一種半夏中摻偽虎掌的鑑別方法與流程
2023-12-08 15:23:21 1
本發明涉及中藥材鑑別領域，具體涉及一種半夏中摻偽虎掌的鑑別方法。
背景技術：
：半夏為天南星科半夏屬植物半夏Pinelliaternata(Thunb.)Breit的乾燥塊莖。夏、秋二季採挖，洗淨，除去外皮和鬚根，曬乾。【性眛與歸經】辛、溫；有毒。歸脾、胃、肺經。【功能與主治】燥溼化痰，降逆止嘔，消痞散結。用於溼痰寒痰，咳喘痰多，痰飲眩悸，風痰眩暈，痰厥頭痛，嘔吐反胃，胸脘痞悶，梅核氣；外治癰腫痰核。半夏的偽品較多，其中天南星科的虎掌為其主要偽品之一。虎掌為天南星科半夏屬植物虎掌PinelliaePedatisectaSchott的乾燥塊莖。虎掌主治惡痢冷漏瘡，惡瘡癘風。氣味苦、辛、有毒。該物種為中國植物圖譜資料庫收錄的有毒植物，其毒性為塊莖有毒，含葫蘆巴鹼、膽鹼、環二肽類成分。虎掌經加工處理後，外觀與半夏極為相似，鑑別難度大，不法商販常在半夏中添加該藥材，非法謀取利益，嚴重損害半夏種植戶、半夏飲片生產企業利益，同時也嚴重影響半夏藥材質量、療效及用藥安全。因此，有必要探索到一種穩定可靠、簡單快捷的半夏中摻偽虎掌的鑑別方法。技術實現要素：為解決上述問題，本發明提供了一種半夏中摻偽虎掌的鑑別方法，包括以下步驟：(1)供試品溶液的製備：取待檢藥材，水提取，過濾或離心，取液體加酸，乙酸乙酯萃取，萃取液除去乙酸乙酯，加水復溶後過濾得供試品溶液；(2)供試品溶液的測定：取供試品溶液，注入高效液相色譜儀，檢測，得到供試品的高效液相色譜圖；色譜條件如下：色譜柱：C18色譜柱；流動相：流動相A為乙腈，流動相B為0.1％磷酸或磷酸鹽水溶液；流動相A的體積百分數為3～10％；流速：0.8～1.0mL/min；檢測波長210nm；(3)鑑別：供試品的高效液相色譜圖在保留時間10～15min的範圍內，如存在特徵峰，則含有虎掌，如無，則不含虎掌。進一步地，流動相A的體積百分數為3％，流速為0.8mL/min。進一步地，步驟(1)中，所述提取是超聲提取30～60分鐘，優選45分鐘。進一步地，步驟(1)中，所述水與待檢藥材的體積重量比為20mL：1g。進一步地，步驟(1)中，所述酸為甲酸、鹽酸或磷酸，優選磷酸。進一步地，步驟(1)中，所述酸為磷酸，磷酸的加入量與待檢藥材的體積重量比為0.1～0.5mL：1g。進一步地，步驟(1)中，乙酸乙酯的萃取次數為1～5次，優選4次；每次萃取的乙酸乙酯用量與待檢藥材的體積重量比為20～30mL：1g。進一步地，步驟(2)中，所述C18色譜柱為AgilentZORBAXEclipsePlusC18液相色譜柱，規格為4.6×250mm，5μm。進一步地，步驟(2)中，所述色譜條件的柱溫為25～40℃，優選40℃。進一步地，步驟(2)中，所述色譜條件的進樣量為5-25μL，優選20μL。試驗結果證明，本方法通過提取工藝和高效液相色譜方法的篩選，有效將半夏和虎掌中的各峰分離開來，找到了恰當的虎掌區別於半夏的特徵鑑別峰，既可用於半夏與虎掌或其炮製品的鑑別，也可用於半夏中摻偽虎掌及其炮製品的鑑別。本發明方法穩定可靠、簡單快捷，可以有效監控半夏藥材質量，保障了其療效及用藥安全，具有廣闊的市場應用前景。顯然，根據本發明的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離本發明上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發明上述主題的範圍僅限於以下的實例。凡基於本發明上述內容所實現的技術均屬於本發明的範圍。附圖說明圖1為10批不同來源半夏的色譜圖，S1～S10分別對應BX-1～BX-10的半夏藥材。圖2為6批不同來源虎掌的色譜圖，S1～S6分別對應HZ-1～HZ-6的虎掌藥材。圖3為虎掌和半夏的對比色譜圖，S1：半夏，S2：虎掌；箭頭所示為特徵峰。圖4半夏、虎掌及半夏偽品炮製品色譜圖，S1：半夏；S2：姜半夏(偽品)；S3：清半夏(偽品)；S4：法半夏(偽品)；S5：虎掌；箭頭所示為特徵峰。圖5為虎掌藥材不同流動相系統色譜圖，S1：乙腈-甲酸系統；S2：乙腈-磷酸系統；S3：乙腈-磷酸鹽系統；箭頭所示為特徵峰。具體實施方式半夏藥材來源如下所示：編號藥材來源BX1半夏四川南充BX2半夏四川成都BX3半夏四川南充BX4半夏四川涼山州BX5半夏四川成都BX6半夏湖北荊門BX7半夏甘肅隴南BX8半夏甘肅天水BX9半夏甘肅天水BX10半夏四川南充虎掌藥材來源如下所示：編號藥材來源HZ-1虎掌河北1HZ-2虎掌河北2HZ-3虎掌黑龍江1HZ-4虎掌河北3HZ-5虎掌河北4HZ-6虎掌黑龍江2半夏偽品炮製品：姜半夏(偽品)、清半夏(偽品)、法半夏(偽品)，將虎掌藥材生品按照據《中國藥典》(2015年版一部)姜半夏、清半夏、法半夏的炮製方法，分別製成姜半夏(偽品)、清半夏(偽品)、法半夏(偽品)。試劑：乙腈(色譜純，sigma)；乙酸乙酯(色譜純，sigma)；甲酸、鹽酸、磷酸(分析純，成都市科龍化工試劑廠)；磷酸鹽系統：0.03mmol/L磷酸二氫銨溶液，磷酸調pH至2；水為超純水。實施例1本發明方法鑑別半夏和虎掌1、供試品溶液的製備取半夏或虎掌藥材粉末1g，加水20mL，超聲提取30min以上，濾過或離心，取澄清提取液10mL，加磷酸0.1mL，乙酸乙酯萃取4次，每次20～30mL，回收乙酸乙酯，殘渣加5mL水溶解，過微孔濾膜，即得。2、色譜條件流動相：A(乙腈)-B(0.1％磷酸)(3:97)色譜柱：AgilentZORBAXEclipsePlusC18液相色譜柱(4.6×250mm，5μm)；流速：0.8mL/min；檢測波長：210nm；柱溫：40℃；進樣量：20μL。3、結果(1)10份不同來源半夏樣品色譜圖如圖1所示。(2)6份虎掌樣品色譜圖如圖2所示。(3)虎掌和半夏的對比色譜圖如圖3所示。在10～15min範圍，虎掌有一個區別於半夏的特徵峰，可用於半夏與虎掌的鑑別。(4)炮製品的鑑別參照《中國藥典》(2015年版一部)，將虎掌生品按照與半夏各種炮製品(姜半夏、清半夏、法半夏)相同的炮製方法進行處理，得到姜半夏、清半夏、法半夏的偽品炮製品，結果如圖4所示。鑑定結果同生品一致，在10～15min範圍，偽品炮製品依然有該特徵峰。通過以上鑑別，找到了虎掌區別於半夏的特徵峰，可有效的用於虎掌鑑別，也可用於半夏生品或炮製品中摻偽虎掌的情況。實施例2本發明方法的工藝篩選1、提取方法考察(1)料液比稱取虎掌樣品1g，提取溶劑水用量分別為20mL、30mL、40mL，超聲提取，分別取10mL澄清提取液，加酸0.1mL，乙酸乙酯萃取，回收溶劑，5mL水溶解，過微孔濾膜，上樣。結果如表1所示。表1不同料液比考察料液比1:201:301:40峰面積17410775換算峰面積174160150結果顯示，提取效果以料液比為1:20峰面積最高，提取效果最好。(2)提取時間的考察稱取虎掌樣品1g，加水20mL，超聲提取，提取時間分別為30min、45min、60min，分別取10mL澄清提取液，加酸0.1mL，乙酸乙酯萃取，回收溶劑，5mL水溶解，過微孔濾膜，上樣。結果如表2所示。表2提取時間考察提取時間30min45min60min峰面積124143133結果顯示，以超聲提取45min峰面積最大，提取效果最好。(3)酸的選擇稱取虎掌樣品1g，加水20mL，超聲提取，取10mL澄清提取液，分別加甲酸、鹽酸、磷酸0.1mL，乙酸乙酯萃取，回收溶劑，5mL水溶解，過微孔濾膜，上樣。結果如表3所示。表3酸的選擇酸的種類甲酸鹽酸磷酸峰面積126143144結果顯示，加鹽酸或磷酸後峰面積最大，均可使用。因鹽酸具有揮發性和刺激性，優選酸性中等磷酸。(4)磷酸用量的考察稱取虎掌樣品1g，加水20mL，超聲提取，取10mL澄清提取液，分別加磷酸0.1mL、0.2mL、0.5mL，乙酸乙酯萃取，回收溶劑，5mL水溶解，過微孔濾膜，上樣。結果如表4所示。表4磷酸用量的選擇磷酸用量0.1mL0.2mL0.5mL峰面積140147143結果顯示，考察的3種磷酸用量之間無顯著差異，故加磷酸0.1mL。(5)萃取次數考察稱取虎掌樣品1g，加水20mL，超聲提取，取10mL澄清提取液，加酸0.1mL，用乙酸乙酯分別萃取1、2、3、4、5次，每次20mL，合併乙酸乙酯，回收溶劑，殘渣加5mL水溶解，過微孔濾膜，上樣。結果如表5所示。表5萃取次數考察萃取次數12345峰面積73116142158154結果顯示，萃取4次後，基本可以萃取完全。2、色譜條件的考察(1)檢測波長經全波長掃描，特徵鑑別峰最大吸收波長為210nm，故檢測波長設定為210nm。(2)流動相考察考察了乙腈-磷酸鹽系統(3:97)、乙腈-磷酸系統(3:97)、乙腈-甲酸系統(3:97)，結果如圖5所示。可以看出，乙腈-甲酸系統色譜峰峰形較差，基線不平穩；乙腈-磷酸鹽系統及乙腈-磷酸系統均可以較好實現特徵峰的鑑別。(3)柱溫的考察分別考察25℃、30℃、35℃、40℃。結果如表6所示。表6柱溫考察柱溫25℃30℃35℃40℃峰面積143142144140峰高5.46.37.48.1峰寬0.400.350.300.26對稱因子0.750.750.750.75綜合考慮多個因素，柱溫優選40℃。(4)進樣量的考察分別考察進樣量為5、10、15、20、25μL。結果如表7所示。表7進樣量的考察進樣量(μL)510152025峰面積3772104141174峰高2.14.76.48.110.4綜合考慮到峰面積、色譜柱的耐用性，選擇了進樣量20μL。(5)重複性試驗取同一批樣品1.0g，共取5份，精密稱定，制定5份供試品溶液，分別測定。結果如表8所示。表8重複性試驗結果重複性實驗12345RSD％峰面積140.5145.0141.7143.9146.91.78結果顯示，本發明方法重複性好。(6)穩定性試驗取同一供試品溶液於不同時間，分別進樣20ul，測定。結果如表9所示。表9穩定性試驗結果時間(小時)048121824RSD％峰面積139.9143.3140.5141.1139.9144.11.28結果顯示，本發明方法穩定性高。綜上所述，本方法通過提取工藝和高效液相色譜方法的篩選，有效將半夏和虎掌中的各峰分離開來，找到了恰當的虎掌區別於半夏的特徵鑑別峰，既可用於半夏與虎掌或其炮製品的鑑別，也可用於半夏中摻偽虎掌及其炮製品的鑑別。本發明方法穩定可靠、簡單快捷，可以有效監控半夏藥材質量，保障了其療效及用藥安全，具有廣闊的市場應用前景。當前第1頁1 2 3