一種增強免疫力的組合物及其生產方法與流程
2023-12-08 22:41:26 2
本發明涉及食品、保健食品及藥品領域，尤其涉及一種增強免疫力的組合物及其生產方法。
背景技術：
：免疫力是指機體抵抗外來侵襲，維護體內環境穩定性的能力。空氣中充滿了各種各樣的微生物：細菌、病毒、支原體、衣原體、真菌等等。在人體免疫力不足的情況下，它們都可以成為病原體。雖然人體對不同的病原體會產生相應的抗體，以抵禦再次感染，但抗體具有專一性和時限性，比如鏈球菌抗體只能在較短時期內保護機體不受鏈球菌的再次侵犯，也並不能抵禦其他病毒的感染。現如今，免疫力低下的人群在世界範圍內普遍存在，且人數很多，伴隨人們保健意識的增強，保健食品市場中對維持人體正常免疫功能的產品需求仍然存在。其中，含有中藥組分的藥物組合物，憑藉其相互協同、增強療效、緩和藥性等特點，越來越得到人們的認可和歡迎。能夠增強免疫力的藥物有：人參、黃芪、靈芝、三七、丹參等，但由於每種物質的成分複雜，組合配伍後的功效不確定性很強。人參具有增強免疫力的功能主要是由於其具有稀有人參皂苷等活性物質。自1980年日本學者北川勳發現人參皂苷Rg3以來，全世界眾多研究人員開始關注各種稀有人參皂苷的製備、生物學活性和應用的研究。其中關注度最高的是人參皂苷Rg3和人參皂苷Rh2，三十多年來也取得了巨大的研究成果，其中人參皂苷Rg3已經開發為一類新藥，人參皂苷Rh2也被批准用於保健食品，上市以來產生了巨大的經濟價值和社會價值，除了這兩種稀有人參皂苷以外，還有很多新的稀有人參皂苷在相當長一段時間內並沒有被進行深入的研究，主要原因是這些稀有人參皂苷中的大多數是常見人參皂苷的次級代謝產物，自然界中含量極低，所以很難獲得足夠量的單體供研究之用。現有大量的國內外研究文獻已經證實稀有人參皂苷具有良好的生物學活性，尤其是在增強免疫器官功能、誘導腫瘤細胞凋亡、抑制腫瘤組織新生血管生成等方面具有顯著的作用。但目前稀有人參皂苷的生產成本還是比較高，其主要原因是生產上也沒有找到高效的生產工藝，轉化效率極低，純化難度又比較大，所以原料成本居高不下，所以嚴重限制了應用開發工作。目前紅參作為增強免疫力的滋補品被用作食品和保健食品原料，白參在加工為紅參的過程中可以產生少量的人參皂苷Rg5、人參皂苷Rk1、人參皂苷Rg3和人參皂苷Rh2，但是含量較低。黑參是近些年在韓國興起的一種新型的人參炮製產品，目前還沒有標準化的生產工藝和產品標準，直觀上的界定標準是顏色比紅參更深一些，呈現黑紅色，稀有人參皂苷的含量比紅參更高一些，作為增強免疫力的產品，效果要優於紅參。傳統的九蒸九曝的炮製工藝炮製得到的黑參往往稀有人參皂苷的含量較低；作為改進，申請號為201510317562.3的中國專利公開了一種高含量人參皂苷的黑參的製備方法，雖然一定程度上提高了活性物質人參皂苷的含量，但其工藝需要經過多次超聲等處理，較為繁瑣不適合工業化生產；而申請號為200780016985.5的中國專利公開了黑參、黑參濃縮液及黑參正果的製造方法，引入了乙醇，不僅增加了成本及工序的複雜性，同時生產環境的危險級別也會提高。因此，有必要發明一種工藝簡單且稀有人參皂苷含量高的增強免疫力的組合物及其生產方法。技術實現要素：本發明所要解決的技術問題是：提供一種工藝簡單且稀有人參皂苷含量高的增強免疫力的組合物及其生產方法。為了解決上述技術問題，本發明採用的技術方案為：本發明提供一種增強免疫力的組合物，包括靈芝提取物、黃芪及黑參，所述靈芝提取物、黃芪及黑參的質量比為0.1～0.2∶0.2～0.5∶1；所述黑參為稀有人參皂苷含量佔人參總皂苷質量20％以上的黑參。本發明還提供一種上述增強免疫力的組合物的生產方法，包括以下步驟：步驟1：將人參進行加溼處理後，進行9～11次蒸製和烘乾，製備成黑參，所述蒸製的溫度為104～106℃；步驟2：將靈芝提取物、黃芪及黑參分別進行粉碎，過篩，得粉末狀的靈芝提取物、黃芪粉及黑參粉；步驟3：將步驟2所得的粉末狀的靈芝提取物、黃芪粉及黑參粉按質量比0.1～0.2∶0.2～0.5∶1混合。本發明的有益效果在於：本發明將稀有人參皂苷含量較高的黑參與靈芝提取物和黃芪進行組合配伍，將靈芝提取物作為組合物的原料，提高了靈芝的藥效，同時，人參本身大補元氣易上火，製成黑參後成為組合物原料，藥性變得更溫和，黃芪補虛，靈芝保肝解毒，三者配伍組合能協同增效，扶正固本，經過動物學及志願者口服驗證，本發明的組合物具有顯著增強免疫力的效果，且毒副作用小；本發明的組合物，尤其是對於進行放化療的腫瘤患者，不僅可以增強放化療的治療效果，還可以顯著降低放化療過程中產生的骨髓抑制、胃腸黏膜損傷、睡眠質量降低等副作用；本發明通過對人參進行加溼、反覆蒸製及烘乾製備出稀有人參皂苷含量高的黑參，再將黑參作為組合物原料，進一步提高了組合物的活性物質含量又使得組合物的藥性更溫和，同時組合物的配伍簡單，生產工藝難度小，可大規模生產滿足免疫力低下人群增強免疫力的需求。具體實施方式為詳細說明本發明的技術內容、所實現目的及效果，以下結合實施方式予以說明。本發明最關鍵的構思在於:將人參進行加溼、反覆蒸製及烘乾製成稀有人參皂苷含量高的黑參，並將黑參與黃芪和靈芝提取物進行配伍得到增強人體免疫力組合物。本發明提供一種增強免疫力的組合物，包括靈芝提取物、黃芪及黑參，所述靈芝提取物、黃芪及黑參的質量比為0.1～0.2∶0.2～0.5∶1；所述黑參是稀有人參皂苷含量佔黑參質量20％以上的黑參。從上述描述可知，本發明有益效果在於：本發明將稀有人參皂苷含量較高的黑參與靈芝提取物和黃芪進行組合配伍，將靈芝提取物作為組合物的原料，提高了靈芝的藥效，同時，人參本身大補元氣易上火，製成黑參後成為組合物原料，藥性變得更溫和，黃芪補虛，靈芝保肝解毒，三者配伍組合能協同增效，扶正固本，經過動物學及志願者口服驗證，本發明的組合物具有顯著增強免疫力的效果，且毒副作用小；本發明的組合物，尤其是對於進行放化療的腫瘤患者，不僅可以增強放化療的治療效果，還可以顯著降低放化療過程中產生的骨髓抑制、胃腸黏膜損傷、睡眠質量降低等副作用。進一步的，所述稀有人參皂苷包括人參皂苷Rg3、人參皂苷Rh2、人參皂苷Rk1及人參皂苷Rg5。由上述描述可知，以上稀有人參皂苷已被證實具有均具有良好的生物學活性，尤其是在增強免疫器官功能、誘導腫瘤細胞凋亡、抑制腫瘤組織新生血管生成等方面具有顯著的作用。進一步的，所述黃芪是黃芪甲苷含量佔中藥飲片質量0.1％以上的中藥飲片。從上述描述可知，選用黃芪甲苷含量佔中藥飲片質量0.1％以上的中藥飲片作為組合物的原料之一，在保持黃芪原本藥效的同時簡化組合物生產。進一步的，所述靈芝提取物為靈芝與水的提取物，靈芝提取物為磷脂多糖含量佔靈芝提取物總質量的10％以上的靈芝提取物。從上述描述可知，選用靈芝與水的提取物更加安全，同時，選用磷脂多糖含量佔靈芝提取物總質量的10％以上的靈芝提取物使得藥效更好。本發明還提供一種增強免疫力的組合物的生產方法，包括以下步驟：步驟1：將人參進行加溼處理後，進行9～11次蒸製和烘乾，製備成黑參，所述蒸製的溫度為104～106℃；步驟2：將靈芝提取物、黃芪及黑參分別進行粉碎，過篩，得粉末狀的靈芝提取物、黃芪粉及黑參粉；步驟3：將步驟2所得的粉末狀的靈芝提取物、黃芪粉及黑參粉按質量比0.1～0.2∶0.2～0.5∶1混合。從上述描述可知，本發明的有益效果在於：本發明通過對人參進行加溼、反覆蒸製及烘乾製備出稀有人參皂苷含量高的黑參，再將黑參作為組合物原料，進一步提高了組合物的活性物質含量又使得組合物的藥性更溫和，同時組合物的配伍簡單，生產工藝難度小，可大規模生產滿足免疫力低下人群增強免疫力的需求。進一步的，所述步驟1的具體操作包括以下步驟：步驟a：將人參進行加溼處理，控制人參的含水量為18～22％；步驟b：將含水量為18～22％的人參於104～106℃環境下蒸製55-65min，再於55-65℃環境中烘乾至含水量為18～22％；步驟c：將步驟b重複進行9～10次；步驟d：將步驟c處理後的紅參於104～106℃環境下蒸製55-65min，再於55-65℃環境中烘乾至含水量為9～11％得黑參。從上述描述可知，本發明的黑參製備方法操作簡單，無需引入醇類等，只需水蒸及烘乾，乾淨衛生，同時，製得的黑參稀有人參皂苷含量高。本發明還提供一種增強免疫力的組合物的生產方法，包括以下步驟：步驟1包括以下步驟：步驟a：將人參進行加溼處理，控制人參的含水量為18～22％；步驟b：將含水量為18～22％的人參於104～106℃環境下蒸製55-65min，再於55-65℃環境中烘乾至含水量為18～22％；步驟c：將步驟b重複進行9～10次；步驟d：將步驟c處理後的紅參於104～106℃環境下蒸製55-65min，再於55-65℃環境中烘乾至含水量為9～11％得黑參；步驟2：將靈芝提取物、黃芪及步驟1得到的黑參分別進行粉碎，過篩，得粉末狀的靈芝提取物、黃芪粉及黑參粉；步驟3：將步驟2所得的粉末狀的靈芝提取物、黃芪粉及黑參粉按質量比0.1～0.2∶0.2～0.5∶1混合。從上述描述可知，本發明的黑參製備方法操作簡單，條件易控，無需引入醇類等，只需水蒸及烘乾，乾淨衛生，同時，製得的黑參稀有人參皂苷含量高。本發明還提供一種上述的增強免疫力的組合物的製劑。進一步的，所述製劑由增強免疫力的組合物與藥學上可接受的載體組成，所述製劑的劑型包括硬膠囊、片劑或顆粒劑。由上述描述可知，將本發明的增強免疫力的組合物進一步製成硬膠囊、片劑或顆粒劑，方便根據食用者體重進行量化，食用更加方便。實施例1步驟1：黑參的製備將人參通過加溼，使含水量控制在(20±2)％，然後105℃蒸製1h，60℃烘至含水量(20±2)％，然後再105℃蒸製1h，60℃烘至含水量(20±2)％，反覆10次，顏色逐漸加深，第10次烘乾至含水量10％，即為黑參的成品；步驟2：將靈芝提取物(磷脂多糖含量佔靈芝提取物總質量的10％以上的靈芝提取物)、黃芪(黃芪甲苷含量佔中藥飲片質量0.1％以上的中藥飲片)及步驟1製備的黑參分別進行粉碎，過100目的篩，得粉末狀的靈芝提取物、黃芪粉及黑參粉；步驟3：將步驟2中的粉末狀的靈芝提取物、黃芪粉及黑參粉分別稱取250g、750g及1500g簡單混合後得組合物。本發明組合物的製劑(硬膠囊)，將組合物加入高速混合制粒機中，按照設備操作規程進行操作，轉速300rpm，攪拌15min混合均勻，然後加入適量85％乙醇，繼續攪拌5min至混合均勻得溼顆粒。將顆粒傾入容器內然後均勻鋪在不鏽鋼盤中，厚度3-4cm，轉入熱風循環烘箱中，將溫度控制在60℃±2℃，打開蒸汽排水閥，先排去蒸汽管道中的冷凝水，然後關閉，打開出汽閥，打開進汽閥，打開風機，加熱開始同時記錄溫度，當溫度升至60℃時開始計時，一共乾燥3h，關閉進汽閥門及風機降溫。制粒完成的物料水分控制在0.6％～0.9％。然後用膠囊填充機填充，採用0號膠囊，內容物400mg/粒。製備得到的膠囊的服用劑量為3粒/次，2次/日。黑參粉稀有人參皂苷的含量測定將步驟1所得黑參進行粉碎過100目篩，得到黑參粉末，用80％甲醇超聲提取30分鐘，濾膜過濾(微孔0.45μm，有機系)，待測。HPLC色譜條件：參照2015年版《中華人民共和國藥典》(一部)中人參總皂苷檢測方法，以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑(柱長為25cm，內徑為4.6mm，粒徑為5μm，載碳量11％)；以乙腈為流動相A，以0.1％磷酸溶液為流動相B，按表1中的洗脫條件進行梯度洗脫；柱溫為30℃，流速為1.3mL/min，檢測波長為203mn。理論板數按人參皂苷Re峰計算應不低於6000，按人參皂苷Rd峰計算應不低於200000。HPLC測定結果人參皂苷Rh2、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rk1及人參皂苷Rg5的含量見表2所述。對照例1-4對照例1-3黑參的製備，按照實施例1的方法，將人參通過如下蒸製溫度進行，其他與實施例1相同，得到以下3例黑參，並與實施例1進行對比。樣品蒸製的溫度(℃)對照例185對照例295對照例3115對照例4為市售黑參。對照例1-4所得黑參粉中稀有人參皂苷的含量測定參照實施例1，結果見表2。將靈芝提取物(磷脂多糖含量佔靈芝提取物總質量的10％以上的靈芝提取物)、黃芪(黃芪甲苷含量佔中藥飲片質量0.1％以上的中藥飲片)及對照例4的黑參分別進行粉碎，過100目的篩，得粉末狀的靈芝提取物、黃芪粉及黑參粉，並按實施例1中步驟3的比例混合成組合物，並將本組合物按實施例1的方法製備成硬膠囊。表1HPLC測定稀有人參皂苷的梯度洗脫條件時間(分鐘)流動相A(％)流動相B(％)0～30198130～3519→2481→7635～6024→4076→60表2黑參中稀有人參皂苷的含量測定結果實施例2實驗動物和檢測條件1材料與方法1.1實驗動物和檢測條件實驗用SD大鼠，清潔級，體重60-80g。檢測環境條件，屏障環境，溫度20℃～23℃，相對溼度範圍50％～70％。實驗動物試驗前在動物房環境中適應3天。1.2劑量設計本發明保健食品(配方為實施1中的組合物或膠囊)推薦量為2.4g/60kg·日。實驗設三個劑量組和一個陰性對照組，低、中、高三個劑量分別為1.0g/kg、2.0g/kg、4.0g/kg體重，相當於人推薦量的25倍、50倍和100倍。實驗各劑量組分別將樣品按體重10％折算均勻拌入基礎飼料，以飼料餵養方式給予。低、中、高三劑量組拌入方法：分別取200g、400g、800g供試樣品加基礎飼料至20kg，充分拌勻。低、中、高三劑量組受試物分別佔飼料的1.0％、2.0％、4.0％。1.3實驗方法SD大鼠80隻，隨機分4組，每組20隻，雌雄各半，大鼠單籠飼養，自由進食、飲水。大鼠連續觀察30天，每周記錄體重和進食量並計算實物利用率，實驗結束後禁食過夜，斷頭取血進行血液學檢查和血生化檢查，對每隻大鼠進行臟器大體觀察，同時取肝、腎、脾、胃、腸、睪丸(卵巢)進行病理組織學檢查。2結果：由一般觀察，實驗期間，各組大鼠均未見異常症狀和體徵，也無死亡。對大鼠體重、進食量及總食物利用率、對大鼠血液學包括(HB、RBC、WBC)的影響、對大鼠血生化的影響、對大鼠臟器重和髒體比的影響的試驗結果顯示，與對照組比較差異均無顯著性。對大鼠各臟器病理組織學檢查均未發現明顯異常。結論本發明產品的大鼠30天餵養試驗三劑量組各項指標均未見明顯毒性反應。實施例3細胞免疫功能試驗1試驗材料與方法實驗材料實施例1製備的膠囊及對照例4製備所得膠囊。實驗動物使用ICR小鼠，清潔級，雌性，體重20g～22g。檢測環境條件，屏障環境，溫度20℃～24℃，相對溼度40％～70％。動物於試驗前在動物房環境中適應4天。1.2劑量設計實驗設三個劑量組和陰性對照組(蒸餾水)。實施例3及對照例5樣品低、中、高三個劑量均分別為0.25g/kg、0.5g/kg、1.5g/kg體重，相當於人推薦量的5倍、10倍和30倍(人推薦量為3.0g/60kg·日)三劑量組分別稱取供試樣品1.5g、3.0g和6.0g加蒸餾水至60mL，配製成濃度為0.02g/mL、0.04g/mL、0.12g/mL樣品，灌胃給樣品，灌胃容量按0.1mL/10g體重計。1.3實驗方法按衛生部《保健食品檢驗與評價技術規範》(2003版)，進行ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化試驗，綿羊紅細胞(SRBC)誘導小鼠DTH(足蹠增厚法)，小鼠血清溶血素測定，抗體生成細胞檢測(Jerne改良玻片法)，小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗，小鼠碳廓清試驗，NK細胞活性測定，臟器/體重比值測定進行功能評價。試驗結果見表3。表3實施例1及對照例4膠囊對小鼠免疫功能的影響總體評價表實驗結果分別與陰性對照組(蒸餾水)比較，對照例樣品中、高劑量組均能提高小鼠左後足蹠部24小時與0小時厚度差值和小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的吞噬率，差異均有顯著性；高劑量組能提高小鼠脾淋巴細胞增殖能力，差異有顯著性。而實施例1樣品低、中、高劑量組均能提高小鼠左後足蹠部24小時與0小時厚度差值、血清溶血素抗體積數、溶血空斑數和小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的吞噬率，差異均有顯著性；中、高劑量組能提高小鼠脾淋巴細胞增殖能力，差異有顯著性。實施例1與對照例4比較，淋巴細胞光密度差值、小鼠左後足蹠部24小時與0小時厚度差值、血清溶血素抗體積數、溶血空斑數和小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的吞噬率等均顯著優於對照例4。3實驗結論本發明產品具有增強免疫力功能，且以本發明製備的黑參為原料的實施例1樣品優於以市售黑參為原料的對照例4樣品。實施例4組合物延長S180小鼠生存期實驗1材料與方法1.1材料組合物1(實施例1的組合物)；組合物2(對照例4中的組合物)；環磷醯胺(CTX)，200mg/瓶，海正輝瑞製藥有限公司。實驗動物和細胞系：昆明種小鼠，雌性，體重17g～22g，由中國人民解放軍軍事醫學科學院實驗動物中心提供。Sarcoma180腹水型瘤株(S180)，購自黑龍江省腫瘤醫院腫瘤研究所。1.2方法細胞保存與傳代：自腹腔荷瘤小鼠無菌操作取瘤細胞，經無菌生理鹽水稀釋後無菌操作接種於健康成年小鼠腹腔，每7d傳1代。荷瘤模型製作方法：處死腹腔傳代7天的S180荷瘤小鼠，無菌操作取腹水。滅菌生理鹽水稀釋腹水調整瘤細胞濃度至1×107個/mL，瘤細胞死亡率≤5％。按無菌操作要求將瘤細胞懸液接種於小鼠腹腔，0.2mL/只。腹腔荷瘤細胞生存期實驗：80隻小鼠，隨機分為8組，每組10隻。分組包括腹腔荷瘤模型組，CTX治療組，組合物低、中、高劑量組。CTX位腹腔注射給藥，50mg/kg，連用7天。組合物都在腹腔荷瘤次日起灌胃給藥。組合物1與組合物2的低、中、高劑量均分別為0.35g/kg、0.70g/kg、1.4g/kg；用至死亡前1天。觀察生存期和一般情況。統計學處理：計量資料以均數±標準差(x±s)表示。採用單因素方差分析，組間兩兩比較採用q檢驗。結果組合物1低、中、高劑量組能顯著延長S180小鼠生存期，且優於組合物2及CTX治療組。結果見表4。表4組合物1、2對S180小鼠生存期的影響(n＝10，x±s)註：*、**分別表示在α為0.05、0.01水平顯著。綜上所述，本發明提供的增強免疫力的組合物，通過將稀有人參皂苷含量較高的黑參與靈芝提取物和黃芪進行組合配伍，將靈芝提取物作為組合物的原料，提高了靈芝的藥效，同時，人參本身大補元氣易上火，製成黑參後成為組合物原料，藥性變得更溫和，黃芪補虛，靈芝保肝解毒，三者配伍組合能協同增效，扶正固本，經過動物學及志願者口服驗證，本發明的組合物具有顯著增強免疫力的效果，且毒副作用小；本發明的組合物，尤其是對於進行放化療的腫瘤患者，不僅可以增強放化療的治療效果，還可以顯著降低放化療過程中產生的骨髓抑制、胃腸黏膜損傷、睡眠質量降低等副作用；本發明通過對人參進行加溼、反覆蒸製及烘乾製備出稀有人參皂苷含量高的黑參，再將黑參作為組合物原料，進一步提高了組合物的活性物質含量又使得組合物的藥性更溫和，同時組合物的配伍簡單，生產工藝難度小，條件可控性強，可大規模生產滿足免疫力低下人群增強免疫力的需求。以上所述僅為本發明的實施例，並非因此限制本發明的專利範圍，凡是利用本發明說明書內容所作的等同變換，或直接或間接運用在相關的
技術領域：
，均同理包括在本發明的專利保護範圍內。當前第1頁1 2 3