一種丹參素衍生物及其製備方法和在藥學上的應用的製作方法

2023-05-01 16:16:06

專利名稱：一種丹參素衍生物及其製備方法和在藥學上的應用的製作方法
技術領域：
本發明屬藥物合成領域，涉及丹參素衍生物的合成方法及在藥學上的應用。

背景技術：
中藥在我國歷史悠久，已有幾千年的歷史，其主要優點為毒副作用小，但由於中藥有效成分的合成困難、複合製劑質量的不穩定和中藥質量標準不易控制等方面原因，很大程度上限制了中藥的發展，因此中藥有效成分單體的製備以及以天然活性成份為先導化合物的合成和半合成化學藥物及成鹽衍生物，即中藥現代化，已成為現代中藥研究的主要方向。丹參素(化學名D-(+)-β-3，4-二羥基苯基乳酸)是中藥丹參中的一種主要有效成分，以丹參素為主要成分的多種中藥複合製劑如複方丹參注射液、複方丹參滴丸等已廣泛應用於臨床。目前丹參素的來源主要是從中藥丹參中提取，現有技術公開了消旋丹參素的化學合成方法，如薛芬等上海第一醫學院學報，1983，10(2)，133-136.)以3，4-二羥基苯甲醛為原料，與N-乙醯甘氨酸縮合後水解再經過Clemmensen還原的方法，合成獲得了丹參素的外消旋體。但是，由於丹參素結構中有兩個極易被氧化的酚羥基，不宜利用直接拆分的方法對丹參素外消旋體進行手性拆分來獲得天然的右旋丹參素。因此尋找新的丹參素的衍生物及其合成方法成為本領域研究人員的關注熱點。


發明內容
本發明的目的是提供一種新結構的丹參素衍生物及其製備方法。
本發明的另一目的是提供所述的丹參素衍生物對缺血心肌的保護藥用用途。
本發明採用丹參素類似物與硝基結合，獲得結構穩定的丹參素衍生物。
本發明提供的丹參素衍生物具有下述I和II的結構
其中R是低級烴基如甲基、乙基、丙基、異丙基、苄基等，低級醯基如丙醯基、苯甲醯基等。
上述化合物通過如下反應流程製備合成
R可以是低級烴基如甲基、乙基、丙基、異丙基、苄基等，低級醯基如丙醯基、苯甲醯基等。
上述步驟1R為亞甲基時，原料為3-(3，4-亞甲基二氧代苯基)-2-羥基丙酸，和乙酸、無水乙酐室溫下反應，2-OH生成乙醯氧基，硝基位於苯環第6位上，得到化合物2-乙醯氧基-3-(6-硝基-3，4-亞甲基二氧代苯基)丙酸(1)。
步驟2R為亞甲基時，原料為3-(3，4-亞甲基二氧代苯基)-2-羥基丙酸，緩慢滴加入濃硫酸、濃硝酸混合酸中反應，硝基位於苯環第6位上，得到化合物2-羥基-3-(6-硝基-3，4-亞甲基二氧代苯基)丙酸(2)。
本發明合成的化合物進行了藥理活性檢測實驗，經體外及體內藥理實驗，結果表明，可降低心肌細胞LDH漏出率，升高細胞內SOD活性，降低細胞內脂質過氧化產物MDA的產生，對原代培養的缺血心肌細胞及急性和慢性心肌梗死均具有保護作用，並具有一定的抗HIV活性。。本化合物可作為原創性的抗心肌缺血類藥物的創新藥物的先導化合物進一步製備治療缺血性心臟病的藥物和抗HIV活性的藥物。



圖1是丹參素衍生物對缺氧心肌細胞乳酸脫氫酶(LDH)漏出率的影響， 其中，各用藥組濃度分別為0.01umol/l、0.1umol/l、1umol/l，*與模型組比較，P＜0.05。
圖2是丹參素衍生物對缺氧心肌細胞內超氧化物岐化酶(SOD)活性的影響， 其中，用藥組濃度為1umol/l，*與模型組比較，P＜0.05。
圖3是丹參素衍生物對缺氧心肌細胞內脂質過氧化產物丙二醛(MDA)含量的影響， 其中，用藥組濃度為1umol/l，*與模型組比較，P＜0.05。

具體實施例方式 通過下述各實施例將有助於進一步理解本發明，但並不限制本發明的內容。
本發明的製備方法可以進一步用代表性的化合物製備過程體現如下 實施例1 按下述反應流程，製備2-乙醯氧基-3-(6-硝基-3，4-亞甲基二氧代苯基)丙酸(1)
取原料3，4-甲叉氧基苯基乳酸0.5g，2.4mmol溶於6mL乙酸和1.5mL乙酐的混合液中，置冰浴中，濃硝酸1滴、乙酸21滴、乙酐21滴配成混合液，緩慢滴入反應液中，冰水浴中反應4小時，用石油醚/乙酸乙酯/乙酸(V/V/V)＝15∶15∶3為展開劑，TLC紫外燈下顯示原料(Rf＝0.5)，反應液中主產物點(Rf＝0.5)，浸磷鉬酸後原料能烤出褐色，兩個產物點烤出淡黃色，停止反應，加入15mL水，用乙酸乙酯萃取，萃取液用水洗3次，無水硫酸鎂乾燥，拌粗矽膠，柱層析分離純化，洗脫劑依次為石油醚/乙酸乙酯/乙酸(V/V/V)＝60∶20∶1，60∶30∶1，40∶40∶1，得到黃色固體200mg，為本化合物(1)，收率28％。HMBC顯示硝基應位於苯環的6-位，mp 129℃。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.06(s，3H，2-OCOCH3)，3.29-3.34(m，1H，3-H)，3.65-3.70(m，1H，3-H)，5.33-5.36(m，1H，2-H)，6.12(s，2H，3』，4』-OCH2O)，6.79(s，1H，2』-H)，7.51(s，1H，5』-H).13C NMR(100MHz，CD3OD)δ20.464，34.592，103.031，106.011，111.467，127.295，143.625，147.367，151.528，170.152，174.191.MS(EI)m/z(％)297(M+，10.84)，249(9.24)，237(9.02)，191(100.00)，177(21.39)，164(53.79)，148(22.82)，136(43.39).HRMS calcd mass for C12H11NO8 297.0485，found 297.0474。
實施例2製備2-羥基-3-(6-硝基-3，4-亞甲基二氧代苯基)丙酸(2) 濃硝酸1mL和濃硫酸1.4mL配成混合酸溶液，置於冰水浴中，原料3，4-甲叉氧基苯基乳酸0.2g，0.95mmol溶於1mL丙酮，攪拌下緩慢滴加入混合酸中，滴加過程中冒黃煙，冰水浴中攪拌反應10分鐘，以石油醚/乙酸乙酯/乙酸(V/V/V)＝10∶10∶2為展開劑，TLC顯示紫外燈下原料(Rf＝0.7)，反應液中有兩個產物點(Rf＝0.5，0.3)，停止反應，將反應液倒入20mL水中，乙酸乙酯萃取，萃取液乾燥，過濾乾燥劑，拌粗矽膠，柱層析分離純化，洗脫劑依次為石油醚/乙酸乙酯/乙酸(V/V/V)＝60∶20∶1，60∶30∶1，得到對應於實施例1的產物點的固體(2)0.1g，收率41％，為化合物(2)，mp 168-170℃。1H NMR(400MHz，acetone-d6)δ3.09-3.15(m，1H，3-H)，3.50-3.55(m，1H，3-H)，4.43-4.46(m，1H，2-H)，6.21(s，2H，3』，4』-OCH2O)，7.02(s，1H，2』-H)，7.48(s，1H，5』-H).MS(EI)m/z(％)255(M+，40.91)，220(11.83)，180(100.00)，177(45.19)，164(42.48)，161(33.53)，149(60.53)，135(19.63)，121(41.19).HRMS calcd mass for C10H9NO7 255.0379，found 255.0376. 當R低級烴基為甲基、乙基、丙基、異丙基或苄基時，低級醯基為丙醯基或苯甲醯基時，可採用上述反應流程合成製得相應的產物。
實施例3丹參素衍生物對缺血心肌保護作用的實驗 按常規方法通過原代培養新生大鼠心肌細胞，建立心肌細胞缺氧模型。實驗分為正常對照組不給於藥物幹預，不缺氧缺糖，模型組不給於藥物幹預，缺氧缺糖5h，用藥組分別給予藥物10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L，缺氧缺糖。
實驗結果顯示，正常對照組細胞內LDH為100％，各用藥組與缺氧組細胞內LDH與正常對照組的差值為LDH漏出率，與缺氧組比較，本發明的化合物可降低缺氧心肌細胞LDH漏出率(圖1)；與缺氧組比較，本發明的化合物能升高細胞內SOD活性(圖2)，提高細胞內超氧化物岐化酶(SOD)活性；與缺氧組比較，本發明中化合物能降低細胞內MDA的含量(圖3)，可抑制細胞內脂質過氧化產物(MDA)的產生。
實施例4丹參素衍生物對急性心肌梗死和慢性心衰的保護實驗 對急性心肌梗死的保護作用成年健康SD大鼠，預給藥1周，麻醉後開胸，結紮左冠狀動脈前降支，製備心肌梗死模型，術後繼續給藥兩天，處死，取血漿及心肌組織，檢測血漿中心肌酶如乳酸脫氫酶、肌酸激酶的活性，心肌組織勻漿，分別檢測梗死面積、炎性因子、抗氧化、抗凋亡等蛋白的基因及蛋白表達水平； 對慢性心衰的保護作用成年健康SD大鼠，製備心肌梗死模型，術後兩天存活的大鼠，隨機分組，連續給藥6周，處死，取血漿及心肌組織，檢測血漿中心肌酶如乳酸脫氫酶、肌酸激酶的活性，心肌組織勻漿，分別檢測炎性因子、抗氧化、抗凋亡等蛋白的基因及蛋白表達水平； 實驗結果表明，本發明化合物能夠減小梗死面積，降低血清中心肌酶活性，並具有抗炎、抗氧化、抗凋亡等作用，對急性心肌梗死和慢性心衰有保護作用。
權利要求
1、一種丹參素衍生物，其特徵是具有下述I和II的結構
其中R是低級烴基為甲基、乙基、丙基、異丙基或苄基，低級醯基為丙醯基或苯甲醯基。
2、根據權利要求1所述的丹參素衍生物，其特徵在於，當R為亞甲基時，是具有下列結構式的化合物1或2
3、權利要求2所述的丹參素衍生物的合成方法，其特徵在於，按下述反應流程，從3，4-甲叉氧基苯基乳酸出發，與乙酸、無水乙酐反應或與濃硫酸、濃硝酸的混合酸反應合成所述化合物1或2
4、權利要求1的丹參素衍生物在製備治療缺血性心臟病的藥物中的用途。
5、按權利要求4所述的用途，其中所述的缺血性心臟病是急性心肌梗死。
6、權利要求1的丹參素衍生物在製備抗HIV活性的藥物中的用途。
全文摘要
本發明屬藥物合成領域，涉及丹參素衍生物。本發明採用丹參素類似物與硝基結合，獲得如上結構穩定的丹參素衍生物。本發明化合物通過培養原代大鼠心肌細胞，建立心肌細胞缺氧模型及急性和慢性大鼠心肌梗死模型，體內、外藥理實驗，結果表明，所述的化合物具有較好的保護缺氧心肌的作用並具有一定的抗HIV活性。本化合物可作為原創性的抗心肌缺血類藥物的創新藥物的先導化合物進一步製備治療缺血性心臟病的藥物和抗HIV活性的藥物。
文檔編號C07D317/62GK101607954SQ20081003916
公開日2009年12月23日 申請日期2008年6月18日 優先權日2008年6月18日
發明者朱依諄, 洋 王, 董村南 申請人:復旦大學