酪蛋白納米粒子的製作方法

2023-06-27 02:55:46

專利名稱：：酪蛋白納米粒子的製作方法
技術領域：
：本發明涉及生命科學或者醫療診斷等領域中使用的納米粒子。更詳細地，本發明涉及含有活性物質的酪蛋白納米粒子。
背景技術：
：一直希望微粒材料可以在生物技術中廣泛應用。特別是，近年來，隨著納米技術的發展，對在生物技術和醫療中應用發明出的納米微粒材料進行了大量的研究，還報導了大量的研究成果。在藥物傳遞系統(DDS)的領域中，從很早開始就強烈期待納米粒子的加入，極其希望納米粒子能作為藥劑和遺傳因子的載體。特別是，使用高分子膠粒的研究極為盛行，但是在大部分的情況下，AB型或ABA型嵌段共聚物是由於其結構簡單而被使用的。高分子膠粒的特徵包括大的藥物容量、高水溶性、高結構穩定性、非蓄積性、小粒徑(100nm以下)、功能分離性。由此，以對標的部位的指定性以及疏水性藥物的可溶化性為目的，進行了研究。近年來，在化妝品中，通過引入以納米技術為代表的各種新技術，而提高功能性、實用性、或者構成與其它公司產品區別，而且可以得到更明顯的皮膚效果。皮膚通常由於角質層作為阻隔層存在，而使藥物對皮膚的滲透性低下。為了充分發揮出對皮膚的效果，不可欠缺的是改善有效成分對皮膚的透過性。另外，即使對皮膚有高的有效性，但是很多成分由於保存穩定性差，或者容易對皮膚產生刺激，所以難以形成製劑。為了解決這些問題，以改善經皮吸收性和提高保存穩定性、降低皮膚刺激性等為目的，開發了各種各樣的膠囊。目前，還對超微細乳化和脂質體等各種材料進行了研究(例如，非專利文獻1)。但是，乳化使用的表面活性劑在安全性方面有所保留，而且，離子絡合物形成的結構與共價鍵相比，穩定性差。可以推測使用高分子材料在保存穩定性和生物體內的粒子穩定性方面有大幅度的改善。但是，大部分研究是使用以乳化聚合為代表的合成高分子，與低分子相比，雖然毒性有所減輕，但是必須解決某種程度的毒性，所以需要更安全的載體。天然高分子和合成高分子同樣地，顯示出高的結構穩定性，而且與合成高分子相比，安全性更高，還兼具作為DDS載體的優點。但是，與合成高分子相比，天然高分子載體的難點在於粒子的製造方法。作為天然高分子的粒子製造方法可以使用的有噴霧乾燥、冷凍乾燥和噴射磨，但是在大部分的情況下，粒子的大小都是微小尺寸(microsize)，大小的控制困難。在專利文獻1中，提出了含有活性化合物的多核(multi-core)結構的固體配製品，粒子大小為5~3000um。另外，在專利文獻2中，提出了使用高分子材料的納米粒子經皮吸收劑，該納米粒子經皮吸收劑是使用表面活性劑的乳化物，如前所述，對安全性和穩定性有點擔憂。此外，在專利文獻3中，記載了球形的蛋白質粒子，但是作為含有藥物的組合物的粒子大小為l"m以上。包括上述物質，到目前為止已知的高分子納米粒子還沒有提及合成高分子，即使是天然高分子，在粒子形成過程中，使用表面活性劑和聚合物單體、化學交聯劑等，在安全性方面有問題。然而，酪蛋白是乳汁中含有的不溶於水的蛋白質。由於疏水性部分朝向外面，所以容易製造集合體，聚集10-100個酪蛋白，形成20nm左右的亞膠粒，進而聚集100-1000個酪蛋白，形成90-150nm的酪蛋白膠粒。酪蛋白膠粒進一步聚集，形成500nm左右的膠粒締結體。因此，酪蛋白膠粒的尺寸分布廣，添加鈉、鎂等鹽，以及使pH為酸性，就可以產生凝聚。非專利文獻l:西田光廣，普雷古蘭思嘉納陸(7^夕'，>^氣—於A)，11月，17(2005)專利文獻l:特開2002-204673號公報專利文獻2:特開2002-308728號公報專利文獻3:特表2005-500304號公報
發明內容本發明的課題在於解決上述現有技術的問題。也就是，本發明的課題在於提供可以不使用表面活性劑和合成高分子製造的，可以控制大小，且在酸性中穩定，以及內含活性物質的納米粒子及其製造方法。本發明人為了解決上述問題進行了認真的研究，結果發現將酪蛋白混合到pH為8以上、小於11的鹼水性介質中，添加至少1種活性物質，將該溶液注入到pH3.57.5的酸性水性介質中，或者將該溶液從等電點下降到pH偏離1以上的pH，從而製造內含活性物質的納米粒子，由此完成本發明。也就是，根據本發明提供通過下述工序(a)到(c)製造的內含活性物質的平均粒徑為10nm以上、小於300nm的酪蛋白納米粒子。(a)將酪蛋白混合到pH為8以上、pH小於11的鹼性水性介質中的工序；(b)在工序(a)得到的溶液中添加至少1種活性物質的工序；以及(c)將工序(b)得到的溶液注入pH3.57.5的酸性水性介質的工序。本發明的另一個方面是提供通過下述工序(a)到(c)製造的內含活性物質的平均粒徑為10nm以上、小於50nm的酪蛋白納米粒子。(a)將酪蛋白混合到pH為8以上、pH小於11的鹼性水性介質中的工序；(b)在工序(a)得到的溶液中添加至少1種活性物質的工序；以及(c)邊攪拌工序(b)得到的溶液，邊將該溶液的pH從等電點下降到PH偏離1以上的pH的工序。優選的是，活性物質是離子性物質或脂溶性物質。優選的是，活性物質是化妝品用成分、功能性食品用成分或藥品成分。優選地，作為化妝品用成分可以列舉出保溼劑、美白劑、毛髮護理劑、毛髮恢復劑、毛髮生長劑、抗白髮劑、防老化劑、抗氧化劑、膠原合成促進劑、防皺紋劑、防痤瘡劑、維生素、紫外線吸收劑、香料、色素、止汗劑、冷卻劑、保溫劑、黑色素生成抑制劑、黑色素細胞活化劑、清潔劑、瘦身劑；作為功能性食品用成分，可以列舉出維生素、礦物質、抗氧化劑、抗壓劑、營養補充劑、胺基酸類物質、類胡蘿蔔素、果實和植物的萃取物；作為藥品，可以列舉出毛髮護理劑、毛髮恢復劑、毛髮生長劑、抗生素、抗癌藥、抗炎藥、抗過敏劑、激素、抗血栓劑、免疫抑制劑、皮膚疾病治療劑、抗真菌藥、核酸藥物、麻醉藥、解熱藥、鎮痛藥、止癢藥、抗浮腫藥、止咳化痰藥、抗癲癇藥、抗帕金森藥、催眠鎮靜劑、抗焦慮藥、興奮劑、精神神經用藥、肌松藥、抗抑鬱藥、複方感冒藥、自主神經類藥物、止咳藥、發汗劑、止汗劑、強心劑、心率不齊用藥、抗心率不齊藥、血管緊張素、血管擴張藥、抗心率不齊劑、降血壓藥、糖尿病治療藥、高血脂劑、呼吸興奮劑、止咳藥、維生素、寄生性皮膚疾病用藥、體內平衡劑、多肽、激素、缺損性角化抑制劑、疫苗或皮膚軟化劑等。優選的是，相對於酪蛋白的重量，本發明的酪蛋白納米粒子含有0.1100重量％的活性物質。優選的是，在工序(b)中，添加活性物質溶液，該活性物質溶液是活性物質溶解到水或者水和至少10重量％的混和性有機溶劑中形成的。優選的是，相對於鹼性水性介質，添加0.1100重量Q/^的水和至少10重量％的混和性有機溶劑。優選的是，在工序(b)中，添加內含活性物質的脂質體水分散液。優選的是，相對於酪蛋白的重量，添加0.1100重量％的內含活性物質的脂質體。優選的是，在工序(b)中，添加活性物質的環糊精溶液。優選的是，相對於酪蛋白的重量，添加0.1100重量Q/^的環糊精。優選的是，相對於酪蛋白的重量，添加0.1100重量％的脂質。優選的是，相對於酪蛋白的重量，添加0.1~100重量％的其它類型的蛋白質。優選的是，相對於酪蛋白的重量，添加0.1100重量Q^的陽離子性或陰離子性多糖。優選的是，相對於酪蛋白的重量，添加0.1~100重量。/^的陽離子性蛋白質或陰離子性蛋白質。本發明的另一個方面是提供含有上述本發明的酪蛋白納米粒子的藥物傳遞劑。優選的是，藥物傳遞劑作為經皮吸收劑、局部治療劑、經口治療劑、化妝品、功能性食品或補充劑(supplement)使用。優選的是，藥物傳遞劑中含有的乙醇為20%以下。優選的是，在藥物傳遞劑中含有添加劑。優選的是，添加劑是選自保溼劑、柔化劑、經皮吸收促進劑、防腐劑、色素、香料或pH調節劑的1種以上。本發明的又一方面是提供包括下述工序(a)到(c)的內含活性物質的平均粒徑為10nm以上、小於300nm的酪蛋白納米粒子的製造方法。(a)將酪蛋白混合到pH為8以上、pH小於11的鹼性水性介質中的工序(b)在工序(a)得到的溶液中添加至少1種活性物質的工序；以及(c)將工序(b)得到的溶液注入pH3.57.5的酸性水性介質的工序。本發明的另一個方面是提供通過包括下述工序(a)到(c)的內含活性物質的平均粒徑為10nm以上、小於50nm的酪蛋白納米粒子的製造方法。(a)將酪蛋白混合到pH為8以上、pH小於11的鹼性水性介質中的工序；(b)在工序(a)得到的溶液中添加至少1種活性物質的工序；以及(c)邊攪拌工序(b)得到的溶液，邊將該溶液的pH從等電點下降到pH偏離1以上的pH的工序。具體實施例方式以下，對本發明的實施方案進行詳細說明。本發明是一種內含活性物質的平均粒徑為10nm以上、小於300nm的酪蛋白納米粒子，該納米粒子通過下述工序(a)到(c)製造。(a)將酪蛋白混合到pH為8以上、pH小於11的鹼性水性介質中的工序；(b)在工序(a)得到的溶液中添加至少1種活性物質的工序；以及(c)將工序(b)得到的溶液注入pH3.57.5的酸性水性介質的工序，或者一邊攪拌工序(b)得到的溶液，一邊將該溶液的pH從酪蛋白的等電點下降到pH偏離1以上的pH的工序。本發明發現可以製造所希望的大小的酪蛋白納米粒子。另外，還發現利用脂溶性的活性物質和酪蛋白疏水性部分的相互作用，可以在酪蛋白內部包含活性物質。此外，還發現這些粒子可以在水溶液中穩定地存在。作為脂溶性物質優選ClogP大於0，更優選ClogP為1以上，進一步優選ClogP為3以上的。另外，發現通過酪蛋白和離子性多糖或其它種類的離子性蛋白質的混和粒子，也可以內含離子性活性物質。也就是，根據本發明可以不使用表面活性劑和合成高分子，也可以製造安全性高的內含活性物質的納米粒子。本發明的酪蛋白納米粒子的平均粒子大小通常是10nm以上、小於300nm，優選為10100nm，進一步優選為10~50nm。本發明的酪蛋白納米粒子包含至少1種活性物質。活性物質的量沒有特別的限定，通常相對於酪蛋白的重量，含有0.1100重量％的活性物質。本發明中使用的酪蛋白的來源沒有特別的限定，可以來自乳汁，也可以來自豆子，可以使用a-酪蛋白、P-酪蛋白、Y-酪蛋白、k-酪蛋白和它們的混合物。還可以使用轉基因產品。優選使用酪蛋白鈉的形態。酪蛋白可以單獨使用，也可以將2種以上組合使用。本發明的酪蛋白納米粒子的製造方法可以列舉出將酪蛋白混和到鹼性水性介質中，注入酸性水性介質的方法；以及將酪蛋白混和到鹼性水性介質溶液中，邊攪拌邊降低pH的方法。作為將酪蛋白混和到鹼水性介質溶液中，注入到酸性水性介質中的方法，注射器注入由於簡單方便而優選使用，但是只要是滿足注入速度、溶解性、溫度、攪拌狀態的方法，就沒有特別的限定。通常，注入速度可以是lmL/min至ljlOOmL/min。鹼性水性介質的溫度可以適當設定，標準的可以是0。C到80°C，優選為25。C到7(TC。水性介質的溫度可以適當設定，標準地可以是0r到8(rC，優選為25'C到6(TC。攪拌速度可以適當設定，標準地可以是100rpm到3000rpm，優選為200rpm至lj2000rpm。作為將酪蛋白混和到鹼性水性介質溶液中，邊攪拌邊降低pH的方法，滴加酸的方法由於簡單方便而優選，但是只要是滿足溶解性、溫度、攪拌狀態的方法，就沒有特別的限定。鹼性水性介質的溫度可以適當設定，標準的可以是0。C到8(TC，優選為25t:到7(rC。攪拌速度可以適當設定，標準地可以是100rpm到3000rpm，優選為200rpm到2000rpm。本發明中使用的水性介質可以使用有機酸或鹼、無機酸或無機鹼的水溶液或緩衝液。具體地，可以列舉出使用檸檬酸、抗壞血酸、葡糖酸、羧酸、酒石酸、琥珀酸、醋酸或鄰苯二甲酸、三氟乙酸、嗎啉基乙磺酸、2-[4-(2-羥乙基)-l-哌嗪基]乙磺酸這樣的有機酸，三(羥甲基)氨基甲垸、氨這樣的有機鹼，鹽酸、高氯酸、碳酸這樣的無機酸，磷酸鈉、磷酸鉀、氫氧化鈣、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鎂這樣的無機鹼的水溶液，但是並不限於此。本發明中使用的水性介質的濃度優選為約10mM到約500mM。更優選為約10mM到約200mM。本發明中使用的鹼性水性介質的pH優選為8以上、小於ll，更優選為9以上、小於11。進一步優選pH為9.5到10.5。如果pH過高，則可能會水解以及操作時可能有危險，所以優選上述範圍。在本發明中，將酪蛋白混和到pH8以上的鹼性水性介質中的溫度優選為08(TC，更優選為1060°C，進一步優選為20~40°C。本發明中使用的酸性水性介質的pH優選為3.57.5，更優選為46，進一步優選為56。pH為3以下時，發現粒子大小有變大的趨勢。在將酪蛋白混和到鹼性水性介質溶液中，邊攪拌邊降低pH的方法中，下降後的優選的pH是從等電點離開1以上的pH到8。本發明中使用的活性物質的種類可以選自例如化妝品用成分或藥品用成分。作為化妝品用成分，可以列舉出保溼劑、美白劑、毛髮護理劑、毛髮恢復劑、毛髮生長劑、抗白髮劑、防老化劑、抗氧化劑、膠原合成促進劑、防皺紋劑、防痤瘡劑、維生素、紫外線吸收劑、香料、色素、止汗劑、冷卻劑、保溫劑、黑色素生成抑制劑、黑色素細胞活化劑、清潔劑、瘦身劑等。作為功能性食品用成分，可以列舉出維生素、礦物質、抗氧化劑、抗壓劑、營養補充劑、胺基酸類物質、類胡蘿蔔素、果實和植物的萃取物。作為藥品，可以列舉出毛髮護理劑、毛髮恢復劑、毛髮生長劑、抗生素、抗癌藥、抗炎藥、抗過敏劑、激素、抗血栓劑、免疫抑制劑、皮膚疾病治療劑、抗真菌藥、核酸藥物、麻醉藥、解熱藥、鎮痛藥、止癢藥、抗浮腫藥、止咳化痰藥、抗癲癇藥、抗帕金森藥、催眠鎮靜劑、抗焦慮藥、興奮劑、精神神經用藥、肌松藥、抗抑鬱藥、複方感冒藥、自主神經類藥物、止咳藥、發汗劑、止汗劑、強心劑、心率不齊用藥、抗心率不齊藥、血管緊張素、血管擴張藥、抗心率不齊劑、降血壓藥、糖尿病治療藥、高血脂劑、呼吸興奮劑、止咳藥、維生素、寄生性皮膚疾病用藥、體內平衡劑、多肽、激素、缺損性角化抑制劑、疫苗或皮膚軟化劑等。上述活性物質可以單獨使用，也可以將2種以上組合後使用。本發明中使用的保溼劑雖然列舉出了具體例子，但是本發明並不限於這些化合物。可以列舉出透明質酸、神經醯胺、Lipidure(利皮久性阿，商品名)、異黃酮、胺基酸、膠原等。上述保溼劑可以單獨使用，也可以組合2種以上使用。本發明中使用的美白劑雖然列舉出了具體例子，但是本發明並不限於這些化合物。可以列舉出維生素C衍生物、氫醌類、熊果苷、丁基雷瑣酚(Rucinol)、鞣酸等。上述美白成分可以單獨使用，也可以組合2種以上後使用。本發明中使用的抗老化劑、抗氧化劑雖然列舉出了具體例子，但是本發明並不限於這些化合物。可以列舉出胡蘿蔔素類、視黃酸、松香油、維生素C衍生物、激動素、蝦黃質、維生素A酸、維生素E及其衍生物、芝麻素、a-硫辛酸、輔酶QIO、類黃酮類等。上述的抗老化劑、抗氧化劑可以單獨使用，也可以組合2種以上使用。本發明中使用的抗痤瘡劑雖然列舉出了具體例子，但是本發明並不限於這些化合物。可以列舉出水楊酸、間苯二酚、視黃酸、諾那氟沙星、氨基糖苷類抗生素、四環素類抗生素、林肯黴素類抗生素等。上述抗痤瘡劑可以單獨使用，也可以組合2種以上使用。本發明中使用的抗癌劑雖然列舉出了具體例子，但是本發明並不限於這些化合物。可以列舉出氟化嘧啶類代謝拮抗劑藥物(5-氟代尿嘧啶(5FU)以及皮炎菌、去氧氟尿苷、卡培他濱(Capecitabine)等)，抗生素(絲裂黴素C(MitomycinC，MMC)以及阿黴素(Doxorubicin，DXR)等)，嘌呤代謝拮抗劑(氨甲喋呤等葉酸代謝拮抗劑、巰基嘌呤等)，維生素A的活性代謝物(羥基脲等的代謝拮抗劑、維生素A酸以及他米巴羅汀(Damibarotene)等)，分子標的藥(赫賽汀(Herceptin)以及甲磺酸伊馬替尼等)，鉑製劑(Briplatin和Randa(CDDP)、佳鉑帝(CBDC)、eluplat(Oxa)、奈達鉑等)，植物生物鹼藥物(伊立替康(Topotecin)以及喜樹鹼(Camptothecine)、巖沙海葵毒素(Palytoxin，PTX)、鰭藻毒素(Dinophytoxins，DTX)、依託泊苷(Etoposide)等)，烷基化劑(白消安(Busulfan)、環磷醯胺(Ifomide)、依厚邁鬥(<*^<卜")等)，抗男性荷爾蒙藥物(卡魯胺(bicalutamide)和氟他胺(Flutamide)等)，女性荷爾蒙藥(呋羅雌酚以及醋酸氯地孕酮、磷酸雌莫司汀(Estramustine)等)，LH-RH藥(亮丙瑞林(Leuprorelin)以及諾雷德(Zoladex)等)，抗雌激素藥(檸檬酸他莫西芬以及檸檬酸託瑞米芬等)，芳香酶抑制劑(鹽酸法倔唑以及阿那曲唑(Anastrozole)、依西美坦(Exemestan)等)，黃體荷爾蒙藥(醋酸甲羥孕酮(Medroxyprogesterone)等)，BCG等，但是並不限於此。上述抗癌劑可以單獨使用，也可以組合2種以上後使用。作為本發明的抗過敏劑雖然列舉出了具體例子，但是本發明並不限於這些化合物。可以列舉出色甘酸鈉以及曲尼司特等抑制介質游離藥物、富馬酸酮替芬以及鹽酸五塑胺等受阻胺Hl-拮抗藥、鹽酸奧扎格雷(Ozagre1)等凝血酶抑制藥、普侖斯特(Pranlukast)等無色三烯拮抗藥、甲磺司特等。上述抗過敏劑可以單獨使用，也可以組合2種以上使用。作為本發明中使用的免疫抑制劑雖然列舉出了具體例子，但是本發明並不限於這些化合物。可以列舉出雷帕黴素(R叩amycin)、他克莫司(Tacrolimus)、環孢素(Ciclosporin)、潑尼松龍(Prednisolone)、甲基潑尼松龍、黴酚酸酯(Myc(3phenolatemofefil)、硝基咪唑硫嘌呤(Azathiopurine)、咪唑立賓等。上述免疫抑制劑可以單獨使用，也可以混和2種以上後使用。本發明中使用的育毛成分的種類沒有特別的限定，可以選自例如化妝品用成分或藥品用成分。在本發明中，內含於蛋白質納米粒子的育毛成分的具體例子，可以列舉出甘草次酸及其衍生物、甘草酸及其衍生物、日扁柏醇、維生素E或其衍生物、維生素C衍生物、6-苄基氨基嘌呤、煙酸醯胺、煙酸苄酯、煙酸生育酚、煙酸e-丁氧基酯、異丙基甲基苯酚、十五(碳)烷酸或其衍生物、Cefalatin、非那甾胺(Finasteride),t-黃烷酮、類胡蘿蔔素以及激動素等抗氧化劑，乙炔雌二醇、泛醇、泛醇乙基醚、西諾科西基陸(〉/*)VA)或其類似物、氯化陽碳(carboniumchloride)、腺苷等。上述育毛成分可以單獨使用，也可以將2種以上組合使用。作為本發明中使用的水和至少10重量％混合性的有機溶劑雖然列舉出了具體例子，但是本發明並不限於這些化合物。優選為乙醇、異丙醇、乙二醇、甘油、丙酮、THF等水溶性有機溶劑。在本發明中，活性物質可以以內含活性物質的脂質體水分散液的形式添加。作為用於形成本發明的脂質體的脂質雖然舉出了具體例子，但是本發明並不限於這些化合物。可以列舉出蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂、蛋黃磷脂醯膽鹼、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼、二肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼等。除此以外，還可以含有磷脂醯絲氨基類、磷脂醯膽鹼乙醇胺類、膽固醇等。作為本發明中使用的環糊精雖然舉出了具體例子，但是在本發明中並不限於這些化合物。可以列舉出a-環糊精、P-環糊精、y-環糊精、2，6-二-0-甲基-a-環糊精、2,6-二-0-甲基-P-環糊精、葡糖醛基葡糖基-{3-環糊精、七(2,6-二-0-甲基)-P-環糊精、2-羥乙基-P-環糊精、羥丙基-日-環糊精、6-0-a-麥芽糖基-a-環糊精、甲基-P-環糊精、2，3,6-三-0-甲基-P-環糊精、6-0-a-D-葡糖基-a-環糊精等。作為本發明中使用的脂質雖然舉出了具體例子，但是在本發明中並不限於這些混合物。可以列舉出磷脂醯膽鹼(卵磷脂)、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯絲氨酸、磷脂醯肌醇、磷脂醯基甘油、二磷脂醯基甘油、神經鞘氨醇類、神經醯胺、油酸、亞油酸、亞麻酸、軟脂酸、肉豆蔻酸、硬脂酸、大豆油、橄欖油、角鯊烯等。本發明中使用的其它種類的蛋白質的種類沒有特別的限定，優選使用分子量為1萬到100萬程度的蛋白質。蛋白質的來源沒有特別的限定，優選使用來自人類的蛋白質。作為蛋白質雖然舉出了具體例子，但是本發明並不限於這些化合物。可以列舉出例如膠原、明膠、白蛋白、轉鐵蛋白、纖維蛋白、纖維蛋白原、球蛋白、絲纖蛋白、層粘素、纖維蛋白連接素或玻璃粘連蛋白(vitronectin)等。另外，蛋白質的來源沒有特別的限定，也可以使用牛、豬、魚和轉基因體的任意一種。特別優選的是明膠、白蛋白。所述的本發明中使用的陰離子性多糖是具有羧基、硫酸基或磷酸基等酸性極性基團的多糖。以下舉出具體例子，但是在本發明中並不限於這些化合物。可以列舉出軟骨素硫酸、葡聚糖硫酸、羧甲基葡聚糖、海藻酸、果膠、角叉菜膠、巖藻依聚糖、瓊脂膠、紫菜聚糖、卡那牙膠、凍膠(GellanGum)、黃原膠、透明質酸類等。所述的本發明中使用的陽離子性多糖是具有氨基等鹼性極性基團的多糖。以下雖然舉出了具體例子，但是在本發明中並不限於這些化合物。可以列舉出殼多糖、殼聚糖等含有葡糖胺和半乳糖胺作為結構單糖的多糖等。'所述的本發明中使用的陰離子性蛋白質是等電點比生理的pH更靠近鹼性側的蛋白質和脂蛋白質。雖然舉出了具體例子，但是在本發明中並不限於這些化合物。可以列舉出聚穀氨酸、聚天冬氨酸、細胞色素C、核糖核酸酶、胰蛋白酶原、糜蛋白酶原、a-糜蛋白酶等。所述的本發明中使用的陽離子性蛋白質是等電點比生理的pH更靠近酸性側的蛋白質和脂蛋白質。雖然舉出了具體例子，但是在本發明中並不限於這些化合物。可以列舉出聚賴氨酸、聚精氨酸、組蛋白、魚精蛋白、卵白蛋白等。本發明中使用的離子性蛋白質和多糖優選具有和活性物質的電荷相反的電荷，相對於酪蛋白的重量，添加量優選為0.1100重量％。本發明的酪蛋白納米粒子是在其中含有活性物質的納米粒子，這種含有活性物質的納米粒子可以供應到病患部位使用。也就是，本發明的酪蛋白納米粒子可以作為藥物傳遞劑使用。在本發明中，藥物傳遞劑的使用沒有特別的限定，可以列舉出經皮吸收劑、局部治療劑、經口治療劑、化妝品、補充物等。在本發明中，藥物傳遞劑優選含有0.0150重量％的蛋白質納米粒子，進一步優選含有0.110重量％蛋白質納米粒子。優選的是，藥物傳遞劑中含有的乙醇為20%以下。更優選為10%以下。在本發明中，可以在藥物傳遞劑中含有添加劑。作為添加劑沒有特別的限定，可以列舉出保溼劑、柔化劑、經皮吸收促進劑、防腐劑、色素、香料或pH調節劑等。作為可以在本發明中使用的保溼劑雖然舉出了具體例子，但是在本發明中並不限於這些化合物。可以列舉出瓊脂、二聚丙三醇、二硬脂基二亞銨鋰蒙脫石、丁二醇、聚乙二醇、丙二醇、透明質酸鈉、己二醇、薏該仁萃取物、凡士林。作為柔化劑雖然舉出了具體例子，但是在本發明中並不限於這些化合物。可以列舉出甘油、礦物油、軟化劑(emollient)成分(例如，異硬脂酸異丙酯、異硬脂酸聚甘油酯、異壬酸異十三烷基酯、異壬酸辛酯、油酸、油酸甘油酯、可可蠟、膽固醇、混合脂肪酸三甘油酯、琥珀酸二辛酯、醋酸硬脂酸蔗糖酯、環戊矽氧烷、二硬脂酸蔗糖酯、軟脂酸辛酯、羥基硬脂酸辛酯、山嵛酸二十烷基酯、聚山嵛酸蔗糖酯、聚甲基矽倍半氧烷、肉豆蔻醇、肉豆蔻酸十六烷基酯、肉豆蔻酸十四垸基酯、月桂酸己酯。作為經皮吸收促進劑雖然舉出了具體例子，但是在本發明中並不限於這些化合物。可以列舉出乙醇、肉豆蔻酸異丙酯、檸檬酸、角鯊烯、油酸、薄荷醇、N-甲基-2-吡咯烷酮、己二酸二乙酯、己二酸二異丙基酯、癸二酸二乙基酯、癸二酸二異丙基酯、軟脂酸異丙基酯、油酸異丙基酯、油酸辛基十二垸基酯、異十八垸醇、2-辛基十二醇、尿素、植物油、動物油。作為防腐劑雖然舉出了具體例子，但是在本發明中並不限於這些化合物。可以列舉出苯甲酸、苯甲酸鈉、對羥基苯甲酸乙酯、山梨酸鉀、山梨酸鈉、山梨酸、脫氫乙酸鈉、對羥甲基苯甲酸甲酯。作為色素雖然舉出了具體例子，但是在本發明中，並不限於這些具體的化合物。可以列舉出高嶺土、胭脂紅、佛青、氧化鉻、氧化鐵。作為pH調節劑雖然舉出了具體例子，但是在本發明中並不限於這些化合物。可以列舉出檸檬酸鈉、醋酸鈉、氫氧化鈉、氫氧化鉀、磷酸。作為本發明的酪蛋白納米粒子的給藥方法，優選地可以列舉出經皮、經黏膜吸收。作為給藥方法雖然列舉出了具體方法，但是在本發明中並不限於此。可以列舉出外用液體、泥敷劑、塗布劑、清潔劑、沐浴露、消毒劑、軟膏、凝膠劑、面霜、泥膏劑、泥罨劑、硬膏劑、創可貼、薄紗型創可貼、止血劑、粘合劑、膠帶、經皮吸收型膠帶、創傷保護劑、氣霧劑、洗劑、滋補劑、搽劑、乳劑、懸濁液、飽和劑、酊劑、粉劑、泡劑、化妝水、按摩膏、營養霜、敷劑、片狀皮膚外用齊!J、皮膚粘合型化妝品、口紅、補妝底(makeupbase)、粉底(foundation)、香波、柔發劑(rinse)、香皂、肥皂、洗澡液、經指甲藥劑、鼻黏膜藥劑、口腔黏膜藥劑、直腸黏膜藥劑、陰道黏膜藥劑、眼黏膜藥劑和肺黏膜藥劑等本發明的酪蛋白納米粒子的給藥量可以根據患者的體重、疾病的狀態等適當設定，通常是每l次給藥，提供10tim100mg/kg程度，優選提供20lig50mg/kg程度。以下，通過實施例對本發明進行更詳細地說明，但是本發明並不限於此。實施例實施例1:將20mg酪蛋白(來自乳汁，和光純藥製造)、2mg軟骨素硫酸-C(和光純藥製造)混和到lmL的pH10的50mM的磷酸緩衝液中。使5mg生育酚(和光純藥製造)溶解到lmL乙醇中。將2種溶液混和，接觸超聲波後，在外部設置為40°C、800rpm的攪拌條件下，使用微量注射器將lml混和溶液注入到10mL的pH為5的200mM的磷酸緩衝水溶液中，得到酪蛋白納米粒子。上述粒子的平均粒徑使用光散射光度計(日機裝株式會社製造納諾鬥拉庫(十乂卜^7夕))測定，為57nm。實施例2:在50ml茄型燒瓶中加入lmg松香油(和光純藥製造)、20mg蛋黃磷醯基膽鹼(日本油脂製造)，溶解到5ml的乙醇中後，通過旋轉蒸發器減壓除去乙醇。在其中加入5ml的pH為9的100mM的磷酸緩衝水溶液，通過VARDEX混和器("^亍"夕^$々卄一)振動，對所得的懸濁液照射超聲波，得到脂質體分散液。將lml所得的脂質體分散液、20mg酪蛋白(來自乳汁，和光純藥製造)、lml的pH為10的200mM磷酸緩衝水溶液混和。在外部設置為4CTC、800ipm的攪拌條件下，使用微量注射器將lml前述溶液注入到10mL的pH為5的磷酸緩衝水溶液中，得到酪蛋白納米粒子。上述粒子的平均粒徑使用光散射光度計(日機裝株式會社製造的納諾鬥拉庫(十乂卜，'7夕))測定，為60nm。實施例3:將5mg的3-胡羅卡素(和光純藥製造)、0.5ml乙醇、20mg酪蛋白(來自乳汁，和光純藥製造)、5mg環糊精(和光純藥製造)、lml的pH為10的50mM磷酸緩衝液混和，接觸超聲波。在外部設置為4(TC、800rpm的攪拌條件下，使用微量注射器將lml前述溶液注入到10mL的pH為5的300mM磷酸緩衝水溶液中，得到酪蛋白納米粒子。上述粒子的平均粒徑使用光散射光度計(日機裝株式會社製造的納諾鬥拉庫(十乂卜，、7夕))測定，為88nm。實施例4:將20mg酪蛋白(來自乳汁，和光純藥製造)、lmg魚精蛋白硫酸鹽(禾口光純藥製造)在lml的pH為10的50mM磷酸緩衝液中混和。將lmg的a-硫辛酸溶解到離子交換水中。將這2種溶液混和，在外部設置為40°C、800rpm的攪拌條件下，使用微量注射器將lml前述溶液注入到10mL的pH為5的200mM磷酸緩衝水溶液中，得到酪蛋白納米粒子。上述粒子的平均粒徑使用光散射光度計(日機裝株式會社製造的納諾鬥拉庫(於乂卜，7夕))測定，為48nm。在改變粒徑測定器時，測定器的值越小，電子顯微鏡照片也越接近該值。實施例5:將100mg酪蛋白鈉(來自乳汁，和光純藥製造)在10ml的pH為10的100mM硼酸緩衝液中混和。將lmg的醋酸生育酚溶解到O.lml乙醇中。將5mg甘草次酸溶解到lml乙醇中。將這2種溶液混和，在攪拌下加入鹽酸，將pH調節為7，得到酪蛋白納米粒子。上述粒子的平均粒徑使用光散射光度計(日機裝株式會社製造的納諾鬥拉庫(於乂卜，'7夕))測定，為32nm。實施例6:將100mg酪蛋白(來自乳汁，和光純藥製造)在10ml的pH為10的50mM磷酸緩衝液中混和。將3.4mg甘草次酸(和光純藥製造)溶解至iJO.lml乙醇中。將這2種溶液混和，在攪拌下加入鹽酸，將pH調節為7，得到酪蛋白納米粒子。上述粒子的平均粒徑使用光散射光度計(日機裝株式會社製造的納諾鬥拉庫(十乂卜，7夕))測定，為23nm。實施例7:將200mg酪蛋白鈉(來自乳汁，和光純藥製造)在10ml的pH為10的200mM磷酸緩衝液中混和。將8.5mg煙酸苄基酯解到0.15ml乙醇中。將這2種溶液混和，在攪拌下加入鹽酸，將pH調節為7，得到酪蛋白納米粒子。上述粒子的平均粒徑使用光散射光度計(日機裝株式會社製造的納諾鬥拉庫(十乂卜，7))測定，為27nm。實施例8:將50mg酪蛋白鈉(來自乳汁，和光純藥製造)在10ml的pH為10的25mM磷酸緩衝液中混和。將1.7mg日扁柏醇解到O.lml乙醇中。將這2種溶液混和，在攪拌下加入鹽酸，將pH調節為7，得到酪蛋白納米粒子。上述粒子的平均粒徑使用光散射光度計(日機裝株式會社製造的納諾鬥拉庫(十/卜，'7夕))測定，為16nm。將100mg酪蛋白鈉(來自乳汁，和光純藥製造)在10ml蒸餾水中混和。將3.4mg甘草次酸(和光純藥製造)溶解到O.lml乙醇中。將這2種溶液混和。上述粒子的平均粒徑使用光散射光度計(日機裝株式會社製造的納諾鬥拉庫(於乂卜，'7夕))測定，為327nm。比較例2:將100mg酪蛋白(來自乳汁，和光純藥製造)在10ml的pH為10的50mM磷酸緩衝液中混和。將3.4mg甘草次酸(和光純藥製造)溶解到O.lml乙醇中。將這2種溶液混和，在攪拌下，加入鹽酸，將pH調節為4，形成白色渾濁，凝聚。比較例3:將100mg酪蛋白鈉(來自乳汁，和光純藥製造)在10ml的pH為12的50mM磷酸緩衝液中混和。將3.4mg甘草次酸(和光純藥製造)溶解到O.lml乙醇中。將這2種溶液混和，在攪拌下，加入鹽酸，將pH調節為7。上述粒子的平均粒徑使用光散射光度計(日機裝株式會社製造的納諾鬥拉庫(十乂卜，'7夕))測定，為485nm。試驗例1:使用日立工機公司製造的超級離心機CS100GXL，將實施例58的納米粒子離心分離，從上清液的HPLC分析結果和添加量，求得內含在粒子內的活性物質的內含率。表1]tableseeoriginaldocumentpage23本發明的酪蛋白納米粒子由於不使用表面活性劑、合成高分子，而是使用生物體適應性方面沒有問題的酪蛋白，所以安全性高。另外，本發明的酪蛋白納米粒子可以控制尺寸，而且為酸性，是穩定的，所以可以改善吸收率和使用感。此外，本發明的酪蛋白納米粒子由於內含活性物質，所以可以將不溶於水或者只是部分溶解的活性物質穩定地分散到水中。權利要求1.一種通過下述工序(a)到(c)製造的內含活性物質的平均粒徑為10nm以上、小於300nm的酪蛋白納米粒子，(a)將酪蛋白混合到pH為8以上、pH小於11的鹼性水性介質中的工序；(b)在工序(a)得到的溶液中添加至少1種活性物質的工序；以及(c)將工序(b)得到的溶液注入pH3.5～7.5的酸性水性介質的工序。2.—種通過下述工序(a)到(c)製造的內含活性物質的平均粒徑為10nm以上、小於50nm的酪蛋白納米粒子。(a)將酪蛋白混合到pH為8以上、pH小於11的鹼性水性介質中的工序；(b)在工序(a)得到的溶液中添加至少1種活性物質的工序；以及(c)邊攪拌工序(b)得到的溶液，邊將該溶液的pH從酪蛋白的等電點下降到pH偏離1以上的pH的工序。3.根據權利要求1或2所記載的酪蛋白納米粒子，其中活性物質是離子性物質或脂溶性物質。4.根據權利要求13任一項所記載的酪蛋白納米粒子，其中活性物質是化妝品用成分、功能性食品用成分或藥品成分。5.根據權利要求4所記載的酪蛋白納米粒子，其中活性物質是保溼劑、美白劑、毛髮護理劑、毛髮恢復劑、毛髮生長劑、抗白髮劑、防老化劑、抗氧化劑、膠原合成促進劑、防皺紋劑、防痤瘡劑、維生素、紫外線吸收劑、香料、色素、止汗劑、冷卻劑、保溫劑、黑色素生成抑制劑、黑色素細胞活化劑、清潔劑、瘦身劑；功能性食品用成分是維生素、礦物質、抗氧化劑、抗壓劑、營養補充劑、胺基酸類物質、類胡蘿蔔素、果實和植物的提取物；藥品成分是毛髮護理劑、毛髮恢復劑、毛髮生長劑、抗生素、抗癌藥、抗炎藥、抗過敏劑、激素、抗血栓劑、免疫抑制劑、皮膚疾病治療劑、抗真菌藥、核酸藥物、麻醉藥、解熱藥、鎮痛藥、止癢藥、抗浮腫藥、止咳化痰藥、抗癲癇藥、抗帕金森藥、催眠鎮靜劑、抗焦慮藥、興奮劑、精神神經用藥、肌松藥、抗抑鬱藥、複方感冒藥、自主神經類藥物、止咳藥、發汗劑、止汗劑、強心劑、心率不齊用藥、抗心率不齊藥、血管緊張素、血管擴張藥、抗心率不齊劑、降血壓藥、糖尿病治療藥、高血脂劑、呼吸興奮劑、止咳藥、維生素、寄生性皮膚疾病用藥、體內平衡劑、多肽、激素、缺損性角化抑制劑、疫苗或皮膚軟化劑。6.根據權利要求15任一項所記載的酪蛋白納米粒子，其中相對於酪蛋白的重量，酪蛋白納米粒子含有0.1100重量％的活性物質。7.根據權利要求16任一項所記載的酪蛋白納米粒子，其中在工序(b)中，添加活性物質溶液，該活性物質溶液是活性物質溶解到水或者水和至少10重量％的混和性有機溶劑中形成的。8.根據權利要求7所記載的酪蛋白納米粒子，其中相對於鹼性水性介質，添加0.1~100重量％的水和至少10重量％的混和性有機溶齊1」。9.根據權利要求18任一項所記載的酪蛋白納米粒子，其中在工序(b)中，添加內含活性物質的脂質體水分散液。10.根據權利要求9所記載的酪蛋白納米粒子，其中相對於酪蛋白的重量，添加0.1100重量％的內含活性物質的脂質體。11.根據權利要求18任一項所記載的酪蛋白納米粒子，其中在工序(b)中，添加活性物質的環糊精溶液。12.根據權利要求11所記載的酪蛋白納米粒子，其中相對於酪蛋白的重量，添加0.1100重量％的環糊精。13.根據權利要求112任一項所記載的酪蛋白納米粒子，其中相對於酪蛋白的重量，添加0.1100重量o^的脂質。14.根據權利要求1~13任一項所記載的酪蛋白納米粒子，其中相對於酪蛋白的重量，添加0.1100重量％的其它類型的蛋白質。15.根據權利要求114任一項所記載的酪蛋白納米粒子，其中相對於酪蛋白的重量，添加0.1~100重量％的陽離子性或陰離子性多糖。16.根據權利要求l-15任一項所記載的酪蛋白納米粒子，其中相對於酪蛋白的重量，添加0.1-100重量％的陽離子性蛋白質或陰離子性蛋白質。17.—種含有權利要求116任一項所記載的酪蛋白納米粒子的藥物傳遞劑。18.根據權利要求17所記載的藥物傳遞劑，該藥物傳遞劑作為經皮吸收劑、局部治療劑、經口治療劑或補充劑使用。19.根據權利要求17或18所記載的藥物傳遞劑，其中乙醇含量為20%以下。20.根據權利要求17M9任一項所記載的藥物傳遞劑，其中在藥物傳遞劑中含有添加劑。21.根據權利要求20所記載的藥物傳遞劑，其中添加劑是選自保溼劑、柔化劑、經皮吸收促進劑、防腐劑、色素、香料或pH調節劑的1種以上。22.—種內含活性物質的平均粒徑為10nm以上、小於300nm的酪蛋白納米粒子的製造方法，該方法包括下述工序(a)到(c):(a)將酪蛋白混合到pH為8以上、pH小於11的鹼性水性介質中的工序；(b)在工序(a)得到的溶液中添加至少1種活性物質的工序；以及(c)將工序(b)得到的溶液注入pH3.57.5的酸性水性介質的工序。23.—種內含活性物質的平均粒徑為10nm以上、小於50nm的酪蛋白納米粒子的製造方法，該方法包括下述工序(a)到(c):(a)將酪蛋白混合到pH為8以上、pH小於11的鹼性水性介質中的工序；(b)在工序(a)得到的溶液中添加至少1種活性物質的工序；以及(C)邊攪拌工序(b)得到的溶液，邊將該溶液的pH下降到pH為5~7.5的工序。全文摘要本發明的目的在於提供不使用表面活性劑和合成高分子製造，可以控制大小，而且在酸性下穩定，還內含活性物質的納米粒子及其製造方法。根據本發明可以提供通過下述工序(a)到(c)製造的內含活性物質的平均粒徑為10nm以上、小於300nm的酪蛋白納米粒子，(a)將酪蛋白混合到pH為8以上、pH小於11的鹼性水性介質中的工序；(b)在工序(a)得到的溶液中添加至少1種活性物質的工序；以及(c)將工序(b)得到的溶液注入pH3.5～7.5的酸性水性介質的工序。文檔編號A61K47/44GK101415395SQ20078001217公開日2009年4月22日申請日期2007年3月29日優先權日2006年3月29日發明者根守良一,相見牧子,荻原一隆申請人:富士膠片株式會社