一種沙雷氏菌合成培養基及其發酵液的製備方法
2023-10-17 05:24:44 1
專利名稱：一種沙雷氏菌合成培養基及其發酵液的製備方法
技術領域：
本發明屬於微生物培養基和發酵技術領域，涉及一種用於發酵產物高效抑制黃麴黴毒素同時產生幾丁質酶的合成培 養基及其應用，具體地說是一種沙雷氏菌發酵合成培養基及發酵方法。
背景技術：
黃麴黴毒素是一類結構相似的真菌次級代謝產物，具有致癌、致畸、致突變作用。我國花生汙染黃麴黴毒素非常嚴重，田間和儲藏期間均易受到黃麴黴毒素的汙染。如何有效防止黃麴黴毒素汙染花生等農產品，對保障食品安全具有十分重要的現實意義。粘質沙雷氏菌是一種高產幾丁質酶的菌種，幾丁質酶的水解產物幾丁低聚糖具有抗菌，調節免疫功能，抑制癌細胞生長等功能。在食品、醫藥等行業具有獨特的使用價值。關於沙雷氏菌產幾丁質酶的培養基和發酵條件國內外已經有過報導，但未見用於沙雷氏菌高產幾丁質酶的同時，發酵產物可以高效防治花生中黃麴黴毒素的合成培養基和發酵方法的報導。對沙雷氏菌高產發酵培養基和發酵條件進行優化，可為今後應用沙雷氏菌發酵產物防治花生中黃麴黴毒素同時產幾丁質酶打下一個堅實的基礎。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是克服上述現有技術的不足，提供一種組成合理，製備方法簡單、可靠，適合沙雷氏菌發酵高產抑制黃麴黴毒素的活性物質並且高產幾丁質酶的沙雷氏菌發酵合成培養基及其發酵液的製備方法。本發明解決上述技術問題採用的技術方案是
一種沙雷氏菌發酵合成培養基，其特徵在於其組成配方為膠體幾丁質2 10克/升，牛肉膏3 10克/升，蛋白腖5 15克/升，氯化鈉6 10克/升，硫酸銨I 5克/升，檸檬酸鈉I 3克/升，K2HPO4 I 5克/升，MgSO4 O. 5 3克/升，FeSO4 · 7H20
O.01 O. 05 克 / 升。一種沙雷氏菌發酵液的製備方法，其特徵在於包括如下步驟
(1)配製產幾丁質酶沙雷氏菌菌株的培養基，培養基配方(克/升)為膠體幾丁質
2 10，牛肉膏3 10，蛋白腖5 15，氯化鈉6 10，硫酸銨I 5，檸檬酸鈉I 3，K2HP04I 5，MgSO4 O. 5 3，FeSO4 · 7H20 O. 01 O. 05 ;
(2)種子培養培養基為葡萄糖20克/升，酵母粉5克/升，初始PH6. 8-7. 2 ;培養條件溫度30°C條件下搖床140 r/min培養12h ；
(3)液體發酵培養按I 10%接種量將液體種子轉接於所述高產培養基中，在28-35°C搖床140 r/min連續培養4 6d，即可獲得含有幾丁質酶和抑制黃麴黴毒素活性物質的沙雷氏菌發酵液。本發明採用上述技術方案，有益效果在於確定並提供了一種適合沙雷氏菌發酵高產抑制黃麴黴毒素的活性物質同時高產幾丁質酶的培養基及其發酵液的製備方法。該培養基是在單因素實驗研究的基礎上，利用響應面法對培養基配方進行優化，確定配方搭配合理，營養豐富，適合沙雷氏菌的生長需求。在適當的發酵條件下可使沙雷氏菌同時高產抑制黃麴黴毒素的活性物質和幾丁質酶。本發明獲得的沙雷氏菌發酵上清液中幾丁質酶的酶活為2. 04 5. 36 U/ml ;發酵上清液對寄生麴黴菌絲生長的抑制率為80. 13 89. 56%，對黃麴黴毒素的抑制率為90. 22 98. 31%。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明做進一步說明。一種沙雷氏菌發酵合成培養基，其組成配方為膠體幾丁質2 10克/升，牛肉膏3 10克/升，蛋白腖5 15克/升，氯化鈉6 10克/升，硫酸銨I 5克/升，檸檬酸鈉 I 3 克 / 升，K2HPO4 I 5 克 / 升，MgSO4 O. 5 3 克 / 升，FeSO4 · 7H20 O. 01 O. 05
克/升。一種沙雷氏菌發酵液的製備方法，其包括如下步驟
(1)配製產幾丁質酶沙雷氏菌菌株的培養基，培養基配方(克/升)為膠體幾丁質2 10，牛肉膏3 10，蛋白腖5 15，氯化鈉6 10，硫酸銨I 5，檸檬酸鈉I 3，K2HP04 I 5，MgSO4 O. 5 3，FeSO4 · 7H20 O. 01 O. 05 ;
(2)種子培養培養基為葡萄糖20克/升，酵母粉5克/升，初始PH6. 8-7. 2 ;培養條件溫度30°C條件下搖床140 r/min培養12h ；
(3)液體發酵培養按I 10%接種量將液體種子轉接於所述高產培養基中，在28-35°C搖床140 r/min連續培養4 6d，即可獲得含有幾丁質酶和抑制黃麴黴毒素活性物質的沙雷氏菌發酵液。實施例I :
菌種沙雷氏菌菌株由哈爾濱工業大學(威海)海洋科學與技術學院從江蘇省淮安市花生莢果土壤中分離的一株高效抑制黃麴黴毒素的沙雷氏菌新菌株(Serratia sp.)。沙雷氏菌發酵合成培養基配方(克/升)為膠體幾丁質4，牛肉膏3，蛋白腖12，氯化鈉6，硫酸銨5，檸檬酸鈉1，K2HP04 5，MgSO4 O. 5, FeSO4 · 7H20 0.01。首先將保藏的沙雷氏菌菌株活化得到單菌落後，接種到裝有30ml培養基的IOOml三角瓶中，在30°C搖床中以140轉/分鐘恆溫連續培養12h，獲得沙雷氏菌液體種子；按照1%接種量將液體種子轉接於所述高產液體培養基中，在28°C搖床中以140 r/min恆溫連續培養6d，即可獲得沙雷氏菌菌株活性物質的高產發酵液。發酵上清液中幾丁質酶的酶活為2. 04 U/ml;發酵上清液對寄生麴黴菌絲生長的抑制率為80. 13%，對黃麴黴毒素的抑制率為90. 22%。實施例2:
菌種沙雷氏菌菌株由哈爾濱工業大學(威海)海洋科學與技術學院從江蘇省淮安市花生莢果土壤中分離的一株高效抑制黃麴黴毒素的沙雷氏菌新菌株(Serratia sp.)。所用培養基配方(克/升)為膠體幾丁質6，牛肉膏5，蛋白腖10，氯化鈉8，硫酸銨3，檸檬酸鈉3，K2HPO4 2，MgSO4 I, FeSO4 · 7H20 0.02。首先將保藏的沙雷氏菌菌株活化得到單菌落後，接種到裝有30ml培養基的IOOml三角瓶中，在30°C搖床中以140轉/分鐘恆溫連續培養12h，獲得沙雷氏菌液體種子；按照5%接種量將液體種子轉接於所述高產液體培養基中，在30°C搖床中以140 r/min恆溫連續培養6d，即可獲得沙雷氏菌菌株活性物質的高產發酵液，發酵上清液中幾丁質酶的酶活為3. 12 U/ml ;發酵上清液對寄生麴黴菌絲生長的抑制率為82. 36%，對黃麴黴毒素的抑制率為93. 43%。實施例3:
菌種沙雷氏菌菌株由哈爾濱工業大學(威海)海洋科學與技術學院從江蘇省淮安市花生莢果土壤中分離的一株高效抑制黃麴黴毒素的沙雷氏菌新菌株(Serratia sp.)。所用培養基配方(克/升)為膠體幾丁質10，牛肉膏8，蛋白腖10，氯化鈉6，硫酸銨I，檸檬酸鈉3，K2HPO4 5，MgSO4 2，FeSO4 · 7H20 O. 05。首先將保藏的沙雷氏菌菌株活化得到單菌落後，接種到裝有30ml培養基的IOOml三角瓶中，在30°C搖床中以140轉/分鐘恆溫連續培養12h，獲得沙雷氏菌液體種子；按照10%接種量將液體種子轉接於所述高產液體培養基中，在30°C搖床中以140 r/min恆溫連續培養6d，即可獲得沙雷氏菌菌株活性物質的高產發酵液，發酵上清液中幾丁質酶的酶活為5. 36 U/ml ;發酵上清液對寄生麴黴菌絲生長的抑制率為89. 56%，對黃麴黴毒素的抑制率為98. 31%。
權利要求
1.一種沙雷氏菌發酵合成培養基,其特徵在於其組成配方為膠體幾丁質2 10克/升，牛肉膏3 10克/升，蛋白腖5 15克/升，氯化鈉6 10克/升，硫酸銨I 5克/升，檸檬酸鈉I 3克/升，K2HPO4 I 5克/升，MgSO4 O. 5 3克/升，FeSO4 · 7H20O.01 O. 05 克 / 升。
2.一種沙雷氏菌發酵液的製備方法，其特徵在於包括如下步驟 (1)配製產幾丁質酶沙雷氏菌菌株的培養基，培養基配方(克/升)為膠體幾丁質2 10，牛肉膏3 10，蛋白腖5 15，氯化鈉6 10，硫酸銨I 5，檸檬酸鈉I 3，K2HP04I 5，MgSO4 O. 5 3，FeSO4 · 7H20 O. 01 O. 05 ; (2)種子培養培養基為葡萄糖20克/升，酵母粉5克/升，初始PH6. 8-7. 2 ;培養條件溫度30°C條件下搖床140 r/min，培養12h ； (3)液體發酵培養按I 10%接種量將液體種子轉接於所述高產培養基中，在28-35°C搖床140 r/min連續培養4 6d，即可獲得含有幾丁質酶和抑制黃麴黴毒素活性物質的沙雷氏菌發酵液。
全文摘要
本發明涉及一種沙雷氏菌合成培養基及其發酵液的製備方法，所述培養基配方(克/升)為膠體幾丁質2～10，牛肉膏3～10，蛋白腖5～15，氯化鈉6～10，硫酸銨1～5，檸檬酸鈉1～3，磷酸氫二鉀1～5，硫酸鎂0.5～3，硫酸亞鐵0.01～0.05。按1～10%接種量在28～35℃搖床140r/min連續培養4～6d，即可獲得高產抑制黃麴黴毒素的活性物質和幾丁質酶的沙雷氏菌高產發酵液。該發酵上清液中幾丁質酶酶活為2.04～5.36U/ml；對寄生麴黴菌絲生長的抑制率為80.13～89.56%，對黃麴黴毒素產生的抑制率為90.22～98.31%。本發明培養基組成合理，製備方法簡單、可靠。
文檔編號C12N9/42GK102634473SQ201210151138
公開日2012年8月15日 申請日期2012年5月16日 優先權日2012年5月16日
發明者丁清龍, 武芹席, 王凱, 趙騰飛, 邵翅, 閆培生 申請人:哈爾濱工業大學(威海)