使用電泳的試樣的分析方法及其利用的製作方法

2023-12-09 11:26:46 3

專利名稱：使用電泳的試樣的分析方法及其利用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種使用電泳的試樣的分析方法及其利用。
背景技術：
作為以高精度分離和分析各種化合物或核酸、蛋白質等分析對象物的方法，已知 有電泳法。電泳法是利用了電場的分離和分析方法，由於能夠根據物質的電荷、分子量、立 體結構等的不同來分離物質，因此正被廣泛用於各種物質的分離和分析中。根據支撐體的有無、支撐體的種類等，電泳存在各種方法，例如已知有聚丙烯醯 胺電泳、瓊脂糖凝膠電泳、澱粉凝膠電泳、濾紙電泳、醋酸纖維素膜電泳、電色譜法、無載體 (自由流)電泳、毛細管電泳法等。作為採用瓊脂糖凝膠電泳法的分析，例如提出了使用添 加有硫酸軟骨素等硫酸化多糖類的瓊脂糖凝膠來分離糖化血紅蛋白的方法(日本特開平 05-133938號公報)等。作為採用毛細管電泳的分析方法，例如提出了使用毛細管電泳法的 一種即電動色譜法並通過使泳動用緩衝液中含有硫酸軟骨素等聚陰離子或聚陽離子從而 以短時間分析試樣的方法(日本專利第3124993號)；將泳動裝置微晶片化從而使分析裝 置小型化的方法(日本專利第2790067號及日本專利第3656165號)等。另一方面，將泳動裝置微晶片化時，用於分離試樣的流路的長度(分離長)與以往 相比變短，由此產生分離能力降低的問題。為了解決該問題提出了各種方法。例如，提出了 使試樣注入容積及分離長增大的方法、分離前在流路內將分析對象物濃縮的方法、與鹼堆 積(base stacking)法組合的方法(Kim 等，J. Chromatgr. A，1064，121-127，2005)、作為泳 動用緩衝液使用與用於調製試樣的緩衝液不同的緩衝液的方法(日本特開2009-74811號 公報)等。然而，在以高精度進行試樣分析的方面，上述現有的方法不能說是充分的。作為其他的方法，提出了使用按照試樣貯存槽和回收槽在流路內連通的方式形成 的電泳晶片來進行分析的方法(國際公開2008/136465號)。具體而言，該方法是向電泳芯 片的試樣導入槽中供給試樣後，通過使試樣導入槽與回收槽之間產生電位差從而進行從試 樣導入槽的試樣的導入和分離的方法。此外，提出了使用該方法例如來分離血漿中的膽紅 素的方法(NieZ 等，Electrophoresis，四(9) :1924-31,2008)等。

發明內容
然而，需求以高精度進行試樣的分析的更高技術。本發明提供能夠提高分離能力的新方法，該方法利用電泳來進行試樣的分析， 所述電泳採用了通過對流路施加電壓來進行試樣的導入和分離的前沿分析(frontal analysis)0本發明涉及一種試樣分析方法，其是利用電泳法進行的試樣分析方法，所述電泳 法使用了具備流路和形成於上述流路中的試樣貯存槽的電泳裝置，所述試樣分析方法包 括向在上述流路中填充有泳動液的上述電泳裝置的上述試樣貯存槽中配置試樣的步驟； 以及通過對上述流路的兩端施加電壓來進行電泳的步驟，並包括使上述試樣及上述泳動液中的下述a)及b)中的至少一者的濃度大致相同的步驟。a)通過上述電泳向與上述分析對象物相同的方向移動、並且移動度小於上述分析 對象物的移動度的離子的濃度b)向與上述分析對象物相反的方向移動的離子的濃度


圖IA是表示本發明的方法中可以使用的電泳晶片的一個例子的構成的概念圖，圖IB是圖IA所示的電泳晶片的I-I線的截面圖。圖2是表示實施例1的結果的一個例子的圖表。圖3是表示比較例1的結果的一個例子的圖表。圖4是表示實施例2的結果的一個例子的圖表。圖5是表示比較例2的結果的一個例子的圖表。圖6是表示實施例3的結果的一個例子的圖表。圖7是表示實施例7的結果的一個例子的圖表。圖8是表示比較例3的結果的一個例子的圖表。圖9是表示實施例8及比較例4的結果的一個例子的圖表。
具體實施例方式作為1個方式，本發明涉及一種試樣分析方法，其是利用電泳法進行的試樣分析 方法，所述電泳法使用了具備流路和形成於上述流路中的試樣貯存槽的電泳裝置，所述分 析方法包括向在上述流路中填充有泳動液的上述電泳裝置的上述試樣貯存槽中配置試樣 的步驟；以及通過對上述流路的兩端施加電壓來進行電泳的步驟，並包括使上述試樣及上 述泳動液中的下述a)及b)中的至少一者的濃度大致相同的步驟。a)通過上述電泳向與上述試樣中的分析對象物相同的方向移動、並且移動度小於 上述分析對象物的移動度的離子的濃度b)向與上述分析對象物相反的方向移動的離子的濃度根據本發明，例如在利用採用了前沿分析法的電泳進行的試樣分析中，可發揮能 夠提高分析對象物的分離能力的效果。此外，根據本發明，優選發揮能夠以比以往短的時 間進行分析的效果。進而，本發明的方法特別適合於使用了小型化的毛細管電泳晶片的 試樣的分析，更優選適合於利用了微晶片化的電泳晶片中的前沿分析法連續毛細管電泳 (frontal analysisContinuous Capillary Electrophoresis)白勺i式#白勺分本發明者們在上述國際公開2008/136465號那樣通過施加電壓來進行從試樣貯 存槽的試樣的導入和試樣的分離的方法、即一邊連續地進行取樣一邊進行電泳的方法中， 為了實現分離能力的進一步提高而重複進行了研究，其中著眼於流路內的離子的分布。具 體而言，發現相對於泳動液注入微量的試樣時對分離基本沒有影響而可以忽視的試樣中的 離子在一邊連續地進行取樣一邊進行電泳的情況下，能夠對分離精度造成影響。進而發現， 該問題在將電泳裝置小型化時、即像電泳晶片那樣用於分離試樣的長度(分離長)較短時 顯著產生。更具體而言，發現在分離長較短的情況下，由離子分布的偏差引起的試樣的電荷 變動導致的峰寬的擴大顯著，其結果是，分離能力降低。
本發明基於如下認識在採用了包括通過對流路的兩端施加電壓從而將試樣貯存 槽內的試樣導入到流路內並對試樣進行電泳的步驟的電泳的試樣分析方法中，通過使試樣 及泳動液中的下述a)及b)中的至少一者的濃度大致相同，能夠提高分析對象物的分離能 力，即使在分離長較短的情況下也能夠提高分離精度。a)通過上述電泳向與上述試樣中的分析對象物相同的方向移動、並且移動度小於 上述分析對象物的移動度的離子的濃度b)向與上述分析對象物相反的方向移動的離子的濃度通過本發明的分析方法，分離能力得到提高的原因並不確定，但推測如下。在前沿 分析中，泳動液與試樣接觸的幅度成為峰寬。並且，該峰寬通常受到1)試樣的電荷變動、2) 由溫度或布朗運動等引起的擴散、3)不均勻的流動、4)試樣導入時的彎液面(meniscus)等 的影響而擴大。其中在分離長較短的電泳中導致峰寬擴大的最大原因被認為是1)試樣的 電荷變動。本發明的方法由於使試樣及泳動液中的上述a)及b)中的至少一者的濃度大致 相同，因此可抑制試樣的電荷變動。認為其結果是，由於能夠抑制峰寬的擴大，因此能夠提 高分離能力。但是，這些只是推測，本發明並不限定於這些機理。本說明書中「電泳法」是指利用根據物質的大小和電荷的不同等而造成的在電場 中的移動速度之差來進行分離的方法。本發明的方法例如可以用於採用了聚丙烯醯胺電 泳、瓊脂糖凝膠電泳、澱粉凝膠電泳、濾紙電泳、醋酸纖維素膜電泳、電動色譜、無載體(自 由流)電泳、毛細管電泳等各種電泳法的分析方法中。其中，本發明適於毛細管電泳，例如 電動色譜、毛細管區帶電泳、膠束電動色譜、毛細管凝膠電泳，優選適於電動色譜、膠束電動 色譜，特別適於使用了微晶片化了的電泳晶片的毛細管電泳。本說明書中「移動度」是指在通過對流路的兩端施加電壓從而在流路內產生的電 場中物質移動的速度，例如根據物質的電荷、大小及形狀、以及流路內的環境(例如流路內 的液體的成分、PH、電滲流等)等而決定。本說明書中「電滲流」是指，例如使用具備具有負 電荷的內壁的流路來進行毛細管電泳等時，起因於上述流路的內壁的負電荷而產生的從陽 極向陰極的流動。本說明書中「離子」包括泳動液和/或試樣中以能夠對分離能力造成影響的程度 所含的、具有負電荷的成分及具有正電荷的成分，例如可列舉出緩衝劑、酸性物質、弱電解 質、鹼性物質、強電解質、蛋白質、其他具有正或負電荷的成分等。本說明書中「使試樣及泳動液中的『通過泳動向與分析對象物相同的方向移動、並 且移動度小於分析對象物的移動度的離子的濃度』及『向與分析對象物相反的方向移動的 離子的濃度』中的至少一者的濃度大致相同」包括使泳動液和試樣中移動度大致相同的離 子的離子濃度大致相同，例如優選使試樣和泳動液中相對應的上述具有負電荷的成分及具 有正電荷的成分達到大致相同的濃度。此外，當試樣和/或泳動液中存在多種「通過電泳向 與分析對象物相同的方向移動、並且移動度小於分析對象物的移動度的離子」或「向與分析 對象物相反的方向移動的離子」時，只要使前者的離子及後者的離子各自中至少一種離子 的濃度大致相同即可，優選使前者的離子及後者的離子各自中全部種類的離子為大致相同 的濃度。大致相同的濃度包括濃度相同或者具有對分離能力實質上不會造成影響的程度 的差的情況。對分離能力實質上不會造成影響的程度的濃度的差，例如根據用於分離試樣
5的長度等適當決定。當分離長(試樣貯存槽的流路側的端部與分析部的距離)為10 30mm 時，泳動液中所含的離子與對應於該泳動液的離子的試樣中的離子的濃度之差例如為超 過-10mmol/L且不到+10mmol/L時可以視為大致相同的濃度，優選為-5mmol/L +5mmol/ L等。此外，同樣地當分離長為10 30mm時，泳動液中所含的離子與對應於該泳動液的離 子的試樣中的離子的濃度之差例如為超過-10重量％ 不到+10重量％時可以視為大致相 同的濃度，優選為_5重量％ +5重量％。泳動液及試樣中的離子的種類及濃度例如可以 採用電感耦合等離子體原子發射光譜法、離子色譜法、電量滴定法、電導度計等來測定。此外，作為移動度大致相同的離子，例如可列舉出移動度相同或者具有對分離能 力實質上不會造成影響的程度的移動度的差的離子。對分離能力實質上不會造成影響的程 度的移動度的差例如可以根據用於分離試樣的長度等適當決定。例如當分離長(試樣貯存 槽的流路側的端部與分析部的距離)為20 30mm時，泳動液中所含的離子與對應於該泳 動液的離子的試樣中的離子的移動度的差例如為士5%，優選為士2%等。泳動液和/或試樣中的離子(以下也稱為「對象離子」)是否為「通過泳動向與分析 對象物相同的方向移動、並且移動度小於分析對象物的移動度的離子」(上述a)的離子)， 例如可以通過下述的方法來進行判斷。首先，準備對象離子的濃度不同的2種泳動液，分別 填充到毛細管電泳裝置的陽極側和陰極側。在連接陽極側和陰極側的毛細管部中，當對象 離子為陽離子時填充與陰極側相同的泳動液，當對象離子為陰離子時填充與陽極側相同的 泳動液。如果在該狀態下對陽極和陰極施加電壓，則對象離子在毛細管部移動，毛細管部中 的該離子的濃度發生變動。該離子濃度的變動例如可以通過測定對對象離子特異性的吸收 或電流值的變動等來進行檢測。由此，能夠測定對象離子在毛細管部中的移動度，通過比較 所得到的對象離子的移動度與分析對象物的移動度，能夠判斷對象離子是否為上述a)的 離子。另外，在製作用於測定移動度的泳動液時，也可以添加與對象離子成對的對離子。作 為添加的對離子，例如優選為比對象離子的移動度快的離子，例如可列舉出Na、K及Cl等。此外，關於對象離子是否為「向與分析對象物相反的方向移動的離子」(上述b)的 離子)，當對象離子為陰離子時，如果分析對象物為陽離子即可判定為上述b)的離子，當對 象離子為陽離子時，如果分析對象物為陰離子即可判定為上述b)的離子。本說明書中作為「分析對象物」，例如可列舉出蛋白質、生物體內物質、血液中物 質等，作為蛋白質的具體例子，可列舉出血紅蛋白、白蛋白、球蛋白等。作為血紅蛋白，可列 舉出糖化血紅蛋白、突變血紅蛋白、次要(minor)血紅蛋白、修飾血紅蛋白等，更具體而言， 可列舉出血紅蛋白AO(HbAO)、血紅蛋白Alc(HbAlc)、血紅蛋白A2 (HbA2)、血紅蛋白S(HbS、 鐮刀形紅細胞血紅蛋白)、血紅蛋白F(HbF、胎兒血紅蛋白)、血紅蛋白M(HbM)、血紅蛋白 C(HbC)、高鐵血紅蛋白、氨基甲醯化血紅蛋白、乙醯化血紅蛋白等。作為HbAlc，有穩定型 HbAlc、不穩定型HbAlc。作為生物體內物質及血中物質等的具體例子，可列舉出膽紅素、激 素、代謝物質等。作為激素，可列舉出甲狀腺刺激激素、副腎皮質刺激激素、絨毛膜促性腺激 素、胰島素、胰高血糖素、副腎髓質激素、腎上腺素、去甲腎上腺素、雄性激素、雌激素、孕激 素、醛固酮、皮質醇等。本說明書中作為「試樣」是指由試樣原料調製的物質。作為試樣原料，可列舉出生 物試樣，優選含有上述分析對象物，更優選為含有血紅蛋白的試樣。作為生物試樣，包括血 液、含有紅細胞成分的血液來源物、唾液、髓液等。作為血液，可列舉出從生物體採集的血液，優選為動物的血液，更優選為哺乳類的血液，進一步優選為人的血液。作為含有紅細胞 成分的血液來源物，可列舉出由血液分離或調製得到的含有紅細胞成分的物質，例如包括 除去了血漿的血細胞級分、或血細胞濃縮物、血液或血細胞的冷凍乾燥物、對全血進行溶血 處理而得到的溶血試樣、離心分離血液、自然沉降血液、洗滌血細胞等。在使用了電泳的試樣的分析中，為了提高分析的準確性和再現性，有時使用校正 用物質(Calibration Material) 0此外，為了管理或維持分析的準確性和再現性，有時使 用精度管理用物質(Control Material) 0因此，本說明書中的「試樣」或「試樣原料」可以 含有校正用物質或精度管理用物質。另外，本說明書中「校正用物質」例如含有用於校正裝 置等的標準物質，「精度管理用物質」含有用於管理或維持分析的準確性和/或再現性的試 樣，例如可列舉出管理血清、混合血清(pooled serum)及標準液等。[試樣分析方法]本發明的試樣分析方法涉及下述試樣分析方法，在一個方式中，其是利用電泳法 進行的試樣分析方法，所述電泳法使用了具備流路和形成於上述流路中的試樣貯存槽的電 泳裝置，所述試樣分析方法包括向在上述流路中填充有泳動液的上述電泳裝置的上述試 樣貯存槽中配置試樣的步驟；以及通過對上述流路的兩端施加電壓來進行電泳的步驟，並 包括使上述試樣及上述泳動液中的下述a)及b)中的至少一者的濃度大致相同的步驟。a)通過上述電泳向與上述試樣中的分析對象物相同的方向移動、並且移動度小於 上述分析對象物的移動度的離子的濃度b)向與上述分析對象物相反的方向移動的離子的濃度此外，本發明的試樣分析方法也可以說是一邊連續地進行取樣一邊進行電泳的方 法。因此，作為其他的方式，本發明的試樣分析方法涉及下述試樣分析方法，其是一邊連續 地進行取樣一邊通過電泳來分析試樣的方法，所述試樣分析方法包括使試樣及泳動液中的 下述a)及b)中的至少一者的濃度大致相同的步驟。本方式的試樣分析方法中，優選為前 沿分析連續毛細管電泳。a)通過上述電泳向與上述試樣中的分析對象物相同的方向移動、並且移動度小於 上述分析對象物的移動度的離子的濃度b)向與上述分析對象物相反的方向移動的離子的濃度本發明的試樣分析方法中，從能夠進一步提高分離能力的方面出發，優選使試樣 及泳動液中的上述a)及b)的濃度大致相同。作為使試樣及泳動液中的上述a)及b)中的 至少一者的濃度大致相同的方法，例如可列舉出為了達到與泳動液中所含的離子成分大 致相同的濃度，使用具有與泳動液相同或類似成分的試樣調製液來稀釋(混合)試樣原料 從而調製試樣的方法；按照泳動液和試樣中所含的離子成分的濃度大致相同的方式分別調 制泳動液及試樣的方法等。此外，可列舉出準備使泳動液和稀釋後的試樣中上述a)及b) 中的至少一者的濃度成為大致相同的試樣調製液(試樣稀釋液)，準備上述a)及b)中的至 少一者中記載的離子組成(成分比)與泳動液相同、並且上述a)及b)中的至少一者的濃 度高於泳動液的添加劑，通過將所準備的添加劑添加到試樣原料或稀釋後的試樣中，從而 使泳動液和試樣中上述a)及b)中的至少一者的濃度相同等。另外，本說明書中「試樣調製 液(試樣稀釋液)」是指用於與試樣原料混合而調製試樣的溶液，例如包括用於稀釋試樣原 料的溶液。
因此，本發明的試樣分析方法還可以包括調製試樣的工序。試樣調製工序優選包 括為了達到與泳動液中的離子成分為大致相同的濃度，使用具有與泳動液相同或類似的離 子成分的試樣調製液來稀釋試樣原料從而調製試樣的步驟，此外，除此以外，還可以包括調 制上述試樣調製液(試樣稀釋液)、調製上述添加劑的步驟。另外，關於用於稀釋的試樣調 制液中的上述離子成分的濃度，鑑於用於稀釋試樣原料，優選比泳動液的濃度高。此外，本 發明的試樣分析方法還可以包括調製泳動液的工序，還可以包括將所調製的泳動液填充到 流路中的工序。本發明的試樣分析方法中，優選包括通過使試樣及泳動液中上述a)及b)中的至 少一者的濃度大致相同，從而使電泳中的流路內的處於試樣周圍的離子成為與配置於試樣 貯存槽中的試樣大致相同的狀態。本申請說明書中「試樣的周圍」包括能夠對試樣的電荷 造成影響而可以改變電荷的範圍，優選包括能夠對試樣中的分析對象物的電荷造成影響的 範圍。本發明的試樣分析方法中，從進一步提高分離能力的方面出發，優選流路包含離 子性的模擬固定相。本說明書中「離子性的模擬固定相」是指能夠與試樣中的分析對象物 結合而形成複合體的物質。離子性的模擬固定相可以含有在泳動液中而導入到流路中，也 可以含有在試樣中而導入到流路中，此外，也可以與泳動液及試樣分開導入到流路中，但從 提高分離能力的方面出發，優選添加到泳動液及試樣這兩者中。作為離子性的模擬固定相，當對像血紅蛋白那樣具有正電荷的分析對象物進行分 析時，例如可以使用硫酸化多糖類、羧酸化多糖類、磺酸化多糖類、磷酸化多糖類等具有陰 極性基團的多糖類，其中，優選為硫酸化多糖類及羧酸化多糖類，更優選為硫酸化多糖類。 作為硫酸化多糖類，例如可列舉出硫酸軟骨素、肝素、乙醯肝素、褐藻糖膠、或其鹽等，其中 優選為硫酸軟骨素或其鹽。作為硫酸軟骨素，可列舉出硫酸軟骨素A、硫酸軟骨素C、硫酸軟 骨素D、硫酸軟骨素E等。作為羧酸化多糖類，可列舉出海藻酸、透明質酸或其鹽等。為鹽的 情況下，作為對離子，可列舉出鹼金屬、鹼土類金屬、胺化合物、有機鹼等的離子。作為羧酸 化多糖類的鹽，例如有鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、鈣鹽、銨鹽、三(羥甲基)氨基甲烷(Tris)鹽、精氨 酸鹽、賴氨酸鹽、組氨酸鹽等。本發明的試樣分析方法也可以包括通過光學手法來檢測利用電泳的分離的工序。 作為利用光學手法的檢測，例如可列舉出吸光度的測定。吸光度的波長可以根據試樣、分析 對象物的種類而適當決定。本發明的試樣分析方法也可以包括對通過光學手法而得到的電泳圖進行解析的 工序。一邊連續地進行取樣一邊進行分離(電泳)的情況下，由所得到的電泳圖對試樣中 的分析對象物個別地進行分析是很困難的，但是通過進行解析處理，能夠對試樣中的分析 對象物個別地進行分離和分析。解析工序可以包括通過對電泳圖進行演算處理從而得到對 應於移動度(分離時間)而分離的電泳圖的步驟，也可以包括根據處理後的電泳圖中的各 峰的高度和/或峰的面積而求出試樣中的分析對象物的成分比的步驟。作為演算處理，例 如可列舉出微分處理、差分處理。本發明的試樣分析方法中，流路優選為毛細管。由此能夠進行毛細管電泳。本說 明書中「毛細管」是指內徑為ΙΟΟμπι以下的管。管的截面形狀可以是圓形，也可以是矩形。 此外，毛細管的長度沒有特別限制，本發明的試樣分析方法由於即使在分離長較短的情況下也可獲得充分的分離能力，因此例如為10 150mm，優選為20 60mm。本發明的試樣分析方法由於即使在分離長較短的情況下也可獲得充分的分離能 力，因此電泳裝置優選為微晶片化了的電泳晶片。電泳晶片的大小例如為長10 200mm、寬 10 60mm、厚0. 3 5mm，優選為長30 70mm、寬10 60mm、厚0. 3 5mm。作為電泳芯 片，可以使用後述的電泳晶片。本發明的試樣分析方法中，可以將對於前沿分析而言為充分量的試樣供給到流路 中後，代替試樣而將泳動液和/或洗滌液導入到流路中。這種情況下，泳動液優選與流路中 填充的泳動液相同。本發明的試樣分析方法也可以使用校正用物質或精度管理用物質作為試樣或試 樣原料。本方式中，本發明的試樣分析方法優選包括以校正用物質和/或精度管理用物質 作為試樣原料來調製試樣的工序。試樣調製工序例如也可以包括確認校正用物質和/或 精度管理用物質中所含的離子的工序；對校正用物質和/或精度管理用物質中所含的離子 和作為分析對象的生物試樣(以下稱為「分析對象試樣」)中所含的離子進行對比的工序; 根據校正用物質和/或精度管理用物質中的上述「通過泳動向與分析對象物相同的方向移 動、並且移動度小於分析對象物的移動度的離子」(上述a)的離子)或「向與分析對象物 相反的方向移動的離子」(上述b)的離子)或其他離子的有無和/或它們的濃度，按照與 分析對象試樣或其試樣原料的離子濃度大致相同的方式調整校正用物質和/或精度管理 用物質或調製後的試樣的離子濃度的工序。由此，能夠使校正用物質及精度管理用物質在 與分析對象試樣大致相同的條件下進行電泳，例如能夠提高裝置的校正精度、或進行充分 的精度管理。另外，作為其他的離子，例如可列舉出通過泳動向與分析對象物相同的方向移 動、並且移動度大於分析對象物的移動度的離子等。本方式是發現如下問題有時一般的校正用物質和/或精度管理用物質與生物試 樣的離子濃度不同，使用這樣的物質進行校正及精度管理時得不到充分的精度，並基於如 下認識的通過使校正用物質或精度管理用物質的離子的狀態與生物試樣大致相同，例如 可以提高裝置的校正精度、或進行充分的精度管理。上述的血清或血漿等生物試樣通常含有各種離子。該離子例如可以包括「通過泳 動向與分析對象物相同的方向移動、並且移動度小於分析對象物的移動度的離子」(上述a) 的離子)或向與分析對象物相反的方向移動的離子」(上述b)的離子)。例如血清或血漿 中含有約140mmol/L的鈉離子、約4mmol/L的鉀離子、約100mmol/L的氯離子，紅細胞中含 有約100mmol/L的鈉離子、約50mmol/L的鉀離子、約100mmol/L的氯離子。另一方面，為了在能夠穩定地保存分析對象物的條件下供給校正用物質及精度管 理用物質，通常添加用於使分析對象物穩定化的添加物等。當分析對象物為血紅蛋白或白 蛋白時，為了它們的穩定化，例如添加緩衝液、鹽類或蔗糖等添加物(血紅蛋白日本特開 平6-308120、日本專利3686482、日本專利4061365、日本特開2004-125560、白蛋白日本專 利4183116、W02001-094618)。由於以分析對象物的穩定化為目的，因此對起因於這些添加 物的離子或這些離子在電泳時造成的影響等基本不予考慮。因此，將校正用物質及精度管 理用物質與分析對象試樣進行比較時，存在校正用物質及精度管理用物質中的上述a)離 子和/或上述b)離子的濃度為低於分析對象試樣的濃度的情況和高於分析對象試樣的濃 度的情況。此外，通常，生物試樣中所含的離子成分在製造過程中通過透析等而被除去，有時校正用物質及精度管理用物質中基本不含上述離子。本發明者們使用這樣的校正用物質及精度管理用物質利用電泳來進行分析時，發 現所得到的結果與進行實際分析的分析對象試樣(例如，來源於生物試樣的試樣等)的分 析結果不同，有時無法充分達到校正用物質及精度管理用物質的目的。進而發現，如上所述，在校正用物質及精度管理用物質和分析對象試樣中，上述a) 的離子、上述b)的離子及其他離子等離子濃度經常不同，起因於該濃度的不同而產生分離 精度等分析精度、或測定時間等發生變動的問題。例如，當校正用物質及精度管理用物質與 分析對象試樣相比離子濃度為低濃度或者基本不含離子時，與生物試樣相比，來源於試樣 的離子濃度變成低濃度，由此導致電流難以流動，其結果是，電泳的速度變慢，測定需要花 費大量時間。另一方面，當校正用物質及精度管理用物質與分析對象試樣相比離子濃度為 高濃度時，與生物試樣相比，電流變得容易流動，其結果是，電泳的速度變快，得不到充分的 分離精度。本方式的方法中，由於包括上述的試樣調製工序，因此即使在例如校正用物質或 精度管理用物質的測定中也能夠提高分離精度，能夠提高裝置的校正精度、或進行充分的
精度管理。在試樣調製工序中，所謂使離子的狀態大致相同是指，當分析對象試樣含有上述 a)的離子和/或上述b)的離子時，包括按照調製後的試樣中的離子濃度與分析對象試樣 大致相同的方式以校正用物質或精度管理用物質作為試樣原料來調製試樣的步驟，當分析 對象試樣含有上述a)的離子、上述b)的離子及其他的離子時，包括按照調製後的試樣中的 上述a)的離子、上述b)的離子及其他離子的離子濃度與分析對象試樣大致相同的方式以 校正用物質或精度管理用物質作為試樣原料來調製試樣的步驟。作為使濃度大致相同的方 法，例如當在製造校正用物質和/或精度管理用物質時添加不會損害穩定性的離子時，可 列舉出按照使其濃度達到與生物試樣相同程度的濃度的方式來添加的方法；當將校正用物 質和/或精度管理用物質溶解後使用時，可列舉出使用其溶解液以達到與生物試樣相同程 度的濃度、或者使用與生物試樣的離子濃度為相同程度的泳動液來進行溶解的方法等。通過上述的以校正用物質和/或精度管理用物質作為試樣原料的試樣調製工序， 例如即使在校正用物質或精度管理用物質的測定中也能夠提高分離精度，能夠提高裝置的 校正精度、或進行充分的精度管理。因此，作為又一其他的方式，本發明涉及包括該試樣調 制工序的、使用校正用物質的校正方法及使用精度管理用物質的精度管理方法。[分析對象物的測定方法]作為又一其他的方式，本發明涉及試樣中的分析對象物的測定方法，該方法包括 採用本發明的試樣分析方法來測定試樣中的分析對象物。試樣及分析對象物如上所述。作 為分析對象物，優選為血紅蛋白，更優選為HbAlc，進一步優選為作為糖尿病診斷的指標的 穩定型HbAlc。此外，本發明的測定方法優選測定作為糖尿病診斷的指標的穩定型HbAlc和 其他的血紅蛋白成分。因此，作為又一其他的方式，本發明涉及包括採用本發明的試樣分析 方法來測定HbAlc的HbAlc測定方法，從進行糖尿病的診斷的觀點出發，優選採用本發明的 試樣分析方法將穩定型HbAlc與其他血紅蛋白成分分離後進行測定。[測定用試劑盒]作為又一其他的方式，本發明涉及包括泳動液、用於調製試樣的試樣調製液、以及
10說明書的測定用試劑盒，所述說明書記載了按照泳動液及調製後的試樣中的下述a)及b) 中的至少一者的濃度成為大致相同的方式使用上述試樣調製液來調製試樣。另外，本發明 的測定試劑盒也可以包括說明書不與本發明的測定試劑盒綁在一起而由全球資訊網提供的情 況。a)通過上述電泳向與上述試樣中的分析對象物相同的方向移動、並且移動度小於 上述分析對象物的移動度的離子的濃度b)向與上述分析對象物相反的方向移動的離子的濃度本發明的測定用試劑盒中，泳動液及試樣調製液如上所述。此外，本發明的測定用 試劑盒優選還包含電泳晶片。電泳晶片優選為包含試樣貯存槽、泳動液貯存槽及流路、且試 樣貯存槽和泳動液貯存槽通過流路而連通的電泳晶片。此外，電泳晶片的流路中也可以填 充上述泳動液。作為電泳晶片，例如可列舉出國際公開第2008/136465號中記載的電泳芯 片、或後述圖1中所示的電泳晶片等。本發明的測定用試劑盒中代替上述試樣調製液、或者與上述試樣調製液一起含有 如下添加劑上述a)及b)中的至少一者中記載的離子組成(成分比)與泳動液相同，並 且，上述a)及b)中的至少一者的濃度高於泳動液。本發明的測定用試劑盒例如也可以含有校正用物質及精度管理用物質。本方式的 測定用試劑盒優選包含記載了以試劑盒中所含的校正物質和/或精度管理用物質作為試 樣原料來調製試樣的方法的說明書，更優選包含記載了按照校正用物質和/或精度管理用 物質中的上述「通過泳動向與分析對象物相同的方向移動、且移動度小於分析對象物的移 動度的離子」(上述a)的離子)、「向與分析對象物相反的方向移動的離子」(上述b)的離 子)或其他離子濃度與分析對象試樣的離子濃度為大致相同的方式進行調製的說明書。此 外，校正用物質及精度管理用物質也可以是後述的校正用物質和/或精度管理用物質。本發明的測定用試劑盒例如也可以包含記載了以市售的校正物質和/或精度管 理用物質作為試樣原料來調製試樣的方法的說明書。由此，在試劑盒中不含校正用物質和/ 或精度管理用物質的情況下、或者使用試劑盒中所含的校正用物質和/或精度管理用物質 以外的校正用物質和/或精度管理用物質的情況下，也能夠使來源於校正物質及精度管理 用物質的試樣與生物試樣的離子濃度大致相同，能夠容易地進行裝置的校正精度的提高、 和充分的精度管理。說明書中優選記載了例如有關各種校正物質和/或精度管理用物質 的製品的調製方法，例如只要記載了對於某種製品用純化水進行溶解，對於別的製品用生 理食水(0.9%的食鹽水)進行溶解，對於其他別的製品用泳動液進行溶解等方法即可。此 外，當校正用物質及精度管理用物質為液體系時，例如可以記載通過用純化水、生理鹽水及 泳動液等溶液稀釋來進行調製，此外，當校正用物質及精度管理用物質為冷凍乾燥品等幹 的體系時，也可以記載通過利用上述溶液等溶解來進行調製。進而，通過記載稀釋倍率、液 量等，能夠進行更恰當的調製，能夠提高校正精度和/或精度管理。[試樣的調製方法]作為又一其他的方式，本發明涉及一種試樣的調製方法，其是通過使用了電泳法 的分析方法來進行分析的試樣的調製方法，包括按照用於電泳的泳動液及所調製的試樣中 的下述a)及b)中的至少一者的濃度成為大致相同的方式來調製試樣。根據本發明的試樣 調製方法，能夠更簡便地進行本發明的試樣分析方法。
a)通過上述電泳向與上述試樣中的分析對象物相同的方向移動、且移動度小於上 述分析對象物的移動度的離子的濃度b)向與上述分析對象物相反的方向移動的離子的濃度作為上述試樣的調製，例如可列舉出使用具有與泳動液相同或類似成分的試樣 調製液來稀釋試樣原料以達到與泳動液中的離子成分為大致相同的濃度從而調製試樣；分 別調製泳動液及試樣以達到泳動液與試樣中離子成分為大致相同的濃度等。此外，除此以 外可以包括準備使泳動液和稀釋後的試樣中上述a)及b)中的至少一者的濃度成為大致 相同的試樣調製液(試樣稀釋液)；準備上述a)及b)中的至少一者中記載的離子的組成 (成分比)與泳動液相同、且上述a)及b)中的至少一者的濃度高於泳動液的添加劑，通過 將所準備的添加劑添加到試樣原料或稀釋後的試樣中從而使得泳動液和試樣中上述a)及 b)中的至少一者的濃度相同等。本發明的試樣分析方法、分析對象物的測定方法、測定用試劑盒及試樣的調製方 法可以用於以糖尿病等的診斷、治療或經過觀察為目的的用途中，但不限定於此，例如也可 以用於單純的化學分析、或突變血紅蛋白等的基因多型的檢測、酶的同工酶的比率的確認、 或者食品、飲料、調味料、洗滌劑、化妝品或醫藥品等的成分的分析、粘合劑(例如粘合膠帶 等)、塗料及油墨等的提取物或溶解物的分析之類的不以診斷為目的的用途中。[校正用物質·精度管理用物質]作為又一其他的方式，本發明涉及校正用物質、及包含校正用物質的試劑盒。本發 明的校正用物質涉及含有分析對象物、還以與該生物試樣中的濃度大致相同的離子濃度含 有包含分析對象物的生物試樣中可以含有的離子成分的校正用物質。根據本發明的校正用 物質，例如能夠提高裝置的校正精度。此外，含有本發明的校正用物質的試劑盒包含校正用 物質、和記載了以試劑盒中所含的校正用物質作為試樣原料的試樣的調製方法的說明書。 校正用物質可以是本發明的校正用物質，也可以是市售的校正用物質。當含有市售的校正 用物質時，本方式的試劑盒優選包含記載了按照校正用物質中的上述「通過泳動向與分析 對象物相同的方向移動、且移動度小於分析對象物的移動度的離子」(上述a)的離子)、「向 與分析對象物相反的方向移動的離子」(上述b)的離子)或其他離子濃度與分析對象試樣 的離子濃度為大致相同的方式進行調製的說明書。作為又一其他的方式，本發明涉及精度管理用物質、及含有精度管理用物質的試 劑盒。本發明的精度管理用物質涉及含有分析對象物、還以與該生物試樣中的濃度大致相 同的離子濃度含有包含分析對象物的生物試樣中可以含有的離子成分的精度管理用物質。 根據本發明的精度管理用物質，例如可以提高裝置的校正精度。此外，含有本發明的精度管 理用物質的試劑盒包含精度管理用物質、和記載了以試劑盒中所含的精度管理用物質作為 試樣原料的試樣的調製方法的說明書。精度管理用物質可以是本發明的精度管理用物質， 也可以是市售的精度管理用物質。當含有市售的精度管理用物質時，本方式的試劑盒優選 包含記載了按照精度管理用物質中的上述「通過泳動向與分析對象物相同的方向移動、且 移動度小於分析對象物的移動度的離子」(上述a)的離子)、「向與分析對象物相反的方向 移動的離子」(上述b)的離子)或其他離子濃度與分析對象試樣的離子濃度為大致相同的 方式進行調製的說明書。關於本發明的校正用物質及精度管理用物質，除了包括按照與該生物試樣中的濃度成為大致相同的離子濃度的方式來添加或調製含有分析對象物的生物試樣中可以含有 的離子成分的工序以外，可以與一般的校正用物質或精度管理用物質的製造方法同樣地進 行。本發明的校正用物質及精度管理用物質、以及含有它們的試劑盒並非僅適用於本 發明的試樣分析方法、及分析對象物的測定方法，也可以作為其他的利用電泳的測定、或利 用電泳以外的測定原理的測定中使用的校正用物質及精度管理用物質而適用。在其他的利 用電泳的測定、或利用電泳以外的測定原理的測定中使用的情況下，也同樣地只要進行上 述試樣的調製方法即可。另外，本發明的校正用物質及精度管理用物質例如不包括將溶血 試樣等上述生物試樣直接冷凍乾燥或稀釋而得到的物質。以下，舉例對本發明的試樣分析方法進行說明。但是，以下的說明只不過是一個例 子，不用說本發明並不限定於此。(實施方式1)本實施方式以使用圖1所示的微晶片化了的毛細管電泳晶片、試樣原料為全血、 分析對象物為血紅蛋白的情況為例進行說明。圖1是表示本發明的試樣分析方法中使用的電泳晶片的構成的一個例子的概念 圖。圖1所示的電泳晶片具有流路3、試樣貯存槽2a及泳動液貯存槽2b，試樣貯存槽2a及 泳動液貯存槽2b分別形成於流路3的兩端。電泳晶片整體的大小例如為長10 200mm、寬10 60mm、厚0. 3 5mm，優選為長 30 70mm、寬 10 60mm、厚 0. 3 5mm。流路3的長度可以根據電泳晶片的長度適當決定，例如為50 150mm，優選為 50 60mm。此外，流路3的內徑例如為200 μ m以下，優選為10 200 μ m，更優選為25 IOOym0流路3的形狀沒有特別限制，可以是圓形，也可以是矩形。流路3的材質可列舉出玻璃、熔融二氧化矽、塑料等。作為塑料制，例如可列舉出 聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚四氟乙烯(PTFE)、聚醚醚酮(PEEK)等。 流路3的內壁例如可以用甲矽烷化劑等被覆。利用甲矽烷化劑等對流路3的內壁的被覆例 如可以與國際公開2008/029685號、國際公開2008/136465號、日本特開2009-186445號公 報中記載的方法等同樣地進行。此外，流路3也可以是市售的毛細管。試樣貯存槽2a及泳動液貯存槽2b的容積可以根據流路的內徑及長度等適當決 定，例如分別為1 IOOOmm3的範圍，更優選為50 IOOmm3的範圍。試樣貯存槽2a及泳動 液貯存槽2b也可以分別具備用於對流路3的兩端施加電壓的電極。從抑制試樣及泳動液的蒸發、減少濃度變化的觀點出發，流路3、試樣貯存槽2a及 泳動液貯存槽2b的上表面優選用密封材等覆蓋。接下來，對使用了圖1所示的電泳晶片的試樣分析方法的一個例子進行說明。首先，向電泳晶片的流路3中填充泳動液。向流路3中填充泳動液例如可以通過壓力或毛細管現象而進行。此外，也可以使 用在流路3中填充有泳動液的電泳晶片。作為泳動液，例如可以使用有機酸、緩衝液、胺基酸類等，優選為有機酸。作為有機 酸，可列舉出馬來酸、酒石酸、琥珀酸、富馬酸、鄰苯二甲酸、丙二酸、蘋果酸等。作為緩衝液， 例如可列舉出MES、ADA、ACES、BES, MOPS、TES, HEPES, TRICINE等。作為胺基酸類，可列舉出甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸等。泳動液中，除了有機酸和/或緩衝液以外，還可以含有弱鹼或 1，4_ 二氨基丁烷。作為弱鹼，例如可列舉出精氨酸、賴氨酸、組氨酸、Tris等。泳動液的pH 例如為pH4. 5 6。此外，像本實施方式那樣分析對象物為血紅蛋白時，泳動液優選含有硫 酸軟骨素或其鹽之類的硫酸化多糖類等離子性的模擬固定相。由此，可以在血紅蛋白的β 鏈N末端的氨基上結合硫酸化多糖類而形成複合體，從而進一步提高分離精度。接著，在流路3中填充有泳動液的上述電泳晶片的試樣貯存槽2a中配置試樣。試樣貯存槽2a中配置的試樣可以通過將作為試樣原料的全血利用上述試樣調製 液等稀釋來進行調製。在該試樣的調製中，優選使泳動液和試樣中的「通過電泳向與作為分 析對象物的血紅蛋白相同的方向移動、且移動度小於作為分析對象物的血紅蛋白的移動度 的離子的濃度」及「向與作為分析對象物的血紅蛋白相反的方向移動的離子的濃度」的至少 一者大致相同。例如，當泳動液含有硫酸軟骨素、鈉、酒石酸、精氨酸作為離子成分時，由於 作為分析對象物的血紅蛋白與硫酸軟骨素形成複合體，變成陰性的狀態，因此優選使具有 負電荷的硫酸軟骨素及酒石酸的離子(即，向與分析對象物相反的方向移動的離子)的濃 度大致相同。使上述離子的濃度大致相同是指，如上所述，當分離長(試樣貯存槽的流路側的 端部與分析部的距離)為10 30mm時，泳動液中所含的離子與對應於該泳動液的離子的 試樣中的離子的濃度之差例如超過-lOmmol/L且不足+lOmmol/L時可以視為大致相同的濃 度，優選為-5mmol/L +5mmol/L等。當以血清、血漿或紅細胞作為試樣原料時，它們中例 如存在Na、K及Cl等，當分析對象物為血紅蛋白時，Cl成為「向與分析對象物相反的方向移 動的離子」(上述b)的離子)。血清、血漿及紅細胞中的Cl (分子量35. 5)的濃度通常為 lOOmmol/L = 3. 55g/L左右，將其稀釋10倍來調製試樣的情況下，試樣中變成含有0. 355g/ L左右濃度的Cl。因此，可以設定泳動液及試樣中的Cl以外的上述b)的離子的濃度，使 得泳動液和試樣中的Cl的離子濃度之差在上述範圍內。當泳動液及試樣含有酒石酸(分 子量150)時，酒石酸成為b)的離子，因此通過使泳動液及試樣中的酒石酸的濃度例如為 3. 55g/L = 24mmol/L以上、優選為7. lg/L = 48mmoI/L以上，可以將泳動液中所含的離子 與對應於該泳動液的離子的試樣中的離子的濃度之差調整至上述範圍。另外，試樣中例如 可以含有磷酸根離子或硫酸根離子等離子，但它們的濃度約為Immol/L。因此，關於這些離 子，可以包含在上述優選的範圍(-5mmol/L +5mmol/L)內。試樣原料的稀釋率例如為1. 2 100倍，優選為2 30倍，更優選為3 15倍。 此外，當試樣原料中以能給分離能力造成影響的程度含有離子成分時，試樣原料的稀釋率 例如為2 1000倍，優選為5 300倍，更優選為10 200倍。此外，試樣及泳動液的pH優選為大致相同。因此，可以向試樣和/或泳動液中添 加PH緩衝物質來調節pH。作為pH緩衝物質，沒有特別限制，可以使用任意離子，其中，從 能夠以更穩定的離子狀態進行電泳的方面出發，優選為其PKa包含在pH調節後的試樣及泳 動液的PH的士 1.0以內的離子，更優選為包含在士0.7以內的離子。作為pH緩衝物質的 濃度，當對於全部離子而言時，例如為10 3000mmol/L，優選為50 1500mmol/L，更優選 為100 800mmol/L。當為pKa包含在調節後的試樣及泳動液的pH中的離子的情況下，例 如為5 2000mmol/L，優選為20 1000mmol/L，更優選為50 600mmol/L，進一步優選為 100 400mmol/L。
14
接著，對流路3的兩端、即試樣貯存槽2a及泳動液貯存槽2b之間施加電壓。由此， 從試樣貯存槽2a向流路3中導入試樣並在流路3中進行分離，含有血紅蛋白的試樣從試樣 貯存槽2a向泳動液貯存槽2b移動。對流路3的兩端施加的電壓例如為0. 5 10kV，優選為0. 5 5kV。然後，在規定的位置進行測定。測定例如可以通過吸光度測定等光學方法進行。當 分析對象物為血紅蛋白時，例如優選進行波長415nm的吸光度的測定。進行測定的位置、即分離所需要的長度(圖1中的y)可以根據流路3的長度等適 當決定。例如當流路3的長度為50 150mm時，優選在流路3的距離試樣貯存槽2a側的 端部5 140mm的位置進行，更優選為10 100mm，進一步優選為15 50mrm。通過如上所述進行分析，從而可以進行血紅蛋白的測定，優選可以將HbAlc與其 他血紅蛋白成分、進一步優選將作為糖尿病診斷指標的穩定型HbAlc與其他血紅蛋白成分 分離而測定。作為其他的血紅蛋白成分，可列舉出不穩定型HbAlc、HbS、HbF、HbA2、HbC等。 進而，通過對所得到的電泳圖進行解析，例如可以測定HbAlc的比率(％ HbAlc)或HbAlc的 量。因此，本發明的分析方法可以利用於糖尿病的預防、診斷及治療等用途中。另外，上述實施方式中，以使用將全血進行溶血處理而得到的溶血試樣作為試樣 原料、並使用將其用試樣調製液稀釋而得到的試樣的情況為例進行了說明，但本發明並不 限定於此。試樣例如可以是從生物體採集的試樣原料(例如溶血了的血液)本身，也可以 是將試樣原料用溶劑(試樣調製液)稀釋而得到的試樣。試樣原料例如可以是含有血液的 血液試樣，也可以是包含含有血紅蛋白的市售品的試樣。作為血液試樣，沒有特別限制，例 如可列舉出將全血等血細胞含有物進行溶血處理而得到的溶血試樣等。上述溶血處理沒有 特別限制，例如可列舉出超聲波處理、冷凍解凍處理、加壓處理、滲透壓處理、表面活性劑處 理等。上述滲透壓處理沒有特別限制，也可以將全血等血細胞含有物用低滲液等進行處理。 作為上述低滲液，沒有特別限制，例如可列舉出水、緩衝液等。上述緩衝液沒有特別限制，例 如可以含有前述的緩衝劑、添加劑等。作為上述表面活性劑處理，沒有特別限制，例如可列 舉出非離子性表面活性劑等。作為上述非離子性表面活性劑，沒有特別限制，例如可列舉出 聚氧乙烯異辛基苯基醚(商品名「Triton(註冊商標)x-100」)等。以下，利用實施例及比較例進一步詳細說明本發明。但是，本發明並不限定於以下 的實施例來解釋。實施例[微晶片]使用具有圖1所示結構的電泳晶片(聚甲基丙烯酸酯制，長70mm、寬30mm)。電 泳晶片具有矩形的流路3，在流路3的兩端分別形成有試樣貯存槽2a (容積0. 05mL)和泳 動液貯存槽2b (容積0. 05mL)。流路3的長度(圖1中的χ)為40mm，流路3的寬度及深 度分別為40 μ m(流路的內徑40 μ m)。此外，試樣貯存槽2a的中心與泳動液貯存槽2b的 中心的距離為46mm。(實施例1)實施例1示出了分析對象物為穩定型HbAlc的例子。[泳動液]泳動液使用將含有1. 0重量％硫酸軟骨素C鈉(生化學工業)、ImMNaN3及0. 01 %
15Triton (註冊商標)X-100的lOOmmol/L L-酒石酸溶液用L-精氨酸調節至pH4. 8而得到的溶液。[試樣]準備將含有1. 11重量％硫酸軟骨素C鈉(生化學工業)、1. ImM
Triton (註冊商標)X-100的lllmmol/L L-酒石酸溶液用L-精氨酸調節至pH4. 8而得到 的溶液，作為試樣調製液。準備血紅蛋白濃度為140g/L的血紅蛋白溶液作為試樣原料。另 外，該血紅蛋白溶液含有蔗糖作為添加劑，但不含上述a)的離子及b)的離子或上述其他的 離子。通過將試樣原料0. OlmL用試樣調製液0. 09mL稀釋，從而來調製試樣(稀釋10倍)。 即，按照硫酸軟骨素C鈉的濃度為1. 0重量％、L-酒石酸的濃度為lOOmmol/L的方式調製試 樣。將泳動液及試樣中的硫酸軟骨素、酒石酸及精氨酸的離子濃度示於下述表1中。另外， 硫酸軟骨素及酒石酸相當於「向與分析對象物相反的方向移動的離子」(上述b)的離子)。 此外，作為試樣原料，使用含有不穩定型HbAlc、穩定型HbAlc及HbAO的血紅蛋白溶液(不 含HbS及HbF的血紅蛋白溶液)。[電泳]向電泳晶片的泳動液貯存槽2b中導入泳動液，通過毛細管作用，向流路3中填充 泳動液。接下來，向試樣貯存槽2a中導入試樣。向試樣貯存槽2a及泳動液貯存槽2b中分 別插入電極，對所插入的電極施加1400V的電壓，從而進行電泳。在距離試樣貯存槽2a側 的流路3的端部20mm(圖1中的y)的位置，測定415nm下的吸光度。將所得到的電泳圖的 一個例子示於圖2中。(比較例1)比較例1中，除了使用泳動液(將含有1. 0重量％硫酸軟骨素C鈉(生化學工業)、 ImM NaN3及0. 01% Triton (註冊商標)X-100的lOOmmol/L L-酒石酸溶液用L-精氨酸調 節至PH4.8而得到的溶液)作為試樣調製液以外，與實施例1同樣地進行測定。將泳動液 及試樣中的硫酸軟骨素、酒石酸及精氨酸的離子濃度示於下述表1中。將所得到的電泳圖 的一個例子示於圖3中。
權利要求
1.一種試樣分析方法，其是利用電泳法進行的試樣分析方法，所述電泳法使用了具備 流路和形成於所述流路中的試樣貯存槽的電泳裝置，所述試樣分析方法包括向在所述流路中填充有泳動液的所述電泳裝置的所述試樣貯存槽中配置試樣的步驟;以及通過對所述流路的兩端施加電壓來進行電泳的步驟，並且包括使所述試樣及所述泳動液中的下述a)及b)中的至少一者的濃度大致相同的 步驟，a)通過所述電泳向與所述試樣中的分析對象物相同的方向移動、並且移動度小於所述 分析對象物的移動度的離子的濃度，b)向與所述分析對象物相反的方向移動的離子的濃度。
2.根據權利要求1所述的試樣分析方法，在所述試樣及所述泳動液中，使所述a)及b) 的濃度大致相同。
3.根據權利要求1所述的試樣分析方法，其包括下述步驟通過使所述試樣及所述泳 動液中所述a)及b)中的至少一者的濃度大致相同，從而使所述電泳中的所述流路內的位 於試樣周圍的離子成為與所述試樣貯存槽中配置的試樣大致相同的狀態。
4.根據權利要求1所述的試樣分析方法，所述流路為毛細管，所述電泳法為毛細管電 泳法。
5.根據權利要求1所述的試樣分析方法，所述試樣是含有血紅蛋白的試樣。
6.一種血紅蛋白Alc的測定方法，所述血紅蛋白Alc的測定方法包括利用權利要求 1 5中任一項所述的試樣分析方法來測定血紅蛋白Alc的步驟。
7.一種測定用試劑盒，其包含泳動液、用於調製試樣的試樣調製液和說明書，所述說明 書記載了按照泳動液及調製後的試樣中的下述a)及b)中的至少一者的濃度成為大致相同 的方式使用所述試樣調製液來調製試樣，a)通過所述電泳向與所述試樣中的分析對象物相同的方向移動、並且移動度小於所述 分析對象物的移動度的離子的濃度，b)向與所述分析對象物相反的方向移動的離子的濃度。
8.根據權利要求7所述的測定用試劑盒，其還包含電泳晶片，所述電泳晶片是包含試 樣貯存槽、泳動液貯存槽及流路，並且所述試樣貯存槽與所述泳動液貯存槽通過所述流路 而連通的電泳晶片。
9.根據權利要求7或8所述的測定用試劑盒，其還包含校正用物質和/或精度管理用 物質。
10.一種試樣的調製方法，其是通過利用電泳法的分析方法來進行分析的試樣的調製 方法，其包括下述步驟按照用於電泳的泳動液及所調製的試樣中的下述a)及b)中的至少一者的濃度成為大 致相同的方式來調製試樣，a)通過所述電泳向與所述試樣中的分析對象物相同的方向移動、並且移動度小於所述 分析對象物的移動度的離子的濃度，b)向與所述分析對象物相反的方向移動的離子的濃度。
全文摘要
本發明提供一種分離精度得到了提高的試樣的分析方法。涉及一種試樣分析方法，其是利用電泳法進行的試樣的分析方法，所述電泳法使用了具備流路和形成於上述流路中的試樣貯存槽的電泳裝置，所述分析方法包括向在上述流路中填充有泳動液的上述電泳裝置的上述試樣貯存槽中配置試樣的步驟；以及通過對上述流路的兩端施加電壓來進行電泳的步驟，並包括使上述試樣及上述泳動液中的下述a)及b)中的至少一者的濃度大致相同的步驟a)通過上述電泳向與上述試樣中的分析對象物相同的方向移動、並且移動度小於上述分析對象物的移動度的離子的濃度，b)向與上述分析對象物相反的方向移動的離子的濃度。
文檔編號G01N27/447GK102128873SQ20111000944
公開日2011年7月20日 申請日期2011年1月17日 優先權日2010年1月19日
發明者中山雄介, 米原聰 申請人:愛科來株式會社