一種高效液相色譜法分離分析阿魏酸丁酸甘油酯的方法
2023-12-10 13:10:17 3
專利名稱：一種高效液相色譜法分離分析阿魏酸丁酸甘油酯的方法
技術領域：
本發明屬色譜分離領域，特別是涉及一種高效液相色譜法(HPLC)分離分析阿魏酸 丁酸甘油酯的方法。
背景技術：
阿魏酸丁酸甘油酯是天然酚酸類物質阿魏酸(Ferulic acid)的衍生物，它是阿魏酸乙 酯與三丁酸甘油酯(tributyrin， TB)通過轉酯反應生成的阿魏酸單丁酸甘油酯、阿魏酸雙 丁酸甘油酯及阿魏酸甘油酯的混合物，它們都具有阿魏酸與丁酸諸多的生理活性，同時克 服了由於其垸烴鏈短而無法在油脂工業中應用的弊端，因而可以在食品、藥品及化妝品行 業得到廣泛的應用。將脂溶性較強的三丁酸甘油酯和水溶性較強的阿魏酸乙酯合成阿魏酸 丁酸甘油酯，不僅可以達到相互保護，降低氧化變性水平，提高它們的化學穩定性，而且 還可以通過新型的雙功能分子達到彼此增強原有療效的雙重目的。然而由於其反應過程難 以控制，且生成的混合物極性相似，甚至存在同分異構體的現象，在分析分離的過程中難 以找到合適的分離條件，給研究者帶來了極大的困擾，並阻礙了對這些化合物性質的研究。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種高效液相色譜(HPLC)法分離分析阿魏酸丁 酸甘油酯的方法，該方法快速，高效，準確，便於工業應用分析。
本發明的一種高效液相色譜(HPLC)法分離分析阿魏酸丁酸甘油酯的方法，包括
(1) 預處理
在亞硫醯氯SOCl2 (3 mL)催化下，阿魏酸(l-5g)與無水乙醇(10-50mL)於60—80。C 鵬下回流加熱反應後，溶於乙醚(10—30mL)，飽和碳酸氫鈉萃取，室溫靜止析出結晶，得阿 魏酸乙酯；
在30 5(TC溫度下，以5mL叔丁醇為反應介質，將1 2.0mmoL純化的阿魏酸乙酯、 2-4.0mmoL丁酸甘油酯和100 150mgNovozym435脂肪酶，在搖床轉速150—210rpm，空 氣浴振蕩反應80 120h，再經後處理，得到不同形式阿魏酸丁酸甘油酯；
取上述阿魏酸丁酸甘油酯1 mg溶於1 mL甲醇，通過0.45 pm孔徑的微孔濾膜過濾後， 再取10nL，用HPLC級甲醇稀釋至lmL，待用；
(2) 分離分析
採用的色譜柱(Ph-3 column Inertsil，ID x 250 mm)，柱溫為室溫。固定相採用矽膠填 料，紫外檢測波長為280 325nrn;流動相為甲醇與水的梯度混合，梯度洗脫程序0—5min內保持50X甲醇，5 — 15min 內甲醇濃度從50 %逐漸變成100 % ，保持10min; 進樣量5|jL，流速lmL/min。
所述的步驟(1)中阿魏酸乙酯與丁酸甘油酯、叔丁醇的體積用量比為l: 1-3: 5。 所述的步驟(1)中後處理是通過過濾除去脂肪酶，旋轉蒸發除去反應介質，用體積
比為4: 1的無水乙醚/正己垸抽提未反應的三丁酸甘油酯，氮氣吹掃除去反應體系殘餘的
有機介質。
所述的步驟(2)中所述的步驟(2)中紫外檢測波長為325nm。 所述的步驟(2)中固定相採用苯基inertsilph-3鍵合的矽膠填料。 本發明利用高效液相色譜法對阿魏酸丁酸甘油酯進行分離分析，根據待分離物質的性
質選擇色譜柱填料和特定紫外掃描波長，利用阿魏酸在325nm處有紫外吸收，而此波長處
對其它物質沒有紫外吸收，且能與特定苯基(inertsilph-3)鍵合的矽膠柱有緊密結合的特點，
達到快速準確分離混合物的目的。
有益效果
(1) 本發明方法大大簡化物質的分離純化步驟，減少實驗次數，快速、高效；
(2) 與傳統方法相比較，高效液相色譜與特殊填料的苯基柱聯用分析方法簡單快捷，適 合工業化生產中定性定量分析時間，可以應用於酚酸類衍生物的分離純化過程。
圖1為本發明高效液相色譜法對阿魏酸丁酸甘油酯的分離純化圖； 圖2為傳統高效液相色譜法對阿魏酸丁酸甘油酯的分離純化圖； 圖3為製備阿魏酸丁酸甘油酯的反應流程圖。
具體實施例方式
下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用於說明本發明 而不用於限制本發明的範圍。此外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之後，本領域技術 人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落於本申請所附權利要求書所限 定的範圍。
實施例1
1.阿魏酸丁酸甘油酯的製備
酶催化反應在25mL的具塞三角瓶中，加入l.OmmoL阿魏酸乙酯，3.0mmoL 丁酸甘油
4酉旨，120mgNovozym435脂肪酶，5mL叔丁醇，5(TC度下空氣浴振蕩150r/min進行反應120h， 通過過濾的方法除去酶。
2. 阿魏酸丁酸甘油酯高效液相色譜法分析的前處理
將通過以上反應的混合物旋轉蒸發除去反應介質異丁醇，用無水乙醚/正己垸(80/20， V/V)抽提未反應的三丁酸甘油酯。最後通過氮氣吹掃的方法除去反應體系的殘餘的有機 介質。取混合產物lmg溶於lmL甲醇中，通過0.45pm孔徑的微孔濾膜過濾，待用。
3. 高效液相色譜法分離分析阿魏酸丁酸混合物
(1) 取lOpL反應樣品，用HPLC級甲醇稀釋至lmL後，通過微量進樣器取5pL樣品加 入到進樣閥。
(2) 流動相條件甲醇與水的梯度混合，0—5min內保持50%甲醇，5 — 15min內甲醇濃 度從50%逐漸變成100%，保持10min。流速為lmL/min。紫外檢測波長325nm。
實施例2
本實例中僅用普遍採用的檢測阿魏酸衍生物的高效液相色譜法，即採用普通C18反相 色譜柱，檢測波長在280nm，其它方法與實施例1相同。
權利要求
1.一種高效液相色譜法分離分析阿魏酸丁酸甘油酯的方法，包括(1)預處理在亞硫醯氯SOCl2(3mL)催化下，阿魏酸(1-5g)與無水乙醇(10-50mL)於60-80℃溫度下回流加熱反應後，溶於乙醚(10-30mL)，飽和碳酸氫鈉萃取，室溫靜止析出結晶，得阿魏酸乙酯；在30～50℃溫度下，以5mL叔丁醇為反應介質，將1～2.0mmoL純化的阿魏酸乙酯、2～4.0mmoL丁酸甘油酯和100～150mg Novozym435脂肪酶，在搖床轉速150-210rpm，空氣浴振蕩反應80～120h，再經後處理，得到不同形式阿魏酸丁酸甘油酯；取上述阿魏酸丁酸甘油酯1mg溶於1mL甲醇，通過0.45μm孔徑的微孔濾膜過濾後，再取10μL，用HPLC級甲醇稀釋至1mL，待用；(2)分離分析採用的色譜柱(Ph-3 column Inertsil，ID×250mm)，柱溫為室溫。固定相採用矽膠填料，紫外檢測；流動相為甲醇與水的梯度混合，梯度洗脫程序0-5min內保持50％甲醇，5-15min內甲醇濃度從50％逐漸變成100％，保持10min；進樣量5μL，流速1mL/min。
2. 根據權利要求1所述的高效液相色譜法分離分析阿魏酸丁酸甘油酯的方法，其特徵在於所述的步驟(1)中阿魏酸乙酯與丁酸甘油酯、叔丁醇的體積用量比為l: 1-3: 5。
3. 根據權利要求1所述的高效液相色譜法分離分析阿魏酸丁酸甘油酯的方法，其特徵在 於所述的步驟(1)中後處理是通過過濾除去脂肪酶，旋轉蒸發除去反應介質，用體積 比為4: 1的無水乙醚/正己垸抽提未反應的三丁酸甘油酯，氮氣吹掃除去反應體系殘餘的有機介質。
4. 根據權利要求1所述的高效液相色譜法分離分析阿魏酸丁酸甘油酯的方法，其特徵在 於所述的步驟(2)中紫外檢測波長為325nm。
5. 根據權利要求1所述的高效液相色譜法分離分析阿魏酸丁酸甘油酯的方法，其特徵在 於所述的步驟(2)中固定相採用苯基inertsilph-3鍵合的矽膠填料。
全文摘要
本發明涉及一種高效液相色譜法分離分析阿魏酸丁酸甘油酯的方法，包括(1)預處理在亞硫醯氯催化下，阿魏酸與無水乙醇回流加熱反應，溶於乙醚，碳酸氫鈉萃取，得阿魏酸乙酯；在30～50℃下，叔丁醇為反應介質，將阿魏酸乙酯、丁酸甘油酯和Novozym435脂肪酶在空氣浴振蕩反應，得阿魏酸丁酸甘油酯；取上述產品溶於甲醇，過濾，再經HPLC級甲醇稀釋；(2)分離分析採用色譜柱(Ph-3 column Inertsil，ID×250mm)，柱溫為室溫。固定相採用矽膠填料，紫外檢測波長280～325nm；流動相為甲醇與水的梯度混合；進樣量5μL，流速1mL/min。本發明方法根據待分離物質的性質選擇色譜柱填料和特定紫外掃描波長，快速、高效、準確，便於工業分析應用。
文檔編號G01N30/50GK101290308SQ200810038660
公開日2008年10月22日 申請日期2008年6月6日 優先權日2008年6月6日
發明者朱利民, 靜 權, 波 蔣, 妍 鄭 申請人:東華大學