測活菌數。由表6可知，副乾酪乳桿菌凍幹製劑低溫保存12個月後，活菌存活率仍可達到83.66％，製劑質量穩定。表6副乾酪乳桿菌凍幹製劑貯存性能測定實施例4副乾酪乳桿菌製劑在母豬生產中的應用1、試驗動物與分組選用健康、胎次相近、妊娠85天的長大二元母豬100頭，隨機分成對照組和試驗組2個組，每組50個重複，每個重複1頭母豬。對照組正常飼喂，試驗組在飼餵基礎日糧基礎上添加豬源副乾酪乳桿菌凍幹製劑(全價料的活菌終濃度為2×109cfu/kg)。其中，母豬的基礎日糧參照《豬飼養標準》(2004)配製，具體營養成分實測值見表7。母豬飼養於同一棟圈舍，飼養管理和免疫程序等按豬場統一制度執行。試驗時間為母豬妊娠第85天開始，至哺乳仔豬28日齡斷奶為止。表7基礎日糧營養成分實測值(％)3、試驗管理試驗期間，每日觀察豬群生長情況，記錄飼料消耗和母豬產仔、窩重、腹瀉等；試驗結束後，每組採取10份母豬新鮮糞樣，測定糞中乳酸菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌等的活菌數。數據統計採用spss18.0統計軟體進行單因素方差分析，結果以平均值±標準差表示。4、結果與分析4.1豬源副乾酪乳桿菌製劑對母豬繁殖性能的試驗結果見表8。表8豬源副乾酪乳桿菌製劑對母豬繁殖性能的影響註：同肩標註不同代表差異顯著，小寫字母不同表示差異顯著(p<0.05)。與對照組相比，試驗組仔豬出生個體重提高了7.01％(p<0.05)，斷奶個體重提高了8.33％(p<0.05)，斷奶成活率提高了8.65個百分點(p<0.05)，哺乳仔豬日增重提高了8.90％(p<0.05)，哺乳母豬日採食量提高了4.48％(p<0.05)，哺乳仔豬腹瀉率降低了31.92個百分點，哺乳母豬便秘率降低了8.51個百分點。由此可見，豬源副乾酪乳桿菌製劑飼餵妊娠後期和哺乳階段的母豬，能夠提高母豬繁殖性能，促進仔豬健康和成活率提高。4.2豬源副乾酪乳桿菌製劑對哺乳母豬糞便微生物的影響結果9。表9豬源副乾酪乳桿菌製劑對哺乳母豬糞便微生物的影響註：同肩標註不同代表差異顯著，小寫字母不同表示差異顯著(p<0.05)。由表9可知，與對照組相比，試驗組母豬糞便中乳酸菌數顯著提高(p<0.05)，大腸桿菌數和沙門氏菌數顯著減少(p<0.05)。由此可見，豬源副乾酪乳桿菌製劑飼餵母豬，能夠降低糞便中的有害細菌，對腸道健康和養殖環境改善有積極作用。綜上，本副乾酪乳桿菌製劑飼餵妊娠後期和哺乳階段的母豬，能夠提高母豬的繁殖性能，提高哺乳仔豬的日增重和斷奶成活率，促進母豬腸道健康，減少糞便中的有害菌排放，有利於養殖環境友好。sequencelisting北京市農林科學院一種副乾酪乳桿菌、製劑及其在豬飼料中的應用2patentinversion3.511401dna副乾酪乳桿菌（lactobacillusparacasei）zlp019的16srrna基因片段1ttgatgatcggtgcttgcaccgagattcaacatggaacgagtggcggacgggtgagtaac60acgtgggtaacctgcccttaagtgggggataacatttggaaacagatgctaataccgcat120agatccaagaaccgcatggttcttggctgaaagatggcgtaagctatcgcttttggatgg180acccgcggcgtattagctagttggtgaggtaatggctcaccaaggcgatgatacgtagcc240gaactgagaggttgatcggccacattgggactgagacacggcccaaactcctacgggagg300cagcagtagggaatcttccacaatggacgcaagtctgatggagcaacgccgcgtgagtga360agaaggctttcgggtcgtaaaactctgttgttggagaagaatggtcggcagagtaactgt420tgtcggcgtgacggtatccaaccagaaagccacggctaactacgtgccagcagccgcggt480aatacgtaggtggcaagcgttatccggatttattgggcgtaaagcgagcgcaggcggttt540tttaagtctgatgtgaaagccctcggcttaaccgaggaagcgcatcggaaactgggaaac600ttgagtgcagaagaggacagtggaactccatgtgtagcggtgaaatgcgtagatatatgg660aagaacaccagtggcgaaggcggctgtctggtctgtaactgacgctgaggctcgaaagca720tgggtagcgaacaggattagataccctggtagtccatgccgtaaacgatgaatgctaggt780gttggagggtttccgcccttcagtgccgcagctaacgcattaagcattccgcctggggag840tacgaccgcaaggttgaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcat900gtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttaccaggtcttgacatctttttgatcacc960tgagagatcaggtttccccttcgggggcaaaatgacaggtggtgcatggttgtcgtcagc1020tcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttatgactagttgcc1080cagcatttagttgggcactctagtaagactgccggtgacaaaccggaggaaggtggggat1140gacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgtgctacaatggatggtac1200aacgagttgcgagaccgcgaggtcaagctaatctcttaaagccattctcagttcggactg1260taggctgcaactcgcctacacgaagtcggaatcgctagtaatcgcggatcagcacgccgc1320ggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccatgagagtttgtaacac1380ccgaagccggtggcgtaaccc14012394dnaphes基因序列2caagtccaatgcaggcgcggacaatggaaaagcacgactttaccaaaggaccgctgaaaa60tgattagccctggggtggtttatcgacgtgatgacgacgatgctactcatagccatcagt120ttcaccagatggaaggactcgtcattgacaagcatataaccatggctgatctaaagggaa180ccttgttggccatgtgccaacacgtgtttggtaaagatcggacaattcgcttgcggccaa240gttattttccatttacggagccatccgttgaagttgatgtttcctgttttcgttgcggcg300gtaaaggttgcccggtttgcaaatataccggttggattgaagtgttaggtgccggcatgg360tgcatcccaatgtgctacgggcagcgaacattga394當前第1頁12