一種豬源植物乳桿菌凍幹製劑及其製備方法

2023-10-09 23:54:54

專利名稱：：一種豬源植物乳桿菌凍幹製劑及其製備方法
技術領域：
：本發明涉及微生物及其應用領域，尤其涉及一種豬源物乳桿菌凍幹製劑及其製備方法
背景技術：
：在動物體內棲息著數百種的細菌，其數量超過百萬億個，其中對動物健康有益的叫益生菌，以乳酸菌、雙歧桿菌為代表，對人體和動物有害的叫有害菌。當益生菌佔優勢時(佔總數的80%以上)，動物保持健康狀態，否則處於亞健康或非健康狀態。長期以來，養殖者們往往只局限於眼前的經濟效益，在飼料中盲目添加抗生素，這不僅殺滅了有害菌，同時也抑殺了有益菌，導致腸道微生態系統處於菌群失調狀態。近年來的科學研究結果證明，在飼料中添加益生菌製劑可以起到與抗生素完全相反的作用，它可以抑制有害菌的數量，增加有益菌的數量，起到維持腸道微生態系統平衡的作用。其中，以乳酸菌為代表的益生菌製劑是應用最多、最為廣泛的一類，眾所周知，乳酸菌是動物必不可少的且具有重要生理功能的有益菌，它們數量的多和少，直接影響動物的健康。目前已有大量研究報導這類益生菌製劑具有良好的生物學功能，被證實在臨床上能夠治療和預防動物的某些腸道疾病或者起保健作用，並已在飼料業中被廣泛應用。植物乳桿菌aacto^cz7/wp/朋tor鵬)是普遍存在於人和動物腸道的有益乳酸桿菌，它屬於兼性異型乳酸發酵菌，是乳酸桿菌屬中重要的種群之一。研究表明植物乳桿菌可定植於動物腸道內，代謝可產生乳酸、乙酸等物質，有抑制腸道有害菌生長和繁殖的作用，能夠發酵多種碳水化合物，如單糖(葡萄糖、甘露糖、半乳糖等)、雙糖(蔗糖、乳糖、海藻糖等)、低聚糖(棉籽糖、松三糖等)，是我國農業部允許使用的飼料級微生物菌種之一。目前市場上已經湧現出大量此類益生菌產品，但由於新的乳酸菌產品標準尚不完善，產品存在著質量不穩定，活菌數低、穩定性差等問題，製成凍幹製劑是將菌穩定保存的一種有效的方法，由於乳酸菌在冷凍乾燥過程中易造成部分細胞的損傷、死亡及某些酶蛋白分子的鈍化，許多研究發現乳酸菌在凍幹前加入適當的物質凍幹保護劑可以減輕或防止冷凍和乾燥兩個過程對細胞的損害，從而對菌體起到保護作用，由於乳酸菌具有種屬特異性，即使在相同的外部條件下，不同來源的同種菌在凍幹過程中也可能表現出不同的特性，目前尚無效果優良且適合添加到動物詞料的植物乳桿菌凍幹製劑，有些凍幹製劑配方雖然凍幹後的細菌存活率高，但保存穩定性差，在生產運輸包裝的過程中容易失活，導致添加到飼料中後難以發揮自身的優異特性。有些研究凍幹保護劑的報導如2008年李家鵬等人(《響應面發優化植物乳桿菌冷凍乾燥保護劑配方的研究》，食品科學，2008，Vol.29，No.06)所公開的凍幹保護劑的配方，能得到較高的菌存活率，但沒有報導其對於菌的保存穩定性的效果，但凍幹製劑的保存穩定性非常重要，從製取凍幹製劑到伺餵動物之前，凍幹製劑中的活菌數取決於凍幹保護劑提供的保存穩定性，而活菌數是決定該菌的凍幹製劑是否能發揮有益效果的關鍵。而且其配方的特性不適合於實際生產，實際生產中如中試水平以上的生產，所採用的配方既要保證菌存活率高、穩定性好還要考慮到適應生產設備、可操作性、產品得率等因素，該文獻提供的最優配方採用海藻糖，需要的成本太高，因此也不適合生產成添加到詞料中的凍幹製劑。上述諸多問題影響益生菌製劑在動物飼料中的應用發展。
發明內容本發明針對上述領域的不足，提供一種豬源植物乳桿菌凍幹製劑及其製備方法，該凍幹製劑活菌數量高、保存穩定性好，在直接飼餵及添加到飼料中都能充分發揮乳桿菌在動物體內的生態平衡功能。一種豬源植物乳桿菌凍幹製劑，其特徵在丁-製備凍幹製劑時所用的凍幹保護劑的重量百分比為脫脂奶粉16%，穀氨酸鈉1.5%,L-半胱氨酸0.5%,乳糖2%，糊精10%，其餘為水。所述豬源植物乳桿菌凍幹製劑中活菌數^10'^fu/g。所述豬源植物乳桿菌來源於保育豬盲腸黏膜。上述的豬源植物乳桿菌凍幹製劑的製備方法，步驟是將豬源植物乳桿菌菌液進行增菌培養，增菌培養液在6000rpra離心10min，取菌泥，加入凍幹保護劑，凍幹時間為20-28小時。所述凍幹時間為26小時。所述增菌培養的培養基重量百分比為胰蚩白腖0.5%，乳糖1%，酵母浸粉0.5%，乙酸鈉0.5%，磷酸氫二鉀0.2%，檸檬酸氫二銨0.2%，四水硫酸猛0.025%，七水硫酸鎂0.0058%，吐溫一800.1%，其餘為水。所述增菌培養的參數為培養基的pH為6.46.5，植物乳桿菌接種量為1%，37"C培養24小時，轉速為100rpm。上述凍幹製劑在動物詞料添加劑中的應用。所述動物為豬。本發明為了使植物乳桿菌在動物飼料屮得到良好的應用並充分發揮其益生菌的作用，提供一種凍幹保護劑配方，將來源於豬的植物乳桿菌製成的凍幹製劑添加到保育豬飼料中，進行33天的飼養試驗，證明0.3。/。植物乳桿菌+基礎日糧組表現出最好的效果，見表D，顯著超過詞用抗生素如金黴素的效果，說明在本發明提供的凍幹保護劑中，植物乳桿菌有良好的存活率與保存穩定性，能充分發揮降低豬腹瀉率、提高豬日增重和飼料利用率的功能。本發明通過大量實驗分析，從菌存活率與菌保存穩定性兩方面綜合考察，獲得了一組使菌存活率高，且保存穩定性高的凍幹保護劑配方，其重量百分比為脫脂奶粉16%，穀氨酸鈉1.5%,L-半胱氨酸0.5%，乳糖2%，糊精10%，其餘為水。選擇脫脂奶粉為懸浮物質，脫脂奶粉能在菌體外形成蛋白膜，對細胞加以保護；乳糖是一種還原糖，它可以抑制質膜的相變，對乳酸菌的凍幹脫水其有顯著的保護作用，且成本低廉，適於實際生產使用研究表明，L-半胱氨酸對菌體的保護作用較好，可使細胞在冷凍前發生胞漿分離，並且在細胞壁與細胞膜間聚集而形成阻止冰晶形成的緩存帶，從而為細胞膜提供了機械保護；選用了易於溶於水的糊精，不需要加熱溶解，簡化了中試生產程序。屮試生產屮該凍幹保護劑製得的凍幹製劑中活菌數為10l2cfu/g，該凍幹製劑在常溫保存12個月時其中活菌數仍然可以保持3.3X10^fu/g，良好的保存穩定性以及適合的生產成本使其適於添加到常規生產的飼料中。本發明中增菌培養採用的培養基採用專門的培養基，重量百分比優選為胰蛋白腖0.5%，乳糖1%，酵母浸粉0.5%，乙酸鈉0.5%，磷酸氫二鉀0.2%，檸檬酸氫二銨0.2%，四水硫酸錳0.025%,七水硫酸鎂0.058%，吐溫一800.1%，其餘為水，其增菌效果比普通MRS活菌數提高了2個數量級，見表8。由於本發明獲得的豬源植物乳桿菌凍幹製劑的植物乳桿菌為普通動物腸道常見的益生菌，因此，該凍幹製劑在動物飼料中都可以添加。由於本發明的植物乳桿菌來源為豬，因此優選將該凍幹製劑用於豬詞料中。綜h所述，本發明提供的豬源植物乳桿菌凍千製劑的凍幹保護劑，能為植物乳桿菌提供良好的凍幹保護，能得到較高的菌存活率與保存穩定性，且生產工藝簡單，成本合理，使本發明的凍幹製劑非常適於應用到動物詞料中。具體實施例方式實施例1製備豬源植物乳桿菌凍幹製劑步驟1豬源植物乳桿菌的分離鑑定無菌刮去健康保育豬腸道內容物，以滅菌生理鹽水衝洗腸道，用載玻片刮取一定量的腸黏膜，稱取lg樣品，置於裝有99ml無菌生理鹽水的三角瓶中，將其分散均勻，吸取lml菌液於裝有9ml無菌生理鹽水的試管中此稀釋度為10—、重複以上過程，依次製成1(T2、IO一3、10—4、l(T5、10—6的菌液。選擇It)—4、IO-5、IO-6三個稀釋度，吸取O.lml菌液分別滴於MRS改良培養基平板上，採用燭缸法37t:培養2448h，挑取形態不同的菌落分別在其選擇培養基上劃線接種做純培養，而後置於4'C冰箱保存備用。然後挑取純培養物進行染色，鏡檢；選取無芽孢革蘭氏陽性桿菌進行接觸酶、硝酸鹽還原、明膠液化等生化實驗，以及糖醇發酵試驗，結果與《常見細菌系統鑑定手冊》、《乳酸細菌分類及實驗方法》對照，確定菌種。然後送至中國工業微生物菌種保藏中心進行鑑定檢驗。分子生物學鑑定結果表明，該菌株與戊糖乳桿菌、植物乳桿菌相似性為99.7%，所依據基因序列見表l，進一歩進行生化鑑定其生化特性見表1最接近植物乳桿菌，確定該菌為植物乳桿菌。本發明所用的植物乳桿菌是豬盲腸黏膜上的常見菌，保存在北京市農林科院畜牧所實驗室，可向公眾發放；採用常規方法或用歩驟一所述的方法分離並參照其生理生化特性進行鑑定也可獲得。表1植物乳杆茼分子生物學鑑定報告tableseeoriginaldocumentpage6751GGTAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATACCGTAAACGATGAA801TGCTAAGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTA851AGCATTCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTGAAACTCAAAGGAATTG901ACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCTACGC951GAAAAACCTTACCAGGTCTTGACATACTATGCAAATCTAAAAGATTAGAC1001GTTCCCTTCGGGGACATGGATACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCG1051TGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATTATC1101GGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGC1151GGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGC1201TACACACGTGCTACAATGGATGGTACAACGAGTTGCGAA表2豬源植物乳桿菌生理生化特徵試驗報告生理特徵培養溫度rc)37°C需氧性厭氧耐鹽性INI)檸檬酸ND氧化酶一接觸酶_B引哚—硝酸鹽還原ND七葉靈水解+明膠液化—甘露醇+水楊苷+山梨醇+葡萄糖產氣ND葡萄糖+果糖+生化特徵苦杏仁苷+乳糖+麥芽糖+蔗糖+甘露糖+棉籽糖+鼠李糖—阿拉伯糖+海藻糖+山梨糖一纖維二糖+核糖+木糖—松三糖+肝糖ND注表中"+"表7:^90%菌株呈陽性，"-"表示290%菌株呈陰性，"ND"表示未測定。步驟2豬源植物乳桿菌耐酸耐膽鹽特性將豬源植物乳桿菌接種於MRS液體培養基中，培養24h，將菌液梯度稀釋，取10—5的稀釋液lml接種於含0.3%膽鹽的MRS平板和不含膽鹽的MRS平板塗板，置於37"培養48h，進行菌落計數，計算存活率。存活率(％)=(含0.3X膽鹽的MRS固體培養基中的活菌數/MRS固體培養基對照中的活菌數)xlOO。以上試驗過程重複2次，結果取平均值。將豬源植物乳桿菌接種於MRS液體培養基中，培養24h，以1%的接種量加入pH為3.0的MRS培養基中，做兩份，一份用滅菌生理鹽水梯度稀釋，取l(T5的稀釋液lml接種MRS平板塗板，置於37'C培養48h，進行菌落計數，即Oh的活菌數。另一份室溫處理lh後，再用滅菌生理鹽水梯度稀釋，取10—5的稀釋液lml接種MRS平板塗板，置於37'C培養48h，進行菌落計數，即lh的活菌數，並計算出乳酸菌的存活率。存活率(％)=(lh的活菌數/Oh的活菌數)x100。以上試驗過程重複2次，結果取平均值。表3豬源植物乳桿菌耐膽鹽和耐酸試驗結果tableseeoriginaldocumentpage8步驟3豬源植物乳桿菌的增菌培養增菌培養基氮源魚肉蛋白腖，胰蛋白腖，大豆蛋白腖；均為生化級試劑。碳源乳糖，蔗糖，葡萄糖；均為分析純試劑。生長因子維生素C，酵母浸出粉，牛肉浸膏。緩衝鹽類K2HP04、檸檬酸氫二銨、乙酸鈉、MgS04.7H20、MnS04.4H20;均為分析純試劑。3.1增菌培養基的配製增菌培養基的備選材料是以MRS培養基的營養組成為依據，參照食物成分表，經預試驗確定。選擇氮源(A)、碳源(B)、生長因子(C)和(D)鹽類(鹽類包括無機鹽和緩衝鹽)為試驗因素，設計正交試驗獲取培養基的最佳組成。培養基氮源、碳源及其他營養成分之間可能存在協同作用，而D因素與其他三個因素間的差別大，因此可將其與其他因素的交互作用忽略不計。各營養成分的比例為氮源0.5%，碳源1%，生長因子0.5%，無機鹽和緩衝鹽類成分不變，其餘為水。具體因素水平項目設計和乳酸菌增菌培養基配方如表4和表5所示。表4培養基正交試驗因素水平表tableseeoriginaldocumentpage9表5增菌培養基配方表tableseeoriginaldocumentpage9增菌培養基的配製培養液經加熱沸煮，經濾紙過濾，使增菌液呈完全澄清透明，以便於比色，增菌液經105"滅菌15min。3.2菌液吸光值(OD600)的測定配製各種培養基後分別以1%的量接種，在37'C培養24h，用UV4802型紫外分光光度計在600nm條件下比色測定菌液吸光值。pH213型酸度計在室溫下測定菌液pH值。植物乳桿菌增菌培養基成分篩選正交試驗結果見表6，植物乳桿菌增菌培養基中指標的極差分析結果見表7。表6豬源植物乳桿菌增菌培養基成分篩選正交試驗結果tableseeoriginaldocumentpage10表8增菌培養基與MRS培養基的活菌數比較培養基植物乳桿菌增菌培養基3.65X10'2cfu/mlMRS培養基1.82X10'0cfu/ml步驟4凍幹保護劑配方的優選材料乳糖、蔗糖、可溶性澱粉、甘油、抗壞血酸、L一半胱氨酸、脫脂奶粉、穀氨酸鈉、L一穀氨酸、糊精。4.1凍幹保護劑的配製選取8種保護劑，以脫脂奶粉為基礎，將8種保護劑按不同濃度隨機組合成10組保護劑配方如表9。植物乳桿菌在最佳增菌培養基中培養24小時，6000r/min，離心10min棄上清，去菌泥，加入與菌泥等容積的保護劑製成菌懸液，取0.5ml菌懸液用生理鹽水稀釋至10—7，取10ul接種MRS培養基，計數。剩下的菌懸液分裝，並置於超低溫預凍2小時，迅速放入小型凍幹機，真空冷凍乾燥。表9不向保護劑對植物乳桿菌存活率的影響tableseeoriginaldocumentpage11計數培養基為MRS培養基葡萄糖20.0g，蛋白腖10.0g，牛肉膏10.0g,酵母膏5.0g，乙酸鈉5.0g,擰檬酸二銨2.0g,吐溫(Tween)80l.OmL，K2HP042.0g，MgSQ4'7H200.58g，MnS04'4H200.25g，瓊脂20g，蒸餾水1000mL，pH為6.5，12rC滅菌15min。結果表明當保護劑組合為16%脫脂奶粉+2%乳糖+10%糊精+0.5°/丄-半胱氨酸+1.5%穀氨酸鈉時，豬源植物乳桿菌凍千製劑的存活率最高，達88.89%，因此，確定為最佳凍幹保護劑。4.2植物乳桿菌中試生產將植物乳桿菌採用增菌培養基擴大培養後，6000r/min，離心10min棄上清，取菌泥，採用最佳保護劑，製成菌懸液，取0.5ml菌懸液用生理鹽水稀釋至10—7，取10ul接種MRS培養基，計數。其餘菌懸液分裝，置於中型凍幹機中進行冷凍乾燥，結果見表10。表10植物乳桿菌中試生產活菌數tableseeoriginaldocumentpage124.3植物乳桿菌凍十菌粉貯存穩定性測定將植物乳桿菌凍幹菌粉用鋁箔袋包裝後，常溫保存6個月、9個月、12個月後，取菌粉，用無菌生理鹽水進行梯度稀釋後，採用MRS培養基測定活菌數。結果見表11。由表11可知，植物乳桿菌凍幹菌粉常溫保存6個月後，活菌數仍可達到10nCfu/g，存活率達68.75%，常溫保存12個月，活菌數仍可達到109cfu/g。表ll植物乳桿菌貯存穩定性測定tableseeoriginaldocumentpage12歩驟5豬源植物乳桿菌凍幹製劑的製備植物乳桿菌增菌培養後，收取培養液，6000r/min，離心10min取菌泥，將菌泥加入到以最佳配比配置的凍幹保護劑中，製成與離心前增菌培養液濃度相同的菌懸液。將菌懸液倒入中型凍十機的物料千燥盤中，抽真空開始進行凍十。凍幹26小時後即得植物乳桿菌凍乾產品，測定後活菌數為1.6xl012cfu/g。步驟6豬源植物乳桿菌凍幹製劑的安全性能測定將豬源植物乳桿菌凍幹製劑送至農業部獸藥安全監督檢驗測試中心進行了大、小鼠急性毒性LDso實驗，結果證明了豬源植物乳桿菌凍幹製劑對於大、小鼠經口LDso均大於5000mg/kg體重，證明了該凍幹製劑屬安全性飼料添加劑。實施例2豬源植物乳桿菌凍幹製劑的抑菌試驗表12為植物乳桿菌的抑菌試驗結果。可以看出，該菌株對致病性大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌都有較強的抑制作用，均判定為中度敏感，其中對沙門氏菌的抑菌圈直徑最大，抑菌效果最好；大腸桿菌次之；金黃色葡萄球菌最差。間接證明，植物乳桿菌對大腸桿菌、沙門氏菌等易引起豬腸道感染、腹瀉的疾病有預防性作用。表12植物乳桿菌體外抑菌試驗結果病原菌抑菌圈直徑(mm)敏感性判定~大腸桿菌中度敏感沙門氏菌13.7中度敏感金黃色葡萄球菌11.7中度敏感實施例3豬源植物乳桿菌凍幹製劑在保育豬生產中的應用效果將凍幹製劑按不同添加比例關係添加到28日齡保育豬飼料中，試驗隨機分成4組，每組16頭，試驗期33天。試驗分抗生素組、0.3%豬源植物乳桿菌凍幹製劑組、0.5%豬源植物乳桿菌凍幹製劑組、0.7%豬源植物乳桿菌凍幹製劑組。保育豬在網床上飼養，舍溫保持在2527°C，粉料飼喂，自由來食，自由飲水。試驗結果見表12。表13豬源植物乳桿菌凍幹製劑詞餵仔豬試驗組別試驗期(天)頭數(頭)試驗期內口增重試驗期內料肉試驗期內死亡豬瘟抗體OD63。值(g/d)比率(％)(33天)對照(金黴素+3316393a1.98a00.41a基礎日糧)0.3%豬源植物乳桿菌凍幹制3316405a1.95a00.78b齊U+基礎日糧0.5%豬源植物乳桿菌凍幹制3316374b2.03b6.250.74h齊U+基礎日糧0.7%豬源植物乳桿菌凍幹制3316364b2.10b12.500.72b齊U+基礎曰糧注縱向比較，數據的上標字母不同者差異顯著(P0.05)。由表13可見，伺餵豬源植物乳桿菌凍千製劑33天時，0.3%豬源植物乳桿菌凍幹製劑+基礎日糧組的效果最好，日增重、料肉比、死亡率和豬瘟效價等指標都是最佳的，並且超過飼用抗生素(金黴素)的同類效果。13附錄序列表北京市農林科學院—種豬源植物乳桿菌凍幹製劑及其製備方法P09140/NLK1Patentlnversion3.3<210〉1<211〉1239DNA<213〉植物乳桿菌鑑定所依據的基因序列1gatacatgcaagtcgaacgaactctggtattgattggtgcttgcatcatgattctactat60ttgagtgagtggcgaactggtgagtaacacgtgggaaacctgcccagaagcgggggataa120cacctggaaacagatgctaataccgcataacaacttggaccgcatggtccgagcttgaaa180gatggcttcggctatcacttttggatggtcccgcggcgtattagctagatggtggggtaa240cggctcaccatggcaatgatacgtagccgacctgagagggtaatcggccacattgggact300gagacacggcccaaactcctacgggaggcagcagtagggaatcttccacaatggacgaaa360gtctgatggagcaacgccgcgtgagtgaacaagggtttcggctcgtaaaactctgttgtt420aaagaagaacatatctgagagtaactgttcaggtattgacggtatttaaccagaaagcca480cggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtaggtggcaagcgttgtccggattta540ttgggcgtaaagcgagcgcaggcggttttttaagtctgatgtgaaagccttcggctcaac600cgaagaagtgcatcggaaactgggaaacttgagtgcagaagaggacagtggaactccatg660tgtagcggtgaaatgcgtagatatatggaagaacaccagtggcgaaggcggctgtctggt720ctgtaactgacgctgaggctcgaaagtatgggtagcaaacaggattagataccctggtag780tccataccgtaaacgatgaatgctaagtgttggagggtttccgcccttcagtgctgcagc840taacgcattaagcattccgcctggggagtacggccgcaaggctgaaactcaaaggaattg900acgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagctacgcgaaaaacctt960accaggtcttgacatactatgcaaatctaaaagattagacgttcccttcggggacatgga1020tacaggtggtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaa1080cgagcgcaacccttattatcggaggaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgcccctta1140tgacctgggcggaggaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggc1200tacacacgtgctacaatggatggtacaacgagttgcgaa12391權利要求1.一種豬源植物乳桿菌凍幹製劑，其特徵在於製備凍幹製劑時所用的凍幹保護劑的重量百分比為脫脂奶粉16％，穀氨酸鈉1.5％，L-半胱氨酸0.5％，乳糖2％，糊精10％，其餘為水。2.根據權利要求1所述的豬源植物乳桿菌凍幹製劑，所述豬源植物乳桿菌凍幹製劑中活菌數>1012cfu/g。3.根據權利要求1所述的豬源植物乳桿菌凍幹製劑，所述豬源植物乳桿菌來源於保育豬盲腸黏膜。4.權利要求1至3任一所述的豬源植物乳桿菌凍幹製劑的製備方法，步驟是將豬源植物乳桿菌菌液用增菌培養基進行增菌培養，增菌培養液在6000rpm離心10min，取菌泥，加入凍幹保護劑，凍幹時間為20-28小時。5.根據權利要求4所述的製備方法，所述凍幹時間為26小時。6.根據權利要求4所述的製備方法，所述增菌培養基重量百分比為胰蛋白腖0.5%，乳糖1%，酵母浸粉0.5%，乙酸鈉0.5%，磷酸氫二鉀0.2%，檸檬酸氫二銨0.2%，四水硫酸錳0.025%,七水硫酸鎂0.058%，吐溫一800.1%，其餘為水。7.根據權利要求6所述的製備方法，所述增菌培養的參數為增菌培養基的pH為6.46.5，植物乳桿菌接種量為1%，37"C培養24小時，轉速為100rpm。8.權利要求1至3任一所述的豬源植物乳桿菌凍幹製劑在動物飼料添加劑中的應用。9.根據權利要求8所述的應用，所述動物為豬。全文摘要本發明涉及「一種豬源植物乳桿菌凍幹製劑及其製備方法」，屬於微生物應用領域。一種豬源植物乳桿菌凍幹製劑，其特徵在於凍幹製劑中凍幹保護劑的重量百分比為脫脂奶粉16％，穀氨酸鈉1.5％，L-半胱氨酸0.5％，乳糖2％，糊精10％，其餘為水，該凍幹保護劑不僅使菌存活率高，且具有良好的保存穩定性，使其非常適合添加到飼料中；將本發明的凍幹製劑添加到保育豬飼料中，結果證明具有降低豬腹瀉率、提高豬日增重和飼料利用率的功能，顯著超過飼用抗生素(金黴素)的效果；本發明還提供了專門適合豬源植物乳桿菌的增菌培養基，該培養基比普通MRS培養基增菌效果好，活菌數提高2個數量級。文檔編號A23K1/16GK101548716SQ20091008244公開日2009年10月7日申請日期2009年4月17日優先權日2009年4月17日發明者單達聰,季海峰,張董燕,王四新,王雅民,蘇布敦格日樂申請人:北京市農林科學院