大腸桿菌細胞的製備方法
2023-10-10 11:04:04
大腸桿菌細胞的製備方法
【專利摘要】本發明公開了大腸桿菌細胞的製備方法。步驟如下：首選挑選合適的細胞菌落，然後將DH5平板劃線，在35攝氏度環境下過夜；其後將菌落接種於菌液中，並導入離心管中；隨後在35攝氏度的培養箱中過夜；加入10%瓊脂；250rpm搖床過夜；加入100ml的氯化鈣溶液；混懸菌液，離心分離；將上清去除乾淨即可；保存的時候可以滴入適量甘油；所述氯化鈣溶液需要提前預冷，並保存在攝氏度4度的環境中。本發明的有益效果是，成本低，對環境汙染小，同時獲得的基因擴增可以得到確認。
【專利說明】大腸桿菌細胞的製備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種實驗方法，具體來說，大腸桿菌細胞的製備方法。
【背景技術】
[0002]腸埃希氏菌(E.coli)通常稱為大腸桿菌,是Escherich在1885年發現的,在相當長的一段時間內，一直被當作正常腸道菌群的組成部分，認為是非致病菌。直到20世紀中葉，才認識到一些特殊血清型的大腸桿菌對人和動物有病原性，尤其對嬰兒和幼畜(禽)，常引起嚴重腹瀉和敗血症，它是一種普通的原核生物，根據不同的生物學特性將致病性大腸桿菌分為5類:致病性大腸桿菌(EPEC)、腸產毒性大腸桿菌(ETEC)、腸侵襲性大腸桿菌(EIEC)、腸出血性大腸桿菌(EHEC)、腸黏附性大腸桿菌(EAEC)。大腸桿菌屬於細菌。大腸桿菌是與我們日常生活關係非常密切的一類細菌，學名稱作「大腸埃希菌」，屬於腸道桿菌大類中的一種。它是寄生在人體大腸裡對人體無害的一種單細胞生物，結構簡單，繁殖迅速，培養容易，它是生物學上重要的實驗材料。在嬰兒剛出生的幾小時內，大腸桿菌就經過吞咽在腸道內定居了。正常情況下，大多數大腸桿菌是非常安分守己的，他們不但不會給我們的身體健康帶來任何危害，反而還能競爭性抵禦致病菌的進攻，同時還能幫助合成維生素K2，與人體是互利共生的關係。只有在機體免疫力降低、腸道長期缺乏刺激等特殊情況下，這些平日裡的良民才會興風作浪，移居到腸道以外的地方，例如膽囊、尿道、膀胱、闌尾等地，造成相應部位的感染或全身播散性感染。因此，大部分大腸桿菌通常被看作機會致病菌。
【發明內容】
[0003]為克服上述 技術問題，我們提出了以下技術方案:
大腸桿菌細胞的製備方法，步驟如下:首選挑選合適的細胞菌落，然後將DH5平板劃線，在35攝氏度環境下過夜；其後將囷落接種於囷液中，並導入尚心管中；隨後在35攝氏度的培養箱中過夜；加入10%瓊脂；250rpm搖床過夜；加入100ml的氯化鈣溶液；混懸菌液，離心分離；將上清去除乾淨即可。
[0004]本發明中，保存的時候可以滴入適量甘油。
[0005]本發明中，所述氯化鈣溶液需要提前預冷，並保存在攝氏度4度的環境中。
[0006]本發明的有益效果是，成本低，對環境汙染小，同時獲得的基因擴增可以得到確認。
【具體實施方式】
[0007]大腸桿菌細胞的製備方法，步驟如下:首選挑選合適的細胞菌落，然後將DH5平板劃線，在35攝氏度環境下過夜；其後將菌落接種於菌液中，並導入離心管中；隨後在35攝氏度的培養箱中過夜；加入10%瓊脂；250rpm搖床過夜；加入100ml的氯化鈣溶液；混懸菌液，離心分離；將上清去除乾淨即可，保存的時候可以滴入適量甘油。所述氯化鈣溶液需要提前預冷，並保存在攝氏度4度的環境中。[0008]以上所述，僅為本發明較佳的【具體實施方式】，但本發明的保護範圍並不局限於此，任何熟悉本【技術領域】的技術人員在本發明披露的技術範圍內，根據本發明的技術方案及其發明構思加以等同替換或 改變，都應涵蓋在本發明的保護範圍之內。
【權利要求】
1.大腸桿菌細胞的製備方法，其特徵在於，步驟如下:首選挑選合適的細胞菌落，然後將DH5平板劃線，在35攝氏度環境下過夜；其後將菌落接種於菌液中，並導入離心管中；隨後在35攝氏度的培養箱中過夜；加入10%瓊脂；250rpm搖床過夜；加入100ml的氯化鈣溶液；混懸菌液，離心分離；將上清去除乾淨即可。
2.如權利要求1所述的大腸桿菌細胞的製備方法，其特徵在於，保存的時候可以滴入適量甘油。
3.如權利要求1所述的大腸桿菌細胞的製備方法，其特徵在於，所述氯化鈣溶液需要提前預冷，並保存在攝氏 度4度的環境中。
【文檔編號】C12R1/19GK103602612SQ201310525800
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年10月31日 優先權日:2013年10月31日
【發明者】徐麗 申請人:徐麗