預防或治療過敏的方法

2023-12-08 04:07:46 3

專利名稱：：預防或治療過敏的方法
技術領域：
：本發明涉及對患食物過敏的病人抑制由食物引發的過敏反應的方法和途徑。本發明尤其提供了預防或治療過敏症，特別是嬰兒的牛奶過敏症的方法。本發明也涉及研製用於帶有消化道屏障功能損害的過敏嬰兒的特殊配方。牛奶過敏症(CMA)被定義為對牛奶蛋白的一種免疫介導的不良反應。本選擇的治療是徹底除去牛奶抗原。對於有CMA的嬰兒，當不能獲得人奶時，有必要用一種替代配方。基於從牛奶中獲得的乳清或酪蛋白的水解配方，被用於來提供足夠的營養並有減少的抗原負荷。對牛奶的初步熱處理主要影響蛋白的構象，並且使它們易於水解。用胃蛋白酶，胰蛋白酶，胰提取物和腸黏膜提取物的隨後的酶水解導致順序抗原決定基的逐漸破壞和將配方精製為最少的抗原和過敏形式。大多數情況下，可安全地採用徹底水解的牛奶衍生配方，這些有效且在臨床和代謝上有好的耐受性。但是，酶水解不一定使配方非過敏，因為最佳的水解程度不知道且在水解物中可以測到微量的最初蛋白。因此要小心地將這些替代物引入有牛奶過敏症的小孩。通過除去抗原來控制過敏性炎症的方法不能令人滿意，尤其是對患有多種食物過敏的患者(Sampson等，1992)。這些患者經常表現出增強的腸滲透性和腸防禦屏障的機能異常(Majamaa等，1996，Majamaa和Isolauri，1996)。這增大了生長紊亂和對多種食物敏化的危險性。迫切需要有新方法來治療牛奶過敏以提高CMA中替代物配方。腸抗原處理決定著隨後的對抗原的免疫反應。在健康方面，抗原沿著二條功能路徑而越過上皮被吸收。主要路徑是降解性地減少了抗原的免疫原性，次要路徑可以運輸對於特定抗原免疫反應關鍵的完整的蛋白質。異常的抗原吸收提高了致敏過程(Fargeas等，1995)。在免疫反應中通過T輔助細胞(Th)的細胞因子的產物差別對免疫反應本質有重要的調控效應。天然的免疫反應的細胞因子輪廓決定著隨後的特定的免疫反應的表現型。除了控制IgE的合成外，IL-4對於Th2表現型，過敏炎症的特徵的發育和成熟是關鍵的。這個過程對於發展對攝入的蛋白的耐受性是關鍵性的。口服耐受性是一種抗原-特異的全身性非反應狀態，其特徵是局部抗原-特異性的IgA反應。分離的人腸菌株，乳桿菌菌株GG(LactobacillusGG，ATCC53103)最近已表現出提高局部IgA的抗腸道中遇到的飲食的抗原的反應性，因而有助於免疫消除(Isolauri等，1993)。但是還不知道特定的腸細菌菌株是否能直接改變食物抗原的免疫原性，因而抑制過敏反應。健康腸的微生物群中包括乳桿菌。有假定認為在腸道中乳桿菌通過與腸黏膜上的病原的微生物競爭受體和營養來起作用。益生的(probiotics)製劑是活的微生物製品，它通過維持消化道中的天然的微生物群落來提高健康。如果起作用的微生物和它們的行為模式已知，那麼可將一種微生物製品認作是一種益生製劑。這些益生製劑附著於腸黏膜上，集居於人的腸道，阻止了有害微生物的附著。一個關鍵的假設是它們到達消化道的黏膜並且在胃腸道的上部不被破壞。乳桿菌GG就是有益生製劑特性的已知的細菌之一。本發明者現在已發現胃腸道中的某些細菌，尤其是乳桿菌和有益生製劑特性的細菌，可用於增強清除飲食(eliminationdiets)的功效，提高口服耐受性，預防和治療病人的食物引起的過敏性。本發明的一個方面是用上述的胃腸的細菌進行蛋白水解獲得的蛋白水解物也可用於達到所說的目的。在這裡我們表明根據本發明所得的蛋白水解物有提高低變應原性的免疫學效應。此水解物抑制過敏性反應，因而提高消化道免疫屏障機能，即穩定消化道黏膜屏障。本發明提供了一種改進的蛋白質水解物的配方，這種配方抑制過敏性反應且提高消化道免疫屏障機能。用從益生製劑的胃腸細菌中獲得的酶，尤其是有附著和集居(colonizing)特性以及與那些乳桿菌GG(ATCC53103)菌株相似的蛋白酶體系的乳桿菌，和胰蛋白酶和/或胃蛋白酶來水解蛋白質，可以獲得水解物配方。另外，本發明的蛋白質水解配方可通過胰蛋白酶和/或胃蛋白酶水解蛋白，且加入到水解物中獲得，這樣就得到了一種細菌製劑，它包含益生製劑的胃腸細菌，尤其是有附著和集居特性和與同那些乳桿菌GG菌株(ATCC53103)相似的蛋白酶體系的乳桿菌。將這些細菌加入到水解物配方中，優選地作為一種凍幹的製品。當對病人用這種水解物配方時，期望正在水解的細菌酶在體內釋放，藉此獲得的效果與用以上所定義的改進的水解物配方相同。而且，活的細菌穩定消化道黏膜屏障，增強了局部防禦。本發明的一個實施方案是預防或治療嬰兒由食物引起的過敏反應的一個方法，它包含的步驟是對處於危險中的嬰兒給予本發明的改進的蛋白質水解物配方，或是給予一種蛋白質水解物的配方，同時用包含益生製劑的胃腸細菌，尤其是乳桿菌的細菌製品，這種乳桿菌有附著和集居特性，以及同那些菌株乳桿菌GG(ATCC53103)相似的蛋白酶體系。本發明的一個進一步實施方案是治療病人牛奶過敏的一個方法，它包含對病人給予本發明的改進的蛋白質水解物的配方，或是實施一種蛋白質水解物的配方，同時使用包含益生製劑的胃腸細菌，尤其是乳桿菌的細菌製品，這種乳桿菌有附著和集居特性，以及同那些菌株乳桿菌GG(ATCC53103)相似的蛋白酶體系。本發明也提供了提高病人對食物抗原耐受原的免疫反應的一種方法，這包括對病人口服本發明的改進的蛋白質水解物的配方，或口服一種包含益生製劑的胃腸細菌，尤其是乳桿菌的細菌製品，這種乳桿菌有附著和集居特性，以及同那些菌株乳桿菌GG(ATCC53103)相似的蛋白酶體系，或是口服一種蛋白質水解物的配方，同時用包含益生製劑的胃腸細菌，尤其是乳桿菌的細菌製品，這種乳桿菌有附著和集居特性，以及同那些菌株乳桿菌GG(ATCC53103)相似的蛋白酶體系。在本發明以上所定義的方法中，當一種蛋白質水解物的配方與前面所定義的選擇的益生製劑的細菌結合使用時，這樣的配方可以是任何合適的蛋白質水解物配方，已知的或新穎的。它可以是部分的蛋白水解物，或是一種徹底的水解的配方。適合於此目的的蛋白質水解物的製備公開於如EP專利申請No.601802中。用於本發明的配方和方法中的優選的細菌是乳桿菌GG(ATCC53103)。在本說明書和所附的權利要求書中，片語「細菌，尤其是有附著和集居特性，以及同那些菌株乳桿菌GG(ATCC53103)相似的蛋白酶體系的乳桿菌」應該理解為其附著和集居特性與那些LGG菌株相當的細菌，例如EP專利199535中定義的。這些細菌也被設想為與LGG有相同的酶體系，這意味著從這種細菌中獲得的酶能把蛋白質降解產生水解產物，這與那些從LGG中衍生的酶獲得的效果一樣。縮寫CI置信區間IFN-γ幹擾素-γIgA免疫球蛋白AIgE免疫球蛋白EIL-4白細胞介素-4LGG乳桿菌GG(ATCC53103)OKT3抗CD3抗體PBMC外周血單核細胞TNF-α腫瘤壞死因子-αWF受到徹底水解的乳清配方的測試組WF-GG受到徹底水解的乳清配方和LGG製品的測試組P/T-酪蛋白(casein)＝由胃蛋白酶和胰蛋白酶水解的酪蛋白P/T-αS1-酪蛋白(casein)＝由胃蛋白酶成胰蛋白酶水解的αS1-酪蛋白圖1A-1D體外由有絲分裂原引起的PBMCs的增殖反應，分別對於P/T-酪蛋白(1A)，P/T-αS1-酪蛋白(1B)，用LGG衍生的酶額外水解的P/T-酪蛋白(1C)，用LGG衍生的酶額外水解的P/T-αS1-酪蛋白(1D)。結果表達為對無水解的產物(PHA-RPMI1640)和有三種濃度(0.1，10和1000微克/毫升)下的水解產物的培養物每分鐘的平均計數。水平線代表6個實驗的每分鐘的幾何平均計數，對每一個個體計數相同。圖2每個患者特應性皮炎的臨床值(SCORAD)和其程度中值(A)，強度中值(B)和主觀值(C)，以上值是對嬰兒在處理前(O)和用徹底水解的乳清配方(WF)或同樣的用徹底水解的乳清配方和乳桿菌GG(WF-GG)處理一個月後的值(I)。圖3酪蛋白和乳桿菌GG降解的酪蛋白對特異反應性的患者(a，b)和在非特異反應性的健康孩子由PBMC的IL-4產物和IFN-γ產物的影響。白柱代表的是在對照培養物中中值細胞因子產物；黑柱代表在含有純化的酪蛋白的培養物中；陰影柱代表在含有乳桿菌GG降解的酪蛋白的培養物。橫切線代表上部和低處的四分位數。*統計學意義上對比於空白樣培養物是顯著的雙向(pairwise)。圖4αS1-酪蛋白和乳桿菌GG降解的αS1-酪蛋白對由PBMC的IL-4產物和IFN-γ產物的影響，這是在特異反應性的患者(a，b)和非特異反應性的健康孩子。白柱代表在對照培養物中的中值細胞因子產物；黑柱代表在含有純化的αS1-酪蛋白的培養物中的；陰影柱代表在含有乳桿菌GG降解的αS1-酪蛋白的培養物中的。橫切線代表上部和低部的四分位數(quartiles)。*統計學意義上對比到對照培養物明顯的雙向下面的實施例進一步闡明本發明。描述了製備改進的水解物的方法，和本研究中可以觀察到表現出良好的治療效應的實驗。實施例1用乳桿菌GG獲得的酶水解的牛酪蛋白在體外抑制淋巴細胞增殖1.a.牛奶蛋白的水解牛的全部酪蛋白和酪蛋白組分(αS1-酪蛋白)從牛奶中提純(Syvaoia，1992)。用以乳桿菌GG中獲取的酶混合物的水解對酪蛋白和αS1-酪蛋白分別進行。用改進的Exterkate和deVeer，1985的方法來分離酶。簡而言之，通過對冷凍的細菌細胞超聲處理釋放出酶。分離出離心的細胞的上層清液，將其用在對酪蛋白和αS1-酪蛋白的水解中，水解於34℃下進行24小時。如此所得的GG-水解物進一步用胃蛋白酶和胰蛋白酶水解。簡單地，樣品首先用0.1摩爾/升鹽酸中含0.1％的胃蛋白酶溶液在37℃下水解3小時，其溶液pH值為2.5。用250毫克碳酸氫鈉和2摩爾/升氫氧化鈉調節pH值後，加入0.1％的胰蛋白酶，它們在37℃，pH8.0下水解5小時。P/T-酪蛋白和P/T-αS1-酪蛋白樣品通過只用胃蛋白酶和胰蛋白酶如上所述那樣水解純化的酪蛋白和αS1-酪蛋白而獲得，只是不用GG-水解過程。1.b.淋巴細胞轉化測試要對有絲分裂原誘導的淋巴細胞轉化的全血液微量法做一個變更。本實驗需6至8個健康的自願者作供血者。簡單地，獲得肝素抗凝的靜脈血液，並用含有抗菌素的RPMI1640培養介質(GrandIslandBiologicalCo.NY.USA)將其稀釋為1∶7。植物凝集素(PHA)(DifcoLaboratories，Detroit，Mich.，USA)用含抗菌素的RPMI1640進行稀釋，培養液中其最終的濃度範圍是5到1250微克/毫升。酪蛋白和αS1-酪蛋白的凍幹水解物用RPMI1640進行稀釋到其最終濃度為0.1微克/毫升(低)，10微克/毫升(中等)和1000微克/毫升(高)，已證明在用伊紅的染料排斥研究中對T細胞是無毒的。採用2套實驗研究有絲分裂原引起的外周血單核細胞(PBMCs)的增殖反應，對於(A)用胃蛋白酶和胰蛋白酶水解的酪蛋白(＝P/T-酪蛋白)，(B)用胃蛋白酶和胰蛋白酶水解的αS1-酪蛋白(＝P/T-αS1-酪蛋白)，(C)另外用乳桿菌GG中獲得的酶水解的P/T-酪蛋白，和(D)另外用從乳桿菌GG中獲得的酶水解的P/T-αS1-酪蛋白。實驗包含了四種對照培養物，它們是培養介質和有絲分裂原的不同稀釋物，而且相應的測試培養液是三種不同濃度的25微升的水解產物。檢測如Sutas等，1996中所描述那樣進行。有絲分裂原引起的PBMCs增殖反應以扣除本底後每分鐘的計數表示。給出對於含125微克/毫升的PHA和RPMI1640的對照培養液和含有125微克/毫升的PHA及在低、中、高濃度下的水解產物的三個測試培養液的結果。1.c.統計分析用一種非參數的配對檢驗(Wilcoxonsigned-rank測試)來對比每個測試培養介質與那些對照培養介質中每分鐘計數值的變化。顯著水平P＜0.05。根據測試培養介質中每分鐘計數值的減少或增大，雙向比較的明顯結果表示為抑制或刺激作用。1.d.結果在用乳桿菌中獲得的酶的水解P/T-酪蛋白和P/T-αS1-酪蛋白所做的實驗中，同用P/T-酪蛋白和P/T-αS1-酪蛋白(圖1A和圖1B)相比，在0.1，10和1000微克/毫升(p＝0.03，p＝0.03，和p＝0.03)(圖1C和圖1D)的有絲分裂原引致的PBMCS的增殖明顯被抑制。實施例2.用乳膠菌補加的蛋白質水解物配方來治療有特應性皮炎的嬰兒2.a.患者和研究設計此研究包含31名嬰兒，年齡從2.5到15.7(平均為8)個月，他們符合孩子特異反應性溼疹的Hanifin標準(Hanifin，1987)。根據特異反應性溼疹他們被歸於兒科診所並被懷疑是牛奶過敏。這種症狀的平均開始時間為2.4個月，哺乳期為5.9個月。在第一級親屬中有特異反應性疾病(哮喘，特應性溼疹和過敏性鼻炎)或食物過敏的陽性家族史的有26(佔84％)位患者。溼疹病斑用潤膚劑和局部的皮質類固醇來處理。但是沒有一位患者接受全身性皮質類固醇治療。除了特應性溼疹外，9位患者(佔19％)可發現有胃腸紊亂，如拉稀，嘔吐或腹瀉。在完成研究期間後，將這些患者進行雙盲空白對照劑對照的牛奶刺激實驗。只有那些有陽性反應的(27/31)包括於最終的研究人口中。將這些患者在一個月隨機地分為兩組。一組(WF，n＝14)接受徹底水解的乳清配方(ValioLtd，Helsinki，Finland，EP-A-601802)，另一組(WF-GG，n＝13)接受同樣的配方，只是其中另有乳桿菌GG製品(5×108cfu/g)(由ValioLtd，Helsinki，Finland提供)。在用他們指定的配方治療一個月後，這兩組都接受一種徹底水解的乳清配方(ValioLtd)再額外治療一個月。在飲食前，測定所有患者的血清總IgE濃度，牛奶特定的IgE(RAST，pharmacia，Uppsala，瑞典)和皮刺試驗。用一種市售的牛奶過敏原ALK(AllergologiskLaboratorium，Horsholm，丹麥)和稀釋到正常進食濃度測試配方來在前臂手掌面進行皮刺試驗。用一個1毫米單峰有鈍邊小刀以防止較深的刺穿(ALK)，以每毫升10毫克的二鹽酸組胺(ALK)作為陽性對照。15分鐘後觀察反應，如果刺痕的平均直徑至少是3毫米，而同時陰性對照僅0毫米，那麼將組胺反應尺寸一半或以上的反應記錄為陽性。在實驗開始前，一個月後(相當於研究期間)和二個月後，收集糞便樣品以測定α-1抗胰蛋白酶和THF-α。根據由EuropeanTaskForce對特應性皮炎建立的SCORAD方法(1993)，評價特應性皮炎的嚴重程度。簡單地說，皮炎的程度(scoreA)用九級規則(ruleofnines)來評估，皮炎的強度(scoreB)是紅斑，浮腫，和/或丘疹、脫皮，地衣化和乾燥的單個值的總和。主觀值(scoreC)表現形式(scored1-10)包括瘙癢和睡眠損失是由父母的評估來確定的。SCORAD由下式計算出A/5+3.5×B+C此研究方案得到了Tanpere大學醫院倫理檢查委員會的批准。徵得了嬰兒父母的同意。2.b.糞便樣品中α-1抗胰蛋白酶的測定冷凍的糞便樣品在室溫下融化並攪勻，取約1克放入玻璃試管中並凍幹。將所得的乾材料研磨，將50毫克轉入一隻Eppendorf試管中，加入1毫升0.15M的氯化鈉溶液，在一個渦旋混合器中在室溫下劇烈混合20分，提取α-1抗胰蛋白酶。所得懸浮液以25,000g離心10分鐘除去殘渣，將上層清液用於測定α-1抗胰蛋白酶，其使用的是根據製造商說明書的BehringBNA濁度計。結果表示為每克幹凍幹的糞便中抗胰蛋白酶的毫克數。2.c.糞便樣品中TNF-α的測定深凍的糞便樣品在室溫下融化，懸浮於1∶1(w/v)的生理鹽水中，使其沉澱下來。將0.5-1.0毫升的上層清液轉到一Eppendorf試管中在25,000g下離心十分鐘，然後，將此上層清液用於測定TNF-α。使用一種商品化的酶免疫分析藥盒(HumanTNF-αELISAKit，EndogenInc.，Boston，Massachusetts，USA)，如在血清樣品所示的那樣以測定糞便的TNF-α。2.d.統計學因為血清IgE濃度的非對稱分布，因而用對數(ln)轉變且數據以置信區間(CI)為95％的平均值給出。炎性參數的濃度以較低和較高四分位數的中值給出。將Wilcoxonsignedrank測試和Mann-WhitneyU-測試用於統計比較中。2.e.結果2.e.1臨床資料平均(95％CI)血清總IgE為31(15-61)kU/1，這是對接受水解物配方的病人而言的。在10/37(37％)的特應性溼疹患者中，牛奶的RAST是陽性的(＞0.4kU/l)。在8/31(30％)的患者中，牛奶的皮刺測試為陽性的。在開始用藥前以及用藥1個月後，即研究期間後，每個患者中特應性皮炎的嚴重性表現於圖2中。在用藥前，WF組和WF-GG組的中(低四分位數-高四分位數)SCORAD值分別為21(14-31)和26(17-38)且(p＝0.33)。在那些用乳桿菌GG的患者中，一個月後，其SCORAD值有明顯的提高(p＝0.008)，但對那些僅用徹底水解的配方而無乳桿菌GG的患者，一個月後，其SCORAD值無明顯增加(p＝0.89)。這時，WF組的SCORAD值為19(13-31)，而WF-GG組的SCORAD值為15(7-28)。WF-GG的SCORAD值下降是由於特應性皮炎，程度(scoreA，p＝0.004)，強度(scoreB，p＝0.05)和主觀值(scoreC，p＝0.01)的下降(圖2)。在WF組中，2個月可以實現SCORAD值的增加，而對WF-GG組在停止施用乳桿菌GG後，SCORAD值保持不變。在2個月時，中(低四分位數-高四分位數)SCORAD值在WF組是14(2-38)而WF-GG組是16(6-25)。2.e.2.糞便中的α-1抗胰蛋白酶和TNF-α的濃度。在健康的對照(n＝9)中，α-1抗胰蛋白酶中值(低四分位數-高四分位數)濃度是0.5(0.5-1.7)毫克/克。在施藥前，WF組和WF-GG組之間的α-1抗胰蛋白酶濃度是相當的(p＝0.22)。如表1中指示的，在一個月的研究期間中，WF-GG組的α-1抗胰蛋白酶濃度明顯下降(p＝0.03)，但WF組中的α-1抗胰蛋白酶濃度卻無明顯下降(p＝0.68)。在二個月時，α-1抗胰蛋白酶濃度對WF為1.2(0.5-1.6)而WF-GG為0.5(0.5-0.7)。在健康的對照中，糞便的TNF-α濃度為0(0-0.08)皮克/克。在特異反應性的孩子中，糞便的TNF-α濃度明顯較高，P＜0.0001(表1)。施藥前，WF組和WF-GG組間TNF-α的濃度是相當的(p＝0.57)。在一個月的研究期間中(表1)，糞便的TNF-α濃度對於WF-GG組明顯下降(p＝0.003)，但WF組中不是這樣(p＝0.38)。在2個月時WF組的TNF-α濃度下降，而在也施用徹底的水解配方但無乳桿菌GG的WF-GG組，可以測到TNF-α增加的趨勢。此時TNF-α的濃度在WF中為84(25-129)而WF-GG中為144(20-338)表1在用藥前(0)和嬰兒接受徹底水解的乳清配方(WF)或還含有乳桿菌GG細菌的配方(WF-GG)一個月後的情況(I)下糞便的α-1抗胰蛋白酶和TNF-α的濃度，數據表示為中值(低四分位數-高四分位數)。實施例3通過特異反應性孩子中的外周血單核細胞抑制細胞因子產物3.a患者和方法研究了總共有14名年齡為5-29(平均為16)個月的患者，他們符合特應性皮炎的Hanifin標準(Hanifin，1987)，另外有8名年齡相符的非特異反應的健康兒童。在研究期間，他們中沒有一人接受全身性的皮質類固醇。含有腹水流體的OKT3(抗-CD3-抗體)是由芬蘭赫爾辛基的赫爾辛基大學的細菌學和免疫學系的M.Kaartinen博士惠贈。如Syvaoja(1992)所敘述的那樣，牛的全酪蛋白從牛奶中純化而來。純化的酪蛋白是用實施例1中描述的從乳桿菌GG中獲得的酶來水解的。將純化的酪蛋白或乳桿菌GG降解的酪蛋白凍幹並貯於室溫中。在實驗前，它們用RPMI1640來稀釋並且應用過濾消毒裝置(0.1μm，Milliporecorporation，Bedford，MA，USA)。完全的培養介質由含有10％的胎牛血清，10mMHepes緩衝液，2mML-穀氨醯胺(GibcoLifeTechnologies，Paisley，UK)，50U/ml的青黴素G(Sigma，St.Louis，MO，USA)，10mg/ml慶大黴素素(RousselLaboratoriesLtd，Uxbridge，Middlesex，UK)的RPMI1640所組成。取得5ml的周圍靜脈血液。含有90％的淋巴樣細胞的PBMC用FicollPaque(PharmaciaBiotech，Uppsala，Sweden)梯度離心，並以1×106細胞/毫升懸浮於完全的培養介質中。用含有腹水流體的抗-CD3-抗體以預測定的最佳稀釋度預先塗到培養孔上。測試培養液還含有酪蛋白或乳桿菌GG降解的酪蛋白的稀釋物，它們的最終濃度為1mg/ml。對純化的αS1-酪蛋白或乳桿菌GG降解的αS1-酪蛋白，重複以上的實驗。在一溼潤的含5％的二氧化碳37℃下培養24小時後，收集上層清液，貯於-70℃下以用於細胞因子分析。根據製造商的說明，用商購的ELISA試劑盒來測定培養物上層清液中的IL-4和IFN-γ(IL-4CLB，CompactHumanInterleukin-4ELISAKit，CentralLaboratoryoftheNetherlandsRedCrossB1oodTransfusionService，Amsterdam，TheNetherlands；IFN-γ，EIFNG，EndogenInc.，Cambridge，MA，USA)。比較於標準曲線，不同途徑所得的結果相等，並以皮克/毫升表示。此檢測的靈敏度對IL-4為2.3皮克/毫升，而IFN-γ為5皮克/毫升。Wilcoxonsigned-rank測定用於統計比較測試培養物和對照培養物。顯著性水平為p＜0.05。3.b.結果在特異反應性患者中，與對照培養液相比，含有純化的酪蛋白的培養液中的IL-4和IFN-γ產物均有增加，它們p值分別為0.008和0.008(圖3a，b)。當用乳桿菌GG的酶降解時，牛酪蛋白中觀察不到這種效應。相反，在含有乳桿菌GG降解的酪蛋白的培養液中，IL-4產物比對照的培養液中的明顯減少，p＝0.003(圖3a)，而這些培養液中IFN-γ產物與對照培養液中的相當，p＝0.10(圖3b)。在健康的兒童中，含有純化的酪蛋白的培養液中的IL-4和IFN-γ產物均與對照培養液中的相當，p＝0.10和p＝0.10(圖3c，d)。與特異反應性的患者的發現相平行，對健康兒童在含有乳桿菌GG降解的酪蛋白的培養液中，同對照培養液中相比，IL-4產物也明顯要少，p＝0.01(圖3c)，而這些培養液中IFN-γ產物與對照培養物中的保持相當，p＝0.50(圖3d)。用αS1-酪蛋白和乳桿菌降解的αS1-酪蛋白可以獲得平行的結果(圖4)。參考文獻關於特應性皮炎的歐洲任務。特應性皮炎的嚴重性的評估theSCORAD指標。皮膚病學1993；18623～31。ExterkateF和deVeerG.由鏈球菌cremoris的細胞壁蛋白酶對酪蛋白的不完全分離和降解。實用環境微生物學1985；49328-32。FargeasMJ，TheodorouV，MoreJ，WalJM，FioramortiJ，BuenoL在口敏化的豚鼠腸炎後促進的全身性免疫和局部的反應性。胃腸病學199510953-62HanifinJM.特應性皮炎的流行病學。過敏反應專論1987；21116-131IsolauriE，MajamaaH，ArvolaT，RantalaI，VirtanenE，Arvilommi，H.乳桿菌casei菌株GG倒轉由乳鼠中牛奶引起的增加的腸的滲透性。胃腸病學1993；105；1643-1650MajamaaH，IsolauriE.消化道黏膜屏障的評估有特應性溼疹的兒童中增強的抗原轉移的證據。過敏反應臨床免疫學雜誌1996，在出版中MajamaaH，MiettinenA，LaineS，IsolauriE.有特應性溼疹的兒童的炎症糞便嗜伊紅的陽離子蛋白質和腫瘤壞死因子作為食物過敏的無損傷的指示物。臨床實驗過敏反應學1996；26181-187。SampsonHA，JameMJandBemhisel-BroadbentJ。一種從胺基酸中所得的用於有牛奶過敏症的兒童的嬰兒配方的安全性兒科學1992；90463-465SutasY，SoppiE，KorhonenH，SyvaojaEL，SaxelinM，RokkaT，IsolauriE.用乳桿菌caseiGG獲得的酶水解牛酪蛋白在體外抑制淋巴細胞的增殖。過敏反應臨床免疫學雜誌1996，在出版中SyvaojaEL.定量測定主要的酪蛋白成分和從牛奶中純化αS2-及k-酪蛋白。Milchwissenschaft1992；47563-566。權利要求1.一種製備用於抑制過敏反應和提高消化道免疫屏障機能的蛋白質水解物配方的方法，它包括以下步驟用從包含益生的(probiotic)胃腸細菌，尤其是有附著和集居特性以及與那些乳桿菌GG(ATCC53103)菌株相似的蛋白酶體系的乳桿菌的細菌製品中取得的酶來水解蛋白質和用胃蛋白酶和/或胰蛋白酶來水解蛋白質。2.權利要求1中所述的方法，其中的酶是從包含乳桿菌GG(ATCC53103)的細菌製劑中製備的。3.一種製備蛋白質水解物配方以抑制過敏反應和提高消化道免疫屏障機能的方法，它包括的步驟如下用胃蛋白酶和/或胰蛋白酶水解蛋白質，並在水解物中添加一種包含益生的胃腸道細菌，尤其是有附著和集居特性以及與那些乳桿菌GG(ATCC53103)菌株相似的蛋白酶體系的乳桿菌的細菌製品。4.根據權利要求3的方法，其中的細菌製品包括乳桿菌GG(ATCC53103)。5.一種用於抑制過敏性反應和促進消化道免疫屏障機能的蛋白質水解物配方，該水解物可用權利要求1到4中定義的任一種方法獲得。6.一種預防或治療由食物引起的嬰兒過敏性反應的方法，包含對處於危險中的嬰兒施以根據權利要求5所得的蛋白質水解物配方。7.一種治療患者牛奶過敏的方法，包括對患者給予根據權利要求1製備的蛋白質水解物配方。8.一種提高患者對食物抗原的耐受原免疫反應的方法，它包括口服根據權利要求5的蛋白質水解物的配方。9.一種預防或治療嬰兒的食物引起的過敏性反應的方法，包括對處於危險中的嬰兒施用一種根據權利要求1製備的蛋白質水解物的配方，同時施用一種生細菌製品，其包含益生的胃腸細菌，尤其是有附著和集居特性以及與那些乳桿菌GG(ATCC53103)菌株相似的蛋白酶體系的乳桿菌。10.一種治療患者牛奶過敏反應的方法，包括對患者施用一種蛋白質水解物配方和一種細菌製品，它包含益生的胃腸細菌，尤其是有附著和集居特性以及與那些乳桿菌GG(ATCC53103)菌株相似的蛋白酶體系的乳桿菌。11.一種促進患者對食物抗原的耐受原免疫反應的方法，包括口服一種細菌製品，這種製品包含益生的胃腸細菌，尤其是有附著和集居特性以及與那些乳桿菌GG(ATCC53103)菌株相似的蛋白酶體系的乳桿菌，或是一種蛋白質水解物配方和一種細菌製品，這種細菌製品包含益生的胃腸細菌，尤其是有附著和集居特性以及與那些乳桿菌GG(ATCC53103)菌株相似的蛋白酶體系的乳桿菌。12.一種根據權利要求9到11任何之一的方法，其中的細菌製劑包含乳桿菌GG(ATCC53103)。全文摘要本發明涉及抑制遭受食物過敏的病人的食物引發的過敏反應的方法和途徑。本發明尤其提供了製備一種抑制過敏反應和提高消化道免疫屏障物的蛋白質水解產物配方的方法,和預防或治療過敏,尤其是嬰兒的牛奶過敏的方法,這是通過用從胃腸道中獲得的合適的益生菌(probioticbacteria),尤其是乳桿菌,來強化牛奶消食而進行的。而且,施用一種由胃腸細菌免疫反應改性的過敏原的片斷可以將敏感反應轉變為全身性的反應低下。用於本發明的一種優選細菌是乳桿菌GG(ATCC53103)。文檔編號A61P37/08GK1187772SQ96194752公開日1998年7月15日申請日期1996年6月12日優先權日1995年6月14日發明者埃裡克·艾斯勞裡,利納·麥特薩尼蒂,漢納·科霍恩,塞波·薩爾米恩,伊娃－莉薩·塞瓦加申請人:瓦裡歐公司