聚乙二醇化的AβFAB的製作方法

2023-10-07 23:12:14 2

專利名稱：聚乙二醇化的AβFAB的製作方法
聚乙二醇化的APFAB本發明涉及結合澱粉樣蛋白β (Αβ )肽且共價結合一個或多個聚乙二醇(PEG)分 子的抗體片段。環狀的Αβ肽由前體蛋白質澱粉樣蛋白前體蛋白質(APP)切割產生的39-43個氨 基酸(大部分為40或42個胺基酸)組成。Αβ從可溶形式向具有高β摺疊含量的不可 溶形式的轉換以及其在腦中作為神經炎斑點和腦血管斑點的沉積似乎與許多病症和疾病 (包括阿爾茨海默氏病、唐氏綜合症和腦澱粉樣血管病(CAA))相關。預防和/或逆轉Αβ 的沉積可治療與Αβ肽相關的病症。影響A β沉積的治療劑包括針對A β肽的抗體，例如在WO 2001/62801、 W02004/071408 和 Tamura, Y.，等，Neurobiol. of Dis. (2005)20 :541_545 中討論的人源化 抗體和片段。儘管許多抗體及其衍生物可用於診斷和治療，但對於特定應用而言常常無法獲得 理想的抗體藥物代謝動力學。旨在治療與Aβ肽相關的多種病症和疾病的治療性抗體通常 為具有完整Fc區的免疫球蛋白。Fc區負責延長血漿中抗體的半衰期。然而，由於這種延長 阻止了有效清除與靶肽結合的抗體，導致抗原抗體複合體在血漿循環中延時存在，因此該 延長可能是不利的。隨後施用抗體導致血漿中不想要複合體的進一步積累。抗體的Fc部 分可能具有某些不必要的效應子作用，因此需要進行修飾以去除這種作用。此外，Fc部分 向整體治療添加了顯著的大小，所述治療常產生與遞送路徑、遞送裝置和擴大製備過程相 關的問題。已在體內研究了包括Fab在內的無Fc部分的抗體片段以測定是否此類片段可能 為潛在的治療法。然而，研究提示由於清除率快和半衰期短，所以限制了涉及如Fab的片段 的治療有效性。因此，需要有活性的治療性抗Αβ肽抗體分子，所述抗體分子具有這樣的藥 物代謝動力學和藥物動力學，其允許改善給藥方案而避免由血漿中複合體的形成產生和潛 在的效應子作用的潛在副作用。本發明克服了與可能靶向Αβ肽的治療性抗體或抗體片段相關的許多問題。本發 明的化合物包括結合Αβ且共價結合一個或多個聚乙二醇(PEG)分子的抗體片段。這些化 合物可在細菌或酵母細胞系統中產生，所述細菌或酵母細胞系統消除了與哺乳動物細胞系 中產生抗體相關的多種問題，例如成本問題、純化問題和汙染內源產生的抗原問題。此外， 本發明的化合物可經皮下施用並具有理想的藥物代謝動力學(PK)和藥物動力學(PD)譜， 同時保持抗體片段對Aβ親和力和選擇性。非常無法預測且意外地，申請人還發現共價結合PEG分子至抗體片段的互補決定 區(CDR)未改變抗體片段對A β的活性、親和力或選擇性。本發明提供包含抗體片段的分子，所述抗體片段在第13-28位胺基酸之間特異性 結合人A β肽，其中抗體片段共價結合PEG分子。優選地，抗體片段為Fab片段。在一個實施方案中，本發明提供包含抗體片段的分子，所述抗體片段具有重 鏈可變區和輕鏈可變區，其中所述輕鏈可變區包含具有以下胺基酸序列的CDR區 CFRLl SSSQSLIYSDGNAYLH (SEQ ID NO :6)、CDRL2 :KVSNRFS (SEQ ID NO 7)禾口 CDRL3 TQSTHSPffT (SEQ IDNO 8)且其中所述重鏈可變區包含具有以下胺基酸序列的⑶R區 CDRHl :GYTFSRYSMS(SEQ ID NO :9)、CDRH2 :QINIRGCNTYYPDTVKG(SEQ ID NO: 10)或 QINIRGNNTYYPDTVKG (SEQ ID NO :11)禾口 CDRH3 :GDF (SEQ ID NO : 12)。優選地，此類分子具有 共價結合抗體片段重鏈可變區或輕鏈可變區的PEG分子。更優選地，此類分子具有共價結 合CDR的PEG分子。甚至更優選地，此類分子具有共價結合CDR內半胱氨酸殘基的PEG分 子。最優選地，此類分子具有共價結合抗體片段重鏈可變區⑶RH2 :QINIRGCNTYYPDTVKG(SEQ ID NO 10)的 PEG 分子。在另一實施方案中，本發明提供包含抗體片段的分子，所述抗體片段具有輕鏈可 變區SEQ ID NO :1和重鏈可變區SEQ ID NO :2。優選地，此類分子具有共價結合抗體片段 的重鏈可變區或輕鏈可變區的PEG分子。更優選地，此類分子具有共價結合抗體片段重鏈 可變區的CDR的PEG分子。甚至更優選地，此類分子具有共價結合抗體片段的重鏈可變區 的CDR內半胱氨酸殘基的PEG分子。最優選地，此類分子具有共價結合重鏈可變區SEQ ID NO 2的第56位胺基酸處的半胱氨酸的PEG分子。在另一實施方案中，本發明提供包含Fab片段或ScFv片段的分子，其中Fab片段 或ScFv片段共價結合PEG分子並具有輕鏈可變區SEQ IDNO 1和重鏈可變區SEQ ID NO :2。 優選地，此類分子具有共價結合重鏈可變區SEQ ID NO :2的第56位胺基酸處的半胱氨酸的 PEG分子。同樣優選地，在此類分子中PEG的分子量約為0. 5kD至30kD，更優選為20kD。在另一實施方案中，本發明提供包含具有輕鏈可變區SEQ ID NO :1和重鏈可變區 SEQ ID NO 2的抗體片段的分子，其中所述抗體片段在重鏈可變區SEQ ID NO 2的第56位 處共價結合20kD的PEG分子。優選地，在此類分子中PEG分子經馬來醯亞胺鍵進行共價結
I=I O在另一實施方案中，本發明提供包含在第13-28位胺基酸間特異結合人A β肽的 抗體片段的分子，其中所述抗體片段共價結合PEG分子並具有輕鏈可變區SEQ ID NO 1和 重鏈可變區SEQ ID NO :3。優選地，此類分子具有共價結合抗體片段絞鏈區的PEG分子。更 優選地，所述PEG經馬來醯亞胺鍵共價結合絞鏈區。本發明還包括包含抗體片段的分子，所述抗體片段優選為人源化抗體片段，其中 PEG分子共價結合抗體片段，所述抗體片段產生具有允許每周給藥方案的藥物代謝動力學 和藥物動力學的活性治療分子，同時將可能是由血漿中複合體形成造成的潛在副作用最小 化且保留或改善抗體片段對Aβ的活性、親和力和選擇性。本發明還包括治療、預防或逆轉與Αβ肽相關的病症和疾病的方法，所述病症和 疾病包括臨床前和臨床(pre-clinical and clinical)阿爾茨海默氏病、唐氏綜合症和臨 床前和臨床腦澱粉樣血管病(CAA)認知缺陷、中風、腦溢血和一般性精神衰弱。這些方法包 含向受試者施用有效量的此處描述和要求保護的分子。本發明提供包含在第13-28位胺基酸間特異結合Αβ肽的抗體片段的分子，其中 所述抗體片段共價結合PEG分子。我們已發現PEG分子共價連接結合A β的抗體片段未負 面地改變抗體片段對Αβ的活性、親和力或選擇性。更令人驚奇地，我們發現具有高達20kD 分子量的PEG分子共價連接結合A β的抗體片段的CDR也未負面地改變抗體片段對A β肽 的活性、親和力或選擇性。這些抗體片段可經皮下施用且具有用於支持可變通給藥方案的 治療用途的改善的PK/PD譜。此外，這些抗體片段可在細菌或酵母細胞系統中產生，所述細
4菌或酵母細胞系統消除了與在哺乳動物細胞中製備全長抗體相關的多種問題。本發明的聚 乙二醇化抗體片段提供了在預防和治療上預防和治療人中與Aβ肽相關的病症的可能性。天然存在的全長抗體為包含四條肽鏈的免疫球蛋白分子，所述四條肽鏈為通過 二硫鍵互相連接的兩條重(H)鏈(全長時約為50-70kDa)和兩條輕(L)鏈(全長時約為 25kDa)。每一條鏈的氨基端部分包括主要負責抗原識別的約100-110個或更多個胺基酸的 可變區。每一條鏈的羧基端部分定義主要負責效應子作用的恆定區。輕鏈分為κ或λ且特徵為具有特定的恆定區。每一條輕鏈包含N端輕鏈可變區 (此處為「LCVR」)和包含一個結構域CL的輕鏈恆定區。重鏈分為Y、μ、α、δ或ε，且 分別將抗體的同種型定義為IgG、IgM、IgA、IgD和IgE，並且這些中的幾種可進一步分為亞 類(同種型)例如IgGp IgG2、IgG3、IgG4, IgA1和IgA2。每一種重鏈類型的特徵在於特定的 恆定區。每一重鏈包含N端重鏈可變區(此處為「HCVR」)和重鏈恆定區。對IgG、IgD和 IgA而言，重鏈恆定區包含3個結構域(CH1、CH2和CH3)；而對IgM和IgE而言，重鏈恆定區 包含4個結構域(CHI、CH2、CH3和CH4)。HCVR區和LCVR區可進一步細分為高變區，命名為互補決定區(「⑶R」)，其上散 布更保守的命名為框架區(「FR」)的區域。每一個HCVR和LCVR由三個⑶R和四個FR組 成，自氨基端向羧基端按如下順序排列FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。此處重鏈的 3 個 CDR 稱為「CDRHl、CDRH2 和 CDRH3」 並且輕鏈的 3 個 CDR 稱為「CDRLl、CDRL2 和 CDRL3，，。 CDR包含與抗原形成特異性相互作用的大部分殘基。HCVR和LCVR區內的CDR胺基酸殘基 的編號及位置與眾所周知的Kabat編號規定一致。每一條輕_重鏈對的可變區形成抗體的抗原結合位點。如此處所用，「抗原結合 部分」或「抗原結合區」或「抗原結合結構域」或「抗原結合位點」可相互取代地指代抗體分 子的部分，其包含與抗原相互作用且賦予抗體對抗原的特異性和親和力的胺基酸殘基。該 抗體部分包括維持抗原結合殘基正常構象所必需的「框架」胺基酸殘基。優選地，本發明抗 體的框架區為人起源或基本為人起源(至少為80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或 99%人起源)且遵循Kabat編號。或者，抗原結合區可來自人序列。如此處所用，術語「抗體片段」指保留特異結合抗原(例如Αβ )能力的抗體的一個 或多個片段。包含在術語抗體的「抗體片段」中的分子的實例包括(i)Fab片段，由VL、VH、 CL和CHl結構域組成的單價片段；(ii)F(ab' )2片段，包含在絞鏈區由二硫鍵連接的兩個 Fab片段的二價片段；(iii)由VH和CHl結構域組成的Fd片段；(iv)由抗體單個臂的VL和 VH 結構域組成的 Fv 片段，和(v)dAb 片段(Ward，等，(1989)Nature341 544-546)，其由 VH 結構域組成。此外，儘管Fv片段的兩個結構域VL和VH由不同基因編碼，但可使用重組方法 通過合成接頭(該接頭使它們形成單條蛋白質鏈，其中VL區和VH區配對以形成單價分子) 將它們連接起來(稱為單鏈Fv(scFv)；參閱，例如Bird等(1988) Science242 :423_426 和 Huston 等(1988)Proc. Natl. Acad. Sci. USA85 :5879_5883)。此類單鏈抗體也旨在包含於 術語「抗體片段」中。術語「抗體片段」也包含單鏈抗體的其他形式，例如雙體(diabody)。 雙體是二價雙特異性結合蛋白質，其中VH和VL結構域表達於單條多肽鏈上，但使用的接頭 太短以至於無法在同一條鏈的兩個結構域之間形成配對，因此迫使該結構域與另一條鏈的 互補結構域配對並形成兩個抗原結合位點(參閱，例如HolIiger，P.，等(1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 :6444_6448 ；Pol jak, R. J.，等(1994) Structure 2 1121-1123)。
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更進一步，抗體或其抗體片段可為通過抗體或抗體片段與一種或多種其他蛋白質 或肽共價或非共價結合形成的更大免疫粘著分子的一部分。此類免疫粘著分子的實例包 括使用鏈黴抗生物素蛋白核心區以產生四聚體scFv分子(Kipriyanov，S. Μ.，等(1995) Human Antibodies andHybridomas 6 :93_101)，和使用半胱氨酸殘基、標記肽和C端多組氨 酸標籤以產生二價和生物素化的scFv分子(Kipriyanov, S. Μ.，等(1994)Mol. Immunol. 31 1047-1058)。可使用常規技術如整個抗體的木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化分別從整個抗體中 製備抗體片段，例如Fab和F(ab' )2片段。此外，如本領域中眾所周知，可使用標準重組 DNA技術獲得抗體、抗體片段和免疫粘著分子。抗體、抗體片段和免疫粘著分子可為糖基化 或非糖基化的且仍落在本發明的範圍內。優選地，抗體片段為Fab片段。術語「人源化抗體」指部分或全部由來自人抗體種系的胺基酸序列或重排序列組 成的抗體，其通過改變具有非人CDR的抗體序列獲得。可變區的框架區可由對應的人框 架區取代。人框架區包括基因組框架區以及包含一個或多個胺基酸取代的那些區域。具 體而言，此類取代包括其中由來自非人CDR的天然框架相應位置的胺基酸取代人框架中 特定位置的胺基酸的突變。例如，具有小鼠CDR的人源化抗體可包含用相應的小鼠框架 胺基酸取代特定的人框架胺基酸的一處或多處取代。其他描述參與人源化可能使用的小 鼠抗體的方法的參考是例如Queen等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88 =2869,1991 ；美國專 利號 5,693, 761 ；美國專利號 4,816, 397 ；美國專利號 5，225，539 ；在 Levitt, Μ.，J. Mol. Biol. 168 595-620,1983中描述的電腦程式ABMOD和ENCAD ；人源化可基本上按Winter 及其同事的方法進行(Jones 等，Nature, 321 -.522-525,1986 ；Riechmann 等，Nature, 332 323-327，1988 Verhoeyen 等，Science, 239 1534-1536，1988)。優選地，本發明的抗體為人 源化抗體片段。更優選地，本發明的抗體是人源化抗體fab片段。本發明還包括共價結合一個或多個PEG分子的抗體片段。希望術語「聚乙二醇」 和「PEG」可相互取代使用且指代本領域中公知的聚乙二醇或其衍生物(參閱，例如美國專 利號5，445，090 ；5，900，461 ；5，932，462 ；6，436，386 ；6，448，369 ；6，437，025 ；6，448，369 ； 6，495，659 ；6, 515，100和6，514，491)。優選地，PEG共價結合抗體片段的一個或多個賴氨 酸或半胱氨酸殘基。更優選地，PEG共價結合抗體片段重鏈可變區中的一個或多個賴氨酸 或半胱氨酸殘基。甚至更優選地，PEG共價結合抗體片段CDR內的一個或多個賴氨酸或半胱 氨酸殘基。最優選地，PEG結合所述重鏈可變區SEQ ID NO :2的第56位胺基酸的半胱氨酸 殘基。或者，PEG分子可經連接抗體片段絞鏈區的接頭或間隔分子結合到抗體片段上。向 絞鏈區添加接頭和間隔分子是本領域眾所周知的。此外，PEG可通過本領域公知的技術共 價結合到抗體片段的被修飾非天然胺基酸上。在其一般形式中，「PEG」為具有末端羥基的線性聚合物且具有分子式HO CH2CH2-(CH2CH2O)n-CH2CH2-OH,其中η從約為8至約為4000。端基氫可由保護基團如烷基或 鏈烷醇基團(M-PEG取代。優選地，PEG具有至少一個羥基，更優選地其為末端羥基。優選 激活該羥基以與肽反應。使用多種化學修飾來製備具有功能性基團(例如活性碳酸鹽、活 性酯、醛、tresylate或使用適合於偶聯給定靶分子的PEG丙醛)的活性PEG衍生物。活性 PEG衍生物隨後共價結合多肽藥物的反應性基團。有許多用於本發明的PEG形式。本領域 中存在大量PEG衍生物且均適合在本發明中使用。共價結合本發明抗體片段的PEG分子不 旨在局限於具體類型或大小。PEG分子量優選從約0. 5千道爾頓(kD)至約IOOkD,更優選
6地從約5kD至約30kD，最優選地從約IkD到約20kD。PEG可為線性的或分支的，且本發明的 抗Αβ肽抗體片段可具有1、2、3、4、5或6個與肽結合的PEG分子。最優選為一個PEG分子 抗體片段；然而，當每個肽分子存在多於一個PEG分子時，優選為不多於六個。本發明還涵 蓋PEG分子的兩端均適合與兩個或多個抗A β肽抗體片段分子共同交聯。將PEG分子結合 到蛋白質、抗體及其片段的方法在本領域是眾所周知的。如此處所用的術語「KD」旨在指特定抗體_抗原相互作用的解離常數。根據方程 式KD = k。ff/k。n(以M測定)計算。如此處所用術語「k。n」旨在指結合速率常數，或前者或 複合體形成反應的反應比速(specific reactionrate)，以單位=M4SecT1測定。如此處所 用術語「k。ff」旨在指抗體從抗體/抗原複合體上解離的解離速率常數或反應比速，以單位 sec—1測定。如此處所用的術語「特異結合」指其中特異結合對中的一個成員不顯著地結合 除它特異結合的一個或多個配偶體之外的其他分子的情況。該術語也適用於例如本發 明抗體的抗原結合結構域對於由許多抗原攜帶的特定表位是特異的，在這種情況下帶有 抗原結合結構域的特異性抗體將能夠結合帶有該表位的多種抗原。因此，本發明的分子 特異結合Αβ肽，而不特異結合ΑΡΡ。此外，本發明的分子在線性、非線性或包含胺基酸 HHQKLVFFAEDVGSNK (13-28) (SEQ ID NO 4)的構象 A β 表位間特異地結合。參考本發明的分子，術語「活性」包括但不限於表位/抗原親和力和特異性、在體 內或體外中和或拮抗Αβ肽活性的能力、IC5tl、抗體的體內穩定性和抗體的免疫特性。本領 域中抗體識別的其他可識別的生物學特性或特徵包括例如交叉反應性、(即通常與靶肽的 非人同源物、或與其他蛋白質或組織的交叉反應性)、和在哺乳動物細胞中保持蛋白質高表 達水平的能力。可使用包括但不限於ELISA、競爭性ELISA、Biacore或KinExA表面等離 子共振分析、不受限的體外或體內中和試驗、受體結合、細胞因子或生長因子產生和/或分 泌、信號轉導和對於來自包括人、靈長類或任何其他來源的不同來源的組織切片的免疫組 織化學在內的領域認可的技術觀察、測定或評估前文提到的特性或特徵。此處可互相取代使用的術語「個體」、「受試者」和「患者」指哺乳動物，優選為人。 在特定實施方案中，受試者特徵還在於患有將從Αβ肽活性下降中受益的疾病或障礙或病 症。如此處所用，表述「宿主細胞」、「宿主細胞系」和「宿主細胞培養物」可互相取代 使用並包括單獨的細胞或細胞培養物，其為本發明任何分離的多核苷酸或包含編碼HCVR、 LCVR或本發明單克隆抗體的序列的任何一個或多個重組載體的接受者。宿主細胞包括單 個宿主細胞的後代。由於自然的、意外的或有目的性的突變和/或改變，後代可能在形態或 總DNA補體上與原始親本細胞不完全一致。宿主細胞包括用表達本發明的抗體片段或其輕 鏈或重鏈的重組載體或多核苷酸轉化的、轉導的或感染的細胞。包含本發明重組載體的宿 主細胞無論是否穩定整合入宿主染色體，也可稱為「重組宿主細胞」。用於產生本發明宿主 細胞的優選細胞為CHO細胞(例如ATCC CRL-9096) ,NSO細胞、SP2/0細胞、COS細胞(ATCC 例如，CRL-1650、CRL-1651)和HeLa(ATCC CCL-2)。本發明中使用的另外的宿主細胞包括植 物細胞、酵母細胞、其他哺乳動物細胞和原核細胞。更優選地，本發明中使用的細胞為酵母 或原核細胞。術語「涉及Αβ肽的病症或疾病」或「與具有Αβ活性的疾病相關的病症」意指包括所有與以下相關的病症、病症和疾病1)腦中β澱粉樣蛋白斑的發展，2)Αβ異常形式的 合成，3)Αβ獨特毒性形式的形成，或4)異常的Αβ合成速率、降解速率或清除速率。已知 或推測如阿爾茨海默氏病、唐氏綜合症、腦澱粉樣血管病、某些血管性痴呆和輕度認知缺損 的病症和疾病與Αβ具有這樣的關係。本發明提供包含在第13-28位胺基酸間特異結合Αβ肽的抗體片段的分子，其中 所述抗體片段共價結合到PEG分子上。該抗體片段優選為人源化抗體片段，如Fab片段和 /或scFv片段。最優選地，該抗體片段為Fab片段。本發明的分子特異結合Αβ肽允許所 述分子待用於治療與Αβ肽相關的疾病和病症，即從抑制Αβ肽的生物活性中受益的病症、 疾病或病症。在本發明的一個實施方案中，抗體片段具有重鏈可變區和輕鏈可變區，其中輕 鏈可變區包含具有以下胺基酸序列的CDR區CDRLl :SSSQSLIYSDGNAYLH(SEQ ID NO: 6)、CDRL2 KVSNRFS(SEQ IDNO 7)和 CDRL3 =TQSTHSPffT(SEQ ID NO :8)，禾口 / 或其中重 鏈可變區包含具有以下胺基酸序列的CDR區CDRH1 :GYTFSRYSMS(SEQ IDNO 9)、CDRH2 QINIRGCNTYYPDTVKG(SEQ ID NO 10)或 QINIRGNNTYYPDTVKG(SEQ ID NO: 11)，和 CDRH3 ⑶F(SEQ IDNO 12)。優選地，本發明抗體片段的六個⑶R共同存在。包含本發明⑶R的 組合物通常為抗體重鏈或輕鏈序列或其基本部分，其中CDR位於與Kabat編號一致的位置 上。在框架區內提供由以下化學式呈現的作為連續序列的每條重鏈和輕鏈的三個CDR區 FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。當以有序狀態與CDR排列為連續序列時，重鏈或輕鏈 FRU FR2、FR3和FR4結合形成抗體片段的完整框架區。優選地，本發明抗體的框架區為人 起源或基本為人起源(即超過約80、82、85、87、90、92、95、97% )。優選地，本發明的抗體片段包含LCVR和HCVR，所述LCVR包含以下序列的肽DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCSSSQSLIYSDGNAYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSG SGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCTQSTHSPffTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO 1),所述HCVR包含具有選自以下序列的序列的肽EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGYTFSRYSMSffVRQAPGKGLEffVGQINIRGCNTYYPDTVKGRFT ISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAYYYCTTGDFffGQGTLYTYSS (SEQ ID NO 2)EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGYTFSRYSMSffVRQAPGKGLEffVGQINIRGNNTYYPDTVKGRFT ISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAYYYCTTGDFffGQGTLYTYSS(SEQ ID NO 3)；或者，抗體片段包含LCVR (包含具有由SEQ ID NO 1組成的序列的肽)和HCVR (包 含具有選自SEQ ID NO :2或SEQ ID NO :3的序列的肽)，其中所述HCVR和LCVR共同存在於 抗體片段中。本領域技術人員將理解本發明的抗體片段不局限於HCVR和LCVR的特異性序 列，而且還包括這些序列的變體，所述變體當在本發明的分子中存在時，其保持或改善抗原 結合能力和親本抗體的至少一種其他功能特性，例如表位特異性、與親本抗體競爭結合A β 肽的能力、結合A β肽的IC50和/或Kd或k。ff值。在本發明的另一實施方案中，所有可變區或部分可變區受限於由SEQID NO 1顯 示的特殊LCVR序列和在SEQ ID NO :2或SEQ ID NO :3中顯示的HCVR，並且進一步的特徵在 於其在體內或體外拮抗或中和至少一種Aβ肽活性。本發明抗體進一步的特徵在於其特異 結合人A β肽但不結合人ΑΡΡ，所述抗體中所有可變區或部分可變區受限於由此處的LCVRSEQID NO :1，禾口 HCVR SEQ ID NO :2 或 SEQ ID NO 3 中顯示的特殊序列。在本發明的一個方面中，PEG(或其衍生物)共價結合抗體片段的一個或多個賴氨 酸、半胱氨酸或非天然修飾的胺基酸殘基。優選地，PEG分子共價結合抗體片段的重鏈可變 區或輕鏈可變區。更優選地，此類分子具有共價結合到抗體片段重鏈可變區的CDR上的PEG 分子。最優選地，此類分子具有共價結合重鏈可變區SEQ ID NO :2的第56位胺基酸處的半 胱氨酸的PEG分子。或者，PEG分子可經針對抗體片段絞鏈區的接頭或間隔分子結合到抗 A β肽Fab抗體片段上。在本發明的另一方面中，PEG分子共價結合本發明抗體的一個或多個改造的賴氨 酸、半胱氨酸或非天然修飾的胺基酸殘基，以取代抗體分子上存在的糖基化而不顯著影響 抗體片段對Αβ的親和力和選擇性。優選地，PEG分子在抗體片段的重鏈可變區或輕鏈可 變區上取代糖基化信號。更優選地，PEG分子在抗體片段重鏈可變區的CDR上取代糖基化 信號。最優選地，PEG分子在重鏈可變區SEQ ID NO :2的第56位處取代糖基化信號。在本發明中共價結合到抗體上的PEG分子不旨在局限於特定的類型或大小。PEG 分子量優選從約0. 5kD至約IOOkD,更優選地從約0. 5kD至約30kD，最優選地從約IkD到約 20kD。或者PEG分子量可選自約0. 5kD、約lkD、約5kD、約IOkD和約20kD。PEG可為線性 的或分支的，且本發明的聚乙二醇化的抗Αβ肽抗體可具多於一個結合到肽上的PEG分子。 優選地，每一聚乙二醇化的抗A β肽抗體具有一個PEG分子。更優選地，本發明的抗體分子包含具有輕鏈可變區SEQ ID NO :1和重鏈可變區SEQ ID NO :2的抗體片段，其中所述抗體片段在重鏈可變區SEQ ID NO :2的第56位處共價結合 到20kD的PEG分子上。本發明抗體結合的抗原性Αβ肽表位是包含胺基酸HHQKLVFFAEDVGSNK(SEQ ID NO 4)的線性、非線性或構象表位。結合所述表位的抗體與它們結合的APP相比特異且優 先結合Αβ肽。本發明的單克隆抗體結合Αβ肽比它結合人APP高出至少2、5、10、20、30、 40、50、60、70、80、90或100倍(例如更高親和力或更高特異性)；更優選地比它結合APP高 出至少150、200、250、300、350、400、450、500、550或600倍，甚至更優選地它在高於如ELISA 試驗、競爭性ELISA試驗或Biacore或KinExA試驗中的Kd值測定的背景水平的水平上不 結合APP。本發明的抗體片段結合胺基酸HQKLVFFAEDVGSNK(SEQ ID NO 5)間的表位比 不包含胺基酸 HQKLVFFAEDVGSNK(SEQ ID NO 5)的表位高出至少 2、5、10、20、30、40、50、 60、70、80、90或100倍(例如更高親和力或更高特異性)。更優選地，比不包含胺基酸 HQKLVFFAEDVGSNK (SEQ ID NO 5)的表位高出至少 150、200、250、300、350、400、450、500、550 或600倍，甚至更優選地它在高於如ELISA試驗、競爭性ELISA試驗測定的背景水平的水平 上，或Biacore或KinExA試驗中的Kd值不結合不包含胺基酸HQKLVFFAEDVGSNK (SEQ ID NO: 5)的表位。在優選的實施方案中，本發明提供抗體片段，所述抗體片段對Αβ肽具有強 親和力，即結合A β肽或其包含序列HQKLVFFAEDVGSNK (SEQID NO 5)的部分[即與 HQKLVFFAEDVGSNK多肽接觸的抗體]，具有通過KinExA方法測定的對人A β肽低於約 200ρΜ、100ρΜ、50ρΜ、40ρΜ或30ρΜ，優選地為低於20ρΜ的結合親和力(Kd)。或者，對人Αβ 肽的結合親和力(Kd)介於0. 1ρΜ-200ρΜ之間。可按下文中實施例或本領域可得的其他方法中描述的進行測定抗體親和力。本發明抗體的給藥途徑可為口服、腸胃外、通過吸入或局部。優選地，本發明抗體 可整合入適合腸胃外給藥的藥物組合物中。如此處所用的術語腸胃外包括靜脈內、肌內、皮 下、直腸、陰道、腹膜內施用。優選通過靜脈內或腹膜內或皮下注射的外周全身給藥。更優 選地，本發明抗體的給藥途徑是經皮下注射。用於此類注射的合適載體在本領域是顯而易 見的。本發明的抗體片段在血漿中較相應的抗Αβ肽全長抗體具有更短的半衰期，且較 相應的抗Αβ肽全長抗體能更快地被從血漿中清除。或者，本發明的抗體較相應的非共價 結合PEG分子的抗A β肽Fab片段具有更長的血漿半衰期，且較相應的非共價結合PEG分 子的抗Αβ肽Fab片段能更慢地被從血漿中清除(實施例1、2和3)。參考如此處所用的抗 體的術語「相應的」指具有相同LCVR和HCVR的抗體。例如，參考具有SEQ ID NO :1的LCVR 和由SEQ ID NO 2組成的HCVR的抗體Fab片段的相應全長抗體將具有相同的SEQ ID NO 1的LCVR和由SEQ ID NO 2組成的HCVR，及完整的Fc結構域。在另一方面，本發明涉及當表達時編碼抗體的重組多核苷酸包含SEQID NO 1的 LCVR和由SEQ ID Ν0:2組成的HCVR。由於密碼子簡併性，其他多核苷酸序列可容易被取代 成這些序列。本發明特別優選的多核苷酸編碼當表達時包含SEQ ID Ν0:6-8的輕鏈⑶R， 和SEQ ID NO :9、10或11和12的重鏈CDR，或SEQ ID NO =I-SEQ ID NO :3的任何可變區的 抗體。編碼SEQ ID NO 1的LCVR和SEQ ID NO 2的HCVR的多核苷酸序列的實例分別示於 SEQ ID NO 13 (LCVR)和 SEQ ID NO 14 (HCVR)中。多核苷酸通常還將包括有效連接到人源化免疫球蛋白編碼序列上的表達控制多 核苷酸，其包含天然結合的或異源的啟動子區。優選地，表達控制序列將為在能夠轉化或轉 染真核細胞的載體中的真核啟動子系統，但也可使用用於原核細胞的控制序列。一旦將載 體整合進合適的宿主細胞系中，宿主細胞在適合表達核苷酸序列的條件下繁殖，並且如期 望的，可接著收集和純化輕鏈、重鏈、輕/重鏈二聚體或完整抗體、結合片段或其他免疫球 蛋白形式。可使用多種眾所周知的技術從多種不同多核苷酸(基因組寡核苷酸或cDNA、RNA、 合成寡核苷酸等)和組分(例如V、J、D和C區)形成能夠最終表達所期望抗體或抗體片段 的本發明的核酸序列。將合適的基因組序列和合成序列連接起來是製備的常用方法，但也 可利用cDNA序列。可根據眾所周知的方法從多種人細胞中分離人恆定區DNA序列，但優選從不凋亡 的B細胞中分離。可從本領域眾所周知的多種來源中獲得用於多核苷酸序列的合適的來源 細胞和用於免疫球蛋白表達和分泌的宿主細胞。除此處特別描述的人源化抗體或抗體片段外，可利用對本領域技術人員熟知的多 種重組DNA技術容易地設計並製備其他「基本同源的」修飾後抗體。例如，框架區可通過幾 個胺基酸替代、末端和中部添加和缺失等而在一級結構水平上與天然序列不同。此外，多種 不同的人框架區可單獨或組合用作與本發明人源化抗體的基礎。通常，可通過多種眾所周 知的技術如定向誘變來容易地完成基因修飾。如前文陳述，當序列已有效連接到(即定位以確保功能)表達控制序列之後多核 苷酸將在宿主中進行表達。這些表達載體通常作為游離基因或作為宿主染色體DNA的整合
10部分在宿主細胞中複製。通常，表達載體將包含選擇標記，例如四環素或新黴素以允許檢測 那些轉化有所期望DNA序列的宿主細胞。這些細胞的表達載體可包括表達控制序列，如復 制起始區、啟動子、增強子和必需的加工信息位點例如核糖體結合位點、RNA剪切位點、多腺 苷酸化位點和轉錄終止序列。優選的表達控制序列是來自免疫球蛋白基因、SV40、腺病毒、 牛乳頭狀瘤病毒、巨細胞病毒等的啟動子。可通過眾所周知的方法(其根據細胞類型而有所不同)將包含目的多核苷酸序列 (例如重鏈和輕鏈編碼序列和表達控制序列)的載體轉入宿主細胞。可使用本領域周知的 技術將多種宿主用於表達本發明的抗體。優選的細胞系包括C0S、CH0、SP2/0、NS0(可從如 公共保藏處ATCC，美國典型培養物保藏中心Manassas，VA獲得)和酵母細胞系。優選地， 本發明的宿主細胞包含一種或多種包含本發明核酸分子的載體或構建體。本發明的宿主細 胞是已引入本發明載體的細胞，所述載體包含編碼本發明的LCVR的多核苷酸和/或編碼本 發明的HCVR的多核苷酸。本發明也提供已引入本發明的兩個載體的宿主細胞；一個載體包 含編碼本發明抗體的LCVR的多核苷酸，一個載體包含編碼存在於本發明抗體中的HCVR的 多核苷酸，並且每一載體有效連接啟動子序列。細胞類型包括哺乳動物細胞、細菌細胞、植 物細胞和酵母細胞。優選地，細胞為CHO細胞、COS細胞、SP2/0細胞、NSO細胞、酵母細胞或 任何優選細胞類型的衍生物或後代。本發明的完整抗體、其二聚體、各個輕鏈和重鏈、或其他免疫球蛋白形式一旦表 達，可根據本領域的標準方法對其進行純化，所述方法包括硫酸銨沉澱、離子交換、親和、反 相、疏水性相互作用柱層析、凝膠電泳等。對藥物使用而言，優選基本上至少約90%、92%、 94 %或96 %同質性的基本純免疫球蛋白，且最優選98 %至99 %或更高同質性的基本純免 疫球蛋白。肽一旦被部分純化或純化達到所期望的同質性，就可如此處所示在治療上或預 防上使用。導致認知缺陷、中風、腦溢血和一般性精神衰弱的許多症狀似乎與含Αβ肽的腦 中神經炎和腦血管斑相關。這些病症為臨床前和臨床阿爾茨海默氏病、唐氏綜合症、和臨 床前和臨床腦澱粉樣血管病(CAA)。澱粉樣蛋白斑形成自Αβ肽。這些肽通常以與脂蛋 白的複合形式在血液和腦脊液(CSF)中循環。循環形式的Αβ肽由從常見前體蛋白質， 常命名為APP的澱粉樣前體蛋白質剪切獲得的39-43個胺基酸(主要為40或42個氨基 酸)組成。可溶性AP的一些形式自身具有神經毒性且可決定神經變性和/或認知衰退的 嚴重性(McLean，C. Α.，等，Ann. Neturol. (1999)46:860-866 ；Lambert，Μ. P.，等(1998)迪 6448-6453 ；Naslund, J.，J. Am. Med. Assoc. (2000) 283 1571)。因此，包含本發明分子的藥物組合物可用於治療或預防這樣的病症，其中Αβ肽 的存在引起或促進不期望的病理學效果或Αβ肽活性的降低在哺乳動物優選人中具有治 療益處，所述病症包括但不限於臨床或臨床前阿爾茨海默氏病、唐氏綜合症、臨床或臨床前 澱粉樣蛋白血管病(CAA)、前驅阿爾茨海默氏病、輕度認知缺損(MCI)和認知缺陷、中風、腦 溢血和一般性精神衰弱，所述病症似乎與含Αβ肽的腦中神經炎和腦血管斑相關。此處涵 蓋本發明的分子用於治療或預防至少一種上述病症(其中Αβ肽活性是有害的或其從生物 活性Αβ肽水平降低中受益)的用途。此外，涵蓋本發明分子用於製備治療至少一種上述 病症的藥物中的用途。如此處所用，術語「治療(treatment) 」、「治療(treating) 」等指獲得所期望的藥
11理學和/或生理學效果。所述效果可以是對疾病和/或歸屬於疾病發展的不利作用的部分 治療或完全治療。如此處所用，「治療(treatment)」包括尤其是向人施用化合物，且包括 (a)抑制疾病，即停滯其發展；或(b)緩解疾病，即導致疾病或病症的復原或緩和其症狀或 併發症。可調整給藥方案來提供最佳的期望應答(例如，治療或預防應答)。例如，可快速 濃注施用，可在一段時間內施用幾份分次劑量或根據治療情況的緊急程度所示按比例減少 或增加劑量。可將本發明分子摻入適合於向受試者施用的藥物組合物中。本發明分子可按一 次劑量或多劑量單獨施用或與可藥用載體、稀釋劑和/或賦形劑組合施用。設計用於施用 的藥物組合物以適合選定的施用方式，並在適當時使用可藥用稀釋劑、載體和/或賦形劑 如分散劑、緩衝液、表面活性劑、防腐劑、增溶劑、等滲劑、穩定劑等(例如見此處的實施例 14) ο 按照例如 ReminRton, The Science and Practice of Pharmacy,第 19 版,Gennaro 編 著，Mack Publishing Co.，Easton, PA 1995中的常規技術設計所述組合物，所述文獻提供 了從業者公知的製備技術一覽表。可使用包括口服、靜脈內、腹膜內、皮下、肺部、透皮、肌內、鼻內、口腔、舌下或栓劑 施用在內的標準施用技術向具有如此處所述病理學風險或出現如此處所述病理學的受試 者施用包含本發明分子的藥物組合物。優選地，可通過皮下施用向具有如此處所述病理學 風險或出現如此處所述病理學的受試者施用本發明的分子。本發明的藥物組合物優選為「治療有效量」或「預防有效量」的本發明分子。「治 療有效量」指在劑量和必需的時間周期上獲得所期望治療結果的有效量。分子的治療有效 量可根據如個體的疾病病症、年齡、性別和體重等因素以及分子在個體中誘導所期望應答 的能力而有所變化。治療有效量還是其中治療有益作用大於分子的任何毒害作用或不利作 用的量。「預防有效量」指在劑量和必需的時間周期上獲得所期望的預防結果的有效量。通 常，由於在受試者患病之前或早期使用預防劑量，預防有效量將少於治療有效量。治療有效量或預防有效量是必需給予受試者治療益處的活性物質的至少最小劑 量但低於中毒劑量。換言之，治療有效量的本發明分子在哺乳動物優選為人中降低Aβ肽 活性(例如結合Αβ肽)的量，其中Αβ肽的存在引起或促進不想要的病理效應或Αβ肽 的降低在哺乳動物優選人中引起有益的療效。本發明分子的給藥途徑可以是口服、腸胃外、通過吸入、或局部給藥。優選地，可將 本發明的抗體摻入到適合腸胃外給藥的藥物組合物中。如此處所用的術語腸胃外包括靜脈 內、肌內、皮下、直腸、陰道、或腹膜內施用。優選通過靜脈內或腹膜內或皮下注射的外周全 身給藥。最優選皮下注射。用於此類注射的合適載體在本領域中是顯而易見的。藥物組合物通常必須為無菌且在生產和所提供的容器(例如包括密封的管或注 射器)中貯存的條件下是穩定的。因此，藥物組合物可在製成後進行無菌過濾，或另在微生 物(方面)上製成可接受的。靜脈輸注的典型組合物可以具有多達250-1000ml液體的體 積(例如無菌的林格氏溶液、生理鹽水、葡萄糖溶液和Hank』 s溶液)和治療有效劑量(例 如1至100mg/ml或更多)的治療劑，以遞送下文列出的典型劑量。劑量可基於疾病的類型 和嚴重性而變化。如在醫學領域眾所周知的，用於任何一名受試者的劑量取決於許多因素， 所述因素包括患者的大小、體表面積、年齡、待施用的特定化合物、性別、給藥時間和途徑、 一般健康和同時施用的其他藥物。例如，典型劑量可在0. 001至IOOOmg範圍內；然而，特別
12是考慮到上文提到的因素時，可考慮低於或高於該示例性範圍的劑量。每日腸胃外劑量方 案可以為每天從約0. lmg/kg至約100mg/kg總體重，優選為從約0. 3mg/kg至約10mg/kg且 更優選為從約lmg/kg至lmg/kg，甚至更優選為從約0. 5至10mg/kg體重。可通過周期評估 來監測進程。對於在幾天或更長時間的重複施用，根據情況重複治療直至產生期望的疾病 症狀的抑制。然而，其他劑量方案也是有用的，並不由此未排除在外。根據從業人員希望獲 得的藥物代謝動力學衰減模式(pattern of pharmacokineticdecay)，可通過分子的單次 快速濃注施用、多次濃注施用或連續輸注施用來遞送所期望的劑量。本發明分子的這些建議用量受許多治療上的考慮。選擇合適劑量和時間安排上的 關鍵因素是所獲得的結果。在該上下文中考慮的因素包括治療的具體病症、治療的具體哺 乳動物、個別患者的臨床情況、病症的原因、抗體遞送位點、抗體的具體類型、施用方法、施 用時間安排和醫療從業人員公知的其他因素。本發明的治療劑可冷凍或凍幹用於貯存並且在使用之前在合適的無菌載體中重 構。凍幹和重構可能會導致抗體活性不同程度的損失。可能需要調整劑量來補償。以下實施例旨在說明而非不限制本發明。下文的實施例使用命名為「266」 (m266) 的鼠類單克隆抗體(其最初通過用人Αβ肽第13-28位殘基組成的肽免疫製備)和命名為 266(m266-Fab)的鼠類單克隆抗體的Fab片段。確認抗體與該肽可以進行免疫反應。前面已 經描述過m266的製備。為將PEG分子共價結合到m266-Fab上，可在重鏈可變的CDR2 (N56C) 中引入半胱氨酸殘基將Fab突變且以下文顯示的方式將其聚乙二醇化(實施例4)。如此處 實施例描述在鼠類系統中進行的實驗，鼠類單克隆抗體的使用是令人滿意的。然而，在旨在 用於人的本發明的治療方法中，優選本發明抗體的人源化形式或其片段。在下文的實施例 中涉及的IAl-Fab是包含SEQ ID NO 1的LCVR和SEQ ID NO 2的HCVR的人源化抗體Fab 片段。實施例1PDAPP 小鼠中 m266_Fab PEG 皮下 PK/PD 研究使用幼小的(3個月大)轉基因PDAPP小鼠以研究抗體和抗體-Αβ複合體的 藥物代謝動力學/藥物動力學血漿反應。研究了幾種抗體，包括小鼠Fab(m266-Fab)、 m266-Fab+5KD PEG、m266_Fab+10KD PEG、m266_Fab+20KD PEG 和完整的全長 m266IgG 抗 體。用lmg/kg的抗體通過皮下注射PDAPP+/-小鼠，隨後在以下時間點分離血漿服藥後 1、4、8、24、48、96、168和240小時。由於這部分的快速翻轉，所以在額外早的時間點對接受 m266-Fab抗體的動物進行分析。用於m266_Fab的時間點如下服藥後1、4、8、12、16、24和 48小時。在每個時間點對每種抗體分析了總共5隻動物。通過用連接到ICC注射器上的 23號針頭進行心臟穿刺獲得全血，所述ICC注射器先前已經用0. 5M EDTA衝洗過。在分離 過程中將血樣在冰上進行溫育，並隨後在4°C，冷凍微量離心機中以14，000轉/分鐘離心 15分鐘。將所得血漿樣品等分並儲存在-80°C。Α.用於Fab PK分析的方法學使用抗原捕獲ELISA測定血漿Fab的濃度。簡言之，在4°C用A β -BSA綴合物過夜 包被平板或在37°C包被1小時，然後用Pierce酪蛋白緩衝液進行封閉。向平板中加入標準 樣品、對照樣品和研究樣品，然後在室溫下溫育1小時。山羊抗小鼠HRP用於檢測並用OPD 底物對比色反應進行顯色。平板在A493的吸光度處進行讀數，參考A700。從標準曲線測定來自血漿樣品的免疫反應性的濃度，使用4/5-參數算法從小鼠血漿中m266 Fab的已知量 製備所述標準曲線。m266 Fab的測定範圍是0. 05到0. 5 μ g/mL。聚乙二醇化的Fab的範 圍是 0. 075 到 0. 8 μ g/mL。從標準曲線測定來自血漿樣品的免疫反應性的濃度，使用4/5-參數算法從小鼠 血漿中m266 Fab的已知量製備所述標準曲線。266 Fab的測定範圍是0. 05到0. 5 μ g/mL。 聚乙二醇化Fab的範圍是0. 075到0. 8 μ g/mL。結果清晰地證實，添加PEG分子並增加PEG 分子的大小提高了聚乙二醇化Fab相比於非聚乙二醇化m266-Fab(8小時後為350ng/ml) 在血漿中的停滯(對20K聚乙二醇化m266-Fab而言，8小時後為2545ng/ml)。B. m266A β ELISA 測定為了測定在不存在或存在治療抗體(全長或Fab片段)的情況下血漿Αβ的量，發 展並使用了 ELISA測定。在這些測定法中測定的Αβ肽是全長Αβ 1-40或Αβ 1-42。用PBS 中10 μ g/ml (每孔100 μ 1)的C端捕獲抗體(對A β 40平板而言為m2G3或對A β 42平板 而言為 m21F12)在 4°C過夜包被 96 孔 Immulon 4HBX 96 孔 ELISA 板(ThermoLabsystems)。 在過夜溫育過程中將測試平板密封以防止蒸發。第二天，去除孔內溶液並用Labsystems 96-孔板洗滌器用PBS (每孔400 μ 1)將孔洗滌3次。加入封閉緩衝液(360 μ 1的牛 奶-PBS)並在37°C溫育平板1小時。通過稀釋血漿將樣品製備成樣品稀釋液，以產生以下 20%血漿、0. 5M 胍、5mM Tris pH 8. 0、0. 5X 蛋白酶抑制劑混合物、25 μ g/ml m266 和 PBS。 因存在高水平的Αβ肽，所以在某些時間點上可能需要減少用於測定的血漿體積，並且在 這些情況下，用大鼠血漿調整剩餘的血漿體積(最終百分比體積維持在20%)。在標準稀 釋液(20%大鼠血漿、0. 5Μ胍、5mM Tris pH 8. 0和完全無EDTA的0. 5X蛋白酶抑制劑混合 物(Roche Diagnostics)、25 μ g/ml m266 和 PBS)中產生濃度在 250pg/ml 到 3. 9pg/ml 之 間變化的A β標準物。需要在樣品和標準稀釋液中摻入25 μ g/ml的完整m266，以中和測 定中不同水平的中心結構域抗體可能產生的任何負幹擾。封閉後，用PBS洗滌平板4次。 一式三份來裝載樣品和標準物(每孔100 μ 1)，封閉平板並在4°C溫育過夜。第二天早晨， 用PBS-T(PBS+0. 05% Tween-20)洗滌平板4次，並在室溫下將孔與生物素化的第二抗體 m3D6 (在0. 5% BSA/PBS-T中稀釋的每孔100 μ 1)溫育2小時。用PBS-T洗滌平板4次後， 它們與鏈黴抗生物素蛋白-多聚HRP(在0. 5% BSA/PBS-T中為1 5000)在室溫下溫育 1. 5小時。用PBS-T洗滌平板4次並每孔加入100 μ 1的TMB(Sigma)底物。在15、30和60 分鐘，650nm處監測比色反應的進行。表1.藥物動力學結果用於A β 40 (pg/ml)的平均血漿濃度
時間m266m266Fabm266Fabm266Fab完整(h)Fab+5KD+IOKD+20KDm266PEGPEGPEG
權利要求
包含抗體片段的分子，所述抗體片段在第13 28位胺基酸之間特異結合人Aβ肽，其中所述抗體片段共價結合聚乙二醇分子。
2.權利要求1的分子，其中所述抗體片段為Fab片段。
3.權利要求1或2的分子，其中所述抗體片段包含輕鏈可變區SEQIDNO :1和重鏈可 變區 SEQ ID NO :2。
4.權利要求1-3中任一項的分子，其中所述聚乙二醇分子共價結合所述抗體片段的重 鏈可變區。
5.權利要求4的分子，其中所述聚乙二醇分子共價結合所述抗體片段重鏈可變區的CDR。
6.權利要求3-5中任一項的分子，其中所述聚乙二醇分子共價結合所述重鏈可變區 SEQ ID NO 2第56位胺基酸處的半胱氨酸。
7.權利要求1或2的分子，其包含輕鏈可變區SEQID NO 1和重鏈可變區SEQ ID NO 3。
8.權利要求7的分子，其中所述聚乙二醇分子共價結合所述抗體片段的絞鏈區。
9.權利要求1-8中任一項的分子，其中所述聚乙二醇分子具有約0.5kD至約30kD的分子量。
10.權利要求9的分子，其中所述聚乙二醇分子具有約20kD的分子量。
11.由在第13-28位胺基酸之間特異結合人Αβ肽的抗體片段組成的分子，其中所述抗 體片段共價結合聚乙二醇分子。
12.包含具有輕鏈可變區SEQID NO :1和重鏈可變區SEQ ID NO :2的抗體片段的分子， 其中所述抗體片段在重鏈可變區SEQ ID NO 2第56位處共價結合20kD的聚乙二醇分子。
13.組合物，其包含權利要求1-12中任一項的分子。
14.權利要求13的組合物，其還包含可藥用載體。
15.治療或預防與Αβ肽活性相關的病症的方法，所述方法包括向需要其的人受試者 施用有效量的權利要求1-12中任一項的分子。
16.治療選自臨床或臨床前阿爾茨海默氏病、唐氏綜合症或臨床或臨床前澱粉樣蛋白 血管病(CAA)、認知缺陷、中風、腦溢血和一般性精神衰弱的病症的方法，所述方法包括向人 受試者施用有效量的權利要求1-12中任一項的分子。
17.根據權利要求1-12中任一項的分子用作藥物的用途。
18.根據權利要求1-12中任一項的分子在製備用於治療或預防與Αβ肽活性相關的病 症的藥物中的用途。
19.根據權利要求1-12中任一項的分子在製備用於治療或預防選自臨床或臨床前阿 爾茨海默氏病、唐氏綜合症、臨床或臨床前澱粉樣蛋白血管病(CAA)、認知缺陷、中風、腦溢 血和一般性精神衰弱的病症的藥物中的用途。
全文摘要
本發明描述了在預防上和治療上治療與Aβ肽活性相關的病症的方法。該方法使用在第13-28位胺基酸之間特異結合人Aβ肽的人源化抗體片段，其中所述抗體片段共價結合聚乙二醇(PEG)分子。
文檔編號A61K47/48GK101981053SQ200880002621
公開日2011年2月23日 申請日期2008年1月9日 優先權日2007年1月18日
發明者C-K·喬, J·盧, K·R·貝爾斯, P·C·麥克唐奈, R·B·德馬託斯, R·J·漢森, T·F·布摩爾, U·庫希波特拉 申請人:伊萊利利公司