抗腫瘤試劑及其製備方法以及含有該試劑的飲料和食品的製作方法
2023-12-09 01:51:56
專利名稱：抗腫瘤試劑及其製備方法以及含有該試劑的飲料和食品的製作方法
技術領域：
本發明涉及抗腫瘤試劑、其製備方法及含有該試劑的飲料和食品。更具體地，本發明涉及以曲類等微生物使麥胚芽、米胚芽和大豆胚芽等等發酵所得的抗腫瘤試劑、含有該試劑的飲料和食品及該抗腫瘤試劑的製備方法。本發明廣泛應用於保健食品及疾病治療等。
背景技術：
一直以來，雖然有許多合成化合物的免疫增強劑，但更優選的是即使長時間服用也無毒副作用的天然免疫增強劑。有些天然免疫增強劑及抗腫瘤試劑是已知的(參見專利文獻1至3)。另外，本發明人曾提出使汙濁的血液變純淨的含酶食品(參見專利文獻4)。
專利文獻1特開平6-9421號公報；專利文獻2特開2000-224970號公報；專利文獻3特開2003-335695號公報；專利文獻4特開2001-120203號公報。
然而，現有技術中未知這樣一類天然的抗腫瘤試劑，其能夠(1)使引起腦血栓、腦梗塞及肺血栓栓塞的紅細胞聚集體彼此分離、且呈正圓形，且(2)短時間內修復異常形狀的紅細胞，使之成為正常形狀，從而治療由這些異常形狀的紅細胞所引起的疾病。本發明人進行了大量研究，並根據活血細胞分析法(Live Blood Analysis)進行顯微鏡觀察，發現某些發酵產物使紅細胞聚集體彼此分離、且呈正圓形，並且使白細胞增大並刺激白細胞的活動。因此，所述發酵產物不僅能預防腦血栓、腦梗塞及肺血栓栓塞，並且能增強免疫力。在該發現的基礎上開發出了本發明的抗腫瘤試劑。另外，本發明的抗腫瘤試劑能在短時間內修復異常形狀的紅細胞，使之成為正常形狀，從而治療各種相關疾病。
在大鼠體外實驗中發現本發明的抗腫瘤試劑具有抗腫瘤效果。更特別地，通過活血細胞分析法發現本發明的抗腫瘤試劑不僅可用於腫瘤免疫，還能提供廣泛的免疫增強作用，從而對多種疾病有效。
發明內容
本發明提供通過使米胚芽、麥胚芽和大豆胚芽發酵得到的抗腫瘤試劑，含有該試劑的飲料和食品以及該抗腫瘤試劑的製備方法。本發明的抗腫瘤試劑能夠(1)增強對腫瘤的免疫力，(2)增強白細胞活性，從而增強對腫瘤以外的各種疾病的免疫力，(3)溶解血液中的尿酸結晶及其類似物，及(4)短時間內修復異常紅細胞，使之成為正常形狀，從而治療由異常形狀的紅細胞引起的各種疾病。
本發明提供1、通過將含有至少一種選自麥胚芽、大豆胚芽及米胚芽的物質的原料用一種或多種選自曲類(leaven)、酵母及乳桿菌的微生物進行發酵得到的抗腫瘤試劑。
2、如上述第1項所述的抗腫瘤試劑，其中所述試劑使至少一種給藥前已經存在的選自紅細胞聚集體、棘紅細胞、靶形紅細胞、紅細胞粘連、鈍鋸齒狀紅細胞、小紅細胞、大紅細胞、溶血紅細胞、鏈狀排列的紅細胞、卵形紅細胞及被自由基損傷的紅細胞的異常紅細胞在使用後變為正圓形，且各紅細胞呈彼此分離的狀態。
3、如上述第1項或第2項所述的抗腫瘤試劑，其中所述試劑給藥後使血液中的白細胞直徑變為正常紅細胞直徑的2.2倍或更高。
4、如上述第1項或第2項所述的抗腫瘤試劑，其能消除血液中的尿酸結晶。
5、如上述第3項所述的抗腫瘤試劑，其能消除血液中的尿酸結晶。
6、如上述第1項或第2項所述的抗腫瘤試劑，其還表現出至少一種附加效果，所述效果選自緩解關節痛、增強肝臟機能、縮小子宮肌瘤、減少癌細胞、降低膽固醇、降低中性脂肪及治療特應性皮炎。
7、如上述第3項所述的抗腫瘤試劑，其還表現出至少一種附加效果，所述效果選自緩解關節痛、增強肝臟機能、縮小子宮肌瘤、減少癌細胞、降低膽固醇、降低中性脂肪及治療特應性皮炎。
8、如上述第4項所述的抗腫瘤試劑，其還表現出至少一種附加效果，所述效果選自緩解關節痛、增強肝臟機能、縮小子宮肌瘤、減少癌細胞、降低膽固醇、降低中性脂肪及治療特應性皮炎。
9、如上述第5項所述的抗腫瘤試劑，其還表現出至少一種附加效果，所述效果選自緩解關節痛、增強肝臟機能、縮小子宮肌瘤、減少癌細胞、降低膽固醇、降低中性脂肪及治療特應性皮炎。
10、含有和使用上述第1項或第2項所述的抗腫瘤試劑的飲料和食品。
11、含有和使用上述第3項所述的抗腫瘤試劑的飲料和食品。
12、含有和使用上述第4項所述的抗腫瘤試劑的飲料和食品。
13、含有和使用上述第5項所述的抗腫瘤試劑的飲料和食品。
14、含有和使用上述第6項所述的抗腫瘤試劑的飲料和食品。
15、含有和使用上述第7項所述的抗腫瘤試劑的飲料和食品。
16、含有和使用上述第8項所述的抗腫瘤試劑的飲料和食品。
17、含有和使用上述第9項所述的抗腫瘤試劑的飲料和食品。
18、上述第1項或第2項中所述的抗腫瘤試劑的製備方法，包括如下步驟(1)將至少一種選自麥胚芽、大豆胚芽及米胚芽的物質在50至150℃用蒸汽加熱，或者將所述物質在50至150℃烘焙後用蒸汽加熱；及(2)將所得的蒸汽加熱產物用至少一種選自曲類、酵母及乳桿菌的微生物進行發酵。
19、如上述第18項所述的抗腫瘤試劑的製備方法，還包括用60至100℃的熱水處理所得的發酵產物的步驟。
20、上述第9項所述的抗腫瘤試劑的製備方法，包括如下步驟(1)將至少一種選自麥胚芽、大豆胚芽及米胚芽的物質在50至150℃用蒸汽加熱，或者將所述物質在50至150℃烘焙後用蒸汽加熱；及(2)將所得的蒸汽加熱產物用至少一種選自曲類、酵母及乳桿菌的微生物進行發酵。
21、如上述第20項所述的抗腫瘤試劑的製備方法，還包括用60至100℃的熱水處理所得的發酵產物的步驟。
附圖的簡要說明
圖1所示為本發明抗腫瘤試劑對人A4573尤因氏肉瘤(Ewing’ssarcoma)的抗腫瘤效果。
圖2所示為本發明抗腫瘤試劑對小鼠黑瘤B16細胞的抗腫瘤效果。
圖3所示為用本發明抗腫瘤試劑接種後的小鼠的體重變化。
圖4所示為在攝取本發明抗腫瘤試劑的小鼠皮下接種的B16細胞的增殖情況。
圖5所示為攝取本發明抗腫瘤試劑的小鼠皮下接種B16細胞後的存活天數。
圖6所示為攝取本發明抗腫瘤試劑的小鼠尾靜脈接種B16後的體重變化。
圖7所示為尾靜脈接種B16細胞19天後的小鼠肺轉移細胞(pulmonary metastasis)數。
圖8所示為尾靜脈接種B16細胞22天後的小鼠肺轉移細胞數。
圖9所示為存在棘紅細胞的紅細胞聚集體的照片。
圖10所示為各血細胞彼此分離、呈正圓形，且不含棘紅細胞的狀態的照片。
圖11所示為血液中的紅細胞為棘紅細胞的照片。
圖12所示為血液中各紅細胞彼此分離、呈正圓形，不含棘紅細胞，且白細胞大小為紅細胞的3倍或以上的狀態的照片。
圖13所示為血液中的紅細胞呈靶形及卵形紅細胞狀態的照片。
圖14所示為血液中的靶形紅細胞及卵形紅細胞變為正常紅細胞狀態的照片。
圖15所示為紅細胞產生聚集且存在尿酸結晶及黴菌的狀態的照片。
圖16所示為血液中的各紅細胞彼此分離、呈正圓形，且尿酸結晶溶解，黴菌消失，白細胞變大的狀態的照片。
圖17所示為血液中明顯存在紅細胞聚集體，且白細胞尺寸很小並為紅細胞所包圍的狀態的照片。
圖18所示為血液中的紅細胞聚集體消失，各血球彼此分離、呈正圓形的正常狀態的照片。
圖19所示為血液中的紅細胞產生聚集，且一幅畫面中存在3個白細胞(粒細胞)的狀態的照片。
圖20所示為血液中各紅細胞彼此分離、呈正圓形，淋巴B細胞為變大的活化狀態的照片。
本發明優選實施方案下面對本發明進行詳細的描述。
抗腫瘤試劑(發酵產物)本發明的抗腫瘤試劑對作為原料的麥胚芽、大豆胚芽及米胚芽的種類並無特別限制。例如，所述麥胚芽可使用大麥、小麥、薏仁(adlay)、裸麥及燕麥等等中任一種的麥胚芽。也可結合使用其中兩種或更多種類型的麥胚芽。現在已知的大豆種類約為200種，其中任一種的胚芽都可使用。例如可使用黑豆、丹波赫豆及青豆等等中任一種的大豆胚芽。也可結合使用其中兩種或更多種類型的大豆胚芽。另外，米胚芽也可為任意種類的米的胚芽。例如，可使用長粒種(long-grain type)、中粒種及短粒種中任一種的米胚芽。另外，也可結合使用其中兩種或更多種類型的米胚芽。而且，可單獨使用麥胚芽、大豆胚芽或米胚芽，也可結合使用其中兩種或更多種。另外，可適當選擇上述原料的配合比例。例如麥胚芽∶大豆胚芽∶米胚芽的重量比可為1∶1∶1。上述原料的重量配比優選麥胚芽∶大豆胚芽∶米胚芽等於3-6∶3-6∶2-5，更優選4-6∶4-6∶3-5，特別優選5-6∶5-6∶4-5，最優選5∶5∶4。在上述範圍內，容易發酵得到具有優異性能的抗腫瘤試劑。
上述原料中，可再添加至少一種選自薏仁、大豆及糙米的物質。添加該物質時，原料的發酵效率提高，並且促進了原料分子量的降低，從而使所述抗腫瘤試劑更容易在體內吸收。該物質可直接添加，也可以破碎狀或粉末狀添加。以添加後的原料總重量為100％，該物質的添加比例優選為5-60％重量比，更優選為5-50％，特別優選為10-40％。添加比例在上述範圍內時，發酵效率提高。
使用一種或多種選自曲類、酵母及乳桿菌的微生物對上述原料進行發酵。所用曲類能使上述原料發酵即可，並無特別的限制。可使用米麴黴(Aspergillus oryzae)及醬油麴黴(Aspergillus sojae)等曲類。可僅使用一種曲類，也可結合使用兩種或更多種曲類。其中，優選使用米麴黴。
另外，所述酵母的種類只要能發酵上述原料即可，並無特別的限制。可使用釀酒酵母(Saccharomyces cerevisie)及魯氏酵母(Saccharomycesrouxii)等。可僅使用所述酵母中的一種，也可同時使用兩種或以上。這些酵母中，優選使用釀酒酵母。
另外，所述乳桿菌的種類能發酵上述原料即可，並無特別的限制。例如，乳桿菌可使用植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、唾液乳桿菌(Lactobacillus salivarius)、短乳桿菌(Lactobacillus brevis)、乾酪乳桿菌(Lactobacillus casei)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、瑞士乳桿菌(Lactobacillus helveticus)、乳酸鏈球菌(Streptococcus lactis)、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)及糞腸球菌(Enterococcus faecalis)等。可僅使用這些乳桿菌中的一種，也可結合使用兩種或更多種乳桿菌。這些乳桿菌中，優選使用植物乳桿菌、唾液乳桿菌、短乳桿菌、乾酪乳桿菌及嗜酸乳桿菌。
可同時培養所述曲類、酵母及乳桿菌中的兩種或更多種，或用其進行發酵。
在50至150℃對所述原料進行蒸汽加熱，優選60至140℃，更優選70至130℃，最優選80至120℃。因為50℃以下時，胚芽中的澱粉或蛋白質等沒有充分變性為適合發酵的形式。而在150℃以上時，胚芽中的後來成為抗腫瘤試劑的有效成分容易分解。
所述蒸汽加熱的方法並無特別限制，雖然可使用常規裝置，但通常使用高壓滅菌釜。蒸汽加熱的時間並無特別的限制，但優選30至500分鐘，更優選50至480分鐘，特別優選70至460分鐘。如果加熱時間少於30分鐘，則蒸汽加熱可能不充分，而500分鐘以上時則必要成分可能會分解。
在蒸汽加熱前，也可對所述原料進行烘焙。所述烘焙方法並無特別的限制，可使用公知的方法。其中，優選使用遠紅外線進行烘焙。烘焙時間為30至500分鐘，優選50至480分鐘，更優選70至460分鐘。因為30分鐘以下時不能充分烘焙而使發酵效率降低，而500分鐘以上時則必要成分會分解。
通常，優選將蒸汽加熱後或先烘焙再蒸汽加熱後的原料冷卻至20至50℃，更優選23至45℃，特別優選26至40℃。將冷卻後的原料與上述曲類等混合，在發酵室中發酵。發酵室的溫度優選24至42℃，更優選25至41℃，特別優選26至40℃；發酵時間優選為24至72小時，更優選28至68小時，特別優選32至64小時。
上述發酵溫度與發酵時間的組合則優選在24至42℃發酵24至72小時，更優選在25至41℃發酵28至68小時，特別優選在26至40℃發酵32至64小時。
此後，將所得物質從發酵室中取出，乾燥得到發酵產物(抗腫瘤試劑)。可使用公知的方法進行乾燥，例如熱風乾燥法、減壓乾燥法及冷凍乾燥法。其中優選熱風乾燥法，並且在35至45℃乾燥10至20小時。隨後如果需要可進行滅菌。根據使用目的可將所述抗腫瘤試劑製成粉末、顆粒、片劑或膠囊等。
另外，可用熱水對上述發酵產物進行處理。所述熱水處理優選在60至100℃進行，更優選65至98℃，特別優選70至96℃，時間優選為5至35分鐘，更優選10至30分鐘，特別優選15至25分鐘。有時，經熱水處理過的抗腫瘤試劑與未經熱水處理的試劑相比較，具有更優異的效果(參見圖1及圖2)。
將本發明的抗腫瘤試劑以1mg/ml的濃度加入在96孔板中培養的人A4573尤因氏肉瘤的培養液中。24小時後加入活細胞檢測試劑(四唑鹽Nakarai Tesk生產)，1小時後使用微板分析儀(microplate leader)(450nm)對顯色反應進行檢測，測定活細胞的數量。與未加本發明抗腫瘤試劑的情況(以下稱為「對照組」」)相比較，使用經熱水處理過的抗腫瘤試劑時，活細胞數優選降至對照組活細胞數的90％或以下，更優選88％或以下，最優選85％或以下。
類似地，向96孔板中培養的小鼠黑瘤B16細胞培養液中，添加濃度為1mg/ml的本發明抗腫瘤試劑。24小時後向其中加入活細胞檢測試劑(四唑鹽Nakarai Tesk生產)，1小時後使用微板分析儀(450nm)檢測顯色反應來測定活細胞數量。與對照組相比較，使用未經熱水處理的本發明抗腫瘤試劑時，活細胞數優選下降為對照組活細胞數的90％或以下，更優選88％或以下，最優選85％或以下。而使用熱水處理過的本發明抗腫瘤試劑時，活細胞數優選下降為對照組活細胞數的90％或以下，更優選89％或以下，最優選88％或以下。
給5周齡的C57BL6小鼠餵食含0.4％的所述抗腫瘤試劑的固體食物，餵食2周後在其尾靜脈接種B16細胞(5×105細胞/小鼠)，接種22天後抗腫瘤試劑接種組的腫瘤體積優選縮小為對照組腫瘤體積的65％或以下，更優選為60％或以下，最優選為55％。
並且，接種22天後測定體重，腫瘤試劑給藥組的平均體重優選為對照組的104％或以上，更優選為105％或以上，最優選為106％或以上。
另外，接種22天後，肺轉移細胞數優選降低至對照組的45％或以下，更優選40％或以下，最優選35％或以下。
用上述抗腫瘤試劑(以上述方法獲得的發酵產物)給藥後，根據活血細胞分析法進行顯微鏡觀察，發現血液中各紅細胞變為正圓形，且彼此分離。所述活血細胞分析法即LBA(活血分析法)指用顯微鏡對未染色的活血液進行分析，在短時間內直接觀察血液中的紅細胞、諸如淋巴細胞、粒細胞及巨噬細胞等等的白細胞的方法。所述「正圓形」指通過顯微鏡觀察時的平面形狀呈基本圓形，如圖10、12、14、16、18及20所示。所述「分離」指各紅細胞未產生聚集的狀態，如圖10、12、14、16、18及20所示。
所述「血液中各紅細胞呈正圓形」指全部或大部分的紅細胞呈正圓形(優選90％或以上)。術語「分離」包括正圓形的紅細胞平面接觸，從而容易使各紅細胞分離的狀態。
圖9顯示了非正圓形的紅細胞聚集形成聚集體的狀態。分離成正圓形的紅細胞尺寸為7至8微米。由於毛細血管的血管腔的直徑約為5微米，因此如圖9所示的紅細胞為非分離狀態的血液難以通過所述毛細血管。與之相對地，本發明的多數紅細胞分離成正圓形的正常血液具有變形能力，可容易地通過所述毛細血管。因此，可預防因血流障礙引起的動脈硬化、心絞痛、腦血栓、腦梗塞、肺血栓栓塞症、心肌梗塞及心房內出血等。
另外，通過將本發明的抗腫瘤試劑(發酵產物)進行給藥，可溶解血液中的尿酸結晶(參見圖15)、膽固醇結晶及血小板(plaque)。溶解所述尿酸結晶等所需的時間優選在給藥後90天以內，更優選60天以內，特別優選30天以內。血液中的這類尿酸結晶被認為是痛風的原因。如果尿酸結晶接觸毛細血管壁，個體就會感到劇烈疼痛。在較短時間內，例如上述期限內所述疼痛即可消除。
給藥後，本發明的抗腫瘤試劑(發酵產物)可使血液中的棘紅細胞(參見圖9及11)、靶形紅細胞(參見圖13)、鏈狀排列的紅細胞(參見圖17)、卵形紅細胞(參見圖13)及被自由基損傷的紅細胞等恢復為正圓形，並且通常使各紅細胞彼此分離。正常的紅細胞為正圓形，而棘紅細胞等非正圓形的紅細胞稱為病態或異常紅細胞。使肝臟機能下降的紅細胞多為棘紅細胞。對缺鐵性貧血，存在許多靶形紅細胞。對甲狀腺異常或子宮肌瘤等引起的內分泌失調，則存在許多卵形紅細胞。
圖10、12、14、16、18及20顯示上述各種變形的異常紅細胞均可變為正常紅細胞。所述異常紅細胞如何變為正常紅細胞的機理還沒有明確的結論。但將本發明的抗腫瘤試劑(或上述方法製造的發酵產物)給藥時，可產生至少一種有益效果，包括緩解膠原病引起的關節痛、增強肝臟機能、縮小子宮肌腫、減少癌細胞、降低膽固醇、降低中性脂肪及治療特應性皮炎。
因此，將含有至少一種選自麥胚芽、大豆胚芽及米胚芽的物質的原料用至少一種選自曲類、酵母及乳桿菌的微生物進行發酵所得的發酵產物除了作為抗腫瘤試劑以外，也可用於治療一種或多種諸如痛風、各種癌症、腦梗塞、心肌梗塞、心絞痛、膠原病、貧血、內分泌失調、高膽固醇、高中性脂肪及特應性皮炎的疾病。
使上述諸如棘紅細胞的異常紅細胞成為正常紅細胞所需的時間優選為給藥後120分鐘以內，更優選為60分鐘以內，特別優選30分鐘以內。必須儘快使異常的紅細胞變為正常。本發明的抗腫瘤試劑(發酵產物)可在較短時間內使異常血液變為正常。
將所述抗腫瘤試劑給藥後，根據活血細胞分析法進行顯微鏡觀察，發現血液中白細胞的直徑優選為正常紅細胞的至少2.2倍，更優選至少2.5倍，最優選至少3.0倍。本文所述的白細胞大小指根據活血細胞分析法通過顯微鏡觀察到的平面形狀的直徑。
另外，將上述抗腫瘤試劑給藥後，血液中的白細胞直徑與給藥前相比(給藥後的直徑/給藥前的直徑)優選為1.5-4倍，更優選為2.0-3.0倍。當白細胞直徑處於上述範圍時，白細胞活性上升，從而增強免疫力。
本發明的抗腫瘤試劑能提高血液中的白細胞活性，從而提高免疫力。已知無活性的白細胞直徑較小而且活動緩慢。根據活血細胞分析法進行顯微鏡觀察發現，將本發明的抗腫瘤試劑給藥後，血液中的白細胞變大，輪廓清晰，尤其觀察到巨噬細胞活躍地四處活動(參見圖12左上)。另外，在白細胞中，也可觀察到攻擊病毒或癌細胞的淋巴T細胞及B細胞，其也具有充分的活力。圖12顯示了給藥後白細胞增大為正常紅細胞的2.5倍以上並且輪廓清晰的狀態。
本發明的抗腫瘤試劑的劑量並無特別的限制。依體重、年齡及性別等可適當地給藥。例如，對成人優選1000至5000mg/天，更優選2000至4000mg/天，特別優選2500至3500mg/天。上述劑量通常每天分3至4次給藥。劑量不足1000mg時，抗腫瘤效果不足。而給藥超過5000mg時，不能得到與用量相符的腫瘤免疫效果。由於本發明的抗腫瘤試劑來源於天然物質，因此無副作用且安全性高。
本發明的抗腫瘤試劑中，可含有一種或多種諸如小麥胚芽、糙米、海藻礦物質、澱粉、維生素和胺基酸的物質。另外，本發明的抗腫瘤試劑可直接飲用或食用。可選擇地，可將其添加入飲料或食品中使用。其也可製成具有特定保健效果的保健食品，或調控活體機能的功能食品或保健飲品。
抗腫瘤試劑的製造方法上述抗腫瘤試劑的製造方法並無特別的限制，主要依據以下的方法進行。本發明的製造方法包括(1)將至少一種選自麥胚芽、大豆胚芽及米胚芽的原料在50至150℃用蒸汽加熱，或將其在50至150℃烘焙後用蒸汽加熱，以及(2)使用至少一種選自曲類、酵母及乳桿菌的微生物對蒸汽加熱產物進行發酵。
在蒸汽加熱步驟(1)中，如上所述用於抗腫瘤試劑的麥胚芽、大豆胚芽及米胚芽均可使用。同時，上述的原料配合比例也可使用。上述的蒸汽加熱方法也可使用。另外，蒸汽加熱前也可在上述溫度下對麥胚芽等等進行烘焙。可使用上述的烘焙方法。另外，在發酵步驟(2)中，可使用如上所述的曲類、酵母及乳桿菌及發酵方法。用上述方法製造的發酵產物不僅可用作抗腫瘤試劑，也可用於治療各種疾病。
此外，所述方法還可包括對所得發酵產物用熱水處理的步驟。所述熱水處理的溫度優選為60至100℃，更優選65至98℃，特別優選70至96℃。熱水處理的時間優選為5至35分鐘，更優選10至30分鐘，特別優選15至25分鐘。有時，經上述熱水處理過的抗腫瘤試劑與未經熱水處理的試劑相比較具有更優異的效果。
含有所述抗腫瘤試劑的飲料和食品(含所述發酵產物的飲料和食品)含有本發明的抗腫瘤試劑的飲料和食品以使用所述的抗腫瘤試劑(發酵產物)為特徵。本發明的「含所述抗腫瘤試劑的飲料和食品」包含飲料及固體食品等等。飲料和食品類型的例子包括具有特定保健效果的飲料和食品，或調控活體機能的功能食品。
將本發明的抗腫瘤試劑用於飲料和食品時，可將所述抗腫瘤試劑直接製成飲料和食品的形式，也可將所需量的抗腫瘤試劑加入飲料和食品原料中，通過常規製造方法加工成含所述抗腫瘤試劑的飲料和食品。例如，將所述抗腫瘤試劑作為添加劑直接添加入飲料，或諸如餅乾等的固體食品中，作為含抗腫瘤試劑的預防癌症的飲料或食品、保健食品或功能食品等。
可選擇地，可將上述抗腫瘤試劑溶解於例如油脂、乙醇、丙二醇、甘油、表面活性劑或其混合物中製成液態或懸浮液，添加於飲料或固體食品中。如果需要，也可將其與諸如阿拉伯膠或糊精等等的膠粘劑混合製成粉末狀或顆粒狀，添加於飲料或固體食品中。添加本發明的抗腫瘤試劑的飲料和食品的種類並無特別的限制。
將所述抗腫瘤試劑添加入飲料和食品時，對於所述抗腫瘤試劑的添加量並無特別的限制，但因為其被作為保健食品、功能食品攝取來預防疾病及維持健康，所以需依年齡、體重及性別適當地調整添加量。以添加所述抗腫瘤試劑後的飲料和食品的重量為100％，所述抗腫瘤試劑的添加量優選1至30％重量比，更優選2至25％，特別優選3至20％。
本發明含抗腫瘤試劑的飲料和食品以傳統的食品為原料，在安全性方面也很優異。
另外，也可以所述「發酵產物」取代本發明的「抗腫瘤試劑」用於飲料和食品。
實施例以下參照實施例對本發明進行說明。本發明實施例中使用如下所述的條件根據活血細胞分析法進行顯微鏡觀察使用CH40型顯微鏡(Olympus公司製造)，放大倍數為1000倍。以下實施例中提到的紅細胞圖片顯示的是用顯微鏡觀察到的放大1000倍的狀態。
實施例1原料的配合比例為250g的麥胚芽、250g的大豆胚芽及200g的米胚芽。將該混合物以110℃的蒸汽加熱3小時，然後冷卻。溫度達到30℃時，將所得混合物與250g的小麥麴黴混合，薄薄地攤開在平盤上。將該平盤和混合物放入發酵室，在30℃發酵48小時。然後取出，撤掉平盤，將混合物在40℃乾燥48小時而得到抗腫瘤試劑。
實施例2-使用小鼠的體外腫瘤免疫(1)將上述抗腫瘤試劑製成乾粉，溶解於磷酸緩衝溶液。由此製備未經熱水處理的抗腫瘤試劑，以及用90℃的熱水(沸騰後的)處理20分鐘。將各溶液添加入96孔板中的人腫瘤細胞A4573及小鼠黑瘤B16細胞培養液中，使最終濃度為1mg/ml。添加6及24小時後，加入活細胞檢測試劑(四唑鹽Nakarai Tesk生產)，1小時後使用微板分析儀(450nm)，測定顯色反應。對未添加抗腫瘤試劑的對照組(以下簡稱為「對照組」)也進行了同樣的測定。並重複測定4次。
結果如圖1及圖2所示。其證明與對照組相比，經熱水處理過的抗腫瘤試劑可明顯降低存活的人腫瘤細胞A4573的數量。對小鼠黑瘤B16細胞，也證明存活細胞數明顯降低。
(2)製備含0.4％所述抗腫瘤試劑的固體飼料，將其對5周齡的C57BL6小鼠給食。估計自由取食的小鼠每日所攝取的抗腫瘤試劑量為人類的10倍。另外，以給予普通固體飼料的小鼠為對照組。為評估所述抗腫瘤試劑(1)對皮下移植腫瘤的抗腫瘤效果，在餵食2周後，對7隻小鼠皮下接種B16細胞(5×105細胞/小鼠)。一段時間後檢測腫瘤體積，並且計算接種腫瘤後的存活率。
結果如圖3、4及5所示。對自由取食的小鼠，與給予普通固體飼料的對照組相比，未發現明顯的體重變化(圖3)。由此證明小鼠攝食與普通飼料等量的含抗腫瘤試劑的飼料。在給食2周後，對各組的7隻小鼠皮下接種B16細胞(5×105細胞/小鼠)。接種22天後，抗腫瘤試劑接種組的腫瘤體積為對照組體積的55％，因此表明其具有顯著的抗腫瘤效果(圖4)。至於腫瘤接種組的存活天數，對皮下接種B16細胞(5×105細胞/小鼠)的抗腫瘤試劑給藥組，接種28天後7隻小鼠中有4隻存活，而對照組的存活數為0(圖5)。
(3)製備含0.4％所述抗腫瘤試劑的固體飼料，將其對5周齡的C57BL6小鼠給食。
以給予普通固體飼料的小鼠為對照組。為評估所述抗腫瘤試劑對轉移瘤的抗腫瘤效果，在給食2周後，對各組的10隻小鼠尾靜脈接種B16細胞(5×105細胞/小鼠)。一段時間後測定其體重，並且在接種19天及22天後，摘除各組中半數(5隻)小鼠的肺，測定轉移細胞數。
結果如圖6、7及8所示。一段時間後測定小鼠體重，相對於對照組的平均體重18.6g，本發明抗腫瘤試劑給藥組的平均體重為19.9g。本發明抗腫瘤試劑給藥組的平均體重為對照組體重的107％(圖6)。
接種19天及22天後，各組各摘除5隻小鼠的肺，測定轉移細胞數。結果如圖7及8所示。接種19天後，對照組的平均轉移數為12，而本發明抗腫瘤試劑給藥組的平均轉移數為8，為對照組平均轉移數的66％，表明轉移數減少。接種22天後，對照組的平均轉移數39，而本發明抗腫瘤試劑給藥組的平均轉移數為17，為對照組平均轉移數的44％，表明轉移數明顯減少。
由上述可知，用所述抗腫瘤試劑接種小鼠可抑制腫瘤細胞的轉移。
實施例3-根據活血細胞分析法進行顯微鏡觀察(1)採取患有膠原病的成人女子的血液，根據活血細胞分析法進行顯微鏡觀察。發現其中紅細胞以異常形狀產生聚集(圖9)。肝臟機能較差，並發現棘紅細胞(突起狀)。糖酵解能力變差，還發現許多黴菌形式。給藥1170mg所述抗腫瘤試劑30分鐘後，再次進行活血細胞分析，結果顯示各紅細胞分離成正圓形，未發現棘紅細胞(突起狀)(圖10)。
對所述患者，1日4次用上述劑量連續給藥90天，結果膠原病特有的關節疼痛消失了。
(2)採取患有肝臟機能障礙的成人女子的血液，根據活血細胞分析法進行顯微鏡觀察。發現許多棘紅細胞(突起狀)(圖11)。該患者的HCV抗體的數值為88.9S/CO(對照HCV抗體為1.0S/CO)。給藥1170mg所述抗腫瘤試劑30分鐘後，再次進行活血細胞分析。結果顯示各紅細胞分離成正圓形，且未發現棘紅細胞(突起狀)(圖12)。並且，如圖12所示，所有白細胞的直徑均為紅細胞直徑的至少2.7倍，從而增強了免疫力。對所述患者1日3次，用上述劑量連續給藥90天，結果發現HCV抗體的數值為10.4S/CO，為給藥前的1/8以下，因而改善了肝臟機能障礙。
(3)採取患有子宮肌瘤的成人女子的血液，根據活血細胞分析法進行顯微鏡觀察。顯示紅細胞為卵形，且內分泌失調(圖13)。觀察到環狀的靶形紅細胞，由此可知為缺鐵性貧血。該患者的血紅蛋白值為8.4g/dl(正常值為11.5至15.5g/dl)。給藥1170mg的抗腫瘤試劑30分鐘後，再次進行活血細胞分析法的顯微鏡觀察，結果顯示各紅細胞分離成正圓形並變為正常狀態(圖14)。對所述患者1日3次，用上述劑量連續給藥90天，結果顯示3cm的子宮瘤縮小至1cm。另外，貧血症狀也得到改善，血紅蛋白恢復正常值。
(4)採取患有子宮癌的成人女子的血液，根據活血細胞分析法進行顯微鏡觀察。發現紅細胞產生聚集，並觀察到尿酸結晶及糖不能分解時出現的黴菌(圖15)。給藥1170mg所述抗腫瘤試劑30分鐘後，再次進行活血細胞分析法的顯微鏡觀察，結果顯示各紅細胞分離成正圓形，且尿酸結晶消失(圖16)。1日3次，對所述患者用上述劑量連續給藥90天。MRI(核磁共振成像)檢查和在體檢測(活組織檢查)的結果診斷癌症已消除。
(5)採取患有高血脂、高膽固醇(261mg/dl)及高中性脂肪(1714mg/dl)的成人男子的血液，根據活血細胞分析法進行顯微鏡觀察。發現紅細胞呈鏈狀排列且聚集狀態很嚴重，而白細胞很小、被包圍在紅細胞中間而無法自行移動。並且，血液的流動非常差，在中醫學上稱為「瘀血」(圖17)。給藥1170mg所述抗腫瘤試劑30分鐘後，再次進行活血細胞分析法的顯微鏡觀察，結果顯示各紅細胞分離成正圓形，並認為是正常狀態(圖18)。1日3次，對所述患者用上述劑量連續給藥120天並進行血液檢查。結果顯示膽固醇值為227mg/dl，而中性脂肪值大幅降低至169mg/dl接近正常值。
(6)採取患有特應性皮炎的成人女子的血液，根據活血細胞分析法進行顯微鏡觀察。發現紅細胞產生聚集，且一幅畫面中觀察到3個白細胞(粒細胞)(圖19)。當一幅畫面中存在2個以上的粒細胞時，即認為患有過敏性疾病(哮喘、鼻炎及花粉症等)，且患處具有炎症。給藥1170mg所述抗腫瘤試劑30分鐘後，再次進行活血細胞分析法的顯微鏡觀察。結果顯示各紅細胞分離成正圓形，且淋巴B細胞大小為紅細胞的2.3倍並活化(圖20)。由於淋巴細胞呈活化狀態，因此使免疫力增強。1日3次，對所述患者用上述劑量連續給藥90天，結果顯示特應性皮炎完全治癒。
由以上描述可知，本發明的抗腫瘤試劑對於腫瘤具有免疫效果。
另外，將含有至少一種選自麥胚芽、大豆胚芽及米胚芽的物質的原料，用至少一種選自曲類、酵母及乳桿菌的微生物進行發酵所得的發酵產物，也可用於治療一種或多種諸如痛風、各種癌症、腦梗塞、心肌梗塞、心絞痛、膠原病、貧血、內分泌失調、高膽固醇、高中性脂肪及特應性皮炎等的疾病。
本發明的抗腫瘤試劑除對腫瘤具有免疫效果外，對許多腫瘤以外的疾病也具有免疫效果。
本發明不局限於上述的具體實施例，根據目的及用途不同，可在本發明的範圍內對其作出各種改變。例如，可用由含有至少一種選自麥胚芽、大豆胚芽及米胚芽的物質的原料，用至少一種選自曲類、酵母及乳桿菌的微生物發酵所得的發酵產物來取代上述的抗腫瘤試劑，直接用於各實施例。因此，所述發酵產物也可用於改善一種或多種諸如痛風、各種癌症、腦梗塞、心肌梗塞、心絞痛、膠原病、貧血、內分泌失調、高膽固醇、高中性脂肪及特應性皮炎等的疾病。
本發明廣泛地用於保健飲料、保健食品、保健輔助食品、特定保健食品及醫藥品等等。例如，將本發明的抗腫瘤試劑直接製成或添加入飲料和食品。另外，可將所述抗腫瘤試劑製成膠囊、片劑、藥囊、糖漿劑、栓劑及注射劑等作為藥物。
本發明的抗腫瘤試劑具有優異的抗腫瘤效果。並且，因為本發明的抗腫瘤試劑以天然物質為原料，所以安全性高。
另外，本發明的抗腫瘤試劑使給藥前血液中已有的紅細胞聚集體、棘紅細胞、靶形紅細胞、紅細胞粘連、鈍鋸齒狀紅細胞、小紅細胞、大紅細胞、溶血紅細胞、鏈狀排列的紅細胞、卵形紅細胞及/或自由基損傷的紅細胞在給藥後變為正圓形，而且使各紅細胞呈分離狀態。其不僅具有優良的抗腫瘤效果，而且對由上述異常形狀的紅細胞所引起的疾病也具有治療效果。
本發明的抗腫瘤試劑使給藥後血液中的白細胞直徑變為正常紅細胞直徑的2.2倍或以上，並且粒細胞活動旺盛，抗腫瘤效果更強。
本發明的抗腫瘤試劑可消除血液中的尿酸結晶，進而消除因痛風引起的疼痛。
另外，本發明的抗腫瘤試劑具有至少一種如下效果緩解關節痛、提高肝臟機能、縮小子宮肌瘤、減少癌細胞、降低膽固醇、降低中性脂肪及改善特應性皮炎，可廣泛用於保健食品等等。
本發明的飲料和食品在預防腫瘤、增強免疫力、增進人體健康方面具有良好效果，並且其源自天然物質，因此無副作用且安全性高。
根據本發明的製造方法可簡單且有效地製造所述抗腫瘤試劑。
另外，根據本發明方法製備的抗腫瘤試劑，再經過60至100℃的熱水處理步驟，其抗腫瘤效果更佳。
權利要求
1.一種抗腫瘤試劑，其特徵在於，通過將含有麥胚芽、大豆胚芽及米胚芽中至少一種的原料用一種或多種選自曲類、酵母及乳桿菌的微生物進行發酵得到。
2.如權利要求1所述的抗腫瘤試劑，其中在用所述試劑給藥前已存在的至少一種類型的異常紅細胞在所述試劑給藥後變為正圓形，而且各紅細胞呈相互分離狀態，其中所述異常紅細胞選自紅細胞聚集體、棘紅細胞、靶形紅細胞、紅細胞粘連、鈍鋸齒狀紅細胞、小紅細胞、大紅細胞、溶血紅細胞、鏈狀排列的紅細胞、卵形紅細胞及被自由基損傷的紅細胞。
3.如權利要求1或2所述的抗腫瘤試劑，其使給藥後血液中的白細胞直徑變為正常紅細胞直徑的2.2倍或以上。
4.如權利要求1或2所述的抗腫瘤試劑，其能消除血液中的尿酸結晶。
5.如權利要求3所述的抗腫瘤試劑，其能消除血液中的尿酸結晶。
6.如權利要求1或2所述的抗腫瘤試劑，其還表現出一種或多種附加效果，所述效果選自緩解關節痛、增強肝臟機能、縮小子宮肌瘤、減少癌細胞、降低膽固醇、降低中性脂肪及治療特應性皮炎。
7.如權利要求3所述的抗腫瘤試劑，其還表現出一種或多種附加效果，所述效果選自緩解關節痛、增強肝臟機能、縮小子宮肌瘤、減少癌細胞、降低膽固醇、降低中性脂肪及治療特應性皮炎。
8.如權利要求4所述的抗腫瘤試劑，其還表現出一種或多種附加效果，所述效果選自緩解關節痛、增強肝臟機能、縮小子宮肌瘤、減少癌細胞、降低膽固醇、降低中性脂肪及治療特應性皮炎。
9.如權利要求5所述的抗腫瘤試劑，其還表現出一種或多種附加效果，所述效果選自緩解關節痛、增強肝臟機能、縮小子宮肌瘤、減少癌細胞、降低膽固醇、降低中性脂肪及治療特應性皮炎。
10.含有權利要求1或2所述的抗腫瘤試劑的飲料或食品。
11.含有權利要求3所述的抗腫瘤試劑的飲料或食品。
12.含有權利要求4所述的抗腫瘤試劑的飲料或食品。
13.含有權利要求5所述的抗腫瘤試劑的飲料或食品。
14.含有權利要求6所述的抗腫瘤試劑的飲料或食品。
15.含有權利要求7所述的抗腫瘤試劑的飲料或食品。
16.含有權利要求8所述的抗腫瘤試劑的飲料或食品。
17.含有權利要求9所述的抗腫瘤試劑的飲料或食品。
18.權利要求1或2所述的抗腫瘤試劑的製備方法，包括如下步驟(1)將含有麥胚芽、大豆胚芽及米胚芽中至少一種的原料在50°-150℃用蒸汽加熱，或者將所述原料在50°-150℃烘焙後用蒸汽加熱；及(2)將所得的蒸汽加熱產物用至少一種選自曲類、酵母及乳桿菌的微生物進行發酵。
19.如權利要求18所述的製備方法，還包括將所得的發酵產物用60°-100℃的熱水進行處理的步驟。
20.權利要求9所述的抗腫瘤試劑的製備方法，包括如下步驟(1)將含有麥胚芽、大豆胚芽及米胚芽中至少一種的原料在50°-150℃用蒸汽加熱，或者將所述原料在50°-150℃烘焙後用蒸汽加熱；及(2)將所得的蒸汽加熱產物用至少一種選自曲類、酵母及乳桿菌的微生物進行發酵。
21.如權利要求20所述的製備方法，還包括將所得的發酵產物用60°-100℃的熱水進行處理的步驟。
全文摘要
本發明公開了抗腫瘤試劑、使用該試劑的飲料和食品及該抗腫瘤試劑的製造方法。本發明的抗腫瘤試劑對人腫瘤細胞A4573及小鼠黑瘤B16細胞表現出特異作用。另外，根據活血細胞分析法進行顯微鏡觀察發現其使血液中各紅細胞分離且呈正圓形，並使棘紅細胞等異常形狀的紅細胞變為正常，更使白細胞的直徑變為紅細胞的2.5倍以上。該抗腫瘤試劑除對腫瘤具有免疫活性外，還表現出多種免疫活性。含有所述抗腫瘤試劑的飲料和食品可作為保健食品等等。所述抗腫瘤試劑的製造方法包括將麥胚芽等在110℃用蒸汽加熱3小時後，在30℃下用曲類等微生物發酵48小時。
文檔編號A61K36/48GK1709409SQ20051006939
公開日2005年12月21日 申請日期2005年5月16日 優先權日2004年6月18日
發明者杉山剛, 松尾龍彥, 二口和之 申請人:歐德有限公司, 瓦利達克斯有限公司