標記了鹼性磷酸酶抗原抗體稀釋液的製作方法
2023-05-17 05:45:21
專利名稱：標記了鹼性磷酸酶抗原抗體稀釋液的製作方法
標記了鹼性磷酸酶抗原抗體稀釋液本發明涉及ー種醫藥試劑，具體的說是ー種標記了鹼性磷酸酶抗原抗體稀釋液。該稀釋液能夠穩定標記鹼性磷酸酶的抗原抗體的活性，並可通過冷凍乾燥的方法來長期穩定標記了鹼性磷酸酶的抗原抗體的活性，大大提升了鹼性磷酸酶在免疫體外診斷行業的應 用。鹼性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)是ー種廣泛存在於動物、植物、微生物中的酶。臨床體外診斷經常用到的鹼性磷酸酶主要從小牛腸黏膜及大腸桿菌中獲得，兩種酶均可在市場購買如Roche、Sigma等。鹼性磷酸酶可以催化多種底物顯色，所以它在臨床免疫體外診斷行業有著廣泛的應用。標記了鹼性磷酸酶的抗原抗體試劑是臨床免疫體外診斷試劑盒的重要組成部分。免疫體外診斷試劑的原理主要通過抗原抗體的特異性結合，然後通過酶催化底物顯色，來達到定量診斷的效果，所以保證穩定的標記鹼性磷酸酶的抗原抗體的活性至關重要。國內以酶作為放大系統的廠家，用到的酶多是辣根過氧化物酶，主要原因是該酶便宜且標記試劑儲存較穩定，但辣根過氧化物酶標記試劑靈敏度較鹼性磷酸酶低。而鹼性磷酸酶沒有被廣泛應用的原因在於性磷酸酶標記試劑的穩定性。本發明為了克服現有技術的不足，發明提供了ー種穩定標記了鹼性磷酸酶抗原抗體的稀釋液，它能夠穩定標記了鹼性磷酸酶的抗原抗體的活性，該稀釋液亦可通過冷凍乾燥的方法來長期穩定標記了鹼性磷酸酶的抗原抗體的活性。為了實現上述目的，本發明設計了ー種標記了鹼性磷酸酶抗原抗體稀釋液，其特徵在於由如下物質組成，磷酸鹽緩衝液，多羥基類有機化合物，胺基酸及蛋白質類化合物，金屬離子，非離子型表面活性剤，防腐剤。所述磷酸鹽緩衝液，由如下物質組成NaCl8. Og ；KClO. 2g ；Na2HPO4. 12H20 2. 9g ；KH2PO4O. 2g ；調PH 至 7· 4，加 DDW 定容至 1000mL。所述多羥基類有機化合物為多糖類化合物或多元醇類化合物。所述多糖類化合物為蔗糖、果糖、麥芽糖、葡聚糖、半乳糖、乳糖或海藻糖中的ー種或多種混合物。所述多元醇類化合物為甘油、甘露醇、肌醇、PEG6000、PEG8000、PEG1000或PEG20000中的ー種或多種混合物。
所述胺基酸及蛋白質類化合物為甘氨酸、纈氨酸、牛血清白蛋白、酪蛋白、明膠中的ー種或多種混合物。所述金屬離子為鎂離子、鋅離子、鈣離子或鐵離子中的ー種或多種混合物。所述非離子型表面活性劑為吐溫-20、吐溫-40、吐溫-60、吐溫_80、Triton X-20、Triton X-100或Triton X-300中的一種或多種混合物。所述防腐劑為疊氮鈉、Proclin-300或慶大黴素中的ー種或多種混合物。本發明同現有技術相比，能夠穩定標記鹼性磷酸酶的抗原抗體的活性，且將稀釋液加入鹼性磷酸酶標記的抗原抗體通過冷凍乾燥法，製備成凍幹品，這樣能夠長期穩定標記了鹼性磷酸酶的抗原抗體的活性。
具體實施方式
]下面結合具體實施例，進ー步闡述本發明。應理解這些實施例僅用於說明本發明不用於限制本發明的範圍。實施例I :本發明稀釋液由如下物質配置而成。磷酸鹽緩衝液NaCl8. Og ；KClO. 2g ；Na2HPO4. 12H202. 9g ；KH2PO4O. 2g ；調PH 至 7· 4，加 DDW 定容至 1000mL。多羥基類有機化合物甘露醇30. 0g。胺基酸及蛋白質類化合物BSA (牛血清白蛋白) 10. Og ;甘氨酸20. 0g。金屬離子MgCl2ImM ；ZnC120. ImM ；非離子型表面活性劑Tween X-200. 5ml0防腐劑NaN3 (疊氮鈉)0. 90g。將標記了鹼性磷酸酶的AFP抗體濃溶液，按I : 4000用稀釋液稀釋，獲得酶標試齊U，將該試劑分成兩份，一份置於37°c恆溫箱內進行加速試驗，另ー份置於2-8°C冰箱內保存。37°C加速7天後，取出酶標試劑，以2-8°C的酶標試劑作為對照，分別加入包被了 AFP抗體的ELISA板孔內，加入AFP抗原，抗原抗體37で反應Ih，洗板，最後以PNPP顯色，終止反應測吸光度。37°C加速7天後其活性剩餘99. 72%。亦可將稀釋後的酶標抗體，分裝成1.0ml每管，置於冷凍乾燥機內，進行冷凍乾燥。冷凍乾燥後，該酶標稀釋液可長期保存。實施例2
磷酸鹽緩衝液NaCl8. Og ；KClO. 2g ；Na2HPO4. 12H202. 9g ；KH2PO4O. 2g ；調PH 至 7· 4，加 DDW 定容至 1000mL。多羥基類有機化合物蔗糖25. 0g。胺基酸及蛋白質類化合物BSA (牛血清白蛋白) 10. Og ;纈氨酸20. Og。金屬離子MgC12ImM ；ZnC12O. ImM ；非離子型表面活性劑Tween X-1000.5ml。防腐劑Procl in-3000.5ml。將標記了鹼性磷酸酶的こ肝表面抗體濃溶液，按I : 2000用稀釋液稀釋，獲得酶標試劑，將該試劑分成兩份，一份置於37°C恆溫箱內進行加速試驗，另ー份置於2-8°C冰箱內保存。37°C加速7天後，取出酶標試劑，以2-8°C的酶標試劑作為對照，分別加入包被了こ肝表面抗體的ELISA板孔內，加入こ肝表面抗原，抗原抗體37で反應lh，洗板，最後以PNPP顯色，終止反應測吸光度。37°C加速7天後其活性剩餘98. 67%。亦可將稀釋後的酶標抗體，分裝成1.0ml每管，置於冷凍乾燥機內，進行冷凍乾燥。冷凍乾燥後，該酶標稀釋液可長期保存。實施例3 磷酸鹽緩衝液NaCl8. Og ；KClO. 2g ；Na2HPO4. 12H202. 9g ；KH2PO4O. 2g ；調PH 至 7· 4，加 DDW 容 1000mL。多羥基類有機化合物蔗糖25. 0g。半乳糖20. Og胺基酸及蛋白質類化合物BSA (牛血清白蛋白) 10. Og ;
酪蛋白10. 0g。金屬離子MgC 12ImM。非離子型表面活性劑Tween X-1000.5ml。防腐劑Procl in-3000.5ml。將標記了鹼性磷酸酶的こ肝核心抗體濃溶液，按I : 12000用稀釋液稀釋，獲得酶標試劑，將該試劑分成兩份，一份置於37°C恆溫箱內進行加速試驗，另ー份置於2-8°C冰箱內保存。37°C加速7天後，取出酶標試劑，以2-8°C的酶標試劑作為對照，分別加入包被了B肝核心抗原的ELISA板孔內，加入こ肝核心抗體競爭，抗原抗體37°C反應lh，洗板，最後以PNPP顯色，終止反應測吸光度。37°C加速7天後其活性剩餘99. 16%。亦可將稀釋後的酶標抗體，分裝成O. 5ml每管，置於冷凍乾燥機內，進行冷凍乾燥。冷凍乾燥後，該酶標稀釋液可長期保存。
權利要求
1.一種標記了鹼性磷酸酶抗原抗體稀釋液，其特徵在於由如下物質組成，磷酸鹽緩衝液，多羥基類有機化合物，胺基酸及蛋白質類化合物，金屬離子，非離子型表面活性劑，防腐劑。
2.根據權利要求I所述的標記了鹼性磷酸酶抗原抗體稀釋液，其特徵在於所述磷酸鹽緩衝液，由如下物質組成 NaCl8. Og ； KCl0. 2g ；Na2HPO4. 12H20 2. 9g ； KH2PO40. 2g ； 調PH至7. 4，加DDff定容至IOOOmL0
3.根據權利要求I所述的標記了鹼性磷酸酶抗原抗體稀釋液，其特徵在於所述多羥基類有機化合物為多糖類化合物或多元醇類化合物。
4.根據權利要求3所述的標記了鹼性磷酸酶抗原抗體稀釋液，其特徵在於所述多糖類化合物為蔗糖、果糖、麥芽糖、葡聚糖、半乳糖、乳糖或海藻糖中的一種或多種混合物。
5.根據權利要求3所述的標記了鹼性磷酸酶抗原抗體稀釋液，其特徵在於所述多元醇類化合物為甘油、甘露醇、肌醇、PEG6000、PEG8000、PEG1000或PEG20000中的一種或多種混合物。
6.根據權利要求I所述的標記了鹼性磷酸酶抗原抗體稀釋液，其特徵在於所述胺基酸及蛋白質類化合物為甘氨酸、纈氨酸、牛血清白蛋白、酪蛋白、明膠中的一種或多種混合物。
7.根據權利要求I所述的標記了鹼性磷酸酶抗原抗體稀釋液，其特徵在於所述金屬離子為鎂離子、鋅離子、鈣離子或鐵離子中的一種或多種混合物。
8.根據權利要求I所述的標記了鹼性磷酸酶抗原抗體稀釋液，其特徵在於所述非離子型表面活性劑為吐溫-20、吐溫-40、吐溫-60、吐溫-80、Triton X-20、Triton X-100或Triton X-300中的一種或多種混合物。
9.根據權利要求I所述的標記了鹼性磷酸酶抗原抗體稀釋液，其特徵在於所述防腐劑為疊氮鈉、Proclin-300或慶大黴素中的一種或多種混合物。
全文摘要
本發明涉及一種醫藥試劑，具體的說是一種標記了鹼性磷酸酶抗原抗體稀釋液。其特徵在於由如下物質組成，磷酸鹽緩衝液，多羥基類有機化合物，胺基酸及蛋白質類化合物，金屬離子，非離子型表面活性劑，防腐劑。本發明同現有技術相比，能夠穩定標記鹼性磷酸酶的抗原抗體的活性，且將稀釋液加入鹼性磷酸酶標記的抗原抗體通過冷凍乾燥法，製備成凍幹品，這樣能夠長期穩定標記了鹼性磷酸酶的抗原抗體的活性。
文檔編號G01N33/535GK102628863SQ20121011754
公開日2012年8月8日 申請日期2012年4月19日 優先權日2012年4月19日
發明者李子樵, 饒啊文 申請人:上海藍怡科技有限公司