作為抗腫瘤劑的喹喔啉衍生物的製作方法

2023-11-06 05:54:27 4

專利名稱：：作為抗腫瘤劑的喹喔啉衍生物的製作方法作為抗腫瘤劑的喹喔啉衍生物政府資助本文工作，全部或者部分，是在國立癌症研究院資金1R01CA97061-01的資助下完成的。美國聯邦政府在本發明中享有一定權利。發明背景許多用於治療疾病的藥物是以疾病細胞和正常細胞間的普遍差異作為靶標。例如，用於治療卵巢癌和乳腺癌並抑制微管功能的紫杉醇，被認為基於腫瘤細胞相對正常細胞更高的增殖率而顯示對腫瘤細胞的特異性(Miller和Ojima,Chem.Rec.1:195-211，2002)。然而，儘管這是一致的觀點，紫杉醇的體外活性在不同腫瘤細胞系間差別很大(Weinstein等人，Science275:343-349,1997)，表明遺傳因子可以調節腫瘤細胞對紫杉醇的敏感性，並且腫瘤細胞的反應性不是簡單的決定於增殖率。分子靶向治療代表了抗癌藥物開發的一種有前途的新方法(Shawver等人，CancerCell1:117-23,2002)。利用這個方法，設計小分子用於直接抑制特定腫瘤細胞類型中突變或者過表達的癌蛋白。通過靶向於腫瘤細胞內發現的特定分子缺陷，這種方法最終可以產生適於特定治療各種腫瘤遺傳組成的方法。近來成功的兩個分子靶向抗癌治療劑的例子是Gleevec(甲磺酸伊馬替尼imatinibmesylate)，一種在費城染色體陽性慢性髓性白血病中發現的斷裂點簇集區-abelsen激酶(BCR-ABL)癌蛋白的抑制劑(Capdeville等人，NatRevDmgDiscov1:493-502,2002),和Herceptin(曲妥單抗trastuzumab),—種耙向在轉移性乳腺癌中發現的HER2/NEU癌蛋白的單克隆抗體(Mokbel和Hassanally,CurrMedResOpin17:51-9，2001)。一種互補的策略涉及尋找基因型選擇性的抗腫瘤試劑，所述試劑只有在特定癌蛋白存在或者特定腫瘤抑制物缺失的條件下對腫瘤細胞才是致死性的。這種基因型選擇性化合物可以直接靶向癌蛋白，或者他們可以耙向其他參與癌蛋白相聯信號網絡的關鍵蛋白。已報導的顯示合成致死性的化合物包括(i)雷帕黴素類似物CCI-779在缺少PTEN的骨髓瘤細胞中(Shi等人，CancerRes62:5027-34，2002)，(ii)Gleevec在BCR-ABL-轉化細胞中(Druker等人，NatMed2:561-6,1996)，和(iii)大量未充分表徵的化合物(Stockwell等人,ChemBiol6:71-83，1999;Torrance等人，NatBiotechnol19:940-5,2001)。儘管有上述研究，仍然非常需要開發和/或鑑定能夠選擇性靶向腫瘤細胞的化合物。發明簡述利用一種合成致死篩選法，尤其是合成致死高通量篩選法，這種方法可有效鑑定用於治療或者預防病症或者疾病的試劑或者藥物，所述病症或者疾病例如腫瘤或者其他以細胞增生為特徵的病症(例如白血病)的存在或者發展，申請人已經鑑定出大量化合物/試劑/藥物用於在個體中治療或者預防癌症(例如腫瘤或者白血病)，所述個體例如需要治療或者預防的人。本發明還提供與一些鑑定出的有治療價值的化合物/試劑直接或者間接結合的細胞蛋白。這種細胞蛋白提供治療以細胞增生(例如白血病)為特徵的疾病或者病症的其他方法。此處使用的術語"試劑"和"藥物"可以互換使用；它們可以是化合物或者分子。在一個實施方案中，本發明指向此處公開的化合物，包括它的鹽。在另一個實施方案中，本發明指向藥物組合物，包括藥學上可接受的載體和此處公開的化合物。仍在另一個實施方案中，本發明是一種促進細胞死亡的方法，包括對細胞給藥有效量的此處公開的化合物。一方面，本發明是一種鑑定候選抗腫瘤試劑的方法，包括以下步驟a)在合適條件下用足量待測試劑接觸細胞；b)檢測待測試劑是否增強或者抑制erastin結合蛋白的水平或者編碼erastin結合蛋白的核酸的水平。該方法還可以包括以下步驟a)用腫瘤細胞接觸待測試劑(體內或者體外)；b)檢測待測試劑是否抑制腫瘤細胞的生長。另一方面，本發明是一種鑑定候選抗腫瘤試劑的方法，包括a)用待測試劑接觸erastin結合蛋白或者表達erastin結合蛋白的細胞，其中erastin結合蛋白或者待測試劑可選用可檢測標記物標記；b)檢測待測試劑是否結合erastin結合蛋白。該方法還可以包括a)用腫瘤細胞接觸待測試劑(體內或者體外)；b)檢測待測試劑是否抑制腫瘤細胞的生長。使用不同的待測試劑文庫，可重複上述兩種方法。另一方面，本發明涉及鑑定化合物的篩選方法，所述化合物殺傷或者抑制致瘤細胞的生長，例如工程化致瘤細胞，但不是它們對應的同源正常細胞。該方法已經用於鑑定已知的和新的具有基因型-選擇活性的化合物，包括已知的化合物阿黴素、柔紅黴素、米託蒽醌、喜樹鹼、桑吉瓦黴素、棘黴素、波凡黴素、NSC146109和新的化合物即此處的erastin。這些化合物在一種或者多種下列物質存在的情況下具有增加的活性hTERT癌蛋白，SV40大T癌蛋白(LT)，小T癌蛋白(ST)，人乳頭狀瘤病毒類型16(HPV)E6癌蛋白，HPVE7癌蛋白,和致癌的HRAS，NRAS禾PKRAS。申請人檢測到hTERT和E7或者LT的過表達增加拓撲異構酶2a的表達，以及在表達hTERT的細胞中過表達的RASV^和ST增加拓撲異構酶1的表達並且使細胞致敏到erastin起始的非凋亡細胞死亡步驟。本發明涉及一種鑑定試劑(例如藥物)的方法，所述試劑對致瘤細胞有選擇毒性(例如殺傷或者抑制生長)，例如工程化致瘤細胞，包括人致瘤細胞(例如工程化致瘤細胞和/或腫瘤細胞)。在一個實施方案中，本發明涉及鑑定選擇性殺傷或者抑制工程化人致瘤細胞生長(有毒的)的試劑(例如藥物)，包括用候選試劑接觸作為待測細胞的工程化人致瘤細胞；檢測與候選試劑接觸的待測細胞的活性；將待測細胞的活性與合適對照的活性進行比較。在所有實施方案中，通過檢測試劑(例如藥物)殺傷細胞或者抑制細胞生長/增殖以及兩者兼有的能力來評定活力。如果待測細胞的活力低於對照細胞，則鑑定出對工程化人致瘤細胞具有選擇毒性(殺傷或者抑制生長)的試劑(例如藥物)。適當的對照是與待測細胞相同類型的細胞，除了對照細胞未被工程化為致瘤的。例如，對照細胞可能是衍生出待測細胞的親本原代細胞。對照細胞在與待測細胞相同的條件下接觸候選試劑。適當的對照可以同時進行，或者預先確立(例如，預先確立的標準或者參考)。'在一個實施方案中,鑑定對致瘤細胞有選擇毒性的試劑的方法還包括評定試劑的毒性，所述試劑經鑑定是在適當的動物模型的工程化人致瘤細胞或者其他的基於細胞或者基於非細胞的體系或者試驗中篩選的結果。例如，如此鑑定的試劑或者藥物可以評定其對諸如從個體獲得的腫瘤細胞或者白血病細胞的毒性或者對(一種或者多種)癌(腫瘤)細胞系的毒性。例如，本方法還可以包含在合適的小鼠模型或者非人靈長類動物中評定試劑(或者藥物)對致瘤細胞的選擇毒性。本發明還涉及一種生產通過本發明方法鑑定的試劑(例如藥物)的方法，例如對工程化人致瘤細胞具有選擇毒性的試劑(例如藥物)。利用已知方法合成對致瘤細胞顯示選擇毒性的試劑(例如藥物)。本發明另外還涉及鑑定對工程化致瘤細胞有毒性的試劑(例如藥物)的方法，例如工程化人致瘤細胞。在一個實施方案中，本發明涉及鑑定殺傷或抑制工程化人致瘤細胞的生長(對其有毒性)的試劑的方法，包括將待測細胞與候選試劑接觸，所述待測細胞是工程化的人致瘤細胞；檢測與候選試劑接觸的待測細胞的活性；將待測細胞的活性與合適對照的活性進行比較。如果待測細胞的活力低於對照細胞，則鑑定出對工程化人致瘤細胞具有毒性(殺傷或者抑制生長)的試劑(例如藥物)。這裡，適當的對照是與待測細胞相同類型的細胞(例如工程化人致瘤細胞)，除了對照細胞未與候選試劑接觸。適當的對照可以同時進行，或者預先確立(例如，預先確立的標準或者參考)。例如，如此鑑定的試劑或者藥物可以評定其對諸如從個體獲得的腫瘤細胞或者白血病細胞的毒性或者對(一種或者多種)癌(腫瘤)細胞系的毒性。在一個實施方案中,鑑定對工程化致瘤細胞有毒性的試劑的方法還包括評定試劑的毒性，所述試劑是在適當的動物模型或者其他的基於細胞或者基於非細胞的體系或者試驗中的工程化人致瘤細胞中篩選的結果所鑑定的。例如，本方法還包括在適當的小鼠模型或者非人靈長類動物中評定試劑(例如藥物)對致瘤細胞的毒性。本發明還涉及一種生產本發明方法鑑定的試劑(例如藥物)的方法，例如對工程化人致瘤細胞具有毒性的試劑(例如藥物)。利用已知方法合成對致瘤細胞顯示毒性的試劑(例如藥物)。在另一個實施方案中，本發明是一種降低腫瘤生長率的方法，包括給藥足夠降低腫瘤生長率的量的治療試劑，其中治療試劑是(a)增強或者抑制VDAC蛋白水平的試劑；(b)增強或者抑制VDAC蛋白活性的試劑；(c)結合VDAC蛋白的試劑；(d)結合和/或調節包括至少一個VDAC和任選一個或多個其他蛋白的蛋白複合物的試劑；(e)包括VDAC多肽或者其功能變異體的試劑；(f)包括編碼VDAC多肽或者其功能變異體的核酸的試劑；合適的試劑在現有形式、或者完全或部分新陳代謝後具有所述活性。一方面，本發明是一種治療癌症患者的方法，包括對患者給藥選自以下的治療試劑，(a)增強或者抑制VDAC蛋白水平的試劑；(b)增強或者抑制VDAC蛋白活性的試劑；(c)結合VDAC蛋白的試劑；(d)結合和/或調節包括至少一種VDAC和任選一或多種其他蛋白的蛋白複合物的試劑；(e)包括VDAC多肽或者其功能變異體的試劑；(f)包括編碼VDAC多肽或者其功能變異體的核酸的試劑；合適的試劑在現有形式、或者完全或部分新陳代謝後具有所述活性。適合用於降低腫瘤生長率和治療癌症患者的合適試劑包括但不限於，小的有機分子、肽、蛋白質、模擬肽、核酸、抗體及其組合。這種試劑通常與可接受的載體製成製劑，可以靜脈內、口服、頰的、胃腸外、通過吸入噴霧、通過局部施用或者經皮膚給藥。試劑還可以通過局部給藥方式給藥。試劑還可以與至少一種其他抗癌化療劑聯用，所述化療劑以累加或者協同方式抑制癌細胞。在另一方面，本發明是一種增加腫瘤細胞對化療劑敏感性的方法，其中腫瘤細胞與增加或者減少erastin結合蛋白豐度的化合物接觸。在相關方面，本發明是一種降低正常細胞對化療劑敏感性的方法，其中正常細胞與減少或者增加erastin結合蛋白豐度的化合物接觸。在本發明的某些實施方案中，通過篩選包括未知或者己知化合物(例如試劑，藥物)或者兩者的標記的(annotated)化合物文庫、組合文庫或者其他文庫鑑定候選試劑。在某些實施方案中，本發明是一種鑑定抑制不需要的細胞增殖的候選治療劑的方法，包括a)將待測試劑和VDAC蛋白或者包括至少一種VDAC和任選一或多種其他蛋白的蛋白複合物混合；b)檢測待測試劑是否結合VDAC蛋白；c)如果待測試劑結合VDAC蛋白，將待測試劑與細胞接觸(體內或者體外)並檢測待測試劑是否改變細胞的增殖。VDAC蛋白與待測試劑的結合是可以例如，通過物理結合試驗，諸如免疫結合試驗、酵母雙雜試驗、螢光偏振試驗、表面細胞質基因組(plasmon)共振或者螢光共振能量傳遞(FRET)試驗來檢測。在某些實施方案中，本發明涉及化合物erastin和一類erastin相關化合物(例如，本發明的化合物)。在其他實施方案中，本發明涉及化合物、erastinB和其相關化合物。在其他實施方案中，本發明涉及化合物、erastinA和其相關化合物。在本發明的其他實施方案中，本發明涉及選擇性殺傷或者抑制工程化人致瘤細胞生長的(對其有毒的)emsthi的類似物。任選，本發明的這些化合物與藥學可接受的載體一起製備成藥物組合物。本發明還涉及鑑定參與腫瘤發生的細胞組分的方法。細胞組分包括，例如，蛋白(例如酶、受體)、核酸(例如脫氧核糖核酸、核糖核酸)，和脂(例如磷脂)。在一個實施方案中，本發明涉及一種鑑定參與腫瘤發生的(一種或者多種)細胞組分的方法，其中(a)細胞，諸如工程化人致瘤細胞與erastin接觸；和(b)直接或者間接與erastin作用的細胞組分被鑑別。被鑑別的細胞組分是參與腫瘤發生的細胞組分。在另外的實施方案中，本發明涉及一種鑑定與erastin作用的(一種或者多種)細胞組分的方法，其中(a)細胞，諸如工程化人致瘤細胞、組織、器官、有機體或者上述之一的裂解產物或者提取物，與erastin接觸；(b)直接或者間接與emstin作用的細胞組分被鑑別。被鑑別的細胞組分是直接或者間接與erastin作用的細胞組分。本發明還涉及治療或者預防癌症的方法。在一個實施方案中，本發明涉及一種治療或者預防癌症的方法，其中治療有效量的化合物，諸如，例如erastin或者其類似物，或者下面式I-V的化合物，給藥需要癌症治療的個體。在某些實施方案中，癌症的特點在於細胞中的RAS途徑被活化。在某些其他實施方案中，癌症的特點在於細胞表達SV40小T癌蛋白，或者與表達ST的細胞表型相似，和/或致癌HRAS。在某些優選的實施方案中，細胞基本上表達野生型水平的Rb(例如，至少大約50%、60%、70%、80%、90%、100%、110%、120%、130%或者150%等等)。本發明還涉及鑑定與一種或多種細胞組分作用的試劑(例如藥物)的方法，所述細胞組分直接或者間接與erastin作用。在一個實施方案中，本發明涉及一種鑑定與細胞組分作用的試劑的方法，所述細胞組分與erastin作用，包括(a)用erastin接觸細胞、組織、器官、有機體或者上述之一的裂解產物或者提取物；(b)鑑別與erastin(直接或者間接)作用的細胞組分；(c)用候選試劑接觸細胞、組織、器官、有機體或者上述之一的裂解產物或者提取物，所述試劑是待被評定與細胞組分作用的能力的試劑或者藥物，所述細胞組分與erastin作用；和(d)檢測試劑是否與(b)中的細胞組分(直接或者間接)作用。如果試劑與(b)中的細胞組分作用，它就是與細胞組分作用的試劑，所述細胞組分與erastin作用。在相關方面，本發明還涉及鑑定與一種或者多種細胞組分作用的試劑(例如藥物)的方法，所述細胞組分已知與erastin直接或者間接作用，該方法包括(a)用候選試劑接觸細胞、組織、器官、有機體或者上述之一的裂解產物或者提取物，所述試劑是待被評定與細胞組分作用的能力的試劑或者藥物，所述細胞組分已知與erastin作用；和(b)檢測試劑是否與(a)中的細胞組分(直接或者間接)作用。如果試劑與(a)中的細胞組分作用，它就是與細胞組分作用的試劑，所述細胞組分與erastin作用。在某些實施方案中，細胞是一種工程化人致瘤細胞。在其他實施方案中，本發明涉及與(一種或多種)細胞組分直接或間接相互作用的化合物，所述細胞組分與erastin相互作用。在某些實施方案中，與erastin相互作用的細胞組分參與腫瘤發生。使用已知方法合成顯示與細胞組分相互作用的試劑(例如藥物)，所述細胞組分與erastin相互作用。本發明還涉及一種鑑定試劑(例如藥物)的方法，所述試劑在腫瘤細胞中誘導死亡，例如通過細胞凋亡或者非細胞凋亡機理。在一個實施方案中，一種鑑定在腫瘤細胞中通過非細胞凋亡機理誘導死亡的試劑包括(a)用在腫瘤細胞中誘導死亡的候選試劑接觸待測細胞，所述待測細胞是腫瘤細胞(或者包含腫瘤細胞的器官或者組織)；(b)評定試劑是否在待測細胞中誘導凋亡；和(c)與合適的對照比較(b)中凋亡的誘導。如果凋亡在對照細胞而不是待測細胞中被誘導，則鑑定出在腫瘤細胞中通過非細胞凋亡機理誘導死亡的試劑(例如藥物)。合適的對照是與待測細胞相同類型的細胞，除了對照細胞與已知在細胞中誘導凋亡的試劑接觸。合適的對照可以同時進行，或者可以預先建立(例如，預先建立標準或者參考)。在某些實施方案中，待測細胞是工程化人致瘤細胞。此處使用的"一"和"一個"是指一個或多個所指的物。在某些方面，本發明提供藥物開發活動的方法。在一個實施方案中，本發明涉及一種進行藥物開發活動的方法，包括(a)鑑定對工程化人致瘤細胞有選擇毒性的試劑(例如藥物)；(b)評定在(a)中鑑定的試劑或者其類似物在動物中的功效和毒性；和(c)製備包括一種或多種在(b)中評定的試劑的藥物製劑。評定的功效可以是在動物的致瘤細胞中試劑選擇性誘導細胞死亡的能力。在另一個實施方案中，進行藥物開發活動的方法包括建立用於分配待售藥物製劑的分配系統。任選，建立銷售團隊用於藥物製劑的市場推廣。在其他實施方案中，本發明涉及一種進行蛋白組學活動的方法，包括鑑定對工程化人致瘤細胞有選擇毒性的試劑(例如藥物)和將進一步開發對工程化人致瘤細胞有選擇毒性的試劑的權利許可給第三方。在另一個實施方案中，本發明涉及一種進行藥物開發活動的方法，包括(a)鑑定對工程化人致瘤細胞有毒性的(一種或多種)試劑(例如藥物)；(b)評定在(a)中鑑定的試劑或者其類似物在動物中的功效和毒性；和(c)製備包括一種或多種在(b)中評定的試劑的藥物製劑。例如，鑑定的試劑是erastin。評定的功效可以是在動物的致瘤細胞中，試劑選擇性誘導細胞生長、毒性或者細胞死亡變化的能力。在另一個實施方案中，進行藥物開發活動的方法包括建立用於分配待售藥物製劑的分配系統。任選,建立銷售團隊用於藥物製劑的市場推廣。在其他實施方案中，本發明涉及一種進行蛋白組學活動的方法，包括鑑定對工程化人致瘤細胞有選擇毒性的試劑(例如藥物)和將進一步開發對工程化人致瘤細胞有選擇毒性的試劑的權利許可給第三方。在另一個實施方案中，本發明涉及一種進行藥物開發活動的方法，包括(a)鑑定與細胞組分相互作用的(一種或多種)試劑(例如藥物)，所述細胞組分與erastin相互作用；(b)評定在(a)中鑑定的試劑或者其類似物在動物中的功效和毒性；和(c)製備包括一種或多種在(b)中評定的試劑的藥物製劑。評定的試劑功效可以是其在動物的致瘤細胞中選擇性誘導細胞死亡的能力。在另一個實施方案中，進行藥物開發活動的方法包括建立用於分配待售藥物製劑的分配系統。任選，建立銷售團隊用於藥物製劑的市場推廣。在其他實施方案中，本發明涉及一種進行蛋白組學活動的方法，包括鑑定與細胞組分相互作用的試劑(例如藥物)，所述細胞組分與erastin相互作用，和將進一步開發與細胞組分相互作用的試劑的權利許可給第三方，所述細胞組分與erastin相互作用。在另一個實施方案中，本發明是一種進行製藥活動的方法，包括(a)鑑定一種抑制細胞增殖的候選治療劑，其中候選治療劑是(i)增強或者抑制VDAC蛋白水平的試劑；(ii)增強或者抑制VDAC蛋白活性的試劑；(Hi)與VDAC蛋白結合的試劑；(iv)結合和/或調節包括至少一種VDAC和任選一種或多種其他的蛋白的蛋白質複合物的試劑；(v)包括VDAC多肽或者其功能性變體的試劑；(vi)包括編碼VDAC多肽或者其功能性變體的核酸的試劑；或者(vii)此處公開的化合物，(b)進行在步驟(a)中鑑定的候選治療劑在動物中的功效和毒性的治療評價；和(c)製備藥物製劑，其包括一種或多種在步驟(b)中鑑定的具有可接受的治療評價的候選治療劑。取代步驟(b)和(C)的一步或者兩步或者除了步驟(b)和(C)的一步或者兩步之外，所述方法可以包括將候選治療劑進一步開發的權利許可給第三方。在另一個實施方案中，進行藥物開發活動的方法包括建立用於分配待售藥物製劑的分配系統。任選，建立銷售團隊用於藥物製劑的市場推廣。在另一個實施方案中，本發明是一種進行製藥活動的方法，包括(a)鑑定抑制細胞增殖的候選治療劑，其中候選治療劑是(i)增強或者抑制VDAC蛋白的試劑；或者(ii)增強或者抑制VDAC蛋白和第二種蛋白之間相互作用的試劑，禾卩(b)將進一步開發候選治療劑的權利許可給第三方。在另一個實施方案中，進行藥物開發活動的方法包括建立用於分配待售藥物製劑的分配系統。任選，建立銷售團隊用於藥物製劑的市場推廣。本發明的另一個方面是進行製藥活動的方法，包括下面的一種或者多種市場開發、生產、將市場開發權利許可給第三方和將生產試劑盒的權利許可給第三方，其中試劑盒包括(a)在生物樣品中檢測erastin結合蛋白、erastin結合蛋白的活性或者以上兩者的一種或多種試劑；和(b)解釋試驗結果的說明書。通常，說明書會指出erastin結合蛋白的水平和/或活性是否正常，相對其所需水平和/或活性是增加還是降低，這樣的話可檢測水平和/或活性是否應該改變，或者預測(部分地)取決於水平和/或活性(例如癌症化療)的治療是否會成功。在某些實施方案中，說明書包括關於emstin結合蛋白一個或多個正常、降低和升高的水平或者活性的指導。在某些實施方案中，基於erastin結合蛋白、emstin結合蛋白的活性或者兩者的水平，說明書包括關於用下列一個或多個後續治療的指導(i)增強或者抑制VDAC蛋白水平的試劑；(ii)增強或者抑制VDAC蛋白活性的試劑；(iii)結合VDAC蛋白的試劑；(iv)結合、調節或者結合和調節包括至少一種VDAC和任選一種或多種其他的蛋白的蛋白質複合物的試劑；(v)包括VDAC多肽或者其功能性變體的試劑；(vi)包括編碼VDAC多肽或者其功能性變體的核酸試劑；和(vii)此處公開的化合物。在某些實施方案中，基於emstin結合蛋白、erastin結合蛋白的活性或者兩者的水平，說明書包括關於下列一個或多個治療是否成功的指導(i)增強或者抑制VDAC蛋白水平的試劑；(ii)增強或者抑制VDAC蛋白活性的試劑；(iii)結合VDAC蛋白的試劑；(iv)結合、調節或者結合和調節包括至少一種VDAC和任選一種或多種其他的蛋白的蛋白質複合物的試劑；(v)包括VDAC多肽或者其功能性變體的試劑；(vi)包括編碼VDAC多肽或者其功能性變體的核酸的試劑；和(vii)此處公開的化合物。在某些實施方案中，基於erastin結合蛋白、emstin結合蛋白的活性或者兩者的水平，說明書包括關於癌症治療成功概率的指導。鑑定增加人細胞對特定化合物敏感性的遺傳改變，最終可能允許從機理上剖析致癌信號網絡並定製針對特定腫瘤類型的化療方法。申請人已經開發了一種發現小分子的系統學方法，所述小分子在帶有特定遺傳變化的細胞中具有增加的活性。使用這個系統，他們檢測到幾個臨床使用的抗腫瘤試劑，在特定遺傳元件存在的情況下更具效力和更具活性。此外，他們鑑定出新的選擇性殺傷細胞的化合物，所述細胞表達小的T癌蛋白和致癌RAS。這些遺傳靶向的小分子可以作為開發具有良好治療指數的抗癌藥物先導物。本發明還提供包裝的藥物。在一個實施方案中，包裝的藥物包括-(i)治療有效量的對工程化人致瘤細胞具有選擇毒性的試劑；和(ii)用於治療癌症患者的試劑給藥的說明書和/或標籤。在一個特定實施方案中，試劑是erastin。在另一個實施方案中，包裝的藥物包括(i)治療有效量的對工程化人致瘤細胞具有選擇毒性的試劑；和(ii)用於治療癌症患者的試劑給藥的說明書和/或標籤。在另一個相關的實施方案中，包裝的藥物包括(i)治療有效量的與細胞組分相互作用的試劑，所述細胞組分與erastin相互作用；和(ii)用於治療癌症患者的試劑給藥的說明書和/或標籤。說明書或者標籤可以儲藏在電子介質，例如CD、DVD、軟盤、存儲卡等等，這些可以通過電腦讀取。本發明還提供使用本發明鑑定的任意試劑製備癌症治療藥劑，例如，利用erastin或者其類似物製備癌症治療藥劑。在某些實施方案中，本發明的方法還包括聯合給藥一種或多種試劑，例如通常通過細胞凋亡機制殺傷細胞的化療劑。適合用於降低腫瘤生長率和治療癌症患者的合適試劑包括但不限於，小的有機分子、肽、蛋白質、模擬肽、核酸、抗體及其組合。可以預期的是本發明的所有實施方案可與一種或多種其他實施方案組合。在另一個方面，本發明涉及用於鑑定化合物的篩選法，所述化合物在工程化細胞而不是其等基因的正常細胞相似物中抑制蛋白的細胞毒性。這些方法已經被用於鑑定已知的和新的具有基因型選擇性活性的化合物。任選，這些化合物在突變蛋白存在情況下活性增加。本發明涉及一種鑑定試劑(例如，藥物)的方法，所述試劑在工程化細胞中選擇性抑制細胞毒性。在一個實施方案中，本發明涉及一種鑑定試劑(例如，藥物)的方法，所述試劑在工程化細胞中抑制突變蛋白的細胞毒性，包括用候選試劑接觸待測細胞(例如，表達突變蛋白的工程化細胞)；檢測與候選試劑接觸的待測細胞的活力；和將待測細胞的活力與合適對照的活力作比較。如果待測細胞的活力大於對照細胞的活力，則鑑定出選擇性抑制細胞毒性的試劑(例如，藥物)。合適的對照是與待測細胞類型相同的細胞，除了對照細胞沒有進行工程化以表達造成毒性的蛋白。例如，對照細胞可以是衍生出待測細胞的親本原代細胞。對照細胞在與待測細胞相同的條件下接觸候選試劑。合適的對照可以同時進行，或者預先建立(例如，預先建立標準或者參考)。在某些方面，本發明提供在哺乳動物中治療病症的方法，包括給藥哺乳動物治療有效量的erastin類似物，例如，通式I代表的化合物(I)其中病症的特點在於細胞具有增強的Ras信號活性和改變(例如，降低或者增加)的SV40小t抗原的細胞靶向蛋白的活性；和任選基本上野生型水平的Rb活性；和其中R'選自H、-Z-Q-Z、-C卜s垸基-N(R2)(R4)、-d-s烷基-OR3、3-到8-元碳環或者雜環，芳基，雜芳基，和Cl4芳院基；每次出現的W和R"均是獨立選自H、C,-4垸基、Q-4芳烷基、芳基、雜芳基、醯基、垸基磺醯和芳基磺醯，如果W和R"在相同氮原子和不同時是氫時，它們是不同的，並且當112和R"在相同氮並且R2或W是醯基、烷基磺醯或者芳基磺醯，另一個選自H、Q—8垸基、芳基、Cm芳院基，和雜芳基；R選自H、C,-4垸基、Q-4芳烷基、芳基和雜芳基；W選自和Q選自O禾口NR2;和每次出現的Z獨立地選自Q-6垸基、C2-6烯基和C2-6炔基。當Z是烯基或者炔基基團，雙鍵或者三鍵優選不在基團的末端(從而排除，例如，烯醇醚、炔醇醚(alkynolether)、烯胺和/或炔胺)。在一些實施方案中，W選自或。在某些這種實施方案中，W選自-Z-Q-Z、-Q-8垸基-N(R2)(R4)、《1-8烷基-0113、芳基、雜芳基，和C卜4芳烷基；在某些實施方案中，W夷R4。在某些這種實施方案中，W選自-Z-Q-Z、-C,.s烷基-N(R2)(R4)、-CLs垸基-OR3、芳基、雜芳基，禾口Ci-4芳烷基。在某些實施方案中，W選自-Z-Q-Z、烷基-N(R2)(R4)、烷基-OR3、芳基、雜芳基，和CV4芳垸基。'在某些實施方案中，W選自CM芳烷基和醯基。在某些這種實施方案中，W是醯基。在某些實施方案中，W是醯基，R4是-C(0)-d-3烷基-Y,Y選自H、烷基、垸氧基、芳氧基、芳基、雜芳基、雜芳氧基和環烷基。在某些實施方案中，Y選自芳氧基、芳基、雜芳基、雜芳氧基和環垸基。在優選的這種實施方案中，Y選自芳氧基和雜芳氧基。在更優選的這種實施方案中，Q-3垸基-Y是-CH20-苯基，其中苯基任選用滷素取代，優選氯。在某些Y是-CH20-苯基的優選實施方案中，選擇剩餘的值以從實施方案中排除erastin。在某些實施方案中，芳基任選用選自Cr6垸基、CF3、羥基、Cr4烷氧基、芳基、芳氧基、滷素、-NR2R4、硝基、羧酸、羧酸酯和磺醯的基團取代。適當的試劑可以在現有形式或者完全或者部分新陳代謝後具有所述活性。在某些實施方案中，病症的特點在於細胞具有基本上野生型水平的Rb活性。在某些這種實施方案中，細胞特徵還在於增強的Ras信號活性和/或SV40小t抗原的細胞靶向蛋白的改變(例如，降低或者增加)的活性。在某些實施方案中，化合物通過非細胞凋亡機理殺傷細胞。在某些實施方案中，化合物通過非細胞凋亡機理外的機理殺傷細胞。在某些實施方案中，細胞具有增強的Ras途徑活性(例如，RasV12)，過表達SV40小t抗原，具有本質上降低的磷酸酶PP2A活性，和/或調節(例如，增強或者抑制)VDAC水平或者活性，比如VDAC2或者VDAC3。在某些實施方案中，病症是癌症。在某些實施方案中，細胞被誘導表達SV40小t抗原，例如，用過表達SV40小t抗原的病毒載體感染所述細胞，例如逆轉錄病毒載體或者腺病毒載體。在某些實施方案中，病毒載體是逆轉錄病毒載體或者腺病毒載體。在某些實施方案中，本發明的方法還包括聯合給藥所述哺乳動物一種試劑，例如通常通過細胞凋亡機理殺傷細胞的化療劑。在某些實施方案中，聯合給藥的試劑選自表皮生長因子受體拮抗劑、五硫化二砷、阿黴素、順鉑、卡鉑、西咪替丁、洋紅黴素、氮芥鹽酸、五甲三聚氰醯胺、塞替派、替尼泊甙、環磷醯胺、苯丁酸氮芥、去甲氧基竹紅菌甲素A、左旋苯丙氨酸氮芥、異環磷醯胺、曲磷胺、曲奧舒凡、足葉草毒素(prodophyllotoxin)或者足葉草毒素衍生物、鬼臼乙叉甙磷酸鹽、替尼泊甙、鬼臼乙叉甙、異長春鹼、環氧長春鹼、長春地辛、9-氨基喜樹鹼、camptoirinotecan、克立那託、甲地孕酮、甲氨蝶呤、絲裂黴素C、ecteinascidin743、白消安、亞硝脲氮芥(BCNU)、環己亞硝脲(CCNU)、洛弗斯特丁、1-甲基-4-苯基吡啶鎗離子、司莫司汀、十字孢鹼(stau!"QspQrin)、鏈脲黴素、酞菁、達卡巴嗪、氨基蝶呤、氨甲蝶呤、曲美沙特、硫鳥嘌呤、巰基嘌呤、氟達拉濱、pentastatin、2-氯脫氧腺苷(cladribin)、阿糖胞苷(araC)、甲基絲裂黴素、5-氟尿嘧啶、6-巰基嘌呤、阿黴素氫氯化物、甲醯四氫葉酸、黴酚酸、柔紅黴素、去鐵敏、5-氟脫氧尿苷、去氧氟尿苷、雷替曲塞、伊達比星、表柔比星、吡柔比星、佐柔比星、米託蒽醌、爭光黴素硫酸鹽、放線菌素D、番紅精、saframycins、quinocarcins、discodennolides、長春新鹼、長春花鹼、長春瑞濱酒石酸鹽、vertoporfm、紫杉醇、他莫昔芬、雷洛昔芬、噻唑呋林、硫鳥嘌呤、病毒唑、EICAR、雌氮芥、雌氮芥磷酸鈉、氟他米特、比卡魯胺、布舍瑞林、亮丙瑞林、蝶啶、烯二炔、左旋四咪唑、aflacon、幹擾素、白介素、阿地白介素(aldesleukin)、非格司亭、沙莫司亭、利妥昔單抗、卡介苗、維甲酸、倍他米松、吉西他濱氫氯化物、異搏定、VP-16、六甲密胺、毒胡蘿蔔內酯(thapsigargin)、奧沙利鉑、異丙鉑、四鉑、洛鉑、DCP、PLD-147、JM118、JM216、JM335、沙鉑、紫杉萜、脫氧紫杉醇、TL-139、5'-降-脫氫長春鹼(下文中5'-降長春鹼)、喜樹鹼、依立替康(Camptosar，CPT-ll)、託泊替康(Hycamptin)、BAY38-3441、9-硝基喜樹鹼(Orethecin、盧比替康)、依沙替康(DX-8951)、勒託替康(GI-147211C)、gimatecan、homocamptothecinsdiflomotecan(BN-80915)和9-氨基喜樹鹼(IDEC-13')、SN-38、ST1481、karanitecin(BNP1350)、氮茚並咔唑(例如NB-506)、原小櫱鹼、茚託利辛、idenoisoquinolones、苯並-吩嗪或者NB-506。本發明另一個方面提供一種殺傷細胞、促進細胞死亡或者抑制細胞增殖的方法，包括給藥細胞(l)有效量的化合物，由通式I代表formulaseeoriginaldocumentpage48其中:W選自H、-Z-Q-Z、-CN8烷基-N(R2)(R4)、s烷基-OR3、3-到8-元碳環或者雜環，芳基，雜芳基，和CL4芳烷基；每次出現的112和W均是獨立選自H、Cm院基、Cm芳院基、芳基、雜芳基、醯基、垸基磺醯和芳基磺醯，如果W和W在相同氮原子和不同時是氫時，它們是不同的，並且當112和114在相同氮上並且f或W是醯基、垸基磺醯或者芳基磺醯，另一個選自H、Q.8烷基、芳基、Cl4芳焼基，和雜芳基；RS選自H、C,V烷基、Cr4芳垸基、芳基和雜芳基；Q選自O和NR2;和每次出現的z獨立地選自Cl6院基、(:2.6烯基和<:2.6炔基。(當z是烯基或者炔基基團，雙鍵或者三鍵優選不在基團的末端)；和(2)—種在細胞中增加VDAC(例如，VDAC2，VDAC3)豐度的本發明另一個方面提供一種殺傷細胞的方法，包括給藥細胞(1)有效量的化合物，由通式I代表w選自試劑。formulaseeoriginaldocumentpage49其中:W選自H、-Z-Q-Z、烷基-N(R2)(R4)、-C卜s烷基-OR3、3-到8-元碳環或者雜環，芳基，雜芳基，^芳烷基；每次出現的W和R"均是獨立選自H、Cu4垸基、cm芳烷基、芳基、雜芳基、醯基、垸基磺醯和芳基磺醯，如果W和R"在相同氮原子和不同時是氫時，它們是不同的，並且當112和114在相同氮上並且R2或W是醯基、烷基磺醯或者芳基磺醯，另一個選自H、d.s烷基、芳基、Cm芳焼基，和雜芳基；W選自H、Cm院基、C,-4芳垸基、芳基和雜芳基；W選自R4,R4,或、R,Q選自0和NR2;和每次出現的z獨立地選自(^.6垸基、<:2.6烯基和<:2.6炔基。(當z是烯基或者炔基基團，雙鍵或者三鍵優選不在基團的末端)；和(2)—種在細胞中降低VDAC(例如，VDAC2，VDAC3)豐度的在另一個實施方案中，本發明是一種促進細胞死亡的方法，包括對細胞給藥有效量的式(I)的化合物。試劑。在某些實施方案中，化合物如上所述。在某些實施方案中，細胞是癌細胞。在某些實施方案中，試劑包括編碼VDAC比如VDAC3的多核苷酸。在某些實施方案中，試劑是適合運輸進細胞的VDAC蛋白(例如，VDAC3)，例如，與異源內化結構域融合的蛋白。在某些實施方案中，試劑是包括VDAC蛋白(例如，VDAC3)的脂質體製劑。在某些實施方案中，試劑增強或者抑制內源VDAC(例如，VDAC3)表達，刺激或者抑制VDAC(例如，VDAC3)表達或者增強或者抑制VDAC(例如，VDAC33)抑制劑的功能。在某些方面，該方法還涉及給藥一種增加細胞中VDAC(例如，VDAC2，VDAC3)豐度的試劑。在某些方面，該方法還涉及給藥一種降低細胞中VDAC(例如，VDAC2，VDAC3)豐度的試劑。在另一個方面，本發明是一種增加腫瘤細胞對化療劑敏感性的方法(例如，累加的或者協同的)，其中腫瘤細胞與此處公開的化合物接觸。在相關方面，本發明是一種降低正常細胞對化療劑敏感性的方法，其中正常細胞與此處公開的化合物接觸。在一個實施方案中，本發明是一種鑑定對利用本發明的化合物的治療可能有反應的患者的方法。使用本領域已知的標準表徵鑑定方法，確定為具有腫瘤形成的患者顯示一個或多個下列表徵將被認為是有反應的異常的Ras信號途徑活性，其特徵在於一種或多種途徑成員的活化(例如，磷酸化Erkl/2,磷酸化MEK等等)，禾口/或VDAC蛋白(1，2或者3)的表達，和/或在體外或者體內暴露於本發明的化合物的相似或者相同基因型的細胞系的敏感性。本發明的另一個方面提供一種通式I代表的化合物，或者其藥學可接受的鹽WCO其中Ri選自H、-Z-Q-Z、-d.8垸基-N(R2)(R4)、-<:1-8垸基-0113、3-到8-元碳環或者雜環，芳基，雜芳基，和Cm芳院基；每次出現的W和R"均是獨立選自H、d-4烷基、d-4芳垸基、芳基、雜芳基、醯基、垸基磺醯和芳基磺醯，如果W和R"在相同氮原子和不同時是氫時，它們是不同的(除了在某些實施方案中，其中R2和R"是氫)，並且當R"和R"在相同氮上並且W或R"是醯基、垸基磺醯或者芳基磺醯，另一個選自H、d-8烷基、芳基、Cl4芳院基，和雜芳基；W選自H、CM烷基、d-4芳垸基、芳基和雜芳基；，ANR2IW選自Q選自O和NR2;禾口每次出現的Z獨立地選自d-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基。當Zn是烯基或者炔基基團，雙鍵或者三鍵優選不在基團的末端。本發明的另一個方面提供一種通式n代表的化合物-其中Ar是取代的苯基；W選自H、-d.8烷基、-Z-Q-Z、-d.8垸基-N(R2)(R4)、-d.8垸基-OR3、3-到8-元碳環或者雜環，芳基，雜芳基，和Cm芳院基；每次出現的W和W均是獨立選自H、Cm院基、CM芳烷基、芳基、雜芳基、醯基、垸基磺醯和芳基磺醯，當W和R"在相同氮並且112或114是醯基、烷基磺醯或者芳基磺醯，另一個選自H、d.s烷基、芳基、C"4芳垸基，芳基和雜芳基；RS選自H、C"4烷基、Cr4芳烷基、芳基和雜芳基；RS代表在其結合的環上的0-4取代基。Q選自O禾nNR2;禾口每次出現的z獨立地選自Qv烷基、c2—6烯基和(:2.6炔基。當z是烯基或者炔基基團，雙鍵或者三鍵優選不在基團的末端。本發明的另一個方面提供一種通式iii代表的化合物:其中Ar是取代的或者未取代的苯基；r1選自h、-d.8烷基、-z-q-z、-c卜s院基-N(r2)(R4)、-d—8烷基-or3、3-到8-元碳環或者雜環，芳基，雜芳基，和Cm芳院基；每次出現的112和W均是獨立選自H、Cm院基、Cm芳院基、芳基、雜芳基、醯基、垸基磺醯和芳基磺醯，當112和r"在相同氮並且RZ或R"是醯基、烷基磺醯或者芳基磺醯，另一個選自H、d.s垸基、芳基、Cl4芳院基，和雜芳基；RS選自H、CM烷基、Cr4芳烷基、芳基和雜芳基；RS代表在其結合的環上的0-4取代基。R4q選自0和nr2;和醜每次出現的Z獨立地選自C^垸基、(32.6烯基和C2-6炔基。當Z是烯基或者炔基基團，雙鍵或者三鍵優選不在基團的末端。本發明的另一個方面提供一種通式IV代表的化合物(IV)其中Af是取代的或者未取代的苯基；R1是-C"8院基；每次出現的W和R"均是獨立選自H和Q-8垸基；RS代表在其結合的環上的0-4取代基。formulaseeoriginaldocumentpage54Q選自0和NR2。本發明的另一個方面提供一種通式V代表的化合物:formulaseeoriginaldocumentpage55其中R'選自H和d.8烷基；R2選自H和d-s垸基；W選自滷素、C,.8垸氧基和d.8垸基；R4選自H、滷素、Cw烷氧基和d.s烷基;RS選自H、滷素和硝基；和N是1或者2。預期上述通式I一V代表的化合物可用於以下方法1)治療哺乳動物的病症，包括給藥哺乳動物治療有效量的所述化合物，2)殺傷細胞，包括給藥細胞a)有效量的所述化合物，和b)增加細胞中VDAC(例如，VDAC2，VDAC3)豐度的試劑，或者3)殺傷細胞，包括給藥細胞a)有效量的所述化合物，和b)降低細胞中VDAC(例如，VDAC2，VDAC3)豐度的試劑。預期本發明的全部的實施方案可以和一個或多個其他實施方案聯用，即使它們在本發明的不同方面描述。在本發明的某些實施方案中，化合物或者試劑不是公開在表2中的化合物。附圖簡述圖1是顯示實驗轉化的人細胞間關係的示意圖。BJ細胞是原代人包皮成纖維細胞。BJ-TERT細胞衍生於BJ細胞，並表達hTERT，端粒末端轉移酶的催化亞單位。BJ-TRET/LT/ST細胞通過引入編碼猴病毒40大(LT)和小T(ST)癌蛋白的基因組構建體而衍生自BJ-TRET細胞。BJ-TERT/LT/ST/RAS^2腫瘤細胞通過引入HRAS(RAS^2)的致癌等位基因而衍生自BJ-TERT/LT/ST細胞(Hahn等人，1999，NatMed5,1164-70)。BJ-TERT/LT/RASV12細胞起源於BJ細胞，通過引入編碼TERT，LT,RASV12的構建物和對照載體的cDNA(Hahn等人，2002,NatRevCancer2,331-41)。BJ-TERT/LT/RASV12/ST細胞通過引入編碼ST的cDNA而起源於BJ-TERT/LT/RASV12細胞(Hahn等人，2002，NatRevCancer2,331-41)。TIP5細胞是原代人包皮成纖維細胞。TIP5-衍生的細胞系通過引入編碼hTERT,LT,ST，RAS或者乳頭狀瘤病毒E6或者E7蛋白的載體來製備，如圖所示。E6和E7可以共同代替LT(Lessnick等人，2002，CancerCell1，393-401)。圖2顯示九個基因型選擇性化合物的化學結構。圖3顯示棘黴素和喜樹鹼對工程化細胞的效果圖示。標記的細胞在384孔板用棘黴素(A)或者喜樹鹼(B，C)處理48小時。顯示使用鈣黃綠素AM檢測的細胞活力的抑制百分比。誤差線表明一個標準差。(A)棘黴素處理的BJ，BJ-TERT，BJ-TERT/LT/ST禾卩BJ-TERT/LT/ST/RASV12細胞；(B)喜樹鹼處理的BJ，BJ-TERT,BJ-TERT/LT/ST和BJ-TERT/LT/ST/RASV12細胞；和(C)喜樹鹼處理的BJ-TERT/LT/RASV12，BJ-TERT/LT/RASV12/ST和BJ-TERT/LT/ST/RASV12細胞。圖4顯示erastin對工程化細胞的效果圖示。標記的細胞在384孔板用erastin處理48小時。顯示使用鈣黃綠素AM檢測的細胞活力的抑制百分比。誤差線表明一個標準差。(A)erastin處理的BJ，BJ-TERT,BJ-TERT/LT/ST和BJ-TERT/LT/ST/RASVI2細胞；(B)erastin處理的BJ，BJ-TERT,BJ-TERT/LT/RASV'2細胞(缺少ST)，BJ陽TERT/LT/RASV12/ST(致瘤細胞)和TERT/LT/ST/RASV12(致瘤細胞)；和(C)獨立衍生的TIP5/TERT、TIP5/TERT/E6、TIP5/TERT/LT、TIP5/TERT/LT/ST禾口TIP5/TERTLT/ST/RASV12細胞。圖5顯示腫瘤選擇性化合物的蛋白靶標在工程化致瘤細胞中被上調。(A-C)來自BJ,BJ-TERT,BJ-TERT/LT/ST，BJ-TERT/LT/ST/RASV12BJ-TERT/LT/RASV'2禾卩BJ-TERT/LT/RASV12/ST細胞裂解物的Westernblot，使用抗拓撲異構酶II(A)或者TOPI(B，C)的抗體。在(C)欄，細胞用針對TOPI,lamicA/C的siRNA或者相同長度的對照雙鏈DNA雙鏈體(TOPIdsDNA)轉染。在各種情況下，各點用抗eIF-4E的抗體檢測以確定蛋白上樣量的差異。對每條帶的相對量進行定量測定。(D)TOPIsiRNA防止工程化腫瘤細胞中喜樹鹼造成的細胞死亡。用針對TOPI的siRNA轉染和指定濃度喜樹鹼處理後，檢測細胞數目。(E)岡田酸，PP2A及其他細胞磷酸酶的抑制劑，使原代人細胞對喜樹鹼敏感。BJ原代細胞用指定濃度的喜樹鹼和岡田酸同時處理，測定對鈣黃綠素AM活性染色的效果。雖然岡田酸在測試的最高濃度殺傷BJ細胞，在3.4nM它自身是無效的，但它導致細胞對喜樹鹼敏感。(F)岡田酸促進TOPI的表達。BJ原代細胞用指定濃度的岡田酸處理，TOPI的表達水平用westernblot檢測。對每條帶的相對量進行定量測定。圖6顯示erastin以ST/RASV12依賴模式誘導快速細胞死亡。(A)erastin對BJ-TERT和BJ-TERT/LT/ST/RASV12細胞時間依賴的效應。在含有指定濃度erastin的情況下，細胞種植於384孔板。在使用鈣黃綠素AM24,48和72小時後檢測細胞活力的抑制。(B)在BJ-TERT(紅)和BJ-TERT/LT/ST/RASV12(藍)細胞中erastin對AlamarBlue活性染色的效果。(C)用erastin處理的BJ-TERT/LT/ST/RASV12禾BBJ原代細胞細胞的照片。細胞結合過夜，然後用9pMerastin處理24小時，然後拍昭。"、、o圖7顯示喜樹鹼而不是erastin誘導凋亡的特徵。(A)喜樹鹼處理，而不是erastin處理的，BJ-TERT/LT/ST/RASV12細胞顯示破碎的核(總核的10-20%、紅色和藍色箭頭)如圖所示。(B)喜樹鹼處理，而不是erastin處理的，BJ-TERT/LT/ST/RASV12細胞顯示AnnexinV染色。與未處理、erastin處理(9/xM)和喜樹鹼處理(1/xM)相應的在指定的Ml區域的細胞百分比是6%，6%和38%。(C)喜樹鹼處理，而不是erastin處理的，BJ-TERT/LT/ST/RASV12細胞帶有活化的caspase3。喜樹鹼和erastin處理樣品的裂解產物利用針對有活性/剪切形式的caspase3的抗體通過westernblot分析。斑點用抗elF4E的抗體再次檢測，以控制上樣水平。圖8顯示erastin和erastinB的化學結構。圖9顯示在erastin處理的腫瘤細胞核保持完整。圖10顯示erastin誘導活性氧的形成。圖11顯示erastinA的化學結構。圖12指出相對於非致瘤BJEH細胞中的表達，致瘤BJELR細胞中VDAC3的表達顯著地升高。圖13顯示將VDAC—1水平設為100%，VDAC同工型在靶細胞中的相對表達水平。圖14顯示利用線粒體提取物和固定化的活性(A6)和無活性(B1)Erastin衍生物從pull-down試驗中通過Westernblot和SDS-PAGE鑑定的蛋白。圖15顯示在(a)HCT116細胞，(b)DLD-I細胞，(c)OVCAR-3細胞和(d)BT549細胞的MCL試驗中的化合物12、13和5。圖16顯示在(a)MiaPaca2細胞，(b)DU145細胞，(c)SK—Mel28細胞和(d)Malm3M細胞的MCL試驗中的化合物12、13和5。圖17顯示在(a)BT549細胞，(b)MCF-7細胞，(c)HOP-92細胞和(d)HOP-62細胞的MCL試驗的化合物12，13和5。圖18顯示化合物6在HT-1080異種移植物中誘導腫瘤生長抑制。圖19顯示化合物5在HT-1080異種移植物中誘導明顯的腫瘤消退。圖20顯示在HT-1080異種移植物中使用化合物5的體重趨勢。圖21顯示化合物6在PANC-1異種移植物中誘導腫瘤生長抑制。圖22顯示化合物5在PANC-1異種移植物中誘導腫瘤消退。發明詳述基因型選擇性化合物作為分子探針的能力基於化學遺傳學的前提，即小分子可用於鑑定行使生物學效果的蛋白和途徑(Schreiber,1998,Bioorg.Med.Chem.6,1127-1152;Stockwell，2000，NatRevGenet1,116-25;Stockwell，2000，TrendsBiotechnol18，449-55)。例如，觀測到天然產物雷帕黴素阻止細胞生長，使發現哺乳動物的雷帕黴素(mTOR)的耙標作為調節細胞生長的蛋白成為可能(Brown等人，1994,Nature369，756-758;Sabatini等人，1994,Cell78，35-43)。申請人已經結合這兩種方法，化學和分子遺傳學，用於發現受人類疾病例如癌症關聯突變影響的途徑。申請人已經加工了一系列具有確定遺傳元件的腫瘤細胞，用於鑑定那些關鍵途徑，這些途徑的破壞將導致致瘤表型(Hahn等人，1999,NatMed5,1164-70;Hahn等人，2002,NatRevCancer2,331-41;Lessnick等人，2002,CancerCell1,393-401)。申請人推定這些實驗轉化的細胞使從已知的和新的化合物來源中鑑定基因型選擇性試劑成為可能，所述試劑在特定癌症相關等位基因存在的情況下顯示合成致死性。具有基因型選擇致死性的化合物可以作為腫瘤細胞中信號網絡的分子探針，並作為後續開發具有良好療效指數的臨床有效藥物的先導物，和/或作為有效藥物。使用這種方法，申請人已經對天然和合成化合物文庫進行高通量篩選研究，並且已經鑑定出強殺傷癌症活性的化合物。erastin和erastin類似物比如erastinB和erastinA就在這些化合物中。儘管如此，很多檢測試劑或者化合物可被用於此處描述的篩選研究(例如，鑑定抗腫瘤候選物的方法)。這種檢測試劑包括但不限於，小的有機分子，肽，模擬肽，蛋白(包括抗體)，核酸，糖類。因此，本發明提供通式I的化合物，所述化合物殺傷癌細胞，尤其是基因型特異的癌細胞，比如那些具有升高的Ras信號活性，改變的SV40小t抗原耙向活性，和/或基本上完整的Rb活性的癌細胞。申請人還已經鑑定了幾個直接或者間接結合erastin和/或它的類似物的細胞蛋白。這些蛋白包括電壓依賴性陰離子通道(VDAC1，VDAC2，和VDAC3)，Prohibitin，核糖體結合糖蛋白(ribophorin)，Sec61a禾卩Sec22b。定量RT-PCR還表明對erastin殺傷敏感的細胞的VDAC3表達水平升高(例如，高2-6倍，通常高2-2.5倍)。但不希望被任何特定理論束縛，這些實驗表明高水平的VDAC，尤其是VDAC3禾口VDAC2，表達增強erastin(和其類似物)介導的細胞殺傷，這甚至可能是功效所需要的。因此，本發明的一個方面提供一種選擇性殺傷癌細胞的方法，尤其是那些具有升高的Ras活性，改變的SV40小t抗原靶向活性，和優選的基本上完整的Rb和/或p53活性，所述方法包括對需要治療的哺乳動物患者給藥治療有效量的由通式I代表的化合物其中W選自H、-Z-Q-Z、烷基-N(R2)(R4)、-C卜s烷基-OR3、3墨到8-元碳環或者雜環，芳基，雜芳基，和芳烷基；每次出現的112和仗4均是獨立選自H、Cl4院基、Cm芳院基、芳基、雜芳基、醯基、烷基磺醯和芳基磺醯，如果W和W在相同氮原子和不同時是氫時，它們是不同的，並且當W和W在相同氮並且R2或W是醯基、垸基磺醯或者芳基磺醯，另一個選自H、d-8烷基、芳基、Cm芳院基，和雜芳基；W選自H、Cm焼基、d-4芳垸基、芳基和雜芳基;NR2w選自Q選自O禾BNR2;和每次出現的Z獨立地選自d-6垸基、(32.6烯基和C2.6炔基。當Z是烯基或者炔基基團，雙鍵或者三鍵優選不在基團的末端。在某些實施方案中，通式I的化合物不包括erastin或者erastinA。如本領域公知，Ras的組成性活化是人癌細胞惡性生長的重要因素。在20%到30%的人類腫瘤中發現，RAS原癌基因(H-RAS，N-RAS,K-RAS)的突變是頻發的遺傳畸變，儘管在不同腫瘤類型中的發生率變化很大(Bos，CancerRes.49:4682-4689,1989)。最高的RAS突變率是在胰腺腺癌(90%)，結腸腺癌(50%)和肺腺癌(30%)中發現。在甲狀腺的濾泡和未分化癌中，RAS突變的發生也是相當高的(50%)。最常觀察到的RAS突變出現在Ras調節的關鍵位點--即密碼子12、13和61。這些突變的每一種均導致Ras正常GTPase活性的消除。Ras活化還經常在血液惡性腫瘤例如骨髓性白血病和多發性骨髓瘤中觀察到。在大約三分之一的脊髓發育不良症候群(MDS)和急性骨髓性白血病(AML)中，RAS基因被突變活化。RAS突變存在於大約40%新確診的多發性骨髓瘤患者中，並且頻率隨病程進展增加。另一方面，多瘤病毒感染多種脊椎動物(現在已知12個成員)。鼠科多瘤病毒在1953年被LudwigGross在研究小鼠的白血病時分離，這樣命名是因為它在多個位點引起實體瘤。本家族的第二個成員,Sweet和Hilleman於1960年在用於生長SabinOPV的原代猴腎細胞培養物中分離了猿空泡病毒40(SV40)(Hilleman,DevBiolStand94:183-190,1998)。兩種人多瘤病毒，cBK病毒(BKV)和JC病毒(JCV)，在1971年被分離。多瘤病毒編碼三種參與細胞轉化的蛋白，稱為大腫瘤抗原(LT)，中T抗原(mT)和小腫瘤抗原(sT)。這三種蛋白是由早期區域轉錄產物的不同剪接造成的，包含同源序列。多瘤的大T抗原與腫瘤抑制蛋白pRb相互作用，能夠在培養中使原代成纖維細胞永生化。位於N末端的DnaJ結構域，尤其是在殘基42和47之間發現的HPDKYG序列，對Rb家族的功能性失活非常關鍵，對SV40大T抗原也是這樣。LT的表達不足以產生完全轉化的細胞表型--這需要mT,它是多瘤病毒的主要轉化蛋白。小鼠多瘤中T由421個胺基酸組成，可以被分為至少三個結構域，其中一些與LT和sT共用。氨基末端結構域包括前面79個胺基酸，所述結構域還存在於LT和sT。在殘基80-192之間鄰近它的是還存在於多瘤sT的結構域，包含兩個半胱氨酸富集區，Cys-X-Cys-X-X-Cys，這在SV40的小T中也被鑑定出。這些半胱氨酸的突變消除mT轉化細胞的能力。剩餘的229胺基酸對mT是獨特的，包含小鼠mT的主要酪氨酸磷酸化位點和參與轉化活性必需蛋白的膜定位的疏水性區域(在羧基端的大約20個胺基酸)。SV40的小T抗原包括174個胺基酸。在殘基97-103之間的區域與蛋白磷酸酶2A(PP2A)相互作用。這些相互作用降低了PP2A滅活ERK1和MEK1蛋白激酶的能力，導致刺激靜止的猴腎細胞的增殖。小T抗原依賴試驗還鑑定出其他具有增強細胞轉化的能力的區域。這些區域位於N端部分，這是SV40的小和大T抗原共用的，能潛在地起DnaJ結構域的作用。小T抗原還可以結合微管蛋白，已經表明這在其生物機能中起作用。申請人發現具有活化Ras活性和小T抗原表達的細胞(因此減少小T抗原耙蛋白活性，例如減少的PP2A等等，或者增強ERK1和MEK1)可以通過erastin和其類似物被選擇性的殺傷，可能通過非細胞凋亡機理。在優選的實施方案中，細胞表達基本上野生型水平的Rb和/或p53(或者其他E6/E7蛋白靶標)。因此，在某些實施方案中，某些特定基因型的癌細胞可被本發明的化合物選擇性的殺傷。這些可以包括帶有組成活化的Ras突變或者Ras信號途徑突變和增強的ERK1、MEK1活性或者減活的PP2A的癌症。在某些其他實施方案中，靶細胞的基因型可以被選擇性的改變(例如，表達SV40的小T抗原，表達ERK1或者MEK1，或者抑制PP2A，等等)，這樣的話以前對erastin和erastin類似物不敏感的靶細胞現在對這種殺傷敏感。具體地，本發明提供一種選擇性殺傷癌細胞的方法，所述癌細胞具有升高的Ras活性和小T抗原表達(或者改變的小T抗原靶蛋白活性，例如PP2A活性，增強的ERK1或者MEK1活性，或者一種模仿sT效果的機理，包括但不限於PP2A調節亞單位中的突變)，而保護不具有升高的Ras活性的相對正常細胞，即使這些細胞也表達小T抗原。這可能是有用的，因為許多癌症帶有體細胞Rasvl2或者導致癌細胞中Ras信號活性升高的其他類似突變，而相同患者/個體中的正常細胞通常沒有相同的RasV^或者其他的Ras途徑突變。Erastin和其類似物可以用來選擇性的殺傷這些癌細胞，如果癌細胞同時表達小T抗原(或者具有改變的小T抗原靶蛋白活性)。即使個體/患者中的其他正常細胞還表達小T抗原，本發明方法仍能有效殺傷癌細胞，因為正常細胞可能沒有升高的Ras信號活性。即使個體不表達小T抗原，小T抗原可以輸送給患者(以蛋白或者載體編碼DNA的形式)使其具有對erastin/erastin類似物殺傷癌症(而不是正常)細胞的敏感性。既然已理解的是小T抗原自身不足以誘導對患者的副作用，治療的副作用(提供小T抗原給患者)將是微小或者不存在的。事實上多達3000萬美國人被認為已經通過1955至1963年之間的脊髓灰質炎疫苗接種而暴露於SV40。SV40通過用於生長脊髓灰質炎病毒的獼猴腎細胞進入疫苗。那些方法不再被使用，從1963年起脊髓灰質炎疫苗已經不含病毒。90年代的DNA研究在一些人類腫瘤中發現SV40。然而，腫瘤組織中的病毒DNA與分裂細胞的相關不能證明病毒引起腫瘤的形成。在2002年10月，美國醫學會的一個科學小組得出結論，沒有辦法確定幾十年前廣泛使用的被猴腎病毒SV40汙染的脊髓灰質炎疫苗是否導致人類癌症患病率的增加。在一些實施方案中，升高的Ras活性通過在胺基酸位置12、13和/或61的組成性活化Ras(N-，H-，或者K-Ras)突變而顯示。在一些其它實施方案中，Ras活性的升高通過Ras途徑蛋白一種或多種下遊組件增強的活性顯示，包括但不限於Raf、MEK、MAPK等等。在其他實施方案中，小T抗原表達可以伴隨有載體對靶細胞的感染，比如表達SV40小T抗原的腺病毒或者逆轉錄病毒載體(見下文)。或者，小T抗原可以直接地提供給靶細胞。例如，小T抗原可利用本領域已知的各種方法導入靶細胞(參見下文細節)。在一個實施方案中，小T抗原可以通過捕獲在帶有正電荷的脂質體表面(例如lipofectins)而提供給靶細胞，任選可用抗靶組織細胞表面抗原的抗體標記，例如，抗癌細胞表面抗原的抗體。在另一個實施方案中，小T抗原可以通過胞轉(transcytosis)作用提供給靶細胞，利用任何能夠調節這種功效的"內化肽"，包括但不限於HIV蛋白Tat的N端結構域(例如，Tat的殘基l-72或者其能夠促進胞轉作用的更小片段)，果蠅antenopediaIII蛋白的全部或者部分，黃峰毒素(mastoparan)的足夠部分等等(見下文)。在其他實施方案中，通過輸送抗體、RNAi(siRNA，短髮夾RNA，等等)、反義序列或者對這種靶蛋白特異的小分子抑制劑可獲得減少的PP2A。這種靶細胞蛋白拮抗劑的輸送是本領域公知的。參見，例如，WO04078940A2，EP1439227A1，WO04048545A2,US20040029275A1,WO03076592A2,WO04076674A1,W09746671A1，在此全部引入作為參考。本發明的另一個方面提供一種利用erastin/erastin類似物和一種或多種通過細胞凋亡機理殺傷細胞的試劑或者療法(例如放療)的聯合療法。這種試劑包括如下所述的多種化療藥物。據信某些蛋白在erastin敏感細胞中表達水平升高。例如，這樣一種蛋白，VDAC3，當暴露於erastin時豐度升高2-2.5倍，但申請人不希望被理論束縛，其存在乃至增加的豐度被認為是erastin介導的殺傷必不可少的。因此在本發明的另一個方面，提供一種殺傷細胞或者降低細胞增殖率的方法，所述細胞中VDAC例如VDAC2或者VDAC3的水平升高，所述方法包括將靶細胞與通式I-IV的erastin和/或erastin類似物接觸。在某些實施方案中，靶細胞被調控表達更高水平的VDAC例如VDAC2或者VDAC3，這樣通過erastin和其功能類似物增強殺傷或者降低增殖率的敏感性。例如，VDAC蛋白可利用本領域已知的各種方法導入靶細胞(參見下面詳述)。在一個實施方案中，VDAC蛋白可以通過被捕獲到帶有正電荷表面的脂質體(例如lipofectins)中而提供給靶細胞，該脂質體可選地用抗耙組織的細胞表面抗原的抗體進行標記，例如，抗癌細胞表面抗原的抗體。在另一個實施方案中，VDAC蛋白可以通過胞轉作用提供給靶細胞，利用任何能夠調節這種功效的"內化肽"，包括但不限於HIV蛋白Tat的N端結構域(例如，Tat的殘基1-72或者其能夠促進胞轉作用的更小片段)，果蠅antennapediaIII蛋白的全部或者部分，黃峰毒素的足夠部分等等。(見下文)。此外，編碼功能性VDAC的核酸可以導入這種靶細胞，利用例如表達VDAC的腺病毒或者逆轉錄病毒載體。此外，內源VDAC(例如，VDAC3)活性可以被試劑刺激，所述試劑刺激VDAC表達，或者抑制VDAC抑制劑(轉錄或者翻譯抑制劑，或者促進VDAC在細胞中轉換的抑制劑)的活性。在某些方面，本發明的方法還涉及給藥一種增加細胞中VDAC(例如，VDAC2，VDAC3)豐度的試劑。用於增加VDAC豐度的試劑可以，例如，包括編碼VDAC諸如VDAC3的多核苷酸；適合運輸進細胞的VDAC蛋白(例如，VDAC3)，例如，與異源內化結構域融合或者製備成脂質體製劑。在某些方面，本發明的方法還涉及給藥一種降低細胞中VDAC(例如，VDAC2，VDAC3)豐度的試劑。用於降低VDAC豐度的試劑能夠，例如，抑制(inhibit)內源VDAC(例如VDAC3)表達，抑制(suppress)VDAC(例如，VDAC3)表達或者增強VDAC(例如，VDAC3)抑制劑的功能。下面章節描述本發明的某些示範性的實施方案，它們預期能夠彼此結合。此外，所述實施方案只用於說明目的，不是用於在任何方面進行限制。工程化細胞系一方面，本發明涉及工程化致瘤細胞系。之前的報告己經表明，通過引入表達hTERT和致癌RAS蛋白以及其他破壞p53、RB和PP2A功能的載體，有可能將原代人細胞轉化為致瘤細胞(Hahn等人,2002，MolCellBiol22，2111-23;Hahn等人，1999,Nature400，464-8;Hahn禾口Weinberg,2002，NatRevCancer2,331-41;Lessnick等人，2002，CancerCell1,393-401)。申請人利用了一系列工程化人致瘤細胞和它們的的前體，這些通過在原代人包皮成纖維細胞中引入特定遺傳元件而構建(圖l)。先前已經報告了這些工程化致瘤細胞的各種特徵，包括它們的倍增時間，它們抗i制老化和培養危機的能力，它們的對Y照射的反應，它們以非貼壁依賴性模式生長的能力，以及它們在免疫缺陷小鼠中形成腫瘤的能力(Hahn等人，1999，前文；Hahn等人，2002,前文；Lessnick等人，2002,前文)。在一個系列的工程化細胞中，下列遺傳元件順序引入原代BJ成纖維細胞人端粒末端轉移酶的催化亞單位(hTERT)，編碼猴病毒40大(LT)和小T(sT)癌蛋白的基因構建體，和HRAS的致癌等位基因(RAS^2)。獲得的轉化細胞系分別命名為BJ-TERT,BJ-TERT/LT/ST和BJ-TERT/LT/ST/RASV12。在第二個系列中，編碼LT和ST的互補DNA(cDNA)構建體用於代替編碼這兩種病毒蛋白的SV40基因構建體，從而構建出細胞系。在後一個系列中，ST在最後階段被引入，使申請人:能夠在ST存在或者缺失的情況下檢測化合物。後一種工程化人致瘤細胞系命名為BJ-TERT/LT/RASV12/ST。在第三個系列中，使用來源於獨立製備的人TIP5包皮成纖維細胞的細胞系，這是通過引入編碼hTERT、LT、ST和RASV12的cDNA構建體得到的(Lessnick等人，2002,CancerCell1，393-401)。獲得的這些細胞系分別命名為TIP5/TERT，TIP5/TERT/LT，TIP5/TERT/LT/ST和TIP5/TERT/LT/ST/RASV12。在第四個系列中，使用來源於TIP5成纖維細胞的細胞系，這是通過引入編碼hTERT，E6，E7，ST禾BRASVI2的cDNA得至U的。這些細胞系分別命名為TIP5/TERT/E6，TIP5/TERT/E6/E7，TIP5/TERT/E6/E7/ST禾卩TIP5/TERT/E6/E7/ST/RASV12。在這些系列中，HPVE6禾卩E7，分別滅活p53和RB,起到與在LT在上述系列中的類似的作用。但是，通過利用HPVE6和E7，申請人能觀察到分別和獨立地滅活p53和RB的效果。在隨後實例中描述大規模的篩選化合物的結果，所述化合物顯示選擇性殺傷這些工程化致瘤細胞系。篩選基因型選擇性化合物的方法，在某些實施方案中，本發明涉及大規模篩選化合物，所述化合物顯示選擇性殺傷或者抑制工程化致瘤細胞系生長(有選擇性的毒性)。此處使用的術語試劑和藥物是可互換使用的。此處使用的術語"對...有毒性"是指試劑或者化合物殺傷或者抑制致瘤細胞的生長/增殖的能力。大規模篩選包括對成百上千的化合物進行高通量篩選對工程化致瘤細胞的選擇毒性。在本發明的一個實施方案中，通過比較與候選試劑接觸後待測細胞與對照細胞的活力，來檢測選擇性的毒性，所述待測細胞是工程化致瘤細胞。一種合適的對照是與待測細胞相同類型的細胞，除了對照細胞未被工程化為致瘤的。例如，對照細胞可能是衍生出待測細胞的親本原代細胞。對照細胞在與待測對照細胞相同的條件下接觸候選試劑。合適的對照可以同時進行，或者可以預先建立(例如，預先建立標準或者參考)。在某些實施方案中，候選試劑選自化合物文庫，比如組合文庫。細胞活力可以通過本領域已知的的各種方法檢測，包括利用染料例如鈣黃綠素乙醯甲酯(鈣黃綠素AM)和AlamarBlue。在本發明的某些實施方案中，在用候選試劑處理後，染料比如鈣黃綠素被用於待測和對照細胞。在活細胞中，鈣黃綠素AM被胞內酯酶切割，形成陰離子螢光衍生物鈣黃綠素，它無法擴散出活細胞。因此，當與鈣黃綠素AM孵育時，活細胞顯示綠色螢光，而死細胞不顯示。活細胞顯示的綠色螢光可以被檢測，從而提供檢測細胞活力的方法。在本發明的某些實施方案中，進一步在動物模型中鑑定試劑的特性，所述試劑已經在工程化致瘤細胞中確定為選擇性誘導細胞死亡。動物模型包括小鼠，大鼠，兔子和猴子，它們可以是非轉基因(例如野生型)或者轉基因動物。在工程化致瘤細胞中選擇性誘導細胞死亡的試劑的效果可以在動物模型中進行評定任意多種效果，例如其在動物致瘤細胞中選擇性誘導細胞死亡的能力和其對動物的總體毒性。例如，本方法還包括在適當的小鼠模型中評定試劑(例如藥物)對致瘤細胞的選擇毒性。在工程化致瘤細胞中誘導細胞死亡的試劑的效果可以在動物模型中進行評定任意多種效果，例如其在動物的致瘤細胞中誘導細胞死亡的能力和其對動物的總體毒性。例如，本方法還包括在適當的小鼠模型中評定試劑(例如藥物)對致瘤細胞的毒性。為了說明，通過使用腫瘤生長試驗進一步評價試劑，所述試驗評定待測試劑抑制小鼠中建立的實體瘤生長的能力。所述試驗通過在裸鼠的脂肪墊植入腫瘤細胞來進行。給藥之前允許腫瘤細胞生長到一定大小。在數周內監控腫瘤體積，例如，三周。在試驗過程中還監控待測動物的總體健康狀況。在本發明的其他實施方案中，進一步在基於細胞的試驗中評定試劑的作用機理，所述試劑已經被鑑定為一種選擇性殺傷或者抑制工程化致瘤細胞生長/增殖的試劑。例如，試劑可以在凋亡試驗中檢測其通過前-細胞凋亡途徑誘導細胞死亡的能力。在本發明的其他實施方案中，評定試劑通過非細胞凋亡途徑在致瘤細胞中誘導死亡的能力，所述試劑在腫瘤細胞中誘導死亡。例如，試劑可以在凋亡試驗中檢測其通過前-細胞凋亡途徑不能誘導細胞死亡的能力。在其他實施方案中，本發明涉及一種鑑定試劑(例如，藥物)的方法，所述試劑在工程化細胞中選擇性抑制細胞毒性。在一個實施方案中，本發明涉及一種鑑定抑制細胞毒性的試劑(藥物)的方法，包括用候選試劑接觸待測細胞(例如，表達突變蛋白的工程化細胞)；檢測與候選試劑接觸的待測細胞的活力；和將待測細胞的活力與合適的對照的活力作比較。如果待測細胞的活如果大於對照細胞的活力，則鑑定出選擇性抑制細胞毒性的試劑(藥物)。合適的對照是與待測細胞類型相同的細胞，除了對照細胞沒有進行工程化以表達造成毒性的蛋白。例如，對照細胞可能是衍生出待測細胞的親本原代細胞。對照細胞在與待測對照細胞相同的條件下接觸候選試劑。合適的對照可以同時進行，或者可以預先建立(例如，預先建立標準或者參考)。在某些實施方案中，本發明的基因型選擇性的化合物(抗腫瘤試劑)可以是任何化學製劑(元素，分子，化合物，藥物)，不論是合成的、用重組技術製備的或者從天然來源分離的。例如，這些化合物可以是肽，多肽，類肽，糖，激素，或者核酸分子(比如反義或者RNAi核酸分子)。此外，這些化合物可以是小分子或者通過組合化學製備的更複雜的分子，例如，並且組合成文庫。這些文庫可以包括，例如，醇，垸基滷，胺，醯胺，酉旨，醛，乙醚及其他類型的有機化合物。這些化合物還可以是分離自細胞--細菌、動物或者植物細胞--裂解產物或者生長培養基的天然或者遺傳工程產品或者可以是細胞裂解產物或者生長培養基自身。可以採用分離的化合物或者混合的化合物的形式將這些化合物用於檢測系統，尤其是在初始篩選步驟。本發明的基因型選擇性化合物申請人的結果證明在特定遺傳元件存在的情況下，可能鑑定出具有增加的效力和活性的化合物。儘管先前的報告指出對感興趣的一種遺傳元件可能鑑定出這種基因型選擇性的化合物(Simons等人，2001,GenomeRes11，266-73;Stockwell等人，1999，ChemBiol6，71-83;Torrance等人，2001，NatBiotechnol19，940-5)，此處描述的工作提供一種利用超過23,000種化合物和一種或多種癌症相關遺傳元件的合成致死性的系統試驗。鑑定的9種選擇性化合物有助於明確在正常人細胞引入TERT和一個或多個LT、ST、E6、E7和致癌RAS的後果。這些遺傳改變的一個效果是提高細胞增殖率，並對抑制DNA合成的小分子敏感。儘管已經確定這種試劑優選的耙向到快速複製的腫瘤細胞，這個原則在這個無偏篩選方法出現是另外的確證。此外，該方法可以容易地區分具有明確的遺傳選擇性基礎和不具有的那些化合物。結果顯示hTERT和E7或者LT的表達使細胞對拓撲異構酶II毒素敏感。因為RB的損失或者失活(Sellers和Kaelin，1997,JClinOncol15，3301-12;Sherr，2001,NatRevMolCellBiol2，731-7)和端粒末端轉移酶的活化(Hahn和Weinberg,2002，NatRevCancer2,331-41;Harley,1994，PatholBiol(Paris)42,342-5)在大部分人類癌症中都有發現，這些觀察可以部分地解釋在大範圍人類腫瘤類型中這些試劑的活性。申請人發現喜樹鹼選擇性致死帶有ST和致癌RAS的細胞，因為這兩種基因對拓撲異構酶I的表達有組合的效應。快速分裂的腫瘤細胞利用拓撲異構酶I解開超螺旋DNA以便連續和快速的細胞分裂。當這兩個途徑被同時改變，拓撲異構酶I被上調，可能是間接地，致使這種腫瘤細胞對拓撲異構酶I毒素敏感。這些觀察表明ST與RASV12、LT和hTERT轉化人細胞能力的一個方面可以是ST和RASV^對拓撲異構酶I的效果。HRAS和KRAS中的突變已經在許多種人類癌症中描述過。此外，最近報導在結腸和肺腫瘤中有PP2A元件—PPP2RlB的失活(Wang等人，1998,Science282284-7)，而在不同PP2A亞基中的突變在黑素瘤、肺、乳腺和結腸癌中有描述(Calin等人，2000,Oncogene19,1191-5;Kohno等人，1999,CancerRes59,4170-4;Ruediger等人，2001，Oncogene20,1892-9;Ruediger等人，2001，Oncogene20，10-5)。目前，還不清楚這兩個途徑的同時改變在人類腫瘤中是否高發或者這兩個途徑紊亂的癌症是否顯示對這些化合物的敏感度增加。此外，申請人鑑定出一種新的化合物，稱為erastin(參見圖8)，它對表達ST和RASV"的細胞是致死的。即使當其使用濃度比在表達RASvl2WST的細胞中觀察到效果所需濃度高8倍時，用這個化合物處理細胞沒能殺傷缺乏RASV"和ST的細胞，表明一定的特異性。一旦獲得，erastin的致死效應是快速和不可逆的。Erastin可以用於在任何腫瘤細胞中誘導細胞死亡，其中erastin與腫瘤細胞接觸導致細胞死亡。通過erastin活性產生致死性的致瘤細胞中包括的不僅是工程化致瘤細胞，例如表達ST和RASV"的工程化細胞，而且還有包括不依賴於ST和RASV"表達的活化的RAS途徑的致瘤細胞。申請人還檢測了135個erastin類似物在腫瘤細胞相對正常細胞中的活性和選擇性。這些類似物中的134個是沒有活性的。一個是有活性和選擇性的，但效力比erastin低。這個化合物被命名為erastinB(參見圖8)。在本發明的某些實施方案中，本發明涉及化合物，erastin。在其他實施方案中，本發明涉及化合物erastin的類似物，其中類似物顯示對工程化致瘤細胞的選擇毒性，比如工程化人致瘤細胞。在一個實施方案中，顯示對工程化人致瘤細胞選擇毒性的erastin類似物，是erastinB。在某些實施方案中，本發明涉及本發明化合物的外消旋混合物，所述混合物顯示對工程化致瘤細胞的選擇毒性。對喜樹鹼(CPT)和erastin來說，申請人確定了被RASV12，CIST表達改變的途徑間的協同作用。RASV12的表達導致幾種已經清楚表徵的信號途徑的活化，包括RAF-MEK-MAPK信號級聯，磷脂醯肌醇3-激酶(PI3K)信號途徑和Ral-鳥嘌呤解離因子途徑(Ral-GDS)。這些途徑的每一種都與人類癌症有關，最近的研究顯示這些途徑與細胞轉化體系相呼應而起作用(Hamad等人，2002，GenesDev16,2045-57)。此外，ST結合併滅活一種廣泛表達的絲氨酸-蘇氨酸磷酸酶PP2A。儘管在ST表達時被擾亂的PP2A的的特定酶靶標還不知道，在被PP2A和RAS改變的途徑中存在本質上的重疊(Millward等人，1999，TrendsBiochemSci24,186-91)。進一步了解通過何種機理，erastin在帶有改變的這兩個信號途徑細胞中誘導死亡，可以提供這兩個途徑功能重疊的本質和程度的線索。本發明的erastin類似物，除了erastinB和erastinA，用通式I代表W選自H、-Z-Q-Z、-C,.s垸基-N(R2)(R4)、-Q.s烷基-OR3、3-到8-元碳環或者雜環，芳基，雜芳基，和Cl4芳院基；每次出現的W和W均是獨立選自H、Cl4院基、Cl4芳院基、芳基、雜芳基、醯基、烷基磺醯和芳基磺醯，如果當112和114在相同氮上並且W或W是醯基、烷基磺醯或者芳基磺醯，另一個選自H、d-8烷基、芳基、Cl4芳院基，和雜芳基；RS選自H、Cm院基、C,-4芳烷基、芳基和雜芳基；Q選自O和NR2;和每次出現的Z獨立地選自Cl6院基、C2-6烯基和C2-6炔基。當Z是烯基或者炔基基團，雙鍵或者三鍵優選不在基團的末端。其中:w選自在某些優選實施方案中，當W和R"在相同N原子上時，它們可以都是H，或者是不同的。在某些實施方案中，W是H。formulaseeoriginaldocumentpage74在某些實施方案中，W是R4formulaseeoriginaldocumentpage74在某些實施方案中，W選自H或者取代的或者未替取的的低級烷在某些實施方案中，Rt是H,W是r4，W選自H或者取代的或者未取代的的低級垸基。通式I的示例化合物包括:formulaseeoriginaldocumentpage75本發明的其他erastin類似物，用通式II表示:formulaseeoriginaldocumentpage75其中Ar是取代的苯基；W選自H、-C,.s烷基、-Z-Q-Z、-d.8烷基-N(R2)(R4)、-Q.8烷基-OR3、3-到8-元碳環或者雜環，芳基，雜芳基，和Cl4芳院基；每次出現的112和R"均是獨立選自H、dv烷基、Cw芳烷基、芳基、雜芳基、醯基、垸基磺醯和芳基磺醯，如果W和R"在相同氮上並且112或114是醯基、烷基磺醯或者芳基磺醯，另一個選自H、d.s烷基、芳基、Cm芳院基，和雜芳基；W選自H、Cl4院基、C,-4芳烷基、芳基和雜芳基；RS代表在其結合的環上的0-4個取代基。Q選自0禾口NR2;禾口每次出現的Z獨立地選自CL6烷基、02.6烯基和C2V塊基。當Z是烯基或者炔基基團，雙鍵或者三鍵優選不在基團的末端。在一些實施方案中，115代表1-4個取代基比如滷素或者硝基。在某些實施方案中，R5代表一個取代基，比如滷素或者硝基，尤其是氯，位於喹唑酮環的羰基對位上。在其他實施方案中，R5代表環上無取代基(即，所有取代基是氫原子)。在某些實施方案，Ar是單一取代，其中取代基是滷素，低級烷氧基，或者低級垸基。在某些實施方案中，Ar在鄰位有一個取代基，其中取代基是滷素，低級烷氧基，或者低級垸基。在某些實施方案中，Ar是2，6-二取代，這樣的話一個取代基是滷素，低級烷氧基，或者低級烷基，第二個取代基是滷素，低級烷氧基，或者低級垸基。在某些實施方案中，通式II的化合物不包括那些其中Ar上的取代基是乙氧基，其位於喹唑酮環上氮鍵鄰位的位置的化合物。在其他實施方案中，通式II的化合物不包括那些其中Ar沒有位於喹唑酮環的氮鍵的鄰位的低級烷氧基或者低級烷基取代基。在通式II的化合物的某些實施方案中，Ar至少有一個滷素取代基。W是R4在某些實施方案中，Ar有在鄰位一個滷素取代基。在優選的實施方案中，通式II的化合物包括那些其中Ar是2，6—二取代的苯環，其中取代基是滷素原子。通式II的示例性化合物包括Ar是取代或未取代的苯基；Ri選自H、-CM烷基、-Z-Q-Z、-d—8烷基-N(R2)(R4)、-d-s垸基-OR3、3-到S-元碳環或者雜環，芳基，雜芳基，和Cm芳院基；每次出現的112和R"均是獨立選自H、Q-4垸基、Cl4芳院基、芳基、雜芳基、醯基、烷基磺醯和芳基磺醯，如果W和W在相同氮上並且R或W是醯基、烷基磺醯或者芳基磺醯，另一個選自H、d.s烷基、芳基、Cm芳院基，和雜芳基；W選自H、dv烷基、C,-4芳烷基、芳基和雜芳基；RS代表在其結合的環上的0-4個取代基。本發明的其他emstin類似物，用通式III代表:、w選自R2^Q選自0和NR2。每次出現的Z獨立地選自d-6烷基、C2—6烯基和(32.6炔基。當Z是烯基或者炔基基團，雙鍵或者三鍵優選不在基團的末端。在某些實施方案中，R2和R4或者都是氫或者是不同的。在某些實施方案，R5代表其結合的環上的l一4個取代基，比如滷素或者硝基。在某些實施方案中，R5代表一個取代基，比如滷素或者硝基，尤其是氯，位於喹唑酮環的羰基對位上。在其他實施方案中，R5代表環上無取代基(即，所有取代基是氫原子)。在某些實施方案中，通式III的化合物不包括那些其中Ar上的取代基是位於喹唑酮環上氮鍵鄰位的位置的乙氧基的化合物。在其他實施方案中，通式III的化合物不包括那些其中Ar沒有位於喹唑酮環的氮鍵的鄰位的低級垸氧基或者低級烷基取代基原的化合物。在本發明優選的實施方案中，Ar是取代的苯基。在通式III的化合物的某些實施方案中，Ar至少有一個滷素取代基。在某些實施方案中，Ar有在鄰位滷素取代基。在優選的實施方案中，通式III的化合物包括那些其中Ar是2，6—二取代的苯環，其中取代基是滷素原子。通式m的示例性化合物包括:本發明的其他erastin類似物，用通式IV代表:79formulaseeoriginaldocumentpage79其中Ar是取代的或者未取代的苯基；R1是-C"8焼基；每次出現的W和R"均是獨立選自H和Q-8垸基;W代表在其結合的環上的0-4取代基。W選自formulaseeoriginaldocumentpage80在某些實施方案，R5代表其結合的環上的l一4個取代基，比如齒素或者硝基。在某些實施方案中，R5代表一個取代基，比如滷素或者硝基，尤其是氯，位於喹唑酮環的羰基對位上。在其他實施方案中，R5代表環上無取代基(即，所有取代基是氫原子)。在本發明優選的實施方案中，Ar是取代苯基。在某些實施方案中，Ar是單一取代，其中取代基是滷素，低級垸氧基，或者低級垸基。在某些實施方案中，Ar在鄰位有取代基，其中取代基是滷素，低級烷氧基，或者低級烷基。在某些實施方案中，Ar是2，6-二取代的，這樣的話一個取代基是滷素，低級垸氧基，或者低級垸基，第二個取代基是滷素，低級烷氧基，或者低級垸基。在某些實施方案中，通式IV的化合物不包括那些其中Ar上的取代基是位於喹唑酮環上氮鍵鄰位的位置的乙氧基的化合物。在其他實施方案中，通式IV的化合物不包括那些其中Ar沒有位於喹唑酮環的氮鍵的鄰位的低級烷氧基或者低級垸基取代基的化合物。在通式IV的化合物的某些實施方案中，Ar至少有一個滷素取代基。在某些實施方案中，Ar在鄰位有滷素取代基。在優選的實施方案中，通式IV的化合物包括那些其中Ar是2，6—二取代的苯環，其中取代基是滷素原子。通式IV的示例性化合物包括:formulaseeoriginaldocumentpage81本發明的其他erastin類似物，用通式V代表:formulaseeoriginaldocumentpage81(V)其中R'選自H和d.s浣基；R2選自H和C,.8垸基；R選自滷素、Q.8烷氧基和d.s垸基；R4選自H、滷素、d.8垸氧基和d.s垸基;W選自H、滷素和硝基；和n是1或者2。通式V的示例性化合物包括-formulaseeoriginaldocumentpage82formulaseeoriginaldocumentpage83通式I-V的化合物可用於此處所述的用於erastin和erastin類似物任意方法。本發明的化合物包括此處公開化合物的對映體和非對映體。本發明還包括此處公開化合物的鹽，尤其藥學可接受的鹽。此外，本發明包括此處公開化合物的溶劑化物，水合物和多形體結晶形式。適當的試劑可以在現有形式或者完全或者部分新陳代謝後具有前述的活性。.本發明還提供本發明化合物的合成或者製備。formulaseeoriginaldocumentpage84在某些實施方案中本發明提供化合物A的製備，其中RS和W如對結構II-V的描述。在某些實施方案中化合物A的合成步驟是formulaseeoriginaldocumentpage84在某些實施方案中，化合物B與化合物C的反應是在極性的質子惰性溶劑中進行，例如乙腈、DMSO、二乙醚、丁酮、環己酮、苯乙酮、四氫呋喃、丙酮、二氯甲烷、環丁碸或者二甲基甲醯胺。在優選的實施方案中，溶劑是二氯甲垸或者二甲基甲醯胺。在某些實施方案中，反應在氮氣中進行。在某些實施方案中，有機鹼，比如吡啶、二異丙胺、2，6-二甲基吡啶、三垸基胺(例如，三乙胺)、吡咯烷、咪唑或者哌啶，被添加到化合物B的溶液中，然後將化合物C添加到得到的溶液中。在優選的實施方案中，有機鹼是胺鹼，比如三烷基胺例如三乙基胺。在優選的實施方案中,反應是在0-10'C進行。本發明還提供結構D的化合物製備方法D，其中R5、R'和Ar如對結構II-V的描述。在某些實施方案中，D的合成步驟是化合物A與化合物E，Ar-NH2的反應。在某些實施方案中，化合物A與化合物E的反應是在極性的質子惰性溶劑中進行，例如乙腈、DMSO、二乙醚、丁酮、環己酮、苯乙酮、四氫呋喃、丙酮、二氯甲烷、環丁碸或者二甲基甲醯胺。在優選的實施方案中，溶劑是乙腈。在某些實施方案中，反應在氮氣中進行。在某些實施方案中，反應在三氯膦存在的條件下進行。在某些實施方案中，反應在40-60'C維持一段時間，例如5-15小時。在其他的實施方案中，磷醯基三氯化物被添加到攪拌的溶液A和E中，得到的混合物加熱回流一段時間，比如1-5小時。本發明還提供結構F的化合物製備方法F，其中R5、R1、Ar和W如對結構II-V的描述。在某些實施方案中，化合物F的合成步驟是化合物D與HNR2的反應，其中HNR2相當於HW。在某些實施方案中，反應是在碳酸鉀和碘化物來源存在的條件下進行，比如碘化亞銅，碘化鉀，碘化銫，碘化鈉，或者碘化四丁銨，在極性質子惰性溶劑中。在某些實施方案中，化合物D和碳酸鉀混合，並且添加HNR2，然後是碘化物來源。在優選的實施方案中，溶劑是乙腈。在某些實施方案中，碘化物試劑是碘化四丁銨；在某些實施方案中，碘化物試劑是碘化鈉。在一些實施方案中，混合物在50-7(TC保持一段時間比如5-15小時。在某些實施方案中HNR2(HW)包括第二個氮原子，其上有胺保護基團。在一些實施方案中，保護基團可以是叔丁氧碳基，苄氧羰基，烯丙氧羰基，9-芴甲氧羰基，2-(三甲基甲矽烷)乙氧羰基，或者2，2,2-三氯乙氧基羰基。在某些實施方案中，反應在鹼存在的條件下進行，比如碳酸鉀，碳酸鈉，吡啶，二異丙胺，2，6-二甲基吡啶，三乙胺，吡咯烷，咪唑，或者哌啶，和碘化物來源，在極性質子惰性溶劑中進行。在某些實施方案中，鹼是碳酸鉀或者三乙基胺。在某些實施方案中，化合物D和鹼混合，並且添加HNR2，然後是碘化物來源。在優選的實施方案中，溶劑是乙腈或者丙酮。在某些實施方案中，碘化物試劑是碘化四丁銨；在某些實施方案中，碘化物試劑是碘化鈉。在一些實施方案中，混合物在70-90'C保持一段時間比如1-10小時。在加成反應完成後，可以通過合適的脫保護反應從獲得的產品去除保護基團。例如，當保護基團是叔丁氧碳基時，保護基團可以通過在化合物溶液中添加酸來去除(例如在產品的二噁烷溶液中添加4NHC1的二噁垸溶液)。在某些實施方案中，在中和混合物之前，反應液用水和有機溶劑稀釋。在某些實施方案中，混合物通過添加飽和碳酸鈉水溶液調為鹼性。預期本發明的全部的實施方案可以和一個或多個其他實施方案聯用，儘管它們在本發明的不同方面描述。術語"醯基"是本領域熟知的，是指通式烴基C(O)-代表的基團，優選垸基C(0)-。術語"醯氨基"是本領域熟知的，是指氨基團被醯基團取代，可以例如用通式烴基C(O)NH-代表。術語"醯氧基"是本領域熟知的，是指通式烴基C(O)O-，優選烷基C(O)O-代表的基團。術語"烷氧基"是指具有氧與其結合的烷基，優選低級烷基。典型的烷氧基包括甲氧基，乙氧基，丙氧基，叔-丁氧基及其類似物。術語"烷氧烷基"是指垸基用烷氧基取代，可以用通式烷基-O-烷基代表。此處使用的術語"烯基"，是指一種脂肪基，包含至少一個雙鍵，並且包括"未被取代的烯基"和"取代的烯基"，其中後者是指烯基部分具有取代基，所述取代基替換烯基基團一個或多個碳上的氫。這種取代可能發生在一個或多個碳原子上，所述碳原子包括或不包括在一個或多個雙鏈內。此外，這種取代包括所有能夠預料到的垸基的取代，如下所述，除非穩定性是不允許的。例如，用一種或多種烷基、碳環、芳基，雜環或者雜芳基基團取代烯基基團是預料得到的。術語"烷基"是指飽和脂肪基團，包括直鏈烷基、支鏈垸基、環烷基(脂環的)基團、垸基-取代的環烷基基團和環垸基-取代的烷基。在優選的實施方案中，直鏈或者支鏈烷基在其骨架上具有30個或者更少的碳原子(例如，對於直鏈而言C1-C30，對於支鏈而言C3-C30),並且更優選20個或者更少。同樣地，優選的環烷基在它們的環狀結構具有從3個到10個碳原子，並且更優選在環狀結構具有5、6或者7個碳。此外，在整個說明書、實施方案和權利要求中使用的術語"垸基"(或者"低級垸基")包括"未被取代的烷基"和"取代的烷基"，其中後者是指烷基部分具有取代基，所述取代基替換烴的骨架的一個或多個碳上的氫。這種取代基可以包括，例如，滷素，羥基，羰基(比如羧基，烷氧羰基，甲醯，或者醯基)，硫代羰基(比如硫酯，硫代醋酸鹽，或者硫代甲酸鹽)，烷氧基，磷醯基，磷酸鹽，膦酸鹽，次膦酸鹽，氨基，醯氨基，脒，亞胺，氰基，硝基，疊氮基，巰基，烷硫基，硫酸鹽，磺酸鹽，氨磺醯，亞磺醯氨基，磺醯，雜環，芳垸基，或者芳香族或者雜芳香族部分。本領域技術人員知道烴鏈上被取代的部分它們自身也是可以被取代的，如果合適的話。例如，取代垸基的取代基可以包括取代和未取代形式的氨基，疊氮基，亞氨基，醯氨基，磷醯基(包括膦酸鹽和次膦酸鹽)，磺醯(包括硫酸鹽，磺氨基，氨磺醯和磺酸鹽)，和甲矽烷基基團，以及醚，烷硫基，羰基(包括酮，醛，羧酸酯，和酯)，-CF3，-CN和類似物。示範性取代的烷基描述如下。環烷基還可以用垸基，烯基，垸氧基，烷硫基，氨垸基，羰基取代的烷基，-CF3，-CN和類似物取代。術語"C,.y"當與化學部分例如醯基，醯氧基，烷基，烯基，炔基，或者烷氧基聯用時表示包括一些基團，所述基團在鏈上包含從X到Y個碳。例如，術語"Cx.y垸基"是指取代的或者未取代的飽和烴基團，包括直鏈垸基和支鏈垸基基團，所述基團在鏈上包含從X到Y個碳，包括滷垸基基團例如三氟甲基和2,2，2-三氟乙基等等。Cq院基表示如果位於末端位置為氫，如果在內部，則為鍵。術語"C2.y烯基"和"C2.y炔基"是指取代的或者未取代的非飽和的脂肪基，長度相似並且可能取代上述烷基，但分別包含至少一個雙鍵或者三鍵。此處使用的術語"垸氨基"是指用至少一個垸基取代的氨基團。此處使用的術語"烷硫基"是指用垸基取代的硫醇基，可以由通式烷基S-代表。此處使用的術語"炔基"，是指一種脂肪基，包含至少一個三鍵，並且包括"未被取代的炔基"和"取代的炔基"，其中後者是指炔基部分具有取代基，所述取代基替換炔基基團一個或多個碳上的氫。這種取代基可能出現在一個或多個碳原子上，所述碳原子包括或不包括在一個或多個三鍵內。此外，這種取代包括所有能夠預料到的對烷基的取代，如上所述，除非穩定性是不允許的。例如，用一種或多種烷基、碳環、芳基，雜環或者雜芳基基團取代炔基基團是預料得到的。此處使用的術語"醯胺"，作為使用此處，是指一種基g^Q其中W和R"各自獨立地代表氫或者烴基基團，或者W和R"與它們結合的氮原子一起形成在環結構上具有4-8個原子的雜環。術語"胺"和"氨基"是本領域熟知的，是指未取代的和取代的胺及其鹽，例如，可被下面結構代表的部分其中R9、R"和R^各自獨立地代表氫或者烴基基團，或者W和R1Q與它們結合的氮原子一起形成在環結構上具有4-8個原子的雜環。此處使用的術語"氨烷基"是指用氨基基團取代的烷基團。此處使用的術語"芳垸基"是指用芳基基團取代的烷基團。此處使用的術語"芳基"包括取代的或者未取代的單環芳族基，其中環上的每個原子是碳。優選的環是5-到7-元環，更優選6-元環。術語"芳基"還包括具有兩個或更多環的多環體系，具有兩個或更多碳是兩個相鄰環公用的，其中至少一個環是芳香族，例如，另一個環可以是環烷基，環烯基，環炔基，芳基，雜芳基，和/或雜環。芳基基團包括苯，萘，菲，苯酚，苯胺和類似物。術語"氨基甲酸鹽"是本領域熟知的，是指基團3-t1LR4Z-Rformulaseeoriginaldocumentpage90其中W和R"獨立地代表氫或者烴基基團。此處使用的術語"碳環"，"碳環基"和"碳環的"是指非芳香族飽和的或者非飽和的環，其中環上的每個原子是碳。優選的碳環包含3-10個原子，更優選5-7個原子。此處使用的術語"碳環烷基"是指用碳環基團取代的烷基團。術語"碳酸酯"是本領域熟知的，是指基團-OC02-R9，其中R9代表烴基基團。此處使用的術語"羧基"是指由式-C02H代表的基團。此處使用的術語"酯"是指基團-C(O)OR9，其中W代表烴基基團。此處使用的術語"醚"是指烴基基團通過氧連接到另一個烴基基團。因此，烴基基團的醚取代基可以是烴基-O-。醚可以是對稱或者不對稱的。醚的實例包括，但不限於，雜環-O-雜環和芳基-O-雜環。乙醚包括"垸氧基烷基"基團，可以由通式烷基-O-烷基代表。此處使用的術語"滷"和"滷素"表示滷素，包括氯，氟，溴和碘。此處使用的術語"雜烷基"和"雜芳垸基"是指用雜芳基基團取代的烷基團。術語"雜芳基"和"雜芳基"包括取代的或者未取代的芳香族單環結構，優選的5-到7-元環，更優選的5-到6-元環，其環狀結構包括至少一個雜原子，優選一到四個雜原子，更優選一到兩個雜原子。術語"雜芳基"和"雜芳基"還包括具有兩個或更多環的多環體系，兩個或更多碳是兩個相鄰環公用的，其中至少一個環是雜原子的，例如，另一個環可以是環烷基，環烯基，環炔基，芳基，雜芳基，和/或雜環。雜芳基基團包括，例如吡咯，呋喃，噻吩，咪唑，惡唑，噻唑，吡唑，吡啶，吡嗪，噠嗪，和嘧啶，以及類似物。此處使用的術語"雜原子"表示除碳或者氫以外的任意元素的原子。優選的雜原子是氮，氧和硫。術語"雜環基"，"雜環"和"雜環的"是指取代的或者未取代的非芳環結構，優選的3-到10-元環，更優選的3-到7-元環，其環狀結構包括至少一個雜原子，優選一到四個雜原子，更優選一到兩個雜原子。術語"雜環基"和"雜環的"還包括具有兩個或更多環的多環體系，其中兩個或更多碳是兩個相鄰環公用的，其中至少一個環是雜環，例如，另一個環可以是環垸基，環烯基，環炔基，芳基，雜環，和/或雜環基。雜環基團包括，例如，哌啶，哌嗪，吡咯烷，嗎啉，內酯，內醯胺，及類似物。此處使用的術語"雜環烷基"是指用雜環基團取代的烷基團。此處使用的術語"烴基"是指通過碳原子成鍵的基團，所述碳原子沒有=0或者-s取代基，通常具有至少一個碳氫鍵和主要的碳骨架，但任選包括雜原子。因此，像甲基、乙氧基乙基、2-吡啶基和三氟甲基的基團被認為是用於本申請目的的烴基，但取代基比如乙醯基(在連接碳上具有-O取代基)和乙氧基(通過氧而不是連接碳)不是。烴基基團包括，但不限於芳基，雜芳基，碳環，雜環，烷基，烯基，炔基，及其組合。此處使用的術語"羥烷基"是指用羥基取代的垸基團。術語"低級"當與化學部分例如，醯基，醯氧基，垸基，烯基，炔基，或者烷氧基聯用時表示包括一些基團，所述基團在取代基上具有十個或者更少非氫原子，優選六個或者更少。"低級烷基"，例如，是指一種垸基，所述垸基包含十個或者更少碳原子，優選六個或者更少。在某些實施方案中，此處定義的醯基，醯氧基，垸基，烯基，炔基，或者烷氧基取代基，分別是低級醯基，低級醯氧基，低級垸基，低級烯基，低級炔基，或者低級烷氧基，不論它們是單獨或者與其他取代基共同存在，比如在羥垸基和芳烷基(在這樣情況下，例如，當計算烷基取代基中的碳原子時，不計算芳基基團中的原子)。術語"多環基"，"多環"和"多環的"是指兩個或更多環(例如，環烷基，環烯基，環炔基，芳基，雜芳基和/或雜環基)，其中兩個或更多原子是兩個相鄰環共用的，例如，環是"稠環"。多環中的每個環可以是取代或者未取代的。在某些實施方案中，多環的每個環在環中包含3到IO個原子，優選的5到7個。術語"取代的"是指具有替換骨架上一個或多個碳上的氫的取代基的部分。很清楚"取代"或者"用...取代"包括隱含條件，即這種取代與取代的原子和取代基允許的化合價一致，並且取代導致穩定的化合物，例如，不會自發進行轉化例如通過重排、環化、消除等等。此處使用的術語"取代的"預期包括有機化合物所有允許的取代。在較寬範圍，允許的取代基包括有機化合物的非環狀的和環狀的，支流和無支鏈的，碳環的和雜環的，芳香族和非芳香族取代基。對合適的有機化合物，允許的取代可以是一種或多種，可以是相同或者不同的。對本發明來說，雜原子比如氮可以有氫取代基和/或此處描述的任何允許的有機化合物取代，其滿足雜原子的化合價。取代基可以包括此處描述的任何取代基，例如滷素，羥基，羰基(比如羧基，垸氧羰基，甲醯，或者醯基)，硫代羰基(比如硫酯，硫代醋酸鹽，或者硫代甲酸鹽)，垸氧基，磷醯基，磷酸鹽，膦酸鹽，次膦酸鹽，氨基，醯氨基，脒，亞胺，氰基，硝基，疊氮基，巰基，垸硫基，硫酸鹽，磺酸鹽，氨磺醯，磺醯氨，磺醯，雜環，芳垸基，或者芳香族或者雜芳族部分。本領域技術人員知道烴鏈上被取代的部分它們自身也是可以被取代的，如果合適的話。除非特別表明為"未取代的"，此處關於化學基團的參考理解為包括取代的變體。例如，關於"芳基"基團或者部分的參考隱含的包括取代的和未取代的變體。術語"硫酸鹽"是本領域熟知的，是指基團-OS03H，或者藥學可接受的鹽。術語"氨磺醯"是本領域熟知的，是指由下列通式代表的基團其中W和R"獨立地代表氫或者烴基。術語"亞碸"是本領域熟知的，是指基團-S(O)-R9，其中W代表烴基基團。術語"磺酸鹽"是本領域熟知的，是指基團S03H，或者藥學可接受的鹽。術語"碸"是本領域熟知的，是指基團-S(0)2-R9，其中RS代表烴基基團。此處使用的術語"硫代烷基"是指用硫醇基取代的烷基團。formulaseeoriginaldocumentpage93此處使用的術語"硫酯"是指基團-C(O)SR9或者-SC(O)R9，其中Rg代表烴基基團。此處使用的術語"硫醚"相當於醚，其中氧用硫替換。術語"尿素"是本領域熟知的，可以由下列通式代表其中W和R"獨立地代表氫或者烴基基團。術語"小的有機分子"是指分子量小於2000amu的非聚合物。通常，這種分子的分子量小於1000amu，比如小於500amu。鑑定基因型選擇性化合物靶標的方法在某些實施方案中，本發明涉及利用基因型選擇性化合物，此處也稱為"配體"(例如，erastin)，鑑定參與改變患病細胞表型的耙標(此處還被稱為"細胞組分"(例如，蛋白，核酸，或者脂類)。在一個實施方案中，本發明提供一種鑑定參與腫瘤發生的細胞組分的方法，其中致瘤細胞，諸如工程化人致瘤細胞、組織、器官、有機體或者其裂解產物或者提取物，與所述抗腫瘤化合物接觸；在接觸後，與erastin作用(直接或者間接)的細胞組分被鑑別，從而可以鑑定出參與腫瘤發生的細胞組分。在另一個實施方案中，本發明提供一種鑑定參與腫瘤發生的細胞組分的方法。在這個方法中，(a)致瘤細胞，諸如工程化人致瘤細胞、組織、器官、有機體或者其裂解產物或者提取物，與erastin抑制劑接觸和與erastin接觸；和(b)與erastin抑制劑作用(直接或者間接)的細胞組分被鑑別，這些細胞組分參與腫瘤發生。細胞可以先後或者同時接觸erastin和erastin抑制劑。可利用己知的方法鑑定與erastin或者本發明的任何試劑相互作用的細胞組分。如此處描述，這些方法所述化合物(或者配體)可以用任何化學方法製備。此外，所述化合物可以是體內或者體外合成的天然存在的生物分子。配體可選衍生自另一個化合物。這種改變的一個益處是，衍生化合物可以用於促進配體靶複合物收集或者配體收集，例如，在分離配體和靶標後。衍生基團的非限制性實例包括生物素，螢光素，地高辛，綠色螢光蛋白，同位素，多聚組氨酸，磁珠，穀胱甘肽S轉移酶，光激活交聯劑或者任意其組合。衍生基團還可以用於結合靶標(例如，erastin結合蛋白)以有利於它們的檢測。根據本發明，靶標(細胞組分)可以是體內或者體外合成的天然存在的生物分子。靶標可以包括胺基酸，核酸，糖，脂類，天然產物或者其任意組合。本發明的一個益處是不需要耙標性質或者功能的先驗知識。配體和靶標的相互作用可以是共價的或者非共價的。任選，配體_耙標配對中的配體對其他靶標可以顯示親合力，或者也可以不顯示親合力。配體-耙標配對中的耙標對其他配體可以顯示親合力，或者也可以不顯示親合力。例如，配體和耙標間的結合可以使用體外生化法在蛋白水平鑑定，包括光-交聯，放射性同位素標記的配體結合和親和色譜法(JakobyWB等人，1974，MethodsinEnzymology46:1)。此外，小分子可以固定在合適的固體支持物或者親合基質例如瓊脂糖基質上，用於篩選不同細胞類型和生物體的提取物。同樣地，小分子可以接觸細胞，組織，器官，生物體或者其裂解產物或者提取物，然後加入固相支持體以捕獲小分子和結合的耙蛋白。表達克隆可用於檢測蛋白的小庫中的靶標(KingRW等人，1997，Science277:973)。肽(Kieffer等人,1992,PNAS89:12048)，核苷衍生物(HaushalterKA等人，1999,Curr.Biol.9:174)和藥物-牛血清白蛋白(藥物-BSA)結合物(Tanaka等人，1999，Mol.Pharmacol.55:356)已經被用於表達克隆中。另一個將配體與編碼耙標的DNA緊密聯繫的有用技術是噬菌體展示。噬菌體展示，主要用於單克隆抗體領域，在病毒表面創建了肽或者蛋白文庫，並用於篩選活性(SmithGP,1985，Science228:1315)。淘篩噬菌體以獲得連接到固相上的靶標(ParmleySF等人，1988，Gene73:305)。噬菌體展示的一個優點是cDNA位於噬菌體中，因此不需要分離克隆步驟。一種非限制性實例包括結合反應條件，其中配體包括標記物例如生物素、螢光素、地高辛、綠色螢光蛋白、放射性同位素、組氨酸標記物、磁珠、酶或者其組合。在本發明的一個實施方案中，靶標可以在基於機理的試驗中篩選，比如檢測結合靶標的配體的試驗。這可以包括與配體或者蛋白或者被檢測的指示劑的固相或者液相結合情況。或者，編碼功能還不確定的蛋白的基因可以與報告系統(例如，^-半乳糖苷酶、螢光素酶或者綠色螢光蛋白)一起轉染細胞，並篩選文庫，優選的通過高通量篩選或者用文庫的單獨成員。可以使用基於其他機理的結合試驗，例如，檢測對酶活性作用的生化試驗，基於細胞的試驗，其中靶標和報告系統(例如，螢光素酶或者/3-半乳糖苷酶)已經導入細胞，以及檢測自由能變化的結合試驗。靶標被固定到孔、珠或者晶片上，或者通過固定化抗體捕獲，或者毛細管電泳分析，進行結合試驗。結合的配體通常可以使用比色或者螢光或者表面等離子共振來檢測。在某些實施方案中，通過調節本發明鑑定的靶標(細胞組分)的功能(例如，活性或者表達)，本發明還預期了治療或者預防疾病(例如癌症)的方法。為了說明，如果靶標被鑑定促進腫瘤生長，治療劑可用於改變或者降低靶標的功能(活性或者表達)。或者，如果靶標被鑑定抑制腫瘤生長，治療劑可用於增強靶標的功能(活性或者表達)。治療劑包括，但不限於，抗體、核酸(例如，反義寡聚核苷酸或者用於RNA幹擾的小抑制RNA)、蛋白、小分子(例如，本發明的化合物)或者模擬肽。Erastin耙標在某些實施方案中，本發明提供emstin和erastin類似物的靶標，在此處通稱為erastin靶標。Erastin靶標可以直接或者間接地結合erastin或者如上所述的erastin類似物。可選地，erastin靶標可以在細胞中調節化合物例如erastin或者erastin類似物的抗腫瘤活性。示例性erastin靶標包括，但不限於VDAC1，VDAC2,VDAC3，Prohibitin，核糖體結合糖蛋白，Sec61a和Sec22b。電壓依賴性陰離子通道(VDACs)是被不同基因編碼的孔道形成蛋白家族，在哺乳動物組織中表達出至少三種蛋白產品(VDAC1，VDAC2，和VDAC3)。VDACs已知主要功能是允許外線粒體膜(ODF)的幾乎自由滲透性。參見，例如，Shoshan-Barmatz等人，2003，CellBiochemBiophys39:279-92。在ODF中與在線粒體中，VDAC2和VDAC3可能具有可選擇的結構組織，不同的功能(Hinsch等人，2004，JBiolChem.279:15281-8)。不同種類的代表性VDAC序列已經儲存在GenBank。例如，人VDAC1胺基酸和核酸序列可以在GenBank登錄號NP—003365和NM—003374中找到；人VDAC2胺基酸和核酸序列可以在GenBank登錄號NP_003366和NM—003375中找到；人VDAC3胺基酸和核酸序列可以在GenBank登錄號NP—005653和NM—005662中找到。Prohibitin是遍在表達的進化保守的基因。據認為它是細胞增殖的負調節劑，可用作腫瘤抑制物(例如，Fusaro等人，2003,J.Biol.Chem.278:47853-47861;Fusaro等人，2002，Oncogene21:4539-4548)。不同種類的代表性prohibitin序列已經儲存在GenBank。例如，人prohibitin胺基酸和核酸序列在GenBank登錄號NP_002625和NM—002634中可以找到。核糖體結合糖蛋白(例如，I和II)是看起來參與核糖體結合的蛋白。它們是大量的、高度保守的糖蛋白，專一靶向於粗面內質網的膜上(例如，Fu等人，2000,J.Biol.Chem.275:3984-3990;Crimaudo等人，1987,EMBOJ.6:75-82)。不同種類的代表性核糖體結合糖蛋白序列已經儲存在GenBank。例如，人核糖體結合糖蛋白I胺基酸和核酸序列在GenBank登錄號NP一002941禾QNM—002950中可以找到；人核糖體結合糖蛋白II胺基酸和核酸序列在GenBank登錄號NP—002942和NM—002951中可以找到。Sec61-alpha蛋白據認為在分泌肽和膜多肽插入內質網中起作用(參見，例如，Higy等人，2004,Biochemistry43:12716-22)。不同種類典型的Sec61alpha序列已經儲存在GenBank中。例如，人Sec61-alpha-I胺基酸和核酸序列在GenBank登錄號NP—037468和NM—013336中可以找到；而人Sec61-alpha-I1的胺基酸和核酸序列在GenBank登錄號NP_060614和NM—018144中可以找到。Sec22-beta蛋白表明在內質網-高爾基體蛋白的運送以及與SNARE形成複合物中起作用(例如，Parlati等人，2000，Nature407:194-198;Mao等人，1998,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.95:8175-8180)。不同種類典型的Sec61-beta序列已經儲存在GenBank中。例如，人Sec61-beta的胺基酸和核酸序列在GenBank登錄號NP—004883和NM—004892中可以找到。在某些實施方案中，本發明涉及通過利用erastin靶標鑑定候選抗腫瘤治療劑的方法。在這種方法中，與erastin靶標結合或者增加或者降低emstin靶標功能(例如，活性或者表達或者相互作用)的待測試劑可以確定為候選抗腫瘤治療劑。候選抗腫瘤治療劑還可以在體內或者體外檢測其抗腫瘤活性。鑑定候選抗腫瘤治療劑的方法類似地可通過如上所述的篩選法來完成。輸送方法本發明的某些實施方案中使用輸送蛋白(例如，小t抗原，VDAC，PP2A抑制劑等等)或者編碼這種蛋白的DNA到靶細胞的方法，這可以通過任意標準分子生物學和分子醫學技術來實現。下面舉例說明的實施方案只是可用於這種目的的技術中的幾種。在本發明的一個方面，有關蛋白或者產生反義分子的表達構建體，可用任意生物學有效的載體給藥，例如在體內能夠有效地將重組基因轉染細胞的任意製劑或者組合物。所述方法包括將有關基因插入病毒載體，所述病毒載體包括重組逆轉錄病毒、腺病毒、腺相關病毒和單純皰疹病毒-1，或者重組細菌或者真核質粒。病毒載體可用於直接轉染細胞；質粒DNA可以藉助於例如陽離子脂質體(例如，lipofectin)或者衍生的(例如，抗體結合的)、多聚賴氨酸結合物、gramacidinS、人工病毒被膜或者其他這類胞內載體進行輸送，以及基因構建體直接注入或者在體內進行CaP04沉澱。應該了解合適的靶細胞的轉導代表基因治療中關鍵的第一步，特定基因輸送系統的選擇依賴於一些因素，諸如預定靶標的表型和給藥途徑，例如局部的或者全身的。體內向細胞引入編碼有關蛋白的核酸的優選的方法是使用包含核酸的病毒載體，例如，編碼基因產物的cDNA。用病毒載體感染細胞的優勢在於大部分靶細胞可以捕獲核酸。此外，病毒載體內編碼的分子，例如，通過病毒載體中包含的cDNA，可以在接納病毒載體核酸的細胞中有效表達。逆轉錄病毒載體和腺相關病毒載體通常被認為是重組基因輸送系統的選擇，用於外源基因傳遞到體內，尤其是到人體內。這些載體可以有效的將基因輸送入細胞，傳遞的核酸穩定地整合到宿主的染色體DNA中。人類免疫缺陷性病毒(HIV)和貓免疫缺陷病毒(FIV)代表了稱為"慢病毒"的逆轉錄病毒家族亞群，它們因為在整合後長時間處於潛伏期而得名。來源於這兩種病毒的載體系統已經有效用於臨床前模型，在治療應用中顯示了廣闊前景。與大部分逆轉錄病毒不同，HIV和FIV(和來源於它們的載體)能夠轉導非分裂細胞(Humeau等人，MolTher.2004，9(6):902-13;Curran等人，MolTlier.2000，1(1》31-8)。根據靶細胞類型這個性質可能是有利的。此外，FIV可以通過其增加的轉基因運載能力同其他逆轉錄病毒區分開(Curmn等人，MoITher,2000,1(1):31-8).2000,1(1):31-8)。逆轉錄病毒使用的主要先決條件是確保其使用安全，尤其是考慮到野生型病毒在細胞群中傳播的可能性。只產生複製缺陷型逆轉錄病毒的專化細胞系(稱為"包裝細胞")的開發促進了逆轉錄病毒在基因治療中的應用，對缺陷型逆轉錄病毒進行了深入研究以用於基因治療目的的基因轉移(綜述參見Miller,A.D.，Blood76:271,1990)。因此，可以構建重組逆轉錄病毒，其中部分逆轉錄病毒編碼序列(gagpol，env)被編碼有關多肽的核酸取代，導致逆轉錄病毒複製缺陷。複製缺陷型逆轉錄病毒然後被包裝變成病毒顆粒，所述病毒顆粒採用標準技術通過輔助病毒感染靶細胞。產生重組逆轉錄病毒和體外或者體內用這種病毒感染細胞的實驗步驟參見CurrentProtocolsinMolecularBiology，Ausubel，F.M.等人，(eds.)，JohnWiley&Sons,Inc.,GreenePublishingAssociates,(2001),9.9-9.14章及其他標準實驗手冊。合適的逆轉錄病毒的實例包括pLJ、pZIPpWE和pEM，這些都是本領域技術人員公知的。用於製備嗜親性和兼嗜性逆轉錄病毒系統的合適包裝病毒系的實例包括vCrip、vCre、V2和vAm。逆轉錄病毒已經用於在體外和/或體內將各種基因導入許多不同的細胞類型中，包括神經細胞、上皮細胞、內皮細胞、淋巴細胞、成肌細胞、肝細胞、骨髓細胞(參見例如Eglitis等人，Science230:1395-1398，1985;Danos和Mulligan,PNASUSA85:6460-6464，1988;Wilson等人，PNASUSA85:3014-3018,1988;Armentano等人，PNASUSA87:6141-6145，19卯；Huber等人，PNASUSA88:8039-8043，1991;Ferry等人，PNASUSA88:8377-8381，1991;Chowdhury等人，Science254:1802-1805，1991;vanBeusechem等人，PNASUSA89:7640-7644,1992;Kay等人，HumanGeneTherapy3:641-647，1992;Dai等人，PNASUSA89:10892-10895，1992;Hwu等人，J.Immunol.150:4104-4115，1993;U.S.PatentNo.4,868,116;U.S,專利4,980,286;PCT申i青WO89/07136;PCT申請WO89/02468;PCT申請WO89/05345;禾卩PCT申請WO92/07573)。此外，已證明通過修飾病毒顆粒表面上的病毒包裝蛋白，能夠限制逆轉錄病毒的感染範圍，從而限制基於逆轉錄病毒的載體(參見PCT公開文本W093/25234,WO94/06920,和W094/11524)。例如，改變逆轉錄病毒載體感染範圍的步驟包括將對細胞表面抗原特異的抗體偶聯到病毒env蛋白(Roux等人，PNASUSA86:9079-卯83，1989;Julan等人，J.GenVirol73:3251-3255，1992;和Goud等人,Virology163:251-254,1983);或者將細胞表面配體偶聯到病毒env蛋白(Nedaetal，J.Biol,chem.266:14143-14146,1991)。偶聯可以是與蛋白或者其他種類化學交聯的形式(例如，偶聯到乳糖以將env蛋白轉化為脫唾液酸糖蛋白)，以及通過產生融合蛋白(例如，單鏈抗體/env融合蛋白)而偶聯。這些技術，不僅有利於限制或與此相反，指導對某些組織類型的感染，還可以用於將嗜親性載體轉換成兼性載體。對本發明有用的另一種病毒基因輸送系統是腺病毒衍生的載體。腺病毒的基因組可以被調控，這樣的話它編碼感興趣的基因產物，但其不具有在正常病毒裂解性生命周期中複製的能力(參見例如Berkner等人，BioTechniques6:616,1988;Rosenfeld等人，Science252:431-434,1991;和Rosenfeld等人，Cell68:143-155，1992)。合適的腺病毒載體來源於腺病毒株Ad型5dl324或者本領域技術人員公知的其他腺病毒株(例如Ad2，Ad3，Ad7等等)。重組腺病毒在某些方面是有優勢的，它們不能感染非分裂細胞，可用於感染大量細胞類型，包括氣道上皮(Rosenfeld等人，(1992)引用前文)，內皮細胞(Lemarchand等人，PNASUSA89:6482-6486，1992),肝細胞(Herz和Gerard,PNASUSA90:2812-2816,1993)和肌細胞(Quantin等人，PNASUSA89:2581-2584，1992)。此外，病毒顆粒相對穩定，易於純化和濃縮，並且如上所述，可以進行修飾以影響感染的範圍。此外，導入的腺病毒DNA(和其包含的外源DNA)不整合到宿主細胞的基因組，仍保持為附加體，從而避免了潛在問題，即作為在導入DNA整合入宿主基因組(例如，逆轉錄病毒DNA)的位置發生的插入致突變作用的結果。此外，相對其他基因輸送載體，腺病毒基因組運載外源DNA的能力較強(到8kb)(Berkner等人,前文；Haj-Ahmand和GrahamJ.,Virol.57:267,1986)。當前使用的大多數是複製缺陷型腺病毒載體，因此本發明也使用這種載體，所述載體被切除全部或者部分病毒El和E3基因，但保持差不多80%的腺病毒遺傳物質(參見例如Jones等人，Cell16:683,1979;Berkner等人，前文；和Graham等人，在MethodsinMolecularBiology,EJ.Murray,Ed.(Humana,Clifton,NJ,1991)vol.7.pp.109-127)。插入相關基因的表達可受例如，E1A啟動子、主要晚期啟動子(MLP)和結合的前導序列、病毒E3啟動子或者外源添加啟動子序列的控制。另一種用於有關基因輸送的病毒載體系統是腺相關病毒(AAV)。腺相關病毒是一種天然發生的缺陷病毒，需要另一種病毒，例如腺病毒或者皰疹病毒作為輔助病毒以便有效的複製和多產的生命周期(綜述參見Muzyczka等人，Curr.TopicsinMicro.Immunol.(1992)158:97-129,1992)。它也是少數幾種能夠將其DNA整合到非分裂細胞中，顯示出高頻率的穩定整合的病毒(參見例如Flotte等人，Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol.7:349-356,1992;Samulski等人，J.Virol.63:3822-3828，1989;和McLaughlin等人，J.Virol.62:1963-1973，1989)。只包含有AAV的300鹼基對的載體可以包裝和整合。用於外源DNA的空間限於大約4.5kb。如Tratschin等人，Mol.Cell.biol.5:3251-3260,1985中所述的AAV載體可用於將DNA導入細胞。使用AAV載體已經將多種核酸導入不同的細胞類型(參見例如Hermonat等人，PNASUSA81:6466-6470，1984;Tratschin等人，Mol.Cell.biol.4:2072-2081，1985;Wondisford等人，Mol.Endocrinol.2:32-39，1988;Tratschinetal，J.Virol.51:611-619，1984;和Flotte等人，J.Biol.Chem.268:3781-3790，1993)。其他用於基因治療的病毒載體系統來源於皰疹病毒、牛痘病毒和幾種RNA病毒。尤其是，皰疹病毒載體可以提供一種在中樞神經系統和眼組織的細胞中持續維持有關重組基因的獨特策略(Pepose等人,InvestOphthalmolVisSci35:2662-2666,1994)。除比如上面那些舉例說明的病毒遞送法之外，非病毒方法也可以用於引起有關蛋白在動物組織中的表達。基因轉移的大多數非病毒方法依靠哺乳動物細胞攝取和胞內運輸高分子的常規機理。在優選的實施方案中，本發明的非病毒基因輸送系統依靠靶細胞的內吞途徑攝取有關基因。這種類型示範性的基因輸送系統包括脂質體衍生的系統、多聚賴氨酸結合物和人工病毒被膜。在一個典型的實施方案中，編碼有關多肽的基因可以被表面帶有正電荷的脂質體(例如lipofectins)捕獲，(任選)所述脂質體用抗靶組織細胞表面抗原的抗體標記(Mizuno等人，NoShinkeiGeka20:547-551,1992;PCT公布WO91/06309;日本專利申請1047381;和歐洲專利公布EP-A-43075)。例如，可以使用抗神經膠質瘤-抗原單克隆抗體標記的脂質體進行神經膠質瘤細胞的脂質體轉染(Mizuno等人，Neurol.Med.Chir.32:873-876，1992)。在另一個說明性的實施方案中，基因輸送系統包括抗體或者細胞表面配體，它們與基因結合劑例如多聚賴氨酸交聯(參見，例如，PCT公布WO93/04701,W092/22635,WO92/20316,W092/19749,和WO92/06180)。例如，有關基因構建體可用於通過使用包括抗體的可溶多核苷酸載體在體內轉染特定細胞，所述抗體結合多聚陽離子，例如多聚賴氨酸(參見美國專利5,166,320)。應該了解通過肽介導的胞吞作用有關核酸構建體的有效輸送可以利用試劑進行改進，所述試劑增強基因從內體結構逃逸。例如，整個腺病毒或者流感HA基因產物的融合肽可以用作輸送系統的一部分以誘導包含DNA的內體的有效破壞(Mulligan等人，Science260-926,1993;Wagner等人，PNASUSA89:7934,1992;和Christiano等人，PNASUSA90:2122，1993)。在臨床條件下，基因輸送系統可以通過本領域熟知的任意大量方法之一導入患者。例如，基因輸送系統的藥物製劑可以全身性的導入，例如，通過靜脈注射，並且耙細胞中構建體的特異轉導主要源自轉染的特異性，這是由基因運載載體、控制基因表達的轉錄調節序列造成的細胞類型或者組織類型表達，或者其組合引起的。在其他實施方案中，重組基因的初始輸送非常受限，這是因為導入動物時非常受局限。例如，基因運載載體可以通過導管(參見美國專利5,328，470)或者立體靶向注射(例如Chen等人，PNASUSA91:3054-3057，1994)導入。此外，有關蛋白可以與第二種肽以融合肽的形式提供，所述第二種肽促進"胞轉作用"，例如通過靶細胞攝取肽。舉例說明，有關蛋白可以作為融合多肽的一部分，所述融合多肽還包括HIV蛋白TatN端結構域的全部或者一個片段，例如，Tat的殘基1-72或者能夠促進胞轉作用的其更小片段。在其他實施方案中，有關多肽可以與觸角足m蛋白的全部或者部分形成融合多肽。合成肽已經有效地用於轉運蛋白、肽和小分子穿過包括血腦屏障的生物膜，因此可以用於本申請(Rothbard等人,NatMed.2000,6(11):1253-7;Rothbard等人,JMedChem,2002，45(17):3612-8)。儘管提供的合成蛋白轉導序列實例的特徵在於高密度的精氨酸殘基，還可以用其他功能類似但結構不同的分子或者序列取代的。為進一步舉例說明，有關多肽(或者模擬肽)可以嵌合肽形式提供，其中包括異源肽序列("內化肽"或者"內化作用結構域")，所述肽序列驅駛有關多肽序列胞外形式穿過細胞膜的移位，以促進有關多肽的胞內定位。在這點上，治療性有關多肽是在胞內有活性的。內化肽自身能夠通過例如胞轉作用以較高比率穿過細胞膜。任選，內化肽以可切割方式與有關多肽融合例如形成融合蛋白。相對於單獨的活化多肽，所獲嵌合肽以較高比率被運輸入細胞，從而提供一種促進其導入它所作用細胞的方法，例如，促進有關多肽的局部施用。除蛋白和模擬肽之外，一種藥物試劑可以與促進輸送到一種物質的化合物偶聯(例如，受體介導的化合物比如維生素B12)。在一個實施方案中，內化肽起源於果蠅觸角足蛋白，或者其類似物。相似-蛋白觸角足的60胺基酸長的同源結構域已經證明能夠移位穿過生物膜，可以促進與其偶聯的異源多肽的移位。參見例如，Derossi等人(1994)JBiolChem269:10444-10450;和Perez等人(1992)JCellSci102:717-722。已經證明這個蛋白小至16胺基酸的片段足以驅動內化作用。參見Derossi等人(1996)JBiolChem271:18188-18193。本發明還提供此處所述的多肽(小t抗原或者VDAC)或者模擬肽序列，以及觸角足蛋白(或者其同系物)的至少一部分，相對有關多肽或者模擬肽，足以在統計意義上顯著的促進嵌合蛋白的跨膜運輸。這種多肽或者其模擬肽可以用於幫助有效和特異殺傷癌細胞的相關方法。內化肽的另一個實例是HIV反式激活因子(TAT)蛋白。這個蛋白被分成四個結構域(Kuppuswamy等人(1989)Nucl.AcidsRes.17:3551-3561)。純化的TAT蛋白可以被在組織培養中的細胞攝取(Frankel和Pabo,(1989)Cell55:1189-1193)，例如對應於TAT殘基37-62的片段的肽在體外被細胞快速攝取(Green和Loewenstein,(1989)Cell55:1179-1188)。高度鹼性的區域調節內化作用和內化部分靶向到核(Ruben等人，(1989)J.Virol.63:1-8)。另一種示範性跨細胞的多肽可以被產生以包括黃峰毒素的足夠部分(T.Higashijima等人，(1990)J.Biol.Chem.265:14176)以促進嵌合蛋白的跨膜運輸。但不希望被任何具體理論束縛，應該注意到通過將多肽偶聯或者結合到可運輸的肽，所述可運輸的肽能夠通過受體介導的胞轉作用穿過膜，親水性多肽也可以生理地運輸穿過隔膜。可以使用，例如，組蛋白，胰島素，轉鐵蛋白，鹼性白蛋白，催乳激素和胰島素樣生長因子I(IGF-I)，胰島素樣生長因子II(IGF-II)或者其他生長因子的全部或者部分，來產生這種類型的合適的內化肽。例如，已經發現一種胰島素片段，顯示對毛細管細胞上胰島素受體的親合力，其降低血糖效率比胰島素低，通過受體介導的胞轉作用能夠跨膜轉運，因此可以作為有關跨細胞肽和模擬肽的內化肽。優選的生長因子-衍生的內化肽包括EGF(表皮生長因子)-衍生肽例如CMHIESLDSYTC禾BCMYIEALDKYAC;TGF-beta(轉化生長因子beta)衍生肽；衍生自PDGF(血小板衍生生長因子)或者PDGF-2的肽；衍生自IGF-I(胰島素樣生長因子)或者IGF-II的肽；和FGF(成纖維細胞生長因子)-衍生肽。另一類移位/內化肽顯示pH-依賴的膜結合。對於在酸性pH假定具有螺旋構象的內化肽，內化肽獲得兩親性的性質，例如，它具有疏水性和親水性界面。更具體地，在大約5.0-5.5的pH範圍內，內化肽形成促進基團插入靶標膜的alpha—螺旋、兩親性結構。在例如細胞內體內的低pH環境中，可以發現誘導alpha-螺旋的酸性pH。通過內吞機理攝取，這種內化肽可用於促進有關多肽和模擬肽從內體隔室轉運到細胞質。優選的pH依賴的膜結合內化肽包括高比例的螺旋形成殘基，比如穀氨酸，甲硫氨酸，丙氨酸和亮氨酸。此外，優選的內化肽序列包括pKa在pH5-7範圍內的離子化殘基，這樣的話在pH5時肽內存在充分不帶電荷的膜結合結構域以便插入靶細胞膜。在這方面特別優選的pH依賴的膜結合內化肽是aal-aa2-aa3-EAALA(EALA)4-EALEALAA-醯胺，這代表Subbarao等人的肽序列的修飾(Biochemistry26:2964，1987)。在這些肽序列中，第一個胺基酸殘基(aal)優選的是獨特的殘基，比如半胱氨酸或者賴氨酸，促進內化肽與靶蛋白結合物的化學結合。可以選擇胺基酸殘基2-3來調節內化肽對不同膜的親合力。例如，如果殘基2和3都是賴氨酸或者精氨酸，內化肽將具有結合具有負表面電荷的膜或者脂類的能力。如果殘基2-3是中性胺基酸，內化肽將插入中性膜。其他優選的內化肽包括apo-脂蛋白A-I和B的肽；肽毒素，比如蜂毒素，bombolittin，delta溶血素和豹鰨劑(paradaxin);抗生素肽，比如丙甲菌素；肽類激素，比如降鈣素，促腎上腺皮質激素釋放因子，beta內啡肽，胰高血糖素，甲狀旁腺激素，胰多肽；和對應於很多分泌蛋白信號序列的肽。此外，示範性的內化肽可以通過添加取代基進行修飾，所述取代基增強內化肽在酸性pH下的alpha-螺旋特性。另一類適合用於本發明的內化肽包括在生理pH下"隱藏"的疏水性結構域，但在耙細胞內體的低pH環境下暴露。當pH誘導疏水性結構域打開和暴露時，該部分結合脂質雙分子層並影響共價連接的多肽移位進細胞質。這種內化肽在例如假單胞菌屬外毒素A，網格蛋白，或者白喉毒素中測序鑑定後可以構建模型。孔形成蛋白或者肽也可作為此處的內化肽。孔形成蛋白或者肽可以獲自或者衍生自，例如，C9補體蛋白，溶胞T細胞分子或者NK細胞分子。這些部分在膜上能夠形成環狀結構，從而允許結合的多肽轉運過膜進入細胞內部。僅內化肽的膜插入就足以使有關多肽或者模擬肽移位穿過細胞膜。但是，移位可以通過將內化肽附著在胞內酶的底物上來改進(即，"附屬肽")。優選的附屬肽附著於內化肽的一部分，所述內化肽從細胞膜突出到胞質表面。附屬肽可以有利地附著於移位/內化部分或者錨肽的末端。本發明的附屬部分可以包含一種或多種胺基酸殘基。在一個實施方案中，附屬部分可以提供細胞磷酸化作用的底物(例如，附屬肽可以包含酪氨酸殘基)。在這方面示範性的附屬部分是N-十四醯轉移酶的肽底物，例如GNAAAARR(Eubanks等人，在Peptides.ChemistryandBiology,GarlandMarshall(ed.)，ESCOM，Leiden,1988,pp.566-69)。在這些構建體中，內化肽將結合於附屬肽的C端，因為N端甘氨酸對附屬部分的活性非常關健。這個雜交肽，在C端附著到E2肽或者模擬肽後，被N-十四烷基化的，進一步錨定到靶細胞膜，例如，它用於增加肽在細胞膜上的局部濃度。為進一步舉例說明附屬肽的使用，可磷酸化的附屬肽首先共價附著於內化肽的C端，然後與有關多肽或者模擬肽整合成融合蛋白。融合蛋白的肽組件插入靶細胞質膜，於是附屬肽移位穿過膜突進靶細胞的細胞質。在質膜的胞質面，在中性pH中附屬肽被細胞激酶磷酸化。一旦磷酸化，附屬肽不可逆將融合蛋白錨定到膜上。靶向到細胞表面膜可以促進多肽移位進細胞質。合適的附屬肽包括作為激酶底物的肽，具有單個正電荷的肽，和包含被膜結合糖基轉移酶糖基化的序列的肽。被膜結合糖基轉移酶糖基化的附屬肽可以包括序列x-NLT-x，其中"x"可以是例如另一個肽，一種胺基酸，偶合劑或者疏水性分子。當這種疏水性三肽與微粒體小囊泡孵育時，它穿過胞囊膜，在腔面被糖基化，由於其親水性被捕獲在小囊泡內(C.Hirschbergetah,(1987)Ann.RRev.BBiochem.556:63-87)。包含序列x-NLT-x的附屬肽因此將促進靶細胞保留相應多肽。在本發明這方面的另一個實施方案中，附屬肽可用於促進多肽或者模擬肽與靶細胞的相互作用。在這方面示範性附屬肽包括衍生自包含序列"RGD"的細胞粘連蛋白的肽，或者衍生自包含序列CDPGYIGSRC的層粘連蛋白的肽。胞外基質糖蛋白，比如纖粘連蛋白和層粘連蛋白，通過受體介導的步驟結合細胞表面。三肽序列，RGD，已經確定是結合細胞表面受體必需的。這個序列存在於纖粘連蛋白，玻連蛋白，補體C3bi，von—Willebrand因子，EGF受體，轉化生長因子beta，膠原類型I，大腸桿菌的lambda受體，纖維蛋白原和Sindbis衣殼蛋白(E.Ruoslahti，Ann.Rev.Biochem.557:375-413，1988)。識別RGD序列的細胞表面受體已經集合成稱為"整合素"的相關蛋白的超家族。"RGD肽"與細胞表面整合素的結合將促進多肽的細胞表面滯留，最終是多肽的移位。如上所述，通過化學交聯或者融合蛋白形式，內化肽和附屬肽可以各自單獨的被添加到多肽或者模擬肽。在融合蛋白的例子中，無結構的多肽接頭可以包括在每個肽部分之間。通常，內化肽足以用於多肽的直接輸出。但是，當提供附屬肽例如RGD序列時，可能需要包括分泌信號序列以便從其宿主細胞直接輸出融合蛋白。在優選的實施方案中，分泌信號序列位於N末端遠端，並且(任選)側翼是分泌信號和融合蛋白其他部分的蛋白水解作用位點。在一個示範性的實施方案中，多肽或者模擬肽被設計包括整合素結合RGD肽/SV40核定位信號(參見例如HartSL等人，1994;J.Biol.Chem.269:12468-12474)，例如被Ndel-EcoRl片段中的核苷酸序列編碼:catatggutgactgccgtggcgatatgttcggttgcggtgctcctccaaaaaagaagagaaaggtagctggattc,其編碼RGD/SV40核苷酸序列MGGCRGDMFGCGAPPKKKRKVAGF。在另一個實施方案中，蛋白可1以與HIV-1tat(1-72)多肽工程化，例如，如Ndel-EcoRl片段所提供catatggagccagtagatcctagactagagccctggaagcatccaggaagtcagcctaaaactgcttgtaccaattgctattgtaaaaagtgttgctttcattgccaagtgtttcataacaaaagcccttggcatctcctatggcaggaagaagcgagacagcgacgaagacctcctcaaggcagtcagactcatcaagtttctctaagtaagcaaggattc，其編碼HIV-1tat(1-72)肽序歹ij:MEPVDPRLEPWKHPGSQPKTACTNCYCKKCCFHCQVCFITKALGISYGRKKRRQRRRPPQGSQTHQVSLSKQ。在另一個實施方案中，融合蛋白包括HSV-IVP22多肽(ElliottG.,O'HareP(1997)Cell,88:223-233)，由Ndel-EcoRl片段提供。在另一個實施方案中，融合蛋白包括來自例如核苷酸序列(Ndel-EcoRl片段)的VP22蛋白的C端結構域。在某些例子中，需要包括核定位信號作為有關多肽的一部分。在產生包括多肽的融合多肽時，可能需要包括無結構的接頭以便確保不同肽結構域的正確摺疊。本領域已知多種合成和天然的接頭可以用於本發明，包括(Gly3Ser)4接頭。治療方法在某些實施方案中，本發明提供在個體中治療或者預防癌症的方法。術語"癌症"，"腫瘤"，和"瘤形成"在此處可以互換使用。此處使用的癌症(腫瘤或者腫瘤形成)的特點在於一種或者多種下列性質在環境中細胞生長不受正常生化和生理影響調節；退行發育(例如，缺少正常調節的細胞分化)；和在有些情況下，轉移。癌症疾病包括，例如，肛門癌，膀胱癌，乳腺癌，宮頸癌，慢性淋巴細胞性白血病，慢性髓性白血病，子宮內膜癌，毛細胞性白血病，頭和頸癌，肺(小細胞)癌，多發性骨髓瘤，非hodgkin's淋巴瘤，濾泡性淋巴瘤，卵巢癌，腦腫瘤，結腸直腸癌，肝細胞癌，卡波西肉瘤，肺(非小細胞癌)，黑素瘤，胰腺癌，前列腺癌，腎細胞癌，和軟組織肉瘤。其他的癌症病症可以參見，例如，Isselbacher等人(1994)Harrison'sPrinciplesofInternalMedicine1814-1877，在此引入作為參考。通常，如上所述的可用此處所述方法治療的癌症顯示不受控制的VDAC表達。在一個實施方案中，上述癌症包含Ras信號途徑的突變，導致Ras信號活性升高。例如，突變可以是Ras基因上的組成性活化突變，比如RasV12。在其他實施方案中，癌症可以包含PP2A上喪失功能的突變，禾口/或MEKl禾口/或ERKl的活化突變。在某些其他實施方案中，癌症的特點在於細胞表達SV40小t癌蛋白，或者與表達ST和/或致癌HRAS的細胞表型相似。在某些優選的實施方案中，細胞表達基本上野生型水平的Rb(例如，至少大約50%，60%，70%，80%，90%，100%,110%，120%,130%，或者150%等等)。在一個實施方案中，本發明涉及一種在個體中治療或者預防癌症的方法，包括給藥個體治療有效量的化合物，所述化合物對工程化人致瘤細胞，或者特定基因型(或者特異改變的基因型)的癌細胞顯示選擇毒性。在某些實施方案中，癌症的特點在於包括活化的RAS途徑的細胞。在某些其他實施方案中，癌症的特點在於細胞表達SV40小t癌蛋白，或者顯示sT和/或致癌RAS的靶標的調節。在相關實施方案中，本發明預期本發明的方法與其他抗腫瘤療法，例如抗實體瘤和控制轉移建立的傳統化療方法，聯合應用。本發明化合物的給藥可以在化療期間或者化療之後進行。這種試劑通常與可接受的載體配製成製劑，可以靜脈內、口服、頰的、胃腸外、通過吸入噴霧、通過局部施用或者經皮膚給藥。試劑還可以通過局部給藥方式給藥。優選的，一種或多種其他試劑與抗癌症化療劑(例如，本發明的化合物)聯合給藥，以累加或者協同方式抑制癌細胞。大量的傳統化合物已經顯示具有抗腫瘤活性。這些化合物已經在化療中用作藥物製劑縮小實體瘤，預防轉移和進一步生長，或者降低在白血病或者骨髓惡性腫瘤中惡性細胞的數目。儘管化療在治療各種類型的惡性腫瘤中有效，許多抗腫瘤化合物誘導不良副作用。多數情況下，當兩種或者多種不同治療方法結合時，治療可以協同作用，可以降低每種療法的劑量，從而降低每種化合物在較高劑量時的不良副作用。在其他情況下，對一種治療無反應的惡性腫瘤可能對兩種或更多種不同治療的療法組合有反應。因此，本發明的化合物和藥物組合物可以與傳統抗腫瘤化合物聯合給藥。傳統的抗腫瘤化合物包括，僅僅為舉例說明氨魯米特，安吖啶，阿那曲唑，天冬醯胺酶，卡介苗，比卡魯胺，爭光黴素，布舍瑞林，白消安，喜樹鹼，卡培他濱，卡鉑，亞硝脲氮芥，苯丁酸氮芥，順鉑，2-氯脫氧腺苷，氯膦酸鹽，秋水仙鹼，環磷醯胺，環丙氯地孕酮，阿糖胞苷，達卡巴嗪，放線菌素D,柔紅黴素，雙烯雌酚，己烯雌酚，紫杉萜，阿黴素，表柔比星，雌二醇，雌氮芥，鬼臼乙叉甙，依西美坦，非格司亭，氟達拉濱，氟氫可的松，氟尿嘧啶，氟烴甲基睪丸素，氟他米特，吉西他濱，染料木素，戈舍瑞林，羥基脲，伊達比星，異磷醯胺，伊馬替尼，幹擾素，依立替康，ironotecan，來曲唑，甲醯四氫葉酸，亮丙瑞林，左旋四咪唑，環己亞硝脲，氮芥，甲羥孕酮，甲地孕酮，左旋苯丙氨酸氮芥，巰基嘌呤，美司鈉，氨甲蝶呤，絲裂黴素，米託坦，米託蒽醌，尼魯米特，諾考達唑，奧曲肽，奧沙利鉑，紫杉醇，帕屈膦酸二鈉，噴司他丁，普卡黴素，卟菲爾鈉，甲基苄肼，雷替曲塞，riruximab，鏈脲黴素，蘇拉明，他莫昔芬，替莫唑胺，替尼泊甙，睪丸激素，硫鳥嘌吟，塞替派，二氯環戊二烯鈦，託泊替康，曲妥單抗，維甲酸，長春花鹼，長春新鹼，長春地辛，和長春瑞濱。在其他實施方案中，本發明的化合物和藥物組合物可以與傳統抗腫瘤化合物聯合給藥，所述傳統抗腫瘤化合物選自表皮生長因子受體拮抗劑，五硫化二砷，阿黴素，順鉑，卡鉑，西咪替丁，洋紅黴素，氮芥氫氯化物，五甲三聚氰醯胺，塞替派，替尼泊甙，環磷醯胺，苯丁酸氮芥，去甲氧基竹紅菌甲素A，左旋丙氨酸氮芥，異磷醯胺，曲磷胺，曲奧舒凡，足葉草毒素或者足葉草毒素衍生物，鬼臼乙叉甙磷酸鹽，替尼泊甙，鬼臼乙叉甙，異長春鹼，環氧長春鹼，長春地辛，9-氨基喜樹鹼，camptoirinotecan，克立那託，甲地孕酮，甲氨蝶呤，絲裂黴素C，ecteinascidin743，白消安，亞硝脲氮芥(BCNU)，環己亞硝脲(CCNU)，洛弗斯特丁，l-甲基-4-苯基吡啶鎗離子，司莫司汀，十字孢鹼，鏈脲黴素，酞菁，達卡巴嗪，氨基蝶呤，氨甲蝶呤，曲美沙特，硫鳥嘌呤，巰基嘌呤，氟達拉濱，pentastatin,克拉曲賓，阿糖胞苷(araC)，泊非黴素，5-氟尿嘧啶，6-巰基嘌呤，阿黴素氫氯化物，甲醯四氫葉酸，黴酚酸，柔紅黴素，去鐵敏，5-氟脫氧尿苷，去氧氟尿苷，雷替曲塞，伊達比星，表柔比星，吡柔比星，佐柔比星，米託蒽醌，博來黴素硫酸鹽，放線菌素D，番紅精，saframycins，quinocarcins，discodermolides，長春新鹼，長春花鹼，長春瑞濱酒石酸鹽，vertoporfm，紫杉醇，他莫昔芬，雷洛昔芬，噻唑呋林，硫鳥嘌呤，病毒唑，EICAR，雌氮芥，雌氮芥磷酸鈉，氟他米特，比卡魯胺，布舍瑞林，亮丙瑞林，蝶啶，烯二炔，左旋四咪唑，aflacon，幹擾素，白介素，阿地白介素，非格司亭，沙莫司亭，利妥昔單抗，卡介苗，維甲酸，betamethosone,鹽酸吉西他濱，異搏定，VP-16，六甲密胺，毒胡蘿蔔內酉旨(thapsigargin)，奧沙利鉑，異丙鉑，四鉑，洛鉑，DCP,PLD-147，JM118，JM216，JM335，沙鉑，紫杉萜，脫氧紫杉醇，TL-139，5'-降-脫水長春鹼(以下5'-降-長春花鹼)，喜樹鹼，依立替康(Camptosar，CPT-ll)，託泊替康(Hycamptin)，BAY38-3441,9-硝基喜樹鹼(Orethecin,盧比替康)，依沙替康(DX-8951)，勒託替康(GI-147211C)，gimatecan，homocamptothecinsdiflomotecan(BN-80915)和9-氨基喜樹鹼(IDEC-13')，SN-38,ST1481,karanitecin(BNP1350)，口引哚咔唑(indolocarbazole)(例如，NB-506),原小櫱鹼，茚託利辛，idenoisoquinolones,苯-吩嗪或者NB-506。在另一個相關實施方案中，本發明預期將本發明實施的方法與其他抗腫瘤療法例如照射聯用。此處使用的術語"照射"是用於包括通過光子、中子、電子或者其他類型的電離輻射治療贅生性細胞或者相關細胞的任意療法。這种放療包括，但不限於，X射線，伽馬照射，或者重離子顆粒，比如alpha或者beta粒子。此外，照射可以是放射性的。在患者中照射贅生性細胞的方法是本領域公知的，包括例如，外粒子束療法和近距放射療法。檢測癌症(腫瘤或者腫瘤形成)是否已經被治癒的方法是本領域技術人員公知的，包括，例如，腫瘤細胞數目減少(例如，細胞增殖下降或者腫瘤大小減小)。應該意識到本發明的治療可以是耐久和完全反應，或者可以包括部分或者短暫的臨床反應。參見實例，Isselbacher等人(1996)Harrison'sPrinciplesofInternalMedicine13ed.,1814-1882，在此引入作為參考。檢測腫瘤細胞的致敏性或者增加的死亡的試驗是本領域公知的，包括，例如，評定細胞活力的標準劑量反應試驗；DNA提取物的瓊脂糖凝膠電泳或者檢測表示細胞死亡特徵的DNA斷裂的流式細胞計量術；檢測參與凋亡的多肽活性的試驗；和檢測細胞死亡形態特徵的試驗。關於這些試驗的細節在此處其他地方描述。其他試驗包括，染色質試驗(例如，計數濃縮的核染色質的頻率)或者例如在Lowe等人(1993)Cell74:957-697中描述的抗藥性試驗，在此引入作為參考。還可參見美國專利號5,821,072，也在此引入作為參考。藥物組合物預期的治療劑可以進行評價以便檢測它們包含在藥物組合物中的適應性。這種試劑一個通用的檢測方法是療效指數，這是治療劑量對有毒劑量的比率。治療劑量(功效)和有毒劑量的閾值可以調整為適當的(例如，治療反應或者最小化毒性反應的必需量)。例如，治療劑量可以是試劑治療有效量的(相對於治療一種或多種病症)，有毒劑量可以是引起死亡的劑量(例如，LD50)或者在一定比例受治療者中引起不希望有的效果。優選的，試劑的療效指數至少是2，更優選的至少是5，甚至更優選的至少是10。評價治療劑還可以包括檢測試劑的藥物動力學，當以不同製劑和/或通過不同途徑給藥時檢測其生物利用率和/或吸收。本發明的化合物，例如erastin或者微管蛋白抑制劑，可以給需要它的個體施用。在某些實施方案中，個體是哺乳動物比如人，或者非人哺乳動物。當給藥個體時，本發明的化合物可以作為藥物組合物給藥，所述藥物組合物包含，例如，本發明的化合物和藥學可接受的載體。藥學可接受的載體是本領域公知的，包括，例如，水溶液比如水或者生理緩衝鹽水或者其他溶劑，或者媒介例如乙二醇，甘油，油劑比如橄欖油或者可注射的有機酯。在優選的實施方案中，當這種藥物組合物用於人施用時，水溶液是無熱原的，或者基本上無熱原的。可以選擇賦形劑，例如，以延緩試劑的釋放或者選擇性靶向一種或多種細胞，組織或者器官。藥學可接受的載體可以包含生理可接受的試劑，所述試劑用作，例如，穩定或者促進化合物例如erastin或者微管蛋白抑制劑的吸收。這種生理可接受的試劑包括，例如，糖類，比如葡萄糖，蔗糖或者右旋糖酐，抗氧化劑，比如抗壞血酸或者穀胱甘肽，螯合劑，低分子量蛋白或者其他穩定劑或者賦形劑。藥學可接受的載體的選擇，包括生理可接受的試劑，依賴於例如組合物的給藥途徑。藥物組合物(製劑)還可以是脂質體或者其他聚合物基質，這可以整合入例如本發明的化合物。脂質體，例如，由磷脂或者其他脂類組成，是無毒的的，生理可接受的和可代謝的載體，可以相對容易的製造和給藥。包含本發明化合物的藥物組合物(製劑)可以通過多種給藥途徑給藥，包括，例如，口服；肌內；靜脈內；肛門；陰道；胃腸外；鼻；腹膜內；皮下；和局部。組合物可以通過注射或者通過溫育給藥。在某些實施方案中，本發明的化合物(例如，erastin)可以單獨給藥或者與另一種抗腫瘤治療劑聯合給藥。此處使用的短語"聯合給藥"是指聯用兩種或更多不同治療化合物的任意給藥形式，這樣的話在先前給藥的治療化合物在體內仍然有效時給藥第二種化合物(例如，兩種化合物同時在患者體內起作用，這可以包括兩種化合物的協同效應)。例如，不同的治療化合物可以在相同製劑或者在分開的製劑中給藥，或者同時的或者依次的。因此，接受這種治療的個體可以受益於不同治療化合物的協同效應。預期本發明的化合物(例如erastin)以治療有效量(劑量)給藥患者(例如哺乳動物，優選的是人)。"治療有效量"是指化合物的濃度足以得到所需治療效果(例如，病症的治癒，贅生性細胞的死亡)。應該理解化合物的有效量會根據患者的重量，'性別，年齡和治療史而變化。其他影響有效量的因素可能包括，但不限於，患者病症的嚴重程度,接受治療的疾病，化合物的穩定性，和，如果需要，與本發明的化合物一起給藥的另一種治療劑。通常，對人類患者有效量的範圍從大約0.001mg/kg體重到大約50mg/kg體重。通過多次試劑給藥可以輸送更多的總劑量。檢測功效和劑量的方法是本領域技術人員已知的。參見例如，Isselbacher等人(1996)Harrison'sPrinciplesofInternalMedicine13ed.,1814-1882，在此引入作為參考。實施例現在概述本發明，參考下列實施例更容易理解本發明，包括下列實施例僅僅為了舉例說明本發明的某些方面和實施方式，不是用於限制本發明。實施例1鑑別在特定的癌症相關等位基因存在條件下具有增強效力或者活性的化合物此處描述的工作是用於鑑定在hTERT，LT，ST，E6,E7或者RASV12存在條件下具有增強的效力或者活性的化合物。儘管此處描述的工作利用hTERT，LT，ST，E6，E7和RASV12作為轉化基因，將來的研究可以利用多種癌癥結合等位基因，利用這種方法以便確定參與許多癌基因和腫瘤抑制物的信號網絡。具有這些遺傳元件的工程化細胞系用於篩選23,550種化合物，包括來自組合文庫的20,000種化合物，來自國家的癌症學會多樣性收集物的1,990種化合物，和1，540種有生物學活性的已知化合物，所述已知化合物是申請人選擇和購買並製成可供篩選的集合。初篩檢測(一式四份)測定用每種化合物治療致瘤BJ-TERT/LT/ST/RASV12工程化致瘤細胞的效果，所述化合物在g/mL濃度作用48小時，對應於分子量400的化合物10uM，這大約是文庫的中值分子量。使用染料鈣黃綠素乙醯甲酯(鈣黃綠素AM)檢測細胞活力(Wang等人，1993，Hum.Immunol.337,264-270)，這是一種能夠自由擴散進細胞的非螢光化合物。在活細胞中，,丐黃綠素AM被胞內酯酶切割，形成陰離子螢光衍生物鈣黃綠素，它不能擴散出活細胞。因此，當與鈣黃綠素AM孵育時，活細胞顯示綠色螢光，而死細胞不顯示。對於在BJ-TERT/LT/ST/RASV"細胞中顯示50%或者更強抑制染料鈣黃綠素AM染色活力的化合物，然後在BJ和BJ-TERT/LT/ST/RASV12細胞中所述化合物進行兩倍系列稀釋以鑑定顯示合成致死性的化合物，這種化合物在致瘤細胞中是致死性的，但在同源原代細胞中不是。計算各化合物在各細胞系中的IC5o值(抑制50%的鈣黃綠素AM信號所需濃度)(表1)。結果鑑定出九種化合物(圖2)，這些化合物在BJ-TERT/LT/ST/RASV12致瘤細胞中比BJ原代細胞活性至少高4倍(在BJ原代細胞中至少需要4倍高的濃度以便獲得相同的鈣黃綠素AM信號的50%抑制)。以下是這九種化合物的更詳細的分析。這些化合物中的三種(阿黴素，柔紅黴素和米託蒽醌)現在臨床用作抗癌藥物，一種(喜樹鹼)是臨床使用抗癌藥(託泊替康和依立替康)的天然產物類似物，一種(棘黴素)最近在進行n期臨床試驗。所有這九種化合物然後在各組工程化細胞中進行多劑量復孔檢測，以證實觀察到的選擇性也存在於多種獨立衍生的細胞系中(圖1和表1)。申請人開發了一種檢測化合物在兩種不同細胞系中IC5o(抑制50yo活力信號所需的濃度)改變的選擇性計量法。為計算兩個細胞系間的選擇性值，化合物在一種細胞系中的IC5Q除以相同化合物在第二種細胞系中的IC50。因此，具有選擇性值4的化合物在一種細胞系中使用的濃度比第二種細胞系高4倍。計算各化合物的"腫瘤選擇性值"，通過用化合物在親本原代BJ細胞中的IC5o值除以化合物在工程化BJ-TERT/LT/ST/RASV12細胞中的IC5o值，工程化BJ-TERT/LT/ST/RASV"細胞包含產生致瘤細胞所需的全部四種遺傳元件(表1)。這些工程化致瘤細胞利用起主要作用的病,癌蛋白比如LT，ST，E6和E7。這些病毒蛋白可能在特定形式的癌症中參與細胞轉化，所述特定形式的癌症即猴病毒40誘導的惡性間皮瘤(Testa和Giordano,2001，SeminCancerBiol77，31-8)和人乳頭狀瘤病毒誘導的宮頸癌(Bosch等人，2002，JClinPathol55，244-65)，並且這些病毒蛋白已經用於破壞p53和pRB的功能以在體外和體內轉化細胞(Elenbaas等人，2001，GenesDev15,50-65;Jorcyk等人，1998,Prostate34，10-22;Perez-Stable等人，1997,CancerRes57，卯0-6;Rich等人,2001,CancerRes61,3556-60;Sandmoller等人，1995,CellGrowthDiffer6,97-103)。申請人:利用兩種不同的方法滅活細胞蛋白，(它們檢測LT和基於E6/E7滅活pRB和p53的效果)以便控制對特定病毒蛋白觀察到的特應性效果。這些化合物的選擇性還在表達p53和pRB主要負抑制劑的細胞系中確認，所述p53和pRB不是衍生自病毒元件。這個細胞系表達(i)破壞內源p53四聚體化的p53截短形式(p53DD)，(ii)抗pl6皿"和pl5INK4B(CDK4的主要負調節物)抑制的CDK4^e突變體和(iii)細胞周期蛋白Dl。在這些細胞中在多種濃度範圍內檢測九種基因型選擇性化合物的效果，所述細胞是指BJ-TERT/p53DD/CDK4R24C/Dl/ST/RAS^2細胞(表1)。結果顯示在這些細胞中檢測時，所有的化合物都存在活性總體適度減少。但是，這些細胞系中利用非病毒蛋白質分析的總體結果沒有改變(表l)。實施例2測定化合物選擇性的遺傳基礎申請人設法檢測了每種化合物選擇性的遺傳基礎。簡而言之，對每種化合物，嘗試確定導致細胞對化合物敏感的基因或者基因的組合(表l)。結果顯示這九種化合物可以分為3組，即(i)顯示無簡單的遺傳選擇性的化合物，(ii)對帶有TERT和非活性RB的細胞顯示選擇性的化合物，和(iii)為顯示致死性需要致癌RAS和ST的存在的化合物。組(i)中的化合物，桑吉瓦黴素，波凡黴素，NSC146109和棘黴素，致瘤細胞選擇性沒有明確的遺傳基礎。，例如，當各遺傳元件導入時棘黴素活性有些升高(圖3a)。申請人己經注意到當這些遺傳元件均導入時，細胞增殖率增加。因此，很可能組(i)中的化合物只對快速分裂的細胞有選擇性。支持這種解釋的事實是，所有這些化合物據報導通過抑制DNA或者蛋白質合成起作用，其在快速分裂的細胞中需求更大。例如，據報導棘黴素的作用是作為DNA雙插入劑(VanDyke禾卩Dervan，1984,Science225,1122-7;Waring禾口Wakelin，1974，Nature252,653-7)，波凡黴素作為蛋白質合成抑制劑(Zalacain等人，1982，FEBSLett148,95-7)，桑吉瓦黴素是核苷酸類似物(Rao，1968,JMedChem11，939-41)，NSC146109在結構上類似於DNA插入劑(圖2)。應當注意到已經報導桑吉瓦黴素作為PKC抑制劑(LoomisandBell,1988,JBiolChem263，1682-92)，儘管這種活性似乎大不可能是與這點相關的，因為其他PKC抑制劑在這個系統中顯示無選擇性。申請人能鑑定出只是在快速分裂的細胞中活性更高的化合物，例如組(i)中的化合物，因為它們沒有顯示明確的選擇性遺傳基礎。對這些化合物沒有進行進一步的工作。因此，他們可以集中於顯示選擇性的組(ii)和(iii)中化合物的機理研究。組(ii)中的化合物，米託蒽醌，阿黴素和柔紅黴素，是拓撲異構酶II毒素，它們結合拓撲異構酶II和DNA並預防拓撲異構酶II引起的雙鏈DNA斷裂的重新連接。這些化合物和蒽環類抗生素，已經有報導在一些細胞類型中誘導活性氧的形成(ROS)(Laurent和Jaffrezou，2001，Blood98，913-24;Muller等人，1998,IntJMolMed14914;Richard等人，2002，LeukRes26,927-31)，儘管申請人在這三種化合物存在的條件下在這些工程化細胞中沒有觀察到ROS的形成。他們發現當hTERT被導入並且當RB通過導入LT或者HPVE7被滅活時，這些化合物活力更高(在更低濃度下也有活性)。在細胞中，E7在E6之後導入，所以這些化合物在帶有E7的細胞中增加的效力可能還依賴於E6的存在，即使E6自身不導致這些化合物效力的增加。hTERT的導入和RB的失活引起引起拓撲異構酶IIa表達的增加(圖5a)，拓撲異構酶lla表達的只是非常有限的增^。致癌RAS的導入引起拓撲異構酶IIa表達的進一步增加，儘管申請人沒有觀察到在致癌RAS存在的情況下對於拓撲異構酶Ila毒素進一步的致敏化。組(iii)的化合物是喜樹鹼(CPT)和來自組合文庫的新化合物，申請人:已經將其命名為erastin，因為它是表達RAS和ST的細胞的去除劑(蘭radicatorofRASandgl-expressingcells)(圖2)。有效的CPT誘導和erastin誘導的細胞死亡需要ST和RASV12的存在(圖3、4和表1)。儘管CPT和erastin具有相同的選擇性遺傳基礎，它們的作用機理不同。CPT在缺乏RB功能(通過E7的表達)的細胞中是部分活化的，而erastin不是，並且CPT需要兩天引起BJ-TERT/LT/ST/RASV12中死亡，而erastin在18小時內是100%有效的(圖3禾n4)。磷酸酶抑制劑岡田酸能夠使在其他情況下是具有抗性的BJ原代細胞對CPT敏化(圖5E)，可能因為岡田酸上調TOPI(圖5F)。岡田酸不會導致BJ或者BJ-TERT細胞對erastin敏感，與CPT和erastin通過不同的機理作用模型一致。此外，申請人發現致死的化合物足葉草毒素，一種微管蛋白抑制劑，不使BJ或者BJ-TERT細胞對CPT敏感，證實岡田酸導致的BJ細胞對CPT的致敏性是特異的，不是兩種具有累加但功能上不相干的效果的微弱細胞死亡刺激的結果。為理解表達RASV^和ST的細胞對CPT敏感性增加的分子基礎，申請人:檢測了工程化細胞中拓撲異構酶I的表達水平，拓撲異構酶I是公認的CPT耙標(Andoh等人,1987,ProcNatlAcadSdUSA84,5565-9;Bjornsti等人，1989，CancerRes49，6318-23;Champoux,2000，AnnNYAcadSd922,56-64;D'Arpa等人，1990,CancerRes50，6919-24;Eng等人，1988，MolPharmacol34，755-60;Hsiang等人，1989，CancerRes49，5077-82;Hsiang和Liu，1988，CancerRes48，1722-6;Liu等人，2000，AnnNYAcadSd922，1-10;Madden禾口Champoux，1992，CancerRes52，525-32;Tsao等人，1993,CancerRes53，5908-14)。他們發現表達RASV12和ST的細胞上調TOPI(圖5B)。因為CPT在其他細胞類型中作用的公認作用機理涉及功能的獲得，即以TOPl依賴的方式導入雙鏈DNA斷裂(Liu等人，2000,AnnNYAcadSci922,1-10)，TOPI的上調可以解釋表達RASvl2fnST細胞對CPT敏感性的增加。為支持這些解釋，他們發現在BJ-TERT/LT/ST/RASV"細胞中用小幹擾RNA(siRNA)導致的TOPI遺傳失活引起對CPT的部分抗性(圖5C，D)。此外申請人檢測了其他erastin類似物在腫瘤細胞相對正常細胞中的活性和選擇性。另一個類似化合物被確定為有活性和選擇性，但活性比erastin低。這個化合物被命名為erastinB(參見圖8)。BJELR細胞是BJ-TERT/LT/ST/RAS^2細胞，BJEH細胞是BJ-TERT細胞。在BJELR和BJEH細胞中進一步的化合物檢測如下實施例3細胞死亡的表徵鑑定申請人設法鑑定了在致瘤BJ-TERT/LT/ST/RAS^2細胞中CPT和erastin誘導的細胞死亡類型。在其他文獻中，已經發現CPT誘導凋亡性細胞死亡(Traganos等人，1996,AnnNYAcadSci803,101-10)，其特點在於核形態學的改變包括固縮，核破裂和/或染色質的著邊(Majno和Joris,1995，AmJPathol146,3-15)。為檢測erastin或者CPT在其系統中是否誘導凋亡，申請人使用螢光顯微術監控接受CPT和erastin處理的致瘤細胞的核形態學。儘管在CPT處理的細胞中可顯見核破裂和染色質的著邊，在erastin處理的細胞中未見這種形態學改變(圖7A)。因為核形態變異是凋亡細胞所需的，申請人得出結論erastin誘導的細胞死亡是非細胞凋亡的。進一步支持該結論的是觀察到CPT，而不是erastin，誘導DNA斷裂(形成DNA條帶)，泛caspase抑制劑(50nMBoc-Asp(Ome)-氟甲基酮，Sigma#B2682(Chan等人，2001，Neuroreport12，541-545))，部分阻斷CPT而不是erastin誘導的細胞死亡，並且CPT而不是erastin引起AnnexinV染色的增加(圖7B)和切割、活化的caspase3的出現(圖7C)。此外，在erastin處理的腫瘤細胞中核保持完整(圖9)。Erastin在表達ST和RASV12細胞中誘導非凋亡細胞死亡的能力是選擇性的。Erastin更長時間的處理和更高的濃度對缺乏RASV"或者ST的細胞活性影響很小，這證實erastin選擇性的定性性質(圖6A，C)。因為erastin處理的細胞不經歷凋亡，申請人設法證實erastin確實誘導細胞死亡，而不是細胞脫離。他們使用檢測胞內還原電勢的染料AlamarBlue在erastin存在的條件下定量測定細胞活力(Ahmed等人，1994，J.Immunol.Methods170,211-224)。在同質AlamarBlue活力試驗中，相對於BJ-TERT細胞Erastin在致瘤BJ-TERT/LT/ST/RASV12細胞中顯示選擇性致死性(圖6B)。用erastin處理18小時的BJ-TERT/LT/ST/RAS^細胞變圓和脫離(圖6C)，不能排除活體染料臺盼藍，在電勢測定染料JC-1檢測中顯示線粒體膜電勢的損失，具有死細胞特徵的小細胞尺寸。申請人檢測到，erastin誘導的活力損失一旦完成就是不可逆的，因為用erastin處理24小時的BJ-TERT/LT/ST/RASV^細胞變圓、脫離，當重新放到不含erastin的介質上不能恢復。因此，erastin以ST和RASV12依賴方式誘導快速(12-24小時)、不可逆的、非凋亡細胞死亡。此外進行研究以證明erastin誘導活性氧的形成(參見圖IO)。進行篩選尋找emstin活性的遏制劑(抑制劑)。鑑定出四種抑制erastin活性的抗氧化劑，其中之一是抗氧化劑，a-生育酚。下列方法和材料用於此處描述的實施例。構建體和逆轉錄病毒hTERT，LT，ST，SV40早期區域和HRASV12的表達構建體按先前所述使用(Harm等人，1999，前文；Hahn等人，2002，前文)。hTERT-pWZL-Blaste,E6-pWZL-zeoe和E6E7-pWZL-Zeoe先前已有描述(Lessnick等人，2002，前文)。E6禾卩LTcDNAs克隆入pWZL-Hygroe逆轉錄病毒載體(J.Morgenstern，MilleniumPharmaceuticals惠貝曾)。製備泡狀口腔炎病毒-G糖蛋白假模標本逆轉錄病毒，感染按前述方法進行(Lessnick等人，2002,前文)。細胞系TIP5原代成纖維細胞(Lessnick等人，2002，前文)從丟棄的新生包皮製備，用hTERT-pWZL-blaste或者hTERT-pBabe-hygro逆轉錄病毒感染使細胞永生化，分別用殺稻瘟菌素或潮黴素篩選。BJ細胞由JimSmith惠贈。hTERT-永生化成纖維細胞用指定逆轉錄病毒感染，選擇合適標記物。所有的BJ衍生物在添加15%滅活胎牛血清、青黴素和鏈黴素(pen/strep)的DMEM和M199的1:1混合物中培養。TIP5細胞在包含10%FBS和pen/strep的DMEM中生長。所有細胞培養物在37。C包含5。/。C02的溼潤溫箱中孵育。化合物文庫包括1,540種化合物的標註化合物文庫(ACL)，從國家癌症學會獲得的1，990種化合物的NCI多樣性組和包含20，000種化合物的組合文庫(ComgenexInternational,Inc.)用於腫瘤選擇性的合成致死篩選。所有化合物文庫在384孔聚丙烯板中製備為溶解在DMSO中的4mg/ml溶液(歹!j3—22)，.20。C保存。喜樹鹼(cat#—C9911，MW348.4)，阿黴素(cat#—D1515MW580.0)，柔紅黴素(cat#—D8809,MW564.0)，米託蒽醌(cat弁—M6545,MW517.4)，岡田酸(cat#—04511，MW805.0)，棘黴素(cat弁—E4392,MW1101)，桑吉瓦黴素(cat弁一S5895，MW309.3)獲自Sigma-AldrichCo。波凡黴素(MW772.84)和NSC146109(MW280.39)獲自國家癌症學會發展治療項目。Erastin(MW545.07)獲自ComgenexInternational,Inc。鈣黃綠素AM活力試驗鈣黃綠素乙醯甲酯(AM)是細胞膜可滲透、非螢光的化合物，它被胞內酯酶切割形成陰離子、細胞不可滲透的、螢光化合物鈣黃綠素。活細胞被鈣黃綠素染色，因為胞內酯酶的存在並且因為完整的質膜阻止螢光鈣黃綠素滲出細胞(Wang等人，1993，前文)。細胞使用ZymarkScicloneALH接種在384孔板，初篩時用各種化合物4ug/mL—式三份處理兩天，在PackardMinitrak的384孔清洗機上用磷酸鹽緩衝液洗滌，與0.7Pg/mL鈣黃綠素(MolecularProbes)孵育四小時。在PackardFusion板計數器記錄各孔的總螢光強度，通過扣除儀器本底和除以細胞不用任何化合物處理時得到的平均信號，將其轉變為信號的抑制率。AlamarBlue活力i式驗AlamarBlue被活細胞中線粒體酶的活性還原，引起比色和螢光變化(Nociari等人，1998，J.IImnmnol.MMethods，13，157-167)。使用注射式大量分注器(Zymark)將細胞以每孔6000個細胞的密度(50yl)接種於384孔黑色、透明底板。使用384固定套管頭從兩倍系列稀釋的erastin板(6X最終濃度)取出10ul，使最高濃度孔中的最終濃度達到20ug/ml。板孵育24小時。AlamarBlue(BiosourceInternational)1:10稀釋後加入各孔，在37。C孵育16小時。使用激發濾片集中在535nm和發射濾片集中在590nm的PackardFusion板計數器來檢測螢光強度。計算各濃度的平均抑制率。誤差條表明一個標準差。AlamarBlue試驗不涉及洗滌細胞。篩選影印子板用ZymarkScicloneALH製備，通過用不含血清和pen/strep的培養基稀釋母板50倍來整合TwisterII，以獲得子板中具有2%DMSO的80ng/ml的化合物濃度。使用注射式大量分注器將細胞接種於黑色、透明底384孔板的1-23列(每孔6000個細胞，57ul)製備檢測板。3-22列用來自文庫子板的化合物處理，通過使用384位置固定的管陣從文庫子板轉移3y1。試驗板中最終化合物濃度因此是4ug/ml。試驗板在37°C包含5%C02的溼潤溫箱中孵育48小時。使用來自PackardBioscience(PerkinElmer)的整合Minitrak/Sidetrak機器人系統進行板處理步驟用於分析鈣黃綠素AM活力。試驗板用磷酸鹽緩衝液洗滌，每孔添加20yl鈣黃綠素AM(0.7ixg/ml)。板在室溫孵育4小時。使用集中在535nm的激發濾片和集中在590nm的發射濾片的PackardFusion板計數器來檢測螢光強度。化合物在系列稀釋中的重複試驗重複試驗的化合物從廠商處購買。儲備物在384孔聚丙烯板中以1mg/ml濃度溶於DMSO中製備，各化合物在每列中具有16點、兩倍稀釋劑量曲線，一式兩份。列1-2和23-24留為空白作為對照。通過在384孔deep-deep孔板中用DMEM稀釋66.6倍(4.5u1轉移到300ti1中)，用儲存的重複試驗板製備重複試驗子板。細胞以每孔40P16000個細胞的密度種植，20nl從重複試驗子板添加。板在37'C5%C02下孵育兩天。數據分析未處理細胞的平均RFU(相對螢光單位)通過平均列1、2和23(有細胞但無化合物的孔)的值來計算。鈣黃綠素背景通過平均列24(有鈣黃綠素但無細胞的孔)的值來計算。每孔的抑制率按[l-(RFU-鈣黃綠素對照)/(未處理細胞-鈣黃綠素對照)X100]計算。通過在BJ原代和BJ-TERT/LT/ST/RASV^細胞中一定濃度範圍內的檢測，確定在初篩中造成鈣黃綠素染色至少50%抑制的化合物對BJ-TERT/LT/ST/RASV12工程化腫瘤細胞的選擇性。選擇性化合物在所有工程化細胞系中重複試驗。核形態學試驗在六孔板的每孔中的玻璃蓋玻片上接種2mL200,000個致瘤BJ-TERT/LT/ST/RASV'2細胞，分別在生長培養基中用空白(NT)，9nMerastin或者1.1uM喜樹鹼(CPT)處理18小時，在37°C5%C02下孵育。核用25ug/mLHoechst33342(MolecularProbes)染色，在螢光顯微鏡上用油鏡IOOX物鏡觀察。細胞大小測量200,000個BJ-TERT/LT/ST/RASV12細胞種於六孔板，只有2mL生長培養基(無處理)，具有9liMerastin或者具有1.1nM喜樹鹼(CPT)。24小時後，細胞用胰蛋白酶/EDTA消化釋放，在生長培養基中稀釋到10mL，在庫爾特計數器上檢測各樣品的細胞大小分布。喜樹鹼活性的細胞計數試驗BJ-TERT/LT/ST/RASV12細胞種於6孔板(200000細胞/孔；每孔2ml)，利用Oligofectamine(LifeTechnologies)在無血清和無抗生素的培養基中轉染，每孔100nMsiRNA，總體積lml。500y1包含30%FBS的培養基在轉染後4小時添加。轉染後細胞用指定濃度的喜樹鹼處理30小時。500nl所需喜樹鹼濃度的5X溶液被添加到各孔。轉染75小時後用胰蛋白酶-EDTA消化細胞，血球計數器計數。對照實驗表明轉染效率大約是10%。WesternBlot分析C3spase-3實驗前在60mm皿中種入5X105BJ-TERT/LT/ST/RASV12細胞。細胞用5ug/mlerasthi(9l4M)處理2、4、6、8或者10小時。一個皿用喜樹鹼處理(0.4ug/ml24小時)作為陽性對照。在每個時間點後細胞在裂解緩衝液(50mMHEPESKOHpH7.4，40nMNaCl，2mMEDTA，0.5%TritonX-100，l,5mMNa3V04，50mMNaF，10mM焦磷酸鈉，lOmMbeta-甘油磷酸鈉和蛋白酶抑制片(Roche))中裂解。用Biorad蛋白檢測試劑定量蛋白質含量。等量蛋白於16。/。SDS-聚丙烯醯胺凝膠上分離。電泳遷移的蛋白轉移到PVDF膜上，用5%牛奶封閉，與1:1500稀釋的抗活化caspase-3的多克隆的抗體在4。C孵育過夜。然後膜與1:3000稀釋的抗兔HRP(SantaCruzBiotechnology)孵育1小時，再用增強化學發光混合物(NENlifescience,Renaissance)顯色。為檢測每條泳道等量上樣，斑點被切成條，封閉，用1:1000稀釋的抗elF-4E抗體(BDTransductionlaboratories)檢測。拓撲異構酶-IIaBJ，BJ-TERT，BJ-TERT/LT/ST，BJ-TERT/LT/ST/RASVI2，BJ-TERT/LT/RASV"禾口BJ-TERT/LT/RASV12/ST細胞種入60mm皿，每皿1X1(^個細胞。在37'C5。/。C02孵育過夜後，細胞按上述方法裂解，蛋白於10%聚丙烯醯胺凝膠上分離。膜與1:1000稀釋的抗人拓撲異構酶IIap170抗體(TopoGEN)在4'C孵育過夜，然後和抗小鼠HRP(SantaCruzBiotechnology)孵育。拓撲異構酶1(TOPI)一個針對TOPI的21核苷酸雙鏈siRNA(核苷酸2233-2255，從起始密碼子計數，Genbank登錄號J03250)被合成(Dharmacon，純化和脫鹽/脫保護)，在六孔板中用oligofectamine(LifeTechnologies)轉染(100nM)BJ-TERT/LT/ST/RAS^2細胞。75小時後，細胞被裂解，通過Westernblot檢測TOPI的表達水平(Topogen，Cat#_2012-2，1:1000稀釋)。通過切條和用抗eIF的抗體(BDBiosciences,Cat#—610270，1:500稀釋)重新測定相同斑點，對蛋白上樣水平進行檢測。此外，1乂106細胞種於60mm皿，在37°C5%C02條件下生長過夜，然後在150U1裂解緩衝液中裂解。細胞用刮刀刮下，轉移到微量離心管，在冰上孵育30分鐘。用Biorad蛋白檢測試劑定量裂解物中的蛋白質含量。等量蛋白上樣於10%梯度SDS-聚丙烯醯胺凝膠。電泳遷移蛋白轉移到PVDF膜上。用5%奶粉封閉後，膜與小鼠抗人拓撲異構酶I抗體(Pharmingen)在4'C孵育過夜，然後與抗小鼠過氧化物酶偶聯抗體(SantaCruzBiotechnology)醉育。AnnexinV-FITC凋亡試驗每個100mm皿中種入1X16個BJ-TERT/LT/ST/RAS^2細胞，生長過夜。細胞用erastin(5或者10ng/ml)處理6、8或者11小時。保持喜樹鹼處理(0.4yg/ml)，在接種時處理20小時。處理後，細胞用胰蛋白酶/EDTA收穫，並用包含血清的新鮮培養基洗滌一次，然後用磷酸鹽緩衝液洗滌兩次。細胞用1X結合緩衝液(BDPharmingen)重新懸浮，濃度是lXlS細胞/ml。在室溫避光條件下100"(1X1S個細胞)與5ulAnnexinV-FITC(BDPharmingen)和碘化丙啶孵育15分鐘。然後加入400yl1X結合緩衝液，通過流式細胞儀(BectonDickinson)分析細胞。使用Cellquest軟體獲得和分析數據。使用FL1通道只分析活細胞的AnnexinV-FITC染色，所述活細胞不被碘化丙啶染色的。ROS分析利用H2DCF-DA的流式細胞分析2'，7'-雙氯雙氫螢光素雙醋酸酯(H2DCF-DA)是非螢光細胞可滲透化合物。細胞內的內源酯酶切割雙醋酸酯部分，它不再滲出細胞。因此它在細胞內積累。然後H2DCF與ROS反應形成螢光二氯螢光素(DCF)，這可以用流式細胞儀在FL1通道檢測。1.每個60mm皿中種入3X10S個細胞，生長過夜。2.用待測化合物處理不同時間(1-10小時)。3.每個時間點分別維持一個未處理細胞，化合物處理細胞和陽性對照(過氧化氫處理)的皿。4.在37。C細胞與10yMH2DCF-DA孵育10分鐘。5.對陽性對照細胞，在加入H2DCF-DA5分鐘後，添加500pM過氧化氫，再孵育5分鐘。6.胰酶消化收穫細胞。7.用冷的PBS洗滌兩次。8.在100ulPBS中重懸沉澱，轉移到5mlFACS管。9.添力卩5tM碘化丙錠(50ug/ml)，在避光條件下冰浴10分鐘。10.添力口400MPBS，通過流式細胞儀(Becton-Dickinson)分析。11.使用Cellquest軟體程序獲得和分析數據。12.只選取碘化丙啶陰性細胞(活細胞)進行DCF染色分析，使用FL1通道，PI在FL3通道，作象限圖。篩選ACL文庫中能夠抑制BJELR細胞中erastin活性的化合物方法包括1，540種化合物的ACL文庫和所有的化合物在384孔聚丙烯板中製備為溶解在DMSO中的4ug/ml溶液，-20^保存。使用ZymarkSciloneALH製備每個文庫的影印子板。子板用DMEM稀釋50倍，子板中的化合物濃度是80iig/ml，具有2%DMSO中。在試驗板中來自子板的化合物用細胞懸液稀釋20倍，因此各化合物的最終濃度是g/ml。BJELR細胞以6000細胞/孔(57p1)(用於共處理篩選)和5000細胞/L(57ul)(用於預處理篩選)用注射式大量分注器種於384孔黑色、透明底板。對共處理抑制物篩選，細胞用3ul來自ACL文庫的子板的化合物處理(試驗板中最終濃度在4ug/ml)，同時用5ug/mlerastin處理。使用384固定管頭進行化合物轉移。板在37°C5%C02溫箱中孵育48小時。對預處理篩選，細胞用來自ACL文庫子板的化合物預孵育過夜，然後用5pg/mlerastin再處理48小時。使用PackardBioscience的MiniTrak/SideTrak機器人系統對板進行l丐黃綠素試驗。試驗板用PBS洗滌，在室溫下與鈣黃綠素AM(0.7ug/ml)孵育4小時。使用集中在485nm的激發濾片和集中在535nm的發射濾片以Fusion板計數器來檢測螢光強度。BJELR細胞是BJ-TERT/LT/ST/RASVu細胞。表1顯示工程化細胞系中腫瘤選擇性的化合物的效力。九種腫瘤選擇性化合物在全部工程化細胞系種進行16點、兩倍稀釋劑量曲線的重複試驗。表列出在各細胞系中各化合物達到鈣黃綠素AM染色50%抑制(IQo)的濃度(Ug/mL)。在原代BJ細胞中的ICso除以BJ-TERT/LT/ST/RASV12致瘤細胞中的IC5Q得到各化合物的腫瘤選擇比。通過計算系列中每個隨後細胞系的對的選擇比來檢定化合物對各遺傳元件的選擇性。小T癌蛋白-選擇性化合物被認為是對PP2A(小T癌蛋白的耙標)有選擇性，而E6-選擇性化合物被認為是對p53缺失有選擇性，E7-選擇性化合物被認為是對RB的缺失有選擇性。tableseeoriginaldocumentpage131tableseeoriginaldocumentpage131表2顯示腫瘤選擇性化合物在工程化細胞系中的效力。表列出各細胞系中各化合物對鈣黃綠素染色的抑制(陰性％值)或者增強(陽性％值)(ic50)。formulaseeoriginaldocumentpage133formulaseeoriginaldocumentpage134formulaseeoriginaldocumentpage135formulaseeoriginaldocumentpage136tableseeoriginaldocumentpage137imageseeoriginaldocumentpage138formulaseeoriginaldocumentpage139formulaseeoriginaldocumentpage140tableseeoriginaldocumentpage141tableseeoriginaldocumentpage142imageseeoriginaldocumentpage143formulaseeoriginaldocumentpage144-27%-1%-33%-10%-23%-5%-24%-2%-20%-9%200680009733.5formulaseeoriginaldocumentpage146formulaseeoriginaldocumentpage147formulaseeoriginaldocumentpage148tableseeoriginaldocumentpage149tableseeoriginaldocumentpage150tableseeoriginaldocumentpage151tableseeoriginaldocumentpage152imageseeoriginaldocumentpage153tableseeoriginaldocumentpage154formulaseeoriginaldocumentpage155實施例4Erastin結合伴侶的鑑定和表徵最初用Pull-down試驗鑑定細胞內的erastin結合伴侶，所述Pull-down試驗使用固定的erastin和細胞裂解產物。最初的pull-down實驗用HEK293、BJEH和BJELR全細胞裂解產物進行。在這些實驗中，erastin的甲氨基衍生物(ERA-A6)被固定到Affigel10,在標準pull-down條件下與裂解產物孵育。洗滌珠子，然後用lOOuMemstin或者0.8。/。十二烷醯肌氨酸(sarkosyl)洗脫。洗脫液用於質譜分析。Erastinpull-down試驗結果的分析發現在HEK293或者BJEH和BJELR裂解產物第一輪pull-down試驗中鑑定到線fe體或者內質網膜蛋白的出現頻率較高。這表明膜孔可能是erastin或者其類似物的靶標。但是，這些結果不排除以下可能性，即erastin可能還有在這輪pull-down實驗中未被鑑定的其他和/或不同的靶標。在pull-down試驗中用erastin或者erastin類似物反覆觀察幾個蛋白。這些蛋白，包括VDAC1、VDAC2、VDAC3、Prohibitin、核糖體結合糖蛋白、Sec61a和Sec22b，假設它們是erastin的靶標。因為全細胞裂解產物混合物仍然是相當複雜的，那些蛋白只在pull-down實驗的sarkosyl洗脫液中檢測到。這潛在地增加了質譜分析的複雜性。因此，為簡化混合物，使用不同的分離方法分離或者預濃縮在全細胞裂解產物pull-down實驗中鑑定的一些蛋白。因為Prohibitin和VDAC同工型都是線粒體蛋白，申請人通過從細胞裂解產物分離線粒體來富集潛在的erastin靶標。分離的線粒體提取物然後用於erastinpull-down實驗。在那些利用線粒體提取物的erastinpull-down實驗中，Prohibitin、VDAC和核糖體結合糖蛋白還通過Westernblot鑑定。圖14顯示pull-down的Westernblot，其中線粒體提取物接觸固定於珠上的活性(A6)和非活性的(Bl)erastin衍生物。Pull-down實驗用線粒體提取物為0.25mg總蛋白進行。珠子在4'C與提取物孵育1.5小時，然後洗滌幾遍。與固定的emstin衍生物結合的蛋白用50ixL0.8。/。十二烷醯肌氨酸溶液洗脫。Westernblot鑑定蛋白，所述westernblot使用抗-核糖體結合糖蛋白、-Sec6、-Prohibitin和抗-VDAC抗體的混合。蛋白還通過質譜分析鑑定。核糖體結合糖蛋白和Prohibitin是酸性蛋白，計算的PI值分別是5.57(Prohibitin)和5.96(核糖體結合糖蛋白I)。申請人利用MonoQ柱在pH6.8條件下通過離子交換色譜法把這兩個蛋白與鹼性更強的蛋白(VDAC同工型，Sec22和Sec61a)分離。然後使用抗體檢測這些級分中Prohibitin或者核糖體結合糖蛋白含i。還檢測這些級分它們與包含固定的ERA-A6和ERA-B1化合物的BIACORE表面的結合。在BIACORETM實驗中顯示結合的級份中發現了Prohibitin和核糖體結合糖蛋白。有趣地是，觀察到一種未知的45kDa蛋白在銀染SDS-PAGE凝膠中與ERA-A6或者ERA-B1珠子結合，所述未知蛋白不與任何使用的抗體反應。為證實這些發現，從MonoQ洗脫液級份對ERA-A6和ERA-B1進行pull-down實驗。Prohibitin和核糖體結合糖蛋白再次被確定為結合來自幾種級份的Erastin珠。這些實驗清楚地支持以下觀點，即VDAC同工型和Prohibitin及核糖體結合糖蛋白結合erastin和erastin類似物。因此這些蛋白在體內都是erastin的潛在靶標/結合伴侶。實施例5不同VDAC同工型的表達水平當利用BJELR裂解產物進行pull-down時，與來自BJEH細胞的裂解產物比較，erastin的ERA-A6類似物的成功的pull-down始終產生更高的VDAC3基於質譜的鑑定值。考慮可比較的總蛋白量時，VDAC同工型的值越高，與之一致的是這些同工型在BJELR裂解產物相對於BJEH裂解產物中的豐度更高。靶標蛋白的不同的水平可能影響Erastin的選擇性。為說明這點，申請人使用定量PCR(Q-PCR)檢測了不同VDAC同工型的相對表達水平。其他可用的方法包括Westernblot和質譜分析法。進行定量PCR(Q-PCR)實驗檢測"正常"BJEH細胞系和致瘤BJELR系中不同基因mRNA的相對量(作為基因表達的代替品標記物)。對各VDAC同工型(VDACl，2禾卩3)，mRNA的兩個區域被用於擴增。這些區域分別稱為1和1-2，2-1和2-2，以及3-1和3-2。各個感興趣基因的mRNA片段擴增的Q-PCR信號與一系列內參比較，相對於靶細胞中GAPDHmRNA衍生的信號按比例繪圖。圖11中所示結果表明，BJELR細胞中VDAC3的表達相對於BJEH細胞中顯著地升高。這個發現與其他幾個基因觀察的結果相反，在BJELR細胞中相對於BJEH細胞觀察到所述基因被抑制。使用圖11中相同的Q-PCR數據作出圖12，但是圖12重點在於靶細胞中VDAC同工型的相對表達水平。各擴增mRNA片段的Q-PCR信號與一系列內參比較，表示為相對於靶細胞中VDAC1mRNA的信號，這被定義為100%。如圖11所示，各VDAC同工型(VDAC1,2和3)mRNA的兩個擴增區域，分別稱為1，1-2，2-1，2-2，3-i和3-2。結果表明BJELR細胞中VDAC3的表達比在BJEH細胞中的高2-2.5倍。綜上，這些發現提示解釋BJELR細胞對erastin處理不同敏感性的一種可能機理。實施例6Erastin對不同VDAC同工型的功能評價功能試驗幫助確認鑑定的蛋白為erastin的功能靶標。在某些實施方案中，分離的線粒體可以用於判斷erastin對線粒體功能是否具有作用或者表型效果。例如，表型效果可以通過顯微鏡觀察，當檢測線粒體膜電位變化時，或者通過使用某些染料觀察erastin處理後活性氧的釋放，這在本領域已知是用於檢測活性氧(ROS)。在某些其他實施例中，確認實驗可以包括用疊氮基-erastin衍生物，或者erastin類似物或者偶聯到二齒螯合物親和標記交聯劑(例如SBED)或者可切割的交聯劑的衍生物來光親和標記靶標蛋白。仍在其他實施方案中，重組和過表達的蛋白可以用於某些體外試驗，用於評定erastin對其功能具有的任意可能的效果。這種體外試驗可以包括，但不限於直接結合(體外或者BIACORETm)，或者是可以檢測VDAC同工型通道性質的外排試驗。仍在其他實施方案中，可以使用那些靶標蛋白的敲除突變株(細胞或者生物體)。與野生型比較，這些突變株可以變成對erastin有抗性的或者超敏的。那些敲除細胞系也可以用於高通量篩選(HTS)以檢測和/或評價erastin或者其類似物的特異性。仍在其他實施方案中，還可以用VDACs、Prohibitin和核糖體結合糖蛋白的RNAi實驗來評定erastin處理後的任意表型(例如，erastin抗性或者超敏性)。根據本發明的這個實施方案，分別以VDAC1、VDAC2禾BVDAC3作為耙標的SMARTPOOLsiRNAs購自Dharmacon(Lafayette,CO)。然後優化轉染條件，例如，在384孔板使用FUGENETM和oligofectamine和螢光標記的siRNA雙鏈體。這種程序導致卯。/o的轉染效率。然後ELR腫瘤細胞可以用抗VDAC1、VDAC2或者VDAC3的siRNAs轉染，可以檢測對erastin的劑量-反應。實施例7細胞生長的抑制檢測化合物抑制BJELR和BJEH細胞生長的能力。化合物通過Sytox初篩進行分析，這是一種監控作為化合物處理結果的細胞倖存-增殖改變的表型試驗。它設計為鑑定特異改變細胞生長潛力的化合物的高通量方法，所述細胞帶有在癌症患者中發現的致病性的突變，而這種突變不影響正常細胞的生長。該試驗依賴於一種便宜、簡單和可靠的膜不可滲透的螢光染料(Sytox,來自MolecularProbes)的讀數，所述螢光染料結合核酸。在健康細胞中，沒有檢測到信號，因為細胞膜是完整的，染料不會進入。但是，如果細胞膜是作為凋亡或者壞死的結果而受損，將檢測到與受到類似影響細胞的數目成比例的螢光信號。利用兩步讀數(在去汙劑存在條件下最終讀數，以標記所有細胞)，該試驗可以鑑定產生白細胞鬱積、細胞毒性和/或致有絲分裂的化合物。第一次讀數或者"死細胞"讀數，通過顯示試驗時培養物中死亡或者瀕死細胞的數目來評估給定化合物的毒性。第二次讀數或者"總細胞"讀數，獲得細胞毒性在減小細胞群大小方面的累積效應，以及無毒性時待測化合物對待測細胞群的任意細胞的抑制細胞或者抗增殖效果。為篩選目的，先前描述的BJ-TERT系稱為"正常"參照細胞系，BJ-TERT/LT/ST/RAS^細胞是致瘤細胞系。細胞種於96孔板過夜，在未處理情況下種植密度允許在72小時後孔中95%融合。隨後幾天，細胞接受系列稀釋的待測化合物處理48小時。在這段溫育期後，按廠商推薦濃度添加Sytox試劑到培養物，讀取死細胞螢光讀數。在完成這些測量後，添加去汙劑皂角苷到培養物各孔對膜進行透化處理，以允許Sytox試劑對進入每個細胞，從而便於測量留在培養物中細胞總數。實施例83-(2-乙氧苯基)-2-(哌嗪-l-基甲基)喹唑啉-4(3H)-酮(化合物5)的合成formulaseeoriginaldocumentpage161步驟1:2"氯甲基)-4H-苯並「dl「l,31噁嗪-4-酮"七合物2)的製備化合物2方法1:在氮氣中，鄰氨基苯甲酸(化合物l，15.3g)溶於300mL二氯甲烷(CH2C12)。然後添加三乙胺(TEA,1.1當量)，在冰浴中冷卻混合物。滴加氯乙醯氯(1.1當量)的二氯甲烷溶液(150mL)，加溫到室溫攪拌混合物兩小時。(在添加後可以去除冰浴或者混合物可以加溫到室溫超過兩個小時。)通過過濾分離固體，用冷水洗滌(2X)，然後是5%二乙醚(Et20)的己烷溶液洗滌，風乾，得到化合物2的白色粉末固體(22.5g，定量收率)。最終產品的特徵是LC/MSm/zMH+196.13;純度>95°/。；1HNMR。方法2二甲基甲醯胺(DMF)用作反應溶劑10克鄰氨基苯甲酸溶於300mLDMF。然後添加TEA(1.5當量)，在冰/水浴中冷卻混合物。氯乙醯氯(1.3當量)的DMF溶液(100mL)被滴加到冷卻的反應混合物中。去除冰/水浴，反應混合物攪拌2小時。反應混合物注入冰水(200-300mL)中，用乙酸乙酯(EtOAc，3X提取)提取。合併有機層，用水和鹽水洗滌，用硫酸鈉(Na2S04)乾燥。濃縮產生固體，該固體與100mL10%Et20/己垸研磨，得到化合物2的白色粉末(12g;85%收率)。最終產品用LC/MS表徵。步驟2:2-(氯甲基V3-(2-乙氧苯基)喹唑啉酮-4(3HV酮(化合物3)的製備方法1使用三氯膦(PC13):在氮氣中，化合物2(8.8g)溶於440mL乙腈(CH3CN)，添加2-乙氧基苯胺(1.5當量)，攪拌。向這些充分攪拌的反應混合物中滴加PC13(2當量)。得到的漿料加熱到50°C6-12小時。反應混合物注入飽和Na2C03/冰混合物中，攪拌30分鐘，用EtOAc(3X300mL)提取。合併的有機層用(最少量的)水和鹽水洗滌，用硫酸鈉(Na2S04)乾燥。濃縮溶液，粗的固體/油混合物與3%Et20/己垸(2X100mL)研磨，以除去未反應氨基苯乙醚中的絕大部分。獲得的固體過濾分離，然後過矽膠柱(20%EtOAc/己垸)純化。分離的化合物3為白色粉末(11g，75-80%)。最終產品的特徵是LC/MSm/zMH+315;純度〉98%。方法2使用磷醯三氯(P0C13):在氮氣中，化合物2(1.2g;6.0mmol;1.0當量)和2-乙氧基苯胺(1.2mL;9.0mmo1，1.5當量)溶於30mLCH3CN。向該溶液滴加P0C13(l.lmL，12mmol，2.0當量)，混合物回流加熱3小時。反應物冷卻至室溫，注入冰/飽和NaHC03槳料中，用EtOAc(3X200mL)提取。合併的有機層用水和鹽水洗滌，用Na2S04乾燥。用LC/MS對粗反應混合物進行分析，證實所需產物化合物3(97%)及少量副產物化合物3c(2-3%)的存在。LC/MS中MH+m/z(333/334/335)與化合物3c的二醯氨結構一致。通常在矽膠上色譜層析分離所需產物(如前步驟2的方法1中所述)，得到的化合物3為白色粉末(1.3g，80-85%收率)。步驟3:3-(2-乙氧苯基)-2-(哌嗪-l-基甲基)喹唑啉-4(3HV酮(化合物5)的製備方法l:在氮氣中，化合物3(5g)溶於CH3CN(0.08-0.2M化合物濃度)，向其中依次加入碳酸鉀(K2C03，1.2當量，商品化粉末)，哌嗪(2當量)和碘化四丁銨(0.2當量)。混合物在60°C(水浴溫度)加熱8-10小時。反應可以按下列兩條路線中的任何一條進行(a)蒸發掉80%的溶劑，添加水(20mL)，用EtOAc(4X60mL)提取混合物；或者(b)反應混合物是用400mLEtOAc稀釋，用水(3X20mL)洗滌。合併的有機層用鹽水洗滌，濃縮成微黃色的油。在矽石(10-25%甲醇/二氯甲烷)上用中壓色譜層析(CombiFlash⑧)純化後獲得的化合物5為白色粉末(80-85%收率)。產物的特徵是1HNMR和LC/MSMH+365。步驟4:叔丁基4-(3-2-乙氧苯基)-4-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2-基)甲基〗哌嗪-l-羧酸酯(化合物4)的製備化合物3化合物4方法1:在氮氣中，化合物3(4.0g，12.7mmo1，1.0當量)溶於60mLCH3CN，向該固體樣品溶液中依次加入K2C03(2.1g，15mmol，1.2當量)，叔丁氧羰基一哌嗪(4.73g，25mmol，2.0當量)和碘化鈉(Nal，570mg，3mmo1，0.3當量)的固體樣品。混合物(懸浮液)在8(TC加熱3-6小時。獲得白色懸浮液。利用TLC和LC/MS檢測反應,顯示化合物3完全轉化為化合物4。減壓條件下通過蒸餾去除大約30mLCH3CN，向獲得的槳料中加入60mL水，用EtOAc(4X60mL)提取混合物。合併的有機層用水，氯化銨飽和溶液(去除未反應的叔丁氧羰基一哌嗪)，NaHC03飽和溶液和鹽水洗滌，用Na2S04乾燥。固體與己垸研磨，經過濾濃縮成為白色固體(5.6g，量產)。這種材料無需進一步純化就可用於後續脫保護步驟。最終化合物的特徵通過1HNMR，LCMS描述。步驟5:3-(7-乙氧苯基)-2-(哌嗪-基甲基〗喹唑啉-4f3HV酮(化合物5)的製備化合物4化合物5方法1:室溫下化合物4(2.7g，5.8mmol，1.0當量)懸浮於15mL無水二噁垸中。室溫下滴加4NHCl/二噁垸溶液(17mL，12當量)；反應30分鐘後再添加17mL4NHCl/二噁烷，用LC/MS監控反應進展。(這是一种放熱反應，觀察到氣體逸出。反應體系必須是開放的，以釋放壓力，同時保持無水條件。)如果殘餘任何量的未反應化合物4，可再添加8-10mL4NHCl/二噁烷以驅動反應完成。反應最後分別添加40mL水和CH2C12到反應物中，通過加入足量飽和含水Na2C03溶液調節混合物為鹼性，達到pH8-9。層被分離，水層用CH2C12(3X60mL)提取。合併有機層，用水(4X10mL，直到水提取物的pH大約為中性)和鹽水洗滌，在Na2S04中乾燥。濃縮產生微黃色的油，該油在矽石(10-25%甲醇/二氯甲垸)上用中壓色譜層析(CombiFlash)純化，與包含5-10%二乙醚的己垸研磨後產生的化合物5為白色粉末(85-95%收率)。化合物5的特徵通過1HNMR和LC/MS描述。常規分析方法下列LC條件用於分析化合物5:柱用於質譜的XTerra;CI8，3.5/xm尺寸2.1x150mm梯度75%CH3CN(包含0.08%甲酸)/25%水(包含0.1%甲酸)-90%CH3CN(包含0.08%甲酸)/10%水(包含0.1%甲酸)所有化合物用下列柱和移動相條件進行LC/MS分析:柱用於質譜的XTerra;C18,3.5/mi尺寸2.1xl50mmtableseeoriginaldocumentpage167實施例9Sytox初篩Sytox初篩是一種表型試驗，監控作為化合物處理結果的細胞倖存-增殖的改變。它設計為鑑定特異改變細胞生長潛力的化合物的高通量方法，所述細胞帶有在癌症患者中發現的致病性突變，而這種突變不影響正常細胞的生長。該試驗依賴於一種膜不可滲透的螢光染料(Sytox，來自MolecularProbes)的便宜、簡單和可靠的的讀數，所述螢光染料結合核酸。在健康細胞中，沒有檢測到信號，因為細胞膜是完整的，染料不會進入。但是，如果細胞膜是作為凋亡或者壞死的結果而受損，將檢測到與受到類似影響細胞的數目成比例的螢光信號。利用兩步讀數(在去汙劑存在條件下最終讀數，以標記所有細胞)，該試驗可以鑑定產生白細胞鬱積、細胞毒性和/或致有絲分裂的化合物。第一次讀數或者"死細胞"讀數，通過顯示試驗時培養物中死亡或者瀕死細胞的數目來評估給定化合物的毒性。第二次讀數或者"總細胞"讀數，獲得細胞毒性減小細胞群大小的累積效應，以及無毒性時待測化合物對待測細胞群的任意細胞抑制或者抗增殖效果。為篩選目的，先前描述的BJ-TERT系稱為"正常"參照細胞系，BJ-TERT/LT/ST/RASV12細胞是致瘤細胞系。細胞種於96孔板過夜，在未處理情況下種植密度允許在72小時後孔中95%融合。隨後幾天，細胞接受系列稀釋的待測化合物處理48小時。在這段溫育期後，按廠商推薦濃度添加Sytox試劑到'培養物，讀取死細胞螢光讀數。在完成這些測量後，添加去汙劑皂角苷到培養物各孔對膜進行透化處理，以允許Sytox試劑對進入每個細胞，從而便於測量留在培養物中的細胞總數。為數據評定，我們不區分顯示細胞毒或者抑制細胞效應的化合物。為用於其他檢測，化合物必須滿足兩個嚴格的標準i.死細胞或者總細胞讀數(或者兩者)對腫瘤細胞系產生至少2標準差大小的信號變化ii.對"正常"對照細胞產生小於1標準差大小的信號變化。參見表3和4和圖15-17對應於本發明化合物的體外數據。化合物編號IC50inBJELR(口M)<0.1006gl扁7^0.1008kl扁9Sl扁14^0.10015Sl扁10-kl細11^0.10016^0.100n^0.10012<0.10013<0.1001tableseeoriginaldocumentpage170C:PRLX化合物5@100mg/Kg，QDX5天，IP，n=8D:PRLX化合物5@50mg/Kg，QDX5天，IP，n=8E:媒介對照，QDX5天，IP,n=8F:未治療對照，n二8治療計劃當平均腫瘤體積達到200mn^時開始，持續至第5天，每天給藥每隻動物單一IP注射上述治療中的一種，總共5個劑量。、腫瘤移植和分期70隻小鼠每隻都移植1X107個HT-1080細胞，通過在右後肢側面SC注射0.1cc接種物。使用25GX5/8針號。使用HT-1080細胞(ATCC分離，第6次傳代凍存物)製備腫瘤細胞接種物，所述HT-1080細胞在DMEM[Gibco，No.l0569-010]+10%FCS[Gibco，No.F-2442]中培養。在細胞收穫時，細胞生長到95-100%的融合度。HT-1080接種物在無菌的DMEM培養基+10。/。FCS中製備，密度1.0Xl8細胞/inl。在腫瘤移植後+9天，動物分組匹配為治療和對照組，每組由8隻小鼠組成。總共22個非正常值從實驗中剔除，因為腫瘤太小或者太大。這被認為是實驗第1天，治療從這天開始。注射液的製備下列注射液在化合物給藥的5天期間每天新鮮製備100mg/kg劑量(組A和C)首先，通過在0.35ml溶劑(0.25。/oTween-80，0.1。/。苯甲醇和350mM乙酸)中溶解35mgPRLX化合物6或者PRLX化合物5來製備各化合物的儲液。然後通過將各儲液與3.15ml稀釋劑(lOOmM磷酸鉀緩衝液和32mM蔗糖，pH6.8)混合來1:10稀釋得到的儲液製備最終注射液。溶液然後過濾殺菌(0.45lim膜)。獲得的溶液包含PRLX化合物6或者PRLX化合物5，終濃度10.0mg/ml，pH=6.5。50mg/kg齊U量(組B和D)對兩種化合物，通過添加1.0ml稀釋劑(100mM磷酸鉀緩衝液和32mM蔗糖，pH6.8)，1:2稀釋1.0ml的10mg/ml注射液(如上所述)。獲得的溶液包含PRLX化合物6或者PRLX化合物5的終濃度為5.0mg/mlpH=6.5。媒介對照(組E)然後使用稀釋劑(100mM磷酸鉀緩衝載體對照和32mM蔗糖，pH6.8)1:10稀釋溶劑(0.25%Tween-80，0.1%苯甲醇和350mM乙酸)來製備媒介對照。媒介對照的最終成分包含在100mM磷酸鉀和32mM蔗糖中的0.025%Tween-80,0.01%苯甲醇和35mMHOAc,最終pH=6.8。劑量概述:tableseeoriginaldocumentpage172腫瘤測量從第1天開始，每隔一天稱重全部動物，測量腫瘤尺寸(長度(L)和寬度(W))。使用下列公式將腫瘤測量結果轉換為腫瘤體積(mm3):腫瘤體積-LXWXW/2。計算各時間點各實驗組獲得的腫瘤體積的平均值，對時間作圖。差異表示為平均值標準差(土SEM)。圖18-20顯示這些實驗的結果。實施例11PANC-1腫瘤治療研究PRLX化合物6和PRLX化合物5的抗腫瘤活性評定PANC-1異種移植物製備和移植PANC-1研究的實驗計劃基本與上述實施例10中所列的HT-1080研究相同，除了以下區別大約30-40mgPANC-1傳代腫瘤組織碎塊皮下植入免疫缺陷裸鼠的右側。每天監控腫瘤生長，當腫瘤達到大約100mm3時，帶有相似大小腫瘤的動物被分組匹配，開始化合物劑量給藥。按下面所列計量連續5天每天給藥化合物5—次。在PANC-1異種移植物中，吉西他濱，以模型最大耐受劑量給藥，用作對照。吉西他濱療法是9天內每3天進行給藥每天180mg/kg3次。圖21-22顯示這些實驗的結果。引用參考此處提及的全部出版物和專利在此完整引入作為參考，就像各個獨立出版物或者專利是特異和單獨引入作為參考。在衝突情況下，將以本申請，包括此處的任何定義，為準。等同物當討論本發明的特定實施方案時，上述說明書是說明性和非限制的。在獲知該說明書和下列權利要求時本發明的許多變化對本領域技術人員來說是顯而易見的。本發明的全部範圍應該參考權利要求和等同物的全部範圍以及說明書和這種變化來決定。權利要求1.一種在哺乳動物中治療病症的方法，包括對哺乳動物給藥治療有效量的具有式I結構的化合物或者其藥學可接受的鹽，其中R1選自H、Z-Q-Z、-C1-8烷基-N(R2)(R4)、-C1-8烷基-OR3、3-到8-元碳環或者雜環，芳基，雜芳基和C1-4芳烷基；每次出現的R2和R4均是獨立選自H、C1-4烷基、C1-4芳烷基、芳基、雜芳基、醯基、烷基磺醯和芳基磺醯，如果R2和R4在相同氮原子上和不同時是氫時，它們是不同的，並且當R2和R4在相同氮上並且R2和R4之一是醯基、烷基磺醯或者芳基磺醯時，另一個選自H、C1-8烷基、芳基、C1-4芳烷基，和雜芳基；R3選自H、C1-4烷基、C1-4芳烷基、芳基和雜芳基；W選自和Q選自O和NR2；和每次出現的Z獨立地選自C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基，其中病症的特點在於細胞具有增強的Ras信號活性和SV40小t抗原的細胞靶標蛋白改變的活性。2.根據權利要求l所述的方法，其中病症的特點還在於基本上野生型水平的Rb活性。3.根據權利要求1所述的方法，其中Ri選自Z-Q-Z、8垸基-N(R2)(R4)、-(^.8垸基-0113、芳基，雜芳基和cl4芳烷基。4.根據權利要求l所述的方法，其中芳基任選用選自Cl6院基，CF3，羥基，CL4垸氧基，芳基，芳氧基，滷素，NR2R4，硝基，羧酸，羧酸酯和磺醯基的基團取代。5.—種在哺乳動物中治療病症的方法，包括對哺乳動物給藥治療有效量的具有式I結構的化合物或者其藥學可接受的鹽，R!選自H、Z-Q-Z、-^&2)(114)、-<:1.8烷基-0113、3-到8-元碳環或者雜環，芳基，雜芳基和CM芳垸基；每次出現的112和W均是獨立選自H、Cm院基、d—4芳烷基、芳基、雜芳基、醯基、垸基磺醯和芳基磺醯，如果w和w在相同氮原子和不同時是氫時，它們是不同的，而當112和W在相同氮上並且R2和W之一是醯基、烷基磺醯或者芳基磺醯時，另一個選自H、d.s烷基、芳基、C"4芳烷基，禾口雜芳基；R3選自H、Cm院基、Cm芳院基、芳基和雜芳基；formulaseeoriginaldocumentpage7W選自Q選自O和NR2;和每次出現的z獨立地選自CL6烷基、^(2)(^4)、-d-s烷基-OR3、3-到8-元碳環或者雜環，芳基，雜芳基和CL4芳烷基；每次出現的112和W均是獨立選自H、Cm焼基、Cu4芳垸基、芳基、雜芳基、醯基、烷基磺醯和芳基磺醯，如果f和W在相同氮原子和不同時是氫時，它們是不同的，而當W和W在相同氮上並且R2和W之一是醯基、烷基磺醯或者芳基磺醯，另一個選自H、C^烷基、芳基、Cm芳院基，和雜芳基；R選自H、Cw垸基、d-4芳烷基、芳基和雜芳基；其中:W選自formulaseeoriginaldocumentpage9,R4Q選自0和NR2;禾口每次出現的z獨立地選自cl6垸基、〔2.6烯基和<:2.6炔基，禾口(2)—種增加細胞中VDAC豐度的試劑。30.根據權利要求29所述的方法，其中R'選自Z-Q-Z、-Cw烷基-n(r2)(r4)、-<:1-8垸基-0113、芳基，雜芳基和cm芳烷基。31.根據權利要求30所述的方法，其中W選自cm芳烷基和醯基。32.根據權利要求31所述的方法，其中W是醯基。33.根據權利要求32所述的方法，其中R4是-C(0)-d.3垸基-Y，Y選自H、垸基、垸氧基、芳氧基、芳基、雜芳基、雜芳氧基和環垸基。34.根據權利要求32所述的方法，其中R4是-C(0)-d.3烷基-Y，Y選自芳氧基、芳基、雜芳基、雜芳氧基和環烷基。35.根據權利要求32所述的方法，其中R4是-C(0)-d.3烷基-Y，Y選自芳氧基和雜芳氧基。36.根據權利要求29所述的方法，其中VDAC是VDAC1、VDAC2或者VDAC3。37.根據權利要求25-35中任一所述的方法，其中所述細胞是癌細胞。38.根據權利要求25-35中任一所述的方法，其中所述試劑包括編碼VDAC的多核苷酸。39.根據權利要求25-35中任一所述的方法，其中所述試劑是適合轉運進細胞的VDAC蛋白。40.根據權利要求39所述的方法，其中所述試劑是與異源內化作用結構域融合的VDAC蛋白。41.根據權利要求39所述的方法，其中所述試劑是包括VDAC蛋白的脂質體製劑。42.根據權利要求25-35中任一所述的方法，其中所述試劑增強或者抑制內源VDAC的表達。43.根據權利要求42所述的方法，其中所述試劑刺激VDAC表達。44.根據權利要求42所述的方法，其中所述試劑抑制VDAC抑制劑的功能。45.—種殺傷細胞，促進細胞死亡或者抑制細胞增殖的方法，包括對細胞給藥(1)有效量的具有式I結構的化合物或者其藥學可接受的鹽，formulaseeoriginaldocumentpage11其中-Ri選自H、Z-Q-Z、-(:1_8烷基-:^(112)(114)、-d-s烷基-OR3、3-到8-元碳環或者雜環，芳基，雜芳基和Cw芳垸基；每次出現的W和R"均是獨立選自H、dv烷基、Cl4芳院基、芳基、雜芳基、醯基、垸基磺醯和芳基磺醯，如果f和W在相同氮原子和不同時是氫時，它們是不同的，而當W和W在相同氮上並且R2和W之一是醯基、垸基磺醯或者芳基磺醯時，另一個選自H、8垸基、芳基、Q-4芳烷基，禾口雜芳基；W選自H、(^.4垸基、Q-4芳烷基、芳基和雜芳基；Q選自0和NR2;禾口每次出現的z獨立地選自CL6烷基、<:2.6烯基和(:2_6炔基，和(2)—種降低細胞中VDAC豐度的試劑。46.具有式I結構的化合物或者其藥學可接受的鹽，W選自formulaseeoriginaldocumentpage12(I)其中-Ri選自H、Z國Q-Z、-d.8垸基-N(R2)(R4)、-d.s烷基-OR3、3國到8-元碳環或者雜環，芳基，雜芳基和Cw芳烷基；每次出現的R"和R"均是獨立選自H、dv烷基、4芳垸基、芳基、雜芳基、醯基、垸基磺醯和芳基磺醯，如果W和W在相同氮原子和不同時是氫時，它們是不同的，並且當W和W在相同氮上並且rS和W之一是酷基、烷基磺醯或者芳基磺醯時，另一個選自h、Q-8烷基、芳基、C卜4芳烷基，禾口雜芳基；RS選自H、Cl4院基、Q-4芳垸基、芳基和雜芳基；formulaseeoriginaldocumentpage12w選自和Q選自O和NR2;和每次出現的z獨立地選自c^烷基、02.6烯基和<:2.6炔基。47.根據權利要求46所述的化合物，其中W選自Z-Q-Z、烷基-N(R2)(R4)、-d.s垸基-OR3、芳基，雜芳基和CM芳烷基。48.根據權利要求46所述的化合物，其中芳基任選用選自Cw烷基，CF3，羥基，CM烷氧基、芳基，芳氧基，滷素，NR2R4，硝基，羧酸，羧酸酯和磺醯基的基團取代。49.具有式I結構的化合物或者其藥學可接受的鹽，Ri選自H、Z-Q-Z、《1.8烷基^(112)(114)、-CLs垸基-OR3、3-到8-元碳環或者雜環，芳基，雜芳基和CM芳烷基；每次出現的W和R"均是獨立選自H、d-4垸基、d-4芳垸基、芳基、雜芳基、醯基、烷基磺醯和芳基磺醯，如果W和R"在相同氮原子和不同時是氫時，它們是不同的，而當W和R"在相同氮上並且R2和R"之一是醯基、烷基磺醯或者芳基磺醯時，另一個選自H、d—8烷基、芳基、Ci-4芳烷基，禾口雜芳基；RS選自H、Cm院基、d-4芳烷基、芳基和雜芳基；W選自R4;Q選自O和NR2;禾口每次出現的Z獨立地選自Q.6烷基、<:2.6烯基和C2-6炔基。50.根據權利要求49所述的化合物，其中W選自Z-Q-Z、-C,.s垸基-N(R2)(R4)、《1.8烷基-0113、芳基，雜芳基和CM芳烷基。51.根據權利要求50所述的化合物，其中W選自Q—4芳垸基和醯基。formulaseeoriginaldocumentpage13其中:52.根據權利要求51所述的化合物，其中W是醯基。53.根據權利要求52所述的化合物，其中R4是-C(0)-d.3垸基-Y，Y選自H、垸基、烷氧基、芳氧基、芳基、雜芳基、雜芳氧基和環烷基。54.根據權利要求52所述的化合物，其中R4是-C(0)-d.3烷基-Y，Y選自芳氧基、芳基、雜芳基、雜芳氧基和環烷基。55.根據權利要求52所述的化合物，其中R4是-C(0)-d.3垸基-Y，Y選自芳氧基和雜芳氧基。56.—種鑑定候選抗腫瘤試劑的方法，包括a)在合適條件下將細胞與足量待測試劑接觸；和b)檢測待測試劑是否增強或者抑制emstin蛋白結合複合物組分的水平或者編碼erastin蛋白結合複合物組分的核酸的水平。57.根據權利要求56所述的方法，其中erastin結合蛋白是VDAC1，VDAC2，VDAC3，Prohibitin，核糖體結合糖蛋白，Sec61a或者Sec22b。58.根據權利要求56所述的方法，還包括a)將待測試劑與腫瘤細胞接觸；和b)檢測待測試劑是否抑制腫瘤細胞的生長。59.—種鑑定候選抗腫瘤試劑的方法，包括a)將待測試劑與erastin結合蛋白或者表達erastin結合蛋白的細胞接觸；和b)檢測待測試劑是否結合erastin結合蛋白。60.根據權利要求59所述的方法，其中erastin結合蛋白是VDAC1,VDAC2，VDAC3,Prohibitin，核糖體結合糖蛋白，Sec61a或者Sec22b。61.根據權利要求59所述的方法，還包括a)將待測試劑與腫瘤細胞接觸；和b)檢測待測試劑是否抑制腫瘤細胞的生長。62.根據權利要求56或者59所述的方法，其中待測試劑是小的有機分子。63.根據權利要求56或者59所述的方法，其中待測試劑是肽、蛋白、糖類或者核酸。64.根據權利要求56或者59所述的方法，其中對不同待測試劑的文庫重複所述方法。65.根據權利要求59所述的方法，其中待測試劑或者erastin結合蛋白用可檢測的標記物標記。66.根據權利要求65所述的方法，其中可檢測的標記物是生物素，螢光素，地高辛，綠色螢光蛋白(GFP)，同位素，多聚組氨酸，磁珠，或者穀胱甘肽S轉移酶(GST)。67.—種增加腫瘤細胞對化療劑敏感性的方法，包括將腫瘤細胞與減少或者增加erastin結合蛋白豐度的化合物接觸。68.根據權利要求67所述的方法，其中erastin結合蛋白是VDAC1，VDAC2，VDAC3，Prohibitin，核糖體結合糖蛋白，Sec61a或者Sec22b。69.根據權利要求67所述的方法，其中化療劑是權利要求46所述的化合物。70.—種降低正常細胞對化療劑敏感性的方法，包括將正常細胞與減少或者增加erastin結合蛋白豐度的化合物接觸。71.根據權利要求70所述的方法，其中erastin結合蛋白是VDAC1，VDAC2，VDAC3，Prohibitin，核糖體結合糖蛋白，Sec61a或者Sec22b。72.根據權利要求70所述的方法，其中化療劑是權利要求46所述的化合物。73.—種鑑定抑制不需要的細胞增殖的候選治療劑的方法，包括(a)將待測試劑與VDAC蛋白或者蛋白複合物混合，所述蛋白複合物包括至少一種VDAC蛋白和任選一種或多種其他蛋白；(b)檢測待測試劑是否結合VDAC蛋白；和(c)如果待測試劑結合VDAC蛋白，則將待測試劑與細胞接觸，並檢測待測試劑是否改變細胞的增殖。74.根據權利要求73所述的方法，其中待測試劑是小的有機分子、肽、蛋白、模擬肽、核酸或者抗體。75.根據權利要求73或者74所述的方法，其中通過物理結合試驗檢測VDAC蛋白與待測試劑的結合。76.—種降低腫瘤生長率的方法，包括給藥足以降低腫瘤生長率的一定量的治療劑，其中治療劑是(a)增強或者抑制VDAC蛋白水平的試劑；(b)增強或者抑制VDAC蛋白活性的試劑；(C)與VDAC蛋白結合的試劑；(d)結合、調節或者結合併且調節包括至少一種VDAC和任選一種或多種其他蛋白的蛋白質複合物的試劑；(e)包括VDAC多肽或者其功能性變體的試劑；或者(f)包括編碼VDAC多肽或者其功能性變體的核酸的試劑。77.—種治療癌症患者的方法，包括給藥患者一種治療劑，所述治療劑選自(a)增強或者抑制VDAC蛋白水平的試劑；(b)增強或者抑制VDAC蛋白活性的試劑；(c)結合VDAC蛋白的試劑；(d)結合、調節或者結合併且調節包括至少一種VDAC和任選一種或多種其他蛋白的蛋白質複合物的試劑；(e)包括VDAC多肽和其功能性變體的試劑；和(f)包括編碼VDAC多肽或者其功能性變體的核酸的試劑。78.根據權利要求76或者77所述的方法，其中VDAC蛋白是VDAC1、VDAC2或者VDAC3。79.根據權利要求76或者77所述的方法，其中待測試劑是小的有機分子、肽、蛋白、模擬肽、核酸或者抗體。80.根據權利要求76或者77所述的方法，其中試劑與一種藥學可接受的載體一起配製成製劑。81.根據權利要求76或者77所述的方法，其中所述試劑通過靜脈內、口服、頰、胃腸外、通過吸入噴霧、通過局部施用或者經皮膚給藥。82.根據權利要求76或者77所述的方法，其中試劑通過局部給藥方式給藥。83.根據權利要求76或者77所述的方法，還包括給藥至少一種其他的抗癌化療劑，所述化療劑與所述治療劑以累積或者協同作用的方式抑制癌細胞。84.具有式II結構的化合物或者其藥學可接受的鹽，formulaseeoriginaldocumentpage18其中Ar是取代的苯基；R1選自H、d.8烷基、-Z-Q-Z、垸基-N(R2)(R4)、烷基-OR3、3-到8-元碳環或者雜環，芳基，雜芳基，和d-4芳烷基；每次出現的R"和R"均是獨立選自H、dv烷基、Cm芳院基、芳基、雜芳基、醯基、烷基磺醯和芳基磺醯，如果W和R"在相同氮上並且f和R"之一是醯基、烷基磺醯或者芳基磺醯時，另一個選自H、Q—8烷基、芳基、Ci-4芳烷基，芳基禾口雜芳基；RS選自H、dV烷基、d-4芳垸基、芳基和雜芳基；RS代表在其相連的環上的0-4個取代基。W是或者Q選自0和NR2;禾口每次出現的Z獨立地選自Cw烷基、^.6烯基和C2—6炔基。85.具有式III結構的化合物或者其藥學可接受的鹽，w阿其中Ar是取代的苯基；R'選自H、-d.8烷基、-Z-Q-Z、-d.8烷基-N(R2)(R4)、-Q.8烷基-OR3、3-到8-元碳環或者雜環，芳基，雜芳基，和Cm芳蹤基；每次出現的W和R"均是獨立選自H、Cm院基、Cm芳院基、芳基、雜芳基、醯基、烷基磺醯和芳基磺醯，如果^和R"在相同氮並且^和W之一是醯基、垸基磺醯或者芳基磺醯時，另一個選自H、d.8烷基、芳基、C"4芳烷基，禾口雜芳基；RS選自H、Cm院基、d-4芳烷基、芳基和雜芳基；RS代表在其相鄰的環上的0-4個取代基。formulaseeoriginaldocumentpage20Q選自O和NR2;禾口每次出現的Z獨立地選自Cl6院基、C2V烯基和C2-6炔基。86.具有式IV結構的化合物或者其藥學可接受的鹽，formulaseeoriginaldocumentpage20其中Ar是取代的苯基；W是-d—8垸基；每次出現的W和W均是獨立選自H和d.s烷基;RM戈表在其相連的環上的0-4個取代基。W選自，或者Q選自0和NR287.具有式V結構的化合物或者其藥學可接受的鹽,R4、R2(V)其中W選自H和-d.s垸基；R2選自H和-d.s垸基;113選自滷素、垸氧基和-Q—8烷基；W選自H、滷素、垸氧基和-Q.s垸基；rs選自H、卣素和硝基；和n是1或者2。88.—種殺傷細胞，促進細胞死亡或者抑制細胞增殖的方法，包括對細胞給藥有效量的具有式I結構的化合物或者其藥學可接受的鹽，R/選自H、-Z-Q-Z、-d.8垸基-N(R2)(R4)、-(21_8烷基-0113、3-到8-元碳環或者雜環，芳基，雜芳基和cm芳垸基；每次出現的R3和R"均是獨立選自H、Cm院基、Cm芳院基、芳基、雜芳基、醯基、烷基磺醯和芳基磺醯，如果W和R"在相同氮原子和不同時是氫時，它們是不同的，而當W和R"在相同氮上並且R2和R"之一是醯基、烷基磺醯或者芳基磺醯時，另一個選自H、C^垸基、芳基、Cm芳院基，和雜芳基；W選自H、Cm焼基、CM芳烷基、芳基和雜芳基；Q選自0禾tlNR2;禾口每次出現的Z獨立地選自Qv烷基、(:2-6烯基和C2.6炔基。其中:w選自89.—種殺傷細胞，促進細胞死亡或者抑制細胞增殖的方法，包括對細胞給藥有效量的具有式II結構的化合物或者其藥學可接受的鹽，formulaseeoriginaldocumentpage23(II)其中Ar是取代的苯基；W選自H、-d.8烷基、-Z-Q-Z、-d.8烷基-N(R2)(R4)、-d.8垸基-OR3、3-到8-元碳環或者雜環，芳基，雜芳基，和Cm芳院基；每次出現的W和W均是獨立選自H、d-4烷基、Cm芳院基、芳基、雜芳基、醯基、垸基磺醯和芳基磺醯，如果W和R"在相同氮上並且^和114之一是醯基、烷基磺醯或者芳基磺醯時，另一個選自H、CV8烷基、芳基、Cm芳院基，芳基和雜芳基；W選自H、Cm院基、Cm芳焼基、芳基和雜芳基；RS代表在其相連的環上的0-4個取代基。w是formulaseeoriginaldocumentpage23或者formulaseeoriginaldocumentpage23Q選自0和NR2;和每次出現的Z獨立地選自Cl6院基、(:2.6烯基和Cw炔基。90.—種殺傷細胞，促進細胞死亡或者抑制細胞增殖的方法，包括對細胞給藥有效量的具有式III結構的化合物或者其藥學可接受的W其中(ni)Ar是取代的苯基；W選自H、-dV烷基、-Z-Q-Z、-C!.8垸基-N(R2)(R4)、-CL8烷基-OR3、3-到8-元碳環或者雜環，芳基，雜芳基，和Cm芳院基；每次出現的W和W均是獨立選自H、Cm院基、d-4芳垸基、芳基、雜芳基、醯基、烷基磺醯和芳基磺醯，如果W和R"在相同氮原子以及它們都是氫或者它們是不同的，而當W和R"在相同氮並且R2和R"之一是醯基、垸基磺醯或者芳基磺醯時，另一個選自H、d-s垸基、芳基、Cm芳院基，和雜芳基；W選自H、d—4垸基、d-4芳烷基、芳基和雜芳基；RS代表在其相連的環上的0-4個取代基。W選自Q選自0和NR2;每次出現的z獨立地選自Cl6院基、(:2.6烯基和<:2.6炔基；和其中Ar在喹唑啉酮環上氮鍵鄰位的位置沒有乙氧基取代基。91.一種殺傷細胞，促進細胞死亡或者抑制細胞增殖的方法，包括對細胞給藥有效量的具有式IV結構的化合物或者其藥學可接受的鹽，formulaseeoriginaldocumentpage25其中Ar是取代的苯基；R1是-C"8院基；每次出現的R2和R4均是獨立選自H和Cw烷基;RS代表在其相連的環上的0-4個取代基。formulaseeoriginaldocumentpage25W選自Q選自O和NR2。92.—種殺傷細胞，促進細胞死亡或者抑制細胞增殖的方法，包括對細胞給藥有效量的具有式V結構的化合物或者其藥學可接受的鹽，formulaseeoriginaldocumentpage26其中R1選自H和-C1-8烷基；R2選自H和-C1-8垸基；R3選自滷素、烷氧基和-C1-8烷基；R4選自H、滷素、垸氧基和-C1-8烷基；R5選自H、卣素和硝基;和n是l或者2。93.—種增加腫瘤細胞或者正常細胞對化療劑敏感性的方法，包括將所述細胞與權利要求46，84，85，86或者87所述的化合物接觸。94.一種在哺乳動物中治療癌症的方法，包括對哺乳動物給藥治療有效量的權利要求46，S4，85，86或者87所述的化合物或者其藥學可接受的鹽。95.—種殺傷細胞，促進細胞死亡或者抑制細胞增殖的方法，包括對細胞給藥(1)有效量的權利要求85，85，86或者87所述的化合物或者其藥學可接受的鹽，和(2)增加細胞中VDAC豐度的試劑。96.—種殺傷細胞，促進細胞死亡或者抑制細胞增殖的方法，包括對細胞給藥-(1)有效量的權利要求85，85，86或者87所述的化合物或者其藥學可接受的鹽，和(2)降低細胞中VDAC豐度的試劑。其中，HNR2相當於HW。Ar是取代的苯基；W選自H、-d.8烷基、-Z-Q-Z、-d.8烷基-N(R2)(R4)、-d.8烷基-OR3、3-到8-元碳環或者雜環，芳基，雜芳基，和CL4芳烷基；每次出現的f和W均是獨立選自H、Cm院基、Cm芳院基、芳基、雜芳基、醯基、垸基磺醯和芳基磺醯，如果W和R"在相同氮上時，它們或者都是氫或者是不同的，以及當112或114在相同氮上時，並且RZ和W之一是醯基、烷基磺醯或者芳基磺醯時，另一個選自H、d.8烷基、芳基、C"4芳烷基，禾口雜芳基；W選自H、Cw烷基、CM芳烷基、芳基和雜芳基；RS代表在其相連的環上的0-4個取代基。97.—種製備式F代表的化合物的方法formulaseeoriginaldocumentpage28每次出現的Z獨立地選自Q—6烷基、(:2.6烯基和C2.6炔基。全文摘要本發明涉及篩選結合伴侶的方法，尤其是erastin(例如VDACs，諸如VDAC3)生物活性必需的結合伴侶。本發明還提供利用erastin和相關化合物或者衍生物，例如化合物(I)有效殺傷癌細胞的試劑和方法。文檔編號C07D239/90GK101218211SQ200680009733公開日2008年7月9日申請日期2006年1月25日優先權日2005年1月25日發明者保羅·B·羅賓斯,基思·西門斯,尤金·陣,布倫特·R·斯託克韋爾,拉傑·葛佩爾·文卡特,約翰·M·佩爾特,羅伯特·R·貝克林,羅伯特·塞利亞,蘇迪爾·R·薩哈斯拉布德,莫裡茨·馮雷興貝格,辛迪·盧·徹帕諾斯克,齊龍武申請人:普羅歷克西醫藥品公司;懷特黑德生物醫學研究所;哥倫比亞大學(紐約)理事會