一種小兒七星茶口服液指紋圖譜的建立方法及其標準指紋圖譜的製作方法

2023-10-11 07:42:59 3

一種小兒七星茶口服液指紋圖譜的建立方法及其標準指紋圖譜的製作方法
【專利摘要】本發明涉及中藥製劑質量控制領域，公開了一種小兒七星茶口服液HPLC標準指紋圖譜及其建立方法。所述的指紋圖譜的建立方法，包括如下步驟：供試品和對照品溶液的製備，色譜條件的確定，指紋圖譜的測定，其特徵在於，所述的色譜條件為：檢測波長為280～340nm；柱溫為20～40℃，流速為0.8～1.5ml/min，以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以pH值為2.0～4.0的水溶液為流動相B，在50～80min內進行線性梯度洗脫，流動相A的起始體積分數為3～7%，結束時的體積分數為20～40%。該方法可快速、準確地鑑別產品的真偽優劣，具有方法簡便、穩定、精密度高、重現性好等優點。
【專利說明】一種小兒七星茶口服液指紋圖譜的建立方法及其標準指紋 圖譜

【技術領域】
[0001] 本發明涉及中藥製劑質量控制領域，更具體地，涉及一種小兒七星茶口服液指紋 圖譜的建立方法及其標準指紋圖譜。

【背景技術】
[0002] 小兒七星茶口服液中的主要成分為薏苡仁、稻芽、山楂、淡竹葉、鉤藤、蟬蛻、甘草。 主治功能為，定驚消滯，用於小兒消化不良，不思飲食，二便不暢、夜寐不安。中山市恒生藥 業有限公司是目前唯一一家獲國家食品藥品監督管理總局批准生產小兒七星茶口服液的 企業。
[0003] 中藥指紋圖譜是一種綜合的，可量化的鑑定手段，它是建立在中藥化學成分系統 研究的基礎上，主要用於評價中藥材以及中藥製劑半成品質量的真實性、優良性和穩定性。 中藥及其製劑均為多組分複雜體系，因此評價其質量應採用與之相適應的，能提供豐富鑑 別信息的檢測方法，建立中藥指紋圖譜將能較為全面地反映中藥及其製劑中所含化學成分 的種類與數量，進而對藥品質量進行整體描述和評價。中藥指紋圖譜技術已涉及眾多方 法，包括薄層掃描（TLCS)、高效液相色譜法（HPLC)、氣相色譜法（GC)和高效毛細管電泳法 (HPCE )等色譜法以及紫外光譜法（UV )、紅外光譜法（IR)、質譜法（MS )、核磁共振法（NMR)和 X-射線衍射法等光譜法。其中色譜方法為主流方法，尤其是HPLC、TLCS和GC已成為公認 的三種常規分析手段。由於HPLC具有分離效能高、選擇性高、檢測靈敏度高、分析速度快、 應用範圍廣等特點。中藥成分絕大多數可在高效液相色譜儀上進行分析檢測，且積累較豐 富的應用經驗。因此高效液相色譜法已成為中藥指紋圖譜技術的首選方法。
[0004] 對於小兒七星茶口服液，目前缺乏全面反映其質量和真偽的方法，現有技術中更 沒有使用HPLC對小兒七星茶口服液進行質量評價。


【發明內容】

[0005] 本發明所要解決的技術問題是，為了克服現有技術的上述不足，提供一種小兒七 星茶口服液指紋圖譜的建立方法及其標準指紋圖譜。
[0006] 本發明所要解決的上述技術問題通過以下技術方案予以實現：
[0007] -種小兒七星茶口服液指紋圖譜的建立方法，包括如下步驟：供試品和對照品溶 液的製備，色譜條件的確定，指紋圖譜的測定，其特徵在於，所述的色譜條件為：檢測波長為 280?340nm ;柱溫為20?40°C，流速為0. 8?1. 5ml/min，以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填 充劑；流動相由流動相A和B組成，以乙腈為流動相A，以PH值為2. 0?4. 0的水溶液為流 動相B，在50?80min內進行線性梯度洗脫，流動相A的起始體積分數為3?7%，結束時的 體積分數為20?40%。
[0008] 該方法可快速、準確地鑑別產品的真偽優劣，具有方法簡便、穩定、精密度高、重現 性好等優點。利用該方法檢測到的小兒七星茶口服液指紋圖譜化學成分相對較多、各特徵 峰高度比例適中，基線較平穩，分離度、峰形和柱效好。
[0009] 作為一種優選方案，所述的線性梯度洗脫的時間為70min ;線性梯度洗脫的的條 件為：
[0010] 〇min時，流動相A的體積分數為3?7%，流動相B的體積分數為97?93% ;
[0011] 25?35min時，流動相A的體積分數為13?17%，流動相B的體積分數為87? 83% ；
[0012] 50?70min時，流動相A的體積分數為20?30%，流動相B的體積分數為80? 70%。
[0013] 作為一種優選方案，所述的線性梯度洗脫的時間為60min ;線性梯度洗脫的的條 件為：
[0014] Omin時，流動相A的體積分數為5%，流動相B的體積分數為95% ;
[0015] 30min時，流動相A的體積分數為15%，流動相B的體積分數為85% ;
[0016] 60min時，流動相A的體積分數為25%，流動相B的體積分數為75%。
[0017] 在指紋圖譜的建立方法中，為了使指紋圖譜中的各特徵峰具有較好的分離度、峰 形及合理的控制指紋圖譜的檢測時間，對於梯度洗脫條件的選擇至關重要，本領域技術人 員在選擇梯度洗脫條件的時候都需要付出大量的實驗不斷對梯度洗脫條件進行優化，因為 對於不同的中藥材及製劑，其中的化學成分千差萬別，不同的藥材及製劑指紋圖譜的洗脫 條件並無參考價值，流動相比例的微小變化將會對指紋圖譜造成很大的影響，如將會影響 特徵峰的分離度和峰形。本申請的發明人通過大量的實驗，對梯度洗脫條件進行摸索，最終 確定了上述梯度洗脫條件。
[0018] 作為一種優選方案，所述的流動相B為體積分數為0. 01?0. 1%冰醋酸水溶液。
[0019] 作為一種最優選方案，所述的流動相B為體積分數為0. 1%冰醋酸水溶液。
[0020] 本發明考察了許多不同的流動相對指紋圖譜的影響，結果表明，採用上述流動相， 指紋圖譜中所得峰的信息較多；基線較平穩，分離度、峰形和柱效最佳。
[0021] 作為一種優選方案，所述的檢測波長為290?320nm ;柱溫為25?35°C，流速為 0· 8 ?L 2ml/min〇
[0022] 作為一種最優選方案，所述的檢測波長為300nm ;柱溫為30°C，流速為1. Oml/min。
[0023] 本發明考察了不同的檢測波長、柱溫對指紋圖譜的影響，結果在上述波長和柱溫 下得到的指紋圖譜，其成分相對較多、各峰高比例適中、基線比較平穩。
[0024] 本發明所述的供試品溶液通過以下方法製備得到：取小兒七星茶口服液過 0. 45 μ m微孔濾膜，即得。本發明考察了利用不同溶劑、不同提取方法製備供試品溶液，結果 表明，在本發明所述方法下製備得到的供試品溶液，經檢測，在指紋圖譜中化學成分相對較 多、各峰高度比例適中，且基線比較平穩，故採用上述方法作為供試品溶液的製備方法。
[0025] 本發明所述對照品溶液的製備方法為取甘草苷對照品，精密稱定，加甲醇製成每 lml含甘草苷0. 1?0. 2mg的溶液。優選地，加甲醇製成每lml含甘草苷0. 14mg的溶液。
[0026] 本發明所述指紋圖譜的測定方法為分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各 2?15 μ 1，注入高效液相色譜儀，測定，記錄色譜圖。優選地，分別精密吸取對照品溶液和 供試品溶液各5 μ 1。
[0027] 所測定的指紋圖譜中含有12個共有特徵峰，其保留時間分別為：6. 301min; 8. 899min ；11.486min ；16. 165min ；17. 234min ；19. 424min ；24. 071min ；25.433min ； 28. 121min ;3L 558min ;36. 210min ;54. 356min〇
[0028] 所測定的指紋圖譜中含有12個共有特徵峰，以甘草苷峰為參照，其相對保留時 間分別為：〇· 1740 ;0· 2458 ;0· 3172 ;0· 4464 ;0· 4759 ;0· 5364 ;0· 6648 ;0· 7024 ;0· 7766 ; 0. 8715 ;1 ;1. 5011。
[0029] 所測定的指紋圖譜中含有12個共有特徵峰，其峰面積為：0. 0596 ;0. 0349 ; 0. 0768 ；0. 0279 ；0. 0642 ；0. 0566 ；0. 0227 ；0. 0191 ；0. 0857 ；0. 1630 ；0. 1732 ；0. 0222〇
[0030] 所測定的指紋圖譜中含有12個共有特徵峰，以甘草苷峰為參照，其相對峰面積 為：0· 3441 ;0· 2015 ;0· 4434 ;0· 1611 ;0· 3707 ;0· 3268 ;0· 1311 ;0· 1103 ;0· 4948 ;0· 9411 ; 1 ;0·1282。
[0031] 本發明具有如下有益效果：（1)該方法可快速、準確地鑑別產品的真偽優劣，具有 方法簡便、穩定、精密度高、重現性好等優點；（2)用該方法檢測到的小兒七星茶口服液指 紋圖譜化學成分相對較多、各特徵峰高度比例適中，基線較平穩，分離度、峰形和柱效好。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0032] 圖1為供試品色譜圖。
[0033] 圖2為經指認後的色譜圖。圖1和2中，峰S為甘草苷。
[0034] 圖3為方法1下製備得到的供試品的色譜圖。
[0035] 圖4為方法2下製備得到的供試品的色譜圖。
[0036] 圖5為方法3下製備得到的供試品的色譜圖。
[0037] 圖6為方法4下製備得到的供試品的色譜圖。
[0038] 圖7為方法5下製備得到的供試品的色譜圖。
[0039] 圖8為方法6下製備得到的供試品的色譜圖。
[0040] 圖9為檢測波長為280nm時的色譜圖。
[0041] 圖10為檢測波長為300nm時的色譜圖。
[0042] 圖11為檢測波長為320nm時的色譜圖。
[0043] 圖12為檢測波長為340nm時的色譜圖。
[0044] 圖13為流動相1下得到的色譜圖。
[0045] 圖14為流動相2下得到的色譜圖。
[0046] 圖15為流動相3下得到的色譜圖。
[0047] 圖16為流動相4下得到的色譜圖。
[0048] 圖17為流動相5下得到的色譜圖。
[0049] 圖18為流動相6下得到的色譜圖。
[0050] 圖19為流動相7下得到的色譜圖。
[0051] 圖20為流動相8下得到的色譜圖。
[0052] 圖21為流動相9下得到的色譜圖。
[0053] 圖22為流動相10下得到的色譜圖。
[0054] 圖23為梯度1下得到的色譜圖。
[0055] 圖24為梯度2下得到的色譜圖。
[0056] 圖25為梯度3下得到的色譜圖。
[0057] 圖26為梯度4下得到的色譜圖。
[0058] 圖27為梯度5下得到的色譜圖。
[0059] 圖28為梯度6下得到的色譜圖。
[0060] 圖29為梯度7下得到的色譜圖。
[0061] 圖30為梯度8下得到的色譜圖。
[0062] 圖31為梯度9下得到的色譜圖。
[0063] 圖32為梯度10下得到的色譜圖。
[0064] 圖33為梯度11下得到的色譜圖。
[0065] 圖34為梯度12下得到的色譜圖。
[0066] 圖35為梯度13下得到的色譜圖。
[0067] 圖36為梯度14下得到的色譜圖。
[0068] 圖37為梯度15下得到的色譜圖。
[0069] 圖38為梯度16下得到的色譜圖。
[0070] 圖39為梯度17下得到的色譜圖。
[0071] 圖40為梯度18下得到的色譜圖。
[0072] 圖41為梯度19下得到的色譜圖。
[0073] 圖42為梯度20下得到的色譜圖。
[0074] 圖43為梯度21下得到的色譜圖。
[0075] 圖44為梯度22下得到的色譜圖。
[0076] 圖45為梯度23下得到的色譜圖。
[0077] 圖46為梯度24下得到的色譜圖。
[0078] 圖47為梯度25下得到的色譜圖。
[0079] 圖48為梯度26下得到的色譜圖。
[0080] 圖49為梯度27下得到的色譜圖。
[0081] 圖50為梯度15°C下得到的色譜圖。
[0082] 圖51為梯度20°C下得到的色譜圖。
[0083] 圖52為梯度25°C下得到的色譜圖。
[0084] 圖53為梯度30°C下得到的色譜圖。
[0085] 圖54為梯度35°C下得到的色譜圖。
[0086] 圖55為梯度40°C下得到的色譜圖。
[0087] 圖56為梯度45°C下得到的色譜圖。

【具體實施方式】
[0088] 以下結合具體實施例來進一步解釋本發明，但實施例對本發明不做任何形式的限 定。
[0089] 本實施例使用如下儀器試藥
[0090] 1.儀器高效液相色譜儀：Waters2695/2487, SHIMADZU(SIL-HTC/SPD-20A/ C70-20AC/LC-20AT);色譜柱 Ultimate AQ-C18 (5ym，150mmX4· 6mm)、資生堂 MG II -C18 (5 μ m, 150mmX4. 6mm)> Sepax Bi〇-C18 (5 μ m, 250mmX4. 6mm)> Agilent Eclipse XDB-C18 (5 4 111，25〇111111\4.6111111);電子天平：331'1:〇1'；[1180?2243、331'1:01'；[1180?22印；真空乾燥箱： V0S-201SD ;超聲波清洗器：KQ-300DA型。
[0091] 2.試劑乙腈為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。
[0092] 3.對照品甘草苷(批號為111610-2011106)，購於中國藥品生物製品檢定所。
[0093] 4. 供試品 20120503、20120201、20120202、20120203、20120302、20120501、 20120502、20120504、20120602、20120606、20120608、20120610、20120702、20120703、 20120710、20120802、20120806、20120812、20120905、20100914、20121002,共 21 批樣品，均 由中山市中智藥業集團有限公司提供。
[0094] 實施例1
[0095] 1.色譜條件的確定以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以 0. 1%冰醋酸溶液為流動相B，按表1中的規定進行梯度洗脫；檢測波長為300nm ;柱溫為 30°C ;流速為 1. Oml/min。
[0096] 表1流動相梯度表

【權利要求】
1. 一種小兒七星茶口服液指紋圖譜的建立方法，包括如下步驟：供試品和對照品溶液 的製備，色譜條件的確定，指紋圖譜的測定，其特徵在於，所述的色譜條件為：檢測波長為 280?340nm ;柱溫為20?40°C，流速為0. 8?1. 5ml/min，以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填 充劑；流動相由流動相A和B組成，以乙腈為流動相A，以PH值為2. 0?4. 0的水溶液為流 動相B，在50?80min內進行線性梯度洗脫，流動相A的起始體積分數為3?7%，結束時的 體積分數為20?40%。
2. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述的線性梯度洗脫的時間為70min ;線 性梯度洗脫的的條件為： Omin時，流動相A的體積分數為3?7%，流動相B的體積分數為97?93% ; 25?35min時，流動相A的體積分數為13?17%，流動相B的體積分數為87?83% ; 50?70min時，流動相A的體積分數為20?30%，流動相B的體積分數為80?70%。
3. 根據權利要求2所述的方法，其特徵在於，所述的線性梯度洗脫的時間為60min ;線 性梯度洗脫的的條件為： Omin時，流動相A的體積分數為5%，流動相B的體積分數為95% ; 30min時，流動相A的體積分數為15%，流動相B的體積分數為85% ; 60min時，流動相A的體積分數為25%，流動相B的體積分數為75%。
4. 根據權利要求1、2或3所述的方法，其特徵在於，所述的流動相B為體積分數為 0.01?0. 1%冰醋酸水溶液。
5. 根據權利要求4所述的方法，其特徵在於，所述的流動相B為體積分數為0. 1%冰醋 酸水溶液。
6. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述的檢測波長為290?320nm ;柱溫為 25 ?35°C，流速為 0· 8 ?1. 2ml/min。
7. 根據權利要求5所述的方法，其特徵在於，所述的檢測波長為300nm ;柱溫為30°C， 流速為 1· Oml/min。
8. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述供試品溶液的製備方法為：取小兒七 星茶口服液過0. 45 μ m微孔濾膜，即得；所述對照品溶液的製備方法為取甘草苷對照品，精 密稱定，加甲醇製成每lml含甘草苷0. 1?0. 2mg的溶液。
9. 一種小兒七星茶口服液指紋圖譜，其特徵在於，含有12個共有特徵峰，其保留時間 分別為：6. 301min ;8· 899min ;1L 486min ;16· 165min ;17· 234min ;19· 424min ;24· 071min ; 25. 433min ;28· 121min ;3L 558min ;36· 210min ;54· 356min〇
10. -種小兒七星茶口服液指紋圖譜，其特徵在於，含有12個共有特徵峰，以甘草 苷峰為參照，其相對保留時間分別為：〇. 1740 ;0. 2458 ;0. 3172 ;0. 4464 ;0. 4759 ;0. 5364 ; 0. 6648 ；0. 7024 ；0. 7766 ；0. 8715 ；1 ；1, 5011〇
【文檔編號】G01N30/88GK104122353SQ201310156489
【公開日】2014年10月29日 申請日期:2013年4月28日 優先權日:2013年4月28日
【發明者】成金樂, 楊立偉, 彭麗華, 王慧玲, 孫麗麗, 周穎儀, 喬衛林, 唐琳 申請人:中山市恒生藥業有限公司