提高櫛孔扇貝免疫力的褐藻多糖複合劑的製備和投餵方法
2023-05-07 12:31:51
專利名稱：提高櫛孔扇貝免疫力的褐藻多糖複合劑的製備和投餵方法
技術領域：
本發明涉及一種免疫增強劑，是一種通過投餵提高三倍體和二倍體櫛孔扇貝免疫力的褐藻多糖複合劑的製備和投餵方法。
背景技術：
貝類養殖在我國海水養殖業中佔有重要地位，也是出口創匯的支柱產業之一。近年來，頻繁發生的貝類大規模死亡事件，給中國的貝類養殖業造成了重大經濟損失。至今，扇貝養殖業也未得到完全恢復。究其原因，扇貝的免疫防禦能力下降是目前扇貝大規模死亡的重要原因。
採用免疫增強劑增強水產動物的抗疾病感染能力是有效解決養殖病害問題的重要途徑。本發明在未作出之前，周永燦(海南大學)等，1997年在「貝類細胞和體液的防禦機制研究進展」文中曾提出貝類非特異性的免疫因子，包括免疫相關酶類存在一定程度的可誘導性，通過注射誘導劑可以增加免疫因子的存在濃度和活性。孫虎山(煙臺師範學院)等，2002年；牟海津(中國海洋大學)等，1999年在「硒化卡拉膠和酵母葡聚糖對櫛孔扇貝血淋巴中兩種水解酶活力的影響」和「免疫多糖對櫛孔扇貝酸性磷酸酶、鹼性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性的影響」等文中通過注射β-葡聚糖、硒化卡拉膠、蟲草多糖、海藻多糖等多糖類物質對貝類免疫都表現出了一定的增強作用。但他們研究的多糖對扇貝的免疫增強作用均採用注射刺激的方法，對生產性問題未加以考慮，故技術內容難以在生產中推廣使用。目前國內外對提高三倍體櫛孔扇貝的免疫能力方面還未見報導。
發明內容
本發明的目的是通過投餵褐藻多糖類物質，提高三倍體與二倍體櫛孔扇貝的免疫力，從而在一定程度上遏制扇貝在苗種和養殖生產過程中因存在免疫力下降而大面積死亡的問題，為扇貝養殖業的持續穩定發展提供了一條新的出路。
本發明是按照以下操作方法完成的褐藻多糖複合劑的製備褐藻多糖複合劑是由低分子量褐藻多糖和殼聚糖複合而成。先用蒸餾水配製5％的褐藻膠，按1∶20(V∶V)的比例加入褐藻膠裂合酶，降解2～4小時，4000rpm離心6～10分鐘後收集上清液，獲得低分子量的水溶性褐藻多糖。後將殼聚糖配製成1％的溶液，在連續攪拌狀態下，按1∶5(W∶W)的比例加入到褐藻多糖水溶液中，形成非水溶性多糖複合物，多糖複合物從溶液中逐漸析出，經過濾、烘乾等工藝後製備出粉末狀的褐藻多糖複合劑。
褐藻多糖複合劑的投餵褐藻多糖複合劑投餵時，用海水浸溼後用500目篩絹洗搓，然後洗入海水中。扇貝換水後投餵褐藻多糖複合劑，每次投餵量為0.01～0.1g/L海水，每日投餵兩次。在投餵多糖的同時進行餌料的正常投喂。
與已有技術對比，本發明技術具有如下特點1.利用低分子量褐藻多糖具有免疫增強作用的特點，通過與殼聚糖相互中和、包埋，從而轉變為非水溶性物質，能夠隨扇貝的濾食作用而被攝入。
2.採用投餵的方法，使免疫多糖能夠被扇貝攝入，從而簡化了操作程序，適應於大規模培育扇貝的需要。
3.將免疫多糖應用到三倍體和二倍體櫛孔扇貝生產和苗種培育中去，彌補在三倍體扇貝苗種生產中苗種成活率低的不足。本發明能夠使三倍體苗種成活率提高10-20％。
實施方式下面通過實施例詳細敘述本發明褐藻多糖複合劑的製備及投餵三倍體與二倍體櫛孔扇貝的方法一、褐藻多糖複合劑的製備褐藻多糖複合劑是由低分子量褐藻多糖和殼聚糖複合而成。取50g褐藻膠，用蒸餾水配製成5％的褐藻膠底物，按1∶20(V∶V)的比例加入褐藻膠裂合酶於32℃降解2小時，4000rpm離心8分鐘後收集上清液，獲得低分子量的水溶性褐藻多糖。然後將殼聚糖配製成1％的溶液，在連續攪拌狀態下，按1∶5(W∶W)的比例加入到褐藻多糖水溶液中，形成多糖複合物。低分子量褐藻多糖和殼聚糖經相互中和、包埋，從而轉變為非水溶性多糖複合物。多糖複合物從溶液中逐漸析出，經過濾、烘乾等工藝後製備出粉末狀的褐藻多糖複合劑。
二、褐藻多糖複合劑投餵三倍體與二倍體櫛孔扇貝褐藻多糖複合劑的投餵適合於在室內育苗和親貝暫養時應用。
1.三倍體苗種生產中投餵褐藻多糖複合劑在三倍體扇貝苗種生產中投餵褐藻多糖複合劑要在幼蟲達到150-160微米後進行。褐藻多糖複合劑投餵時，用海水浸溼後用500目篩絹洗搓，然後洗入海水中。扇貝換水後投餵褐藻多糖複合劑，每次投餵量為0.01g/L海水，每日投餵兩次。在投餵多糖的同時進行餌料的正常投喂。
2004年按本發明的方法進行了養殖試驗。試驗在山東省長島增殖試驗站進行，試驗池2個，每池水體20立方米。對照池一個，水體20立方米。試驗池投餵褐藻多糖複合劑，結果表明，三倍體櫛孔扇貝的成活率比對照提高14％。通過投餵的方式，由低分子量褐藻多糖和殼聚糖形成的非水溶性複合物，能夠隨扇貝的濾食作用而被攝入，從而簡化了操作程序，適應於大規模培育扇貝的需要。
2.在親貝培育中投餵褐藻多糖複合劑2004年4月在黃海水產研究所實驗室內進行。在親貝培育過程中也用海水浸溼後用500目篩絹洗搓，然後洗入海水中。褐藻多糖複合劑的投餵也採用每天兩次，投餵量為0.1g/L海水。在投餵一個月以後，檢測扇貝血細胞吞噬能力、肝臟酸性磷酸酶以及鹼性磷酸酶的活性的免疫指標。發現投餵褐藻多糖複合劑能夠顯著增加扇貝的血細胞吞噬能力(見表1)、肝臟酸性磷酸酶(見表2)以及鹼性磷酸酶(見表3)的活性。能夠具有明顯的免疫增強作用。
表1 多糖投餵對櫛孔扇貝血細胞吞噬作用的影響投餵方式吞噬百分率(％)褐藻多糖複合劑 44.0±5.74對照 35.3±2.91表2 多糖投餵對櫛孔扇貝肝臟ACP活力的影響投餵方式ACP活力(金氏單位/ml)褐藻多糖複合劑 1014.0±73.91對照 840.3±55.12表3 多糖投餵對櫛孔扇貝肝臟ALP活力的影響投餵方式ALP活力(金氏單位/100ul)褐藻多糖複合劑 161.9±22.22對照 134.4±12.30從表1中看出投餵褐藻多糖複合劑後扇貝的血細胞吞噬百分率由對照組的35.3％±2.91％提高到44.0％±5.74％。從表2中看出投餵褐藻多糖複合劑扇貝的肝臟酸性磷酸酶的活性由對照組的840.3±55.12金氏單位/ml提高到1014.0±73.91金氏單位/ml。從表3中看出投餵褐藻多糖複合劑扇貝的鹼性磷酸酶的活性由對照組134.4±12.30金氏單位/100ul提高到161.9±22.22金氏單位/100ul。
權利要求
1.一種提高櫛孔扇貝免疫力的褐藻多糖複合劑的製備和投餵方法，其特徵在於它的製備方法是它是由低分子量褐藻多糖和殼聚糖複合而成，先用蒸餾水配製5％的褐藻膠，按1∶20(V∶V)的比例加入褐藻膠裂合酶，降解2～4小時，4000rpm離心6～10分鐘後收集上清液，獲得低分子量的水溶性褐藻多糖，後將殼聚糖配製成1％的溶液，在連續攪拌狀態下，按1∶5(W∶W)的比例加入到褐藻多糖水溶液中，形成非水溶性多糖複合物，多糖複合物從溶液中逐漸析出，經過濾、烘乾等工藝後製備出粉末狀的褐藻多糖複合劑。
2.一種提高櫛孔扇貝免疫力的褐藻多糖複合劑的製備和投餵方法，其特徵在於它的投餵方法是將褐藻多糖複合劑用海水浸溼後，用500目篩絹洗搓，然後洗入海水中，扇貝換水後投餵褐藻多糖複合劑，每次投餵量為0.01～0.1g/L海水，每日投餵兩次，在投餵多糖的同時進行餌料的正常投喂。
全文摘要
一種提高櫛孔扇貝免疫力的褐藻多糖複合劑製備和投餵方法，是將褐藻膠經酶解後形成低分子量的褐藻多糖，與殼聚糖相互中和製備成非水溶性的褐藻多糖複合劑；後將褐藻多糖複合劑用海水洗入。定量定時與餌料同時進行正常投喂，使褐藻多糖複合劑隨扇貝的濾食而被攝入。褐藻多糖複合劑能夠顯著提高三倍體與二倍體櫛孔扇貝的血細胞吞噬能力以及肝臟酸性磷酸酶、鹼性磷酸酶的活性，增強其免疫功能和抗病力。本發明可適用於三倍體與二倍體櫛孔扇貝苗種培育及親貝培育，將有助於提高櫛孔扇貝的抗病力和成活率，經生產應用，三倍體苗種成活率可提高10－20％。
文檔編號A61K31/715GK1602890SQ20041002457
公開日2005年4月6日 申請日期2004年8月19日 優先權日2004年8月19日
發明者劉志鴻, 江曉路, 楊愛國 申請人:中國水產科學研究院黃海水產研究所