安祖花無菌苗組織培養和試管苗煉苗移栽技術的製作方法

2024-03-26 14:52:05

專利名稱：安祖花無菌苗組織培養和試管苗煉苗移栽技術的製作方法
1.發明領域本發明涉及植物組織培養技術領域，特別涉及名稱為安祖花植物的無菌苗組織培養技術和試管苗煉苗移栽技術。在培養中選用無菌外植體，在兩種不同優勢的培養基上交替培養，同步產生愈傷組織、側芽、不定根，在最短時間內形成完整植株；然後選用2-3cm高的完整植株用藥劑浸泡處理移栽，提高成活率。本發明為安祖花工廠化育苗創造良好的條件，而且本發明還有利於其它植物進行工廠化育種的組織培養工作者。
2.背景技術2.1安祖花組織培養技術安祖花(Anthurium andreamum)原產於美洲的熱帶地區，是天南星科安祖花屬多年生草本花卉，花朵鮮豔奪目，花形獨特，又名紅掌、火鶴花、燈臺花、花燭、蠟燭花。因其花形獨特、花色豔麗、並具有蠟質光澤、非常優美可愛，而成為倍受人們歡迎的高檔花卉；且盆花可周年開花、切花瓶插壽命長，在國際市場上是十分暢銷的一種切花材料和盆栽品種。近五年來紅掌成為躋身於國際花卉市場的「新星」。
安祖花通常以分株和扦插方式繁殖，目前採用組織培養技術育苗越來越多，但是大部分選用的外植體為莖尖、葉片、葉柄莖尖分化率高，生長快，由於分枝少，適宜取材的部位甚少，難以滿足外植體的需求；葉片、葉柄誘導愈傷組織、分化芽時間較長。自1974年Pierk首次培養安祖花取得成功以來，國內外對安祖花愈傷組織誘導的研究報導，大多是依照外植體一愈傷組織一愈傷組織增殖一芽一生根一完整植株這一技術路線；從外植體誘導愈傷組織到形成完整植株，需130-180天；而且以上技術都是採用器官發生型這條途徑，愈傷組織繼代時間過長，抵抗力差，易染病，移栽不易成活。
本發明的目的是針對上述問題，提供一種在最短的時間獲得大量試管苗的快速繁殖技術，該技術具有穩定性好、操作簡便、繁殖速率更快的優點。本發明的方法是依照外植體一愈傷組織、芽、不定根一完整植株這一技術路線，從外植體誘導產生愈傷、芽、不定根的完整植株只需50-62天左右。
本發明的目的可以通過以下技術實現A、外植體的選擇選用安祖花幼嫩器官經組織培養獲得的2～3cm高且生長健壯、長勢均勻、品質良好的無菌苗為材料，切取帶1～2個節的莖段為外植體進行培養。
B、外植體的接種將帶1～2個節的莖段，接種在I.1/2MS+6-BA0.5～1.0mg/L+NAA0.05mg/L+3％葡萄糖+0.75％瓊脂，II.1/2MS+6-BA1.5～2.0mg/L+NAA0.05mg/L+3％葡萄糖+0.75％瓊脂，III.1/2MS+6-BA1.0～1.5mg/L+NAA0.05mg/L+IAA0.05mg/L+3％葡萄糖+0.75％瓊脂，每瓶培養基接種10～12個莖段。
C、培養條件接種後移到培養室培養，培養室溫度為22～28℃，培養室相對溼度為30～40％，每天光照10～12小時，光照強度為1000～2000lx；培養25～32天左右三種不同培養基上的外植體基部產生愈傷組織，葉腋萌發1～2個側芽；再培養25～30天，長至2～3cm高的芽，側芽基部產生2～5條不定根，形成完整植株。
D、組培苗繼代將帶愈傷和芽的外植體，用II號和III號培養基不斷進行交替培養，分化更多健壯的芽苗，同時誘導粗壯不定根進行移栽。
本發明具有如下的優點和效果1、利用無菌苗為外植體，穩定性好、操作簡便，取材容易，不需經過體外消毒，恢復期短；至今有一篇報導採用無菌葉、葉柄及莖段為外植體，但45天後才長出愈傷，再轉入分化培養基培養30天後才能分化出小芽點(黃珺梅等，福建熱帶科技，2002，27(1)12～13)。本發明25-32天左右同步誘導出愈傷組織和側芽。
2、按上述培養條件培養，繼續培養25～30天，芽2～3cm高時，基部產生2～5條不定根，從出愈到完整植株形成，僅需50～62天。比目前報導最短時間提早了30～60天形成完整植株(見蘭芹英等，園藝學報，2003，30(1)107～109)。
3、利用兩種培養基各自的優勢交替培養，獲得安祖花組織培養的最佳效果，在目前未見報導。
4、外植體在I、II、III號培養基上均能同步產生愈傷、側芽、不定根，且各有優勢；目前還未見報導可同步誘導愈傷、側芽、不定根的培養基。
5、利用外植體——愈傷組織、芽、不定根——完整植株這一技術路線，僅需50～62天形成完整植株，4～5個月內可獲得大量完整植株，進行大規模工廠化育種。
下面結合實施例描述本發明的最佳實施方案1、選用組織培養獲得的2～3cm高且生長健壯、長勢均勻、品質優良的無菌苗，先切除葉片和葉柄，然後切成帶1～2節的莖段，接種在I、II、III號培養基上，每瓶10～12個外植體。
2、接種後移到培養室培養，培養室溫度為22～28℃，培養室相對溼度為30～40％，每天光照12小時，光照強度為1000～2000lx；3、培養30天左右，平均出愈率達93％，大部分葉腋萌發1-2個側芽(見表1)。
表1不同培養基對安祖花無菌苗愈傷組織形成及芽分化的影響基本培養基 激素(mg/L)接種外植 產生愈傷組 產生愈傷的外 愈傷組織 葉腋長出 側芽萌發體數(塊) 織的天數 植體數(塊) 誘導率的側芽數 率(％)(天)(％)
I、1/2MS 6BA1.0+NAA0.05 100298484％ 152 89％II、1/2MS6BA2.0+NAA0.05 10025100 100％ 135 85％III、1/2MS 6BA1.0+NAA0.05 100329595％ 194 100％+IAA0.05+100g/LCM(注表中數據為培養35天統計的結果。)4、上述培養的外植體，繼續接種在三種培養基上培養，再培養25～30天，當長至2～3cm高的芽時，基部長出2～5條不定根，形成完整植株(見表2)。
表2不同培養基增殖對安祖花各器官繁殖的影響培養基 愈傷組織狀況芽苗分化情況 成苗數及長勢 根狀況葉片狀況I 球莖不規則，直徑約1 部分愈傷組織上分化 大部分頂芽和側芽 氣生根較多， 較小，約0.5cm2，釐米，淡綠色或淡黃 出芽點，3-5個萌發展葉，每塊愈傷 3-5條，2-3cm 淡綠色。
色，質地緻密。組織上有成苗2-3 長。
株，高1.5-3cm。
II球莖形狀明顯，直徑 大部分愈傷組織分化 大部分頂芽和側芽 氣生根少而短，較小，約0.5cm2，約2.5cm，淡綠、淡黃 出芽點，數目較多 萌發展葉，每塊愈傷 1-2條，0.5-1.5cm 淡綠色。
或黃色，質地緻密。
(5-10個)。
組織上有成苗1-2 長。
株，高1-2cm。
III 球莖形狀不明顯，直 大部分愈傷組織分化 大部分頂芽和側芽 2-4條，1-3cm長。
較大，約1cm2，徑約2cm，淡綠、淡黃 出芽點，數目較多 萌發展葉，每塊愈傷 濃綠色，光滑。
或黃色，質地光滑致 (5-6個)。組織上有成苗4-5密。
株，高2-3cm，粗壯。
(注表中數據為培養62天統計結果)5、從表1、表2可以看出I號培養基愈傷組織小而不規則，分化芽點少，芽苗長勢一般，但氣生根多而長；II號培養基上愈傷組織大而形狀明顯，分化芽點多，但成苗弱而少，氣生根少而短；III號培養基愈傷組織較小，但分化芽點數比較多，成苗多而壯，氣生根比II號培養基多而長。因此外植體先接種在II號培養基上，然後轉入III號培養基，再轉入II號培養基進行交替培養，分化更多健壯的芽苗、粗壯不定根，即可切取移栽。
2.2安祖花煉苗移栽技術安祖花喜較高溫度，生長適溫為20～30℃，越夏溫度不高於31℃，越冬溫度不低於10℃，喜溫潤，故每天需向葉面噴霧。然而試管苗在瓶苗階段都是在人工條件下，提供各種最適宜生長條件，完成生長過程的；因此，同外界自然環境條件差異很大，為了使瓶苗能適應外界的自然環境條件，就必須讓試管苗有一個過渡的適應過程，即煉苗。
大部分植物在試管繁殖中能不斷生長、增殖，但不生根而無法移栽；國內外安祖花組織培養技術報導的方法大多是經過25～40天生根再移栽(見黃珺梅等，福建熱帶科技，2002，27(1)12～13；蔡維藩，亞熱帶植物科學，2002，31(3)66-68等)。
試管苗移栽時，因組織幼嫩，易於滋生雜菌，且安祖花試管苗的根、莖、葉均會發病，發病時受害植物首先停止生長，然後受害部位淡褐色，後期莖幹布滿白色或粉紅色黴層，最後全株枯萎死亡，降低了移栽成活率。
本發明的目的是針對以上技術的不足，發明一種同步誘芽和根的培養方法，試管苗不必另行壯苗生根便能形成根葉具全的小苗；且在移栽時用不同藥劑浸泡處理，減少病菌來源，預防病害，加快生長。
本發明提供一種安祖花試管苗煉苗移栽技術，主要按以下步驟和方法進行A、選用II、III號培養基交替培養所獲得的壯苗，無需轉至生根培養基，即可形成完整植株；因此在培養過程中隨著不定根的出現，即可出瓶移栽，簡化繁殖程序。
B、移栽預處理用500～2000倍的高錳酸鉀、多菌靈、代森錳鋅、甲基託布津、家用鏈黴素等藥劑浸泡5～25分鐘。
C、栽培基質移栽時選用椰糠∶泥炭土∶珍珠巖＝2∶2∶1為基質；移栽前用同濃度浸泡藥劑淋透放置2～3天，然後再移栽。
D、移栽後管理移栽後，轉入煉苗室，用薄膜密封進行煉苗，溫度控制在22～28℃，溼度60～80％，2～7天向膜內噴水一次，20～40天後慢慢打開薄膜；移栽後10天，開始用MS母液噴霧(每周一次)，當新葉長出時，轉入到溫室培養。
本發明具有如下的優點和效果1、採用培養基交替培養同步誘芽和根，不必另行壯苗生根便能形成根葉具全的小苗，長至2～3cm高的時，可切取移栽；愈傷組織和弱苗可繼續轉入培養基繼續培養，此方法簡化繁殖程序。
2、移栽時，幼苗和栽培基質都用藥劑進行消毒處理，減少病菌來源、增強抵抗力，故而提高成活率、加快生長速度。
3、選用疏鬆透氣、肥沃，富含有機質，無病蟲害的天然栽培基質，移栽前用同濃度浸泡藥劑淋透放置2～3天，保證移栽時基質溼度60％左右。
4、在室內煉苗，縮小環境條件變化，實現高成活、低成本的移栽方式。
下面結合實施例描述本發明的最佳實施方案1、把長至2～3cm高的小苗切割下來，然後將苗放入清水中把根部的瓊脂清洗乾淨，洗苗時注意水溫，冬季宜用溫水，以免水溫過低凍傷幼苗。
2、試管苗洗淨後用500～2000倍的高錳酸鉀、多菌靈、代森錳鋅、甲基託布津、家用鏈黴素等藥劑浸泡5～25分鐘處理。
3、以椰糠∶泥炭土∶珍珠巖＝2∶2∶1的比例配製基質，保證基質通氣的孔隙度和保水能力以1∶1為佳；移栽前用同濃度浸泡藥劑淋透放置2～3天，保證移栽時基質溼度60％左右。
4、移栽時，不能直接把帶根的小苗直接插入基質中，因幼苗根部較脆容易折斷，造成傷口感染。先用小木棍或鑷子將穴盤的基質挖個小洞，輕輕的把苗放入，再覆蓋基質將根部蓋住；不要用力擠壓基質，以免基質過實，根系通氣不良而引起根部的腐爛。
5、移栽後，在煉苗室內，用薄膜密封煉苗，溫度控制在22～28℃，溼度60～80％；2～7天向膜內噴水一次，20～40天後慢慢打開薄膜；移栽10天後，開始用MS母液噴霧(每周一次)，當新葉長出時，轉入到溫室進行培養。
採用以上方法移栽，植株生長健壯，生長速度快，染病率低，移栽成活率達95％以上。
權利要求
1.一種安祖花植株組織培養技術，其特徵在於安祖花無菌苗組織培養技術是按以下步驟和方法進行A、外植體的選擇選用安祖花幼嫩器官經組織培養獲得的2～3cm高且生長健壯、長勢均勻、品質良好的無菌苗為材料，切取帶1～2個節的莖段為外植體進行培養。B、外植體的接種將帶1～2個節的莖段，接種在I.1/2MS+6-BA0.5～1.0mg/L+NAA0.05mg/L+3％葡萄糖+0.75％瓊脂，II.1/2MS+6-BA1.5～2.0mg/L+NAA0.05mg/L+3％葡萄糖+0.75％瓊脂，III.1/2MS+6-BA1.0～1.5mg/L+NAA0.05mg/L+IAA0.05mg/L+3％葡萄糖+0.75％瓊脂，每瓶培養基接種10～12個莖段。C、培養條件接種後移到培養室培養，培養室溫度為22～28℃，培養室相對溼度為30～40％，每天光照10～12小時，光照強度為1000～2000lx；培養25～32天左右，三種不同培養基上的外植體基部產生愈傷組織，葉腋萌發1～2個側芽；繼續培養25～30天，長至2～3cm高的芽，側芽基部產生2～5條不定根，形成完整植株。D、組培苗繼代將帶愈傷和小芽的外植體，用II號和III號培養基不斷進行交替培養，分化更多健壯的芽苗，同時誘導粗壯不定根進行移栽。
2.一種安祖花組織培養技術，其特徵在於安祖花試管苗煉苗移栽技術是按以下步驟和方法進行A、選用II、III號培養基交替培養所獲得的壯苗，無需轉至生根培養基，即可形成完整植株；因此在培養過程中隨著不定根的出現，即可出瓶移栽，簡化繁殖程序。B、移栽預處理用500-2000倍的高錳酸鉀、多菌靈、代森錳鋅、甲基託布津、家用鏈黴素等藥劑浸泡5-25分鐘。C、栽培基質選擇移栽時選用椰糠∶泥炭土∶珍珠巖＝2∶2∶1為基質；移栽前用同濃度浸泡藥劑淋透放置2-3天，然後再移栽。D、移栽後管理移栽後，轉入煉苗室，用薄膜密封煉苗，溫度控制在22～28℃，溼度60～80％； 2～7天向膜內噴水一次，20～40天後慢慢打開薄膜；移栽後10天，開始用MS母液噴霧(每周一次)，當新葉長出時，轉入到溫室培養。
全文摘要
安祖花組培新技術，選用幼嫩組織誘導出來的少量無菌苗莖段作為外植體，接種在I、II、III號培養基上，同步誘導出愈傷組織、側芽、不定根；試管苗不必另行壯苗生根，長至2－3cm高時即可切取，然後用藥劑浸泡處理移栽，轉入煉苗室，移栽成活率達95％以上。本發明可在4－5個月內形成大量完整植株，為工廠化育種創造了良好的條件。
文檔編號A01H4/00GK1739341SQ20041004669
公開日2006年3月1日 申請日期2004年8月24日 優先權日2004年8月24日
發明者易自力, 黃麗芳, 蔣建雄, 蔡能 申請人:易自力, 黃麗芳, 蔡能