一種螢光標記的腫瘤靶向示蹤劑及製備方法和應用的製作方法
2023-05-16 02:56:11
一種螢光標記的腫瘤靶向示蹤劑及製備方法和應用的製作方法
【專利摘要】一種螢光標記的腫瘤靶向示蹤劑及製備方法和應用，屬於螢光標記【技術領域】。本發明示蹤劑由異硫氰酸螢光素FITC與7肽IF7構成，記為FITC-IF7；7肽IF7為異亮氨酸－苯丙氨酸－亮氨酸－亮氨酸－色氨酸－穀氨醯胺－精氨酸。其製備方法為：取FITC加入於IF7鹼性溶液中，4℃反應24h，NH4Cl終止反應，製備型HPLC分離純化得到FITC－IF7。FITC－IF7具有良好的穩定性，對腫瘤細胞親和力高，能進入不同的腫瘤細胞：人表皮癌細胞（A431）、人肺腺癌細胞（A549）、人肝癌細胞（Bel-7402）、小鼠黑色素瘤細胞（B16）。FITC-IF7利用FITC等螢光材料作為示蹤劑，檢測方便，各種螢光顯微鏡、流式細胞儀都可檢測，還可用於腫瘤診斷的螢光成像。
【專利說明】一種螢光標記的腫瘤靶向示蹤劑及製備方法和應用
【技術領域】
[0001]螢光標記的腫瘤靶向示蹤劑及製備方法和應用，屬於螢光標記【技術領域】。本發明示蹤劑FITC-1F7可用於檢測其進入不同腫瘤細胞的能力，在抗腫瘤藥物研製和光學成像等生物應用領域具有重要的作用。
【背景技術】
[0002]在生命科學及現代分子生物學領域裡，研究和應用高靈敏度的非同位素檢測方法一直是各國學者共同努力的方向。螢光標記技術是指利用一些能發螢光的物質共價結合或物理吸附在所要研究分子的某個基團上，利用它的螢光特性來提供被研究對象的信息。該技術具有聞靈敏度、聞穩定性和聞選擇性等特點。
[0003]糖模擬肽(carbohydrate mimetic peptide, CMP),是一短序列肽分子，能模擬生物大分子或細胞表面複雜的糖結構，常用於替代糖分子進行誘導免疫反應製備特異性抗體。CMP分子小，血漿清除快，在藥代動力學方面極具優勢，備受研究者青睞，現在也多用於篩選受體或抗體的特異性高親和力配體。如能篩選出一種與腫瘤新生血管特異性結合的CMP,將有較高應用前景。Shingo Hatakeyama等在研究糖模擬肽的過程中，發現了一個名為IF7的七肽片段，能有效靶向腫瘤血管，而且基本不引起免疫反應。Anxal是鈣磷脂結合蛋白Anx家族的成員之一，高表達於腫瘤新生血管，是EGFR的底物，可以特異性調節MAPK/ERK信號傳導通路，同時作為PLA2的抑制劑等參與信號轉導、細胞凋亡、鈣離子通道的形成等眾多生理過 程，在腫瘤的形成及發展中起重要作用。結合Shingo Hatakeyama等的研究，我們發展了以IF7為基礎，以Anxal為靶點，螢光為標記的腫瘤靶向示蹤劑，檢測其進入不同腫瘤細胞的能力，這對研究抗腫瘤藥物和光學成像等生物應用領域具有重要的作用。
【發明內容】
[0004]本發明的目的是提供一種螢光標記的腫瘤靶向示蹤劑及製備方法和應用。用螢光基團標記IF7製備腫瘤靶向示蹤劑，並且檢測其進入腫瘤細胞的能力，在抗腫瘤藥物研製和光學成像等生物應用領域具有重要的作用。
[0005]本發明的技術方案:一種螢光標記的腫瘤靶向示蹤劑，該示蹤劑由異硫氰酸螢光素FITC與7肽IF7構成，記為FITC-1F7 ；7肽IF7為異亮氨酸一苯丙氨酸一亮氨酸一亮氨酸一色氨酸一穀氨醯胺一精氨酸。
[0006]FITC -1F7的結構式為
【權利要求】
1.一種螢光標記的腫瘤靶向示蹤劑，其特徵在於該示蹤劑由異硫氰酸螢光素FITC與7肽IF7構成，記為FITC-1F7 ；7肽IF7為異亮氨酸一苯丙氨酸一亮氨酸一亮氨酸一色氨酸一穀氨醯胺一精氨酸。
2.權利要求1所述螢光標記的腫瘤靶向示蹤劑的製備方法，其特徵在於:(1)IF7、FITC分別用DMSO溶解配製成10mg/mL溶液，再用0.5mol/L的碳酸氫鈉緩衝溶液稀釋成lmg/mL溶液；(2)取lmg/mL的FITC溶液10μ L緩慢加入於lmg/mL的IF7 100 μ L溶液中，邊加邊輕輕晃動使其混合均勻，暗處4V反應24 h ；(3)加入5mol/L的NH4C1至終濃度50mmol/L，4°C終止反應2h。
3.權利要求1所述的腫瘤靶向示蹤劑的分離純化方法，其特徵在於:(1)製備型高效液相HPLC純化FITC標記的IF7用製備型高效液相HPLC純化，Waters XBridge, C-18色譜柱150 mmX 19mm, 5 μ m,流動相A為含0.1%TFA的純水，B為含0.1%TFA的乙腈，流速20mL/min,進樣體積為1 mL,檢測波長218nm ；(2)梯度洗脫，0-1.2min:95%A 和 5% B ；1.2-21 min:95%A 和 5% B_35%A 和 65% B ；21-24 min:35%A 和 65% B ;24-27 min:35%A 和 65% B_5%A 和 95% B ；27-30min:5%A 和 95%B-95%A和5% B ;收集16.51min的流出液。
4.權利要求1所述的腫瘤靶向示蹤劑的應用，其特徵在於應用於腫瘤細胞的示蹤，用螢光顯微鏡和/或流式細胞儀 技術觀察示蹤劑對腫瘤細胞的親和力。
【文檔編號】A61K47/42GK103623418SQ201310254778
【公開日】2014年3月12日 申請日期:2013年6月25日 優先權日:2013年6月25日
【發明者】蔣孟軍, 吳鵬西, 殷瑩, 李小雯, 謝平 申請人:蔣孟軍, 吳鵬西, 殷瑩, 李小雯, 謝平