真菌細胞壁合成基因的製作方法

2023-10-27 08:53:17 2

專利名稱：真菌細胞壁合成基因的製作方法
技術領域：
本發明涉及編碼參與真菌細胞壁合成的蛋白質的DNA，由該DNA編碼的蛋白質，檢查某些化合物是否對GPI-錨定蛋白質到細胞壁的轉運中所涉及的轉運過程產生影響的方法，以及對GPI-錨定蛋白質到細胞壁的轉運中所涉及的轉運過程產生影響的抗真菌劑。
背景技術：
近年來，由於老人以及因高強度化療等而導致的免疫受損患者的數目的增加，機會感染的管理變得比以往更重要。由假絲酵母(Candida)、麴黴菌(Aspergillus)、隱球菌(Cryptococcus)等導致的深部真菌感染佔這種機會感染的一部分，其比例正年復一年地增加。由眾多無毒細菌導致的機會感染接連發生的事實表明，只要存在降低病人免疫功能的疾病，傳染性疾病就不會終止。儘管在即將到來的老齡社會中傳染病控制的策略(包括細菌耐藥性的問題)將是至關緊要的問題之一，但是目前存在的有效治療藥物還相當少。
到目前為止，治療真菌感染的藥物的開發主要基於下列策略，即通過化學方法修飾已知的結構來製備新的化合物。但是，由於耐藥性細菌的出現等問題，所以迫切需要開發基於新機理的新藥物。
考慮到這種狀況，本發明人瞄準了治療藥物種類不充分的抗真菌劑領域中的一種新途徑。換言之，本發明人的工作集中在通過阻止病原體發揮致病性來影響感染的發作、發展和持續。為了避免感染的建立和發展，本發明人認為最有效的途徑是抑制對宿主的粘附(這是感染建立的第一步)，以及隨後的定居。另外，還實施了一種嶄新的方法，即抑制粘附因子本身的表達。
為了抑制粘附因子的表達，本發明人將其注意力指向如下假設細胞壁糖蛋白如粘附因子首先通過GPI(糖基磷脂醯肌醇)-錨定在細胞膜上，然後再轉運到細胞壁上(圖1)。迄今，已經發現30或更多的細胞壁糖蛋白(包括粘附配體)是通過GPI-錨定轉運的(稱之為GPI-錨定蛋白質)。因此，發明人想到，如果該轉運步驟受到抑制，則極有可能抑制粘附因子和構成細胞壁的主要蛋白質在細胞壁上的表達(Hamada K et al，Mol.Gen.Genet.，25853-59，1998)。已經報導過，GPI-錨定蛋白質存在於假絲酵母中，其為一種致病性的真菌(Kapteyn JC et al，Eur.J.Cell Biol.，65402-407，1994)。
本發明人開始了他們的研究，同時確信，抑制細胞壁合成的新抗真菌劑可以通過抑制真菌細胞膜中存在的GPI-錨定蛋白質轉運到細胞壁的過程來製備。

發明內容
本發明的目的是開發抗真菌劑，該抗真菌劑通過抑制細胞壁糖蛋白的表達，抑制細胞壁的裝配及與細胞的粘附，以及阻止病原體表現出致病性，而體現出抵抗感染髮作、發展和持續的作用。
為了篩選抑制GPI-錨定蛋白質到細胞壁之轉運過程的化合物，本發明人製備了採用融合蛋白的報告系統，該融合蛋白包括報告酶和存在於CWP2(GPI-錨定蛋白質之一)的C-末端的轉運信號(Van Der Vaat JM et al，J.Bacteriol.，1773104-3110，1995)。
構建包含分泌信號基因+報告酶基因+CWP2C-末端基因(存在或缺失)的DNA，並在釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中表達融合蛋白，經證實，當CWP2C-末端存在時，可在細胞壁中檢測到報告酶的活性；當CWP2C-末端不存在時，可在培養物上清液中檢測到報告酶的活性。因此，可以預言，如果GPI-錨定蛋白質到細胞壁的轉運過程受到試樣的抑制，報告酶在細胞壁中的活性將會減少，或者報告酶的活性將會在培養物上清液中發現。因而，抑制GPI-錨定蛋白質到細胞壁的轉運過程的化合物的篩選是利用該報告系統開始的。
從採用該報告系統的篩選中發現了若干抑制GPI-錨定蛋白質到細胞壁的轉運過程的化合物。有代表性的實例如式(Ia)所示的化合物。 前述式(Ia)所示的化合物(下文中稱之為「化合物(Ia)」)抑制釀酒酵母和白色假絲酵母(Candida albicans)的生長，而且在前述化合物(Ia)存在下培養的白色假絲酵母表現出弱的粘附到細胞上的活性。這樣，可以確定前述的化合物(Ia)適於本發明的最初目的，即基於對GPI-錨定蛋白質向細胞壁轉運的系統的抑制，發現一種因為抑制真菌粘附素的表達而抑制真菌粘附的化合物。此外，通過透射電子顯微鏡觀察可以證實，在前述化合物(Ia)的存在下培養的白色假絲酵母在其細胞壁合成中有異常。
本發明人證實，採用前述的化合物(Ia)可以製備基於抑制GPI-錨定蛋白質向細胞壁轉運過程的機制的抗真菌劑。
此外，為了確定前述化合物(Ia)所作用的目標蛋白，本發明人檢索了賦予前述化合物(Ia)以抗性的基因。
將釀酒酵母基因的質粒庫引入釀酒酵母中，並通過過表達收集對前述化合物(Ia)表現出抗性的質粒。然後克隆抗性基因，測定核苷酸序列，並將該基因命名為GWT1(SEQ ID NO1)。在過表達GWT1基因產物的釀酒酵母中，具有GPI-錨定蛋白質之C-末端的前述報告酶轉運到細胞壁上，即使在前述化合物(Ia)存在時也是如此。此外，通過透射電鏡觀察證實，即使存在前述的化合物(Ia)，細胞壁也是正常的。
而且，當將點突變隨機地引入釀酒酵母染色體組的DNA上，並分離出對前述化合物(Ia)表現出特異抗性的突變菌株R1和R5時，在R1突變菌株中發現涉及GWT1基因第405號密碼子自GTC變為ATC的點突變，以及在R5突變菌株中發現第140號密碼子自GGG變為AGG的點突變。由於在這些突變的GWT1基因引入GWT1基因已被破壞的菌株時發現對前述化合物(Ia)的抗性，所以可以單獨用GWT1基因來解釋對該化合物的抗性。因此，這暗示前述化合物(Ia)直接作用於GWT1基因產物，以抑制GWT1蛋白的功能。
通過類似的方法，克隆白色假絲酵母的抗性基因(SEQ ID NO3和5)，測定核苷酸序列，並將該基因命名為CaGWT1。
此外，利用GWT1進行資料庫同源檢索，揭示了粟酒裂殖糖酵母(Schizosaccharomyces pombe)中的同源物(SEQ ID NO27)。再者，基於釀酒酵母、粟酒裂殖糖酵母和白色假絲酵母的GWT1基因編碼的蛋白質中高度保守區的序列設計引物，經PCR產生煙麴黴(Aspergillus fumigatus)中的同源物(SEQ ID NO39和41)。而且，基於對GWT1的資料庫同源檢索發現的序列進行PCR，發現了新形隱球酵母(Cryptococcus neoformans)中的同源物(SEQ ID NO54和58)。
更具體地，本發明涉及下列內容。
1.一種編碼蛋白質的DNA，當該DNA過量表達在真菌中時，所述蛋白質具有賦予真菌耐受式(Ia)所示化合物的活性，其中該DNA選自(a)編碼包含SEQ ID NO2，4，6，28，40或59胺基酸序列的蛋白質的DNA，(b)包含SEQ ID NO1，3，5，27，39，41，54或58核苷酸序列的DNA，(c)在嚴謹條件下與包含SEQ ID NO1，3，5，27，39，41，54或58核苷酸序列的DNA雜交的DNA，(d)編碼包含SEQ ID NO2，4，6，28，40或59胺基酸序列的蛋白質的DNA，所述胺基酸序列中，增加、缺失、取代和/或插入一個或多個胺基酸，及(e)利用SEQ ID NO29和31或者SEQ ID NO29和30為引物擴增的DNA 2.一種編碼蛋白質的DNA，該蛋白質因為該DNA的功能缺陷而具有降低真菌細胞壁中GPI-錨定蛋白質的量的活性，其中該DNA選自(a)編碼包含SEQ ID NO2，4，6，28，40或59胺基酸序列的蛋白質的DNA，(b)包含SEQ ID NO1，3，5，27，39，41，54或58核苷酸序列的DNA，(c)在嚴謹條件下與包含SEQ ID NO1，3，5，27，39，41，54或58核苷酸序列的DNA雜交的DNA，(d)編碼包含SEQ ID NO2，4，6，28，40或59胺基酸序列的蛋白質的DNA，所述胺基酸序列中，增加、缺失、取代和/或插入一個或多個胺基酸，及(e)利用SEQ ID NO29和31或者SEQ ID NO29和30為引物擴增的DNA，其中，「嚴謹條件」是指，例如，在65℃下於4×SSC中進行雜交，然後在65℃下於0.1×SSC中洗滌1小時；或者在另一方法中，「嚴謹條件」為42℃下於50％甲醯胺中的4×SSC；或者，在65℃下於PerfectHybTM(TOYOBO)溶液中雜交2.5小時，然後(i)在25℃下於2×SSC，0.05％SDS溶液中洗滌5分鐘，(ii)在25℃下於2×SSC，0.05％SDS溶液中洗滌15分鐘，及(iii)在50℃下於0.1×SSC，0.1％SDS溶液中洗滌20分鐘；「DNA功能缺陷」可以發生在DNA的功能基因產物未表達時或者表達減少時，例如利用同源重組技術嵌入與DNA編碼區無關的DNA如選擇標記；以及單獨或聯合應用下列任一方法定量源於真菌細胞壁中GPI-錨定蛋白質的蛋白質的減少(i)反映GPI-錨定蛋白質到細胞壁的轉運過程的報告系統，(ii)定量細胞壁中GPI-錨定蛋白質的ELISA，(iii)GPI-錨定蛋白質活性如附著動物細胞的活性的測量，或者(iv)通過透射電鏡觀察真菌細胞最外層的絮狀纖維結構。
3.通過項1或2的DNA編碼的蛋白質。
4.其中插入了項1或2的DNA的載體。
5.包含項1或2的DNA或者項4的載體的轉化體。
6.項5的轉化體，其為過量表達項3的蛋白質的真菌。
7.一種真菌，其中項3的蛋白質的功能有缺陷。
8.一種製備項3的蛋白質的方法，該方法包括培養項5的轉化體，並由該轉化體或其培養上清液收集所表達的蛋白質的步驟。
9.一種與項3的蛋白質結合的抗體。
10.一種篩選具有抗真菌作用的化合物的方法，其中該方法包括以下步驟(a)使試樣與項3的蛋白質接觸；(b)檢測該蛋白質與試樣之間的結合活性；及(c)選取具有與該蛋白質結合活性的化合物。
11.一種篩選具有抗真菌作用的化合物的方法，其中該方法包括以下步驟(a)使試樣與過量表達項3的蛋白質的真菌接觸；(b)檢測GPI-錨定蛋白質到真菌細胞壁上的轉運量；及(c)選出下述化合物，其使得步驟(b)中所檢測的GPI-錨定蛋白質到真菌細胞壁上的轉運量比試樣與未過量表達項3的蛋白質接觸時所檢測到的轉運量減少，其中，通過檢測細胞生長速度的降低、膨脹或溫度敏感性，或者通過檢測源於細胞壁中GPI-錨定蛋白質的蛋白質的減少，優選通過檢測源於細胞壁上GPI-錨定蛋白質的蛋白質的減少，可以檢測因為試樣而導致的轉運到細胞壁上的GPI-錨定蛋白質的量的降低；而且，利用下列任一方法或其組合，可定量源於真菌細胞壁中GPI-錨定蛋白質的蛋白質的減少(i)反映GPI-錨定蛋白質到細胞壁的轉運過程的報告系統，(ii)定量細胞壁中一類GPI-錨定蛋白質的ELISA，(iii)測量GPI-錨定蛋白質活性如附著動物細胞的活性，或者(iv)通過透射電子顯微鏡觀察真菌細胞最外層的絮狀纖維結構。
12.一種具有抗真菌作用的化合物，其是通過項10或11的篩選方法分離的。
13.一種抗真菌劑，其包含抑制GPI-錨定蛋白到真菌細胞壁的轉運的化合物作為活性成分。
14.一種抗真菌劑，其包含項9的抗體或者項12的化合物作為活性成分。
15.項13的抗真菌劑，其包含下列通式(I)所示的化合物或其鹽或其水合物作為活性成分，在式(I)中 [R1a和R2a彼此相同或相異並且單獨代表氫原子，滷原子，羥基，硝基，氰基，三氟甲基，三氟甲氧基，取代或未取代的C1-6烷基，C2-6鏈烯基，C2-6炔基，取代或未取代的C1-6烷氧基，或者下式所示的基團 (其中X1代表單鍵，羰基，或者式-S(O)2-所示的基團；R5a和R6a彼此相同或相異並且代表氫原子或者取代或未取代的C1-6烷基)。而且，R1a和R2a可以一起形成選自下列的稠環取代或未取代的苯環，取代或未取代的吡啶環，取代或未取代的吡咯環，取代或未取代的噻吩環，取代或未取代的呋喃環，取代或未取代的噠嗪環，取代或未取代的嘧啶環，取代或未取代的吡嗪環，取代或未取代的咪唑環，取代或未取代的 唑環，取代或未取代的噻唑環，取代或未取代的吡唑環，取代或未取代的異唑環，取代或未取代的異噻唑環，取代或未取代的環己烷環，及取代或未取代的環戊烷環；R3a和R4a彼此相同或相異並且單獨代表氫原子，滷原子，羥基，硝基，氰基，羧基，甲醯基，肟基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-6烷基，C1-6烷氧基，C2-6鏈烯基，C2-6炔基，式-C(O)NR7aR7b(其中R7a和R7b彼此相同或相異並且單獨代表氫原子，或者C1-6烷基)，式-CO2R7a(其中R7a的定義同上)，式-S(O)nR7a(其中n代表0～2的整數，R7a的定義同上)，式-S(O)2NR7aR7b(其中R7a和R7b的定義同上)所示的基團，下式的基團 (其中X2代表單鍵，羰基，或者式-S(O)2-所示的基團；R5b和R6b彼此相同或相異，並且代表氫原子，取代或未取代的C1-6烷基，或者取代或未取代的C6-14芳基)，或者下式的基團-Z1-Z2(其中Z1代表單鍵，氧原子，1，2-亞乙烯基或者亞乙炔基；Z2代表單鍵，或者被0～4個取代基取代或未取代的C1-6烷基)。R3a和R4a可以共同代表亞甲二氧基，或者1，2-亞乙二氧基，作為選擇，R3a和R4a可以一起形成選自下列的稠環取代或未取代的苯環，取代或未取代的吡啶環，取代或未取代的吡咯環，取代或未取代的噻吩環，取代或未取代的呋喃環，取代或未取代的噠嗪環，取代或未取代的嘧啶環，取代或未取代的吡嗪環，取代或未取代的咪唑環，取代或未取代的唑環，取代或未取代的噻唑環，取代或未取代的吡唑環，取代或未取代的異唑環，取代或未取代的異噻唑環，取代或未取代的環己烷環，及取代或未取代的環戊烷環，但是R1a和R2a均代表氫原子的情況除外]。
16.項13所述的抗真菌劑，其包含下式的化合物(Ia)作為活性成分 17.通式(II)所示的化合物，或者它的鹽或水合物，在式(II)中， [Ar代表選自式(IIIa)至(IIIf)的取代基 (其中K代表硫原子，氧原子，或者式-NH-所示的基團；R1b和R2b彼此相同或相異，並且單獨代表氫原子，滷原子，羥基，硝基，氰基，三氟甲基，三氟甲氧基，下式所示的基團 (其中X3代表單鍵，羰基，或者式-S(O)2-所示的基團；R5c和R6c彼此相同或相異，並且代表氫原子，或者取代或未取代的C1-6烷基)，或者式-X4-R8a(其中X4代表單鍵，氧原子，或硫原子；R8a代表C1-6烷基，C2-6鏈烯基，C2-6炔基，C3-8環烷基，或者C3-8環烯基)所示的基團。作為選擇，R1b和R2b可以一起形成亞甲二氧基，或者1，2-亞乙二氧基)；R3b和R4b彼此相同或相異並且單獨代表氫原子，滷原子，羥基，硝基，氰基，羧基，甲醯基，肟基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-6烷基，C1-6烷氧基，C2-6鏈烯基，C2-6炔基，或者下式所示的基團-Z1b-Z2b(其中Z1b代表單鍵，1，2-亞乙烯基或亞乙炔基；Z2b代表單鍵，或者被0～4個取代基取代或未取代的C1-6烷基)；下列情況除外(1)Ar代表前述的式(IIId)，其中R1b和R2b均為氫原子，(2)至少一個R3b或R4b代表氫原子，而另一個為氫原子，甲氧基，羥基，甲基，苄氧基，或者滷原子，及Ar代表前述的式(IIIc)，其中R1b和R2b兩個均代表氫原子或甲氧基，(3)至少一個R3b或R4b代表氫原子，而另一個為氫原子，羥基，甲氧基，或苄氧基，及Ar代表前述的式(IIIc)，其中R1b和R2b兩個均代表羥基或苄氧基，或者(4)Ar代表前述的式(IIId)，其中R1b為氫原子，且R2b為甲醯基，羥甲基，或者甲氧基羰基]。
18.項17的化合物，或者它的鹽或水合物，其中Ar代表下式 (其中R1c代表氫原子，取代或未取代的C1-6烷基，或苄基)，並且排除R3b代表氫原子時的情形。
19.通式(IIIc2)所示的化合物，或者它的鹽或水合物，在式(IIIc2)中， [R1b和R2b的定義同上，但下列情況除外(1)R1b代表式R1c-O-(其中R1c的定義同上)所示的基團，R2b為氫原子，且R3b代表氫原子，(2)至少一個R3b或R4b代表氫原子，而另一個為氫原子，甲氧基，羥基，甲基，苄氧基，或滷原子，且R1b和R2b兩個均代表氫原子或甲氧基，或者(3)至少一個R3b或R4b代表氫原子，而另一個為氫原子，羥基，甲氧基，或苄氧基，且R1b和R2b兩個均代表羥基或苄氧基]。
20.項17的抗真菌劑，其具有抗真菌作用。
21.項15的抗真菌劑，其中R3a和R4a至少一個代表下列各式所示的基團式-C(O)NR7aR7b(其中R7a和R7b的定義同上)，式-CO2R7a(其中R7a的定義同上)，式-S(O)nR7a(其中n代表0～2的整數，R7a定義同上)，式-S(O)2NR7aR7b(其中R7a和R7b的定義同上)，下式 (其中X2，R5b，及R6b的定義同上)，或者被1～4個取代基取代或未取代的C1-6烷氧基，或者R3a和R4a共同代表亞甲二氧基或1，2-亞乙二氧基。
22.項15所述的抗真菌劑，其中該具有抗真菌作用的化合物為(1)1-苄基異喹啉，(2)1-(4-溴苄基)異喹啉，(3)1-(4-氯苄基)異喹啉，(4)1-(4-氟苄基)異喹啉，(5)1-(4-碘苄基)異喹啉，(6)1-(3-甲基苄基)異喹啉，(7)1-(4-甲基苄基)異喹啉，(8)1-(3，4-二甲基苄基)異喹啉，(9)1-(3-甲氧基苄基)異喹啉，(10)1-(4-甲氧基苄基)異喹啉，(11)1-(3，4-亞甲二氧基苄基)異喹啉，(12)1-(4-苄氧基苄基)異喹啉，(13)1-(4-氰基苄基)異喹啉，(14)1-(4-硝基苄基)異喹啉，(15)1-(4-氨基苄基)異喹啉，(16)1-(4-甲氧基苄基)-6，7-二氯-異喹啉，(17)1-(4-甲氧基-2-硝基-苄基)-異喹啉，(18)1-(4-甲氧基苄基)-6，7-亞甲二氧基-異喹啉，(19)1-(2-氨基-4-甲氧基-苄基)異喹啉，(20)1-(4-甲氧基苄基)-7-羥基-6-甲氧基-異喹啉，(21)1-(4-苄氧基苄基)-6，7-二甲氧基-異喹啉，(22)1-(4-甲氧基苄基)6，7-二甲氧基-異喹啉，(23)1(4-甲氧基-2-硝基-苄基)-異喹啉，(24)3-[4-(1-異喹啉基甲基)苯氧基]丁腈，(25)1-[4-(2，2，3，3-四氟丙氧基)苄基]異喹啉，(26)1-[4-(2-哌啶子基乙氧基)苄基]異喹啉，(27)4-(1-異喹啉基甲基)苯基(2-嗎啉基乙基)醚，(28)1-[4-(2-甲氧基乙氧基)苄基]異喹啉，(29)N-{2-[4-(1-異喹啉基甲基)苯氧基]乙基}-N，N-二甲胺，(30)1-[4-(苯乙氧基)苄基]異喹啉，(31)1-{4-[(2-甲基烯丙基)氧基]苄基}異喹啉，(32)1-(4-異丁氧基苄基)異喹啉，(33)1-[4-(2-苯氧基乙氧基)苄基]異喹啉，(34)2-[4-(1-異喹啉基甲基)苯氧基]乙酸甲酯，(35)2-[4-(1-異喹啉基甲基)苯氧基]-1-乙醇，(36)N-{2-[4-(1-異喹啉基甲基)苯氧基]乙基}氨基甲酸叔丁酯，(37)1-{4-[3-(四氫-2H-2-吡喃氧基)丙氧基]苄基}異喹啉，(38)2-[4-(1-異喹啉基甲基)苯氧基]-1-乙胺，(39)1-[4-(3-哌啶子基丙氧基)苄基]異喹啉，(40)3-[4-(1-異喹啉基甲基)苯氧基]-1-丙醇，(41)1-[4-(2-乙基丁氧基)苄基]異喹啉，(42)4-[4-(1-異喹啉基甲基)苯氧基]丁酸，(43)1-(4-{3-[(4-苄基哌啶子基)磺醯基]丙氧基}苄基)異喹啉，(44)1-(4-{3-[4-(4-氯苯基)哌啶子基]丙氧基}苄基)異喹啉，(45)4-(1-異喹啉基甲基)苯胺，(46)N-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]丁醯胺，(47)N-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]丙醯胺，(48)N-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-1-乙磺醯胺，(49)N-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-N-甲基-乙磺醯胺，(50)N-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-N-甲胺，(51)N-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-N-丙胺，或者(52)N-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-N-甲基-N-丙胺。
23.一種治療真菌感染的方法，包括將治療有效量的項13～22中任一項的抗真菌劑給藥於哺乳動物。
下面將通過解釋本說明書中所提到的術語、符號等的意義，更詳細地說明本發明。
在本說明書中，為了方便，化合物的結構式可以代表某些異構體，但是，本發明包括所有的幾何異構體，基於不對稱碳原子的光學異構體，立體異構體，源於化合物結構的互變異構體，以及各種異構體的混合物，本發明不受為了方便而構建的化學式的代表物的限制，而且可以為各種異構體中的任意一種或其混合物。因此，可能存在光活性物質和分子中具有不對稱碳原子的外消旋物質，但是在本發明中沒有特別的限制，並且包括它們中的任何一種。此外，可能存在多晶形現象，對此同樣沒有任何限制，晶形可以是任何晶形之一或者其混合物，而且可以是無水物或水合物。
此外，本發明的化合物包括在體內代謝之後如在氧化之後，還原之後，水解之後，或者偶聯之後具有抗真菌作用的化合物。再者，本發明還包括那些在體內代謝之後如氧化之後，還原之後，以及水解之後產生本發明的化合物的化合物。
本說明書中的「C1-6烷基」是指直鏈或支鏈的烷基，其中碳的數目為1～6，具體實例包括甲基，乙基，異丙基，正丙基，正丁基，異丁基，叔丁基，正戊基，異戊基，新戊基，正己基，1-甲基丙基，1，2-二甲基丙基，2-乙基丙基，1-甲基-2-乙基丙基，1-乙基-2-甲基丙基，1，1，2-三甲基丙基，1-甲基丁基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，2-乙基丁基，1，3-二甲基丁基，2-甲基戊基，3-甲基戊基，等等。
本說明書中的「C2-6鏈烯基」是指直鏈或支鏈的鏈烯基，其中碳的數目為2～6，具體實例包括乙烯基，烯丙基，1-丙烯基，異丙烯基，1-丁烯-1-基，1-丁烯-2-基，1-丁烯-3-基，2-丁烯-1-基，2-丁烯-2-基，等等。
本說明書中的「C2-6炔基」是指直鏈或支鏈的炔基，其中碳的數目為2～6，其具體實例包括乙炔基，1-丙炔基，2-丙炔基，丁炔基，戊炔基，己炔基，等等。
本說明書中的「C1-6烷氧基」是指連接在上面所定義的「C1-6烷基」上的氧基，其具體實例包括甲氧基，乙氧基，正丙氧基，異丙氧基，正丁氧基，異丁氧基，仲丁氧基，叔丁氧基，正戊氧基，異戊氧基，仲戊氧基，叔戊氧基，新戊氧基，1-甲基丁氧基，2-甲基丁氧基，1，1-二甲基丙氧基，1，2-二甲基丙氧基，正己氧基，異己氧基，1-甲基戊氧基，2-甲基戊氧基，3-甲基戊氧基，1，1-二甲基丁氧基，1，2-二甲基丁氧基，2，2-二甲基丁氧基，1，3-二甲基丁氧基，2，3-二甲基丁氧基，3，3-二甲基丁氧基，1-乙基丁氧基，2-乙基丁氧基，1，1，2-三甲基丙氧基，1，2，2-三甲基丙氧基，1-乙基-1-甲基丙氧基，1-乙基-2-甲基丙氧基，等等。
本說明書中的「C6-14芳基」是指芳環基團，其中碳的數目為6～14，其具體實例包括苯基，1-萘基，2-萘基，as-indacenyl group，s-indacenyl group，二氫苊基，等等。
本說明書中的「滷原子」是指氟原子，氯原子，溴原子，及碘原子。
本說明書中的「取代或未取代的」是指「可取代的位置上可以具有一個或多個取代基的任意組合」，具體的取代基的實例包括氫原子，滷素，硝基，氰基，羥基，巰基，羥烷基，羧基，C1-6烷氧基羰基，C2-7醯氨基，C1-6烷氨基，吡啶基，C1-6烷基亞磺醯基，C1-6烷基磺醯基，C1-6烷基氨磺醯基，C1-6烷基氨亞磺醯基，C1-6烷基氨次磺醯基(sulfenamoyl)，四氫吡喃基，C1-6烷基氨甲醯基，或者式-X4-R8a(其中X4代表單鍵，氧原子或硫原子；R8a代表C1-6烷基，C2-6鏈烯基，C2-6炔基，C6-14芳基，C3-8環烷基或C3-8環烯基)，等等。
「可以被0～4個取代基所取代」與「可取代的位置上可以具有1～4個取代基的任意組合」的意義相同，且取代基的定義同上。
本發明中的「鹽」是指藥學上可接受的鹽，並且沒有任何特殊的限制，只要該鹽是與本發明的化合物形成的加成鹽，且其優選實例為滷族酸鹽如氫氟化物，氫氯化物，氫溴化物，及氫碘化物；無機酸鹽如硫酸鹽，硝酸鹽，高氯酸鹽，磷酸鹽，碳酸鹽，及碳酸氫鹽；有機羧酸鹽如乙酸鹽，草酸鹽，馬來酸鹽，酒石酸鹽，及富馬酸鹽；有機磺酸鹽如甲磺酸鹽，三氟甲磺酸鹽，乙磺酸鹽，苯磺酸鹽，甲苯磺酸鹽，及樟腦磺酸鹽；胺基酸鹽如天門冬氨酸鹽，及穀氨酸鹽；胺鹽如三甲胺鹽，三乙胺鹽，普魯卡因鹽，吡啶鹽，及苯乙基苯甲基胺鹽；鹼金屬鹽如鈉鹽，及鉀鹽；鹼土金屬鹽如鎂鹽和鈣鹽；等等。
在下文中將要描述1.獲得參與細胞壁合成的蛋白質的編碼DNA的方法，2.檢查試樣是否影響GPI-錨定蛋白質到細胞壁的轉運過程的方法，以及3.獲得本發明的前述化合物(Ia)的方法。
1.獲得參與細胞壁合成的蛋白質的編碼DNA的方法下文中將描述(1)獲得編碼蛋白質的DNA的方法，所述蛋白質通過在真菌中過表達而賦予對前述化合物(Ia)的抗性；(2)獲得在嚴謹條件下與SEQID NO1，SEQ ID NO3，或SEQ ID NO5的DNA雜交的DNA的方法；(3)基於同源檢索獲得編碼參與真菌細胞壁合成的蛋白質的DNA的方法；及(4)獲得過表達或者缺乏賦予對前述化合物(Ia)的抗性所需的蛋白的真菌的方法。
(1)獲得編碼蛋白質的DNA的方法，所述蛋白質通過在真菌中過表達而賦予對前述化合物(Ia)的抗性這裡，「真菌」是指屬於接合菌門(Zygomycota)，子囊菌門(Ascomycota)，擔子菌門(Basidiomycota)及半知菌門(Deuteromycota)的真菌。優選的真菌為致病性真菌，毛黴菌(Mucor)，糖酵母屬(Saccharomyces)，假絲酵母屬(Candida)，隱球酵母屬(Cryptococcus)，絲孢酵母屬(Trichosposon)，鱗斑黴屬(Malassezia)，麴黴屬(Aspergillus)，髮癬菌屬(Trichophyton)，小孢子菌屬(Microsporum)，孢子絲菌屬(Sporothrix)，芽生菌屬(Blastmyces)，球孢菌屬(Coccidioides)，副球孢子菌屬(Paracoccidioides)，青黴屬(Penicillinium)或鐮孢屬(Fusarium)，更優選的真菌為白色假絲酵母，C.glabrata，新形隱球酵母或煙麴黴。便於進行遺傳分析的釀酒酵母和粟酒裂殖糖酵母，也是優選的菌株。
將真菌基因的質粒庫引入真菌中。可以由ATCC(ATCC的信息編號為37323)得到釀酒酵母和粟酒裂殖糖酵母的質粒庫，而白色假絲酵母的質粒庫則可以根據Navaro-Garcia，F.et al，Mol.Cell.Biol.，152197-2206，1995的方法來製備。將所得的質粒庫通過Gietz，D.et al，Nucl.Acids Res.201425，1992的方法引入真菌中。作為選擇，可以使用例如YEASTMAKERTM酵母轉化系統(Clontech)等試劑盒。
在前述化合物(Ia)的存在下培養其中引入了質粒庫的真菌。具體地，在包含濃度為1.56～25μg/ml，優選為1.56～6.25μg/ml，更優選為3.125μg/ml的前述化合物(Ia)的瓊脂培養基中接種已經引入了質粒庫的真菌，培養適當長的時間，即在30～42℃培養2～5天，或優選在37℃培養3天。在包含前述化合物(Ia)的培養基中進一步培養通過增殖形成的菌落，並由增殖的真菌細胞中提純質粒。質粒的提純可以根據例如METHODS IN ENZYMOLOGY，Vol.194169-182(1991)的方法來進行。
優選直接測定所得質粒的核苷酸序列，但是如果需要，可以克隆至適於核苷酸序列測定的載體例如pBluescript II及pUC19中，然後再完成核苷酸序列的測定。核苷酸序列可以根據例如ABI377系統(PE applied Biosystems)手冊的方法進行測定。
在本發明的實施例中，全部27個獨立獲得的釀酒酵母菌落，以及30個白色假絲酵母菌落中的28個菌落均包含本發明的DNA。只有一個賦予對前述化合物(Ia)的抗性的基因存在於這些真菌中，而且該基因可以通過前述的方法而得到。
(2)獲得在嚴謹條件下與SEQ ID NO1，SEQ ID NO3，或SEQ ID NO5的DNA雜交的DNA的方法根據本發明，獲得編碼參與真菌細胞壁合成的蛋白質的DNA的方法包括以釀酒酵母染色體組的DNA為模板，由SEQ ID NO1的核苷酸序列的信息設計引物，或者以白色假絲酵母染色體組的DNA為模板，由SEQ IDNO3或SEQ ID NO5的核苷酸序列的信息設計引物，然後進行PCR，並將擴增的DNA克隆到適宜的載體如pBlueScript中。按照將要擴增的區域的需要設計引物，優選長度為15個或更多個鹼基對(bp)，更優選為20個或更多個鹼基對，且某些情況下，可以增加後續DNA構建所必需的序列(如限制酶位點)。PCR的條件可以根據引物長度、將要擴增的區域的長度及將要使用的DNA模板的量等因素而適當地確定。例如，編碼真菌中參與細胞壁合成的蛋白的DNA可以採用200ng的白色假絲酵母染色體組DNA為模板，採用SEQ ID NO21和SEQ ID NO22為引物，在94℃4分鐘→(94℃30秒→68℃5分鐘)×35循環→72℃4分鐘的條件下得到。
通過PCR得到的DNA可以用作獲得其它類型真菌DNA的探針，該其它類型的真菌DNA與編碼參與細胞壁之合成的蛋白的DNA具有同源性。具體地，例如，為了獲得編碼參與釀酒酵母細胞壁合成的蛋白質的白色假絲酵母的同源基因，可以採用釀酒酵母的染色體組DNA為模板，並以通過PCR得到的DNA為探針，由白色假絲酵母的基因組文庫或cDNA文庫克隆出在嚴謹條件下雜交的DNA。這裡，嚴謹條件是指例如在65℃於4×SSC中雜交，然後在0.1×SSC中於65℃洗滌1小時。此外，另一嚴謹條件是指42℃於50％甲醯胺中的4×SSC。作為選擇，下列條件也是允許的，例如在65℃於PerfectHybTM(TOYOBO)溶液中雜交2.5小時，然後1)在25℃於2×SSC，0.05％SDS溶液中洗滌5分鐘，2)在25℃於2×SSC，0.05％SDS溶液中洗滌15分鐘，及3)在50℃於0.1×SSC，0.1％SDS溶液中洗滌20分鐘。
通過Southern印跡分析，本發明的實施例證實，白色假絲酵母中僅有一種基因與SEQ ID NO1的DNA雜交，並且示出了對該基因的克隆。從上述方法，可以得到與SEQ ID NO1或SEQ ID NO3雜交的DNA。
(3)基於同源檢索獲得編碼參與真菌細胞壁合成的蛋白質的DNA的方法本發明揭示了釀酒酵母，白色假絲酵母，粟酒裂殖糖酵母，煙麴黴，及新形隱球酵母的GWT1同源物。據認為，這些基因中的保守區對於GWT1基因產物展示其功能是重要的，並且可以在其它真菌中也是保守的。
因此，編碼參與真菌細胞壁合成的蛋白質的DNA可以根據下列方法得到基於保守區的胺基酸序列構建探針再實施雜交，或者根據該序列設計引物再實施PCR。PCR引物可以具有任何序列，只要將其設計成編碼保守區即可，但是優選SEQ ID NO29和31或者優選SEQ ID NO29和30。
此外，作為另一種方法，編碼參與真菌細胞壁合成的蛋白質的DNA可以通過下列方法得到在登記於資料庫中的基因片段中找出與GWT1同源的核苷酸序列，然後根據該核苷酸序列設計引物，採用cDNA或染色體組DNA進行PCR。
根據所得序列獲得全長基因的PCR方法的實例包括如3′-RACE，5′-RACE，以及反向PCR等技術，也可以通過雜交選擇包含鄰接序列的克隆。全長基因可以通過組合這些技術而得到。
(4)獲得過表達或者缺乏賦予對前述化合物(Ia)的抗性所需的蛋白的真菌的方法過量表達賦予對本發明前述化合物(Ia)的抗性的蛋白質的真菌，優選釀酒酵母，可以通過將表達該蛋白的表達載體插入真菌染色體的特定位置上的方法而得到，例如其中SEQ ID NO1的DNA與啟動子的下遊相連的表達載體，該啟動子可以強制地將蛋白質表達在真菌中，優選芽殖酵母烯醇酶基因(ENO1)的啟動子。插入法可以通過如下步驟進行例如將所需的序列插到pRS304(Sikorski RS et al，Genetics.122(1)19-27，1989)的多克隆位點，構建用於整合的載體，並將該載體引入真菌中。詳見METHODS INENZYMOLOGY Vol.194281-301(1991)。
此外，過量表達的白色假絲酵母菌株可以通過將SEQ ID NO3或SEQID NO5的基因引入白色假絲酵母的表達載體如pCARS1和pRM1(Pla J etal，Yeast121677-1702，1996)中，然後轉化白色假絲酵母(Sanglard D et al，Antimicrobiol.Agents Chemother.402300-2305，1996)而得到。
本發明的缺乏賦予對前述化合物(Ia)的抗性的基因的真菌，優選釀酒酵母，可以通過下列方法得到，但並不僅限於下列方法。
利用標記基因(優選粟酒裂殖糖酵母的his5基因)作模板，採用引物來進行PCR擴增，引物被設計成使得PCR產物包含將要缺失的基因(在釀酒酵母的情況中，為SEQ ID NO1的基因序列)兩端30個鹼基對或更多，優選40個鹼基對或更多。PCR產物可以提純並引入到真菌中，然後在對應於標記基因的選擇培養基(如對應於his5的his-)中培養，得到缺失菌株。
此外，通過慣常方法，基於SEQ ID NO3或SEQ ID NO5的核苷酸序列信息，用hisG-URA3-hisG表達盒(Fonzi WA et al，Genetics134717-728，1993)得到白色假絲酵母的缺失菌株。
2.檢查試樣是否影響GPI-錨定蛋白質到細胞壁的轉運過程的方法通過下列方法可以確定試樣是否抑制GPI-錨定蛋白質到細胞壁的轉運過程，或者試樣是否抑制GPI-錨定蛋白質在真菌表面的表達(1)一種利用了報告酶的方法，(2)一種利用了與真菌細胞壁表面糖蛋白反應的抗體的方法，(3)檢查對動物細胞的粘附活性的方法，及(4)採用光學顯微鏡或電子顯微鏡觀察真菌的方法。
利用下述(1)～(4)的方法，優選利用(1)～(4)的方法的組合來判斷試樣是否抑制GPI-錨定蛋白質到細胞壁的轉運過程或者GPI-錨定蛋白質在真菌表面的表達。此外，當由本發明的DNA編碼的蛋白質過量表達於真菌中時，在抑制程度減小或不再能觀察到抑制的情況下，可以判定試樣影響GPI-錨定蛋白質到細胞壁的轉運過程。
下面將描述方法(1)～(4)。
(1)採用報告酶進行的方法GPI-錨定蛋白質到細胞壁的轉運過程可通過示蹤實驗定量如用放射性同位素標記GPI-錨定蛋白質，然後對真菌細胞壁級分進行分離，與GPI-錨定蛋白質的抗體進行免疫沉澱反應。也可以用另一種方法更簡便的定量表達由各種GPI-錨定蛋白質中常見的、被認為起轉運信號作用的C-末端序列與便於測量的酶(報告酶)形成的融合蛋白，對真菌細胞壁級分進行分離，然後採用報告系統測量每一級分的酶活性(Van Berkel MAA et a1，FEBS Letters，349135-138，1994)。在下文中，將要解釋一種採用報告酶進行的方法，但是本發明並不僅限於此。
首先，構建報告基因並將其引入真菌中。報告基因是這樣構建的連接能在真菌中起作用的啟動子序列，然後依次連接編碼信號序列、報告酶和GPI-錨定蛋白質C-末端序列的DNA，使得讀框匹配。啟動子序列的實例包括如GAL10及ENO1等啟動子的那些序列。信號序列的實例包括如α-因子，轉化酶，溶菌酶等的序列。報告酶的實例是β-內醯胺酶，溶菌酶，鹼性磷酸酶，β-半乳糖苷酶等。可以使用易於檢出的綠色螢光蛋白(GFP)，即便它不具有酶活性。GPI-錨定蛋白質C-末端序列的實例是α-凝集素C-末端序列，CWP2C-末端序列等。此外，優選將適宜的選擇標記物如LEU2和URA3插到包含所構建的報告基因的載體中。
將所構建的報告基因通過適宜的方法插到真菌中，如乙酸鋰方法(GietzD et al，Nucl.Acids Res.201425，1992)，並且在需要時通過適於選擇標記物的方法(如適於LEU2的Leu-培養基，以及適於URA3的Ura-培養基)進行培養，然後挑選其中引入了DNA的真菌。
通過下列方法檢查試樣是否影響GPI-錨定蛋白質到細胞壁的轉運過程。
在試樣存在時，於適宜的條件下(如30℃48小時)培養引入了報告基因的真菌。培養之後，離心分離培養物上清液，並測量培養物上清液級分的報告酶活性。洗滌剩餘的細胞級分，然後通過適當的方法分離細胞壁成分，例如用葡聚糖酶降解細胞壁的葡聚糖，然後測量細胞壁級分和細胞質級分的報告酶活性。該試驗可以如下簡單地進行通過離心分離，然後在不洗滌細胞的情況下按比例計算來源於培養物上清液級分但殘留在細胞級分中的報告酶的量，從細胞級分的報告酶的量中減去此量，從而確定細胞級分中報告酶的量。
如果證實試樣具有增加培養物上清液級分中報告酶活性的活性(活性/細胞)，或者具有降低細胞壁級分中報告酶活性的活性(活性/細胞)，那麼就可以判定試樣對GPI-錨定蛋白質到細胞壁的轉運過程有影響。
(2)採用與真菌細胞壁表面糖蛋白反應的抗體進行的方法對於試樣是否影響GPI-錨定蛋白質在真菌表面層的表達，可以通過採用與所述蛋白質反應的抗體定量真菌細胞壁中的GPI-錨定蛋白質來檢測。
例如，可以由GPI-錨定蛋白質的胺基酸序列預測抗體的抗原決定簇，所述GPI-錨定蛋白質的實例如α-凝集素，Cwp2p及Alslp(Chen MH et al，J.Biol.Chem.，27026168-26177，1995；Van Der Vaat JM et al，J.Bacteriol.，1773104-3110，1995；Hoyer LL et al，Mol.Microbiol.，1539-54，1995)，合成該區的肽，將其與具有抗原性的物質如載體蛋白結合，然後可以通過免疫兔子等得到多克隆抗體，也可以通過免疫小鼠等得到單克隆抗體。更優選家兔的針對Alslp肽的多克隆抗體。
在可供選擇的方法中，可以通過用真菌(優選過量表達如α-凝集素，Cwp2p及Alslp等GPI-錨定蛋白質的真菌)免疫小鼠等獲得抗GPI-錨定蛋白質的單克隆抗體，在某些情況下，可以用部分純化GPI-錨定蛋白質進行免疫，並通過ELISA，Western印跡分析等選擇經融合產生的克隆。
通過下列方法可以檢查試樣是否影響GPI-錨定蛋白質到細胞壁的轉運過程，以及試樣是否減少來源於細胞壁中GPI-錨定蛋白質的蛋白量。
在試樣存在時，於適宜的條件下(如30℃48小時)培養真菌。通過離心法收集所培養的真菌並將細胞破碎，優選採用玻璃珠。優選用SDS離心提取洗滌過的破碎細胞，然後洗滌沉澱物。提取之後，用降解葡聚糖的酶，優選葡聚糖酶處理破碎的細胞，其經過離心處理的上清液即為GPI-錨定蛋白質樣品。
將抗-Alslp肽的抗體通過4℃培養過夜而包被在96-孔板上。用洗滌溶液，優選含0.05％Tween20的PBS(PBST)，洗滌之後，用封閉96-孔板非特異性吸附位點的試劑，優選BSA和明膠等蛋白質，更優選BlockAce進行封閉。用洗滌溶液，優選PBST，再次洗滌之後，有時在加入適當稀釋的GPI-錨定蛋白質樣品之後，在室溫進行適當長時間如2小時的反應。用洗滌溶液，優選PBST，洗滌之後，使對抗酶標記的白色假絲酵母的抗體，優選HRP-標記的抗-假絲酵母抗體，在室溫反應適當長的時間如2小時。標記方法可以是酶標記法或放射性同位素標記法。用洗滌溶液，優選PBST，洗滌之後，通過適於標記類型即酶標記的方法計算GPI-錨定蛋白質樣品中Alslp的量，加入底物溶液，然後終止反應，測量在490nm處的吸光度。
(3)檢查對動物細胞的粘附活性的方法通過測量真菌細胞壁中GPI-錨定蛋白質的活性，優選通過測量真菌對動物細胞等的粘附活性，可以檢查試樣是否影響GPI-錨定蛋白質在真菌表面的表達。除了參與粘附動物細胞的Alslp，Hwplp等之外，參與交配的α-凝集素，參與酵母聚集的Flolp等也稱作GPI-錨定蛋白質。在下文中，將詳細解釋採用真菌對動物細胞的粘附活性進行檢測的方法，但是本發明並不僅限於此。
真菌選用對細胞具有粘附活性的真菌，優選的真菌為白色假絲酵母。哺乳動物細胞採用粘附真菌的細胞，優選小腸上皮細胞。培養哺乳動物細胞並通過適當的方法如乙醇固定法將其固定。接種試樣和已經培養適當長時間(如30℃培養48小時)的真菌，培養一定長的時間(如在30℃培養1小時)之後，移出培養物上清液，用緩衝液洗滌，加載至瓊脂培養基，如SabouraudDextrose Agar培養基(Difco)。在30℃培養過夜之後，計數菌落的數目，並計算粘附率。
如果觀察到一種試樣使真菌粘附細胞而形成的菌落數目與未經該試樣處理的真菌相比降低，則可以判定該試樣已經影響了GPI-錨定蛋白質到細胞壁的轉運過程。
(4)採用光學顯微鏡或電子顯微鏡觀察真菌的方法可以通過用電子顯微鏡觀察真菌細胞壁的結構來檢查試樣是否影響GPI-錨定蛋白質在真菌表面的表達。
在試樣存在的條件下，將真菌如白色假絲酵母培養一定長的時間，例如30℃培養48小時，用透射電子顯微鏡觀察超精細的形態結構。這裡，採用透射電子顯微鏡進行的觀察可以通過例如根據Electron Microscope ChartManual(Medical Publishing Center)的方法來進行。據認為，具有高電子密度且通過透射電子顯微鏡顯像可以觀察到的真菌細胞最外層絮狀纖維結構是具有GPI-錨定蛋白質作為其構成成分的表面糖蛋白層，它不受其它現有抗真菌劑的影響。與未經處理的細胞相比，當真菌細胞最外層的這種絮狀纖維結構(其具有高電子密度)消失，留下具有高電子密度的微層時，可以判定所述試樣已經影響GPI-錨定蛋白質到細胞壁的轉運過程。
當在透射電子顯微鏡以及光學顯微鏡下觀察到真菌細胞大量溶脹且出芽(分裂)受到抑制的圖像時，可以判定試樣對細胞壁有影響。
下面式(I)所示的本發明的化合物 (其中各符號的定義同上)可以採用目前已知的常規有機化學反應來合成。例如，它可以通過下列方法來合成。
製備方法(1) 在上面各式中，X為離去基團如滷素基團和醯基。R3c的定義與R3a相同。式中其它符號的定義同上。
步驟A1製備Reissert化合物(V)的方法。該化合物可以根據文獻中的反應條件來製備，如Org.Synth.，VI，115(1988)；Heterocycles，36(11)，2489(1993)；J.Chem.Soc.(C)，666(1969)；或者J.Heterocycl.Chem.，29(5)，1165(1992)。具體地，反應物為例如苯甲醯氯與氰化鉀的組合。
步驟A2烷基化步驟。化合物(VI)可以通過化合物(V)與取代的苯甲基滷衍生物，取代的甲磺酸苄酯衍生物等在鹼的存在下進行反應而製備。所述鹼的具體實例包括氫化鈉，氫氧化鈉。
步驟A3水解反應步驟。化合物(I)可以通過在鹼的存在下水解化合物(VI)來製備。
方法A是通過步驟A1，步驟A2，及步驟A3製備化合物(I)的方法。
步驟B1將化合物(V)轉化成化合物(VII)的步驟。化合物(VII)可以通過化合物(V)與取代的苯甲醛在鹼和相轉移催化劑的存在下反應來製備。所述鹼的實例包括氫氧化鈉和氫氧化鉀。所述相轉移催化劑的實例包括三乙基苄基氯化銨。
步驟B2將醇氧化成酮的步驟。酮衍生物(VIII)可以採用醇到酮的氧化反應中常用的氧化劑和反應條件來製備。具體地，氧化劑為例如二氧化錳，二氧化鉻，或者苯醌。
步驟B3將酮還原成亞甲基的步驟。亞甲基衍生物(I)可以採用酮衍生物(VIII)到亞甲基衍生物(I)的還原反應中常用的還原劑組合來製備。所述還原劑組合的實例包括水合肼與氫氧化鈉或氫氧化鉀，和三乙基矽烷與三氟化硼，或三氟甲磺酸。
方法B是通過步驟A1，步驟B1，步驟B2，及步驟B3製備化合物(I)的方法。
步驟C1羥基滷化或醯化的步驟。化合物(IX)可以通過滷化劑或醯化劑與化合物(VII)的反應來製備。滷化劑的實例包括亞硫醯氯，濃鹽酸，及三溴化磷。此外，醯化劑的實例包括醯滷如乙醯氯和酸酐如乙酸酐。
步驟C2滷素基團或醯基的還原性消除反應步驟。化合物(I)可以通過例如採用催化劑進行化合物(IX)的氫消除反應來製備。
所述催化劑的實例包括鈀-碳。
方法C是通過步驟A1，步驟B1，步驟C1，及步驟C2製備化合物(I)的方法。
製備方法(2)
式(I)所示的本發明的化合物還可以通過下面的方法來合成。 式中，X為離去基團如滷素基團和醯基。其它符號的定義同上。
步驟D1進行Grignard反應及隨後的酸水解反應的步驟。化合物(VIII)可以通過化合物(X)與取代或未取代的苯基Grignard試劑反應，然後在酸存在下水解來製備。
步驟D2亞甲基衍生物(I)可以由酮衍生物(VIII)按類似於步驟B3的條件來製備。
方法D是通過步驟D1和步驟D2製備化合物(I)的方法。
步驟E1酮到醇的還原反應步驟。化合物(VII)可以從化合物(VIII)開始，採用酮到醇的還原反應中常用的還原劑和反應條件來製備。所述還原劑的具體實例包括硼氫化鈉和氫化鋁鋰。
步驟E2在類似於步驟C1的條件下，滷化或醯化的衍生物(IX)可以由醇衍生物(VII)來製備。
步驟E3在類似於步驟C2的還原性消除反應的條件下，化合物(I)可以由化合物(IX)來製備。
方法E是通過步驟D1，步驟E1，步驟E2，及步驟E3製備化合物(I)的方法。
製備方法(3)式(I)所示的本發明的化合物還可以通過下面的方法來合成。 方法F式中各符號的定義同上。
步驟F1氯化反應步驟。化合物(XII)可以通過化合物(XI)與氯化試劑反應來製備。氯化試劑的實例包括三氯氧磷和亞硫醯氯。
步驟F2與Grignard試劑偶聯反應的步驟。化合物(I)可以通過化合物(XII)與取代或未取代的苄基Grignard試劑在催化劑存在下反應來製備，反應條件依據文獻如Arch.Pharm，314，156(1981)。所述催化劑的實例包括[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯合鎳(II)。
方法F是通過步驟F1和步驟F2製備化合物(I)的方法。
製備方法(4)式(I)所示的本發明的化合物可以通過下列方法來合成，該化合物中的R1a和R2a一起形成如苯環，吡啶環，吡咯環，噻吩環，呋喃環，環己烷環或者環戊烷環等稠環。

式中各符號的定義同上。
其中形成異喹啉環的製備方法示例如下。
步驟G1進行縮合反應及隨後的還原反應的步驟。化合物(XIV)可以通過取代或未取代的苯甲醛衍生物(XIII)與硝基甲烷之間的縮合反應，以及隨後的硝基還原反應來製備。還原硝基所使用的試劑的實例包括鈀-碳與甲酸銨的組合，以及氫化鋁鋰。
步驟G2形成醯胺鍵的反應。化合物(XV)可以利用醯胺鍵形成反應的偶聯試劑通過化合物(XIV)與取代或未取代的苯乙醯氯反應而製備。所述偶聯試劑的實例包括N，N′-二環己基碳二亞胺與N-羥基琥珀醯亞胺的組合，N，N′-二環己基碳二亞胺與N-羥基苯並三唑的組合，以及1，1′-羰基二咪唑。
步驟G3環化反應步驟。化合物(XV)可以根據文獻中的反應條件來製備，所述文獻如Organic Reaction，6，74(1951)；J.Hetetocyclic Chem.，30，1581(1993)。該反應的試劑的實例包括三氯氧磷和多聚磷酸。
方法G是通過步驟G1，步驟G2，及步驟G3製備化合物(I)的方法。
製備方法(5-1)替換通過前述製備方法合成的化合物(I)的取代基R3a或R4a(5-1)用氨基，醯胺基，磺醯胺基等替換所述取代基。 式中各符號的定義同上。
步驟H1硝基的還原反應。化合物(XVII)可以利用還原硝基常用的方法，通過還原化合物(XVI)來製備。所述還原方法的實例為鈀-碳或氫氧化鈀催化的氫化還原，以及通過鐵-氯化銨、鐵-鹽酸、鐵-乙酸等進行的還原。
步驟H2進行醯化或磺醯化反應的步驟。化合物(XVIII)可以通過用醯氯或酸酐處理化合物(XVII)來製備。
方法H是通過步驟H1和步驟H2製備化合物(XVIII)的方法。 式中各符號的定義同上。
步驟I1還原氨化反應步驟。化合物(XX)可以根據文獻中的反應條件由化合物(XIX)與取代或未取代的醛來製備，所述的文獻如J.Am.Chem.Soc.，93，2897(1971)；Comprehensive Organic Synthese，8，25(1991)；Tetrahedron，40，1783(1984)；及Tetrahedron，41，5307(1985)。所述還原氨化試劑的實例包括三乙醯氧基硼氫化鈉，氰基三硼氫化鈉，硼烷-吡啶複合物，以及鈀-碳/氫。
步驟I2進行醯化、磺醯化或還原氨化反應的步驟。化合物(XXIa)或者化合物(XXIb)可以採用醯氯或酸酐由化合物(XX)製備。化合物(XXIc)可以通過進行類似於步驟I1的還原氨化反應來製備。
方法I是通過步驟I1和步驟I2製備化合物(XXIa)，化合物(XXIb)，或者化合物(XXIc)的方法。
製備方法(5-2)替換通過前述製備方法合成的化合物(I)的取代基R3a或R4a(5-2)用羥基，烷氧基等替換所述取代基。 方法J式中各符號的定義同上。
步驟J1化合物(XXIII)可以根據文獻中的反應條件通過去甲基化反應由化合物(XXII)來製備，所述文獻如Bull.Chem.Soc.Jpn.，44，1986(1971)；Org.Synth.，Collect.Vol.V，412(1073)；J.Am.Chem.Soc.，78，1380(1956)；或者J.Org.Chem.，42，2761(1977)。在去甲基化反應中使用的試劑的實例包括47％的氫溴酸水溶液，三溴化硼，鹽酸吡啶，以及碘代三甲基矽烷。
步驟J2烷基化反應步驟。化合物(XXIV)可以通過化合物(XXIII)與取代或未取代的烷基滷化物，取代或未取代的甲磺酸烷基酯等在鹼存在下的反應來製備。
方法J是通過步驟J1和步驟J2製備化合物(XXIV)的方法。
製備方法(5-3)替換通過前述製備方法合成的化合物(I)的取代基R3a或R4a(5-3)用1，2-亞乙烯基，亞乙炔基，烷基等替換所述取代基。 式中各符號的定義同上。
步驟K1三氟甲磺醯化(triflation)反應的步驟。化合物(XXV)可以通過化合物(XXIII)與三氟甲磺酸酐在鹼存在下的反應來製備。
步驟K2與炔偶聯反應的步驟。化合物(XXVI)可以通過化合物(XXV)與炔衍生物在鈀膦複合物，碘化銅和鹼的存在下的偶聯來製備。製備該反應體系中鈀膦複合物的試劑的實例包括鈀-碳與三苯基膦的組合，四(三苯基膦)合鈀(0)與三苯基膦，二氯三苯基膦合鈀(II)，乙酸鈀(II)與三(鄰甲基苯基)膦，以及乙酸鈀(II)與1，1′-雙(二苯基膦)二茂鐵。所述鹼的實例包括三乙胺，哌啶，吡啶，及碳酸鉀。根據反應，還可以使用氯化鋰。
步驟K3進行不飽和烴之還原反應的步驟。化合物(XXVIIa)或者化合物(XXVIIb)可以通過例如採用催化劑的催化氫化反應由化合物(XXVI)來製備。所述催化劑的實例包括鈀-碳，氫氧化鈀，氧化鈀，及鈀-碳-碳酸鈣。 X為離去基團如滷素基團和三氟磺酸根。方法L式中各符號的定義同上。
步驟L1與烯烴之偶聯反應(Heck反應)的步驟。化合物(XXVIIa)可以根據文獻反應條件利用催化劑(如，鈀絡合物及其配位體)由化合物(XXVIII)來製備，所述文獻如J.Org.Chem.，37，2320(1972)；Org.Reactions.，27，345(1982)；Comprehensive Organic Synthesis，Vol.4，833(1991)；鈀Reagents andCatalysts，125(1995)；Chem.Commun.，1287(1984)；Tetrahedron Lett，26，2667(1985)；及Tetrahedron Lett，31，2463(1990)。該反應所使用的催化劑組合(鈀絡合物及其配位體)的實例包括乙酸鈀(II)與1，1′-雙(二苯基膦)二茂鐵，以及乙酸鈀(II)與三(鄰甲基苯基)膦。三級鹼的實例包括三乙胺，二異丙基乙胺，以及1，8-二氮雜雙環[5.4.0]-7-十一碳烯。化合物(XXVIII)中的X代表離去基團，如滷素基團和三氟甲磺醯氧基。
步驟L2化合物(XXVIIb)可以根據類似於步驟K3的不飽和烴還原反應的條件由化合物(XXVIIa)來製備。
方法L是通過步驟L1製備化合物(XXVIIa)，然後通過步驟L2製備化合物(XXVIIb)的方法。
式(I)所示的本發明的化合物的各種異構體可以利用普通的分離技術(例如重結晶，色譜法等)進行純化與分離。
本發明的化合物或其鹽或其水合物可以直接給藥於哺乳動物(優選人)。它們還可以通過常規方法配製成片劑，粉劑，細粒劑，顆粒劑，包衣片劑，膠囊，糖槳，錠劑，吸入劑，栓劑，注射劑，軟膏劑，眼膏，滴眼劑，滴鼻劑，滴耳劑，泥罨劑，洗劑等，然後給藥。對於藥物製劑，可以使用藥物製劑常用的助劑(例如，填充劑，粘結劑，潤滑劑，著色劑，調味劑，以及需要時的穩定劑，乳化劑，吸收促進劑，表面活性劑，pH調節劑，防腐劑，抗氧劑等)。藥物製劑可以用常規方法，通過將通常用作藥劑成分的各組份混合來製備。例如，經口給藥的製劑可以如此製備將本發明的化合物或其藥用鹽與填充劑，必要時還有粘結劑，崩解劑，潤滑劑，著色劑，調味劑等混合，並通過普通方法將該混合物配製成粉劑，細粒劑，顆粒劑，片劑，包衣片劑，膠囊等。這些組分的實例包括動物脂肪和植物油，如大豆油，牛脂，以及合成甘油酯；烴，如液體石蠟，角鯊烯，以及固體石蠟；酯油，如肉豆蔻酸辛基十二醇酯和肉豆蔻酸異丙酯；高級醇，如十六醇十八醇混合物以及二十二醇；矽氧烷樹脂；矽油；表面活性劑，如聚氧乙烯脂肪酸酯，山梨聚糖脂肪酸酯，甘油脂肪酸酯，聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯，聚氧乙烯硬化的蓖麻油，以及聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物；水溶性大分子，如羥乙基纖維素，聚丙烯酸，羧基乙烯基聚合物，聚乙二醇，聚乙烯基吡咯烷酮，以及甲基纖維素；低級醇，如乙醇和異丙醇；多元醇，如甘油，丙二醇，二丙二醇，以及山梨醇；糖，如葡萄糖和蔗糖；無機粉末，如矽酸酐，矽酸鋁鎂，以及矽酸鋁；純水等。填充劑的實例包括乳糖，玉米澱粉，精製白糖，葡萄糖，甘露醇，山梨醇，結晶纖維素，以及二氧化矽。粘結劑的實例包括聚乙烯醇，聚乙烯醚，甲基纖維素，乙基纖維素，阿拉伯樹膠，黃芪膠，明膠，蟲膠，羥丙基甲基纖維素，羥丙基纖維素，聚乙烯吡咯烷酮，聚丙二醇聚氧乙烯嵌段聚合物，以及葡甲胺。崩解劑的實例包括澱粉，瓊脂，粉狀明膠，結晶纖維素，碳酸鈣，碳酸氫鈉，檸檬酸鈣，糊精，果膠，以及羧甲基纖維素鈣。潤滑劑的實例包括硬脂酸鎂，滑石，聚乙二醇，二氧化矽，以及硬化的植物油。著色劑的實例為那些允許加入藥物中的著色劑。調味劑的實例包括，可可粉，l-薄荷醇，芳香分散劑，薄荷油，冰片，以及肉桂粉。對於這些片劑和顆粒劑當然可以使用糖衣，必要時還可以使用其它適宜的包衣。此外，液體製劑(如糖漿和注射劑)可以採用常規方法通過將pH調節劑，穩定劑，等滲劑等，以及必要時的增溶助劑，穩定劑等，加到本發明的化合物或其藥用鹽中，來製備。製備外用製劑的方法沒有限制，而且可以通過常規方法來製備。也就是說，用於製劑的基礎材料可以選自藥物、準藥物、化妝品等常用的各種材料。具體地，可使用的基礎材料的實例為動物脂肪和植物油，礦物油，酯油，蠟，高級醇，脂肪酸，矽油，表面活性劑，磷脂，醇，多元醇，水溶性大分子，粘土礦，以及純化水。必要時，可以添加pH調節劑，抗氧化劑，螯合劑，防腐劑和抗真菌劑，著色物質，香味劑等，但是，本發明的外用製劑的基礎材料並不僅限於此。再者，如果需要，還可以混入具有不同誘導作用的組分，血流促進劑，殺真菌劑，消炎劑，細胞活化劑，維生素，胺基酸，保溼劑，以及角質裂解劑。上述基礎材料按外用製劑常用濃度的量加入。
施用本發明的化合物或其鹽或其水合物時，對其形式沒有特別的限制，它們可以根據常用的方法經口或經非胃腸道途徑給藥。它們可以配製成如片劑，粉劑，細粒劑，膠囊，糖漿，錠劑，吸入劑，栓劑，注射劑，軟膏劑，眼膏，滴眼劑，滴鼻劑，滴耳劑，泥罨劑，以及洗劑等劑型。本發明的藥物組合物的劑量可以根據症狀輕重、年齡、性別、體重、劑型、鹽的類型、疾病的具體類型等適當地選擇。
將治療有效量的本發明的抗真菌劑給藥於患者。這裡，「治療有效量」是指產生所需藥理效果並且有效地恢復或緩解所要治療的患者之症狀的藥物量。視患者的體重、疾病類型、症狀輕重、患者的年齡、性別、對藥物的敏感性等，上述劑量可以顯著地不同。通常，成人的日劑量為大約0.03～1000mg，優選0.1～500mg，更優選0.1～100mg，並且每日給藥一次或幾次，或者每若干天給藥一次或幾次。注射劑量一般為約1～3000μg/kg，優選為約3～1000μg/kg。


圖1是GPI-錨定蛋白質到細胞壁的轉運過程的示意圖。GPI(糖基磷脂醯肌醇)-錨定蛋白質首先錨定在GPI上，然後再轉運至細胞壁。
圖2圖示前述化合物(Ia)在釀酒酵母報告系統中的活性。當前述化合物(Ia)以0.39～1.56μg/ml的濃度存在時，培養物上清液級分中的頭孢菌素酶活性增加而細胞壁級分中的此酶活性降低，當濃度為3.13μg/ml或更高時，則觀察到生長抑制。
圖3圖示前述化合物(Ia)對白色假絲酵母與動物細胞的粘附的影響。即使在未能觀察到生長抑制的1.56μg/ml濃度下，白色假絲酵母對動物細胞的粘附也有大約一半受到了抑制。
圖4是前述化合物(Ia)對白色假絲酵母的Alslp抗原量的影響。當前述化合物(Ia)以0.1～0.39μg/ml的濃度存在時，培養物上清液級分中Alslp抗原量增加而細胞壁級分中該抗原量減少。
圖5是用GWT1基因作為探針對白色假絲酵母基因進行Southem印跡分析的照片。經EcoRI處理後在6.5kb處，經HindIII處理後在4.0kb處，經EcoRI-HindIII後處理在2.0kb處，經EcoRI-PstI處理後在2.5kb處，都分別觀察到單一泳帶，預期白色假絲酵母中抗前述化合物(Ia)的抗性基因的同源物以單個基因的形式存在。
圖6示過量表達GWT1基因產物的釀酒酵母中，前述化合物(Ia)的活性。在釀酒酵母CW63菌株(圖中的「W/T」)中，即使前述化合物(Ia)在導致培養物上清液級分中頭孢菌素酶活性增加而細胞壁級分中該酶活性降低的濃度下(0.39～1.56μg/ml)，也未在釀酒酵母CW63/GWT1菌株，及釀酒酵母CW63菌株中觀察到這種效果，甚至在導致生長受到抑制的前述濃度(＞3.13μg/ml)下，也未在釀酒酵母CW63/GWT1菌株(圖中的「O/E」)中觀察到生長抑制。
圖7是釀酒酵母，粟酒裂殖糖酵母，及白色假絲酵母的GWT1基因編碼的蛋白質中高度保守區的圖譜。
具體實施例方式下面將參照實施例詳細地說明本發明，但是本發明並不受這些實施例的限制。
實施例A1構建報告基因並將其引入釀酒酵母(1)構建溶菌酶為報告酶的報告基因用包含ENO1啟動子+分泌信號+溶菌酶基因的pESH質粒(IchikawaK et al，Biosci.Biotech.Biochem.，57(10)，1686-1690，1993)作為模板，以SEQ ID NO8和SEQ ID NO9的寡核苷酸為引物，通過PCR擴增包含啟動子序列的溶菌酶基因，並將其亞克隆到pCR-Script SK(+)的SalI-EcoRI位點中(a)。此外，用釀酒酵母染色體DNA作模板，以SEQ ID NO10和SEQID NO11的寡核苷酸為引物，通過PCR擴增CWP2基因，並將其亞克隆到pUC19的EcoRI-HindIII位點中(b)。類似地，用pYES2(INVITROGEN)作模板，以SEQ ID NO12和SEQ ID NO13的寡核苷酸為引物，通過PCR擴增CYC1終止子，並將其亞克隆到pUC19的新引入的NotI-KpnI位點中(c)。
下一步，將用SalI-EcoRI切除的溶菌酶基因(a)，以及用EcoRI-HindIII切除的CWP2基因(b)插到pESH的SalI-HindIII切割位點。最後，通過下述步驟製備pRLW63T用BamHI-HindIII切割包含ENO1啟動子+分泌信號+溶菌酶基因+CWP2基因的基因，將其插入pRS306整合載體(Sikorski RS etal，Genetics.122(1)19-27，1989)，然後將HindIII-KpnI切割的CYC1終止子(c)插到HindIII-KpnI切割位點中。
(2)構建頭孢菌素酶為報告酶的報告基因用前述pESH作模板，用ENO1啟動子C-末端+分泌信號部分(d)作模板，以SEQ ID NO14和SEQ ID NO15的寡核苷酸為引物，通過PCR擴增包含啟動子序列和分泌信號部分的DNA，並將其亞克隆到新引入pUC19中的BamHI-NotI位點中(d)。此外，用弗勞地氏檸檬酸桿菌(Citrobacter freundii)染色體DNA作模板，以SEQ ID NO16和SEQ ID NO17的寡核苷酸為引物，通過PCR擴增頭孢菌素酶基因，並將其亞克隆到新引入pUC19中的NspV-XbaI位點中(e)。類似地，用釀酒酵母染色體DNA作模板，以SEQ IDNO18和SEQ ID NO19的寡核苷酸為引物，通過PCR擴增CWP2基因，並將其亞克隆到pUC19的XbaI-HindIII位點中(f)。
通過將pESH的BamHI-SalI片段插到其中已經插入了(d)的質粒的BamHI-SalI切割位點，製得全長的ENO1啟動子+分泌信號部分之後，用NspV-XbaI切割頭孢菌素酶基因，用XbaI-HindIII切割CWP2基因，將這兩種基因插到NspV-HindIII切割位點中。之後，通過下列步驟製備pRCW63T用EcoRI-HindIII切割，將該片段插到前述pRS306中，然後將CYC1終止子插入HindIII-KpnI切割位點。
(3)將報告基因引入釀酒酵母中在10ml YPD培養基中30℃振蕩培養釀酒酵母G2-10菌株，在對數生長晚期收集細胞(2～5×107細胞/ml)。用無菌水洗滌之後，通過乙酸鋰方法引入上述的pRLW63T和pRCW63T，所述乙酸鋰方法採用YEASTMAKERTM酵母轉化系統(Clontech)(參照YEASTMAKERTM酵母轉化系統用戶手冊)。採用pRLW63T和pRCW63T，其中的URA3基因分別用EcoRV和ApaI切割。在SD(Ura-)培養基中30℃培養3天，所得菌落在YPD培養基中培養。
確定溶菌酶和頭孢菌素酶活性的定位，將二者的活性主要定位於細胞壁中，並且確認CWP2的C-末端序列的作用是作為向細胞壁轉運的信號。
實施例A2通過釀酒酵母報告系統篩選藥物由於使用頭孢菌素酶的酶反應的靈敏性優於使用溶菌酶的酶反應的靈敏性，所以採用引入了pRCW63T的釀酒酵母(釀酒酵母CW63菌株)篩選化合物。
在YPD液體培養基中30℃靜止培養48小時之後，將酵母細胞培養物用YPD液體培養基稀釋100倍(3～5×105細胞/ml)，並將其以75μl/孔的等分試樣接種在V-形底的96-孔板(含有25μl/孔的稀釋試樣)中，30℃靜止培養48小時。將該板離心之後，取樣25μl的上清液，並置於平底的96-孔板中，以此作為培養物上清液級分。
使沉澱的細胞懸浮，並按75μl/孔的等份加入用2.4M山梨醇製備的酶解酶(Seikagaku Corporation)溶液，30℃反應1小時。將該板離心之後，取樣10μl的上清液，並置於平底的96-孔板中，加入15μl的磷酸鹽緩衝液，將其用作細胞壁級分。
通過下列方法測量培養基和細胞壁級分中的頭孢菌素酶活性將200μMnitrocefin溶液加到已集中的樣品中，經過一定時間之後，用檸檬酸緩衝液中止反應，然後測量在490nm處的吸光度。
此外，通過目測法測定試樣存在下的真菌生長。
圖2表明，當前述化合物(Ia)以0.39～1.56μg/ml的濃度存在時，培養物上清液級分中的頭孢菌素酶活性增加，而細胞壁級分中的該酶活性降低。依照這種方式，將增加在培養物上清液級分中頭孢菌素酶活性又降低細胞壁級分中頭孢菌素酶活性的化合物視為抑制GPI-錨定蛋白質到細胞壁的轉運過程的化合物。
實施例A3利用假絲酵母與動物細胞的粘附篩選藥物將IEC-18細胞(1×105細胞/ml於包含10％胎牛血清和2mM穀氨醯胺的D-MEM培養基(Nissui Pharmaceutical)中)的3毫升等分試樣置於6-孔板的每個孔中。將該板在二氧化碳氣體培養箱中於37℃培養3天，取出培養物上清液，並進行乙醇固定。
在包含各種濃度的試樣的Sabouraud葡萄糖液體培養基中於30℃將白色假絲酵母培養48小時，將細胞數調整到4×102細胞/ml，取1ml接種到平板的每個孔中，所述孔中已培養了固相IEC-18細胞。30℃培養1小時之後，取出培養物上清液，用PBS洗滌，然後在上層覆蓋2ml的Sabouraud葡萄糖瓊脂培養基(Difco)。30℃培養過夜之後，計數成熟菌落(CFU)並計算粘附率。
圖3表明，即使前述化合物(Ia)的濃度為1.56μg/ml，且其中未能觀察到生長抑制，白色假絲酵母對動物細胞的粘附也有大約一半受到抑制。與未經處理的白色假絲酵母相比，將減少細胞粘附型CFU的試樣視為抑制白色假絲酵母與動物細胞的粘附的化合物。
實施例A4利用通過ELISA定量的GPI-錨定蛋白質的量篩選藥物(1)抗-Alslp肽抗體的製備用與KLH偶聯的合成肽SEQ ID NO20使家兔免疫。將所得抗血清進行親和純化，用IgG級分作為抗-Alslp肽抗體。
(2)通過ELISA利用抗-Alslp肽抗體篩選藥物將白色假絲酵母在包含各種濃度的試樣的Sabouraud葡萄糖液體培養基(5ml)中30℃培養48小時，離心收集細胞，洗滌，然後懸浮於300μl的Tris-HCl緩衝液中。將懸浮的細胞轉移至裝有玻璃珠的微型試管中，並通過將攪拌1分鐘且冰上冷卻1分鐘的循環重複10次來進行破碎。破碎的細胞洗滌後，用2％的SDS在95℃抽提10分鐘，離心，然後用磷酸鹽緩衝液洗滌沉澱物5次。向該沉澱物中加入0.5ml5μg/ml的酶解酶溶液，37℃反應1小時，用離心所得上清液作為GPI-錨定蛋白質樣品。
用50μl抗-Alslp肽抗體(40μg/ml)包被96-孔板並於4℃過夜。待用包含0.05％Tween20的PBS(PBST)洗滌5次之後，用25％的BlockAce在室溫封閉2小時。用PBST洗滌3次之後，使50μl2-倍系列稀釋的GPI-錨定蛋白樣品在室溫反應2小時。用PBST洗滌5次之後，使100μl稀釋1000倍的HRP-標記的抗-假絲酵母抗體(ViroStat)室溫反應2小時，然後在用PBST洗滌5次之後，立即加入75μl底物溶液。中止反應之後，測量490nm的吸光度。
圖4表明，當前述化合物(Ia)以0.1～0.39μg/ml的濃度存在時，Alslp抗原的量在培養物上清液級分中增加，且在細胞壁級分中減少。按照這種方式，將增加培養物上清液中Alslp量或者降低細胞壁級分中Alslp量(與未經所述化合物處理的白色假絲酵母中的Alslp量相比，其通過ELISA測量)的化合物視為抑制白色假絲酵母中GPI-錨定蛋白質到細胞壁的轉運過程的化合物。
實施例A5通過電子顯微鏡觀察在試樣存在下培養的白色假絲酵母的細胞壁將白色假絲酵母在包含各種濃度的試樣的Sabouraud葡萄糖液體培養基(5ml)中30℃培養48小時，然後離心並收集，通過高錳酸鉀固定法將其固定，觀測其透射電子顯微鏡圖像。
在細胞的最外層觀察到具有高電子密度的絮狀纖維結構，並認為它是具有GPI-錨定蛋白質為其構成成分的表層糖蛋白層。該絮狀纖維結構不受其它現有的抗真菌劑的影響。
與未經處理的細胞相比，在前述化合物(Ia)存在下培養的白色假絲酵母中，細胞的最外層具有高電子密度的絮狀纖維結構消失，留下少量具有高電子密度的層。照此，當真菌細胞最外層具有高電子密度的絮狀纖維結構消失時，則將試樣視為影響GPI-錨定蛋白質到細胞壁的轉運過程的化合物。
實施例A6篩選釀酒酵母的抗前述化合物(Ia)的抗性基因由ATCC得到釀酒酵母基因的質粒文庫(ATCC編號37323)。
在10ml YPD培養基中30℃振蕩培養釀酒酵母G2-10菌株，在對數生長晚期收穫細胞(1～2×107細胞/ml)。用無菌水洗滌細胞之後，通過乙酸鋰方法引入釀酒酵母基因的質粒文庫，所述乙酸鋰方法採用YEASTMAKERTM酵母轉化系統(Clontech)(參照YEASTMAKERTM酵母轉化系統用戶手冊)，將所得細胞塗布在SD(Leu-)板上，得到大約80,000個菌落。收集和稀釋菌落，並將其塗布在包含濃度為1.56μg/ml和3.125μg/ml的前述化合物(Ia)的SD(Leu-)板上，致使每個板上有570,000個菌落。隨後，通過在37℃培養72小時，得到抗性克隆。
挑選27個克隆，通過METHODS IN ENZYMOLOGY，Vol.194169-182(1991)的方法收集質粒，分析插入子，結果發現所有27個克隆均包含相同的片段。
採用ABI377系統(PE Applied Biosystems)測定核苷酸序列，結果發現SEQ ID NO1所示DNA就是賦予對前述化合物(Ia)的抗性的DNA，將其命名為GWT1。
實施例A7釀酒酵母GWT1基因的白色假絲酵母同源物的Southern印跡分析樣品如下製備用EcoRI(TaKaRa)，HindIII(TaKaRa)，BamHI(TOYOBO)，或者PstI(New England Biolabs)(包括2種酶的組合)處理25μg的白色假絲酵母染色體組DNA16小時，然後通過乙醇沉澱法濃縮，並溶解於25μl的無菌水中。將25微克用所述限制性內切酶消化的染色體組DNA通過0.75％的瓊脂糖凝膠電泳進行分離，並將其轉移至尼龍膜(GeneScreenPLUS/NEN)。
通過隨機引物法，用α-33P-dCTP標記20ng大約1.5kb的SEQ ID NO1的DNA片段，由此製得探針，並用GeneQuant柱(Amersham-Pharmacia)進行純化。
按下列方法進行雜交將膜浸泡在10ml PerfectHybTM(TOYOBO)溶液中，在65℃預培養1小時，然後加入上述標記過的探針，並於65℃培養2.5小時。按下列進行洗滌1)2×SSC，0.05％SDS溶液，於25℃洗滌5分鐘，2)2×SSC，0.05％SDS溶液，於25℃洗滌15分鐘，及3)0.1×SSC，0.1％SDS溶液，於50℃洗滌20分鐘。將經洗滌的膜用Saran Wrap包裹起來，並與成像底片(FUJI)在室溫接觸12小時，用BAS2000(FUJI)捕集轉移到成像底片的圖像，且對圖像進行分析。
結果，經EcoRI處理後在6.5kb處，經HindIII處理後在4.0kb處，經EcoRI-HindIII後處理在2.0kb處，經EcoRI-PstI處理後在2.5kb處，都分別觀察到單一泳帶(圖5)，而且預期白色假絲酵母中抗前述化合物(Ia)的抗性基因的同源物以單個基因的形式存在。
實施例A8篩選白色假絲酵母的抗前述化合物(Ia)的抗性基因根據Navaro-Garcia F et al，Mol.Cell.Biol.，152197-2206，1995的方法製備白色假絲酵母的染色體組文庫。具體地，用Sau3AI部分地消化白色假絲酵母的染色體組DNA，然後收集大約3～5個DNA片段，並將其插到YEp352穿梭載體的BamHI位點中。
在30℃，於10ml的YPD培養基中振蕩培養釀酒酵母G2-10菌株，並在對數生長晚期收集細胞(2～5×107細胞/ml)。用無菌水洗滌細胞之後，通過乙酸鋰方法引入白色假絲酵母的染色體組文庫，所述乙酸鋰方法採用YEASTMAKERTM酵母轉化系統(Clontech)(參照YEASTMAKERTM酵母轉化系統用戶手冊)，將所得細胞塗布在SD(Ura-)板上，得到大約25,000個菌落。收集和稀釋菌落，並將其塗布在包含濃度為1.56μg/ml的前述化合物(Ia)的SD板上，致使每個板上有500,000個菌落。其後，通過在30℃培養6小時，然後將其轉移到37℃並培養66小時，得到抗性克隆。
挑選30個克隆並通過METHODS IN ENZYMOLOGY，Vol.194169-182(1991)的方法收集質粒，分析插入片段，結果發現30個克隆中有28個克隆包含相同的片段。
採用ABI377系統(PE Applied Biosystems)測定核苷酸序列，結果發現SEQ ID NO3所示DNA就是賦予對前述化合物(Ia)的抗性的DNA。
實施例A9由白色假絲酵母的臨床分離物克隆前述化合物(Ia)的抗性基因的同源物進行PCR擴增採用由本發明人保存的白色假絲酵母的臨床分離物純化製得的染色體組DNA作為模板，並以SEQ ID NO21和SEQ ID NO22為引物。由全部三個獨立的PCR樣品擴增大約1.6kb的DNA片段，純化已擴增的片段，將其亞克隆到pT7-Blue載體(Novagen)中，並測定核苷酸序列，由此發現SEQ ID NO5的DNA序列。該序列在三個位置不同於實施例A7的DNA序列(SEQ ID NO3)。
此外，在史丹福大學序列中心(Stanford University Sequence Center(http//sequence-www.stanford.edu/))測定的白色假絲酵母基因的核苷酸序列中，發現實施例A7的DNA的同源物(SEQ ID NO7)，該序列在四個位置不同於實施例A7的DNA序列(SEQ ID NO3)。
實施例A10構建過量表達GWT1基因產物的釀酒酵母進行PCR擴增，採用由實施例A6所得抗前述化合物(Ia)的抗性克隆純化製得的質粒作為模板，並以SEQ ID NO23和SEQ ID NO24為引物。將用PvuII切割的PCR產物插到得自實施例A1的pRLW63T的SalI-HindIII切割位點中。將完整插入物用BamHI-KpnI切割，並插到pRS304的MCS(多克隆位點)中(Sikorski RS et al，Genetics.122(1)19-27，1989)，製得用於整合的載體。
根據實施例A1的方法培養釀酒酵母CW63菌株，該菌株具有頭孢菌素酶基因作為報告基因，用EcoRV切割整合載體的TRP1，然後通過實施例A1的方法進行轉化。過量表達GWT1的菌株(釀酒酵母CW63/GWT1菌株)通過在SD(Trp-)培養基中於30℃培養3天而得到。
除了對前述化合物(Ia)表現出抗性之外，過量表達GWT1的菌株與野生型菌株沒有什麼不同，而且對其它抗真菌劑，放線菌酮，苯菌靈，及兩性黴素B敏感。
實施例A11構建缺少GWT1基因的釀酒酵母突變體通過PCR擴增兩端均包含GWT1序列的His5盒，所用模板為粟酒裂殖糖酵母的his5基因(Longtine MS et al，Yeast，14953-961，1998)，以SEQ IDNO25和SEQ ID NO26為引物。
培養釀酒酵母G2-10並根據實施例A1的方法收集細胞，且根據實施例A1的方法轉化前述的PCR產物。通過在SD(His-)培養基中於30℃培養5-7天，得到缺乏GWT1的菌株。
儘管缺乏GWT1的菌株表現出生長非常緩慢，但卻暗示其生長不受前述化合物(Ia)的影響，且該GWT1基因產物即為所述化合物的靶。此外，缺乏GWT1的菌株具有如下特徵其不能在高溫下生長；細胞是溶脹的；以及通過透射電子顯微鏡觀察時，具有高電子密度的真菌細胞最外層的絮狀纖維結構已經消失。
實施例A12前述化合物(Ia)在過量表達GWT1基因產物的釀酒酵母中的活性利用釀酒酵母CW63菌株和引入了GWT1基因的釀酒酵母CW63/GWT1，通過實施例A2中所述的方法檢測前述化合物(Ia)的活性。
結果，即使前述化合物(Ia)的濃度(0.39～1.56μg/ml)使得在釀酒酵母CW63菌株中頭孢菌素酶在培養物上清液級分中的活性增加，在細胞壁級分中的活性減小，也未在釀酒酵母CW63/GWT1菌株中觀察到任何影響，甚至在前述化合物(Ia)的濃度(＞3.13μg/ml)使得釀酒酵母CW63菌株的生長受到抑制時，仍未觀察到釀酒酵母CW63/GWT1菌株的生長抑制(圖6)。
實施例A13(4-丁基苯基)(1-異喹啉基)酮的合成在氮氣氛下，將1-溴-4-丁基苯(2.29ml，13.0mmol)加到鎂(338mg，13.9mmol)與四氫呋喃(6.5ml)的混合溶液中，並加入催化劑量的1，2-二溴乙烷作為引發劑，回流攪拌10分鐘。將該溶液冷卻至0℃，加入1-異喹啉腈(1.0g，6.49mmol)的四氫呋喃溶液，並於室溫下再攪拌1小時，且於70℃下攪拌3小時。其後，再次將溶液冷卻至0℃，加入濃鹽酸(2.56ml)和甲醇(11ml)，然後回流2小時。將濃縮的剩餘物溶解於5N氫氧化鈉和甲苯，並通過硅藻土(celite)進行過濾。分出濾液的甲苯層，用水洗滌，用硫酸鎂乾燥，並濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化得到1.72g的標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.93(3H，t)，1.32-1.43(2H，m)，1.58-1.66(2H，m)，2.68(2H，t)，7.28(2H，d)，7.61(1H，td)，7.74(1H，td)，7.80(1H，d)，7.87(2H，d)，7.92(1H，d)，8.20(1H，d)，8.60(1H，d)實施例A14前述式(Ia)的化合物{1-(4-丁基苄基)異喹啉}的合成將實施例A13的化合物(1.72g，5.95mmol)，一水合肼(836mg，16.7mmol)，及氫氧化鉀(769mg，13.7mmol)加到二乙二醇(8.5ml)中，並在80℃下攪拌1小時，在160℃下攪拌3.5小時，在200℃下攪拌1小時。冷卻至室溫，加冰水並用乙酸乙酯萃取。將其用水洗滌，然後用硫酸鎂乾燥，並濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化得到914mg前述式(Ia)的化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.26-1.36(2H，m)，1.50-1.59(2H，m)，2.53(2H，t)，4.64(2H，s)，7.06(2H，d)，7.19(2H，d)，7.53(1H，td)，7.56(1H，d)，7.64(1H，td)，7.81(1H，d)，8.18(1H，dd，)，8.50(1H，d)實施例A15製備前述式(Ia)的化合物{1-(4-丁基苄基)異喹啉}的另一種方法在氮氣氛和-16℃下，向60％氫化鈉(16mg，0.40mmol)的二甲基甲醯胺(1.8ml)溶液中滴加根據文獻Org.Synth.，VI，115(1988)合成的1-氰基-2-苯甲醯基-1，2-二氫異喹啉(100mg，0.38mmol)的二甲基甲醯胺(3.6ml)溶液和4-正丁基苄基氯化物(70mg，0.38mmol)，並在室溫下進一步攪拌30分鐘。加水，將其濃縮，並向該剩餘物中加入甲苯和水。用水洗滌甲苯層，通過碳酸鉀乾燥，並濃縮。向剩餘物的乙醇(1.6ml)溶液中加入50％的氫氧化鈉水溶液(0.63ml)，並將其回流2小時。濃縮之後，加入甲苯和水。用水洗滌甲苯層，用碳酸鈣乾燥，然後濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化得到18mg前述式(Ia)的化合物。
實施例A16克隆釀酒酵母GWT1基因的白色假絲酵母同源物通過0.75％瓊脂糖凝膠電泳分離經HindIII(TaKaRa)處理16小時的白色假絲酵母染色體組DNA(25μg)，從凝膠中回收大小約3.5～4.5kb的DNA片段。將回收的DNA片段插到pKF3載體(TaKaRa)的HindIII位點中，製備假絲酵母基因組文庫。
利用所製備的文庫，大約10,000個菌落出現在LB/氨苄青黴素板上，採用Colony/Plaque Screen(NEN)膜進行菌落轉移，然後進行雜交。通過隨機引物法，用α-33P-dCTP標記20ng來自SEQ ID NO1的約1.5kb DNA片段，製備探針，採用GeneQuant柱(Amersham-Pharmacia)進行純化。
按下列步驟進行雜交將所述的膜在PerfectHybTM(TOYOBO)溶液中於65℃培養1小時，然後加入上述標記過的探針，並於65℃進一步培養2.5小時。進行下面的洗滌(i)2×SSC，0.05％SDS溶液，在25℃洗滌5分鐘，(ii)2×SSC，0.05％SDS溶液，在25℃洗滌15分鐘，及(iii)0.1×SSC，0.1％SDS溶液，在50℃洗滌20分鐘。將洗滌過的膜用Saran Wrap包裹，在室溫下與X-射線膠片(KONICA)接觸24小時，然後顯影。將對應於曝光點的大腸桿菌菌落分離出來，並進行二次篩選。每個LB/Ampicillin板上將出現約200個分離的菌落，按類似於一次篩選時的方式進行菌落轉移，然後進行雜交。雜交的條件與第一次篩選時的條件相同。
結果，分離出與探針強烈反應的大腸桿菌單菌落。由該菌落收集質粒，測定其所包含的序列，結果發現了與在實施例A9中揭示的序列(SEQ ID NO5)相同的序列(假絲酵母GWT1的序列)，推測其為白色假絲酵母同源物。
實施例A17釀酒酵母GWT1基因的粟酒裂殖糖酵母同源物通過資料庫檢索，發現了與釀酒酵母GWT1基因具有同源性的粟酒裂殖糖酵母基因(SEQ ID NO27，其基因產物的胺基酸序列為SEQ ID NO28)，並將其視為GWT1的粟酒裂殖糖酵母同源物。
實施例A18克隆釀酒酵母GWT1基因的煙麴黴同源物通過遺傳序列分析，本發明人在釀酒酵母，粟酒裂殖糖酵母，及白色假絲酵母的GWT1基因編碼的蛋白質中發現兩個高度保守區(圖7)。根據假定的編碼該保守區胺基酸序列的DNA，設計引物SEQ ID NO29，SEQ ID NO30，及SEQ ID NO31。進行PCR擴增，採用1μl購自STRATAGENE的文庫(煙麴黴cDNA文庫#937053)作為模板，並採用SEQ ID NO29和SEQ IDNO31為引物。此外，採用1μg該擴增的樣品作模板且採用SEQ ID NO29和SEQ ID NO30引物進行嵌套式-PCR，結果證實了大約250kb的單個片段的擴增。測定該片段的序列，獲得與釀酒酵母的GWT1基因具有同源性的新序列(示於SEQ ID NO32中)，並假定其為煙麴黴的同源物。
為了獲得全長cDNA，根據擴增片段的序列設計引物SEQ ID NO33和SEQ ID NO34。此外，還設計了該文庫的基因插入位點以外的引物，即SEQ ID NO35和SEQ ID NO36。採用煙麴黴cDNA文庫為模板，並採用SEQ ID NO33和SEQ ID NO35引物組或SEQ ID NO34和SEQ ID NO36引物組進行PCR，結果證實擴增了大約1kb的DNA片段(兩個引物組都是如此)。測量這些片段的核苷酸序列，得到與釀酒酵母的GWT1基因高度同源的新序列(示於SEQ ID NO1中)。由於該序列的完整基因與釀酒酵母，粟酒裂殖糖酵母，及白色假絲酵母的GWT1基因高度同源，所以強烈暗示該序列為煙麴黴的同源物。
為了克隆煙麴黴的完整同源物，根據所得的序列重新設計下列引物對應於起始密碼子上遊序列的引物SEQ ID NO37，以及對應於終止密碼子下遊序列的引物SEQ ID NO38。用煙麴黴cDNA文庫(STRATAGENE)和煙麴黴染色體組文庫(STRATAGENE)為模板，並採用SEQ ID NO37和SEQ IDNO38為引物進行35輪PCR，結果使用兩種模板都檢測出大約1.6kb的單個擴增片段。直接測序該片段的核苷酸序列，從cDNA文庫中發現了示於SEQ ID NO39中的核苷酸序列，並認為該核苷酸序列編碼包含501個胺基酸的蛋白質，如SEQ ID NO40中所示。此外，從染色體組文庫中發現核苷酸序列SEQ ID NO41，並發現其具有在同一位置上包含77個鹼基對的內含子。
實施例A19克隆釀酒酵母GWT1基因的隱球菌同源物1)資料庫檢索在資料庫中搜索與釀酒酵母GWT1基因具有同源性的基因，結果從史丹福大學的基因組中心的伺服器(http//baggage.stanford.edu/cgi-misc/cneoformans/)上發現了序列502042C05.x1。此外，還從美國俄克拉荷馬大學(Oklahoma University)的伺服器(http//www.genome.ou.edu/cneo_blast.html)上發現了序列b6e06cn.f1。
2)採用染色體組DNA為模板進行的PCR根據序列502042C05.x1構建引物SEQ ID NO42，並根據序列b6e06cn.f1構建引物SEQ ID NO43。當採用隱球菌(新形隱球酵母)的染色體組DNA為模板，利用引物SEQ ID NO42及引物SEQ ID NO43進行PCR擴增時，檢測到大約2kb的擴增片段。當檢測該片段的核苷酸序列時，得到與釀酒酵母的GWT1基因同源的新序列，如SEQ ID NO44中所示。
為了獲得隱球菌GWT1基因起始密碼子上遊的序列，根據序列502042C05.x1構建引物SEQ ID NO45，並根據序列SEQ ID NO44構建引物SEQ ID NO46。當採用隱球菌的染色體組DNA為模板，利用引物SEQID NO45及引物SEQ ID NO46進行PCR擴增時，檢測到大約500bp的擴增片段。當檢測該片段的核苷酸序列時，得到SEQ ID NO47的序列，並且發現該序列與SEQ ID NO44重疊。
3)3′-RACE為了得到隱球菌GWT1基因的3′-末端序列，進行3′-RACE。用銜接子-引物SEQ ID NO48(基於16μg從隱球菌中提取的總RNA)引發，並採用SuperScript II逆轉錄酶(GIBCO/BRL)來進行逆轉錄，並製備隨後將成為RT-PCR模板的單鏈cDNA。採用該單鏈cDNA為模板，並利用引物SEQ IDNO49和SEQ ID NO50進行35個PCR循環，結果檢測到大約1.2kb的擴增片段。當採用直接測序法分析該片段的核苷酸序列時，得到示於SEQ IDNO51中與釀酒酵母GWT1基因同源的新序列。
4)全長染色體組DNA的PCR利用根據SEQ ID NO47設計的引物SEQ ID NO52，以及根據SEQID NO51設計的引物SEQ ID NO53，以隱球菌的染色體組DNA為模板，對三個獨立的製劑進行35個PCR循環。結果，從全部三個獨立的試管中檢測到大約2kb的擴增片段，因此，將它們中的每一個單獨地進行直接測序，並測定它們的全部核苷酸序列。結果，三個獨立的序列完全匹配，得到包含SEQ ID NO54所示的隱球菌全長GWT1基因同源物的序列。
5)cDNA序列的測定將來源於SEQ ID NO54中所示的基因組的隱球菌GWT1基因的序列，與通過3′-RACE得到的cDNA序列51進行比較，結果表明在兩個位置存在內含子。此外，由於ATG起始密碼子之後的開放式讀框不連續，所以暗示存在另一個內含子。因此，從假定的胺基酸序列和剪接供體/受體序列預言cDNA結構，並將引物SEQ ID NO55和SEQ ID NO56設計在預期的外顯子連接處。利用上述引物，並以來源於隱球菌的單鏈cDNA為模板，進行35個循環的PCR，結果證實擴增了大約1.4kb的片段。在採用直接測序法測定該片段的核苷酸序列時，得到序列SEQ ID NO57，並與SEQ ID NO54進行比較，暗示隱球菌GWT1基因的cDNA序列具有SEQ ID NO58的結構。由於該序列在某些區域顯示出與釀酒酵母，粟酒裂殖糖酵母，白色假絲酵母，及煙麴黴的GWT1基因的高度同源性，所以強烈暗示該序列為隱球菌的同源物。
實施例A20賦予對前述式(Ia)所示化合物的抗性的遺傳突變用甲磺酸乙酯處理因引入pRLW63T而以溶菌酶基因為報告基因的釀酒酵母LW63菌株，然後在前述式(Ia)化合物的濃度為1.56，3.13，及6.25μg/ml的SD培養基中於37℃培養3天，得到5個抗性突變菌株(R1～R5)。在它們當中，發現R1突變菌株和R5突變菌株因為單個基因的突變而獲得了針對前述式(Ia)化合物的特異性抗性。為了確認這兩種突變菌株在GWT1基因上是否具有突變，從兩種突變菌株中提取染色體組DNA，並測定GWT1基因部分的核苷酸序列。結果，在R1突變菌株中，1213位的鳥嘌呤已變異為腺嘌呤。此外，在R5突變菌株中，418位的鳥嘌呤已變異為腺嘌呤。因此，這表明，在R1突變菌株中，第405個胺基酸(異亮氨酸)已經變成纈氨酸，而在R5突變菌株中，第140個胺基酸(甘氨酸)已經變成精氨酸。
下一步，為了確認這些突變是否獲得對前述式(Ia)化合物的特異抗性的原因，採用來源於這兩種突變菌株的染色體組DNA作為模板，並採用引物SEQ ID NO60和61分離突變的GWT1基因(R1或R5)。同時，分離GWT1啟動子區(SEQ ID NO62)和終止子區(SEQ ID NO63)，將GWT1基因啟動子，突變的GWT1基因ORF，以及GWT1基因終止子插到pRS316載體中，並構建表達突變的GWT1基因的單個拷貝的質粒(pRS316GWT1-R1，pRS316GWT1-R5)。將其引入僅僅單個GWT1基因拷貝被破壞的二倍體菌株(WDG1)中。通過在孢子形成培養基上培養菌落，形成孢子，並通過進行四分體分析，得到其中染色體上的GWT1基因已被破壞而且攜帶前述質粒的克隆。當將其在包含前述式(Ia)化合物的培養基中培養時，觀察到了對前述式(Ia)化合物的抗性，類似於原始的R1突變菌株和R5突變菌株。綜上所述說明，通過發生在GWT1基因上的伴隨胺基酸突變的點突變，賦予了對前述式(Ia)化合物的特異性抗性，並且強烈暗示該化合物通過直接與GWT1蛋白質的結合而抑制GWT1蛋白的功能。
本發明的化合物可以通過例如下列方法來製備。但是，這些實施例僅用於說明，任何情況下，本發明的化合物都不僅限於在下述具體實例中製備的那些化合物。
實施例B1
1-(氯甲基)-4-正丁基苯 將亞硫醯氯(2.5ml，34mmol)加到4-正丁基苄基醇(2.0g，12mmol)的乙醚(25ml)溶液中，並將該混合物在室溫下攪拌3小時。濃縮該混合物之後，通過用苯共沸蒸餾除去過量的亞硫醯氯得到標題化合物(2.3g)。該化合物無需純化即可用於下列反應。
實施例B21-(4-丁基苄基)異喹啉 在氮氣氛和-16℃下，將根據Org.Synth.，VI，115(1988)合成的1-氰基-2-苯甲醯基-1，2-二氫異喹啉(100mg，0.38mmol)與4-正丁基苄基氯(70mg，0.38mmol)的二甲基甲醯胺(3.6ml)溶液滴加到60％氫化鈉(16mg，0.40mmol)的二甲基甲醯胺(1.8ml)溶液中，並將該混合物在室溫下攪拌30分鐘。加水，將該混合物在減壓下濃縮，向剩餘物中加入甲苯和水。用水洗滌甲苯層，用碳酸鉀乾燥，然後減壓濃縮。將50％氫氧化鈉水溶液(0.63ml)加到剩餘物的乙醇(1.6ml)溶液中。將該混合物加熱回流2小時並濃縮，然後加入甲苯和水。用水洗滌甲苯層，用碳酸鈣乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化得到標題化合物(18mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.26-1.36(2H，m)，1.50-1.59(2H，m)，2.53(2H，t)，4.64(2H，s)，7.06(2H，d)，7.19(2H，d)，7.53(1H，td)，7.56(1H，d)，7.64(1H，td)，7.81(1H，d)，8.18(1H，dd)，8.50(1H，d)實施例B3(4-丁基苯基)(1-異喹啉基)酮 在氮氣氛下，將1-溴-4-丁基苯(2.29ml，13mmol)和作為引發劑的催化劑量的1，2-二溴乙烷加到鎂(338mg，14mmol)與四氫呋喃(6.5ml)的混合溶液中，並將該混合物回流攪拌10分鐘。將該混合物冷卻至0℃，加入1-異喹啉腈(1.0g，6.5mmol)的四氫呋喃溶液，並將該混合物在室溫下攪拌1小時，然後在70℃下攪拌3小時。其後，將該混合物再次冷卻至0℃，加入濃鹽酸(2.6ml)和甲醇(11ml)，並將該混合物加熱回流2小時。將該混合物濃縮之後，將剩餘物溶解於5N氫氧化鈉和甲苯，並通過硅藻土過濾。分出濾液的甲苯層，用水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化得到標題化合物(1.7g)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.93(3H，t)，1.32-1.43(2H，m)，1.58-1.66(2H，m)，2.68(2H，t)，7.28(2H，d)，7.61(1H，td)，7.74(1H，td)，7.80(1H，d)，7.87(2H，d)，7.92(1H，d)，8.20(1H，d)，8.60(1H，d)實施例B4可供選擇的製備1-(4-丁基苄基)異喹啉的方法將實施例B3的化合物(1.7g，6.0mmol)，一水合肼(836mg，17mmol)，及氫氧化鉀(769mg，14mmol)加到二乙二醇(8.5ml)中，並將該混合物在80℃下攪拌1小時，在160℃下攪拌3.5小時，然後在200℃下攪拌1小時。將該混合物冷卻至室溫，加入冰水，並用乙酸乙酯進行萃取。萃取物用水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，並減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化得到標題化合物(914mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.26-1.36(2H，m)，1.50-1.59(2H，m)，2.53(2H，t)，4.64(2H，s)，7.06(2H，d)，7.19(2H，d)，7.53(1H，td)，7.56(1H，d)，7.64(1H，td)，7.81(1H，d)，8.18(1H，dd)，8.50(1H，d)實施例B51-(4-乙基苄基)異喹啉 利用對乙基苄基氯，按與實施例B2相同的方式得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.18(3H，t)，2.57(2H，q)，4.64(2H，s)，7.08(2H，d)，7.20(2H，d)，7.50-7.55(2H，m)，7.61-7.65(1H，m)，7.80(1H，d)，8.16-8.18(1H，m)，8.49(1H，d)
實施例B6(4-丙基苯基)甲醇 將硼氫化鈉(2.9g，76mmol)與濃硫酸的乙醚溶液(通過將2.0ml濃硫酸加到4.0ml的乙醚中而製備)滴加到已經冷卻至0℃的對正丙基苯甲酸(5.0g，32mmol)的四氫呋喃(20ml)溶液中，同時保持反應體系的溫度低於20℃，然後將該混合物在室溫下攪拌3小時。待混合物在冰上冷卻之後，加入甲醇和1N氫氧化鈉，並用乙酸乙酯萃取該混合物。乙酸乙酯層用飽和鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮，得到標題化合物(4.33g)。該化合物無需純化即可用於下列反應。
實施例B71-(氯甲基)-4-丙基苯 按與實施例B1相同的方式，通過處理實施例B6的化合物，得到標題化合物。該化合物無需純化即可用於下列反應。
實施例B81-(4-丙基苄基)異喹啉 按與實施例B2相同的方式，通過處理實施例B7的化合物得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.90(3H，t)，1.55-1.61(2H，m)，2.51(2H，t)，4.64(2H，s)，7.06(2H，d)，7.19(2H，d)，7.51-7.55(2H，m)，7.61-7.65(1H，m)，7.81(1H，d)，8.17(1H，dd)，8.49(1H，d)實施例B9(4-戊基苯基)甲醇 按與實施例B6相同的方式，通過還原4-正戊基苯甲酸，得到標題化合物。
實施例B101-(氯甲基)-4-戊基苯 按與實施例B1相同的方式，通過處理實施例B9的化合物，得到標題化合物。該化合物無需純化即可用於下列反應。
實施例B111-(4-戊基苄基)異喹啉 按與實施例B2相同的方式，通過實施例B10的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.86(3H，t)，1.26-1.33(4H，m)，1.52-1.59(2H，m)，2.52(2H，t)，4.64(2H，s)，7.06(2H，d)，7.18(2H，d)，7.50-7.55(2H，m)，7.61-7.65(1H，m)，7.80(1H，d)，8.17(1H，dd)，8.49(1H，d)實施例B12(4-己基苯基)甲醇 按與實施例B6相同的方式，通過還原4-正己基苯甲酸，得到標題化合物。該化合物無需純化即可用於下列反應。
實施例B131-(氯甲基)-4-己基苯 按與實施例B1相同的方式，通過處理實施例B12的化合物，得到標題化合物。該化合物無需純化即可用於下列反應。
實施例B141-(4-己基苄基)異喹啉 按與實施例B2相同的方式，通過處理的實施例B13化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.86(3H，t)，1.26-1.31(6H，m)，1.51-1.58(2H，m)，2.52(2H，t)，4.63(2H，s)，7.06(2H，d)，7.18(2H，d)，7.50-7.55(2H，m)，7.61-7.65(1H，m)，7.80(1H，d)，8.17(1H，dd)，8.49(1H，d)實施例B151-(4-異丙基苄基)異喹啉 按與實施例B2相同的方式，通過處理對異丙基苄基氯，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.19(6H，d)，2.80-2.87(1H，m)，4.64(2H，s)，7.11(2H，d)，7.21(2H，d)，7.51-7.56(2H，m)，7.61-7.65(1H，m)，7.81(1H，d)，8.19(1H，dd)，8.50(1H，d)實施例B161-[4-(叔丁基)苄基]異喹啉 按與實施例B2相同的方式，通過處理4-叔丁基苄基氯，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.26(9H，s)，4.64(2H，s)，7.22(2H，d)，7.27(2H，d)，7.52-7.56(2H，m)，7.62-7.66(1H，m)，7.81(1H，d)，8.19(1H，dd)，8.50(1H，d)
實施例B17(4-異丁基苯基)甲醇 按與實施例B6相同的方式，通過還原4-異丁基苯甲酸，得到標題化合物。該化合物無需進一步純化即可用於下列反應。
實施例B181-(氯甲基)-4-異丁基苯 按與實施例B1相同的方式，通過處理實施例B17的化合物，得到標題化合物。該化合物無需進一步純化即可用於下列反應。
實施例B191-(4-異丁基苄基)異喹啉 按與實施例B2相同的方式，通過處理實施例B18的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.86(6H，d)，1.75-1.83(1H，m)，2.39(2H，d)，4.66(2H，s)，7.02(2H，d)，7.18(2H，d)，7.52-7.58(2H，m)，7.63-7.67(1H，m)，7.82(1H，d)，8.18(1H，d)，8.50(1H，d)實施例B201-(氯甲基)-4-(三氟甲基)苯 按與實施例B1相同的方式，通過處理4-三氟甲基苄基醇，得到標題化合物。該化合物無需進一步純化即可用於下列反應。
實施例B211-[4-(三氟甲基)苄基]異喹啉 按與實施例B2相同的方式，通過處理實施例B20的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)4.73(2H，s)，7.39(2H，d)，7.51(2H，d)，7.54-7.60(2H，m)，7.65-7.69(1H，m)，7.84(1H，d)，8.09-8.10(1H，m)，8.51(1H，d)實施例B221-(氯甲基)-4-(三氟甲氧基)苯 按與實施例B1相同的方式，通過處理4-三氟甲氧基苄基醇，得到標題化合物。該化合物無需進一步純化即可用於下列反應。
實施例B231-[4-(三氟甲氧基)苄基]異喹啉 按與實施例B2相同的方式，通過處理實施例B22的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)4.67(2H，s)，7.10(2H，d)，7.27(2H，d)，7.54-7.59(2H，m)，7.64-7.68(1H，m)，7.84(1H，d)，8.11(1H，dd)，8.50(1H，d)實施例B241-(氯甲基)-2-碘苯 將甲磺醯氯(2.0ml，29mmol)和三乙胺(3.6ml，26mmol)加到冷卻至0℃的鄰碘苄基醇(5.0g，21mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液中，並將混合物在該溫度下攪拌19小時。加入5％的碳酸氫鈉水溶液，並用二氯甲烷萃取所得的混合物。將二氯甲烷層用無水硫酸鎂乾燥並減壓濃縮，得到標題化合物(5.34g)。
實施例B251-(2-碘苄基)異喹啉 按與實施例B2相同的方式，通過處理實施例B24的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)4.74(2H，s)，6.81-6.84(1H，m)，6.87-6.92(1H，m)，7.11-7.15(1H，m)，7.55-7.57(1H，m)，7.60(1H，d)，7.64-7.68(1H，m)，7.83-7.86(1H，m)，7.89-7.91(1H，m)，8.00-8.02(1H，m)，8.50(1H，d)實施例B261-[2-(2-苯基-1-乙炔基)苄基]異喹啉 在氮氣氛下，將四(三苯基膦)合鈀(58mg，0.05mmol)與乙炔基苯(204mg，2.0mmol)的吡咯烷(1.5ml)溶液加到實施例B25的化合物(345mg，1.07mmol)的吡咯烷(1.5ml)溶液中，並將該混合物在80℃下攪拌3小時。將該混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋，用飽和的氯化銨水溶液洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(280mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)4.95(2H，s)，6.98-7.06(2H，m)，7.10-7.21(2H，m)，7.31-7.35(3H，m)，7.48-7.51(3H，m)，7.57-7.65(2H，m)，7.82(1H，d)，8.25(1H，d)，8.52(1H，d)實施例B27
1-(2-苯基乙基苄基)異喹啉 將鈀-碳(10％，230mg)加到實施例B26的化合物(280mg，0.88mmol)的四氫呋喃(30ml)溶液中，並在氫氣氛(1atm)下將該混合物在室溫下攪拌3小時。濾除催化劑並減壓濃縮所得濾液。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(162mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)2.90-2.94(2H，m)，3.07-3.10(2H，m)，4.67(2H，s)，6.80(1H，d)，7.02-7.06(1H，m)，7.15-7.30(7H，m)，7.49-7.53(1H，m)，7.58(1H，d)，7.64-7.68(1H，m)，7.84(1H，d)，7.95(1H，d)，8.50(1H，d)實施例B281-{2-[4-(四氫-2H-2-吡喃氧基)-1-丁炔基]苄基}-異喹啉 在氮氣氛下，將四(三苯基膦)合鈀(58mg，0.05mmol)與2-(3-丁炔氧基)-四氫-2H-吡喃(208mg，2.0mmol)的吡咯烷(1.5ml)溶液加到實施例B25的化合物(345mg，1.07mmol)的吡咯烷(1.5ml)溶液中，並將該混合物在室溫下攪拌4天，且於80℃下攪拌30分鐘。將該混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋，用飽和的氯化銨水溶液洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(277mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.42-1.60(4H，m)，1.64-1.68(1H，m)，1.75-1.81(1H，m)，2.76-2.80(2H，m)，3.46-3.51(1H，m)，3.60-3.66(1H，m)，3.85-3.95(2H，m)，4.64-4.66(1H，m)，4.85(2H，s)，6.95-6.98(1H，m)，7.05-7.13(2H，m)，7.44-7.46(1H，m)，7.49-7.53(1H，m)，7.56(1H，d)，7.60-7.65(1H，m)，7.80-7.82(1H，m)，8.15-8.18(1H，m)，8.49-8.51(1H，m)實施例B294-[2-(1-異喹啉基甲基)苯基]-3-丁炔-1-醇 待將實施例B28的化合物(200mg，0.54mmol)冷卻至0℃之後，加入鹽酸-甲醇溶液(10％，5ml)，並將該混合物攪拌15分鐘。加入飽和的碳酸氫鈉水溶液，並用乙酸乙酯萃取該混合物。乙酸乙酯層用無水硫酸鎂乾燥並減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(86mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)2.72(2H，t)，3.53-3.60(1H，brs)，3.85(2H，t)，4.85(2H，s)，7.12-7.15(2H，m)，7.22-7.24(1H，m)，7.42-7.44(1H，m)，7.55-7.59(2H，m)，7.63-7.67(1H，m)，7.81(1H，d)，8.30(1H，m)，8.46(1H，m)實施例B304-[2-(1-異喹啉基甲基)苯基]-1-丁醇 將鈀-碳(10％，10mg)加到實施例B29的化合物(44mg，0.15mmol)的四氫呋喃(5ml)溶液中，並在氫氣氛下(1atm)將該混合物在室溫下攪拌1小時。濾除催化劑之後，將濾液減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(18mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.61-1.75(4H，m)，2.33(1H，brs)，2.77(2H，t)，3.67(2H，t)，4.70(2H，s)，6.91(1H，d)，7.02-7.06(1H，m)，7.12-7.16(1H，m)，7.19-7.21(1H，m)，7.50-7.55(1H，m)，7.57(1H，d)，7.63-7.67(1H，d)，7.83(1H，d)，8.09(1H，d)，8.47(1H，d)實施例311-溴-2-(氯甲基)苯 按與實施例B1相同的方式，通過處理溴苄基醇，得到標題化合物。
實施例B321-(4-溴苄基)異喹啉 按與實施例B2相同的方式，通過處理實施例B31的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)4.61(2H，s)，7.14-7.16(2H，m)，7.35-7.39(2H，m)，7.52-7.58(2H，m)，7.63-7.67(1H，m)，7.82(1H，d)，8.07-8.10(1H，m)，8.49(1H，d)實施例B33(E)-3-[4-(異喹啉基甲基)苯基]-2-丙酸乙酯 在氮氣氛下，將三(2-甲基苯基)膦(20mg，0.067mmol)，乙酸鈀(II)(7.5mg，0.034mmol)，及三乙胺(70μl，0.50mmol)加到實施例B32的化合物(100mg，0.34mmol)與丙酸乙烯酯(73μl，0.67mmol)的二甲基甲醯胺(1.0ml)溶液中，並將該混合物在100℃下攪拌4小時。待將該混合物冷卻至室溫之後，加水，並用乙酸乙酯萃取該混合物。有機層用水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(74mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.32(3H，t)，4.24(2H，q)，4.69(2H，s)，6.36(1H，d)，7.29(2H，d)，7.42(2H，d)，7.53-7.67(4H，m)，7.83(1H，d)，8.11-8.13(1H，m)，8.50(1H，d)實施例B343-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]丙酸乙酯 將鈀-碳(10％，20mg)加到實施例B33的化合物(71mg，0.22mmol)的甲醇(5.0ml)溶液中，並在大氣壓大小的氫氣氛下，將該反應混合物於室溫攪拌5.5小時。從反應混合物中濾除催化劑之後，將濾液減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(52mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.20(3H，t)，2.56(2H，t)，2.88(2H，t)，4.09(2H，q)，4.64(2H，s)，7.09(2H，d)，7.20(2H，d)，7.51-7.57(2H，m)，7.62-7.66(1H，m)，7.82(1H，d)，8.15(1H，dd)，8.50(1H，d)實施例B353-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-1-丙醇 在氮氣氛下，將氫化鋁鋰(6mg，0.16mmol)加到冷卻至0℃的四氫呋喃(1.0ml)中。進一步加入實施例B34的化合物(46mg，0.14mmol)的四氫呋喃(1.0ml)溶液，並將反應混合物在該溫度下攪拌3小時。向反應混合物中加入甲醇與水(9∶1，1.0ml)的混合溶液，進一步加入飽和的氯化銨水溶液，然後用氯仿萃取該混合物。有機層用無水硫酸鎂乾燥並減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(22mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.30-1.35(1H ，brs)，1.81-1.88(2H，m)，2.64(2H，t)，3.62-3.65(2H，m)，4.64(2H，s)，7.09(2H，d)，7.20(2H，d)，7.51-7.57(2H，m)，7.62-7.66(1H，m)，7.81(1H，d)，8.16-8.18(1H，m)，8.49(1H，d)實施例361-異喹啉基(4-甲氧基苯基)酮 在氮氣氛下，將4-溴苯甲醚(15.3ml，122mmol)和催化劑量的1，2-二溴乙烷(引發劑)加到鎂(3059mg，125.8mmol)與四氫呋喃(20ml)的混合溶液中，並在加熱回流下攪拌反應混合物45分鐘。將該混合物冷卻至0℃，並向其中滴加1-異喹啉腈(10.78g，69.9mmol)的四氫呋喃(30ml)溶液，且將該混合物在室溫下攪拌2小時。將反應混合物在冰上冷卻，加入濃鹽酸(24ml)和甲醇(120ml)，並將該混合物加熱回流1.5小時。在冰上冷卻之後，通過加入氫氧化鈉水溶液將混合物的pH調整至8，用乙醚萃取，用飽和鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(15.87g)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)3.88(3H，s)，6.95(2H，d)，7.61(1H，dd)，7.74(1H，dd)，7.76(1H，d)，7.85(2H，d)，8.17(1H，dd)，8.60(1H，d)。
實施例B371-異喹啉基(4-甲氧基苯基)甲醇 將硼氫化鈉(1855mg)加到冰冷卻的實施例B36的化合物(8608mg)的乙醇(170ml)溶液中，並將該混合物在室溫下攪拌35分鐘。進一步加入硼氫化鈉(957mg)，並將反應混合物在40℃下攪拌40分鐘。將反應混合物減壓濃縮，加水，並用乙醚萃取該混合物。有機層用水和飽和鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。所得標題化合物(7881mg)無需進一步純化即可用於下面的反應。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)3.66(3H，s)，6.30-6.32(1H，brs)，6.81(2H，d)，7.28(2H，d)，7.54(1H，dd)，7.68(1H，dd)，7.76(1H，d)，7.94(1H，d)，8.37(1H，d)，8.47(1H，d)。
在NMR光譜中未觀察到羥基的質子。
實施例B38
1-異喹啉基(4-甲氧基苯基)乙酸甲酯 將乙酸酐(20ml)加到實施例B37的化合物(7881mg)的吡啶(100ml)溶液中，並將反應混合物在50℃下攪拌4小時。將反應混合物減壓濃縮，並用甲苯共沸蒸餾。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(8.79g)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)2.22(3H，s)，3.76(3H，s)，6.84(2H，d)，7.39(2H，d)，7.54(1H，dd)，7.56(1H，s)，7.60(1H，d)，7.64(1H，dd)，7，82(1H，d)，8.19(1H，d)，8.57(1H，d)。
實施例B391-(4-甲氧基苄基)異喹啉 將鈀-碳(10％，4.0g)加到實施例B38的化合物(8.79g)的甲醇(150ml)溶液中，並在大氣壓大小的氫氣氛下，將該混合物在室溫下攪拌5.5小時。通過硅藻土濾除催化劑，並將濾液減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(4.48g)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)3.74(3H，s)，4.61(2H，s)，6.79(2H，d)，7.21(2H，d)，7.53(1H，dd)，7.56(1H，d)，7.63(1H，dd)，7.80(1H，d)，8.16(1H，d)，8.49(1H，d)。
實施例B404-(1-異喹啉基甲基)苯酚 將氫溴酸水溶液(47％，40ml)加到實施例B39的化合物(2185mg)中，並將該反應混合物加熱回流14小時。將反應混合物冷卻至室溫，進一步在冰上冷卻，用50％的氫氧化鈉水溶液中和，並用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯層用水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。所得粉末經石油醚洗滌之後，得到標題化合物(1822mg)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)4.48(2H，s)，6.61(2H，d)，7.07(2H，d)，7.60(1H，dd)，7.68(1H，d)，7.71(1H，dd)，7.92(1H，d)，8.27(1H，d)，8.41(1H，d)，9.19(1H，brs)。
實施例B414-(1-異喹啉基甲基)三氟甲磺酸苯酯 將三氟甲磺酸酐(0.55ml)滴加到冰冷的實施例B40的化合物(513mg)的吡啶(10ml)溶液中，並將反應混合物在該溫度下攪拌45分鐘。加冰之後，用乙醚萃取反應混合物。有機層用水和飽和鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(546mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)4.69(2H，s)，7.16(2H，d)，7.35(2H，d)，7.57(1H，dd)，7,60(1H，d)，7.68(1H，dd)，7.85(1H，d)，8.09(1H，d)，8.50(1H，d)。
實施例B421-[4-(2-苯基-1-乙炔基)苄基]異喹啉 將苯乙炔(53μl)，乙酸鈀(9mg)，1，1′-二(二苯基膦)二茂鐵(67mg)，碘化銅(I)(3mg)，氯化鋰(20mg)，及三乙胺(50μl)加到已經脫氣並置於氮氣中的實施例B41的化合物(88mg)的N，N-二甲基甲醯胺(2.0ml)溶液中，將該混合物在80℃下攪拌8小時。待混合物冷卻至室溫之後，加水，並用乙酸乙酯萃取該混合物。有機層用水和飽和鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(53mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)4.69(2H，s)，7.12-7.32(3H，m)，7.25(2H，d)，7.42(2H，d)，7.43-7.52(2H，m)，7.54(1H，dd)，7.58(1H，d)，7.65(1H，dd)，7.83(1H，d)，8.10(1H，d)，8.51(1H，d)。
實施例B431-(4-苯乙基苄基)異喹啉 將鈀-碳催化劑(10％，20mg)加到實施例B42的化合物(45mg)的四氫呋喃(2ml)溶液中，並在大氣壓大小的氫氣氛下，將該混合物於室溫下攪拌2小時。通過硅藻土濾除催化劑，並將濾液減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(23mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)2.78-2.90(4H，m)，4.64(2H，s)，7.07(2H，d)，7.10-7.20(5H，m)，7.22(2H，d)，7.53(1H，dd)，7.55(1H，d)，7.63(1H，dd)，7.80(1H，d)，8.15(1H，d)，8.49(1H，d)。
實施例B441-[4-(4-苯基-1-丁炔基)苄基]異喹啉 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物和4-苯基-1-丁炔，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)2.65(2H，t)，2.88(2H，t)，4.68(2H，s)，7.12-7.40(9H，m)，7.50-7.70(3H，m)，7.80-7.88(1H，m)，8.00-8.10(1H，m)，8.48-8.51(1H，m)。
實施例B451-[4-(4-苯基-1-丁基)苄基]異喹啉 按與實施例B43相同的方式，通過處理實施例B44的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.55-1.80(4H，m)，2.50-2.65(4H，m)，4.68(2H，s)，7.00-7.30(9H，m)，7.52(1 H，dd)，7.56(1H，d)，7.63(1H，dd)，7.81(1H，d)，8.15(1H，d)，8.50(1H，d)。
實施例461-{4-[4-(四氫-2H-2-吡喃氧基)-1-丁炔基]苄基}-異喹啉 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物和2-(3-丁炔氧基)四氫-2H-吡喃，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.48-1.90(6H，m)，2.67(2H，t)，3.49-3.55(1H，m)，3.60(1H，dd)，3.65-3.94(2H，m)，4.66(2H，s)，4.65-4.70(1H，m)，7.14-7.20(2H，m)，7.23-7.30(2H，m)，7.53(1H，dd)，7.58(1H，d)，7.65(1H，dd)，7.82(1H，d)，8.10(1H，d)，8.49(1H，d)。
實施例B474-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-3-丁炔-1-醇 將實施例B46的化合物(1048mg)溶解於10％的鹽酸-甲醇溶液(50ml)，並將該反應混合物在室溫下攪拌1.5小時。將反應混合物在冰上冷卻，加入飽和的碳酸氫鈉水溶液，並用乙酸乙酯萃取所得的混合物。有機層用水和飽和鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(666mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)2.65(2H，t)，3.77(2H，t)，4.65(2H，s)，7.18(2H，d)，7.29(2H，d)，7.52(1H，dd)，7.57(1H，d)，7.64(1H，dd)，7.81(1H，d)，8.07(1H，d)，8.49(1H，d)。
在NMR光譜中未觀察到羥基的質子。
實施例B484-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-1-丁醇 按與實施例B43相同的方式，通過處理實施例B47的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.50-1.70(4H，m)，2.57(2H，t)，3.62(2H，t)，4.64(2H，s)，7.06(2H，d)，7.18(2H，d)，7.53(1H，dd)，7.55(1H，d)，7.63(1H，dd)，7.80(1H，d)，8.16(1H，d)，8.49(1H，d)。
在NMR光譜中未觀察到羥基的質子。
實施例491-[4-(3-環戊基-1-丙炔基)苄基]異喹啉 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與3-環戊基-1-丙炔，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.25-1.35(2H，m)，1.45-1.70(6H，m)，1.75-1.85(2H，m)，2.05-2.13(1H，m)，4.65(2H，s)，7.17(2H，d)，7.27(2H，d)，7.51(1H，dd)，7.56(1H，d)，7.64(1H，dd)，7.81(1H，d)，8.08(1H，d)，8.49(1H，d)。
實施例B50
1-[4-(3-環戊基丙基)苄基]異喹啉 按與實施例B43相同的方式，通過處理實施例B49的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.25-1.74(13H，m)，2.49-2.54(2H，m)，4.64(2H，s)，7.06(2H，d)，7.18(2H，d)，7.53(1H，dd)，7.55(1H，d)，7.63(1H，dd)，7.80(1H，d)，8.17(1H，d)，8.49(1H，d)。
實施例B514-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-2-甲基-3-丁炔-2-醇 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與2-甲基-3-丁炔-2-醇，得到標題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)1.35(1H，s)，1.40(6H，s)，4.62(2H，s)，7.20-7.30(4H，m)，7.61(1H，dd)，7.71(1H，d)，7.69-7.76(1H，m)，7.95(1H，d)，8.26(1H，d)，8.42(1H，d)。
實施例B524-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-2-甲基-2-丁醇 按與實施例B43相同的方式，通過處理實施例B51的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.25(6H，s)，1.70-1.77(2H，m)，2.60-2.67(2H，m)，4.64(2H，s)，7.08(2H，d)，7.19(2H，d)，7.53(1H，dd)，7.55(1H，d)，7.63(1H，dd)，7.80(1H，d)，8.16(1H，d)，8.49(1H，d)。
在NMR光譜中未觀察到羥基的質子。
實施例B531-[4-(3-甲氧基-1-丙炔基)苄基]異喹啉 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與甲基丙炔基醚，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)3.42(3H，s)，4.29(2H，s)，4.66(2H，s)，7.21(2H，d)，7.34(2H，d)，7.54(1H，dd)，7.58(1H，d)，7.65(1H，dd)7.82(1H，d)，8.10(1H，d)8.49(1H，d)。
實施例B541-[4-(3-甲氧基丙基)苄基]異喹啉 按與實施例B43相同的方式，通過處理實施例B53的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.78-1.87(2H，m)，2.06(2H，t)，3.31(3H，s)，3.35(2H，t)，4.64(2H，s)，7.07(2H，d)，7.22(2H，d)，7.53(1H，dd)，7.55(1H，d)，7.64(1H，dd)，7.81(1H，d)，8.17(1H，d)，8.49(1H，d)。
實施例B551-{4-[2-(2-吡啶基)-1-乙炔基]苄基}異喹啉 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與2-乙炔基吡啶，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)4.71(2H，s)，7.20-7.25(2H，m)，7.29(2H，d)，7.48-7.53(1H，m)，7.51(2H，d)，7.57(1H，dd)，7.61(1H，d)，7.67(1H，dd)，7.85(1H，d)，8.13(1H，d)，8，53(1H，d)，8.59-8.63(1H，m)。
實施例B561-{4-[2-(2-吡啶基)乙基]苄基}異喹啉 按與實施例B43相同的方式，通過處理實施例B55的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)2.94-3.06(4H，m)，4.64(2H，s)，7.04(1H，d)，7.09(1H，dd)，7.09(2H，d)，7.18(2H，d)，7.53(1H，ddd)，7.54(1H，dd)，7.55(1H，d)，7.64(1H，d)，7.81(1H，d)，8.15(1H，d)，8.49(1H，d)，8.53(1H，dd)。
實施例B571-{4-[2-(3-吡啶基)-1-乙炔基]苄基}異喹啉 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與3-乙炔基吡啶，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)4.69(2H，s)，7.27(2H，d)，7.31(1H，dd)，7.43(2H，d)，7.55(1H，dd)，7.59(1H，d)，7.66(1H，dd)，7.82(1H，ddd)，7.83(1H，d)，8.10(1H，d)，8.51(1H，d)，8.60(1H，dd)，8.77(1H，d)。
實施例B581-{4-[2-(3-吡啶基)乙基]苄基}異喹啉 按與實施例B43相同的方式，通過處理實施例B57的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)2.80-2.90(4H，m)，4.65(2H，s)，7.04(2H，d)，7.15(1H，dd)，7.19(2H，d)，7.39(1H，dd)，7.54(1H，dd)，7.56(1H，d)，7.64(1H，dd)，7.81(1H，d)，8.15(1H，d)，8.40(1H，d)，8.42(1H，d)，8.49(1H，d)。
實施例B59N-(2-丙炔基)乙醯胺 將吡啶(16.3ml)和乙酸酐(10.4ml)加到冰冷卻的丙炔基胺(3023mg)的二氯甲烷(30ml)溶液中，並將該反應混合物在室溫下攪拌1小時。將反應混合物倒在冰上，用乙酸乙酯萃取，依次用1N鹽酸，飽和的碳酸氫鈉水溶液，及飽和的鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後通過矽膠進行過濾。將濾液減壓濃縮，得到標題化合物(743mg)。所得化合物無需進一步純化即可用於下面的反應。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)1.79(3H，s)，3.07(1H，t)，3.81(2H，d)，8.25(1H，brs)。
實施例B60N-{3-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-2-丙炔基}乙醯胺 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與實施例B59的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)1.79(3H，s)，4.04(2H，s)，4.61(2H，s)，7.45-7.68(4H，m)，7.68-7.75(2H，m)，7.90-8.00(1H，m)，8.25-8.38(2H，m)，8.40-8.45(1H，m)。
實施例B61N-{3-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]丙基}乙醯胺 按與實施例B43相同的方式，通過處理實施例B60的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.95(3H，s)，1.74-1.84(2H，m)，2.55(2H，t)，3.25(2H，dt)，4.68(2H，s)，7.10(2H，d)，7.18(2H，d)，7.20-7.28(1H，m)，7.50-7.58(2H，m)，7.60-7.68(1H，m)，7.75-7.85(1H，m)，8.10-8.16(1H，m)，8.45-8.50(1H，m)。
實施例B62N-(2-丙炔基)甲磺醯胺 將三乙胺(9.77ml)加到冰冷卻的丙炔基胺(3023mg)的二氯甲烷(30ml)溶液中。滴加甲磺醯氯(5.19ml)之後，將反應混合物在該溫度下攪拌3小時，溫暖至室溫，進一步攪拌2小時。將冰架的反應混合物中，所的混合物用乙酸乙酯萃取，用飽和鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，並減壓濃縮。將剩餘物溶解於甲醇(120ml)，加入碳酸鉀(11.7g)，並將反應混合物在室溫下攪拌3小時。將反應混合物減壓濃縮，在冰冷卻下用稀鹽酸中和，然後用乙酸乙酯萃取。萃取液用飽和鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(6.67g)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)2.39(1H，t)，3.10(3H，s)，3.99(2H，dd)，4.60(1H，brs)。
實施例B63N-{3-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-2-丙炔基}-甲磺醯胺 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與實施例B62的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)2.97(3H，s)，4.00(2H，d)，4.63(2H，s)，7.25-7.37(4H，m)，7.57(1H，t)，7.62(1H，dd)，7.71(1H，d)，7.73(1H，dd)，7.94(1H，d)，8.28(1H，d)，8.42(1H，d)。
實施例B64N-{3-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]丙基}甲磺醯胺 按與實施例B43相同的方式，通過處理實施例B63的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.80-1.90(2H，m)，2.62(2H，t)，2.89(3H，s)，3.11(2H，dt)，4.25(1H，brs)，4.64(2H，s)，7.05(2H，d)，7.20(2H，d)，7.50(1H，dd)，7.56(1H，d)，7.63(1H，dd)，7.81(1H，d)，8.15(1H，d)，8.49(1H，d)。
實施例B651-{4-[3-(乙基磺醯基)-1-丙炔基]苄基}異喹啉 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與丙炔基乙基硫化物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.30(3H，t)，2.73(2H，q)，3.47(2H，s)，4.67(2H，s)，7.20-7.32(4H，m)，7.52(1H，dd)，7.57(1H，d)，7.64(1H，dd)，7.81(1H，d)，8.08(1H，d)，8.49(1H，d)。
實施例B66N-(2-丙炔基)氨基甲酸叔丁酯 將焦碳酸二叔丁酯(di-t-butyl-dicarbonate)(10.84g)的四氫呋喃(20ml)溶液滴加到冰冷卻的丙炔基胺(3040mg)的四氫呋喃(20ml)溶液中，將混合物的溫度逐步升高至室溫，並將反應混合物攪拌20小時。加水之後，將反應混合物用乙酸乙酯萃取，用飽和鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮得到標題化合物(9.34g)。所得化合物無需進一步純化即可用於下面的反應。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)1.36(9H，s)，3.04(1H，t)，3.62-3.70(2H，m)，7.20-7.30(1H，m)實施例B67N-{3-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-2-丙炔基}-氨基甲酸叔丁酯 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與實施例B66的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.45(9H，s)，4.06-4.13(2H，m)，4.66(2H，s)，7.19(2H，d)，7.20-7.28(1H，m)，7.29(2H，d)，7.52(1H，dd)，7.57(1H，d)，7.65(1H，dd)，7.82(1H，d)，8.08(1H，d)，8.49(1H，d)。
實施例B68N-{3-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]丙基}氨基甲酸叔丁酯 按與實施例B43相同的方式，通過處理實施例B67的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.43(9H，s)，1.70-1.81(2H，m)，2.54-2.60(2H，m)，3.01-3.20(2H，m)，4.47-4.57(1H，m)，4.65(2H，s)，7.07(2H，d)，7.21(2H，d)，7.55(1H，dd)，7.57(1H，d)，7.65(1H，dd)，7.83(1H，d)，8.18(1H，d)，8.51(1H，d)。
實施例B693-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-2-丙炔-1-胺 將三氟乙酸(0.3ml)加到冰冷卻的實施例B67的化合物(4mg)的二氯甲烷(0.6ml)溶液中，並將反應混合物在該溫度下攪拌1小時。加入飽和的碳酸氫鈉水溶液之後，將反應混合物用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(4mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)3.60-3.68(2H，m)，4.66(2H，s)，7.19(2H，d)，7.29(2H，d)，7.53(1H，dd)，7.56(1H，d)，7.63(1H，dd)，7.82(1H，d)，8.10(1H，d)，8.49(1H，d)。
在NMR光譜中未觀察到胺質子。
實施例B703-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-1-丙胺 按與實施例B69相同的方式，通過處理實施例B68的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.20-1.30(2H，m)，1.78-1.88(2H，m)，2.45-2.52(2H，m)，2.73-2.81(2H，m)，4.55(2H，s)，6.94(2H，d)，7.08(2H，d)，7.50(1H，dd)，7.51(1H，d)，7.61(1H，dd)，7.76(1H，d)，8.10(1H，d)，8.38(1H，d)。
實施例B71N-甲基-N-(2-丙炔基)乙醯胺 按與實施例B59相同的方式，通過處理N-甲基-N-(2-丙炔基)胺，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)2.11(2.1H，s)，2.17(0.9H，s)，2.21(0.7H，t)，2.31(0.3H，t)，3.00(0.9H，s)，3.08(2.1H，s)，4.04(0.6H，d)，4.23(1.4H，d)。
所得化合物包含該醯胺的幾何異構體的7∶3混合物。
實施例B72N-{3-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-2-丙炔基}-N-甲基-乙醯胺 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與實施例B71的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)2.10(1.8H，s)，2.11(1.2H，s)，3.01(1.2H，s)，3.10(1.8H，s)，4.21(1.2H，s)，4.41(0.8H，s)，4.67(2H，s)，7.18-7.23(2H，m)，7.29-7.32(2H，m)，7.53(1H，dd)，7.58(1H，d)，7.65(1H，dd)，7.82(1H，d)，8.09(1H，d)，8.49(1H，d)。
所得化合物包含該醯胺的幾何異構體的3∶2混合物。
實施例B73N-{3-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]丙基}-N1-甲基乙醯胺 按與實施例B43相同的方式，通過處理實施例B72的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.70-1.90(2H，m)，1.89(1.5H，s)，2.03(1.5H，s)，2.50-2.59(2H，m)，2.88(1.5H，s)，2.91(1.5H，s)，3.20-3.25(1H，m)，3.36-3.40(1H，m)，4.66(2H，s)，7.03-7.10(2H，m)，7.18-7.30(2H，m)，7.53(1H，dd)，7.58(1H，d)，7.66(1H，dd)，7.82(1H，d)，8.17(1H，d)，8.50(1H，d)。
所得化合物包含該醯胺的幾何異構體的1∶1混合物。
實施例B74N-甲基-N-(2-丙炔基)甲磺醯胺 將三乙胺(6.55ml)加到冰冷卻的N-甲基-N-(2-丙炔基)胺(2603mg)的二氯甲烷(25ml)溶液中。進一步滴加甲磺醯氯(3.50ml)，將反應混合物在該溫度下攪拌1小時，然後在室溫性愛進一步攪拌2小時。加冰之後，將反應混合物用乙酸乙酯萃取，依次用1N鹽酸，飽和的碳酸氫鈉水溶液，及飽和的鹽水，用無水硫酸鎂乾燥，然後通過矽膠進行過濾。將濾液減壓濃縮，得到標題化合物(4522mg)。所得化合物無需進一步純化即可用於下面的反應。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)2.41(1H，t)，2.93(3H，s)，2.96(3H，s)，4.09(2H，d)。
實施例B75N-{3-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-2-丙炔基}-N-甲基甲磺醯胺
按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與實施例B74的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)2.95(3H，s)，2.97(3H，s)，4.26(2H，s)，4.68(2H，s)，7.24(2H，d)，7.31(2H，d)，7.55(1H，dd)，7.59(1H，d)，7.66(1H，dd)，7.83(1H，d)，8.10(1H，d)，8.49(1H，d)。
實施例B76N-{3-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]丙基}-N-甲基甲磺醯胺 按與實施例B43相同的方式，處理實施例B75的化合物，所得剩餘物通過LC-MS[洗脫劑含0.1％三氟乙酸的乙腈溶液∶含0.1％三氟乙酸的水溶液＝1∶99～100∶0/20-分鐘循環，流速20ml/分鐘，柱子YMC CombiprepODS-AM，Φ20mm×50mm(長)]純化與分離，得到標題化合物。
MS m/z(ESIMH+)369.2實施例B775-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-4-戊炔-2-醇 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與4-戊炔-2-醇，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.27(3H，t)，2.38-2.62(2H，m)，3.95-4.03(1H，m)，4.65(2H，s)，7.19(2H，d)，7.29(2H，d)，7.52(1H，dd)，7.57(1H，d)，7.64(1H，dd)，7.81(1H，d)，8.08(1H，d)，8.48(1H，d)。
在NMR光譜中未觀察到羥基的質子。
實施例B785-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-2-戊醇 按與實施例B43相同的方式處理實施例B77的化合物，所得剩餘物通過LC-MS[洗脫劑含0.1％三氟乙酸的乙腈溶液∶含0.1％三氟乙酸的水溶液＝1∶99～100∶0/20-分鐘循環，流速20ml/分鐘，柱子YMC Combiprep ODS-AM，Φ20mm×50mm(長)]純化與分離，得到標題化合物。
MS m/z(ESIMH+)306.2實施例B793-丁基苯酚 按與實施例B40相同的方式，通過處理1-丁基-3-甲氧基苯，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.94(3H，t)，1.30-1.55(2H，m)，1.55-1.62(2H，m)，2.56(2H，t)，4.76(1H，brs)，6.63(1H，dd)，6.66(1H，d)，6.75(1H，d)，7.12(1H，dd)。
實施例B801-丁基-3-(甲氧基甲氧基)苯 將60％分散於礦物油(102mg)中的氫化鈉溶液加到冰冷卻的實施例B79的化合物(318mg)的二甲基甲醯胺(5ml)溶液中，並將反應混合物在室溫下攪拌30分鐘。再次將混合物在冰上冷卻，加入氯甲基甲基醚(0.18ml)，並將該反應混合物在室溫下攪拌12小時。加水之後，將反應混合物用乙酸乙酯萃取，用飽和的碳酸氫鈉水溶液及飽和的鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後通過矽膠進行過濾。將濾液減壓濃縮，得到標題化合物(341mg)。所得化合物無需進一步純化即可用於下面的反應。
1H-NMR(CDC13)δ(ppm)0.94(3H，t)，1.30-1.42(2H，m)，1.55-2.04(2H，m)，2.58(2H，t)，3.49(3H，s)，5.17(2H，s)，6.80-6.87(3H，m)，7.18(1H，dd)。
實施例B814-丁基-2-(甲氧基甲氧基)苯甲醛 將叔丁基鋰的戊烷溶液(1.51M，10.6ml)滴加到冷卻至-20℃的實施例B80的化合物(2396mg)的石油醚溶液中，將該反應混合物在-10℃～0℃的溫度下攪拌1.5小時。將反應混合物冷卻至-70℃，加入無水乙醚(17ml)和二甲基甲醯胺(1.91ml)，並將所得混合物在該溫度下攪拌3小時，然後再在室溫下攪拌1小時。將反應混合物在冰上冷卻，加入飽和的氯化銨水溶液，並將該混合物用乙酸乙酯萃取。萃取液用飽和鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化得到標題化合物(1821mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.94(3H，t)，1.32-1.42(2H，m)，1.57-1.65(2H，m)，2.64(2H，t)，3.54(3H，s)，5.29(2H，s)，6.91(1H，d)，7.01(1H，s)，7.76(1H，d)，10.44(1H，s)。
實施例B82[4-丁基-2-(甲氧基甲氧基)苯基](1-異喹啉基)甲醇 將氫氧化鈉水溶液(50％，1.4ml)加到1-氰基-苯甲醯基-1，2-二氫異喹啉(815mg)(根據Org.Synth.，IV，155(1988)合成的)，實施例B81的化合物(869mg)，以及三乙基苄基氯化銨(7mg)的二氯甲烷(1.6ml)溶液中，使反應混合物在水浴中進行10分鐘的超聲波處理。加入二氯甲烷(8.3ml)和乙醇(4.4ml)之後，將反應混合物再在水浴中進行85分鐘的超聲波處理。加水並用二氯甲烷萃取所得反應混合物。萃取液用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(1144mg)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)0.86(3H，t)，1.22-1.31(2H，m)，1.44-1.52(2H，m)，2.44-2.51(2H，m)，3.16(3H，s)，5.10(1H，d)，5.12(1H，d)，6.72(1H，s)，6.75(1H，d)，6.84(1H，s)，7.21(1H，d)，7.61(1H，dd)，7.72(1H，dd)，7.74(1H，d)，7.95(1H，d)，8.31(1H，d)，8.42(1H，d)。
在NMR光譜中未觀察到羥基的質子。
實施例B83[4-丁基-2-(甲氧基甲氧基)苯基](1-異喹啉基)乙酸甲酯 按與實施例B38相同的方式，通過處理實施例B82的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.90(3H，t)，1.28-1.40(2H，m)，1.50-1.60(2H，m)，2.22(3H，s)，2.54(2H，t)，3.41(3H，s)，5.22(1H，d)，5.26(1H，d)，6.77(1H，d)，6.94(1H，s)，7.29(1H，d)，7.55(1H，dd)，7.58(1H，d)，7.70(1H，dd)，7.81(1H，d)，8.05(1H，s)，8.35(1H，d)，8.55(1H，d)。
實施例B841-[4-丁基-2-(甲氧基甲氧基)苄基]異喹啉 按與實施例B39相同的方式，通過處理實施例B83的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.28-1.37(2H，m)，1.50-1.58(2H，m)，2.53(2H，t)，3.46(3H，s)，4.65(2H，s)，5.24(2H，s)，6.66(1H，dd)，6.89(1H，d)，6.92(1H，d)，7.51(1H，dd)，7.53(1H，d)，7.62(1H，dd)，7.79(1H，d)，8.23(1H，d)，8.47(1H，d)。
實施例B855-丁基-2-(1-異喹啉基甲基)苯酚 將5N鹽酸(1.0ml)加到實施例B84的化合物(88mg)的甲醇(1.5ml)溶液中，並將該混合物在室溫下攪拌14小時。將反應混合物用5N的氫氧化鈉水溶液中和，用磷酸鹽緩衝液將pH調整至6.8，並用乙酸乙酯萃取。萃取液用無水硫酸鎂乾燥並減壓濃縮，得到標題化合物(44mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.23-1.37(2H，m)，1.48-1.60(2H，m)，2.51(2H，t)，4.56(2H，s)，6.65(1H，dd)，6.82(1H，d)，7.21(1H，d)，7.55(1H，d)，7.68(1H，dd)，7.72(1H，dd)，7.82(1H，d)，8.35(1H，d)，8.44(1H，d)。
在NMR光譜中未觀察到羥基的質子。
實施例B86N-{3-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-2-丙炔基}-N，N-二甲基胺 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與1-二甲基氨基-2-丙炔，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)2.04(3H，s)，2.34(3H，s)，3.47(2H，s)，4.66(2H，s)，7.20(2H，d)，7.32(2H，d)，7.53(1H，dd)，7.56(1H，d)，7.65(1H，dd)，7.82(1H，d)，8.10(1H，d)，8.50(1H，d)。
實施例B871-{4-[3-(四氫-2H-2-吡喃氧基)-1-丙炔基]苄基}異喹啉 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與四氫-2-(2-丙炔氧基)-2H-吡喃，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.45-1.85(6H，m)，3.50-3.60(1H，m)，3.84-3.90(1H，m)，4.42(1H，d)，4.48(1H，d)，4.66(2H，8)，4.87(1H，dd)，7.1 5-7.21(2H，m)，7.33-7.36(2H，m)，7.50-7.70(3H，m)，7.81-7.86(1H，m)，8.07-8.10(1H，m)，8.48-8.51(1H，m)。
實施例B883-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-2-丙炔-1-醇 按與實施例B47相同的方式，通過處理實施例B87的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.20-1.30(1H，m)，4.46(2H，s)，4.67(2H，s)，7.23(2H，d)，7.31(2H，d)，7.53(1H，dd)，7.58(1H，d)，7.65(1H，dd)，7.83(1H，d)，8.09(1H，d)，8.49(1H，d)。
實施例B89N，N-二甲基-4-戊炔醯胺 將二甲胺(2M的四氫呋喃溶液，8.53ml)，三乙胺(2.59ml)，及1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(3221mg)加到4-戊炔酸(552mg)的二氯甲烷(150ml)溶液中，並將該混合物在室溫下攪拌24小時。反應混合物依次用1N鹽酸，飽和的碳酸氫鈉水溶液，水，及飽和的鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮，得到標題化合物(129mg)。所得化合物無需進一步純化即可用於下面的反應。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.96-1.99(1H，m)，2.50-2.60(4H，m)，2.96(3H，s)，3.02(3H，s)。
實施例B90N，N-二甲基-5-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-4-戊炔醯胺 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與實施例B89的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)2.59-2.64(2H，m)，2.71-2.75(2H，m)，2.96(3H，s)，3.03(3H，s)，4.66(2H，s)，7.18(2H，d)，7.28(2H，d)，7.43-7.70(3H，m)，7.90(1H，d)，8.09(1H，d)，8.50(1H，d)。
實施例B911-甲基-2-丙炔基四氫-2H-2-吡喃基醚 將3，4-二氫-2H-吡喃(7.15ml)和對甲苯磺酸吡啶鹽(2187mg)加到3-丁炔-2-醇(3051mg)的二氯甲烷(150ml)溶液中，並將該混合物在室溫下攪拌29小時。反應混合物依次用飽和的碳酸氫鈉水溶液，水，及飽和的鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(4698mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.45(1.05H，d)，1.48(1.95H，d)，1.50-1.90(6H，m)，2.37(0.65H，d)，2.43(0.35H，d)，3.50-3.60(1.3H，m)，3.80-3.86(0.7H，m)，4.4-3-4.50(0.35H，m)，4.52-4.60(0.65H，m)，4.77(0.35H，t)，4.94(0.65H，t)。
實施例B921-{4-[3-(四氫-2H-2-吡喃氧基)-1-丁炔基]苄基}異喹啉 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與實施例B91的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.40-1.80(6H，m)，1.49(1.05H，d)，1.52(1.95H，d)，3.49-3.60(1H，m)，3.80-3.88(0.65H，m)，3.99-4.06(0.35H，m)，4.65(2H，s)，4.74(1H，q)，4.83(0.35H，t)，4.97(0.65H，t)，7.18-7.22(2H，m)，7.32(2H，d)，7.54(1H，dd)，7.57(1H，d)，7.64(1H，dd)，7.82(1H，d)，8.08(1H，d)，8.49(1H，d)。
實施例B934-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-3-丁炔-2-醇 按與實施例B47相同的方式，通過處理實施例B92的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.53(3H，d)，2.15(1H，brs)，4.68(2H，s)，4.72(1H，q)，7.21(2H，d)，7.31(2H，d)，7.54(1H，dd)，7.59(1H，d)，7.66(1H，dd)，7.84(1H，d)，8.10(1H，d)，8.51(1H，d)。
實施例B944-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-2-丁醇 按與實施例B43相同的方式處理實施例B93的化合物，所得剩餘物通過LC-MS[洗脫劑含0.1％三氟乙酸的乙腈溶液∶含0.1％三氟乙酸的水溶液＝1∶99～100∶0/20-分鐘循環，流速20ml/分鐘，柱子YMC Combiprep ODS-AM，Φ20mm×50mm(長)]純化與分離，得到標題化合物。
MS m/z(ESIMH+)292.2實施例B952-甲基-4-戊炔-2-醇 將乙炔化鋰-乙二胺複合物逐步加到冷卻至0℃的1，1-二甲基環氧乙烷(1889mg)於四氫呋喃(13ml)和二甲亞碸(20ml)的混合溶液中，將該反應混合物在0℃下攪拌5小時。加水之後，將反應混合物用乙酸乙酯萃取，用飽和鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後通過矽膠進行過濾。將濾液減壓濃縮，得到標題化合物(3316mg)。該化合物無需進一步純化即可用於下列反應。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.33(6H，s)，2.09(1H，t)，2.38(2H，t)。
在NMR光譜中未觀察到羥基的質子。
實施例B965-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-2-甲基-4-戊炔-2-醇 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與實施例B95的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)1.18(6H，s)，2.28(1H，s)，2.42(2H，s)，4.62(2H，s)，7.10-7.30(4H，m)，7.62(1H，dd)，7.71(1H，d)，7.72(1H，dd)，7.94(1H，d)，8.27(1H，d)，8.42(1H，d)。
實施例B975-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-2-甲基-2-戊醇 按與實施例B43相同的方式，處理實施例B96的化合物，所得剩餘物通過LC-MS[洗脫劑含0.1％三氟乙酸的乙腈溶液∶含0.1％三氟乙酸的水溶液＝1∶99～100∶0/20-分鐘循環，流速20ml/分鐘，柱子YMC CombiprepODS-AM，Φ20mm×50mm(長)]純化與分離，得到標題化合物。
MS m/z(ESIMH+)320.2
實施例B984-苄氧基-2-(甲氧基甲氧基)苯甲醛 將N，N-二異丙基乙基胺(1.98ml)和氯甲基甲基醚(0.76ml)加到4-苄氧基-2-羥基苯甲醛(2071mg)的四氫呋喃(30ml)溶液中，並在加熱回流下將該反應混合物攪拌19小時。進一步加入N，N-二異丙基乙基胺(2.7ml)和氯甲基甲基醚(1.04ml)，並再次將所的混合物化熱回流攪拌10小時。加水之後，將反應混合物用乙酸乙酯萃取，用飽和的氯化銨水溶液及飽和的鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後通過矽膠和氧化鋁過濾。將濾液減壓濃縮，得到標題化合物(2470mg)。該化合物無需純化即可用於下列反應。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)3.52(3H，s)，5.12(2H，s)，5.27(2H，s)，6.68(1H，dd)，6.80(1H，d)，7.33-7.45(5H，m)，7.82(1H，d)，10.33(1H，s)。
實施例B99[4-(苄氧基)-2-(甲氧基甲氧基)苯基](1-異喹啉基)甲醇 按與實施例B82相同的方式，通過處理實施例B98的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)3.16(3H，s)，5.01(2H，s)，5.11(1H，d)，5.14(1H，d)，6.59(1H，dd)，6.66-6.70(2H，m)，7.18(1H，d)，7.31(1H，d)，7.34-7.42(4H，m)，7.61(1H，dd)，7.71(1H，d)，7.75(1H，d)，7.95(1H，d)，8.28(1H，d)，8.43(1H，d)。
在NMR光譜中未觀察到羥基的質子。
實施例B100[4-(苄氧基)-2-(甲氧基甲氧基)苯基](1-異喹啉基)乙酸甲酯 按與實施例B38相同的方式，通過處理實施例B99的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)2.21(3H，s)，3.42(3H，s)，4.98(1H，d)，5.00(1H，d)，5.21-5.27(2H，m)，6.54(1H，dd)，6.81(1H，d)，7.25(1H，d)，7.30-7.41(5H，m)，7.53(1H，dd)，7.57(1H，d)，7.63(1H，dd)，7.80(1H，d)，8.00(1H，s)，8.29(1H，d)，8.55(1H，d)。
實施例B1014-(1-異喹啉基甲基)-3-(甲氧基甲氧基)苯酚 按與實施例B39相同的方式，通過處理實施例B100的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)3.36(3H，s)，4.44(2H，s)，5.17(2H，s)，6.22(1H，d)，6.52(1H，s)，6.67(1H，d)，7.57-7.76(3H，m)，7.92(1H，d)，8.22(1H，d)，8.37(1H，d)，9.24(1H，brs)。
實施例B1024-(1-異喹啉基甲基)-3-(甲氧基甲氧基)苯基三氟甲磺酸酯 按與實施例B41相同的方式，通過處理實施例B101的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)3.43(3H，s)，4.65(2H，s)，5.24(2H，s)，6.77(1H，dd)，7.04(1H，d)，7.07(1H，d)，7.54-7.61(2H，m)，7.67(1H，dd)，7.84(1H，d)，8.16(1H，d)，8.47(1H，d)。
實施例B1031-{2-(甲氧基甲氧基)-[4-(四氫-2H-2-吡喃氧基)-1-丁炔基]苄基}異喹啉 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B102的化合物與2-(3-丁炔氧基)四氫-2H-吡喃，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.51-1.90(6H，m)，2.68(2H，t)，3.50(3H，s)，3.49-3.55(1H，m)，3.58-3.65(1H，m)，3.84-3.94(2H，m)，4.63-4.68(1H，m)，4.65(2H，s)，5.23(2H，s)，6.76(1H，dd)，7.04(1H，d)，7.07(1H，d)，7.49-7.69(3H，m)，7.81(1H，d)，8.14(1H，d)，8.47(1H，d)。
實施例B1045-(4-羥基-1-丁炔基)-2-(1-異喹啉基甲基)苯酚 按與實施例B85相同的方式，通過處理實施例B103的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.80(1H，brs)，2.66(2H，t)，3.73-3.82(2H，m)，4.58(2H，s)，6.87(1H，d)，7.04(1H，s)，7.23(1H，d)，7.60(1H，d)，7.69-7.78(2H，m)，7.86(1H，d)，8.37(1H，d)，8.42(1H，d)。
在NMR光譜中未發現酚羥基的質子。
實施例B1051-(叔丁基)-1，1-二甲基甲矽烷基{4-[4-(1-異喹啉基甲基)-苯基]-2-甲基-3-丁炔基}醚 將三苯基膦(18.37g)加到冰冷卻的四溴化碳(11.19g)的二氯甲烷(60ml)溶液中，並將反應混合物在該溫度下攪拌1小時。滴加3-{[1-(叔丁基)-1，1-二甲基甲矽烷基]氧基}-2-甲基丙醇(根據Tetrahedron Lett.，4347(1979)製備)的二氯甲烷(14ml)溶液，並將所得反應混合物進一步攪拌1小時。將反應混合物用二氯甲烷稀釋，依次用飽和的碳酸氫鈉水溶液，飽和的氯化銨水溶液及飽和的鹽水洗滌，用硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。向剩餘物中加入乙醚，濾除不溶物，並將濾液減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到叔丁基[(4，4-二溴-2-甲基-3-丁烯基)氧基]-二甲基矽烷(2385mg)。
下一步，將2.47M的正丁基鋰己烷溶液(3.15ml)滴加到冷卻至-70℃的叔丁基[(4，4-二溴-2-甲基-3-丁烯基)氧基]二甲基矽烷(1326mg)的四氫呋喃(10ml)溶液中，並將混合物在該溫度下攪拌1小時。進一步加入飽和的氯化銨水溶液，並將所得的混合物溫暖至室溫。加水之後，用乙醚萃取反應混合物。乙醚層用飽和鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後通過矽膠進行過濾。將濾液減壓濃縮。按與實施例B42相同的方式，處理所得剩餘物和實施例B41的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.07(6H，s)，0.90(9H，s)，1.18(3H，d)，2.70-2.80(1H，m)，3.47(1H，dd)，3.70(1H，dd)，4.65(2H，s)，7.16(2H，d)，7.27(2H，d)，7.51(1H，dd)，7.56(1H，d)，7.64(1H，dd)，7.81(1H，d)，8.07(1H，d)，8.49(1H，d)。
實施例B1064-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-2-甲基-3-丁炔-1-醇
按與實施例B47相同的方式，通過處理實施例B105的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)1.11(3H，d)，2.60-2.70(1H，m)，3.28(1H，d)，3.44(1H，d)，4.58(2H，s)，4.85-4.90(1H，m)，7.23(4H，s)，7.61(1H，dd)，7.70(1H，d)，7.71(1H，dd)，7.93(1H，d)，8.25(1H，d)，8.42(1H，d)。
實施例B1071-{[1-(叔丁基)-1，1-二甲基甲矽烷基]氧基}-3-丁炔-2-醇 在氮氣氛下，將乙炔基溴化鎂的四氫呋喃溶液(0.5M，90ml)加到冷卻至-78℃的無水四氫呋喃(20ml)中。滴加叔丁基二甲基甲矽烷氧基乙醛(6000mg)的四氫呋喃(30ml)溶液，並將所得的混合物在-78℃下攪拌45分鐘，溫暖至室溫，攪拌1小時40分鐘，然後在冰上冷卻。加入飽和的氯化銨水溶液之後，用乙醚萃取反應混合物，用水及飽和的鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後通過矽膠進行過濾。將濾液減壓濃縮，得到標題化合物(8.55g)。該化合物無需純化即可用於下列反應。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.08(6H，s)，0.91(9H，s)，2.43(1H，d)，2.60-2.66(1H，m)，3.65-3.70(1H，m)，3.73-3.81(1H，m)，4.38-4.42(1H，m)。
實施例B1081-{[1-(叔丁基)-1，1-二甲基甲矽烷基]氧基}甲基)-2-丙炔基乙酸酯 按與實施例B38相同的方式，通過處理實施例B107的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.08(6H，s)，0.90(9H，s)，2.11(3H，s)，2.44(1H，d)，3.80-3.88(2H，m)，5.41-5.55(1H，m)。
實施例B1094-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-3-丁炔-1，2-二醇 按與實施例B42相同的方式，處理實施例B41的化合物和實施例B108的化合物，得到偶聯產物。按與實施例B47相同的方式，通過去除偶聯產物的羥基保護基，得到標題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)3.40-3.45(1H，m)，3.70-3.82(1H，m)，4.30-4.35(1H，m)，4.63(2H，s)，4.90(1H，t)，5.46(1H，d)，7.25-7.30(4H，m)，7.62(1H，dd)，7.71(1H，d)，7.73(1H，dd)，7.94(1H，d)，8.28(1H，d)，8.43(1H，d)。
實施例B1101-{4-[2-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊環-4-基)-1-乙炔基]苄基}-異喹啉 將2，2-二甲氧基丙烷(0.36ml)，10-樟腦磺酸(43mg)，及分子篩(4)加到實施例B109的化合物(34mg)的二甲基甲醯胺(2ml)溶液中，並將該反應混合物在75℃下攪拌9小時。加入飽和的碳酸鈉水溶液之後，將反應混合物用乙酸乙酯萃取，用水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(14mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.40(3H，s)，1.50(3H，s)，3.97(1H，dd)，4.21(1H，dd)，4.66(2H，s)，4.91(1H，dd)，7.19(2H，d)，7.32(2H，d)，7.52(1H，dd)，7.65-7.78(2H，m)，8.08(1H，d)，8.09(1H，d)，8.49(1H，d)。
實施例B111叔丁基{[2-(1-乙氧基乙氧基)-3-丁炔基]氧基}二甲基矽烷 將乙基乙烯基醚(1.21ml)and對甲苯磺酸吡啶鹽(317mg)加到1-{[1-(叔丁基)-1，1-二甲基甲矽烷基]氧基}-3-丁炔-2-醇(1687mg)的二氯甲烷(90ml)溶液中，並將該混合物在室溫下攪拌1小時。二氯甲烷層用飽和的碳酸氫鈉水溶液及飽和的鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮，得到標題化合物(1962mg)。該化合物無需純化即可用於下列反應。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)0.00(6H，s)，0.81(9H，s)，1.01-1.07(3H，m)，1.10-1.20(1H，m)，1.18(3H，d)，3.35-3.63(4H，m)，4.18-4.27(1H，m)，4.74(0.5H，q)，4.81(0.5H，q)。
實施例B1121-{4-[4-{[1-(叔丁基)-1，1-二甲基甲矽烷基]氧基}-3-(1-乙氧基乙氧基)-1-丁炔基]苄基}異喹啉 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與實施例B111的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)0.00(6H，s)，0.80(9H，s)，1.01-1.05(3H，m)，1.19(3H，d)，3.39-3.70(4H，m)，4.41(0.5H，t)，4.48(0.5H，t)，4.59(2H，s)，4.79(0.5H，q)，4.87(0.5H，q)，7.20-7.30(4H，m)，7.58(1H，dd)，7.68(1H，d)，7.69(1H，dd)，7.91(1H，d)，8.24(1H，d)，8.38(1H，d)。
實施例B1131-{[1-(叔丁基)-1，1-二甲基甲矽烷基]氧基}4-[4-(1-異喹啉基-甲基)苯基]-3-丁炔-2-醇 將對甲苯磺酸吡啶鹽(486mg)加到實施例B112的化合物(474mg)的甲醇(15ml)溶液中，並將該混合物在室溫下攪拌24小時。加入乙酸乙酯之後，將反應混合物用飽和的碳酸氫鈉水溶液及飽和的鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(265mg)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)0.01(6H，s)，0.82(9H，s)，3.55-3.62(2H，m)，4.30-4.39(1H，m)，4.61(2H，s)，5.51(1H，d)，7.20-7.27(4H，m)，7.50-7.63(1H，m)，7.67-7.74(2H，m)，7.92(1H，d)，8.27(1H，d)，8.41(1H，d)。
實施例B1141-(叔丁基)-1，1-二甲基甲矽烷基{2-氟-4-[4-(1-異喹啉基-甲基)苯基]-3-丁炔基}醚 在氮氣氛下，將實施例B113的化合物(116mg)的二氯甲烷(2ml)溶液滴加到冷卻至-78℃的(二乙基氨基)三氟化硫(44μl)的二氯甲烷(2ml)溶液中。攪拌15分鐘之後，將反應混合物在室溫下再攪拌8小時。加入飽和的碳酸氫鈉水溶液，所得的反應混合物用二氯甲烷萃取。二氯甲烷層用水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(42mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.10(6H，s)，0.91(9H，s)，3.83-4.00(2H，m)，4.67(2H，s)，5.17(1H，ddd)，7.22(2H，d)，7.34(2H，d)，7.53(1H，dd)，7.58(1H，d)，7.65(1H，dd)，7.83(1H，d)，8.08(1H，d)，8.50(1H，d)。
實施例B115
2-氟-4-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-3-丁炔-1-醇 按與實施例B47相同的方式，通過處理實施例B114的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.31(1H，brs)，3.77-3.95(2H，m)，4.67(2H，s)，5.35(1H，ddd)，7.22(2H，d)，7.35(2H，d)，7.53(1H，dd)，7.58(1H，d)，7.65(1H，dd)，7.83(1H，d)，8.07(1H，d)，8.50(1H，d)。
實施例B1161-(叔丁基)-1，1-二甲基甲矽烷基{6-[4-(1-異喹啉基甲基)-苯基]-5-己炔基}醚 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與叔丁基(5-己炔基氧基)二甲基矽烷，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.04(6H，s)，0.88(9H，s)，1.55-1.70(4H，m)，2.39(2H，t)，3.64(2H，t)，4.65(2H，s)，7.17(2H，d)，7.27(2H，d)，7.51(1H，dd)，7.55(1H，d)，7.64(1H，dd)，7.82(1H，d)，8.08(1H，d)，8.49(1H，d)。
實施例B1176-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-5-己炔-1-醇 按與實施例B47相同的方式，通過處理實施例B116的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.60-1.80(4H，m)，2.42(2H，t)，3.69(2H，t)，4.65(2H，s)，7.17(2H，d)，7.27(2H，d)，7.52(1H，dd)，7.57(1H，d)，7.64(1H，dd)，7.81(1H，d)，8.08(1H，d)，8.49(1H，d)。
在NMR光譜中未觀察到羥基的質子。
實施例B1186-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-1-己醇 按與實施例B43相同的方式處理實施例B117的化合物，所得剩餘物通過LC-MS[洗脫劑含0.1％三氟乙酸的乙腈溶液∶含0.1％三氟乙酸的水溶液＝1∶99～100∶0/20-分鐘循環，流速20ml/分鐘，柱子YMC CombiprepODS-AM，Φ20mm×50mm(長)]純化與分離，得到標題化合物。
MS m/z(ESIMH+)320.2實施例B1192-(4-戊炔氧基)四氫-2H-吡喃 按與實施例B91相同的方式，通過處理4-戊炔-1-醇，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.50-1.90(8H，m)，1.95(1H，t)，2.30-2.35(2H，m)，3.46-3.54(2H，m)，3.80-3.90(2H，m)，4.60(1H，dd)。
實施例B1201-{4-[5-(四氫-2H-2-吡喃氧基)-1-戊炔基]苄基}-異喹啉 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與實施例B119的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.49-1.90(8H，m)，2.49(2H，t)，3.47-3.54(2H，m)，3.82-3.90(2H，m)，4.60(1H，dd)，4.65(2H，s)，7.17(2H，d)，7.27(2H，d)，7.52(1H，dd)，7.58(1H，d)，7.64(1H，dd)，7.82(1H，d)，8.09(1H，d)，8.49(1H，d)。
實施例B1215-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-4-戊炔-1-醇 按與實施例B47相同的方式，通過處理實施例B120的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.80-1.88(2H，m)，2.51(2H，t)，3.80(2H，t)，4.65(2H，s)，7.18(2H，d)，7.29(2H，d)，7.52(1H，dd)，7.58(1H，d)，7.65(1H，dd)，7.82(1H，d)，8.09(1H，d)，8.49(1H，d)。
在NMR光譜中未觀察到羥基的質子。
實施例B1225-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-4-戊炔基氰化物 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與5-氰基-1-戊炔，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.85-1.98(2H，m)，2.40-2.60(4H，m)，4.66(2H，s)，7.20(2H，d)，7.28(2H，d)，7.53(1H，dd)，7.58(1H，d)，7.65(1H，dd)，7.83(1H，d)，8.09(1H，d)，8.50(1H，d)。
實施例B1231-[4-(3-甲基-1-丁炔基)苄基]異喹啉 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與3-甲基-1-丁炔，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.23(6H，d)，2.70-2.78(1H，m)，4.65(2H，s)，7.18(2H，d)，7.28(2H，d)，7.51(1H，dd)，7.58(1H，d)，7.64(1H，dd)，7.82(1H，d)，8.08(1H，d)，8.50(1H，d)。
實施例B1241-[4-(5-甲基-1-己炔基)苄基]異喹啉 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與5-甲基-1-己炔，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.91(6H，d)，1.47(2H，dt)，1.68-1.77(1H，m)，2.37(2H，t)，4.65(2H，s)，7.17(2H，d)，7.28(2H，d)，7.52(1H，dd)，7.57(1H，d)，7.64(1H，dd)，7.81(1H，d)，8.09(1H，d)，8.49(1H，d)。
實施例B1254-戊炔醯胺 將1-乙氧基羰基-2-乙氧基-1，2-二氫喹啉(6775mg)和碳酸氫銨(5905mg)加到4-戊炔酸(2446mg)的氯仿(75ml)溶液中，並將該混合物在室溫下攪拌17.5小時。將反應混合物用硅藻土過濾並減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(249mg)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)2.21(2H，t)，2.29-2.33(2H，m)，2.73(1H，t)，6.78-6.88(1H，m)，7.28-7.38(1H，m)。
實施例B1265-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-4-戊炔酸醯胺 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與實施例B125的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)2.51(2H，t)，2.85(2H，t)，3.70(2H，brs)，4.59(2H，s)，7.05(2H，d)，7.23(2H，d)，7.61(1H，dd)，7.70(1H，d)，7.72(1H，dd)，7.94(1H，d)，8.30(1H，d)，8.43(1H，d)。
實施例B1274-戊炔酸叔丁酯 將苄基三乙基氯化銨(5.92g)，碳酸鉀(93.4g)，及叔丁基溴(143ml)加到4-戊炔酸(2550mg)的N，N-二甲基乙醯胺(230ml)溶液中，並將該反應混合物在55℃下攪拌24小時。加水之後，將反應混合物用乙酸乙酯萃取，用水洗滌，用無水氯化鎂乾燥，然後通過矽膠進行過濾。將濾液減壓濃縮，得到標題化合物(2.10g)。該化合物無需純化即可用於下列反應。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.46(9H，s)，1.96-1.97(1H，m)，2.45-2.47(4H，m)。
實施例B1285-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-4-戊炔酸叔丁酯 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B41的化合物與實施例B127的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.45(9H，s)，2.49(2H，t)，2.64(2H，t)，4.64(2H，s)，7.21(2H，d)，7.26(2H，d)，7.52(1H，dd)，7.57(1H，d)，7.64(1H，dd)，7.82(1H，d)，8.09(1H，d)，8.49(1H，d)。
實施例B1295-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-4-戊炔酸 按與實施例B69相同的方式，處理實施例B128的化合物，所得剩餘物通過LC-MS[洗脫劑含0.1％三氟乙酸的乙腈溶液∶含0.1％三氟乙酸的水溶液＝1∶99～100∶0/20-分鐘循環，流速20ml/分鐘，柱子YMC CombiprepODS-AM，Φ20mm×50mm(長)]純化與分離，得到標題化合物。
MS m/z(ESIMH+)316.1下列的化合物合成如下。即根據實施例B33，用下述各種反應物處理實施例B41的化合物，得到標題化合物。該各種反應物為丙烯醯胺，N，N-二甲基丙烯醯胺，丙烯酸叔丁酯，及甲基乙烯基碸。此外，將按此方式得到的偶聯產物進行實施例B39的還原或者實施例B40的叔丁酯去保護，或者二者均進行。所得產物通過矽膠柱色譜或通過LC-MS[洗脫劑含0.1％三氟乙酸的乙腈溶液∶含0.1％三氟乙酸的水溶液＝1∶99～100∶0/20-分鐘循環，流速20ml/分鐘，色譜柱YMC Combiprep ODS-AM，20mm(Φ)×50mm(長)]進行純化。
實施例B130(E)-3-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-2-丙烯醯胺 MS m/z(ESIMH+)289.3實施例B131
3-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-2-丙醯胺 MS m/z(ESIMH+)291.2實施例B132N，N-二甲基-(E)-3-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-2-丙烯醯胺 MS m/z(ESIMH+)317.3實施例B133N，N-二甲基-3-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]丙醯胺 MS m/z(ESIMH+)319.1實施例B134(E)-3-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-2-丙烯酸叔丁酯 1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.51(9H，s)，4.68(2H，s)，6.28(1H，d)，7.27(2H，d)，7.39(2H，d)，7.49-7.60(3H，m)，7.65(1H，dd)，7.82(1H，d)，8.11(1H，d)，8.50(1H，d)。
實施例B135
(E)-3-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-2-丙烯酸 MS m/z(ESIMH+)290.2實施例B1363-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]丙酸叔丁酯 1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.37(9H，s)，2.47(2H，t)，2.83(2H，t)，4.64(2H，s)，7.07(2H，d)，7.19(2H，d)，7.52(1H，dd)，7.56(1H，d)，7.63(1H，dd)，7.81(1H，d)，8.14(1H，d)，8.49(1H，d)。
實施例B1373-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]丙酸 MS m/z(ESIMH+)292.1實施例B138(E)-2-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-1-乙烯基甲基碸 MS m/z(ESIMH+)324.1實施例B139
1-{4-[2-(甲基磺醯基)乙基]苄基}異喹啉 MS m/z(ESIMH+)326.1實施例B1402-苯甲醯基-6，7-二甲氧基-1，2-二氫-1-異喹啉腈 將氰化鉀(1.0g，16mmol)水溶液(2.3ml)和苯甲醯氯(1.1ml，9.5mmol)加到6，7-二甲氧基異喹啉(1.0g，5.3mmol)的二氯甲烷(6.0ml)溶液中，其是根據Tetrahedron，37(23)，3977(1981)合成的，並將該反應混合物在加熱回流下攪拌2小時。將反應混合物冷卻至室溫，用硅藻土過濾，並用二氯甲烷和水洗滌。分出濾液之後，二氯甲烷層依次用水，2N鹽酸，水，及2N氫氧化鈉洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(573mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)3.92(3H，s)，3.94(3H，s)，5.99(1H，d)，6.51-6.55(2H，m)，6.73(1H，s)，6.85(1H，s)，7.45-7.49(2H，m)，7.53-7.56(1H，m)，7.58-7.61(2H，m)實施例B1411-(4-丁基苄基)-6，7-二甲氧基異喹啉 按與實施例B2相同的方式，通過處理實施例B140的化合物與實施例B1的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.90(3H，t)，1.27-1.36(2H，m)，1.51-1.58(2H，m)，2.54(2H，t)，3.88(3H，s)，4.01(3H，s)，4.57(2H，s)，7.05(1H，s)，7.07(2H，d)，7.19(2H，d)，7.32(1H，s)，7.43(1H，d)，8.37(1H，d)
實施例B1421-(3-甲氧基苯基)-2-硝基-1-乙醇 將氫氧化鈉水溶液(1.5g氫氧化鈉(37mmol)溶解於15ml水)滴加到間甲氧基苯甲醛(5.0g，37mmol)與硝基甲烷(4.0ml，73mmol)的甲醇(50ml)溶液中，同時保持溶液的溫度不高於30℃。然後將反應混合物在室溫下攪拌4小時。在冰上冷卻之後，加入乙酸水溶液(將冰醋酸(37mmol)溶解於250ml水)，所得反應混合物用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯層依次用水和5％的碳酸氫鈉水溶液洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(6.09g)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)3.83(3H，s)，4.52(1H，dd)，4.61(1H，dd)，4.76-4.78(1H，m)，5.44-5.48(1H，m)，6.90(1H，dd)，6.96-6.98(2H，m)，7.25-7.34(1H，m)實施例B1432-氨基-1-(3-甲氧基苯基)-1-乙醇 將鈀-碳(10％，0.64g)和甲酸銨(4.8g)加到實施例B142的化合物(3.0g，15mmol)於四氫呋喃(43ml)和甲醇(43ml)的混合溶液中，並將該混合物在室溫下攪拌18小時。濾出催化劑，用乙醚稀釋濾液，通過過濾除去沉澱物，並濃縮所得濾液，進而得到標題化合物(1.82g)。該化合物無需純化即可用於下列反應。
實施例B1442-(4-丁基苯基)乙酸 將亞硫醯氯(4.7ml，66mmol)滴加到4-正丁基苄基醇(9.6g，59mmol)的乙醚(120ml)溶液中，並將該混合物在室溫下攪拌2小時。減壓下除去溶劑，並通過用苯共沸蒸餾除去過量的亞硫醯氯。將剩餘物溶解於二甲基亞碸(50ml)，向該溶液中加入氰化鈉(86g，1.8mol)和四正丁基碘化銨(2.2g，5.9mmol)，並將所得混合物在室溫下攪拌16小時。加水，並用乙酸乙酯萃取該混合物。乙酸乙酯層依次用水及飽和的鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到正丁基苯基乙腈(8.2g)，其為黃色的油狀物。下一步，將濃硫酸(48ml)滴加到水(58ml)中，並將該溶液冷卻至50℃，將上面得到的正丁基苯基乙腈(8.2g)滴加到該溶液中。將所得混合物在加熱回流下攪拌16小時。冷卻至室溫之後，通過過濾收集沉澱的結晶，用水洗滌，並將其溶解於0.1N的氫氧化鈉水溶液(200ml)中。加入蘇長巖(Norit)(5g)，並將該混合物攪拌回流2小時。通過硅藻土濾出蘇長巖之後，將濾液冷卻至室溫並用1N鹽酸酸化，以沉澱結晶。通過過濾收集沉澱的介晶，用水洗滌，並乾燥，得到標題化合物(3.5g)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.93(3H，t)，1.30-1.40(2H，m)，1.53-1.62(2H，m)，2.59(2H，t)，3.62(2H，s)，7.15(2H，d)，7.20(2H，d)在NMR光譜中未發現羧基的OH。
實施例B145N-[2-羥基-2-(3-甲氧基苯基)乙基]-2-(4-丁基苯基)-乙醯胺 將亞硫醯氯(0.76ml，10mmol)加到實施例B144的化合物(1.0g，5.2mmol)的苯(10ml)溶液中，並將該混合物回流攪拌2小時。濃縮之後，通過苯的共沸蒸餾除去過量的亞硫醯氯。將所得剩餘物與實施例B143的化合物(0.87g，5.2mmol)溶解於乙醚(5ml)，向其中加入氫氧化鈉水溶液(0.21g的氫氧化鈉溶解於4.2ml水)，並在室溫下劇烈攪拌該混合物30分鐘。分出乙醚層並減壓濃縮，得到標題化合物(600mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.94(3H，t)，1.31-1.40(2H，m)，1.57-1.63(2H，m)，2.60(2H，m)，3.30-3.37(1H，m)，3.56(2H，s)，3.60-3.66(1H，m)，3.80(3H，s)，3.81(1H，d)，4.79-4.81(1H，m)，6.80-6.89(3H，m)，7.10(2H，d)，7.16(2H，d)，7.20-7.25(1H，m)實施例B1461-(4-丁基苄基)-6-甲氧基異喹啉 將三氯氧磷(1.6ml)加到實施例B145的化合物(600mg，1.7mmol)的乙腈(15ml)溶液中，並將該混合物回流攪拌1小時30分鐘。將該混合物在冰上冷卻，用5％的碳酸氫鈉水溶液使之呈鹼性，用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(82mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.27-1.36(2H，m)，1.50-1.58(2H，m)，2.53(2H，t)，3.92(3H，s)，4.57(2H，s)，7.05-7.07(3H，m)，7.13-7.18(3H，m)，7.45(1H，d)，8.06(1H，d)，8.41(1H，d)實施例1471-(4-丁基苄基)-6-異喹啉醇 將47％的氫溴酸溶液加到實施例B146的化合物(82mg)中，並將該混合物回流攪拌19小時。將該混合物減壓濃縮，加水，並將所得混合物用碳酸鈉中和，以沉澱結晶。濾集所得結晶，用水洗滌，然後乾燥，得到標題化合物(74mg)。
1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.25-1.34(2H，m)，1.49-1.57(2H，m)，2.52(2H，t)，4.63(2H，s)，7.03-7.13(6H，m)，7.49(1H，d)，8.10(1H，d)，8.18(1H，d)實施例B1481-(4-丁基苄基)-6-丙氧基異喹啉 將碳酸銀(40mg，0.14mmol)加到實施例B147的化合物(20mg，0.069mmol)與1-碘丙烷(0.4ml，4.1mmol)的甲苯(1.0ml)溶液中，並於暗處將該混合物在50℃下攪拌4小時。冷卻至室溫之後，將該混合物通過硅藻土過濾，並用甲苯與甲醇(9∶1)的混合溶液洗滌。將所得濾液減壓濃縮，並將所得剩餘物用矽膠柱色譜進行純化，得到標題化合物(13mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.90(3H，t)，1.08(3H，t)，1.30-1.33(2H，m)，1.51-1.57(2H，m)，1.86-1.91(2H，m)，2.54(2H，t)，4.05(2H，t)，4.58(2H，s)，7.05-7.07(3H，m)，7.14-7.18(3H，m)，7.43-7.44(1H，m)，8.05-8.07(1H，m)，8.40-8.41(1H，m)實施例B1491-(4-丁基苄基)-6-(2-哌啶子基乙氧基)異喹啉 按與實施例148相同的方式，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.26-1.36(2H，m)，1.46-1.57(8H，m)，2.50-2.54(6H，m)，2.83-2.86(2H，m)，4.23(2H，t)，4.56(2H，s)，7.04-7.06(3H，m)，7.13-7.17(3H，m)，7.43(1H，d)，8.04(1H，d)，8.40(1H，d)實施例B150N-({[1-(4-丁基苄基)-6-異喹啉基]氧基}乙基)-N，N-二甲基胺 按與實施例148相同的方式，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.26-1.36(2H，m)，1.49-1.57(2H，m)，2.37(6H，s)，2.52(2H，t)，2.80(2H，t)，4.19(2H，t)，4.57(2H，s)，7.04-7.06(3H，m)，7.15-7.19(3H，m)，7.43(1H，d)，8.05(1H，d)，8.40(1H，d)實施例B1512-苯甲醯基-7-甲氧基-1，2-二氫-1-異喹啉腈 按與實施例B140相同的方式處理7-甲氧基異喹啉(其是根據Tetrahedron，27，1253(1971)合成的)，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)3.87(3H，s)，6.03(1H，brd)，6.56-6.54(2H，m)，6.90(1H，s)，6.95(1H，dd)，7.17(1H，d)，7.46-7.50(2H，m)，7.54-7.62(3H，m)實施例B1521-(4-丁基苄基)-7-甲氧基異喹啉 按與實施例B2相同的方式，通過處理實施例B1的化合物與實施例B151的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.27-1.36(2H，m)，1.56-1.58(2H，m)，2.55(2H，t)，3.82(3H，s)，4.59(2H，s)，7.07(2H，d)，7.20(2H，d)，7.26-7.29(1H，m)，7.35(1H，d)，7.49(1H，d)，7.70(1H，d)，8.38-8.40(1H，m)實施例B1531-(4-溴苄基)-7-甲氧基異喹啉 按與實施例B2相同的方式，通過處理實施例B31的化合物與實施例B151的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)3.84(3H，s)，4.57(2H，s)，7.14-7.16(2H，m)，7.26(1H，s)，7.29-7.32(1H，m)，7.37-7.39(2H，m)，7.51(1H，d)，7.73(1H，d)，8.39(1H，d)實施例B1541-(4-丁基苄基)-7-異喹啉醇 按與實施例B147相同的方式，通過處理實施例B152的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)0.83(3H，t)，1.21-1.26(2H，m)，1.44-1.48(2H，m)，4.68(2H，s)，7.11(2H，d)，7.18(2H，d)，7.59-7.62(2H，m)，8.10-8.17(2H，m)，8.38(1H，d)，10.9(1H，brs)(丁基的兩個亞甲基質子與DMSO信號重疊，不能觀測到)實施例B1551-(4-丁基苄基)-7-異喹啉基三氟甲磺酸酯 將4-硝基苯酚三氟甲磺酸酯(0.72g，2.7mmol)(其是根據J.Org.Chem.，64，7638(1999)合成的)，及碳酸鉀(1.1g，8.1mmol)加到實施例B154的化合物(1.0g，2.7mmol)的二甲基甲醯胺(30ml)溶液中，並將該混合物在室溫下攪拌2小時。加水之後，所的混合物用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯層用1N的氫氧化鈉及飽和的鹽水洗滌，用硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(1.0g)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.90(3H，t)，1.27-1.37(2H，m)，1.51-1.59(2H，m)，2.54(2H，t)，5.10(2H，s)，6.38(1H，s)，6.95(2H，d)，7.04(2H，d)，7.44(1H，d)，7.55(1H，d)，7.75(1H，d)，8.45(1H，d)實施例B1561-(4-丁基苄基)-7-異喹啉腈 在氮氣氛下，將氰化鋅(215mg，1.8mmol)，四(三苯基膦)合鈀(41mg，0.035mmo1)，及氯化鋰(120mg，2.8mmol)加到實施例B155的化合物(400mg，0.95mmol)的二甲基甲醯胺(2ml)溶液中，並將該混合物在120℃下攪拌2小時。冷卻至室溫之後，加入飽和的碳酸氫鈉，並用乙酸乙酯萃取所得的混合物。乙酸乙酯層用飽和鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(71mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.26-1.35(2H，m)，1.47-1.55(2H，m)，2.50(2H，t)，4.91(2H，s)，6.97(2H，d)，7.07(2H，d)，7.28-7.31(1H，m)，7.42(1H，d)，7.51(1H，d)，7.74(1H，d)，8.34(1H，d)實施例B1571-(4-丁基苄基)-7-[2-(1，1，1-三甲基甲矽烷基)-1-乙炔基]-異喹啉 將乙酸鈀(11mg，0.047mmol)，1，1′-雙(二苯基膦)二茂鐵(72mg，0.13mmol)，及氯化鋰(25mg，0.59mmol)加到實施例B155的化合物(100mg，0.24mmol)與三甲基甲矽烷基乙炔(65μl，0.47mmol)的二甲基甲醯胺(3.0ml)溶液中，將該反應體系用氮氣吹洗。加入三乙胺(59μl，0.43mmol)和碘化銅(2mg，0.018mmol)，並將該混合物在80℃下攪拌21小時，然後冷卻至室溫。加入水和乙酸乙酯進行分配，乙酸乙酯層用水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(7.0mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.28-0.32(9H，m)，0.92(3H，t)，1.32-1.38(2H，m)，1.54-1.57(2H，m)，2.57(2H，t)，4.63(2H，s)，7.10(2H，d)，7.20(2H，d)，7.52(1H，d)，7.67-7.69(1H，m)，7.75(1H，d)，8.34(1H，d)，8.51(1H，d)實施例B1581-(4-丁基苄基)-7-(1-乙炔基)異喹啉 將碳酸鉀(13mg，0.094mmol)加到實施例B157的化合物(6mg，0.016mmol)的甲醇(1.0ml)溶液中，並將該混合物在室溫下攪拌1小時。減壓濃縮之後，所得剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(3.0mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.91(3H，t)，1.29-1.38(2H，m)，1.52-1.57(2H，m)，2.55(2H，t)，3.19(1H，s)，4.62(2H，s)，7.09(2H，d)，7.20(2H，d)，7.53(1H，d)，7.67-7.69(1H，m)，7.77(1H，d)，8.36(1H，s)，8.52(1H，d)實施例B1591-(4-丁基苄基)-7-乙基異喹啉 將鈀-碳(10％，5.0mg)加到實施例B158的化合物(2.0mg)的四氫呋喃(2.0ml)溶液中，並將該混合物在氮氣氛(1atm)下於室溫攪拌1小時。濾除催化劑，並濃縮濾液。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(0.21mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(6H，t)，1.25-1.32(2H，m)，1.48-1.57(2H，m)，2.53(2H，t)，2.80(2H，q)，4.62(2H，s)，7.06(2H，d)，7.20(2H，d)，7.49-7.52(2H，m)，7.73(1H，d)，7.95(1H，s)，8.43(1H，d)實施例B1601-(4-丁基苄基)-7-[4-(四氫-2H-2-吡喃氧基)-1-丁炔基]-異喹啉 將乙酸鈀(11mg，0.047mmol)，1，1′-雙(二苯基膦)二茂鐵(72mg，0.13mmol)，及氯化鋰(25mg，0.59mmol)加到實施例B155的化合物(100mg，0.24mmol)與2-(3-丁炔氧基)四氫-2H-吡喃(73mg，0.47mmol)的二甲基甲醯胺(3.0ml)溶液中，並用氮氣吹洗該反應體系。同時，加入三乙胺(59μl，0.43mmol)和碘化銅(2mg，0.018mmol)，並將所的混合物在80℃下攪拌24小時。將該混合物冷卻至室溫，加水，並用乙酸乙酯萃取所得的混合物。乙酸乙酯層用水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(25mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.90(3H，t)，1.28-1.38(2H，m)，1.52-1.67(6H，m)，1.72-1.79(1H，m)，1.79-1.88(1H，m)，2.54(2H，t)，2.78(2H，t)，3.53-3.56(1H，m)，3.66-3.72(1H，m)，3.91-3.99(2H，m)，4.60(2H，s)，4.71-4.73(1H，m)，7.08(2H，d)，7.19(2H，d)，7.50(1H，d)，7.59-7.62(1H，m)，7.72(1H，d)，8.24(1H，s)，8.48(1H，d)實施例B1614-[1-(4-丁基苄基)-7-異喹啉基]-3-丁炔-1-醇 按與實施例B29相同的方式，通過處理實施例B160的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.27-1.39(2H，m)，1.51-1.57(2H，m)，1.83(1H，brs)，2.55(2H，t)，2.75(2H，t)，3.84-3.89(2H，m)，4.60(2H，s)，7.08(2H，d)，7.18(2H，d)，7.50(1H，d)，7.60-7.62(1H，m)，7.73(1H，d)，8.25(1H，s)，8.48(1H，d)實施例B1624-[1-(4-丁基苄基)-7-異喹啉基]-1-丁醇 按與實施例B30相同的方式，通過處理實施例B161的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.28-1.36(2H，m)，1.50-1.59(4H，m)，1.67-1.77(3H，m)，2.53(2H，t)，2.79(2H，t)，3.63(2H，t)，4.62(2H，s)，7.06(2H，d)，7.18(2H，d)，7.47-7.52(2H，m)，7.73(1H，d)，7.92(1H，s)，8.43(1H，d)實施例B1631-(4-丁基苄基)-7-丙氧基異喹啉 按與實施例B148相同的方式，通過處理實施例B154的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.90(3H，t)，1.05(3H，t)，1.27-1.36(2H，m)，1.50-1.56(2H，m)，1.76-1.84(2H，m)，2.53(2H，t)，3.92(2H，t)，4.58(2H，s)，7.06(2H，d)，7.19(2H，d)，7.26-7.29(1H，m)，7.34(1H，d)，7.48(1H，d)，7.70(1H，d)，8.38(1H，d)實施例B1641-(4-丁基苄基)-7-(2-哌啶子基乙氧基)異喹啉 按與實施例B148相同的方式，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.27-1.36(2H，m)，1.43-1.58(4H，m)，1.61-1.69(4H，m)，2.51-2.55(6H，m)，2.79(2H，t)，4.11(2H，t)，4.57(2H，s)，7.06(2H，d)，7.18(2H，d)，7.28-7.30(1H，m)，7.36(1H，d)，7.48(1H，d)，7.70(1H，d)，8.38(1H，d)實施例B165N-(2-{[1-(4-丁基苄基)-7-異喹啉基]氧基}乙基)-N，N-二甲基胺 按與實施例B148相同的方式，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.27-1.36(2H，m)，1.50-1.57(2H，m)，2.35(6H，s)，2.53(2H，t)，2.75(2H，t)，4.06(2H，t)，4.58(2H，s)，7.06(2H，d)，7.18(2H，d)，7.30-7.33(1H，m)，7.36(1H，d)，7.48(1H，d)，7.70(1H，d)，8.39(1H，d)實施例B1661-(4-丁基苄基)-7-異喹啉基-(2-嗎啉基乙基)醚 按與實施例B148相同的方式，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.27-1.36(2H，m)，1.50-1.58(2H，m)，2.51-2.58(6H，m)，2.81(2H，t)，3.75(4H，t)，4.11(2H，t)，4.58(2H，s)，7.06(2H，d)，7.17(2H，d)，7.28-7.31(1H，m)，7.35(1H，d)，7.49(1H，d)，7.71(1H，d)，8.39(1H，d)實施例B1677-(苄氧基)-1-(4-丁基苄基)異喹啉 按與實施例B148相同的方式，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.27-1.36(2H，m)，1.50-1.54(2H，m)，2.54(2H，t)，4.54(2H，s)，5.06(2H，s)，7.05(2H，d)，7.14(2H，d)，7.34-7.43(7H，m)，7.49(1H，d)，7.72(1H，d)，8.39(1H，d)實施例B1681-(4-丁基苄基)-7-(2-吡啶基甲氧基)異喹啉 按與實施例B 148相同的方式，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.27-1.36(2H，m)，1.49-1.57(2H，m)，2.52(2H，t)，4.51(2H，s)，5.25(2H，s)，7.02(2H，d)，7.14(2H，d)，7.24-7.27(1H，m)，7.40(1H，dd)，7.47-7.50(3H，m)，7.68-7.72(1H，d)，7.74(1H，d)，8.39(1H，d)，8.64-8.66(1H，m)實施例B1691-(4-丁基苄基)-7-(3-吡啶基甲氧基)異喹啉 按與實施例B148相同的方式，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.27-1.36(2H，m)，1.50-1.58(2H，m)，2.54(2H，t)，4.57(2H，s)，5.06(2H，s)，7.07(2H，d)，7.15(2H，d)，7.31-7.36(2H，m)，7.42(1H，d)，7.51(1H，d)，7.74-7.76(2H，m)，8.42(1H，d)，8.61-8.62(1H，m)，8.69-8.70(1H，m)實施例B1701-(4-丁基苄基)-7-(4-吡啶基甲氧基)異喹啉 按與實施例B148相同的方式，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.27-1.36(2H，m)，1.50-1.56(2H，m)，2.54(2H，t)，4.53(2H，s)，5.09(2H，s)，7.04(2H，d)，7.09(2H，d)，7.33-7.39(4H，m)，7.51(1H，d)，7.76(1H，d)，8.41(1H，d)，8.63-8.64(2H，m)實施例B1711-(4-丁基苄基)-7-[(2-甲氧基苄基)氧基]異喹啉 按與實施例B148相同的方式，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.27-1.36(2H，m)，1.50-1.57(2H，m)，2.53(2H，t)，3.82(3H，s)，4.52(2H，s)，5.04(2H，s)，6.88-6.91(1H，m)，6.99-7.02(2H，m)，7.05(2H，d)，7.14(2H，d)，7.32(1H，t)，7.36(1H，dd)，7.43(1H，d)，7.48(1H，d)，7.72(1H，d)，8.39(1H，d)實施例B1721-(4-丁基苄基)-7-[(3-甲氧基苄基)氧基]異喹啉 按與實施例B148相同的方式，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.27-1.36(2H，m)，1.50-1.56(2H，m)，2.53(2H，t)，3.90(3H，s)，4.53(2H，s)，5.16(2H，s)，6.93-6.98(2H，m)，7.03(2H，d)，7.15(2H，d)，7.30-7.35(1H，m)，7.37(1H，dd)，7.41-7.43(1H，m)，7.47(1H，d)，7.51(1H，d)，7.71(1H，d)，8.37(1H，d)實施例B1731-(4-丁基苄基)-7-[(4-甲氧基苄基)氧基]異喹啉 按與實施例B148相同的方式，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.27-1.37(2H，m)，1.51-1.57(2H，m)，2.54(2H，t)，3.83(3H，s)，4.55(2H，s)，4.99(2H，s)，6.93(2H，d)，7.06(2H，d)，7.15(2H，d)，7.32-7.36(3H，m)，7.44(1H，d)，7.48(1H，d)，7.71(1H，d)，8.38(1H，d)實施例B1747-(1，3-苯並二氧戊環(Benzodioxol)-5-基甲氧基)-1-(4-丁基苄基)異喹啉 按與實施例B148相同的方式，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.27-1.37(2H，m)，1.51-1.57(2H，m)，2.54(2H，t)，4.55(2H，s)，4.95(2H，s)，5.98(2H，s)，6.82(1H，d)，6.88(1H，dd)，6.92(1H，d)，7.06(2H，d)，7.15(2H，d)，7.33(1H，dd)，7.42(1H，d)，7.48(1H，d)，7.72(1H，d)，8.39(1H，d)實施例B1751-(4-丁基苄基)-7-[(2-硝基苄基)氧基]異喹啉 按與實施例B148相同的方式，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.87(3H，t)，1.26-1.34(2H，m)，1.48-1.56(2H，m)，2.51(2H，t)，4.53(2H，s)，5.49(2H，s)，7.03(2H，d)，7.14(2H，d)，7.40(1H，dd)，7.430-7.434(1H，m)，7.45-7.49(1H，m)，7.51(1H，d)，7.64-7.68(1H，m)，7.76(1H，d)，7.85-7.87(1H，m)，8.22-8.24(1H，d)，8.41(1H，d)實施例B1761-(4-丁基苄基)-7-[(3-硝基苄基)氧基]異喹啉 按與實施例B148相同的方式，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.27-1.36(2H，m)，1.50-1.56(2H，m)，2.54(2H，t)，4.55(2H，s)，5.14(2H，s)，7.05(2H，d)，7.11(2H，d)，7.37-7.40(2H，m)，7.51(1H，d)，7.55-7.59(1H，m)，7.73-7.78(2H，m)，8.19-8.22(1H，m)，8.32-8.33(1H，m)，8.42(1H，d)實施例B1771-(4-丁基苄基)-7-(苯乙氧基)異喹啉 按與實施例B148相同的方式，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.26-1.36(2H，m)，1.49-1.57(2H，m)，2.52(2H，t)，3.10(2H，t)，4.18(2H，t)，4.56(2H，s)，7.04(2H，d)，7.16(2H，d)，7.26-7.28(4H，m)，7.33-7.35(3H，m)，7.48(1H，d)，7.70(1H，d)，8.38-8.39(1H，m)實施例B178
1-(4-丁基苄基)-7-(3-苯基丙氧基)異喹啉 按與實施例B148相同的方式，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.27-1.36(2H，m)，1.49-1.57(2H，m)，2.09-2.15(2H，m)，2.52(2H，t)，2.82(2H，t)，3.97(2H，t)，4.55(2H，s)，7.04(2H，d)，7.16(2H，d)，7.20-7.23(3H，m)，7.27-7.33(4H，m)，7.48(1H，d)，7.70(1H，d)，8.38(1H，d)實施例B1791-(4-丁基苄基)-7-(2-環己基乙氧基)異喹啉 按與實施例B148相同的方式，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，0.94-1.02(2H，m)，1.17-1.36(4H，m)，1.36-1.57(4H，m)，1.65-1.76(7H，m)，2.53(2H，t)，3.98(2H，t)，4.58(2H，s)，7.06(2H，d)，7.19(2H，d)，7.25-7.28(1H，m)，7.33(1H，d)，7.47(1H，d)，7.69(1H，d)，8.37(1H，d)實施例B1806-苯甲醯基-5，6-二氫[1，3]二氧戊環[4，5-g]異喹啉-5-腈 按與實施例B140相同的方式，通過處理[1，3]二氧戊環[4，5-g]異喹啉，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)5.94-5.96(1H，m)，6.03(1H，d)，6.04(1H，d)，6.47-6.54(2H，m)，6.70(1H，s)，6.83(1H，s)，7.45-7.49(2H，m)，7.54-7.62(3H，m)實施例B1815-(4-丁基苄基)[1，3]二氧戊環[4，5-g]異喹啉 按與實施例B2相同的方式，通過處理實施例B180的化合物與實施例B1的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.90(3H，t)，1.28-1.37(2H，m)，1.51-1.57(2H，m)，2.54(2H，t)，4.50(2H，s)，6.05(2H，s)，7.05-7.07(3H，m)，7.16(2H，d)，7.38(7.40(2H，m)，8.35(1H，d)實施例B1822-苯甲醯基-6-溴-1，2-二氫-1-異喹啉腈 按與實施例B140相同的方式，通過處理6-溴異喹啉(其是根據J.Am.Chem.Soc.，183(1942)合成的)，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)6.01(1H，d)，6.53(1H，brs)，6.70(1H，brd)，7.24(1H，d)，7.33(1H，d)，7.47-7.51(3H，m)，7.56(3H，m)實施例B1836-溴-1-(4-丁基苄基)異喹啉 按與實施例B2相同的方式，通過處理實施例B182的化合物與實施例B1的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.27-1.36(2H，m)，1.50-1.58(2H，m)，2.53(2H，t)，4.60(2H，s)，7.06(2H，d)，7.15(2H，d)，7.46(1H，d)，7.59(1H，q)，7.98(1H，d)，8.02(1H，d)，8.51(1H，d)實施例B1842-苯甲醯基-5-溴-1，2-二氫-1-異喹啉腈與2-苯甲醯基-7-溴-1，2-二氫-1-異喹啉腈的混合物 按與實施例B140相同的方式，通過處理5-或7-溴異喹啉(其是根據J.Am.Chem.Soc.，61，183(1939)合成的)，得到標題化合物。所得化合物無需分離與純化即可用於下列反應。
實施例B1857-溴-1-(4-丁基苄基)異喹啉 按與實施例B2相同的方式，通過處理實施例B184的化合物與實施例B1的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.90(3H，t)，1.28-1.37(2H，m)，1.51-1.58(2H，m)，2.55(2H，t)，4.58(2H，s)，7.09(2H，d)，7.18(2H，d)，7.51-7.53(1H，m)，7.69-7.70(2H，m)，8.33-8.34(1H，m)，8.52(1H，d)實施例B1865-苯甲醯基-4，5-二氫噻吩並[3，2-c]吡啶-4-腈 按與實施例B140相同的方式，通過處理噻吩並[3，2-c]吡啶(其是根據J.Heterocycl.Chem.，30，183(1993)合成的)，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)6.05(1H，d)，6.57(1H，brd)，6.66(1H，s)，7.07(1H，d)，7.32(1H，d)，7.46-7.50(2H，m)，7.54-7.62(3H，m)實施例B1874-(4-丁基苄基)噻吩並[3，2-c]吡啶 按與實施例B2相同的方式，通過處理實施例B186的化合物與實施例B1的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.90(3H，t)，1.27-1.37(2H，m)，1.51-1.59(2H，m)，2.54(2H，t)，4.47(2H，s)，7.07(2H，d)，7.19(2H，d)，7.42(1H，d)，7.47(1H，dd)，7.68(1H，d)，8.41(1H，d)實施例B1884-(4-甲氧基苄基)噻吩並[3，2-c]吡啶 按與實施例B2相同的方式，通過處理實施例B186的化合物與4-甲氧基苄基氯，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)3.75(3H，s)，4.44(2H，s)，6.79-6.82(2H，m)，7.19-7.22(2H，m)，7.43(1H，d)，7.46(1H，dd)，7.68(1H，d)，8.41(1H，d)實施例B1894-(噻吩並[3，2-c]吡啶-4-基甲基)苯基三氟甲磺酸酯 將三溴化硼的二氯甲烷溶液(1.0M，10ml，10mmol)滴加到冷卻至0℃的實施例B188的化合物(510mg，2.0mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中，並將反應混合物在該溫度下攪拌1.5小時。通過加入飽和的碳酸氫鈉水溶液使該反應混合物呈弱鹼性，用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。將所得剩餘物溶解於吡啶，並將所得溶液冷卻至0℃。向其中滴加三氟甲磺酸酐(0.34ml，2.1mmol)之後，將混合物在該溫度下攪拌2小時，倒在冰上，用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(312mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)4.52(2H，s)，7.16-7.18(2H，m)，7.36(2H，m)，7.43-7.44(1H，m)，7.49(1H，d)，7.73(1H，d)，8.42(1H，d)
實施例B1904-(4-溴苄基)噻吩並[3，2-c]吡啶 按與實施例B2相同的方式，通過處理實施例B186的化合物與實施例B31的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)4.45(2H，s)，7.14-7.16(2H，m)，7.37-7.39(2H，m)，7.41-7.43(1H，m)，7.45(1H，d)，7.71(1H，d)，8.41(1H，d)實施例B1914-(4-溴-2-氟苄基)噻吩並[3，2-c]吡啶 按與實施例B2相同的方式，通過處理實施例B186的化合物與4-溴-2-氟苄基溴，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)4.46(2H，s)，7.11(1H，t)，7.15-7.18(1H，m)，7.22-7.25(1H，m)，7.47(1H，d)，7.49(1H，d)，7.71(1H，d)，8.41(1H，d)實施例B1924-{4-[4-(四氫-2H-2-吡喃氧基)-1-丁炔基]苄基}噻吩並[3，2-c]吡啶 按與實施例B42相同的方式，通過處理實施例B1 89的化合物與2-(3-丁炔氧基)四氫-2H-吡喃，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.40-1.90(6H，m)，2.69(2H，t)，3.45-3.65(2H，m)，3.78-3.95(2H，m)，4.48(2H，s)，4.66-4.69(1H，m)，7.18(2H，d)，7.27(2H，d)，7.41(1H，d)，7.44(1H，d)，7.70(1H，d)，8.41(1H，d)。
實施例B1934-[4-(噻吩並[3，2-c]吡啶-4-基甲基)苯基]-3-丁炔-1-醇 按與實施例B47相同的方式，通過處理實施例B192的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)2.67(2H，t)，3.79(2H，t)，4.50(2H，s)，7.20(2H，d)，7.32(2H，d)，7.41(1H，d)，7.44(1H，d)，7.71(1H，d)，8.42(1H，d)。
在NMR光譜中未觀察到羥基的質子。
實施例B1946-苯甲醯基-6，7-二氫噻吩並[2，3-c]吡啶-7-腈 按與實施例B140相同的方式，通過處理噻吩並[2，3-c]吡啶(其是根據J.Heterocycl.Chem.，30，183(1993)合成的)，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)6.07(1H，d)，6.56(1H，brd)，6.75(1H，s)，6.97(1H，d)，7.37(1H，d)，7.46-7.51(2H，m)，7.54-7.64(3H，m)實施例B1957-(4-丁基苄基)噻吩並[2，3-c]吡啶 按與實施例B2相同的方式，通過處理實施例B194的化合物與實施例B1的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.90(3H，t)，1.28-1.37(2H，m)，1.51-1.59(2H，m)，2.55(2H，t)，4.40(2H，s)，7.09(2H，d)，7.28(2H，d)，7.34(1H，d)，7.57(1H，d)，7.62(1H，d)，8.47(1H，d)實施例B196
7-(4-甲氧基苄基)噻吩並[2，3-c]吡啶 按與實施例B2相同的方式，通過處理實施例B194的化合物與4-甲氧基苄基氯，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)3.76(3H，s)，4.38(2H，s)，6.81-6.83(2H，m)，7.28-7.30(2H，m)，7.35(1H，d)，7.57(1H，d)，7.62(1H，d)，8.47(1H，d)實施例B1974-(噻吩並[2，3-c]吡啶-7-基甲基)苯基三氟甲磺酸酯 按與實施例B1相同的方式89，通過處理實施例B196的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)4.44(2H，s)，7.17-7.19(2H，m)，7.38-7.40(1H，m)，7.44-7.46(2H，m)，7.61(1H，d)，7.65-7.67(1H，m)，8.47-8.49(1H，m)實施例B1987-(4-溴苄基)噻吩並[2，3-c]吡啶 按與實施例B2相同的方式，通過處理實施例B194的化合物與實施例B31的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)4.37(2H，s)，7.23-7.25(2H，m)，7.37(1H，d)，7.39-7.41(2H，m)，7.59(1H，d)，7.63-7.65(1H，m)，8.47(1H，d)實施例B1997-(4-溴-2-氟苄基)噻吩並[2，3-c]吡啶 按與實施例B2相同的方式，通過處理實施例B194的化合物與4-溴-2-氟苄基溴，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)4.40-4.41(2H，m)，7.12-7.20(2H，m)，7.23-7.26(1H，m)，7.37-7.39(1H，m)，7.59-7.62(1H，m)，7.65-7.67(1H，m)，8.45-8.47(1H，m)實施例B2007-{4-[4-(四氫-2H-2-吡喃氧基)-1-丁炔基]苄基}噻吩並[2，3-c]吡啶 按與實施例B42相同的方式通過處理實施例B197的化合物與2-(3-丁炔氧基)四氫-2H-吡喃，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.50-1.90(6H，m)，2.69(2H，t)，3.49-3.54(1H，m)，3.58-3.65(1H，m)，3.85-3.95(2H，m)，4.41(2H，s)，4.68(1H，t)，7.26-7.31(4H，m)，7.36(1H，d)，7.58(1H，d)，7.63(1H，d)，8.47(1H，d)。
實施例B2014-[4-(噻吩並[2，3-c]吡啶-7-基甲基)苯基]-3-丁炔-1-醇 按與實施例B47相同的方式，通過處理實施例B200的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.99(1H，brs)，2.67(2H，t)，3.79(2H，t)，4.42(2H，s)，7.27-7.34(4H，m)，7.36(1H，d)，7.59(1H，d)，7.64(1H，d)，8.47(1H，d)。
實施例B2022-氯-3-(甲氧基甲氧基)吡啶 在氮氣氛下，將氫化鈉(66％，633mg，17.4mmol)加到冰冷卻的2-氯-3-羥基吡啶(2.05g，15.8mmol)的四氫呋喃(30ml)溶液中，並將反應混合物在該溫度下攪拌15分鐘。加入氯甲基甲基醚(1.32ml，17.4mmol)，並將所得反應混合物在該溫度下攪拌30分鐘，然後再在室溫下攪拌2小時。加水之後，將反應混合物用乙酸乙酯萃取，用飽和鹽水洗滌，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(2.44g)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)3.53(3H，s)，5.28(2H，s)，7.19(1H，dd)，7.49(1H，dd)，8.06(1H，dd)實施例B2032-氯-4-碘-3-(甲氧基甲氧基)吡啶 在氮氣氛下，將實施例B202的化合物(1.40g，8.06mmol)的乙醚(8ml)溶液滴加到冷卻至-78℃的1.51M叔丁基鋰-正戊烷溶液(8.01ml，12.1mmol)的乙醚(15ml)溶液中，並將反應混合物在該溫度下攪拌15分鐘。加碘(3.07g，12.1mmol)之後，將反應混合物逐漸溫暖至室溫。進一步加入三氟甲磺酸鈉溶液，並分出乙醚層，用飽和鹽水洗滌，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(356mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)3.73(3H，s)，5.22(2H，s)，7.69(1H，d)，7.80(1H，d)實施例B2047-氯呋喃並[2，3-c]吡啶 將三甲基甲矽烷基乙炔(28.3μl，0.201mmol)和三乙胺(59.8μl，0.429mmol)加到實施例B203的化合物(36.6mg，0.143mmol)，四(三苯基膦)合鈀(16.5mg，0.0143mmol)，及碘化銅(I)(2.7mg，0.014mmol)的二甲基甲醯胺(1.5ml)溶液中，並將該混合物在50℃下攪拌4小時。待將該混合物冷卻至室溫之後，向其中加水，並用乙酸乙酯萃取所得的混合物，用飽和鹽水洗滌，然後減壓濃縮。將剩餘物溶解於甲醇(5ml)，向其中加入碳酸鉀(100mg，0.724mmol)，並將所的混合物在室溫下攪拌1小時。加水之後，用乙醚萃取該混合物，用飽和鹽水洗滌，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(5.5mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)6.89(1H，d)，7.51(1H，d)，7.83(1H，d)，8.21(1H，d)實施例B2054-丁基苄基氯化鎂 通過加熱回流引發實施例B1的化合物(1.04g，5.69mmol)，鎂(761mg，31.3mmol)，及催化劑量的1，2-二溴乙烷的乙醚(11ml)混合溶液。移除熱源之後，以使該反應混合物保持溫和回流的方式向其中滴加實施例B1的化合物(4.16g，22.8mmol)的乙醚(60ml)溶液，並將該混合物加熱回流30分鐘。將混合物冷卻至室溫，得到標題化合物，其為0.4M的乙醚溶液。將該溶液本身用於下列反應。
實施例B2067-(4-丁基苄基)呋喃並[2，3-c]吡啶 將實施例B205的化合物(300μl，0.1mmol)加到實施例B204的化合物(5.0mg，0.033mmol)與[1，1′-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯合鎳(II)(4.5mg，0.0065mmol)的四氫呋喃(1ml)溶液中，並將該混合物在50℃下攪拌1小時。待將該混合物冷卻至室溫之後，向其中加入乙酸乙酯。將所得混合物用飽和的氯化銨水溶液及飽和的鹽水洗滌，然後減壓濃縮。剩餘物經NH-矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(2.9mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.29-1.35(2H，m)，1.50-1.58(2H，m)，2.54(2H，t)，4.40(2H，s)，6.78(1H，d)，7.08(2H，d)，7.30(2H，d)，7.40(1H，d)，7.72(1H，d)，8.34(1H，d)實施例B2077-(4-丁基苄基)-1H-吡咯並[2，3-c]吡啶 在冰冷卻下，將實施例B205的化合物(800μl，0.3mmol)加到1-氯吡咯並吡啶(19.4mg，0.127mmol)(其是根據H07-165，708A方法，由2-氯-3-氨基吡啶合成的)，及二氯(二苯基膦丙烷)合鎳(6.9mg，0.013mmol)的四氫呋喃(1ml)溶液中，並將該混合物在加熱回流下攪拌4小時。待將其冷卻至室溫之後，向其中加入乙酸乙酯。將所得混合物用飽和的氯化銨水溶液及飽和的鹽水洗滌，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(7.1mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.91(3H，t)，1.31-1.37(2H，m)，1.55-1.59(2H，m)，2.58(2H，t)，4.44(2H，s)，6.50(1H，d)，7.12(2H，d)，7.18(1H，d)，7.22(2H，d)，7.45(1H，d)，8.21(1H，d)在NMR光譜中未觀察到NH質子。
實施例B2084-(4-丁基苄基)-1-咪唑並[4，5-c]吡啶 將實施例B205的化合物(3.45ml，1.38mmol)加到1-氯咪唑並吡啶(88.6mg，0.577mmol)(其是根據J.Heterocycl.Chem.，2，196(1965)中所述的方法由4-氨基-2-氯吡啶合成的)，及二氯(二苯基膦丙烷)合鎳(31.3mg，0.0577mmol)的四氫呋喃(2ml)溶液中，並將該混合物在加熱回流下攪拌2小時。待將其冷卻至室溫之後，向其中加入乙酸乙酯。所的混合物通過矽膠過濾並減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(64.2mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.86(3H，t)，1.23-1.32(2H，m)，1.44-1.52(2H，m)，2.47(2H，t)，4.56(2H，s)，7.02(2H，d)，7.19(2H，d)，7.34(1H，d)，8.00(1H，s)，8.25-8.27(1H，m)在NMR光譜中未觀察到NH質子實施例B2094-溴-1-異喹啉醇 將溴(1.78ml，34.5mmol)加到冰冷卻的1-羥基異喹啉(5.01g，34.5mmol)的乙酸(50ml)溶液中，並將該混合物在室溫下攪拌2小時。加入水，乙酸乙酯，及四氫呋喃，並用濾紙過濾所得的反應混合物。有機層用飽和鹽水洗滌並減壓濃縮。剩餘物經乙酸乙酯與己烷的重結晶，得到標題化合物(6.19g)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)7.56(1H，s)，7.59-7.63(1H，m)，7.76-7.78(1H，m)，7.84-7.89(1H，m)，8.23-8.26(1H，m)，11.59(1H，brs)實施例B2101，4-二溴異喹啉 將實施例B209的化合物(1.40g，8.06mmol)與三溴化磷(6ml)的混合溶液在150℃下攪拌1小時，然後再加熱回流1小時。將反應混合物冷卻至室溫，倒在冰上，然後溫暖至室溫。加入乙酸乙酯，並將所的混合物用飽和鹽水洗滌且減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(845mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.76-7.80(1H，m)，7.86-7.90(1H，m)，8.19(1H，d)，8.31-8.34(1H，m)，8.48(1H，s)實施例B2114-溴-1-(4-丁基苄基)異喹啉 將實施例B205的化合物(2.5ml，1mmol)加到實施例B210的化合物(200mg，0.697mmol)與[1，1′-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯合鎳(II)(75.6mg，0.139mmol)的四氫呋喃(2ml)溶液中，並將該混合物在室溫下攪拌30分鐘。加入乙酸乙酯之後，將所得混合物依次用飽和的氯化銨水溶液，飽和的碳酸氫鈉水溶液，及飽和的鹽水洗滌，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(98mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.29-1.34(2H，m)，1.51-1.60(2H，m)，2.53(2H，t)，4.59(2H，s)，7.06(2H，d)，7.16(2H，d)，7.57-7.61(1H，m)，7.73-7.77(1H，m)，8.15-8.19(2H，m)，8.69(1H，s)實施例B2121-(4-丁基苄基)-5，6，7，8-四氫異喹啉 將實施例B211的化合物(13.0mg，0.0367mmol)溶解於乙酸乙酯與甲醇的混合溶液中(1∶1，1ml)，加入10％的鈀-碳(含50％的水，13mg)，並將該混合物在大氣壓大小的氫氣氛下於室溫攪拌12小時。待用氮氣吹洗反應體系之後，通過硅藻土濾除催化劑。將所得濾液減壓濃縮，得到標題化合物(8.8mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.90(3H，t)，1.28-1.38(2H，m)，1.52-1.59(2H，m)，1.74-1.82(4H，m)，2.55(2H，t)，2.66(2H，t)，2.81(2H，t)，4.26(2H，s)，7.07-7.15(5H，m)，8.32(1H，d)實施例B2131-[2-(苯基)苄基]異喹啉 按與實施例B2相同的方式，通過處理代替正丁基苄基氯的2-苯基苄基溴，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)4.62(2H，s)，7.05(1H，d)，7.16(1H，dd)，7.22-7.50(8H，m)，7.52(1H，d)，7.58(1H，dd)，7.65(1H，d)，7.76(1H，d)，8.47(1H，d)。
實施例B2141-[4-氟-2-(三氟甲基)苄基]異喹啉 按與實施例B2相同的方式，通過處理代替正丁基苄基氯的4-氟-2-(三氟甲基)苄基，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)4.83(2H，s)，6.87(1H，dd)，7.01(1H，ddd)，7.43(1H，dd)，7.54(1H，dd)，7.61(1H，d)，7.67(1H，dd)，7.85(1H，d)，7.96(1H，d)，8.49(1H，d)。
實施例B2151，3-苯並二氧戊環-4-基-(1-異喹啉基)甲醇 按與實施例B82相同的方式，通過處理2，3-亞甲二氧基苯甲醛，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)5.97-5.99(1H，m)，6.09(1H，brs)，6.20-6.40(1H，m)，6.54-6.60(2H，m)，6.65-6.70(2H，m)，7.52(1H，dd)，7.63(1H，d)，7.64(1H，dd)，7.84(1H，d)，8.04(1H，d)，8.53(1H，d)。
實施例B216
1，3-苯並二氧戊環-4-基-(1-異喹啉基)甲基乙酸酯 按與實施例B38相同的方式，通過處理實施例B215的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)2.23(3H，s)，5.98-6.02(2H，m)，6.74-6.79(1H，m)，6.90-6.93(1H，m)，7.15-7.19(1H，m)，7.23-7.28(1H，m)，7.58(1H，dd)，7.60(1H，d)，7.66(1H，dd)，7.83(1H，d)，8.28(1H，d)，8.57(1H，d)。
實施例B2171-(1，3-苯並二氧戊環-4-基甲基)異喹啉 按與實施例B39相同的方式，通過處理實施例B216的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)4.62(2H，s)，6.02(2H，s)，6.64-6.70(3H，m)，7.57(1H，dd)，7.58(1H，d)，7.66(1H，dd)，7.83(1H，d)，8.23(1H，d)，8.50(1H，d)。
實施例B2181-(1-萘甲基)異喹啉 按與實施例B2相同的方式，通過處理代替正丁基苄基氯的1-(氯甲基)萘，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)5.13(2H，s)，6.96(1H，d)，7.29(1H，d)，7.45-7.67(5H，m)，7.72(1H，d)，7.84-7.90(2H，m)，8.08(1H，d)，8.26(1H，d)，8.52(1H，d)。
實施例B219
3-溴苯基丁酸酯 將正丁醯氯(7.25ml)加到冰冷卻的3-溴苯酚(10.0g)的吡啶(50ml)溶液中，並將反應混合物在該溫度下攪拌3小時，然後再在室溫下攪拌3.5小時。加冰之後，將反應混合物用乙酸乙酯萃取，用1N鹽酸和水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(12.77g)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.04(3H，t)，1.72-1.82(2H，m)，2.54(2H，t)，7.04(1H，dd)，7.22-7.29(2H，m)，7.36(1H，d)。
實施例B2201-(4-溴-2-羥基苯基)-1-丁酮 在氮氣氛下，將三氯化鋁(10.51g)加到實施例B219的化合物(12.77g)的氯苯(70ml)溶液中，並將該反應混合物在加熱回流下攪拌9小時。待反應混合物冷卻至室溫之後，向其中加冰。所得混合物用乙酸乙酯萃取，用水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後減壓濃縮。如此得到的化合物無需進一步純化即可用於下面的反應。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.91(3H，t)，1.53-1.65(2H，m)，3.00(2H，t)，7.02(1H，dd)，7.19(1H，d)，7.78(1H，d)，12.50(1H，s)。
實施例B2211-(4-溴-2-甲氧基苯基)-1-丁酮 將碳酸鉀(9.07g)和碘甲烷(3.92ml)加到實施例B220的化合物(13.30g)的丙酮(75ml)溶液中，並將該反應混合物在加熱回流下攪拌4小時。用硅藻土過濾反應混合物，加入乙醚以通過過濾除去不溶物，並將濾液減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(9.52g)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.95(3H，t)，1.64-1.74(2H，m)，2.91(2H，t)，3.90(3H，s)，7.10(1H，d)，7.14(1H，dd)，7.54(1H，d)。
實施例B2224-溴-1-丁基-2-甲氧基苯 按與實施例B3相同的方式，通過處理實施例B221的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.92(3H，t)，1.29-1.39(2H，m)，1.48-1.56(2H，m)，2.54(2H，t)，3.81(3H，s)，6.95(1H，s)，6.96-7.02(2H，m)。
實施例B223(4-丁基-3-甲氧基苯基)(1-異喹啉基)酮 按與實施例B36相同的方式，通過處理實施例B222的化合物，得到包含標題化合物的混合物。
該混合物無需分離與純化即可用於下面的反應。
實施例B224(4-丁基-3-甲氧基苯基)(1-異喹啉基)甲醇 按與實施例B37相同的方式，通過處理實施例B223的化合物，得到包含標題化合物的混合物。
該混合物無需分離與純化即可用於下面的反應。
實施例B225(4-丁基-3-甲氧基苯基)(1-異喹啉基)甲基乙酸酯
按與實施例B38相同的方式，通過處理實施例B224的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.90(3H，t)，1.24-1.38(2H，m)，1.46-1.60(2H，m)，2.24(3H，s)，2.54(2H，t)，3.76(3H，s)，6.97(1H，s)，6.98(1H，d)，7.06(1H，d)，7.53-7.67(4H，m)，7.83(1H，d)，8.26(1H，d)，8.58(1H，d)。
實施例B2261-(4-丁基-3-甲氧基苄基)異喹啉 按與實施例B39相同的方式，通過處理實施例B225的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.27-1.38(2H，t)，1.45-1.54(2H，t)，2.52(2H，t)，3.72(3H，s)，4.63(2H，s)，6.78(1H，d)，6.79(1H，s)，6.99(1H，d)，7.53(1H，dd)，7.55(1H，d)，7.64(1H，dd)，7.80(1H，d)，8.19(1H，d)，8.49(1H，d)。
實施例B2272-丁基-5-(1-異喹啉基甲基)苯酚 按與實施例B40相同的方式，通過處理實施例B226的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.91(3H，t)，1.30-1.40(2H，m)，1.52-1.65(2H，m)，2.55(2H，t)，4.55(2H，s)，6.46(1H，brs)，6.85(1H，d)，7.03(1H，d)，7.32-7.40(1H，m)，7.55(1H，dd)，7.68(1H，dd)，7.81(1H，d)，7.94-8.05(1H，m)，8.14(1H，d)。
在NMR光譜中未發現酚羥基的質子。
實施例B2282-溴-3-(甲氧基甲氧基)吡啶 按與實施例B202相同的方式，利用2-溴-3-羥基吡啶合成標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)3.53(3H，s)，5.29(2H，s)，7.19-7.23(1H，m)，7.42-7.45(1H，m)，8.04-8.06(1H，m)實施例B2292-(4-丁基苄基)-3-(甲氧基甲氧基)吡啶 將實施例B205的化合物(7ml，3mmol)加到冰冷卻的實施例B228的化合物(524mg，2.40mmol)與二氯(二苯基膦丙烷)合鎳(65.0mg，0.120mmol)的四氫呋喃(10ml)溶液中，並將該混合物在加熱回流下攪拌5小時。待將其冷卻至室溫之後，加入乙酸乙酯。所得混合物依次用飽和的氯化銨水溶液，飽和的碳酸氫鈉水溶液，及飽和的鹽水洗滌，然後減壓濃縮。剩餘物通過NH-矽膠過濾。減壓濃縮之後，將剩餘物溶解於甲醇(15ml)，加入三乙胺(500μl，3.59mmol)和10％鈀-碳(含水50％，50mg)，並在大氣壓大小的氫氣氛下將所得混合物於室溫攪拌3小時。待用氮氣吹洗反應體系之後，通過硅藻土濾除催化劑，並將濾液減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(280mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89(3H，t)，1.28-1.34(2H，m)，1.52-1.58(2H，m)，2.53(2H，t)，3.33(3H，s)，4.16(2H，s)，5.16(2H，s)，7.04-7.10(3H，m)，7.20(2H，d)，7.33-7.35(1H，m)，8.19-8.20(1H，m)實施例B2302-(4-丁基苄基)-3-吡啶醇 將三氟乙酸(1ml)加到實施例B229的化合物(256mg，0.849mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中，並將該反應混合物在室溫下攪拌過夜。加入飽和的碳酸氫鈉水溶液和乙酸乙酯之後，將反應混合物用飽和鹽水洗滌並減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(182mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.90(3H，t)，1.28-1.37(2H，m)，1.51-1.58(2H，m)，2.54(2H，t)，4.20(2H，s)，7.02-7.08(4H，m)，7.22(2H，d)，8.08-8.09(1H，m)在NMR光譜中未觀察到酚羥基的質子。
實施例B2312-(4-丁基苄基)-3-甲氧基吡啶 將碳酸鉀(33.0mg，0.239mmol)和碘甲烷(14.9μl，0.239mmol)加到實施例B230的化合物(19.2mg，0.0796mmol)的丙酮(1ml)溶液中，並將該混合物在室溫下攪拌3小時。加入乙酸乙酯之後，將反應混合物用飽和鹽水洗滌並減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(1.47mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.90(3H，t)，1.32-1.34(2H，m)，1.53-1.57(2H，m)，2.54(2H，t)，3.82(3H，s)，4.14(2H，s)，7.06(2H，d)，7.10-7.11(2H，m)，7.21(2H，d)，8.12-8.14(1H，m)實施例B2322-(4-丁基苄基)-3-氯吡啶 將實施例B205的化合物(12ml，5mmol)加到冰冷卻的2，3-二氯吡啶(525mg，3.55mmol)與二氯(二苯基膦丙烷)合鎳(96.2mg，0.178mmol)的四氫呋喃(4ml)混合溶液中，並將該混合物在室溫下攪拌1小時。加入乙酸乙酯之後，將反應混合物依次用飽和的氯化銨水溶液，飽和的碳酸氫鈉水溶液，及飽和的鹽水洗滌，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(199mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.91(3H，t)，1.29-1.38(2H，m)，1.52-1.60(2H，m)，2.56(2H，t)，4.28(2H，s)，7.08-7.13(3H，m)，7.21(2H，d)，7.64(1H，dd)，8.46(1H，dd)實施例B2332-(4-丁基苄基)-3-乙基吡啶 將乙基氯化鎂(0.97M，102μl，0.993mmol)加到實施例B232的化合物(12.9mg，0.0496mmol)與二氯(二苯基膦二茂鐵)合鎳(3.4mg，0.0050mmol)的四氫呋喃(1ml)混合溶液中。將反應混合物在50℃下攪拌1小時，然後再加熱回流2小時。待將反應混合物冷卻至室溫之後，向其中加入乙酸乙酯。將反應混合物用飽和的氯化銨水溶液及飽和的鹽水洗滌，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(3.29mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.90-0.93(6H，m)，1.30-1.37(2H，m)，1.54-1.59(2H，m)，2.55-2.59(4H，m)，4.12(2H，s)，7.05-7.18(5H，m)，7.55-7.59(1H，m)，8.53-8.55(1H，m)實施例B234N-(2-溴-3-吡啶基)氨基甲酸叔丁酯 將N-溴琥珀醯亞胺(7.51g，42.2mmol)加到冰冷卻的3-氨基吡啶(3.97g，42.2mmol)的二甲基甲醯胺(25ml)混合溶液中，並將反應混合物在該溫度下攪拌30分鐘。加入乙酸乙酯之後，將反應混合物用飽和鹽水洗滌並減壓濃縮。將剩餘物的二氯甲烷(20ml)溶液在冰上冷卻，然後向該溶液中加入三乙胺(3.74ml，26.8mmol)，催化劑量的二甲基氨基吡啶，及焦碳酸二叔丁酯(3.08ml，13.4mmol)，並將該混合物在室溫下攪拌過夜。減壓濃縮之後，剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(344mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.55(9H，s)，7.03(1H，brs)，7.25(1H，dd)，8.03(1H，dd)，8.46(1H，d)實施例B235
2-溴-3-(N-叔丁氧基羰基-N-甲基)氨基吡啶 將碘甲烷(157μl，2.52mmol)與66％的氫化鈉(91.6mg，2.52mmol)加到冰冷卻的實施例B234的化合物(344mg，1.26mmol)的二甲基甲醯胺(5ml)溶液中，並將反應混合物在該溫度下攪拌40分鐘。加入乙酸乙酯之後，反應混合物用飽和鹽水洗滌並通過矽膠過濾。將有機層減壓濃縮，得到標題化合物(356mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.36(9H，s)，3.17(3H，s)，7.30(1H，dd)，7.55(1H，d)，8.30(1H，dd)實施例B236N-[2-(4-丁基苄基)-3-吡啶基]-N-甲基胺 向按與實施例B211相同的方式，通過將4-丁基苄基引入實施例B235的化合物(62.8mg，0.219mmol)中而得到的化合物的二氯甲烷溶液中(2ml)加入三氟乙酸(2ml)。將該混合物在室溫下攪拌1小時，然後將其滴加到碳酸氫鈉水溶液中。加入乙酸乙酯之後，將混合物用飽和鹽水洗滌並減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(29.7mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.91(3H，t)，1.29-1.38(2H，m)，1.53-1.60(2H，m)，2.56(2H，t)，2.72(3H，s)，3.63(1H，br s)，4.09(2H，s)，6.86(1H，d)，7.08-7.12(5H，m)，7.98(1H，dd)實施例B237N-[2-(4-丁基苄基)-3-吡啶基]-N，N-二甲基胺 將乙酸(12.1μl，0.211mmol)，37％福馬林(15.8μl，0.211mmol)，及三乙醯氧基硼氫化鈉(44.7mg，0.211mmol)加到冰冷卻的實施例B236的化合物(26.8mg，0.105mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液中，並將該混合物在室溫下攪拌30分鐘。加入乙酸乙酯之後，將混合物用飽和的碳酸氫鈉水溶液及飽和的鹽水洗滌並減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(23.3mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.91(3H，t)，1.30-1.36(2H，m)，1.52-1.59(2H，m)，2.55(2H，t)，2.67(6H，s)，4.24(2H，s)，7.06(2H，d)，7.10(1H，dd)，7.18(2H，d)，7.40(1H，dd)，8.27(1H，dd)實施例B2382-(4-丁基苄基)-4-甲氧基吡啶 按與實施例B211相同的方式，利用2-氯-4-甲氧基吡啶，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.91(3H，t)，1.31-1.37(2H，m)，1.53-1.59(2H，m)，2.57(2H，t)，3.78(3H，s)，4.06(2H，s)，6.61-6.65(2H，m)，7.11(2H，d)，7.17(2H，d)，8.36(1H，d)實施例B2392-(4-丁基苄基)-4-氯吡啶 將三氯氧磷(57.0μl，0.612mmol)加到冰冷卻的實施例B238的化合物(52.0mg，0.204mmol)的二甲基甲醯胺(1ml)溶液中，並將該反應混合物在100℃下攪拌8小時。將反應混合物冷卻，倒在冰上，並溫暖至室溫。加入乙酸乙酯之後，將混合物用飽和的碳酸氫鈉水溶液及飽和的鹽水洗滌，然後減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(2.29mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.92(3H，t)，1.31-1.38(2H，m)，1.53-1.61(2H，m)，2.59(2H，t)，4.10(2H，s)，7.12-.18(6H，m)，8.44(1H，d)實施例B240
2-氯-3-甲氧基吡啶 按與實施例B231相同的方式，利用2-氯-3-羥基吡啶，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)3.93(3H，s)，7.21-7.22(2H，m)，7.99-8.01(1H，m)實施例B2412-氯-3，4-二甲氧基吡啶 在氮氣氛下，將二異丙基胺(84.0μl，0.599mmol)與實施例B240的化合物(860mg，5.99mmol)的四氫呋喃(4ml)溶液加到冷卻至-78℃的1.06M苯基鋰環戊烷-乙醚溶液的四氫呋喃(11ml)溶液中。將該反應混合物在-40℃下攪拌1小時，然後再在-18℃下攪拌20分鐘。再次將反應混合物冷卻至-78℃，向其中滴加三甲氧基硼酸酯(2.04ml，18.0mmol)，並將所得的混合物在0℃下攪拌20分鐘。在該溫度下，依次加入氨水(29％，30ml)，氯化銨(4.5g)，及過氧化氫水溶液(30％，12ml)，並將該混合物在室溫下攪拌2小時。加入飽和的硫代硫酸鈉，乙酸和乙酸乙酯，並將混合物用飽和鹽水洗滌。通過矽膠過濾得到乙酸乙酯層，並減壓濃縮。所得剩餘物按與實施例B231相同的方式進行處理，得到標題化合物(31.3mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)3.89(3H，s)，3.94(3H，s)，6.82(1H，d)，8.05(1H，d)實施例B2422-(4-丁基苄基)-3，4-二甲氧基吡啶 按與實施例B206相同的方式，利用實施例B241的化合物，得到標題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.90(3H，t)，1.26-1.35(2H，m)，1.53-1.57(2H，m)，2.54(2H，t)，3.70(3H，s)，3.89(3H，s)，4.12(2H，s)，6.72(1H，d)，7.06(2H，d)，7.21(2H，d)，8.20(1H，d)實施例B2432，4-二(4-丁基苄基)-3-甲氧基吡啶 在氮氣氛下將實施例B240的化合物(436mg，3.04mmol)的乙醚(2ml)溶液加到冷卻至-78℃的1.43M叔丁基鋰正戊烷溶液(2.76ml，3.95mmol)的乙醚(5ml)溶液中，並將反應混合物在該溫度下攪拌30分鐘。進一步加入四甲基乙二胺(688μl，4.56mmol)與六氯乙烷(719mg，3.04mmol)的乙醚(3ml)溶液，並將反應混合物在該溫度下攪拌1小時。逐漸溫暖至室溫之後，加入乙酸乙酯，並將混合物用飽和鹽水洗滌。減壓濃縮經矽膠過濾得到的乙酸乙酯層。所得剩餘物按與實施例B206相同的方式進行處理，得到標題化合物(10.1mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.89-0.94(6H，m)，1.31-1.37(4H，m)，1.52-1.62(4H，m)，2.53-2.59(4H，m)，3.74(3H，s)，4.07(2H，s)，4.13(2H，s)，6.84(1H，d)，6.98(1H，d)，7.04-7.22(8H，m)實施例B2442-(4-溴-2-氟苄基)-3-(甲氧基甲氧基)吡啶 在氮氣氛下，將實施例B228的化合物(422mg，1.94mmol)的四氫呋喃(3ml)溶液加到冷卻至-78℃的2.47M正丁基鋰己烷溶液(862μl，2.13mmol)的四氫呋喃(3ml)溶液中，並將反應混合物在該溫度下攪拌1小時。加入溴化銅(I)(139mg，0.968mmol)之後，將反應混合物在0℃下攪拌1小時，並再次冷卻至-78℃。下一步，加入4-溴-2-氟苄基溴(259mg，0.968mmol)，將所得混合物在0℃下攪拌1小時。進一步加入四甲基乙二胺(584μl，3.88mmol)，並將所得反應混合物在該溫度下攪拌1小時。向反應混合物中加入乙醚氨水溶液，有機層用飽和鹽水洗滌並減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(81.0mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)3.38(3H，s)，4.17(2H，s)，5.18(2H，s)，7.04(1H，t)，7.11-7.22(3H，m)，7.38(1H，dd)，8.19(1H，dd)實施例B2452-(4-溴-2-氟苄基)-3-吡啶醇 將三氟乙酸(1ml)加到實施例B244的化合物(134mg，0.411mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液中，並將該反應混合物在室溫下攪拌過夜。該混合物用飽和的碳酸氫鈉水溶液中和之後，加入乙酸乙酯。乙酸乙酯層用飽和鹽水洗滌並減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(97.5mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)4.17(2H，s)，7.10-7.24(5H，m)，8.15(1H，t)在NMR光譜中未發現酚羥基的質子。
實施例B2462-(4-溴-2-氟苄基)-3-甲氧基吡啶 將碳酸鉀(38.7mg，0.280mmol)和碘甲烷(10.5μl，0.168mmol)加到實施例B245的化合物(15.8mg，0.0560mmol)的二甲基甲醯胺(1ml)溶液中，並將該混合物在室溫下攪拌2小時。加入乙酸乙酯之後，將反應混合物用飽和的鹽水洗滌並減壓濃縮。剩餘物經矽膠柱色譜純化，得到標題化合物(14.0mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)3.82(3H，s)，4.15(2H，s)，7.03(1H，t)，7.12-7.22(4H，m)，8.13(1H，dd)
實施例B的系列化合物是按與實施例B246相同的方式合成的，並通過LC-MS[洗脫液含0.1％三氟乙酸的乙腈溶液∶含0.1％三氟乙酸的水溶液＝1∶99～100∶0/20-分鐘循環，流速20ml/分鐘，色譜柱YMC CombiprepODS-AM，20mm(Φ)×50mm(長)]進行純化。
實施例B2472-(4-溴-2-氟苄基)-3-乙氧基吡啶 MS m/z(ESIMH+)310.0實施例B2482-(4-溴-2-氟苄基)-3-丙氧基吡啶 MS m/z(ESIMH+)324.0實施例B2492-(4-溴-2-氟苄基)-3-丁氧基吡啶 MS m/z(ESIMH+)338.1實施例B2502-(4-溴-2-氟苄基)-3-(戊基氧基)吡啶 MS m/z(ESIMH+)352.1實施例B251
2-(4-溴-2-氟苄基)-3-(己基氧基)吡啶 MS m/z(ESIMH+)366.0實施例B2522-(4-溴-2-氟苄基)-3-(2-氟乙氧基)吡啶 MS m/z(ESIMH+)328.0實施例B2532-(4-溴-2-氟苄基)-3-(3-氟丙氧基)吡啶 MS m/z(ESIMH+)342.0實施例B2542-(4-溴-2-氟苄基)-3-異丙氧基吡啶 MS m/z(ESIMH+)324.0實施例B2552-(4-溴-2-氟苄基)-3-(2，2，2-三氟乙氧基)吡啶
MS m/z(ESIMH+)364.0實施例B2562-(4-溴-2-氟苄基)-3-(3，3，3-三氟丙氧基)吡啶

MS m/z(ESIMH+)378.0實施例B257利用實施例A2的釀酒酵母報告系統評價化合物。與化合物未經處理時所獲得的濃度相比，將細胞壁級分中頭孢菌素酶活性變成50％或更小時的濃度定義為IC50值。有代表性的化合物的效果示於表1中。
表1

工業實用性本發明公開了編碼參與GPI-錨定蛋白質到細胞壁之轉運過程的蛋白質的基因。此外，本發明還公開了篩選抑制這些蛋白質活性的化合物的方法，本發明還公開了抑制這種活性的有代表性的化合物。
利用這些新的化合物，本發明表明可以提供具有新的抑制GPI-錨定蛋白質到細胞壁之轉運過程機制的抗真菌劑。
序列表序列表110衛材株式會社(Eisai Co.，Ltd.)120真菌細胞壁合成基因130E1-A0101Y1P150JP2000-2069681512000-07-07150JP2000-3160271512000-10-1716063170PatentIn Ver.2.021012111497212DNA213釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)220221CDS222(1)..(1494)4001atg gca aca gta cat cag aag aat atg tcg act tta aaa cag aga aaa 48Met Ala Thr Val His Gln Lys Asn Met Ser Thr Leu Lys Gln Arg Lys1 5 10 15gag gac ttt gtg aca ggg ctc aat ggc ggt tct ata aca gaa att aac 96Glu Asp Phe Val Thr Gly Leu Asn Gly Gly Ser Ile Thr Glu Ile Asn20 25 30gca gtg aca tca att gct ttg gta act tac ata tca tgg aac tta ttg 144Ala Val Thr Ser Ile Ala Leu Val Thr Tyr Ile Ser Trp Asn Leu Leu35 40 45aaa aat tcc aac ctt atg cct cct ggc att tcc agc gtg caa tac ata 192Lys Asn Ser Asn Leu Met Pro Pro Gly Ile Ser Ser Val Gln Tyr Ile50 55 60att gat ttt gca ttg aac tgg gtt gct ttg ctt cta tct att act att 240Ile Asp Phe Ala Leu Asn Trp Val Ala Leu Leu Leu Ser Ile Thr Ile65 70 75 80tat gct agt gaa cca tac ctt cta aac acg cta ata ctg tta cct tgt 288Tyr Ala Ser Glu Pro Tyr 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355 360 365Gly Leu Cys Ile Trp Ser Thr Ile Phe Leu Val Ile Ser Gln Leu Val370 375 380Phe Gln Tyr His Pro Tyr Ser Val Ser Arg Arg Phe Ala Asn Leu Pro385 390 395 400Tyr Thr Leu Trp Val Ile Thr Tyr Asn Leu Leu Phe Leu Thr Gly Tyr405 410 415Cys Leu Thr Asp Lys Ile Phe Gly Asn Ser Ser Glu Tyr Tyr Lys Val420 425 430Ala Glu Cys Leu Glu Ser Ile Asn Ser Asn Gly Leu Phe Leu Phe Leu435 440 445Leu Ala Asn Val Ser Thr Gly Leu Val Asn Met Ser Met Val Thr Ile450 455 460Asp Ser Ser Pro Leu Lys Ser Phe Leu Val Leu Leu Ala Tyr Cys Ser465 470 475 480Phe Ile Ala Val Ile Ser Val Phe Leu Tyr Arg Lys Arg Ile Phe Ile485 490 495Lys Leu21032111458212DNA213白色假絲酵母(Candida albicans)220221CDS222(1)..(1455)4003atg tca tcg tct tta aaa caa ttg aaa gaa caa ttt gtc tca gat ttg 48Met Ser Ser Ser Leu Lys Gln Leu Lys Glu Gln Phe Val Ser Asp Leu1 5 10 15act ggt ggc aca att gaa gaa att tat gct gta acc agt ata gca tta 96Thr Gly Gly Thr Ile Glu Glu Ile Tyr Ala Val Thr Ser Ile Ala Leu20 25 30tca tct tat ttg tcc ttt aga ttg ttg 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85 90 95aag cca aaa ggc caa tgg cta gac gaa tca gac tcc gat gag gaa cca450Lys Pro Lys Gly Gln Trp Leu Asp Glu Ser Asp Ser Asp Glu Glu Pro100 105 110 115gcg gaa cct gct tct gca gct gga tct gca gca gtc tca cca gta aag498Ala Glu Pro Ala Ser Ala Ala Gly Ser Ala Ala Val Ser Pro Val Lys120 125 130ctt cta cct tcc caa gtg gcg ttc gct tcg gga tcc cta tta tct ccc546Leu Leu Pro Ser Gln Val Ala Phe Ala Ser Gly Ser Leu Leu Ser Pro135 140 145gat ccg aca aca tcc ccc atg tcg cca agt agt tct tca gct tca gga594Asp Pro Thr Thr Ser Pro Met Ser Pro Ser Ser Ser Ser Ala Ser Gly150 155 160cat gaa gac cct ttg ggg att atg ggc gtt aac aga cgg agg tcg cta642His Glu Asp Pro Leu Gly Ile Met Gly Val Asn Arg Arg Arg Ser Leu165 170 175tta gaa gga gtt tcg ctt gat gtt ccg tca cat atc gac tcc aag gtc690Leu Glu Gly Val Ser Leu Asp Val Pro Ser His Ile Asp Ser Lys Val180 185 190 195aga ata tct cct gtt ccc tac ttg agg ctc aaa aag tct agg gca acg738Arg Ile Ser Pro Val Pro Tyr Leu Arg Leu Lys Lys Ser Arg Ala Thr200 205 210aag 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Leu Arg Lys Ser Ile Pro Ile Leu Val310 315 320ctc ggc ttt ata cgg ttg att atg gtc aag gga tct gat tat cct gag 1173Leu Gly Phe Ile Arg Leu Ile Met Val Lys Gly Ser Asp Tyr Pro Glu325 330 335cat gtg acg gag tac ggc gtg cac tgg aat ttc ttc ttc acc ctc gca 1221His Val Thr Glu Tyr Gly Val His Trp Asn Phe Phe Phe Thr Leu Ala340 345 350 355ttg gtt cct gtg ctc gcc gtg ggc att cga cca ttg acg cag tgg ctt 1269Leu Val Pro Val Leu Ala Val Gly Ile Arg Pro Leu Thr Gln Trp Leu360 365 370cgc tgg agt gtg ctt ggg gta atc atc tct ttg ctg cat cag ctg tgg 1317Arg Trp Ser Val Leu Gly Val Ile Ile Ser Leu Leu His Gln Leu Trp375 380 385tta aca tat tat ctc caa tcc atc gtc ttc tca ttc ggc cgg tca ggt 1365Leu Thr Tyr Tyr Leu Gln Ser Ile Val Phe Ser Phe Gly Arg Ser Gly390 395 400atc ttt cta gca aac aag gaa ggc ttc tcc tct ctt cct ggt tat ctt 1413Ile Phe Leu Ala Asn Lys Glu Gly Phe Ser Ser Leu Pro Gly Tyr Leu405 410 415tcc ata ttt ttg atc ggc ttg tct att gga gat cat gtt tta agg ctc 1461Ser Ile Phe Leu Ile Gly Leu Ser Ile Gly Asp His Val Leu Arg Leu420 425 430 435agt tta cca cca aga aga gag agg gtc gtg tca gaa aca aat gaa gag 1509Ser Leu Pro Pro Arg Arg Glu Arg Val Val Ser Glu Thr Asn Glu Glu440 445 450cat gag cag agt cat ttt gag aga aaa aaa ttg gat ttg att atg gag 1557His Glu Gln Ser His Phe Glu Arg Lys Lys Leu Asp Leu Ile Met Glu455 460 465ttg att gga tat agc tta ggc tgg tgg gca ctc tta gga ggc tgg att 1605Leu Ile Gly Tyr Ser Leu Gly Trp Trp Ala Leu Leu Gly Gly Trp Ile470 475 480tgg gcc ggc ggg gag gta tcc agg cgt tta gtaagtggac atctttggta 1655Trp Ala Gly Gly Glu Val Ser Arg Arg Leu485 490atattgtacc tatactaatc cctgcataaa g gcc aac gct cct tat gta ttt1707Ala Asn Ala Pro Tyr Val Phe495 500tgg gta gcg gca tac aat acc acc ttt ctc ctc ggc tac ctc ctc ctt 1755Trp Val Ala Ala Tyr Asn Thr Thr Phe Leu Leu Gly Tyr Leu Leu Leu505 510 515acc cac att att cca tct ccc acc tct tcc caa aca tca cca tcg atc 1803Thr His Ile Ile Pro Ser Pro Thr Ser Ser Gln Thr Ser Pro Ser Ile520 525 530tta gtg cct ccc ttg ctc gac 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atctctttgc tgcatcagct 1080gtggttaaca tattatctcc aatccatcgt cttctcattc ggccggtcag gtatctttct 1140agcaaacaag gaaggcttct cctctcttcc tggttatctt tccatatttt tgatcggctt 1200gtctattgga gatcatgttt taaggctcag tttaccacca agaagagaga gggtcgtgtc 1260agaaacaaat gaagagcatg agcagagtca ttttgagaga aaaaaattgg atttgattat 1320ggagttgatt ggatatagct taggctggtg ggcactctta ggaggctgga tttgggccgg 1380cggggaggta tccaggcgtt tagccaacgc tccttatg 1418210582111797212DNA213新型隱球酵母(Cryptocccus neoformans)220221CDS222(1)..(1794)40058atg ggg gat tac aag tcg gcc aaa gag gcc ttt gtc tcg gat aac cca 48Met Gly Asp Tyr Lys Ser Ala Lys Glu Ala Phe Val Ser Asp Asn Pro1 5 10 15ggt gct tct atc tgg agt atc aac gct gtc agc ctg gtc gca ctg gcg 96Gly Ala Ser Ile Trp Ser Ile Asn Ala Val Ser Leu Val Ala Leu Ala20 25 30aca tat gct ctc tgg atc gcc tta tcg ccg tac atc cgt cat gga ctc 144Thr Tyr Ala Leu Trp Ile Ala Leu Ser Pro Tyr Ile Arg His Gly Leu35 40 45ctg aac aac tac ctg atc tgt gtt ctt ccc cta tta ttc ggg gtg acc 192Leu Asn Asn Tyr Leu 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Ser Pro Leu Val Phe Thr Ser Phe Leu Ser Ile Ile65 70 75 80Ser Leu Ala Phe Ile Thr Lys Ser Gln Lys Cys Phe Lys Ser Val Ser85 90 95Ser Pro Glu Lys Pro Lys Gly Gln Trp Leu Asp Glu Ser Asp Ser Asp100 105 110Glu Glu Pro Ala Glu Pro Ala Ser Ala Ala Gly Ser Ala Ala Val Ser115 120 125Pro Val Lys Leu Leu Pro Ser Gln Val Ala Phe Ala Ser Gly Ser Leu130 135 140Leu Ser Pro Asp Pro Thr Thr Ser Pro Met Ser Pro Ser Ser Ser Ser145 150 155 160Ala Ser Gly His Glu Asp Pro Leu Gly Ile Met Gly Val Asn Arg Arg165 170 175Arg Ser Leu Leu Glu Gly Val Ser Leu Asp Val Pro Ser His Ile Asp180 185 190Ser Lys Val Arg Ile Ser Pro Val Pro Tyr Leu Arg Leu Lys Lys Ser195 200 205Arg Ala Thr Lys Ala Gln Trp Val Lys Glu Lys Gly Arg Leu Pro Phe210 215 220Leu Thr Val Tyr Arg Ala His Met Met Leu Met Thr Val Ile Cys Ile225 230 235 240Leu Ala Val Asp Phe Glu Val Phe Pro Arg Trp Gln Gly Lys Cys Glu245 250 255Asp Phe Gly Thr Ser Leu Met Asp Val Gly Val Gly Ser Phe Val Phe260 265 270Ser Leu Gly Leu Val Ser Thr Lys Ser Leu Ser Pro Pro Pro Pro Thr275 280 285Pro Thr Pro Ser Ser Pro Ala Leu Asn Ser His Ile Ile Pro Leu Thr290 295 300Pro Ser Pro Phe Thr Ser Ile Leu Ile Ser Leu Arg Lys Ser Ile Pro305 310 315 320Ile Leu Val Leu Gly Phe Ile Arg Leu Ile Met Val Lys Gly Ser Asp325 330 335Tyr Pro Glu His Val Thr Glu Tyr Gly Val His Trp Asn Phe Phe Phe340 345 350Thr Leu Ala Leu Val Pro Val Leu Ala Val Gly Ile Arg Pro Leu Thr355 360 365Gln Trp Leu Arg Trp Ser Val Leu Gly Val Ile Ile Ser Leu Leu His370 375 380Gln Leu Trp Leu Thr Tyr Tyr Leu Gln Ser Ile Val Phe Ser Phe Gly385 390 395 400Arg Ser Gly Ile Phe Leu Ala Asn Lys Glu Gly Phe Ser Ser Leu Pro405 410 415Gly Tyr Leu Ser Ile Phe Leu Ile Gly Leu Ser Ile Gly Asp His Val420 425 430Leu Arg Leu Ser Leu Pro Pro Arg Arg Glu Arg Val Val Ser Glu Thr435 440 445Asn Glu Glu His Glu Gln Ser His Phe Glu Arg Lys Lys Leu Asp Leu450 455 460Ile Met Glu Leu Ile Gly Tyr Ser Leu Gly Trp Trp Ala Leu Leu Gly465 470 475 480Gly Trp Ile Trp Ala Gly Gly Glu Val Ser Arg Arg Leu Ala Asn Ala485 490 495Pro Tyr Val Phe Trp Val Ala Ala Tyr Asn Thr Thr Phe Leu Leu Gly500 505 510Tyr Leu Leu Leu Thr His Ile Ile Pro Ser Pro Thr Ser Ser Gln Thr515 520 525Ser Pro Ser Ile Leu Val Pro Pro Leu Leu Asp Ala Met Asn Lys Asn530 535 540Gly Leu Ala Ile Phe Leu Ala Ala Asn Leu Leu Thr Gly Leu Val Asn545 550 555 560Val Ser Met Lys Thr Met Tyr Ala Pro Ala Trp Leu Ser Met Gly Val565 570 575Leu Met Leu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Cys Val Gly Trp Ile Leu Lys580 585 590Gly Arg Arg Ile Lys Ile5952106021130212DNA213人工序列220223人工序列的描述人工合成的引物序列40060aaagaattca tggcaacagt acatcagaag 302106121120212DNA213人工序列220223人工序列的描述人工合成的引物序列40061gggcactgtt gaaaaaccta 20210622111428212DNA213釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)220221啟動子222(1)..(1428)40062gttgttcaaa atgggggtaa aattgagacg tcttacttga gcggcattta cgatcattct 60tattacatca ttccaagtaa taaagctctt gactccttca atgatttacc tgagattata 120gatgataatg atggtatagt tacagaattt ttcattgaac gctgcttgta ttatcaaaaa 180ttactacacc caatagattt atggtcaaaa cccttcctca gcacaataga gtttcaagtt 240tcgtcttctt caaagttatt gcatcatgaa ttttcttctt ccccttttct gaatgttact 300atcactggat tctctggcgt agagctgtta catctgacta aagtattaaa tcttctaaaa 360ccaatgggca tcaattatgt agaatacctc aataaatcca ctgacattct gctaatcaac 420ttagcagctt tacccagtat cccgaaaacc catccgttat ggtcgaatga atttagcgat 480ctttttactc agttttgcat taataacaat aatgatgatc ctggtgataa taacagaaaa 540gattttcaaa ataattcaat cttgagaaat tcgatgaaaa ggaaaattga atatatcaag 600aaattccact ccataccggt agttactcca gcatttattt ttaaattatt gtccgctgca 660tctggagaaa ataatgaaat ctttttaaac aatatcaagt ggtgtattat ctgcccaaga 720ggacacaagg acgattttaa atgtaagata aaaaaaccat actataccag cattagttca 780gaaaaaaagt accaaaacaa tgatccaaaa atcgacaaaa ctattctttt gaaaagaaac 840aattcctcat tatcggagca ctctatgaaa gataccaaaa acgaattatt gcagaaaatt 900agagaaactg attctggaag aaaaaagcgt agtgtctcat cgagtatcat ggatgtttct 960tcagagagac aaatgccgga tacgaaaagg atcaagttgg agtcactgcc aaaaaatttc 1020gttcctaaac aaattaaacg aaccacgagt tggggcacaa taatgtcaga aaatgtgcct 1080acagagcagc cgactgcaat ttctaatcca gaagagatcc caagaactga ggaagtttca 1140catactcaag ttacctatgg ctccattcaa gataagaaac gtactgcctc tttagaaaaa 1200cctatgagac gacagacaag aaatcagaca aaggaattag attcttgaaa tgtagtccgt 1260aattttataa gatattcatt tacatacgcc atctacagca ttattcaaat ctactcatct 1320atatgtatta ccgttttgta tgataatact ttccatgaca tgctcgcgtg aaaaaacagc 1380atgagaaaaa gaggatcgca ataagaagac acgtaaatat ctaaataa 142821063211133212DNA213釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)220221終止子222(1)..(133)40063taacacacca tccacatttc catgtagttc gtatacaaac cctaccagta aaataaaatt 60aactcctatg tgctttaaat aaaaattata aaccgcctcc aatagttgac gtagtcaggc 120atgaaagtgc tac 13權利要求
1.一種編碼蛋白質的DNA，當該DNA過量表達在真菌中時，所述蛋白質具有賦予真菌耐受式(Ia)所示化合物的活性，其中該DNA選自(a)一種DNA，其編碼包含SEQ ID NO2，4，6，28，40或59胺基酸序列的蛋白質，(b)包含核苷酸序列SEQ ID NO1，3，5，27，39，41，54或58的DNA，(c)在嚴謹條件下與包含核苷酸序列SEQ ID NO1，3，5，27，39，41，54或58的DNA雜交的DNA，(d)編碼一種蛋白質的DNA，其中所述蛋白包含SEQ ID NO2，4，6，28，40或59的胺基酸序列且其中增加、缺失、取代和/或插入一個或多個胺基酸，及(e)利用SEQ ID NO29和31或者SEQ ID NO29和30為引物擴增的DNA
2.一種編碼蛋白質的DNA，該蛋白質因為該DNA的功能缺陷而具有降低真菌細胞壁中GPI-錨定蛋白質的量的活性，其中該DNA選自(a)編碼包含SEQ ID NO2，4，6，28，40或59胺基酸序列的蛋白質的DNA，(b)包含SEQ ID NO1，3，5，27，39，41，54或58核苷酸序列的DNA，(c)在嚴謹條件下與包含SEQ ID NO1，3，5，27，39，41，54或58核苷酸序列的DNA雜交的DNA，(d)編碼蛋白質的DNA，所述蛋白質包含SEQ ID NO2，4，6，28，40或59的胺基酸序列且其中增加、缺失、取代和/或插入一個或多個胺基酸，及(e)利用SEQ ID NO29和31或者SEQ ID NO29和30為引物擴增的DNA。
3.通過權利要求1或2的DNA編碼的蛋白質。
4.其中插入了權利要求1或2的DNA的載體。
5.包含權利要求1或2的DNA或者權利要求4的載體的轉化體。
6.權利要求5的轉化體，其為過量表達權利要求3的蛋白質的真菌。
7.一種真菌，其中權利要求3的蛋白質的功能有缺陷。
8.一種製備權利要求3的蛋白質的方法，該方法包括培養權利要求5的轉化體，並由該轉化體或其培養上清液收集所表達的蛋白質的步驟。
9.一種與權利要求3的蛋白質結合的抗體。
10.一種篩選具有抗真菌作用的化合物的方法，其中該方法包括以下步驟(a)使試樣與權利要求3的蛋白質接觸；(b)檢測該蛋白質與試樣之間的結合活性；及(c)選取具有與該蛋白質結合活性的化合物。
11.一種篩選具有抗真菌作用的化合物的方法，其中該方法包括以下步驟(a)使試樣與過量表達權利要求3的蛋白質的真菌接觸；(b)檢測GPI-錨定蛋白質轉運到真菌細胞壁上的量；及(c)選取使步驟(b)中所檢測的GPI-錨定蛋白質轉運到真菌細胞壁上的量比試樣與未過量表達權利要求3的蛋白質的真菌接觸時所檢測到的轉運量減少的化合物。
12.一種具有抗真菌作用的化合物，其是通過權利要求10或11的篩選方法分離的。
13.一種抗真菌劑，其包含抑制GPI-錨定蛋白向真菌細胞壁轉運的化合物作為活性成分。
14.一種抗真菌劑，其包含權利要求9的抗體或者權利要求12的化合物作為活性成分。
15.權利要求13的抗真菌劑，其包含下列通式(I)所示的化合物或其鹽或其水合物作為活性成分，在式(I)中 [R1a和R2a彼此相同或相異並且單獨代表氫原子，滷原子，羥基，硝基，氰基，三氟甲基，三氟甲氧基，取代或未取代的C1-6烷基，C2-6鏈烯基，C2-6炔基，取代或未取代的C1-6烷氧基，或者下式所示的基團 (其中X1代表單鍵，羰基，或者式-S(O)2-所示的基團；R5a和R6a彼此相同或相異並且代表氫原子或者取代或未取代的C1-6烷基)；R1a和R2a可以一起形成選自下列的稠環取代或未取代的苯環，取代或未取代的吡啶環，取代或未取代的吡咯環，取代或未取代的噻吩環，取代或未取代的呋喃環，取代或未取代的噠嗪環，取代或未取代的嘧啶環，取代或未取代的吡嗪環，取代或未取代的咪唑環，取代或來取代的噁唑環，取代或未取代的噻唑環，取代或未取代的吡唑環，取代或未取代的異噁唑環，取代或未取代的異噻唑環，取代或未取代的環己烷環，及取代或未取代的環戊烷環；R3a和R4a彼此相同或相異並且單獨代表氫原子，滷原子，羥基，硝基，氰基，羧基，甲醯基，肟基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-6烷基，C1-6烷氧基，C2-6鏈烯基，C2-6炔基，由式-C(O)NR7aR7b(其中R7a和R7b彼此相同或相異並且單獨代表氫原子，或者C1-6烷基)，式-CO2R7a(其中R7a的定義同上)，式-S(O)nR7a(其中n代表0～2的整數，R7a的定義同上)，式-S(O)2NR7aR7b(其中R7a和R7b的定義同上)所示的基團，下式所示的基團 (其中X2代表單鍵，羰基，或者式-S(O)2-所示的基團；R5b和R6b彼此相同或相異，並且代表氫原子，取代或未取代的C1-6烷基，或者取代或未取代的C6-14芳基)，或者下式所示的基團-Z1-Z2(其中Z1代表單鍵，氧原子，1，2-亞乙烯基或亞乙炔基；Z2代表單鍵，或者被0～4個取代基取代或未取代的C1-6烷基)；R3a和R4a可以共同代表亞甲二氧基，或者1，2-亞乙二氧基，或者，R3a和R4a也可以一起形成選自下列的稠環取代或未取代的苯環，取代或未取代的吡啶環，取代或未取代的吡咯環，取代或未取代的噻吩環，取代或未取代的呋喃環，取代或未取代的噠嗪環，取代或未取代的嘧啶環，取代或未取代的吡嗪環，取代或未取代的咪唑環，取代或未取代的噁唑環，取代或未取代的噻唑環，取代或未取代的吡唑環，取代或未取代的異噁唑環，取代或未取代的異噻唑環，取代或未取代的環己烷環，及取代或未取代的環戊烷環，R1a和R2a均不代表氫原子的情況除外]。
16.權利要求13的抗真菌劑，其包含下式的化合物(Ia)作為活性成分
17.下面式(II)所示的化合物，或者它的鹽或水合物，在式(II)中， [Ar代表選自式(IIIa)至(IIIf)的取代基 (其中K代表硫原子，氧原子，或者式-NH-所示的基團；R1b和R2b彼此相同或相異並且單獨代表氫原子，滷原子，羥基，硝基，氰基，三氟甲基，三氟甲氧基，下式所示的基團 (其中X3代表單鍵，羰基，或者式-S(O)2-所示的基團；R5c和R6c彼此相同或相異並且代表氫原子，或者取代或未取代的C1-6烷基)，或者式-X4-R8a(其中X4代表單鍵，氧原子，或硫原子；R8a代表C1-6烷基，C2-6鏈烯基，C2-6炔基，C3-8環烷基，或C3-8環烯基)所示的基團；R1b和R2b可以一起形成亞甲二氧基，或者1，2-亞乙二氧基)；R3b和R4b彼此相同或相異並且單獨代表氫原子，滷原子，羥基，硝基，氰基，羧基，甲醯基，肟基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-6烷基，C1-6烷氧基，C2-6鏈烯基，C2-6炔基，或者下式所示的基團-Z1b-Z2b(其中Z1b代表單鍵，1，2-亞乙烯基，或亞乙炔基；Z2b代表單鍵，或者被0～4個取代基取代或未取代的C1-6烷基)；下列情況除外(1)Ar代表前述的式(IIId)，其中R1b和R2b均為氫原子，(2)至少一個R3b或R4b代表氫原子，而另一個為氫原子，甲氧基，羥基，甲基，苄氧基，或滷原子，以及Ar代表前述的式(IIIc)，其中R1b和R2b兩個均代表氫原子或甲氧基，(3)至少一個R3b或R4b代表氫原子，而另一個為氫原子，羥基，甲氧基，或苄氧基，以及Ar代表式(IIIc)，其中R1b和R2b兩個均代表羥基或苄氧基，或者(4)Ar代表式(IIId)，其中R1b為氫原子且R2b為甲醯基，羥甲基，或者甲氧基羰基]。
18.權利要求17的化合物，或者它的鹽或水合物，其中Ar代表下式 (其中R1c代表氫原子，取代或未取代的C1-6烷基，或苄基)，但不包括R3b代表氫原子時的情形。
19.下面式(IIIc2)所示的化合物，或者它的鹽或水合物，在式(IIIc2)中， [R1b和R2b的定義同上，下列情況除外(1)R1b代表式R1c-O-(其中R1c的定義同上)所示的基團，R2b為氫原子，且R3b代表氫原子，(2)至少一個R3b或R4b代表氫原子，而另一個為氫原子，甲氧基，羥基，甲基，苄氧基，或滷原子，且R1b和R2b兩個均代表氫原子或甲氧基，或者(3)至少一個R3b或R4b代表氫原子，而另一個為氫原子，羥基，甲氧基，或苄氧基，且R1b和R2b兩個均代表羥基或者苄氧基]。
20.包括權利要求17的化合物或者它的鹽或水合物的抗真菌劑，作為活性組分，其具有抗真菌作用。
21.權利要求15的抗真菌劑，其中R3a和R4a至少一個代表下面各式所示的基團式-C(O)NR7aR7b(其中R7a和R7b的定義同上)，式-CO2R7a(其中R7a的定義同上)，式-S(O)nR7a(其中n代表0～2的整數，R7a的定義同上)，式-S(O)2NR7aR7b(其中R7a和R7b的定義同上)，式 (其中X2，R5b，及R6b的定義同上)，或者被0～4個取代基取代或未取代的C1-6烷氧基，或者R3a和R4a共同代表亞甲二氧基，或者1，2-亞乙二氧基。
22.權利要求15的抗真菌劑，其中該具有抗真菌作用的化合物為(1)1-苄基異喹啉，(2)1-(4-溴苄基)異喹啉，(3)1-(4-氯苄基)異喹啉，(4)1-(4-氟苄基)異喹啉，(5)1-(4-碘苄基)異喹啉，(6)1-(3-甲基苄基)異喹啉，(7)1-(4-甲基苄基)異喹啉，(8)1-(3，4-二甲基苄基)異喹啉，(9)1-(3-甲氧基苄基)異喹啉，(10)1-(4-甲氧基苄基)異喹啉，(11)1-(3，4-亞甲二氧基苄基)異喹啉，(12)1-(4-苄氧基苄基)異喹啉，(13)1-(4-氰基苄基)異喹啉，(14)1-(4-硝基苄基)異喹啉，(15)1-(4-氨基苄基)異喹啉，(16)1-(4-甲氧基苄基)-6，7-二氯-異喹啉，(17)1-(4-甲氧基-2-硝基-苄基)-異喹啉，(18)1-(4-甲氧基苄基)-6，7-亞甲二氧基-異喹啉，(19)1-(2-氨基-4-甲氧基-苄基)異喹啉，(20)1-(4-甲氧基苄基)-7-羥基-6-甲氧基-異喹啉，(21)1-(4-苄氧基苄基)-6，7-二甲氧基-異喹啉，(22)1-(4-甲氧基苄基)-6，7-二甲氧基-異喹啉，(23)1(4-甲氧基-2-硝基-苄基)-異喹啉，(24)3-[4-(1-異喹啉基甲基)苯氧基]丁腈，(25)1-[4-(2，2，3，3-四氟丙氧基)苄基]異喹啉，(26)1-[4-(2-哌啶子基乙氧基)苄基]異喹啉，(27)4-(1-異喹啉基甲基)苯基(2-嗎啉基乙基)醚，(28)1-[4-(2-甲氧基乙氧基)苄基]異喹啉，(29)N-{2-[4-(1-異喹啉基甲基)苯氧基]乙基}-N，N-二甲胺，(30)1-[4-(苯乙氧基)苄基]異喹啉，(31)1-{4-[(2-甲基烯丙基)氧基]苄基}異喹啉，(32)1-(4-異丁氧基苄基)異喹啉，(33)1-[4-(2-苯氧基乙氧基)苄基]異喹啉，(34)2-[4-(1-異喹啉基甲基)苯氧基]乙酸甲酯，(35)2-[4-(1-異喹啉基甲基)苯氧基]-1-乙醇，(36)N-{2-[4-(1-異喹啉基甲基)苯氧基]乙基}氨基甲酸叔丁酯，(37)1-{4-[3-(四氫-2H-2-吡喃氧基)丙氧基]苄基}異喹啉，(38)2-[4-(1-異喹啉基甲基)苯氧基]-1-乙胺，(39)1-[4-(3-哌啶子基丙氧基)苄基]異喹啉，(40)3-[4-(1-異喹啉基甲基)苯氧基]-1-丙醇，(41)1-[4-(2-乙基丁氧基)苄基]異喹啉，(42)4-[4-(1-異喹啉基甲基)苯氧基]丁酸，(43)1-(4-{3-[(4-苄基哌啶子基)磺醯基]丙氧基}苄基)異喹啉，(44)1-(4-{3-[4-(4-氯苯基)哌啶子基]丙氧基}苄基)異喹啉，(45)4-(1-異喹啉基甲基)苯胺，(46)N-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]丁醯胺，(47)N-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]丙醯胺，(48)N-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-1-乙磺醯胺，(49)N-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-N-甲基-乙磺醯胺，(50)N-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-N-甲胺，(51)N-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-N-丙胺，或者(52)N-[4-(1-異喹啉基甲基)苯基]-N-甲基-N-丙胺。
23.一種治療真菌感染的方法，包括將治療有效量的權利要求13-16和20-22中任一項的抗真菌劑或權利要求17-19的化合物或它的鹽或水合物給藥於哺乳動物。
全文摘要
構建一種反映將GPI－錨定蛋白質轉運到細胞壁的過程的報告系統，並且公開了抑制該轉運過程的化合物。此外，確定賦予上述化合物以耐受性的基因，並且揭示篩選化合物的方法，該化合物抑制由該基因編碼的蛋白質的活性。因此，該新化合物提供了依據新機制的抗真菌劑，所述機制中，GPI－錨定蛋白質轉運到細胞壁的過程受到抑制。
文檔編號C07D491/056GK1449443SQ01814781
公開日2003年10月15日 申請日期2001年7月6日 優先權日2000年7月7日
發明者塚原克平, 畑桂, 相根康司, 中本和孝, 土谷滿美子, 渡邊直彰, 大場史記, 塚田格, 上田教博, 田中圭悟, 甲斐純子 申請人:衛材株式會社