一種治療角膜鹼燒傷的羊膜滴眼液的製作方法

2023-05-13 08:10:31 1

專利名稱：一種治療角膜鹼燒傷的羊膜滴眼液的製作方法
技術領域：
本發明屬於醫藥技術領域，涉及一種針對角膜鹼燒傷的眼科用藥，尤其涉 及一種治療角膜鹼燒傷的羊膜滴眼液。
背景技術：
眾知，羊膜移植作為重建眼表的一項新技術，在國內外得到逐漸的推廣應 用。羊膜移植已廣泛應用於角膜鹼燒傷並取得較好的治療效果。但是，羊膜是
一種暫時性的生物覆蓋物，存在以下幾方面的欠缺
(1) 在移植後1-2周，羊膜移植片自行溶解、脫落、移位、感染；
(2) 較長久貼附於角膜表面，沉積於前彈力層為輕度渾濁，持續三個月之
久；
(3) 術後外形欠佳，影響美觀；
(4) 移植後的羊膜長期存在能否成為受體組織組成部分尚缺乏直接證據。 來自《現代醫藥衛生》的《人羊膜勻漿上清液治療兔角膜鹼燒傷的病理研
究》這篇文章簡述了 一種治療兔角膜鹼燒傷的人羊膜勻漿上清液的研製方法， 羊膜勻漿上清液比羊膜移植經濟、方便、效果佳。其製備方法是在超淨臺上將 羊膜在PBS液中清洗3次，約10 15分鐘，取適當大小稱溼重，按l: 1力pPBS 液放入勻漿機中，每分鐘5000轉，10衝程磨製勻漿，每衝程30秒。取出勻漿 按1 : 5加PBS液於離心管中離心2000 r/min， IO分鐘，取上清液備用(l小時 內用)。隨後加入細胞凍存液放入-80。C水箱過夜，再放入液氮中凍存。但目前 由於羊膜勻漿不穩定，只能短時間內使用，還未用於臨床。
玻璃酸存在於人體，是由普糖醛酸和N-乙醯氨基葡糖為雙糖單位組成的直 接粘多糖。玻璃酸多以其鈉鹽即玻璃酸鈉(英文sodium hyaluronate )的形式 存在和應用。玻璃酸基本為一化學惰性物質，其具有獨特的祐彈性和非牛頓流 體的特性，並具有重要的藥理作用和生理功能，如
l.智能保溼作用玻璃酸被稱為理想的天然保溼因子，其分子中的羧基和其它極性基團可以與水形成氫鍵而結合大量的水。而且，玻璃酸還可以根據環境 的溼度，自動調節吸水量。這種智能保溼作用可使眼表始終保持最佳溼度；
2. 潤滑作用玻璃酸溶液具有良好的私彈性，在低幢擊頻率即切變速率下， 溶液呈黏性，可減少組織間的摩擦，在高窗機頻率即高切變速率下，溶液呈彈 性，可避免組織損傷；
3. 修復、促進癒合作用玻璃酸是創傷無痣痕修復中不可或缺的物質，其可 抑制炎症反應，修複眼表損傷；
4. 生物粘附性玻璃酸與其它高分子聚合物相比，相同的溶液黏度甚至較低 的黏度卻能使藥物獲得較高的生物利用度，其原因在於玻璃酸與眼球表面黏蛋 白具有一種特殊的親和力，即生物黏附。玻璃酸分子中的親水性官能團可與黏 蛋白相互作用，從而延緩藥物的消除；
5. 鋪展潤溼能力玻璃酸作為一種翁多糖，其分子結構、性質與淚液中的粘 性糖蛋白具有相似之處，易與和淚液發生作用。在增加藥液翁度的同時，因具 有與淚液相近的表面張力，從而有利於藥物與淚液混合，使藥液在角膜表面均 勻地鋪展，增強藥物的作用；
6. 緩釋作用玻璃酸具有使藥物緩釋的作用，是由其分子特異性所決定的。 藥物可通過非共價方式鑲嵌在玻璃酸的大分子網狀結構中，玻璃酸分子猶如一 個動態的分子篩，連同藥物較長時間附著於眼球表面；
7. 非牛頓流體特性合成高分子聚合物等物質雖可增加藥液的黏度，延長藥 液在眼表的滯留時間從而提高療效，然而所用合成高分子聚合物溶液基本上為 牛頓流體，當私度增大到一定程度，會使眼睛產生翁糊不適的感覺。而玻璃酸 溶液為非牛頓流體，具有獨特的翁彈性，當眼睛眨動時，由於高切變速率而黏 度降低，克服了合成高分子聚合物等增粘劑存在的不足。
海藻糖具有多種生物特性，例如l.抗乾燥特性("水替代"作用)海藻 糖是一種在脫水作用中起關鍵保護作用的雙糖，它能使許多生物在異常條件下， 如高溫、脫水、冷凍、乾燥時仍能保持原有的活性，提高細胞的抗乾燥能力。 研究發現海藻糖可以抑制因乾燥導致的體外培養人角膜上皮細胞死亡；
2. 穩定生物膜的作用人的眼表也是生物膜，海藻糖可通過降低相變溫度， 使在脫水條件下的膜脂仍能處於液晶狀態，從而起到保護生物膜的作用；
3. 對蛋白質等生物分子的保護作用海藻糖對脫水千燥的生命物質有明顯的 保護作用，即使在極度乾燥的環境中，其還能很好的穩定蛋白質等生物分子，使其不受破壞；
4.製劑穩定劑和保鮮劑的作用海藻糖作為穩定劑和保鮮劑已有廣泛應用。

發明內容
為了克服羊膜移植術後可能會發生植片排斥反應、植片脫落、移位溶解、 感染等併發症和羊膜勻漿上清液的不穩定性、保留時間短等缺點，本發明的目 的在於提供一種以羊膜勻漿上清液為主要活性成分的滴眼液。
為了達到上述目的，本發明採用如下技術方案
本發明提供一種治療角膜鹼燒傷的羊膜滴眼液，其是以羊膜勻漿上清液為 主要活性成分，再加入海藻糖、玻璃酸或其鹽、肝素或其鹽、氯化鈉、苯扎溴 銨、維生素。
所述羊膜滴眼液的處方是每100ml注射用水中，包括海藻糖l-2g,玻璃酸 或其鹽0.5-1.5g,肝素或其鹽4000-6000單位，氯化鈉0.3-0.9g，苯扎溴銨 O.OOl-O扁g,維生素E 0.05-0.15g,羊膜勻漿上清液l-3pl。
優選的，所述羊膜滴眼液的處方是每100ml注射用水中，包括海藻糖1.5g， 玻璃酸或其鹽1.0g,肝素或其鹽5000單位，氯化鈉0.6g，苯扎溴銨0.002g,維生 素E0.1g，羊膜勻漿上清液2pl。
所述羊膜滴眼液的pH值為5.0-9.0,優選為6.5-7.5。所述滴眼液可以採用磷 酸/磷酸鹽緩沖對、硼酸/硼酸鹽緩衝對、鹽酸或氫氧化鈉來調節pH值，優選鹽酸。
其中，本發明涉及的玻璃酸，包括玻璃酸及其鹽，即玻璃酸鈉或其它玻璃 酸的鹽，優選為玻璃酸鈉。
本發明所涉及的肝素，包括肝素及其鹽，優選為肝素鈉或肝素鉀。
本發明羊膜滴眼液的配方合理，主要體現在1)海藻糖等小分子物質優先 與蛋白質表面的水分子結合，使蛋白質的溶劑化層半徑減少，分子結構更緊密， 構象更穩定，有利於抵禦外界極端環境的影響，增強蛋白質的穩定性。2)玻璃 酸及其鹽有使角膜上皮細胞抗乾燥的作用，是很好的保溼劑；也可增加藥物的 生物利用度，還可減輕藥物的生物利用度，還可減輕藥物對眼的刺激，促進眼 部創傷的癒合，迅速緩解眼部不適症狀。3)由於鹼性成纖維細胞生長因子功能 區上有肝素結合區，是鹼性胺基酸的富集區，這些帶電荷的鹼性殘基可與帶負 電荷的肝素結合發揮作用。人類bFGF結合肝素分子肝素後，其三級結構的構象 發生變化，使蛋白質溶解度溫度提高，結構更加穩定。且肝素還可以抑制蛋白
6酶對bFGF的水解，延長bFGF的半衰期。此外，肝素鈉或肝素鉀具有抗炎作用， 可抑制免疫刺激或非免疫刺激誘導的肥大細胞的活化，抑制其釋放炎性物質。 因此，它們可用於治療慢性結膜炎和過敏性結膜炎。另外，肝素鈉或肝素鉀還 可抑制細菌在眼表面的吸附，可用於急性細菌性結膜炎的預防。與腎上腺皮質 激素和非甾體抗炎藥相比，肝素鈉具有生物相容性好、不引起眼內壓升高和長 期使用安全等優點，是一種較理想的治療藥物。
本發明還提供所述羊膜滴眼液的製備方法，是將玻璃酸或其鹽浸入佔總量 1/4的注射用水中，使其溶解備用；取佔總量1/2的注射用水，依次溶解肝素或 其鹽、海藻糖、氯化鈉、苯扎溴銨、維生素E,必要時可加熱，再加入所述玻璃 酸或其鹽的溶液，再將羊膜勻漿上清液加入上述溶液，補加注射用水至體積， 攪拌均勻，調pH值在5.0-9.0 (優選為6.5-7.5)，再用0.22nm孩支孔濾膜過濾除 菌，分裝後即得本發明滴眼液。
其中，所述羊膜勻漿上清液是採用如下方法製備得到在超淨臺上將羊膜 在PBS液中清洗3次，約10-15分鐘，取適當大小稱溼重，4安1 : 1力。PBS液 i丈入勻漿機中，每分鐘5 000轉，IO衝程磨製勻漿，每衝程30秒。取出勻漿按 1 : 5加PBS液於離心管中離心2 000r/min, IO分鐘，取上清液備用；
所述調pH值是採用磷酸/磷酸鹽緩衝對、硼酸/硼酸鹽緩衝對、鹽酸或氫氧 化鈉，優選鹽酸。pH值優選在6.5-7.5之間。
本發明所述羊膜滴眼液可以用於治療角膜鹼燒傷，治療眼部化學傷，治療 翼狀胬肉術後、青光眼濾過術後、角膜上皮缺損等眼部疾病。
本發明的有益效果是與羊膜移植相比，羊膜滴眼液具有製作方便、操作簡 單、技術難度不高等優勢。從患者角度來講，該羊膜滴眼液攜帶使用方便、風 險小、費用低。進一步與現有的羊膜勻漿上清液相比，本發明滴眼液含有多種 活性物質，具有良好的穩定性和生物利用度本發明眼科給藥系統具有良好的 潤滑作用，可提供防粘連的表面；作為給藥系統添加其它藥理活性成分，可增 加藥液的黏度，延長藥物在眼表面的存留時間，提高藥物的生物利用度，減小 藥物的毒副作用，降低藥物的刺激性，並具有緩釋作用。該滴眼液是一個有效 的眼用新藥，具有良好的臨床應用前景。
具體實施例方式
下面結合實施例對本發明作進一步說明，應該理解的是，這些實施例僅用於例證的目的，決不限制本發明的保護範圍。
海藻糖購自北京藍博斯特生物技術有限公司；型號CHL07-25G;規格 50mg/ml。
肝素鈉購自上海燦溪海杣溪經貿有限公司；型號JL011800278;規格lg。 玻璃酸鈉購自上海其勝生物製劑有限公司；產品標準號YZB/國0077-2005;
規格l.Oml/支；標示質量濃度15mg/ml。
維生素E購自武漢遠城科技發展有限公司；規格食品級、醫藥級。 羊膜勻漿上清液的製備在超淨臺上將羊膜在PBS液中清洗3次，約10 15
分鐘，取適當大小稱溼重，按1 : 1加PBS液放入勻漿機中，每分鐘5 000轉，
10沖程磨製勻漿，每沖程30秒。取出勻漿按1 : 5加PBS液於離心管中離心2 000
r/min, 10分鐘，取上清液備用。
實施例1
處方海藻糖1.5g,玻璃酸鈉1.0g，肝素鈉5000單位，氯化鈉0.6g，苯扎 溴銨0.002g，維生素E0.1g,羊膜勻漿上清液2nl，注射用水加至100ml。
將玻璃酸鈉浸入適量(約佔總量的1/4)注射用水中，使其溶解備用；取約 佔總量l/2的注射用水，依次溶解肝素鈉、海藻糖、氯化鈉、苯扎溴銨、維生素 E，必要時可加熱，再加入玻璃酸鈉溶液，再將製備得到的羊膜勻漿上清液加入 上述溶液，補加注射用水至體積，攪拌均勻，用鹽酸調節pH至6.5-7.5，再用 0.22pm孩t孔濾膜過濾除菌，分裝後即得本發明滴眼液。
實施例2
處方海藻糖lg,玻璃酸鈉0.5g,肝素鉀4000單位，氯化鈉0.3g，苯扎溴 銨0.001g，維生素E0.05g,羊膜勻漿上清液注射用水加至100ml。
將玻璃酸鉀浸入適量(約佔總量的1/4)注射用水中，使其溶解備用；取約 佔總量1/2的注射用水，依次溶解肝素鉀、海藻糖、氯化鈉、苯扎溴銨、維生素， 必要時可加熱，再加入玻璃酸鉀溶液，再將製備得到的羊膜勻漿上清液加入上 述溶液，補加注射用水至體積，攪拌均勻，用磷酸/磷酸鹽緩衝液調節pH至 5.0-6.5，再用0.22pm微孔濾膜過濾除菌，分裝後即得本發明滴眼液。
實施例3處方海藻糖2g,玻璃酸鈉1.5g,肝素鈉6000單位，氯化鈉0.9g,苯扎溴 銨0.003g,維生素E0.15g,羊膜勻漿上清液3pl，注射用水加至100ml。
將玻璃酸鈉浸入適量(約佔總量的1/4)注射用水中，使其溶解備用；取約 佔總量1/2的注射用水，依次溶解肝素鈉、海藻糖、氯化鈉、苯扎溴銨、維生素， 必要時可加熱，再加入玻璃酸鈉溶液，再將羊膜勻漿上清液加入上述溶液，補 加注射用水至體積，攪拌均勻，用鹽酸調節pH至7.5-9.0,再用0.22pm微孔濾 膜過濾除菌，分裝後即得本發明滴眼液。
以上所述僅為本發明的較佳實施例，對本發明而言僅僅是說明性的，而非 限制性的。本專業技術人員理解，在本發明權利要求所限定的精神和範圍內可 對其進行許多改變，修改，甚至等效，但都將落入本發明的保護範圍內。
權利要求
1、一種治療角膜鹼燒傷的羊膜滴眼液，其特徵在於是以羊膜勻漿上清液為主要活性成分，再加入海藻糖、玻璃酸或其鹽、肝素或其鹽、氯化鈉、苯扎溴銨、維生素。
2、 根據權利要求l所述的羊膜滴眼液，其特徵在於其處方是每100ml注射 用水中，包括海藻糖l-2g,玻璃酸或其鹽0.5-1.5g,肝素或其鹽4000-6000單位， 氯化鈉0.3-0.9g,苯扎溴銨0.001-0.003g,維生素E 0.05-0.15g,羊膜勻漿上清液 l-3pl。
3、 根據權利要求2所述的羊膜滴眼液，其特徵在於其處方是每100ml注射 用水中，包括海藻糖1.5g,玻璃酸或其鹽1.0g,肝素或其鹽5000單位，氯化鈉0.6g， 苯扎溴銨0.002g,維生素E0.1g，羊膜勻漿上清液2|11。
4、 根據權利要求l-3任一項所述的羊膜滴眼液，其特徵在於所述滴眼液的pH <直為5.0-9.0,優選為6.5-7.5。
5、 根據權利要求l-3任一項所述的羊膜滴眼液，其特徵在於採用磷酸磷酸緩 衝對或硼酸緩衝對或鹽酸或氫氧化鈉來調節pH，優選鹽酸。
6、 根據權利要求l-3任一項所述的羊膜滴眼液，其特徵在於所述玻璃酸或其 鹽為玻璃酸鈉；所述肝素或其鹽為肝素鈉或肝素鉀。
7、 一種製備權利要求1-3任一項所述的羊膜滴眼液的方法，其特徵在於是 是將玻璃酸或其鹽浸入佔總量1/4的注射用水中，使其溶解備用；取佔總量1/2 的注射用水，依次溶解肝素或其鹽、海藻糖、氯化鈉、苯扎溴銨、維生素E,必 要時可加熱，再加入所述玻璃酸或其鹽的溶液，再將羊膜勻漿上清液加入上述 溶液，補加注射用水至體積，攪拌均勻，調pH值在5.0-9.0,再用0.22pm微孔 濾膜過濾除菌，分裝後即得本發明滴眼液。
8、 根據權利要求7所述的羊膜滴眼液的製備方法，其特徵在於所述羊膜勻 漿上清液是釆用如下方法製備得到在超淨臺上將羊膜在PBS液中清洗3次， 約10~15分鐘，取適當大小稱溼重，按l : 1加PBS液放入勻漿機中，每分鐘5 000轉，IO衝程磨製勻漿，每衝程30秒。取出勻漿按1 : 5加PBS液於離心管 中離心2 000 r/min, 10分鐘，取上清液備用。
9、 根據權利要求7所述的羊膜滴眼液的製備方法，其特徵在於所述調pH 值是採用磷酸/磷酸鹽緩衝對、硼酸/硼酸鹽緩衝對、鹽酸或氫氧化鈉，優選鹽酸；pH值優選在6.5-7.5之間。
10、權利要求l-3任一項所述的羊膜滴眼液在製備治療角膜鹼燒傷，治療眼 部化學傷，治療翼狀胬肉術後、青光眼濾過術後、角膜上皮缺損等眼部疾病的 藥物製劑中的應用。
全文摘要
本發明提供一種羊膜滴眼液及其製備方法，是以羊膜勻漿上清液為主要活性成分，再加入海藻糖、玻璃酸或其鹽、肝素或其鹽、氯化鈉、苯扎溴銨、維生素等物質。本發明屬於眼科給藥系統，具有良好的潤滑作用，可提供防粘連的表面；作為給藥系統添加其它藥理活性成分，可增加藥液的黏度，延長藥物在眼表面的存留時間，提高藥物的生物利用度，減小藥物的毒副作用，降低藥物的刺激性，並具有緩釋作用。本發明羊膜滴眼液是一個有效的眼用新藥，具有良好的臨床應用前景。
文檔編號A61K9/08GK101658491SQ20091017842
公開日2010年3月3日 申請日期2009年9月24日 優先權日2009年9月24日
發明者於永斌, 張明紅, 楊洪濱 申請人:哈爾濱醫科大學