一種用於缺血性腦卒中後神經再生的藥物組合物及其製備方法和用途
2024-03-31 21:17:05
一種用於缺血性腦卒中後神經再生的藥物組合物及其製備方法和用途
【專利摘要】本發明涉及一種用於缺血性腦卒中後神經再生的藥物組合物及其製備方法和用途。針對目前缺血性腦血管病的化學治療藥物肝毒性較大，本發明提供一種用於缺血性腦卒中後神經再生的藥物組合物，其由如下原料製備而成：木通15份、黨參6份、石榴皮10份、文冠果殼10份、浙貝母10份、黃精20份，丹參20份、腫節風10份、川芎5份、青葙子8份、防己15份、牛蒡子7份、葛根10份、甘草10份。該藥物組合物可促進缺血性腦卒中後神經再生，從而用於治療或預防腦缺血或腦梗死。
【專利說明】一種用於缺血性腦卒中後神經再生的藥物組合物及其製備方法和用途
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種用於缺血性腦卒中後神經再生的藥物組合物，屬於醫藥領域。
【背景技術】
[0002]缺血性腦血管病(ICVD)約佔全部腦血管病的80%，具有發病率、致殘率、治病率高的特點，已經成為嚴重胃寒人類健康的疾病之一。缺血性腦血管病是腦血管病中最主要的病種之一，是局部血液循環所提供的氧及其他營養物質與神經元代謝需求之間的驟然供需不平衡，最終導致缺血中央區的神經元受損的一類疾病。短暫性腦缺血發作簡稱TIA，也稱一過性腦缺血發作或小中風，它是由於負責供應腦部血液的動脈血管短時間內供血不足，引起相應動脈負責供血的腦組織發生暫時性功能障礙。此病的主要臨床症狀常常表現為突然發作的頭暈、眼花、眩暈、耳鳴、走路不穩，嚴重時意識模糊、雙目失明或復視、單側或雙側肢體無力與感覺異常、莫名其妙地摔倒、說話不流利等。能夠引發短暫性腦缺血發作的原因頗多，諸如高血壓、高脂血症、動脈粥樣硬化、糖尿病是最主要和最常見的原因，而過度用腦，情緒激動，寒冷，勞累則可促其發生。
[0003]短暫性腦缺血發作每次犯病的時間持續不久，通常是數秒鐘、數分鐘或數小時不等，最長不超過24小時，因此容易被人忽視。實際上，短暫性腦缺血是腦血管病的先兆或危險信號，如不及時治療極易惡化發展成為嚴重腦血管病從而威脅病人生命。據統計，約有25%~40%短暫性腦缺血患者在5年內將產生嚴重的腦梗塞。因此，對短暫性腦缺血發作應當進行積極治療，降低血液粘稠度，調整血液的高凝狀態，控制和維持血壓在正常範圍內，終止和減少短暫性腦缺血發作，預防或推遲腦梗塞的發生。
[0004]腦梗塞是由於腦動脈粥樣硬化，血管內膜損傷使腦動脈管腔狹窄，進而因多種因素使局部血栓形成，使動脈狹窄加重或完全閉塞，導致腦組織缺血、缺氧、壞死，引起神經功能障礙的一種腦血管病。腦缺血和腦梗塞具有十分密切的聯繫，能夠實現對腦缺血的治療就會進一步延緩或者預防腦梗塞的發生和發展。
[0005]腦保護藥物是目前神經學界研究的熱點，各種藥物處於不同研究階段，但目前還沒有一種藥物可以對大腦保護取得公認的確切療效。目前醫學上對於腦缺血或腦梗塞的治療尚沒有特效藥物，一般臨床上建議是控制血壓，清淡飲食，並可以服用擴血管藥和活血化淤的藥或者營養腦細胞的藥物改善。但臨床實踐表明，上述藥物的治療效果並不能令人滿意，而這些藥物高昂的花費通常讓患者苦不堪言。
[0006]中醫藥在用於缺血性腦卒中後神經再生方面積累大量的中醫理論和臨床實踐。中醫認為，缺血性腦血管病是腦血管意外之一，屬於中醫的「中風病」，「中風病」為「風、癆、臌、脹」四大難症之首，是僅次於心血管疾病與癌症而位居第三位的威脅人類生命的疾病，老年人易發，並有逐漸年輕化的趨勢。缺血型中風病發作前絕大多數病人有先兆，中醫稱「中風先兆」。病人多有高血脂、高血糖、高粘血症、頸椎病等。主要病理變化是在腦動脈硬化、高脂血症、聞粘血症的基礎上，血流粘桐而緩慢，或者加上其它因素壓迫腦血管，由粘、緩、窄的共同作用，使血管內形成小血栓或血管壁形成了附壁血栓，部分阻塞或者暫短的阻塞了腦血流，造成腦組織的短時缺血、缺氧，病人表現為一過性的頭暈目眩、口角流涎、手臂麻木、下肢發軟等症狀。在「中風先兆」期及時進行防治，可預防中風病發生或者減輕患者的中風病症狀，從而降低發病率、致殘率及死亡率。傳統醫藥治療腦梗塞在昔日曾挽救了不少患者的生命，隨著西方醫學的發展，儘管傳統醫藥倍受冷遇，但一些單方和提純製劑目前仍廣泛應用於臨床，如丹參、銀杏、川芎、葛根、燈盞花等中藥製劑。中華醫學會神經病學分會於1998年建議活血化淤的中藥可用於急性缺血性腦卒中的治療，但需要更多高質量的證據應證。目前國外指南中尚無有關中醫中藥治療缺血性腦卒中的建議。
【發明內容】
[0007]針對目前醫學實踐中缺少腦缺血或腦梗塞顯效治療藥物、且藥物價格高昂的現有技術不足，本發明提供一種用於缺血性腦卒中後神經再生的藥物。該藥物以藥物組合物為主要活性成分，其用於缺血性腦卒中後神經再生時，療效顯著，成本低廉，具有良好的醫學應用前景。
[0008]針對目前缺血性腦血管病臨床治療藥物的不足，本發明的第一個目的在於提供一種用於缺血性腦卒中後神經再生的藥物組合物，該藥物組合物在治療急性缺血性腦血管病、慢性缺血性腦血管病以及過敏性缺血性腦血管病方面具有很好的治療效果。本發明所述的藥物組合物，按照重量組分計，包括如下組分:木通15份、黨參6份、石槽皮10份、文冠果殼10份、浙貝母10份、黃精20份，丹參20份、腫節風10份、川芎5份、青葙子8份、防己15份、牛蒡子7份、葛根10份、甘草10份。
[0009]作為中藥方劑，上述藥物組合物的配方可具體為:木通15克、黨參6克、石榴皮10克、文冠果殼10克、浙貝母10克、黃精20克，丹參20克、腫節風10克、川芎5克、青葙子8克、防己15克、牛蒡子7克、葛根10克、甘草10克。
[0010]另外，本發明的藥物組合物所採用的原料中，木通選擇木通科植物白木通或三葉木通的乾燥木質莖；石槽皮選擇石槽科植物石槽Punica granatum L.的乾燥果皮；文冠果殼選擇無患子科文官果屬植物文冠果Xanthoceras sorbifolia Bunge的乾燥果殼；腫節風選擇金粟蘭科植物草珊瑚Sarcandra glabra (Thunb.)Nakai的乾燥全株；青葙子選擇覓科植物青葙Celosia argentea L.的乾燥成熟種子；防己選擇防己科植物粉防己Stephaniatetrandra S.Moore的乾燥根；其他藥材按照中國藥典的來源選取中藥材。
[0011]製備本發明藥物組合物的方法如下:取上述重量組分的各藥材，加藥材總重量的5-15倍的水，浸泡10-60分鐘，煎煮1-4次，每次1-3小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮至相對密度1.05-1.25的浸膏，該相對密度是在60攝氏度下的檢測結果，加入乙醇至含醇量為60-90%( v/v )，靜置24小時，取上清液，回收乙醇，濃縮，即得。本發明上述藥物組合物可以進一步製備成臨床上常用的藥物製劑，優選為合劑、片劑、膠囊劑。
[0012]本發明實施例7藥物組合物對腦缺血模型大鼠海馬一氧化氮和一氧化氮合酶的影響實驗中，藥物組合物各治療組的NO和NOS水平均極顯著低於模型組的NO和NOS水平，且明顯低於陽性對照藥尼莫地平治療組的NO和NOS水平，提示藥物組合物可以顯著降低大鼠海馬中的過氧化物，對大腦海馬神經元具有明顯的保護作用。本發明實施例8中藥物組合物對腦缺血及其引發的腦梗塞治療結果顯示，藥物組合物不僅可以顯著降低大鼠腦缺血模型的血清MDA含量，減少自由基對大鼠腦的損傷，而且可以減小腦缺血大鼠的腦梗塞面積，可見藥物組合物對缺血性腦損傷疾病特別是腦缺血以及腦缺血引發的腦梗塞具有顯著的治療效果，且這種治療效果具有劑量依賴性。各給藥組大鼠的海馬錐體細胞的顯微鏡下照片顯示模型組大鼠海馬錐體細胞細胞核皺縮，染色深，細胞碎片多，應用藥物組合物治療後藥物組合物組對腦缺血後損傷的神經元具有保護作用，其中中藥高劑量組的神經元細胞的細胞形態和數量與模型組具有十分顯著的差異。本發明實施例8發現應用本發明藥物組合物幹預7 d後，其缺血BrdU+陽性細胞明顯增加，說明可促進內源性神經幹細胞的激活、分化、增殖，有利於缺血性損傷的神經細胞修復。該實施例還證實，本發明藥物組合物能夠激活內源性神經幹細胞，增加缺血區新生血管，改善缺血區腦供血，促進神經功能恢復。具體如下:與缺血性腦卒中組相比，陽性藥物和本發明藥物組合物均可以顯著升高BrdU+細胞數量和CD31+細胞數量，其中本發明藥物組合物在升高BrdU+細胞數量和CD31+細胞數量方面與陽性藥物組相比具有顯著性或極限著性的差異，本發明藥物組合物對於神經幹細胞的再生和腦微血管的生成體現出明顯的劑量依賴性。
[0013]因此，本發明請求保護藥物組合物用於用於缺血性腦卒中後神經再生的用途，由於現代動物福利的提高和飲食的複雜性，動物患腦血管疾病機率也明顯增加。本發明所述的用途治療對象可以為人或者動物，所述動物優選為哺乳動物。本發明所述的藥物用途中，藥物組合物用於缺血性腦卒中後神經再生時可以根據病情和藥物性質選擇合適的給藥途徑，優選為口服給藥，用於治療或預防腦缺血或腦梗塞的給藥劑型可以為本發明上述所述的藥物製劑，如合劑、片劑、膠囊劑。
[0014]本發明所述的藥物組合物用於缺血性腦卒中後神經再生時具有以下優勢:
(I)本發明藥物組合物對腦缺血或腦梗塞治療和預防效果確切，不僅可以為腦缺血或腦梗塞的治療提供一種新的用藥選擇，而且其治療效果優於陽性藥物尼莫地平，適宜推廣使用。
[0015](2)本發明藥物組合物可促進內源性神經幹細胞的激活、分化、增殖，有利於缺血性損傷的神經細胞修復。另外,本發明藥物組合物能夠激活內源性神經幹細胞，增加缺血區新生血管，改善缺血區腦供血，促進神經功能恢復。
[0016]( 3)本發明所述藥物組合物起效劑量低，並可以製備成不同的給藥劑型和給藥劑量，可以根據患者疾病的嚴重程度選用合適的給藥方案，從而可以大大提高患者的用藥依從性，提高藥物使用的長期效果。
[0017]
【具體實施方式】
[0018]以下通過【具體實施方式】進一步描述本發明，但本發明不僅僅限於以下實施例。在本發明的範圍內或者在不脫離本發明的內容、精神和範圍內，對本發明所述的藥物組合物進行適當改進、替換功效相同的組分，對於本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明的範圍之內。
[0019]實施例1中藥合劑的製備
處方:木通15克、黨參6克、石榴皮10克、文冠果殼10克、浙貝母10克、黃精20克，丹參20克、腫節風10克、川芎5克、青葙子8克、防己15克、牛蒡子7克、葛根10克、甘草10克。
[0020]製備方法:取上述重量組分的各藥材，加藥材總重量的5倍的水，浸泡30分鐘，煎煮2次，每次2小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮至相對密度1.1的浸膏，該相對密度是在60攝氏度下的檢測結果，加入乙醇至含醇量為75% (v/v)，靜置24小時，取上清液，回收乙醇濃縮，加水至1000ml,攪勻，分裝,流通蒸汽滅菌35min,即得合劑。
[0021]實施例2中藥片劑的製備
處方:木通150克、黨參60克、石榴皮100克、文冠果殼100克、浙貝母100克、黃精200克，丹參200克、腫節風100克、川芎50克、青葙子80克、防己150克、牛蒡子70克、葛根100克、甘草100克。
[0022]製備方法:取上述重量組分的各藥材，加藥材總重量的10倍的水，浸泡60分鐘，煎煮I次，每次I小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮至相對密度1.25的浸膏，該相對密度是在60攝氏度下的檢測結果，加入乙醇至含醇量為80% (v/v)，靜置24小時，取上清液，回收乙醇，濃縮，真空乾燥、制粒，壓片即得。
[0023]實施例3中藥細粉的製備
處方:木通1.5kg、黨參0.6kg、石槽皮1.0kg、文冠果殼1.0kg、浙貝母1.0kg、黃精
2.0kg,丹參2.0kg、腫節風1.0kg、川彎0.5kg、青葙子0.8kg、防己1.5kg、牛蒡子0.7kg、葛根 1.0kg、甘草 1.0kg0
[0024]製備方法:取上述重量組分的各藥材，加藥材總重量的8倍的水，浸泡45分鐘，煎煮4次，每次1.5小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮至相對密度1.2的浸膏，該相對密度是在60攝氏度下的檢測結果，加入乙醇至含醇量為90% (v/v)，靜置24小時，取上清液，回收乙醇，濃縮，真空乾燥後粉碎即可得到中藥提取物細粉，用於下述實施例4-9中片劑、膠囊劑的製備，以及用於動物試驗。
[0025]實施例4中藥片劑的製備 中藥細粉50g 澱粉 25g 糊精 35g 低取代羥丙基纖維素5g 60%乙醇適量
硬脂酸鎂Ig
製備工藝:稱取處方量的中藥細粉、澱粉、糊精和低取代羥丙基纖維素混合均勻。另取適宜量的60%乙醇，加入於混合粉末中，混合均勻後制軟材，通過16目篩制粒，60°C以下乾燥。乾燥後完成後用18目篩進行整粒，篩出幹粒中的細粉，與過篩的硬脂酸鎂混勻，然後再與幹顆粒混和均勻，壓片，即得。
[0026]實施例5中藥片劑的製備 中藥細粉 25g
微晶纖維素 180g 羥丙基纖維素15g 8%澱粉漿適量 硬脂酸鎂 1.5g製備工藝:稱取處方量的中藥細粉、微晶纖維素和羥丙基纖維素混合均勻。另取適宜量的8%澱粉漿溶液，加入混合粉末中，混合均勻後制軟材，通過16目篩制粒，60°C以下乾燥。乾燥後完成後用18目篩進行整粒，篩出幹粒中的細粉，與過篩的硬脂酸鎂混勻，然後再與幹顆粒混和均勻，壓片，即得。
[0027]實施例6中藥膠囊劑的製備 中藥細粉25g
可壓性澱粉40g
乳糖30g
低取代羥丙基纖維素5g 60%乙醇適量
製備工藝:將處方中的各輔料過100目篩，稱取中藥細粉與可壓性澱粉、乳糖和低取代羥丙基纖維素混合均勻後，加入60%乙醇溶液制軟材，18目篩制顆粒，於60°C乾燥，16目篩整粒，裝填膠囊，即得。
[0028]實施例7中藥對腦缺血模型大鼠海馬一氧化氮和一氧化氮合酶的影響
本試驗中發明人採用尼莫地平作為陽性對照藥物，它是一種Ca2+通道阻滯劑，通過有效地阻止Ca2+進入細胞內、抑制平滑肌收縮，達到解除血管痙攣之目的。
[0029]SPF級健康雄性SD大鼠50隻，體重250~300g。造模6周後，大鼠隨機分為5組，正常對照組、模型組、尼莫地平組、中藥高劑量組(高劑量組)和中藥低劑量組(低劑量組)，每組10隻。造模後第7周正常對照組和模型組大鼠分別給予等體積的溶媒灌胃，尼莫地平組大鼠給予30mg/ (kg.d),中藥高劑量組大鼠給藥劑量IOOmg/ (kg.d),中藥中劑量組給藥劑量50 mg/ (kg.d),中藥低劑量組大鼠給藥劑量為IOmg/ (kg.d),連續給藥3周。
[0030]中藥樣品按實施例3製備工藝製備，處方為:木通15份、黨參6份、石榴皮10份、文冠果殼10份、浙貝母10份、黃精20份，丹參20份、腫節風10份、川芎5份、青葙子8份、防己15份、牛蒡子7份、葛根10份、甘草10份。
[0031]尼莫地平:購自山西亞寶藥業集團股份有限公司，批號90602 ；
NO、NOS試劑盒:南京建成生物工程研究所，批號20091210 ；
一抗nNOS、iNOS、eNOS和t3肌動蛋白抗體:北京博奧森生物技術有限公司，批號S-0156R ;羊抗兔Ig-G:北京鼎國生物技術有限公司，批號0090915。
[0032]腦缺血大鼠模型的製備:大鼠術前禁食12 h、禁水4 h，用10%水合氯醛(0.30ml/100 g)腹腔注射麻醉，仰臥固定於木製手術臺上。頸前部備皮，酒精、碘酒消毒後，沿腹側頸正中切開，依次鈍性分離皮下脂肪、胸骨舌骨肌和胸鎖乳頭肌，再分別分離暴露左、右側頸總動脈及氣管，於近心端和遠心端雙重結紮後從中間剪斷，然後逐層縫合肌肉、皮膚。正常對照組大鼠同法行頸前皮膚切開，分離皮下脂肪。
[0033]造模後第10周，各組大鼠斷頭取腦，去除嗅球、小腦，取出大腦海馬稱重，加入9倍冷生理鹽水，電動勻眾機研磨，製成10%勻眾液,3000 r/min,離心10 min,取上清液,按試劑盒說明書測定NO含量和NOS活性。
[0034] 各組大鼠新鮮腦組織海馬抽提蛋白後取等量的蛋白進行十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳分離，電轉移至硝酸纖維素膜，室溫封閉30 min, nNOS、iNOS、eNOS和t3肌動蛋白一抗500倍稀釋於封閉液中，4°C反應過夜後室溫孵育2 h。充分漂洗後辣根過氧化物酶標記的二抗羊抗兔IgG 1500倍稀釋於封閉液中，室溫孵育I h。將膜置於DAB顯色液中，顯影、定影、曝光。利用Quantity one軟體分析條帶的灰度值。
[0035](I)各組大鼠海馬NO含量和NOS活性的比較
如表1所示，與正常對照組比較，模型組大鼠海馬NO含量和NOS活性明顯升高(P〈0.01);與模型組比較，尼莫地平組和中藥各劑量組大鼠海馬NO含量和NOS活性明顯降低(P〈0.05);與陽性對照藥尼莫地平相比，中藥各劑量組大鼠海馬NO含量和NOS活性均顯著降低(P〈0.05)，其中中藥高劑量組與尼莫地平治療組相比具有極顯著差異(P〈0.01)。
[0036]表1各給藥組大鼠海馬NO含量和NOS活性比較_
【權利要求】
1.一種藥物組合物，其特徵在於它主要由以下重量份的原料製得:木通15份、黨參6份、石榴皮10份、文冠果殼10份、浙貝母10份、黃精20份，丹參20份、腫節風10份、川芎5份、青葙子8份、防己15份、牛蒡子7份、葛根10份、甘草10份。
2.如權利要求1所述的藥物組合物，其特徵在於它主要由以下重量份的原料製得:木通15克、黨參6克、石榴皮10克、文冠果殼10克、浙貝母10克、黃精20克，丹參20克、腫節風10克、川芎5克、青葙子8克、防己15克、牛蒡子7克、葛根10克、甘草10克。
3.如權利要求1或2所述的藥物組合物，其特徵在於所述藥物組合物為合劑、片劑、顆粒劑或膠囊劑。
4.一種製備如權利要求1或2所述的藥物組合物的方法，其特徵在於它包括以下步驟:取各藥材，加藥材總重量的5-15倍的水，浸泡10-60分鐘，煎煮1-4次，每次1-3小時，濾過，合併濾液，濾液減壓濃縮至相對密度1.05 -1.25的浸膏，該相對密度是在60攝氏度下的檢測結果,加入乙醇至含醇量為60-90%(v/v)，靜置24小時，取上清液，回收乙醇，濃縮，即得。
5.如權利要求1或2所述的藥物組合物在製備用於缺血性腦卒中後神經再生的藥物中的用途。
6.如權利要求1或2所述的藥物組合物在製備用於製備治療或預防腦缺血或腦梗死的藥物中的用途。
【文檔編號】A61P25/00GK103989941SQ201410251763
【公開日】2014年8月20日 申請日期:2014年6月9日 優先權日:2014年6月9日
【發明者】強紅楓 申請人:強紅楓