一種具抗腫瘤活性的甘草查爾酮A硫脲嘧啶類衍生物及其合成方法與流程

2023-12-09 03:55:56 4

本發明涉及一類具抗腫瘤活性的甘草查爾酮a硫脲嘧啶類衍生物及其合成方法，屬於醫藥化學領域。

背景技術：
：

腫瘤已嚴重威脅到人類的健康，尋找有效安全、毒副作用小的抗腫瘤藥物一直是腫瘤藥物研發工作者孜孜以求的目標。隨著藥物化學的發展，以嘧啶環為結構母核的化合物在腫瘤治療中的作用引起廣泛關注。

甘草查爾酮a被視為脹果甘草的種屬特異性成分，其結構如下所示。

近年來，研究發現甘草查爾酮a具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗腫瘤、降脂、解痙和抗瘧抗寄生蟲等多種生物活性，在醫藥領域具有很大的開發價值。但甘草查爾酮a是平面性強的分子，水溶性差。

技術實現要素：
：

本發明的目的在於提供一類具有抗腫瘤活性的甘草查爾酮a硫脲嘧啶類衍生物及其合成方法，以提高甘草查爾酮a的水溶性和抗腫瘤活性。

本發明的實現過程如下：

結構通式(i)所示的化合物，

其中：r為c1-c4的烷基，c1-c4的烷氧基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的苄基、硝基；

所述的取代為單取代或多取代，取代基為：滷素、c1-c4的烷氧基、氰基、三氟甲基、苯氧基。

結構通式(i)所示的化合物的合成方法，以甘草查爾酮a、硫脲類化合物為原料，以有機鹼為催化劑，在甲苯或dmf作為反應溶劑的條件下進行合成。

具體來說，包括如下步驟，

(1)向反應器中按摩爾比為1:1～1:1.5加入甘草查爾酮a和硫脲類化合物，加入有機溶劑混合均勻，加入有機鹼催化劑，80℃～120℃回流反應3～8小時；

(2)將步驟(1)反應體系的固液混合物減壓濃縮後，柱層析分離提純，乾燥得到目標產物。

步驟(1)中所述的甘草查爾酮a與硫脲類化合物的摩爾比優選為1:1～1:1.3，有機溶劑為甲苯或dmf，反應溫度優選為105℃～115℃，有機鹼優選為三乙胺。

本發明的優點在於：原料環保，生產成本低，操作安全性高，反應條件溫和，可實現反應原料的充分利用，適用於工業化生產，解決了現有技術產率低的問題，同時將嘧啶環引入到甘草查爾酮a的化學結構中，對探究該類化合物的生物活性與總結構效關係具有重要的理論價值和應用價值。

具體實施方式：

下面結合具體實施例對本發明作進一步闡述。這些實施例僅是出於解釋說明的目的，而不限制本發明的範圍和實質。

一類甘草查爾酮a硫脲嘧啶類衍生物的合成方法包括如下步驟：

(1)向反應器中按摩爾比為1:1～1:1.5，加入甘草查爾酮a、硫脲類化合物，加甲苯或dmf混合均勻，其中溶劑體積小於反應器容積的2/3，加入有機鹼催化劑三乙胺，置於磁力攪拌器上攪拌，加熱到80℃～120℃，回流反應3～8小時；

(2)反應過程中使用薄層色譜追蹤，及時監測反應的進行程度，待原料反應完全後停止加熱，撤去冷凝裝置；

(3)將步驟(2)反應體系的固液混合物減壓濃縮後，柱層析分離提純，乾燥得到目標產物。

本發明部分優選實施方案中的化合物結構式如下所示：

實施例1

6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-1-甲基-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(1)的製備。

在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和68.44mg1-甲基硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應3小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束後，減壓濃縮，柱層析，脫幹得到棕色粉末113mg，總收率46.57％。

棕黃色結晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),6.95(1h,s),6.75(2h,d,j＝7.52hz),6.41(1h,s),6.30(1h,m),5.33(2h,s),5.00-4.98(2h,m),4.0(1h,t),3.83(3h,s),3.10(3h,s),1.76-1.51(2h,m),1.69(6h,s)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):181.5,164.6,160.2,156.1,155.0,148.5,133.2,129.2,125.2,116.2,111.1,103.8,62.0,56.1,40.2,28.6.ms(esi)for(m+h)+:411.2.

實施例2

1-苄基-6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(2)的製備。

在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和107.73mg1-苄基硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應5小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束後，減壓濃縮，柱層析，脫幹得到棕色粉末124.72mg，總收率43.36％。

棕黃色結晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),7.33-7.23(5h,m),6.90(1h,s),6.75(2h,d,j＝7.52hz),6.41(1h,s),6.30(1h,m),5.33(2h,s),5.00-4.98(2h,m),4.0(1h,t),3.83(3h,s),3.80(2h,s),1.76-1.51(2h,m),1.69(6h,s)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):181.2,164.8,161.0,156.2,155.1,147.8,136.5,133.2,129.1,128.6,127.4,125.0,116.2,111.1,104.0,59.4,55.4,40.5,39.7,28.3.ms(esi)for(m+h)+:487.2.

實施例3

6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-1-苯基-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(3)的製備。

在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和116.95mg1-苯基硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束後，減壓濃縮，柱層析，脫幹得到棕色粉末115.31mg，總收率41.28％。

棕黃色結晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.87(2h,d,j＝7.52hz),7.25(2h,t),6.95(1h,s),6.83(2h,d,j＝7.52hz),6.75(1h,m),6.60(2h,m),6.41(1h,s),6.30(1h,q),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(3h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,164.6,160.8,155.1,154.7,148.9,140.3,134.3,129.1,128.4,126.2,121.6,117.0,111.1,103.8,69.9,56.1,41.1,39.8,28.6.ms(esi)for(m+h)+:473.2

實施例4

6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-1-(鄰甲苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(4)的製備。

在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和97.73mg1-(鄰甲苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束後，減壓濃縮，柱層析，脫幹得到棕色粉末(121.79mg),總收率42.35％。

棕黃色結晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),7.18(1h,d),7.04(1h,t),6.95(1h,s),6.83(2h,d,j＝7.52hz),6.65(1h,t),6.41(1h,s),6.30(1h,q),6.19(1h,d),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(3h,s),2.12(3h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,164.6,160.8,155.1,154.7,147.8,139.2,137.2,133.2,131.8,129.4,128.3,126.0,123.2,121.7,116.0,111.1,103.8,70.2,55.1,40.1,39.8,28.6,18.2.ms(esi)for(m+h)+:487.2.

實施例5

1-(2-氯苯基)-6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(5)的製備。

在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和113.41mg1-(2-氯苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應4小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束後，減壓濃縮，柱層析，脫幹得到棕色粉末(148.23mg),總收率49.46％。

棕黃色結晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.85(2h,d,j＝7.52hz),7.43(1h,d),7.11(1h,t),6.95(1h,s),6.85(2h,d,j＝7.52hz),6.71(1h,t),6.54(1h,d),6.41(1h,s),6.30(1h,q),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(3h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,164.6,160.8,155.1,154.7,147.8,146.0,138.8,133.2,131.7,130.2,129.1,128.3,127.5,125.2,122.6,116.0,111.1,103.8,68.4,56.1,40.1,39.8,28.6.ms(esi)for(m+h)+:507.2.

實施例6

6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-1-(2-甲氧基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(6)的製備。

在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和110.02mg1-(2-甲氧基苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束後，減壓濃縮，柱層析，脫幹得到棕色粉末(135.94mg)，總收率45.76％。

棕黃色結晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),6.95(1h,s),6.88(1h,m),6.75(2h,d,j＝7.52hz),6.79(1h,m),6.66(1h,m),6.41(1h,s),6.39(1h,d),6.30(1h,q),5.35(2h,s),5.00-4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(6h,s),1.88-1.63(2h,m),1.69(6h,s)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,166.9,164.6,160.8,155.1,154.7,147.8,133.2,129.1,128.4,127.2,125.2,123.0,121.4,116.0,112.9,111.1,103.8,75.2,56.1,56.8,40.1,39.8,28.6.ms(esi)for(m+h)+:503.2.

實施例7

1-(3-氟苯基)-6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(7)的製備。

在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和130.77mg1-(3-氟苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到90℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束後，減壓濃縮，柱層析，脫幹得到棕色粉末126.76mg，總收率43.72％。

棕黃色結晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),7.21(1h,m),6.95(1h,s),6.75(2h,d,j＝7.52hz),6.56(1h,m),6.54(1h,m),6.41(1h,s),6.37(1h,m),6.30(1h,q),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(3h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,164.6,163,2,160.8,155.1,154.7,147.8,141.9,135.2,130.6,129.1,128.2,125.2,121.6,117.2,115.0,111.1,103.8,67.9,56.1,40.1,39.8,28.6.ms(esi)for(m+h)+:491.2.

實施例8

3-(6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-2-硫代-5,6-二氫嘧啶1(2h)-基)苄腈(8)的製備。

在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和126.16mg1-(3-氰基苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到105℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束後，減壓濃縮，柱層析，脫幹得到棕色粉末117.83mg，總收率40.06％。

棕黃色結晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),7.30(1h,m),7.24(1h,m),6.95(1h,s),6.78(1h,m),6.85(2h,d,j＝7.52hz),6.69(1h,m),6.41(1h,s),6.30(1h,q),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(3h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,164.6,160.8,155.1,154.7,148.8,141.0,136.7,133.5,131.2,129.4,127.3,125.2,121.6,118.6,116.0,112.9,111.1,106.8,69.9,56.1,40.1,39.8,28.6.ms(esi)for(m+h)+:498.2.

實施例9

6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-1-(3-(三氟甲基)苯基)-5，6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(9)的製備。

在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和169.19mg1-(3-(三氟甲基)苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束後，減壓濃縮，柱層析，脫幹得到棕色粉末131.32mg，總收率41.10％。

棕黃色結晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.85(2h,d,j＝7.52hz),7.16(1h,t),6.95(1h,s),6.94(1h,m),6.91(1h,m),6.75(2h,d,j＝7.52),6.60(1h,m),6.41(1h,s),6.30(1h,q),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(3h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,164.6,160.8,155.1,153.7,148.8,140.6,135.5,133.2,131.3,129.2,128.3,125.2.124.1,123.3,121.3,116.0,111.1,103.8,69.9,56.1,40.1,39.8,28.6.ms(esi)for(m+h)+:541.2.

實施例10

6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-1-(對甲苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(10)的製備。

在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和127.73mg1-(對-甲苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到115℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束後，減壓濃縮，柱層析，脫幹得到棕色粉末139.51mg,總收率48.51％。

棕黃色結晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),7.01(2h,d,j＝7.34hz),6.95(1h,s),6.75(2h,d,j＝7.52hz),6.41(1h,s),6.30(1h,q),6.13(2h,d,j＝7.34hz),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(3h,s),2.34(3h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,164.6,160.8,155.1,153.7,148.8,138.3,137.3,134.2,129.2,128.3,125.2,122.6,116.0,111.1,103.8,69.9,56.1,41.1,39.8,28.6,21.3.ms(esi)for(m+h)+:487.2.

實施例11

1-(4-氟苯基)-6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(11)的製備。

在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和120.77mg1-(4-氟苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到120℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束後，減壓濃縮，柱層析，脫幹得到棕色粉末136.21mg，總收率46.98％。

棕黃色結晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),7.02(2h,t),6.95(1h,s),6.75(2h,d,j＝7.52hz),6.58(2h,m),6.41(1h,s),6.30(1h,q),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(3h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,164.6,163.3,160.8,155.1,154.7,147.8,135.9,133.2,129.1,128.2,123.2,121.6,116.0,115.8,111.1,103.8,68.9,56.1,40.1,39.8,28.6.ms(esi)for(m+h)+：491.2.

實施例12

6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-1-(4-苯氧基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(12)的製備。

在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和157.71mg1-(4-苯氧基苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束後，減壓濃縮，柱層析，脫幹得到棕色粉末147.08mg,總收率44.07％。

棕黃色結晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),7.41(2h,t),7.17(1h,m),7.14(2h,m),6.95(1h,s),6.75(2h,d,j＝7.52hz),6.79(2h,m),6.78(2h,m),6.41(1h,s),6.30(1h,q),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(3h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,164.6,160.8,157.0,155.1,154.7,151.2,148.8,133.3,129.1,128.3,126.2,125.2,122.7,118.9,116.0,115.7,111.1,103.8,68.9,56.1,40.1,39.8,28.6.ms(esi)for(m+h)+:565.2.

實施例13

1-(3,5-二氯苯基)-6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(13)的製備。

在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和169.87mg1-(3,5-二氯苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束後，減壓濃縮，柱層析，脫幹得到棕色粉末134.25mg，總收率41.95％。

棕黃色結晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),7.01(1h,m),6.95(1h,s),6.75(2h,d,j＝7.52hz),6.66(2h,s),6.41(1h,s),6.30(1h,q),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(3h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,164.6,160.8,155.1,154.7,147.8,143.1,138.8,133.2,129.2,128.3,123.2,121.6,116.0,111.1,103.8,68.9,56.1,40.1,39.8,28.6.ms(esi)for(m+h)+:541.1.

實施例14

1-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)-6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(14)的製備。

在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和221.44mg1-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束後，減壓濃縮，柱層析，脫幹得到棕色粉末153.09mg，總收率42.56％。

棕黃色結晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),7.33(1h,m),6.95(1h,s),6.91(2h,s),6.75(2h,d,j＝7.52hz),6.41(1h,s),6.30(1h,q),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(3h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,164.6,160.8,156.1,154.7,147.8,140.9,133.2,131.6,129.1,128.3,125.4,122.6,119.1,116.0,111.1,103.8,68.9,56.1,40.1,39.8,28.6.ms(esi)for(m+h)+:609.2.

實施例15

1-(2,4-二甲氧基苯基)-6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(15)的製備。

在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和163.09mg1-(2,4-二甲基苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結束後，減壓濃縮，柱層析，脫幹得到棕色粉末135.70mg，總收率43.11％。

棕黃色結晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),6.95(1h,s),6.75(2h,d,j＝7.52hz),6.41(1h,s),6.38(1h,m),6.36(1h,m),6.33(1h,m),6.30(1h,q),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(9h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,170.0,164.6,160.8,157.6,155.1,154.7,148.8,133.2,129.1,127.4,125.2,121.6,119.5,116.0,111.1,105.9,103.8,100.7,70.2,56.1,56.8,40.1,39.8,28.6.ms(esi)for(m+h)+:533.2.

實施例16

本發明化合物的抗腫瘤活性測試

對本發明的化合物進行了腫瘤細胞增殖抑制試驗，試驗方法採用常規的mtt法。

細胞株選用：人肝癌細胞(hepg2)，人肺癌細胞(a-549)，人胃癌細胞(sgc-7901)。培養液為dmem+15％nbs+雙抗。

樣品液的配製：用dmso(merck)溶解後，加入pbs(-)配成的100μmol/l的溶液或者均勻的混懸液，然後用dmso的pbs(-)稀釋，最終濃度分別為0.1，1，10，20，40，60，80，100μmol/l。

將上市的抗腫瘤藥物阿糖胞苷(ara-c)以同樣的條件配成對照品溶液。

細胞培養：貼壁生長腫瘤細胞細胞培養於含10％滅活新生牛血清和青黴素、鏈黴素(各100萬u/l)的1640培養液中，置於37℃，5％co2，飽和溼度的二氧化碳培養箱中培養。細胞貼壁生長，每2～3天傳代1次，傳代時首先倒出培養液，pbs洗2次，胰酶消化後，加入新鮮的培養液吹打均勻，調整細胞至適當濃度移入新的培養瓶中，添加培養液至適量。取對數生長期細胞用於實驗。

mtt法檢測細胞活性及ic50的測定：

實驗原理：活細胞線粒體中脫氫酶能將黃色的mtt還原成不溶於水的藍紫色產物甲臢(mttformazan)，並沉積在細胞中，生成的量與活細胞數目成正比，而死細胞沒有這種功能。dmso能溶解藍紫色結晶物，顏色深淺與所含的量成正比，因此用酶標儀測定的光吸收值可反映細胞存活率。

實驗方法：取對數生長期細胞，消化、計數，以2×104/ml的密度接種於96孔培養板中，每孔100μl。培養24小時後，將待測化合物以0.1，1，10，20，40，60，80，100μmol/l濃度處理細胞。實驗組每個濃度設5個復孔，以含0.4％dmso的培養液作對照。藥物作用48小時後，去上清，每孔加入100μlmtt(2-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-3，5-二苯基-2h-四唑氫溴酸鹽)(1mg/ml)，繼續培養4小時，棄上清，每孔加入100μldmso，振蕩混勻，用酶標儀在570nm處測定吸光度值，採用ic50計算軟體求出半數抑制濃度(ic50)。

試驗結果詳見表1，其中，樣品是指相應實施例中製備的甘草查爾酮a硫脲嘧啶類衍生物，樣品編號對應製備實施例中所得到的化合物的具體編號。

表1化合物對不同腫瘤細胞的半數抑制濃度ic50(單位：μmol/l)

化合物7和化合物2在所測試的3種細胞株中均表現出了良好的抗腫瘤活性，化合物1和11次之，在不同的細胞株中也表現出了良好的抗腫瘤活性。以上實驗結果表明，本發明的化合物具有良好的抗腫瘤活性，特別是部分甘草查爾酮a硫脲嘧啶類衍生物的活性在特定細胞株中抗腫瘤活性優於或等同於阿糖胞苷，可用於抗腫瘤藥物的研究。