一種用於高產單抗的細胞培養基添加劑的製作方法

2024-02-29 03:17:15 1

一種用於高產單抗的細胞培養基添加劑的製作方法
【專利摘要】本發明提供了一種用於高產單抗的細胞培養基添加劑，其特徵在於，所述添加劑包含以下成分山-穀氨醯胺292-1461mg/L、腺嘌呤6.5-9.5mg/L、鳥嘌呤6.5-9.5mg/L、尿嘧啶6.5-9.5mg/L、胸腺嘧啶0.75-1.75mg/L、胞嘧啶6.5-9.5mg/L、核糖2.5-9.5mg/L、脫氧核糖2.5-9.5mg/L、生物素0.15-0.55mg/L、葉酸0.06-15.Omg/L、核黃素0.5-0.75mg/L、維生素C15-40mg/L、維生素B60.05-0.8mg/L、維生素B120.05-2.5mg/L、硫酸亞鐵1.5-4.5mg/L、硫酸鋅1.5-7.5mg/L?本發明所提供的添加劑通過添加到通用培養基中能夠有效提高培養基中細胞的單抗產量，降低單抗的生產成本。
【專利說明】一種用於高產單抗的細胞培養基添加劑

【技術領域】
[0001] 本發明涉及培養基添加劑，具體地說，涉及一種用於高產單抗的細胞培養基添加 劑。

【背景技術】
[0002] 生物製藥是近年來醫藥行業中增長最迅速的行業，單克隆抗體作為生物藥中最受 矚目的產品類別，約佔生物製藥的35%。單抗類藥物在治療以腫瘤為主的多種疾病方面起 著非常重要的作用，同時因其療效越來越受患者的青睞，2012年，單抗藥物以750億美元的 銷售額領跑全球藥品市場，年增長率在25%，其中6個單抗藥物排名位於全球處方藥銷售 額排行榜的前10位。
[0003] 與第一代生物技術醫藥產品相比，新一代產品不是天然物質的仿製，而是對細胞 內和細胞表面的各個功能單位包括基因表達的各個環節進行加工。由此可見新一代產品的 技術難度更大、研發周期更長、生產成本更高，這也導致了新一代生物醫藥產品（不管是原 研藥還是仿製藥）的價格居高不下。
[0004] 但是從療效方面來看，新一代產品即生物藥尤其是單抗針對性強、半衰期長、療效 持續顯著、副作用小等特點，所以越來越多的患者渴望接受單抗藥物的治療，但苦於負擔不 起高昂的醫療費用。同時越來越多的企業投資大量人力物力致力於單抗藥物的研發。
[0005] 目前已經批准上市的大部分單抗藥物其推薦成人臨床用藥劑量均較大，若要滿足 廣大患者的需求，除去價格方面的因素，產能也是最重要的影響患者使用單抗藥物的因素 之一。同時，產能的提高也能反過來影響價格的走勢，因為產能提高在某種意義上來說是節 約了成本，利潤空間也有所擴增，降價才能最終實現，價格平民化和產能擴大才能使越來越 多的患者使用單抗藥物治療疾病。
[0006] 除了構建單抗高產的細胞株之外，培養單抗高產細胞株的培養基對單抗的最終產 量也是至關重要的，國內目前普遍採用通用培養基，一般可從生產培養基的公司購買。
[0007] 通常，細胞培養基包含多種不同種類的成分，例如胺基酸、維生素、鹽、脂肪酸和其 它成分：
[0008] -胺基酸：例如美國專利US6048728公開了可用於細胞培養基中的以下胺基酸：丙 氨酸、精氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、穀氨酸、穀氨醯胺、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、 賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙胺酸、脯氨酸、絲氨酸、色氨酸、酪氨酸、蘇氨酸和纈氨酸。
[0009] -維生素：例如美國專利US2003/0096414或US5811299描述了可用於細胞培養基 的以下維生素：生物素、泛酸鹽、氯化膽鹼、葉酸、肌醇、煙醯胺、維生素B6、核黃素、維生素 B12、硫胺、腐胺。
[0010] -鹽：例如美國專利US6399381公開的一種培養基包含：CaCl2、KC1、MgCl2、NaCl、 NaH 2P04、似2冊04、似2560 3、(：11504、211(：12。另一美國專利文獻舊2003/0153042例子中公開了可 用於培養基的無機鹽，該培養基包含：CaCl 2、KCl、MgCl2、NaCl、NaH2P04、Na 2HP04、CuCl2*2H20、 ZnCl 2〇 toon]-脂肪酸：已知可用於培養基的脂肪酸有：花生四烯酸、亞油酸、油酸、月桂酸、肉 豆蘧酸和甲基-β -環糊精，例如美國專利US5045468。環糊精本身不是脂肪，但是它能夠與 脂質形成複合物，因此在細胞培養基中用它來溶解脂肪。
[0012] -其它成分，具體指用於構成無血清細胞培養基的化合物，例如包括葡萄糖、穀氨 醯胺、丙酮酸鈉、胰島素或乙醇胺（例如歐洲專利ΕΡ274445)，或保護劑如Pluronic F68。 Pluronic F68 (也稱為泊洛沙姆（Poloxamer) 188)是一種環氧乙燒（EO)與環氧丙燒（PO) 的嵌段共聚物。
[0013] 標準的"基礎培養基"是本領域技術人員熟知的，這些培養基包含上述培養基諸成 分。廣泛應用的這種培養基的例子有達爾伯克改良伊格爾培養液（Dulbecco' s Modified Eagle' s Medium, DMEM), DMEMF12(1:1), Ham' s Nutrientmixture F-10, Roswell Park Memorial Institute Medium(RPMI), MCDB131，或 William' s Medium E。這些商品化培養 基可以從例如Gibco、Invitrogen獲得。
[0014] "基礎培養基"還包括金屬元素，例如鋅（Zn)和銅（Cu)參與代謝反應（Vallee和 Falchuk, 1993,或 Lindner, 1991)。
[0015] 但是這類培養基不是針對單抗高產細胞株的培養基，並不能激發高產細胞株的產 能，而且限制了單抗高產細胞株發揮優勢。只有研發出一種適用於單抗高產細胞株的培養 基配方，才能發揮高產細胞株的優勢，最終實現單抗生產上的大跨越。


【發明內容】

[0016] 為了解決現有技術中存在的問題，本發明的目的是提供一種用於高產單抗的細胞 培養基添加劑。
[0017] 為了實現本發明目的，本發明首先提供一種用於高產單抗的細胞培養基添加 齊U，所述添加劑包含以下成分：L-穀氨醯胺292-1461mg/L、腺嘌呤6. 5-9. 5mg/L、鳥嘌呤 6. 5-9. 5mg/L、尿嘧啶 6. 5-9. 5mg/L、胸腺嘧啶 0· 75-1. 75mg/L、胞嘧啶 6. 5-9. 5mg/L、核糖 2. 5-9. 5mg/L、脫氧核糖 2. 5-9. 5mg/L、生物素 0· 15-0. 55mg/L、葉酸 0· 06-15. Omg/L、核黃素 0· 5-0. 75mg/L、維生素 C15-40mg/L、維生素 B60. 05-0. 8mg/L、維生素 B120. 05-2. 5mg/L、硫 酸亞鐵 1. 5-4. 5mg/L、硫酸鋅 L 5-7. 5mg/L。
[0018] 作為優選，所述添加劑包含以下成分：L-穀氨醯胺1000mg/L、腺嘌呤8mg/L、鳥嘌 呤8mg/L、尿啼陡8mg/L、胸腺啼陡I. 2mg/L、胞啼陡8mg/L、核糖7mg/L、脫氧核糖7mg/L、生 物素〇· 4mg/L、葉酸10mg/L、維生素C30mg/L、維生素B60. 6mg/L、維生素B122mg/L、硫酸亞鐵 3. 5mg/L、硫酸鋅 6mg/L。
[0019] 本發明還提供了前述添加劑在製備高產單抗的細胞培養基中的應用，具體為：向 通用培養基中加入純化水，溶解後加入腺嘌呤、鳥嘌呤、尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶、核糖、脫 氧核糖、生物素、葉酸、核黃素、維生素C、維生素B6、維生素B12、硫酸亞鐵和硫酸鋅，攪拌均 勻，臨用前再加入L-穀氨醯胺，攪拌均勻即得高產單抗的細胞培養基。
[0020] 本發明還提供了前述添加劑在促進細胞株高產單抗中的應用，將所述添加劑加 入到通用培養基中，將產單抗的細胞株加入到所述培養基中，在37°C、5% C02、85%溼度、 120rpm的條件下培養，之後收集上清，取單抗。
[0021] 進一步地，所述應用包括如下步驟：
[0022] 1)將產單抗的細胞株加入到所述培養基中，混勻後離心，棄上清；
[0023] 2)將細胞重懸於培養基中，在37°C、5% C02、85%溼度、120rpm條件下培養，培養 至第三天補糖、補培養基；
[0024] 3)在37°C、5% C02、85%溼度、120rpm的條件下繼續培養，隔天補糖、補培養基直 至培養的第11天，繼續培養至第14天停止；
[0025] 4)收集上清，離心3分鐘，之後收集上清，取單抗。
[0026] 本發明的有益效果在於：
[0027] 本發明所提供的用於高產單抗的細胞培養基添加劑適用於單抗高產細胞株的培 養，用添加有該添加劑的培養基培養的細胞株，其單抗產量顯著高於現有技術，並能有效降 低生產成本。

【具體實施方式】
[0028] 以下實施例用於說明本發明，但不用來限制本發明的範圍。
[0029] 實施例1
[0030] 取 CD OptiCHO 培養基（購自 Gibco, Cat. No. Al 1222-04) 1 個包裝（配 IL 培養基 用），加IL純化水，溶解後加入8mg腺嘌呤、8mg鳥嘌呤、8mg尿嘧啶、I. 2mg胸腺嘧啶、8mg 胞啼陡、7mg核糖、7mg脫氧核糖、0. 4mg生物素、IOmg葉酸、0. 65mg核黃素、30mg維生素C、 0· 6mg維生素B6、2mg維生素B12、3. 5mg硫酸亞鐵和6mg硫酸鋅，攪拌均勻。用前再加入Ig L-穀氨醯胺，攪拌均勻。復甦一支高產依那西普的細胞（來自北京益生合生物科技有限公 司）（ImL)，加入9mL培養基，混勻後離心，棄去上清，將細胞重懸於30mL培養基中，在37°C、 5% C02、85%溼度、120rpm的條件下進行培養。培養至第三天補培養基、補糖，補培養基的成 分與初始培養基的成分一樣，均在臨使用前加入L-穀氨醯胺攪拌均勻。之後繼續在37°C、 5% C02、85%溼度、120rpm的條件下進行培養，隔天補培養基加糖直至培養的第11天，接著 培養至第14天，停止培養。
[0031] 收集上清，離心3分鐘，取上清，用ELISA測產量，產量為3. 15g/L。
[0032] 實施例2
[0033] 取Gibco的CD OptiCHO培養基1個包裝（配IL培養基用），加IL純化水，溶解後 加入6. 5mg腺噪呤、6. 5mg鳥噪呤、6. 5mg尿啼陡、0· 75mg胸腺啼陡、6· 5mg胞啼陡、2· 5mg核 糖、2. 5mg脫氧核糖、0· 15mg生物素、0· 06mg葉酸、0· 5mg核黃素、15mg維生素C、0. 05mg維生 素B6、0. 05mg維生素B12、l. 5mg硫酸亞鐵和I. 5mg硫酸鋅，攪拌均勻。用前再加入292mg L-穀氨醯胺，攪拌均勻。
[0034] 復甦一支高產依那西普的細胞（來自北京益生合生物科技有限公司）（ImL)，加入 9mL培養基，混勻後離心，棄去上清，將細胞重懸於30mL培養基中，在37°C、5% C02、85%溼 度、120rpm的條件下進行培養。培養至第三天補培養基、補糖，補培養基的成分與初始培養 基的成分一樣，均在臨使用前加入L-穀氨醯胺攪拌均勻。之後繼續在37°C、5% C02、85% 溼度、120rpm的條件下進行培養，隔天補培養基加糖直至培養的第11天，接著培養至第14 天，停止培養。
[0035] 收集上清，離心3分鐘，取上清，用ELISA測產量，產量為2. 69g/L。
[0036] 實施例3
[0037] 取Gibco的CD OptiCHO培養基1個包裝（配IL培養基用），加IL純化水，溶解後 加入9. 5mg腺嘌呤、9. 5mg鳥嘌呤、9. 5mg尿嘧啶、I. 75mg胸腺嘧啶、9. 5mg胞嘧啶、9. 5mg核 糖、9. 5mg脫氧核糖、0· 55mg生物素、15mg葉酸、0· 75mg核黃素、40mg維生素C、0. 8mg維生 素Β6、2· 5mg維生素Β12、4· 5mg硫酸亞鐵和7. 5mg硫酸鋅，攪拌均勻。用前再加入1461mg L-穀氨醯胺，攪拌均勻。
[0038] 復甦一支高產依那西普的細胞（來自北京益生合生物科技有限公司）（ImL)，加入 9mL培養基，混勻後離心，棄去上清，將細胞重懸於30mL培養基中，在37°C、5% C02、85%溼 度、120rpm的條件下進行培養。培養至第三天補培養基、補糖，補培養基的成分與初始培養 基的成分一樣，均在臨使用前加入L-穀氨醯胺攪拌均勻。之後繼續在37°C、5% C02、85% 溼度、120rpm的條件下進行培養，隔天補培養基加糖直至培養的第11天，接著培養至第14 天，停止培養。
[0039] 收集上清，離心3分鐘，取上清，用ELISA測產量，產量3. 43g/L。
[0040] 實施例4
[0041] 取Gibco的⑶OptiCHO培養基1個包裝（配IL培養基用），加IL純化水，溶解後 加入8mg腺噪呤、8mg鳥噪呤、8mg尿啼陡、I. 2mg胸腺啼陡、8mg胞啼陡、7mg核糖、7mg脫氧 核糖、〇· 4mg生物素、IOmg葉酸、30mg維生素C、0. 6mg維生素B6、2mg維生素B12、3. 5mg硫酸 亞鐵和6mg硫酸鋅，攪拌均勻。用前再加入Ig L-穀氨醯胺，攪拌均勻。
[0042] 復甦一支高產阿達木單抗的細胞（來自北京益生合生物科技有限公司）（ImL)，加 入9mL培養基，混勻後離心，棄去上清，將細胞重懸於30mL培養基中，在37°C、5% C02、85% 溼度、120rpm的條件下進行培養。培養至第三天補培養基、補糖，補培養基的成分與初始培 養基的成分一樣，均在臨使用前加入L-穀氨醯胺攪拌均勻。之後繼續在37°C、5% C02、85% 溼度、120rpm的條件下進行培養，隔天補培養基加糖直至培養的第11天，接著培養至第14 天，停止培養。
[0043] 收集上清，離心3分鐘，取上清，用ELISA測產量，產量為5. 33g/L。
[0044] 實施例5
[0045] 取Gibco的⑶OptiCHO培養基1個包裝（配IL培養基用），加IL純化水，溶解後 加入8mg腺噪呤、8mg鳥噪呤、8mg尿啼陡、I. 2mg胸腺啼陡、8mg胞啼陡、7mg核糖、7mg脫氧 核糖、〇· 4mg生物素、IOmg葉酸、30mg維生素C、0. 6mg維生素B6、2mg維生素B12、3. 5mg硫酸 亞鐵和6mg硫酸鋅，攪拌均勻。用前再加入Ig L-穀氨醯胺，攪拌均勻。
[0046] 復甦一支高產利妥昔單抗的細胞（來自北京益生合生物科技有限公司）（ImL)，加 入9mL培養基，混勻後離心，棄去上清，將細胞重懸於30mL培養基中，在37°C、5% C02、85% 溼度、120rpm的條件下進行培養。培養至第三天補培養基、補糖，補培養基的成分與初始培 養基的成分一樣，均在臨使用前加入L-穀氨醯胺攪拌均勻。之後繼續在37°C、5% C02、85% 溼度、120rpm的條件下進行培養，隔天補培養基加糖直至培養的第11天，接著培養至第14 天，停止培養。
[0047] 收集上清，離心3分鐘，取上清，用ELISA測產量，產量為6. 50g/L。
[0048] 實施例6
[0049] 取Gibco的⑶OptiCHO培養基1個包裝（配IL培養基用），加IL純化水，溶解後 加入8mg腺噪呤、8mg鳥噪呤、8mg尿啼陡、I. 2mg胸腺啼陡、8mg胞啼陡、7mg核糖、7mg脫氧 核糖、〇· 4mg生物素、IOmg葉酸、30mg維生素C、0. 6mg維生素B6、2mg維生素Β12、3· 5mg硫酸 亞鐵和6mg硫酸鋅，攪拌均勻。用前再加入Ig L-穀氨醯胺，攪拌均勻。
[0050] 復甦一支高產曲妥珠單抗的細胞（來自北京益生合生物科技有限公司）（ImL)，加 入9mL培養基，混勻後離心，棄去上清，將細胞重懸於30mL培養基中，在37°C、5% C02、85% 溼度、120rpm的條件下進行培養。培養至第三天補培養基、補糖，補培養基的成分與初始培 養基的成分一樣，均在臨使用前加入L-穀氨醯胺攪拌均勻。之後繼續在37°C、5% C02、85% 溼度、120rpm的條件下進行培養，隔天補培養基加糖直至培養的第11天，接著培養至第14 天，停止培養。
[0051] 收集上清，離心3分鐘，取上清，用ELISA測產量，產量為5. 07g/L。
[0052] 對比例1
[0053] 取Gibco的CD OptiCHO培養基1個包裝（配IL培養基用），加IL純化水，攪拌均 勻。用前再加入1461mg L-穀氨醯胺，攪拌均勻。
[0054] 復甦一支高產依那西普的細胞（來自北京益生合生物科技有限公司）（ImL)，加 入9mL培養基，混勻後離心，棄去上清，將細胞重懸於30mL培養基中，在37°C、5% C02、 85%溼度、120rpm的條件下進行培養。培養至第三天補料、補糖。補料是稱取適量（根 據每天的培養數據會調整和變化）購自KEERY的SHEFF-CHO PLUS PF ACF，用1 :1的 CHO CD EfficientFeed A 和 CHO CD EffcientFeed B (CHO CD EfficientFeed A 和 CHO CD EfficientFeed B均購自Bibco)溶解。在臨使用前加入L-穀氨醯胺攪拌均勻。之後繼續 在37°C、5% C02、85%溼度、120rpm的條件下進行培養，隔天補培養基加糖直至培養的第11 天，接著培養至第14天，停止培養。
[0055] 收集上清，離心3分鐘，取上清，用ELISA測產量，產量為I. 23g/L。
[0056] 對比例2
[0057] 取Gibco的CD OptiCHO培養基1個包裝（配IL培養基用），加IL純化水，攪拌均 勻。用前再加入1461mg L-穀氨醯胺，攪拌均勻。
[0058] 復甦一支高產阿達木單抗的細胞（來自北京益生合生物科技有限公司）（ImL)， 加入9mL培養基，混勻後離心，棄去上清，將細胞重懸於30mL培養基中，在37°C、5% C02、 85%溼度、120rpm的條件下進行培養。培養至第三天補料、補糖。補料是稱取適量（根 據每天的培養數據會調整和變化）購自KEERY的SHEFF-CHO PLUS PF ACF，用1 :1的 CHO CD EfficientFeed A 和 CHO CD EffcientFeed B (CHO CD EfficientFeed A 和 CHO CD EfficientFeed B均購自Bibco)溶解。在臨使用前加入L-穀氨醯胺攪拌均勻。之後繼續 在37°C、5% C02、85%溼度、120rpm的條件下進行培養，隔天補培養基加糖直至培養的第11 天，接著培養至第14天，停止培養。
[0059] 收集上清，離心3分鐘，取上清，用ELISA測產量，產量為I. 91g/L。
[0060] 對比例3
[0061] 取Gibco的⑶OptiCHO培養基1個包裝（配IL培養基用），加IL純化水，攪拌均 勻。用前再加入1461mg L-穀氨醯胺，攪拌均勻。
[0062] 復甦一支高產利妥昔單抗的細胞（來自北京益生合生物科技有限公司）（ImL)， 加入9mL培養基，混勻後離心，棄去上清，將細胞重懸於30mL培養基中，在37°C、5% C02、 85%溼度、120rpm的條件下進行培養。培養至第三天補料、補糖。補料是稱取適量（根 據每天的培養數據會調整和變化）購自KEERY的SHEFF-CHO PLUS PF ACF，用1 :1的 CHO CD EfficientFeed A 和 CHO CD EffcientFeed B (CHO CD EfficientFeed A 和 CHO CD EfficientFeed B均購自Bibco)溶解。在臨使用前加入L-穀氨醯胺攪拌均勻。之後繼續 在37°C、5% C02、85%溼度、120rpm的條件下進行培養，隔天補培養基加糖直至培養的第11 天，接著培養至第14天，停止培養。
[0063] 收集上清，離心3分鐘，取上清，用ELISA測產量，產量為2. 24g/L。
[0064] 對比例4
[0065] 取Gibco的⑶OptiCHO培養基1個包裝（配IL培養基用），加IL純化水，攪拌均 勻。用前再加入1461mg L-穀氨醯胺，攪拌均勻。
[0066] 復甦一支高產曲妥珠單抗的細胞（來自北京益生合生物科技有限公司）（ImL)，加 入9mL培養基，混勻後離心，棄去上清，將細胞重懸於30mL培養基中，在37°C、5% C02、85% 溼度、120rpm的條件下進行培養。培養至第三天補料、補糖。補料是稱取適量（根據每天的 培養數據會調整和變化）購自 KEERY 的 SHEFF-CHO PLUS PF ACF (Cat. No. 1320021854)，用 1 :1 的 CHO CD EfficientFeed A和 CHO CD EffcientFeed B(CH0 CD EfficientFeed A(Cat. No. A10234-01)和 CHO CD EfficientFeed B (Cat. No. A10240-01)均購自 Bibco)溶解。在臨 使用前加入L-穀氨醯胺攪拌均勻。之後繼續在37°C、5% C02、85%溼度、120rpm的條件下 進行培養，隔天補培養基加糖直至培養的第11天，接著培養至第14天，停止培養。
[0067] 收集上清，離心3分鐘，取上清，用ELISA測產量，產量為I. 83g/L。
[0068] 雖然，上文中已經用一般性說明及具體實施方案對本發明作了詳盡的描述，但在 本發明基礎上，可以對之作一些修改或改進，這對本領域技術人員而言是顯而易見的。因 此，在不偏離本發明精神的基礎上所做的這些修改或改進，均屬於本發明要求保護的範圍。
【權利要求】
1. 一種用於高產單抗的細胞培養基添加劑，其特徵在於，所述添加劑包含以下成分： L-穀氨醯胺 292-1461mg/L、腺嘌呤 6. 5-9. 5mg/L、鳥嘌呤 6. 5-9. 5mg/L、尿嘧啶 6. 5-9. 5mg/ L、胸腺嘧啶 0· 75-1. 75mg/L、胞嘧啶 6. 5-9. 5mg/L、核糖 2. 5-9. 5mg/L、脫氧核糖 2. 5-9. 5mg/ L、生物素 0· 15-0. 55mg/L、葉酸 0· 06-15. Omg/L、核黃素 0· 5-0. 75mg/L、維生素 C15-40mg/ L、維生素 B60. 05-0. 8mg/L、維生素 B120. 05-2. 5mg/L、硫酸亞鐵 L 5-4. 5mg/L、硫酸鋅 L 5-7. 5mg/L〇
2. 根據權利要求1所述的添加劑，其特徵在於，所述添加劑包含以下成分：L-穀氨醯胺 1000mg/L、腺嘌呤8mg/L、鳥嘌呤8mg/L、尿嘧啶8mg/L、胸腺嘧啶I. 2mg/L、胞嘧啶8mg/L、核 糖7mg/L、脫氧核糖7mg/L、生物素0· 4mg/L、葉酸10mg/L、維生素C30mg/L、維生素B60. 6mg/ L、維生素B122mg/L、硫酸亞鐵3. 5mg/L、硫酸鋅6mg/L。
3. 權利要求1或2所述的添加劑在製備高產單抗的細胞培養基中的應用，其特徵在於， 向通用培養基中加入純化水，溶解後加入腺嘌呤、鳥嘌呤、尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶、核糖、 脫氧核糖、生物素、葉酸、核黃素、維生素C、維生素B6、維生素B12、硫酸亞鐵和硫酸鋅，攪拌 均勻，臨用前再加入L-穀氨醯胺，攪拌均勻即得高產單抗的細胞培養基。
4. 權利要求1或2所述的添加劑在促進細胞株高產單抗中的應用，其特徵在於，將所 述添加劑加入到通用培養基中，將產單抗的細胞株加入到所述培養基中，在37°C、5% C02、 85%溼度、120rpm的條件下培養，之後收集上清，取單抗。
5. 根據權利要求4所述的應用，其特徵在於，包括如下步驟： 1) 將產單抗的細胞株加入到所述培養基中，混勻後離心，棄上清； 2) 將細胞重懸於培養基中，在37°C、5% C02、85%溼度、120rpm條件下培養，培養至第 三天補糖、補培養基； 3) 在37°C、5% C02、85%溼度、120rpm的條件下繼續培養，隔天補糖、補培養基直至培 養的第11天，繼續培養至第14天停止； 4) 收集上清，離心3分鐘，之後收集上清，取單抗。
【文檔編號】C12N5/20GK104212769SQ201410334195
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2014年7月14日 優先權日:2014年7月14日
【發明者】狄春輝, 劉進 申請人:北京益生合生物科技有限公司