一種吡咯伯克霍爾德氏菌及其在防治楊樹潰瘍病中的應用的製作方法
2024-04-01 09:57:05 2
專利名稱：一種吡咯伯克霍爾德氏菌及其在防治楊樹潰瘍病中的應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於植物保護領域，尤其涉及一種吡咯伯克霍爾德氏菌及其在防治楊樹潰瘍 病中的應用。
背景技術：
楊樹是重要的速生用材樹種，具有頗高的經濟價值和生態效益。然而，楊樹在生長 過程中不斷受到病蟲害的威脅。
楊樹潰瘍病是一類危害嚴重的楊樹枝幹病害，病原種類繁多，症狀多種多樣，嚴重
影響樹木生長甚至導致寄主死亡。通常的名稱有潰瘍病、腐爛病、爛皮病、枝枯病等，
該病大多數由真菌引起。楊樹潰瘍病的發病規律病害發生與樹木生長勢關係密切，當寄
主受到環境影響而生長勢衰弱時極易發生，因此新造幼林以及乾旱瘠薄、水分供應不足
的林地容易發病。
目前對楊樹潰瘍病的防治尚無理想的藥劑及抗病品種， 一些栽培管理措施只能起到 局部的控制作用，尋找一種經濟、安全、有效的防治措施是當務之急，生物防治不失為 重要的輔助手段，其中拮抗細菌在植物病害生物防治中起到非常重要的作用，其主要優 勢在於
(1) 種類和數量眾多，在植物體內外大量存在；
(2) 對病原菌的作用方式多樣化，包括競爭、拮抗、寄生、誘導植物抗性產生等；
(3) 繁殖速度快；
(4) 許多大多細菌在植物體內外定殖力強
(5) 能夠人工培養，易於操作，便於生產應用；
(6) 有些細茼菌株不僅能夠防治病害而且可以促進植物的生長，增加作物的產量。 利用植物外部環境中的拮抗細菌防治植物病害己有許多研究報導，但由於這些生防
菌易受外界環境條件的影響，防病效果不理想。近年來研究表明，植物體內存在大量的 對植物病害具有較好防治作用的內生細菌，尤其是對化學藥劑難以發揮作用的植物土傳 病害、維管束病害和系統性病害的防治更顯示其獨特的優勢。這些內生細菌定殖於植物 體內，不易受外界環境的影響，可長期持續作用，而且許多內生細菌具有固氮、促生、 抗旱等生物功能，具有良好開發利用前景。目前已從水稻、棉花、玉米、馬鈴薯等植物 體內篩選出多種對植物病害有較好防治效果的內生細菌，但對楊樹的內生細菌的研究相 對較少。吡咯伯克霍爾德氏菌在目前的分類地位上隸屬于洋蔥伯克霍爾德氏菌。洋蔥伯克氏 菌(5wr狄oWen'ace;wc/fl，簡稱Bc)是一種廣泛存在於農業環境和醫院的革蘭氏陰性細 菌，是一組基因型不同表型相近的複合物CBwr狄oWm'crcepac/acomplex,簡稱Bcc)，現 被國際上劃分為9個基因型，合稱洋蔥伯克氏菌群(Bcc)。由於該菌最初是是作為洋蔥腐 爛病的病原菌發現的，所以被稱為洋蔥假單胞菌(Psmto7womwce/7flc&)， 1993年被歸到伯 克霍爾德氏菌屬CB^MoWm'fl)。目前，Bcc的9個基因型，除基因型I保留原名以外，基 因型II 一 K都重新命名，它們分別為及wi/Wvora/w 、及cewocepadfl 、及Wa6/fc 、 及v/e/"fl附/e"^、及f/o/aya、 5.cww6的r/a、及a"Ai"a、 _S./7>7rocz'"/fl (Vandamme et al.， 1997、 2002、 2003;Coenyeeta1., 2001、 2001)。 Bcc的某些基因型是引起囊性纖維化(CF)的重 要條件致病菌，也是醫院感染的重要病原菌之一；基因型II、 III類菌最具傳染性；Butler 等研究發現，弓l起CF患者死亡的Bcc與環境中分離的Bc無一基因型相同，同時Pegues等 也發現存在於環境和CF患者的Bc非同一流行株。Bcc的九種基因型中，只有基因型IX (醜/^rroc/"/a)是唯一只在野外分布的基因型，該基因型未在醫院和病人身上分離到。 研究還表明，5.c印"c7'a的一些基因型具有防治植物病害和促進植物生長的作用。作為生 防菌，Bc被製成生物殺蟲劑和生物殺菌劑，能代替部分農業生產中常用的化學農藥，它 在農業生產和環境保護方面起著重要的作用。目前有不少國家在生產和使用以Bc為原料-製成的生物農藥。但以Bc為材料來防治楊樹潰瘍病未見報導。
由於農業生產中微生物農藥使用的增多以及在已經登記的微生物農藥中發現一些 種類是條件致病菌後，微生物農藥的風險評估日益成為全球關注的問題。目前已有一些 比較成熟的動物、植物模型用於生物農藥菌株的生物學分析，來評估這些生防菌對人類 是否存在潛在風險。
苜蓿是一般用於醫院呼吸道感染細菌致病性測定的模式植物。2002年Laura用一種 在CF病人體內常檢測到的病原菌屍犯必附"oos am/g!'mwfl對苜蓿和老鼠分別接種，比較研 究結果發現，苜蓿可以代替老鼠作為模式植物測定該菌對哺乳動物的毒性，甚至苜蓿模 型表現出了比老鼠模型更高的靈敏度(Lauraetal.， 2002)。隨後，Steve對Bcc做了同樣的 比較測試，發現Bcc在苜蓿上的發病率與在老鼠上的結果呈正相關，可以代替老鼠作為 測定Bcc對動物毒性的模式植物(Steveetal.， 2003)。用苜蓿模型可簡單快捷的檢測出Bcc 菌株對哺乳動物是否具有致病性，這為我們在農業和環保中安全利用Bc奠定了堅實的基 礎。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種高效防治楊樹潰瘍病的吡咯伯克霍爾德氏菌。
本發明還要解決的一個技術問題是提供上述吡咯伯克霍爾德氏菌的用途。 為解決上述技術問題，本發明採用的技術方案如下
高效防治楊樹潰瘍病的吡咯伯克霍爾德氏菌(Bwr狄oWen'aJK-SH007， 是一種從楊樹幹部篩選獲得的對楊樹潰瘍病菌具有拮抗作用且具有內生性的生防細菌 菌株，已保藏於中國典型培養物保藏中心CCTCC，保藏號M 209028。
吡咯伯克霍爾德氏菌(5wA"狄o/fifeWa; ,rac/m'fl) JK-SH007在牛肉膏蛋白腖培養基平 板上菌落較小，黃色，直徑一般2-3mm，圓形，邊緣整齊，中間具乳狀突起，光滑溼 潤，產黃色色素，菌體直杆狀，大小為0.8x(l~2) pm，極生一根或三根鞭毛。革蘭氏染 色表現為陰性；葡萄糖氧化發酵反應(0/F反應)結果為氧化產酸、好氧；氧化酶反應 為弱陽性；過氧化氫酶反應為延遲反應。recA基因特異引物鑑定為基因型XI: 5w狄oWm'a; ;7Toc!'m'a。測得16SrDNA大部分序列1312bp,具體如SEQIDNo: 1所示。 將所測16SrDNA序列通過BLAST比對，能在GenBank中找到同源性非常高的相近菌 株序列。與JK-SH007菌株相似性最高的是5w狄oWen力ce/ ada和B"r狄oWer/a pyrrac/m'a，同源性都達到99%。構建進化樹發現，JK-SH007與5w狄oWw/a/^m dm'a 同屬一個遺傳分枝，親緣關係十分接近。
BIOLOG細菌自動鑑定系統以每種細菌形成各自特有的"代謝指紋"圖譜為鑑定依 據，選用四唑紫作為細菌能否利用供試碳源的指示劑，通過細菌對95種不同碳源的代 謝情況鑑定菌種。與傳統方法相比，該系統採用標準化程序，操作簡便，自動化程度高， 鑑定快速，且菌種資料庫大，鑑定範圍廣，包括約2000種微生物，適合於環境、食品、 工業、臨床和動植物病原菌各類微生物的鑑定分析。通過BIOLOG系統對JK-SH007進 行鑑定，該菌株在鑑定板培養16 24h時的讀數相似值(SIM值)為0.661，大於0.50，符 合BIOLOG系統關於理想結果的要求，而且鑑定結果的相似性(PROB)都為99%，因此 該菌株利用BIOLOG系統，準確鑑定到了種，為吡咯伯克霍爾德氏菌(5wr狄oWer/fl
通過recA基因引物(BCR1/BCR2 )PCR對JK-SH007菌株的檢測結果表明，在1000bp 左右出現一條清晰的條帶，進一步確定該菌株屬於Bcc。對該菌株的基因型鑑定通過Bcc 各基因型recA特異引物(缺少基因型IX引物)擴增法進行，各引物對只能識別對應的 基因型。結果表明，所有引物的擴增反應均無特異性條帶出現。據此鑑定JK-SH007菌 株的基因型為IX: 5"r狄oWm'a p> rocz'"/fl 。
上述吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007及其代謝產物對楊樹潰瘍病原金黃殼囊孢菌 (QKas/ o屍fl c/w7j:as/7er;na)、擬莖點黴(iVz附wo;w/s )和七葉樹殼梭孢菌(5o/A7(W/ /zaen'a都具有一定的抑菌作用，因此能夠高效防治楊樹潰瘍病。 並且上述吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007對楊樹還具有促生長的作用。 上述吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007對稻瘟病菌、小麥赤黴菌、肉桂炭疽病菌、辣
椒疫黴菌、瓜果疫黴菌、大豆疫黴菌、蘋果輪紋菌、水稻紋枯病菌、棉花立枯病原真菌
具有拮抗作用。可應用於防治稻瘟病、小麥赤黴病、肉桂炭疽病、辣椒疫黴病、瓜果疫
黴病、大豆疫黴病、蘋果輪紋病、水稻紋枯病和花立枯病。
上述吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007產生抑菌物質最多的最佳發酵條件如下 培養基每1000mL蒸餾水，含牛肉膏2 5g，蛋白腖2 5g，氯化鈉5g， ， pH6~7。 工藝條件為pH6~7，通氣量1: 1， 28°C~30°C，搖床轉速180-200轉/分，48~60小時。
通過上述發酵工藝得到的發酵液即為一種微生物殺菌劑。該發酵液直接施加到土壤 中對植物進行灌根處理即可發揮其殺菌作用。
有益效果
(1) 吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007為植物內生菌，對楊樹潰瘍病菌抑制作用強， 對多種病原真菌具有拮抗作用，具有拮抗細菌在植物病害生物防治中所起到的非常重要 的作用，例如種類和數量眾多，在植物體內外大量存在對病原菌的作用方式多樣化； 繁殖速度快；在植物體內外定殖力強；能夠人工培養，易於操作，便於生產應用；促進 植物的生長等優點，尤其是對楊樹潰瘍病的防治具有重要意義。
(2) 吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007培養條件簡單、容易保存，易於工業化生產， 具有良好的開發應用前景。
吡咯伯克霍爾德氏菌(￡t "it/wWen'a/7>7roc/m'a) JK-SH007,巳保藏於中國典型培養 物保藏中心CCTCC，保藏號M 209028，保藏日2009年2月18日。 圖1吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007對楊樹的促生長作用照片。 圖2吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007對楊樹潰瘍病溫室防治照片。
具體實施例方式
根據下述實施例，可以更好地理解本發明。然而，本領域的技術人員容易理解，實 施例所描述的具體的物料配比、工藝條件及其結果僅用於說明本發明，而不應當也不會 限制權利要求書中所詳細描述的本發明。
實施例l:吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007對楊樹潰瘍病原金黃殼囊孢菌(C^o^wra
c/w7SOS/ er附a)、擬蓮點黴(iVwWK)/W/S 5p.)、七葉樹殼梭孢菌(FMS/COCCW/M aeSCt/")平板抑菌作用。
將用NA斜面活化的吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007菌株劃線接種於PDA平板兩側， 再將楊樹潰瘍病病原菌PDA平板培養物用直徑5mm的打孔器打取同質同量的菌塊，點接 於平板中間。28'C培養4天觀察抑菌帶的有無，並記錄其寬度(表l)。試驗結果表明， JK-SH007對三種病原菌均有強拮抗作用。
表1 JK-SH007對3種楊樹潰瘍病病原菌的抑制
抑菌帶(mm)
處理
金黃殼囊孢菌擬莖點黴七葉樹殼梭孢菌
JK-S聽721.9820.6718.79
對照CK000
實施例2:吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007的代謝產物對3種楊樹潰瘍病原菌(包括擬莖點 黴(/Vwmo/w/s 5/ .)、金黃殼囊孢菌(C少fasporfl c/iAj^KW^eAvna)、七葉樹殼梭孢菌 (屍咖'cocc謂aescw//))的平板抑菌作用。
在PDA平板上鋪上無菌玻璃紙，塗布接種吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007， 30'C培養 48小時，揭去玻璃紙，再分別在平板中央接種病原菌，28'C培養。以不接生防菌對照， 待對照菌絲長滿平板後，觀察拮抗活性，並統計抑菌率(表2)。試驗結果表明，JK-SH007 代謝產物對三種病原菌均有強拮抗作用。
表2 JK-SH007的代謝產物對3種病原菌的抑制
處理金黃殼囊孢菌(ram)擬莖點黴(mm)七葉樹殼梭孢菌(mm)
JK-S誦7566
對照CK787579
《 O、 嫌 乾10098.5798.65
實施例3:吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007對美洲黑楊實生苗150天的促生長情況。
將吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007接種於NB培養基發酵48小時，用該菌株48小 時發酵液浸泡美洲黑楊種子3小時，無菌水衝淨後，進行播種。以無菌水浸泡種子為對 照。苗高15cm定苗，每盆4株，150天後測量苗高、地徑。與對照相比，接種JK-SH007 發酵液能夠顯著的促進實生苗的生長(表3)。與對照(CK)相比，接種JK-SH007的 處理在地莖和苗高上差異顯著，促生效果明顯，見圖l。
7表3 JK-SH007對楊樹實生苗生長的影響
菌株地徑(cm)苗高(cm)
JK-S腳75.37a38.65a
對照CK2.56b24.75b
注P<0.05
吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007內生性試驗。
將用利福平(300微克/毫升)標記過的吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH0Q7接種於NB培 養基發酵48小時，用該菌株48小時發酵液浸泡美洲黑楊種子3小時，無菌水衝淨後，進 行播種。以無菌水浸泡種子為對照。苗高15cm定苗，每盆4株，30天後分別採集楊樹苗 的葉子和幹部0.5克，將其表面消毒後，力卩2mL無菌水研磨，分別塗布於利福平(300微 克/毫升)的NA平板。3(TC培養4天，觀察平板是否有吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007菌 落長出。結果表明，葉子和幹部均能回收到吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007。這說明 JK-SH007能在楊樹體內較長時期存在，其具有內生性。
實施例5:吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007對溫室盆栽苗楊樹潰瘍病的防治情況。
用打孑L器分另U在金黃殼囊孢菌(Qytospora c/w^so5per附a)、擬莖點黴(_P/ww"o/w& ^.)、七葉樹殼梭孢菌(Fmw'cocowj flMC"//)菌落邊緣處均勻打孔，獲得大小、生長速 度一致的菌絲塊。接種的楊樹苗用單面的手術刀片分別在苗幹離地面1米處和離地面 1.5 2米處做燙傷處理，然後在燙傷處斜切一小傷口，用鑷子分別將3種病原菌菌絲塊 輕輕放在切好的傷口部位，用封口膜將菌絲塊固定在樹皮下的傷口內，並放上一小塊帶 有無菌水的棉球保溼。病原菌接種後用JK-SH007液體殺菌劑(109cfii/mL)進行楊樹苗 土壤灌根處理，每株50mL。共設3個處理(Th接種金黃殼囊孢菌及JK-SH007、 T2: 接種擬莖點黴及JK-SH007、 T3:接種七葉樹殼梭孢菌及JK-SH007)，每處理30個重複， 以無菌水灌根為對照(CK1:接種金黃殼囊孢菌、CK2:接種擬莖點黴、CK3:接種七 葉樹殼梭孢菌)，另外設一個不接病原菌，以無菌水土壤灌根對照(CK)，以校正發病 率，每對照同樣30個重複。
上述JK-SH007液體殺菌劑按如下方法製得培養基牛肉膏5g，蛋白腖5g，氯化鈉 5g，蒸餾水1000mL， pH6~7。工藝條件為pH6，通氣量l: 1， 28°C，搖床轉速200轉 /分，60小時。
l個月後調查發病情況，結果如表4所示。大部分用JK-SH007液體殺菌劑處理過 的苗木接種口癒合，對照病原菌大部分接種口及周圍產生黑色子實體及金黃色分生孢子 角，個別嚴重者整株死亡。說明接種吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007能很好的防治楊樹
8潰瘍病的發生。對金黃色殼囊孢菌引起的楊樹潰瘍病的防治效果見圖2(A、示對照的發 病情況子實體B、示對照的發病情況金黃色的分生孢子角C、示接種JK-SH007後
沒發病的健康組織)。
表4室內楊樹潰瘍病防治效果處理髮病率(％)感病指數防治效果(％)
Tl103.56卯.23
CK16536.42/
T283.1292.68
CK25728.98/
T313582.81
CK36030.83/
實施例6:吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007對洋蔥致病性測定。
致病性測定參照Sijam等(2005)的方法，用注射器取吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007 菌懸液(lX107~108cfU/mL)在洋蔥鱗莖上兩點對稱注射(深度為1~2 cm)，每點注射 量為lmL。以滅菌水處理為對照。所有處理均重複3次，置於26'C培養，4~5天後檢 査結果。洋蔥鱗莖接種試驗表明，注射接種JK-SH007不引起洋蔥鱗莖的腐爛，只是在 接種處稍有乾癟凹陷。以上說明吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007不是植物病原細菌，對 植物具有安全性。
實施例7:吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007對稻瘟病菌、小麥赤黴菌、肉桂炭疽病菌、 辣椒疫黴菌、瓜果疫黴菌、大豆疫黴菌、蘋果輪紋菌、水稻紋枯病菌、棉花立枯病菌平 板抑菌作用。
表5 JK-SH007對部分病原菌的抑制 抑菌帶(mm)
JK-SH007 25.27 21.46 23.28 15.35 16.42 17.24 12.15 17.52 16.54 對照CK 000000000
將用NA斜面活化的吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007細菌菌株劃線接種於PDA平板 兩側，再將稻瘟病菌、小麥赤黴菌、肉桂炭疽病菌、辣椒疫黴菌、瓜果疫黴菌、大豆疫 黴菌、蘋果輪紋菌、水稻紋枯病菌、棉花立枯病菌的PDA平板培養物用直徑5mm的打 孔器打取同質同量的菌塊，分別點接於平板中間。28'C培養4天觀察抑菌帶的有無，並
花枯菌
棉立病
稻枯菌
水紋病
果紋
蘋輪
豆黴
大疫
菌
菌
身署音
l ^富
狹群
插霧
辣疫
菌
桂疽菌
肉炭病
麥黴
小赤
菌
瘟菌
稻病
理
處記錄其寬度(表5)。試驗結果表明，JK-SH007對9種病原菌均有較強拮抗作用，抑菌 斑均在15mm以上。
實施例8:吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007對苜蓿的接種試驗。
將JK-SH007接種到NB培養基中，3(TC下震蕩(150mrp)培養24h，用無菌水調節菌 懸液濃度到109左右用於接種。用Laura的方法來準備要接種的苜蓿種子(Laura et al.，
2002) 。將紫花苜蓿種子用98%濃硫酸浸泡20分鐘(約10ml浸300顆種子)，用500mL 滅菌水清洗4次，然後泡在60mL滅菌水中，32'C下震蕩(150prm)浸種6 8小時，再清 洗2次，換水後同樣條件培養過夜。次日再用滅菌水清洗2次後(每次60mL水)，用無 菌鑷子擺放到1%的水瓊脂平板上等待接種，每皿擺放20顆種子。將水瓊脂平板上的苜 蓿種子用接種針在子葉上判一.個小孔，取20mL準備好的菌懸液點在傷口處，每菌株接 種3個重複，每重複20顆種子，設2種CK處理，其中l個不作任何處理，另l個針刺 接種無菌水。接種後的種子在37'C、 70%相對溼度、定時光照(12h光照，12h黑暗)條 件的人工氣候箱中培養，7天後檢査發病率。
苜蓿接種結果顯示，無論是CK還是接種處理，均無發病症狀(接種點附近壞死、 黃化和根畸)出現。苜蓿是代替老鼠作為測定Bcc對動物毒性的模式植物(Steve et al.，
2003) ，用苜蓿模型可簡單快捷的檢測出Bcc菌株對哺乳動物是否具有致病性。上述試驗 結果說明吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007對哺乳動物沒有毒害性。SEQUENCE LISTING
〈110〉南京林業大學
〈120> —種吡咯伯克霍爾德氏菌及其在防治楊樹潰瘍病中的應用 〈130〉 njfu090222 〈160> 1
<170〉 Patentln version 3.3
1 〈211〉 1312 〈212> DNA
〈213> 吡咯伯克霍爾德氏菌(Burkholderia pyrrocinia) 〈400〉 1 '
ttacacatgc aagtcgaacg gcagcacggg tgcttgcacc tggtggcgag tggcgaacgg 60 gtgagtaata catcggaaca tgtcctgtag tgggggatag cccggcgaaa gccggattaa 120 taccgcatac gatctacgga tgaaagcggg ggaccttcgg gcctcgcgct atagggttgg 180 ccgatggctg attagcteigt tggtggggta aaggcctacc aaggcgacga tcagtagctg 240 gtctgagagg acgaccagcc acactgggac tgagacacgg cccagactcc tacgggaggc 300 agcagtgggg aattttggac aatgggcgaa agcctgatcc agcaatgccg cgtgtgtgaa 360 gaaggccttc gggttgtaaa gcacttttgt ccggaaagaa atccttggtt ctaatatagc 420cgggggatga cggtaccgga agaataagca ccggctaact acgtgccagc agccgcggta 480
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gtcctcatgg cccttatggg tagggcttca cacgtcatac aatggtcgga acagagggtt 1200
gccaacccgc gagggggagc t幼tcccaga aaaccgatcg tagtccggat tgcactctgc 1260
aactcgagtg catgaagctg gaatcgctag taatcgcgga tcagcatgcc gc 1312
1權利要求
1、一種吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007，其分類命名為吡咯伯克霍爾德氏菌(Burkholderia pyrrocinia)，已保藏於中國典型培養物保藏中心CCTCC，其保藏編號是M 209028，保藏日期2009年2月18日。
2、 權利要求1所述的吡咯伯克霍爾德氏菌在防治楊樹潰瘍病中的應用。
3、 權利要求1所述的吡咯伯克霍爾德氏菌在促進楊樹生長中的應用。
4、 一種防治楊樹潰瘍病殺菌劑，其特徵在於該殺菌劑按如下方法製備將吡咯伯 克霍爾德氏菌(5MHyioWe〃'fljo^radm'a) JK-SH007接種於培養基中，pH6~7，通氣量l: 1， 28°C~30°C，搖床轉速180~200轉/分，48~60小時，得到的發酵液即為防治楊樹潰瘍 病殺菌劑。
5、 根據權利要求4所述的防治楊樹潰瘍病殺菌劑，其特徵在於所述培養基中，各 物質含量如下每1000mL蒸餾水，含牛肉膏2 5g，蛋白腖2 5g，氯化鈉5g， pH6~7。
6、 權利要求1所述的吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007在防治稻瘟病菌、小麥赤黴病 菌、肉桂炭疽病菌、辣椒疫黴病菌、瓜果疫黴病菌、大豆疫黴病菌、蘋果輪紋病菌、水 稻紋枯病菌、棉花立枯病中的應用。
全文摘要
本發明公開了一株吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007，其分類命名為吡咯伯克霍爾德氏菌(Burkholderia pyrrocinia)，已保藏於中國典型培養物保藏中心CCTCC，其保藏編號是M 209028，保藏日期2009年2月18日。本發明還公開了上述吡咯伯克霍爾德氏菌在防治楊樹潰瘍病中的應用和在促進楊樹生長中的應用。本發明還提供了一種防治楊樹潰瘍病殺菌劑，即將JK-SH007接種於培養基中發酵培養所得。本發明的JK-SH007為植物內生菌，對楊樹潰瘍病菌抑制作用強，對多種病原真菌具有拮抗作用，且培養條件簡單、容易保存，易於工業化生產，具有良好的開發應用前景。
文檔編號C12N1/20GK101555458SQ200910025880
公開日2009年10月14日 申請日期2009年3月12日 優先權日2009年3月12日
發明者任嘉紅, 葉建仁, 吳小芹, 王豔芳 申請人:南京林業大學