檢測Angelman症候群的基因晶片及使用方法、試劑盒的製作方法
2023-05-15 04:25:01 1
專利名稱：檢測Angelman症候群的基因晶片及使用方法、試劑盒的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種生物技術領域的基因晶片及使用方法、試劑盒，具體涉及一種檢測Angelman症候群的基因晶片及使用方法、試劑盒。
背景技術：
Angelman症候群(Angelman syndrome，AS)，又名快樂木偶症候群，是一種基因組印記性疾病，最早由Hurry Angelman在1965年報導。該病在臨床上表現為複雜的多系統異常，主要I臨床症狀包括小頭畸形、快樂木偶樣的共濟失調步態、癲癇、EEG異常、 過度興奮和發作性大笑等。母源15號染色體qll-13區域的異常是導致該病發生的主要原因，目前已明確有4種分子病理機制會導致AS的發生。國外報導AS的發病率約為 2.5/100000-10/100000。目前的研究表明4種明確的機制會導致Angleman症候群的發生(1)母源染色體15qll. 2-13關鍵區域發生4 6Mb的大片段缺失(佔患兒的70% )， UBE3A基因位於這一區域痰，因此母源UBE3A基因表達缺失；(2) 15號染色體父源單親二體性(uniparental disomy, UPD,5% )，即患兒的兩條15號染色體都來自父源，缺乏母源 15號染色體，因此缺乏母源的UBE3A基因，而父源UBE3A基因不具有表達活性；C3)印記缺損(imprinting defect, ID，5% )，母源15qll. 2_13區域呈現異常的印記狀態，從而引起 UBE3A基因表達出現異常；(4)母源UBE3A基因發生突變(10% )，無法正常表達。這4種機制都會間接或直接引起UBE3A基因的低表達或不表達，從而使患者產生AS特徵性的臨床表現。另有約10%的AS患者其致病機制尚未明確。基於AS的發病機制不同，已建立了多種實驗室診斷方法，其中MS-PCR是最主要和最常用的診斷方法。由於在AS的分子機制中，15qll_13缺失、父源單親二倍體和印記缺陷均表現為甲基化狀態的異常，涉及這3種機制的病例均可應用MS-PCR進行診斷，並且這3 種機制的病例共佔AS的80%，因此可首先應用MS-PCR方法對病例進行初步診斷。此外，還可以使用FISH的方法，檢出率為70%。然而尚無一種快速、低成本、大通量和自動化檢測 Angelman症候群基因突變的方法。比較基因組雜交(CGH)晶片分析技術是一種突破性技術，能夠支持研究人員通過微陣列準確研究與疾病有關的染色體的變化。比較基因組雜交(CGH)晶片分析的原理是在一張晶片上用兩份標記不同螢光素的樣品(檢測樣品和對照樣品)同時進行雜交，從而快速而又直觀地檢測實驗樣品和對照樣品之間基因組DNA的拷貝數量的差異。CGH應用於疾病遺傳學的研究，可以提供一個全基因組的掃描圖，提示樣本DNA在整個染色體組的哪個特定位置存在擴增或缺失，那些發生擴增的區域，極有可能存在致病基因，而缺失區域即可能包含一些抑制基因。因此，需要一種新的技術方案來克服現有技術的上述缺陷和不足。
發明內容
本發明的目的在於克服現有技術的不足，提供一種檢測Angelman症候群的基因晶片及使用方法、試劑盒。本發明的基因晶片操作步驟簡單，檢測特異性高，穩定性好，時間短，成本低。本發明還提供了一種檢測Angelman症候群的基因晶片的使用方法及試劑盒。本發明的目的是通過以下技術方案實現第一方面，本發明提供一種檢測Angelman症候群的基因晶片，包括固相載體和固定在該固相載體上的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO. 1 50所示的核苷酸序列。優選地，所述固相載體選自載玻片、矽片、硝酸纖維素膜、尼龍膜或聚苯乙烯。第二方面，本發明還涉及前述檢測檢測Angelman症候群的基因晶片的使用方法， 包括以下步驟(a)製備樣品DNA片段；
(b)螢光標記上述DNA片段；(c)洗脫上述標記產物；(d)將標記產物與所述基因晶片雜交；(e)掃描檢測基因晶片的雜交信號，獲得結果。第三方面，本發明還涉及一種用於檢測Angelman症候群的試劑盒，所述試劑盒包括權利要求1所述的基因晶片。優選地，所述試劑盒還包括標記物，所述標記物為Cy3_dUTP。優選地，該試劑盒還包括標記物，所述標記物為Cy5_dUTP。本發明具有如下的有益效果本發明的基因晶片操作步驟簡單，檢測特異性高，穩定性好，該晶片多次試驗重複性高；時間短，從樣本抽提到得到掃描結果可在一天內完成。
具體實施例方式下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解為這些實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，例如Sambrook等分子克隆實驗室手冊見New York Cold Spring Harbor Laboratory出版社1989年版中所述的條件，或按照製造廠商所建議的條件。實施例本實施例的基因晶片由固相載體和固定在該固相載體上的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO. 1 50所示的核苷酸序列，所述固相載體為玻片。本實施例基因晶片的固相載也可選用硝酸纖維素膜、矽片、尼龍膜或聚本乙烯。本實施例的寡核苷酸探針由安捷倫公司生產，同時本實施例的基因晶片也由安捷倫公司按照常規方法生產。本實施例基因晶片的使用方法，步驟如下(1)樣品DNA片段的製備取患者、正常人血液，採用常規方法抽提全基因組DNA(gDNA)。將水浴鍋溫度調到371和651，溶化10\8吐作『C (見下表)，短暫渦旋震蕩後離心數秒。對每個反應來說，將gDNA加入到適當的無核酸酶的PCR管中，並加入無核酸酶的水使反應體積達到10. 1 μ L0在冰上準備酶切混合母液，按順序加入以下試劑
權利要求
1.一種檢測Angelman症候群的基因晶片，包括固相載體和固定在該固相載體上的寡核苷酸探針，其特徵在於，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO. 1 50所示的核苷酸序列。
2.根據權利要求1所述的檢測Angelman症候群的的基因晶片，其特徵在於，所述固相載體選自載玻片、矽片、硝酸纖維素膜、尼龍膜或聚苯乙烯。
3.—種如權利要求1所述檢測Angelman症候群的基因晶片的使用方法，其特徵在於， 包括以下步驟(a)製備樣品DNA片段；(b)螢光標記上述DNA片段；(c)洗脫上述標記產物；(d)將標記產物與所述基因晶片雜交；(e)掃描檢測基因晶片的雜交信號，獲得結果。
4.一種用於檢測Angelman症候群的試劑盒，其特徵在於，所述試劑盒包括權利要求1 所述的基因晶片。
5.根據權利要求4所述的用於檢測Angelman症候群的試劑盒，其特徵在於，所述試劑盒還包括標記物，所述標記物為Cy3-dUTP。
6.根據權利要求4所述的用於檢測Angelman症候群的試劑盒，其特徵在於，該試劑盒還包括標記物，所述標記物為Cy5-dUTP。
全文摘要
本發明涉及一種檢測Angelman症候群的基因晶片及使用方法、試劑盒，所述基因晶片包括固相載體和固定在該固相載體上的探針，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO.1-50所示的核苷酸序列；所述使用方法包括如下步驟(a)製備樣品DNA片段；(b)螢光標記上述DNA片段；(c)洗脫上述標記產物；(d)將標記產物與所述基因晶片雜交；(e)掃描檢測基因晶片的雜交信號，獲得結果；本發明還涉及包含前述基因晶片的試劑盒。本發明的基因晶片操作步驟簡單，檢測特異性高，穩定性好，從樣本抽提到得到掃描結果可在一個工作日內完成，成本低，適用於臨床患者基因突變檢測、產前診斷和正常人雜合子攜帶者檢測。
文檔編號C12Q1/68GK102559872SQ201110410178
公開日2012年7月11日 申請日期2011年12月9日 優先權日2011年12月9日
發明者吳茜, 李笑天, 秦勝營, 賀林, 郭奇桑, 龔小會 申請人:上海交通大學, 復旦大學附屬婦產科醫院