一種胸腺素α1的純化方法
2023-05-12 15:33:06 1
專利名稱：一種胸腺素α1的純化方法
技術領域：
本發明涉及一種多肽的純化方法，尤其涉及胸腺素α 1的純化方法。
背景技術：
胸腺素α 1 (Thymosin α 1)是由胸腺素組分5 (TF_5)中分離純化得到一種小分子 生物活性多肽，由28種胺基酸排列而成，分子量3108. 37，其含量約佔TF-5的0. 6%，具有 較高的免疫增強活性。胸腺肽α 作用機制主要是作用於T淋巴細胞分化、發育及成熟的 各個階段，從而調節細胞免疫功能，增強機體防病和抗病能力，是一種市場應用前景好的多 肽藥物。
發明內容
本發明提出了一條適於產業化純化胸腺素α 1的工藝方法，使用反相高效液相色 譜法純化胸腺素α 1，純度高且收率好，達到產業化要求。為實現上述目的，本發明採取的技術方案包括以下步驟為1)以十八烷基矽烷鍵合矽膠為固定相，以三氟乙酸的水溶液為A相，乙腈為B相， 梯度-60%，將粗肽溶液進行梯度洗脫；所述「三氟乙酸的水溶液」的濃度為0. 01% -1%，優選為0. 05% -0. 3%。所述「粗 肽」是指採用液相合成法或固相合成法得到的，尚未經過精製處理的胸腺素α 1粗肽或者純 度不能滿足藥用的胸腺素α 。「粗肽溶液」是指粗肽溶於純淨水所得到的溶液，純淨水符 合注射用水標準，優選超純水。優選「乙腈」的純度級別優選色譜純。步驟1)下文也表述 為純化。2)轉鹽採用反相高效液相色譜法將三氟乙酸鹽轉成無鹽。所述「反相高效液相色譜」的固定相為八烷基矽烷鍵合矽膠。所述「轉鹽」指用含 5%乙腈的水衝洗，再用50%乙腈洗脫將胸腺素α 1三氟乙酸鹽轉成無鹽的胸腺素α 1。純化規模包括以下規格色譜柱5cmX25cm(柱子直徑X長度)、15cmX25cm、 30cmX 25cm。
具體實施例方式實施例一1.樣品處理粗肽用超純水溶解，使樣品完全溶解後用濾膜過濾，收集濾液備用。2.純化純化條件色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為5cmX25cm。流動相A相:0. 05%三氟乙酸水溶液，B相乙腈，流速:50_80ml/min。 檢測波長:230歷。梯度:B% 10% -60% (洗脫時間50min)。進樣量為1. 5_2g。純化過程將色譜柱用50%以上的乙腈衝洗乾淨後平衡上樣，上樣量為1. 5_2g。 線性梯度洗脫50min，收集目的峰，將收集的胸腺素α 1溶液於水溫不超過35°C下減壓旋蒸濃縮至約10-20mg/mL後備用。3、轉鹽色譜柱以八烷基矽烷鍵合矽膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為5cmX25cm。將色譜柱用50%以上的乙腈水溶液衝洗乾淨後上樣，上樣量1. 5_2g，用含5% 乙腈的水衝洗15-30min，最後用50%乙腈洗脫，收集目的峰，將收集的胸腺素α 1溶液於水 溫不超過35°C下減壓旋蒸濃縮至約150-200mg/mL後轉至合適大小容器。冷凍乾燥後即可 得到純度大於98%的胸腺素α 1。實施例二1.樣品處理粗肽用超純水溶解，使樣品完全溶解後用濾膜過濾，收集濾液備用。2.純化純化條件色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長 度為15cmX25cm。流動相A相0. 3%三氟乙酸水溶液；B相乙腈，流速:450_550ml/min。 檢測波長230nm。梯度B% 10% -60% (洗脫時間50min)。進樣量為10_15g。純化過程將色譜柱用50%以上的乙腈衝洗乾淨後平衡上樣，上樣量為10_15g。 線性梯度洗脫50min，收集目的峰，將收集的胸腺素α 1溶液於水溫不超過35°C下減壓旋蒸 濃縮至約10-20mg/mL後備用。3、轉鹽色譜柱以八烷基矽烷鍵合矽膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為 15cmX25cm。將色譜柱用50%以上的乙腈水溶液衝洗乾淨後上樣，上樣量10_15g，用含5% 乙腈的水衝洗15-30min，最後用50%乙腈洗脫，收集目的峰，將收集的胸腺素α 1溶液於水 溫不超過35°C下減壓旋蒸濃縮至約150-200mg/mL後轉至合適大小容器。冷凍乾燥後即可 得到純度大於98%的胸腺素α 1。實施例三1.樣品處理粗肽用超純水溶解，使樣品完全溶解後用濾膜過濾，收集濾液備用。2.純化純化條件色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長 度為:30cmX25cm。流動相A相0. 三氟乙酸水溶液；B相乙腈，流速:1900_2200ml/ min。檢測波長230nm。梯度B% 10% -60% (洗脫時間50min)。進樣量為55_75g。純化過程將色譜柱用50%以上的乙腈衝洗乾淨後平衡上樣，上樣量為55_75g。 線性梯度洗脫50min，收集目的峰，將收集的胸腺素α 1溶液於水溫不超過35°C下減壓旋蒸 濃縮至約10-20mg/mL後備用。3、轉鹽色譜柱以八烷基矽烷鍵合矽膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為 30cmX25cm。將色譜柱用50%以上的乙腈水溶液衝洗乾淨後上樣，上樣量55_75g，用含5% 乙腈的水衝洗15_30mi n，最後用50%乙腈洗脫，收集目的峰，將收集的胸腺素α 1溶液於 水溫不超過35°C下減壓旋蒸濃縮至約150-200mg/mL後轉至合適大小容器。冷凍乾燥後即 可得到純度大於98%的符合標準要求的胸腺素α 。綜上所述，用以上方法純化胸腺素α 1操作簡單可行、精品純度高於98%、收率理 想、純化成本較低，達到產業化要求。
權利要求
一種胸腺素α1的純化方法，包括以下步驟1)以十八烷基矽烷鍵合矽膠為固定相，以三氟乙酸的水溶液為A相，乙腈為B相，梯度B％10％-60％，將粗肽溶液進行梯度洗脫；2)轉鹽採用反相高效液相色譜法將三氟乙酸鹽轉成無鹽。
2.根據權利要求1所述方法，其特徵在於步驟1)的A相的三氟乙酸水溶液的三氟乙 酸濃度為0. 05% -0.3%。
3.根據權利要求1至2任意一項所述方法，其特徵在於步驟2)的反相高效液相色譜 的固定相為八烷基矽烷鍵合矽膠。
4.根據權利要求1至2任意一項所述方法，其特徵在於步驟2)用含5%乙腈的水衝 洗，再用50%乙腈洗脫將胸腺素a 1三氟乙酸鹽轉成無鹽的胸腺素a 1。
5.根據權利要求3所述方法，其特徵在於步驟2)用含5%乙腈的水衝洗，再用50% 乙腈洗脫將胸腺素a 1三氟乙酸鹽轉成無鹽的胸腺素a 1。
全文摘要
本發明提出了一條適於產業化純化胸腺素α1的工藝方法，包括以下步驟以十八烷基矽烷鍵合矽膠為固定相，以三氟乙酸的水溶液為A相，乙腈為B相，梯度B％10％-60％，將粗肽溶液進行梯度洗脫；轉鹽採用反相高效液相色譜法將三氟乙酸鹽轉成無鹽。本發明採用一步反相高效液相色譜法純化，一步反相高效液相色譜法轉鹽，使得純化胸腺素α1純度高且收率好，達到產業化要求。
文檔編號C07K1/20GK101798335SQ20101013899
公開日2010年8月11日 申請日期2010年3月30日 優先權日2010年3月30日
發明者戴柱, 袁建成, 覃亮政, 馬亞平 申請人:深圳翰宇藥業股份有限公司