由人巨細胞病毒感染的細胞製造「緻密體」（db）的製作方法

2023-05-12 15:25:36

由人巨細胞病毒感染的細胞製造「緻密體」（db）的製作方法
【專利摘要】本發明涉及「緻密體」（DB）的製造和含有DB的藥學組合物。
【專利說明】由人巨細胞病毒感染的細胞製造「緻密體」(DB)
【技術領域】
[0001]本發明涉及「緻密體」(DB)的製造和含有DB的藥學組合物。
【背景技術】
[0002]還被稱為人類皰疫病毒5的人巨細胞病毒(HCMV)為一種覆膜的雙股DNA病毒,其屬於皰疹病毒。HCMV對於健康的成人是通常無害的。然而在妊娠中該病毒是特別危險的，並且可以對未出生的胎兒甚至是危及生命的。對於具有虛弱的免疫系統的人，也可能由被HCMV感染髮展成嚴重的疾病。因此，特別有危險的是愛滋病患者、移植受者、幹細胞移植後的白血病患者、以細胞抑制劑治療的患者等等。
[0003]對於具有虛弱的免疫系統的患者，在HCMV感染時使用病毒抑制劑，例如更昔洛韋、勝甲酸、西多福韋、並且也可能是阿昔洛韋。
[0004]此外，從多年前起已經致力於抗HCMV的痘苗或疫苗的發展。因此例如嘗試了，以削弱的或減毒的活痘苗引發所期望的免疫力。然而由此僅僅可以獲得有限的保護。
[0005]另外的方式在於，藉助於所謂的「緻密體」(DB)實現接種疫苗。在這種情況下涉及由HCMV派生出的、在電子顯微鏡中可見的結構。DB為在其被膜中膜圍繞的亞病毒顆粒，被膜由細胞脂質膜派生而出、嵌入病毒糖蛋白。這些病毒蛋白很有可能以天然的構象存在於病毒脂質膜中。類似於病毒顆粒，DB在被感染的細胞的細胞質中形成並且最終由細胞排出。DB的90%DB蛋白質量由病毒編碼為所謂的PP65(UL83)蛋白組成。此外在DB中，還可以探測到病毒蛋白PP150 (UL32)、gH (UL75)、gM (UL100)以及gB (UL55)。因為DB不含有病毒DNA和病毒殼體，所以其是非感染性的。
[0006]在現有技術中描述`了，DB由於其高度近似於HCMV抗原特性的抗原特性，適合作為抗HCMV感染或在HCMV感染時作用的痘苗。這種痘苗被證明是特別有效的。因為DB是非感染性的，所以風險方面和副作用與活痘苗的情況相比明顯較少受批評的。因此，含有DB的、名稱為「VMP2001」的痘苗已經存在於臨床試驗中。以DB接種疫苗的原則和優點例如在W000/5372中進行了描述。
[0007]由於DB在HCMV的正常侵染循環中:i)僅以微小的量形成並且因此僅以有限的量提供；並且ii) DB製劑可能在一定情況下被感染性的HCMV汙染，存在對以下方法的需求，即，通過該方法DB的形成可以有針對性地提高並且防止通過感染性的HCMV而汙染。
[0008]Reefschlaeger 等(2001，Journal of Antimicrobial Chemotherapy (抗菌化學療法雜誌)48，757-767)和 Buerger 等(2001，Journal of Virology (病毒學雜誌)75，9077-9086)描述了一種名稱為BAY38-4766的物質，其應當提升所形成的DB的量。
[0009]Hwang 等(2007，Journal of Viro logy81，11604-11611 )和 Hwang 等(2009, Antimicrobial Agents and Chemotherapy (抗微生物製劑與化學療法)53，5095-5101)描述了苯並咪唑基-D核糖核苷，其同樣能夠適用於所形成的DB的量的提升。
[0010]然而，迄今所描述的用於DB形成優化的所謂適用的物質都沒有在實踐中得以證明。

【發明內容】

[0011]在這個背景下，本發明的任務在於:提供另外的物質，該物質作為在生產DB時的添加物i)防止DB製劑被感染性的HCMV汙染；ii)在DB生產的範疇下提升DB的產率。
[0012]這個任務通過如下物質的用途解決，該物質選自以下物質:
[0013]`
【權利要求】
1.物質的用來製造「緻密體」(DB)的用途，其特徵在於，所述物質選自以下物質:
2.根據權利要求1所述的用途，其特徵在於，利用所述物質在適當的介質中培養以人巨細胞病毒(HCMV)感染的生物細胞。
3.根據權利要求2所述的用途，其特徵在於，所述生物細胞為原代細胞。
4.根據權利要求2或3所述的用途，其特徵在於，所述生物細胞選自由以下所構成的組:人成纖維細胞、人內皮細胞、人樹突狀細胞、人上皮細胞和人巨噬細胞。
5.根據權利要求2至4中任一所述的用途，其特徵在於，所述培養在所述物質的濃度為約lnmol/1到約lOOiimol/l的介質中進行。
6.根據權利要求2至5中任一所述的用途，其特徵在於，所述培養進行I天到14天的持續時間，優選進行3至10天，最優選地進行5天。
7.根據權利要求2至6中任一所述的用途，其特徵在於，在所述培養之後進行所述緻密體的分離。
8.根據權利要求7所述的用途，其特徵在於，所述分離通過藉助離心從無細胞的所述介質中分出緻密體進行。
9.一種製造「緻密體」(DB)的方法，所述方法包括以下步驟: (1)提供在適當的介質中的、以人巨細胞病毒(HCMV)感染的生物細胞，以及 (2)利用物質培養感染的生物細胞， 其特徵在於，所述物質選自以下物質:
10.根據權利要求9所述的方法，其特徵在於，所述生物細胞為原代細胞。
11.根據權利要求9或10所述的方法，其特徵在於，所述生物細胞選自由以下所構成的組:人內皮細胞、人成纖維細胞、人樹突狀細胞、人上皮細胞和人巨噬細胞。
12.根據以上權利要求中任一所述的方`法，其特徵在於，步驟(2)在所述物質的濃度為約lnmol/1到約liimol/1的介質中進行。
13.根據以上權利要求中任一所述的方法，其特徵在於，步驟(2)進行I天到14天的持續時間，優選進行3至10天，最優選地進行5天。
14.根據以上權利要求中任一所述的方法，其特徵在於，在步驟(2)後接著為另外的步驟: (3)分離所述緻密體。
15.根據權利要求14所述的方法，其特徵在於，在步驟(3)中所述緻密體通過離心無細胞的介質從所述介質中分出。
16.一種用於製造藥學組合物的方法，所述方法具有以下步驟: (1)製造「緻密體」(DB); (2)提供在步驟(1)中製造的所述緻密體；以及 (3)把在步驟(2)中提供的所述緻密體配製到藥學上能接受的載體中，其特徵在於，步驟(1)中的製造根據權利要求9至15中任意一項所述的方法進行。
17.根據權利要求16所述的方法，其特徵在於，所述藥學組合物為疫苗。
18.根據權 利要求16或17所述的方法製造的藥學組合物。
【文檔編號】C07D413/04GK103764164SQ201280034022
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2012年5月3日 優先權日:2011年5月10日
【發明者】彼得·利施卡, 克裡斯蒂安·辛茲格爾 申請人:艾庫裡斯有限及兩合公司