一種小花棘豆黃酮的製備方法及其應用的製作方法

2023-05-02 08:33:06 3

專利名稱：一種小花棘豆黃酮的製備方法及其應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於醫藥和保健品技術領域，涉及一種小花棘豆黃酮的製備方法及其應用。
背景技術：
小花棘豆(Oxytropisglabra DC)是豆科(Leguminosae)棘豆屬(Oxytropis)植物，在新疆分布廣泛。據蒙藥典記載，小花棘豆是一種重要的中蒙藥原料，具有麻醉、鎮靜和止痛作用，主治牙痛、關節痛、失眠、健忘、神經衰弱及皮膚瘙癢。如小花棘豆4.5g、北五加皮6g及地枸葉9g,水煎服,可治關節痛。黃酮類化合物是小花棘豆的有效成分之一。目前，已從小花棘豆中分離得到了 7種黃酮類化合物，均以黃酮苷的形式存在，且均為氧苷。苷元主要為山柰酚、槲皮素、鼠李素和異鼠李素等，糖取代基有D-葡萄糖、L-鼠李糖和D-芸香糖等。並且發現小花棘豆的黃酮含量高於傳統藏藥「達夏」(鐮形棘豆)，表明小花棘豆黃酮具有較好的開發利用前景。國內外研究認為黃酮類化合物除具有抗菌、抗炎、抗突變、降壓、清熱解毒、鎮靜、利尿等作用，在抗氧化、抗癌、抑制脂肪酶等方面有顯著效果，同時也是大多數氧自由基的清除劑，對冠心病、心絞痛等疾病的治療效果顯著；而且黃酮類化合物安全性好、毒性小。而到目前為止，並未有小花棘豆黃酮保肝和抗氧化作用的研究報導和專利申請。

發明內容
本發明的目的在於克服上述技術存在的缺陷，提供一種小花棘豆黃酮的製備方法及其應用，提取得到新疆小花棘豆黃酮類成分，通過體外抗脂質氧化試驗、體外自由基清除試驗、肝損傷小鼠體內自由基清除試驗，小鼠飼餵安全性試驗等，發現小花棘豆黃酮具有保肝和抗氧化作用，可以用於製備保肝和抗氧化藥物及保健食品。。其具體技術方案 為:一種小花棘豆黃酮的製備方法，包括以下步驟:(I)小花棘豆粉碎:取小花棘豆地上部分，陰乾、粉碎、過20目篩後備用；(2)超聲波協助法提取小花棘豆總提取物:稱取小花棘豆樣品，按照物料比I: 10 1: 20g/mL的比例加入體積分數60% 100%的甲醇超聲波提取45 90min，超聲波功率800W，溫度45°C，提取完成後過濾，濾液採用旋轉蒸發儀濃縮，恆溫乾燥箱乾燥，即得到小花棘豆總提取物；(3)小花棘豆黃酮的分離:將小花棘豆總提取物用水充分溶解；向層析柱中加入1/3體積的去離子水，然後將D-101型大孔吸附樹脂用去離子水轉移至層析柱中，加入70%的乙醇溶液(V/V)，體積為樹脂體積的2倍，流速為I倍樹脂體積/min，然後用去離子水洗至無醇味後進行小花棘豆總提取物水溶液的梯度洗脫，用10% 100%的乙醇洗脫，收集50% 85%的乙醇洗脫液，經旋轉蒸發儀濃縮，冷凍乾燥儀乾燥，得到棕黃色粉末；(4)小花棘豆黃酮的定性檢測:通過顯色反應和紙層析法鑑定，顯色反應包括鹽酸-鎂試驗、鹼液試驗和螢光試驗；紙層析反應條件為:取待測液10 μ L點在濾紙上，用正丁醇:冰乙酸:水體積比=4: I: 5為展開劑，上行展開5h，取出晾乾，噴1%氯化鋁乙醇溶液，吹乾後紫外燈下觀察，結果表明得到棕黃色粉末為黃酮類物質；(5)小花棘豆黃酮含量的測定:採用NaNO2-Al (N03) 3_NaOH顯色方法操作，在500nm或者274nm波長處測定吸光度,結果表明小花棘豆樣品中黃酮含量為16.54mg/kg。本發明所述的小花棘豆黃酮在製備保肝和抗氧化藥物及保健食品中的應用。與現有技術相比，本發明的有益效果為:(I)本發明建立了小花棘豆黃酮保肝和抗氧化作用的新用途，為進一步開發小花棘豆資源提供了新的思路。(2)本發明中的製備工藝簡單，成本較低。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明的技術方案作進一步詳細地說明。小花棘豆提取試驗:為了綜合考察小花棘豆黃酮提取的影響因素，利用正交法「均衡分散」的特點，選取超聲時間、甲醇濃度、物料比作為考察因素，並結合多次提取的經驗每因素又選取3個水平安排試驗，以黃酮的得率為衡量提取效率的客觀指標，優選最佳提取工藝。表I正交試驗設 計
權利要求
1.一種小花棘豆黃酮的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟: (1)小花棘豆粉碎:取小花棘豆地上部分，陰乾、粉碎、過20目篩後備用； (2)超聲波協助法提取小花棘豆總提取物:稱取小花棘豆樣品，按照物料比1: 10 I: 20g/mL的比例加入體積分數60% 100%的甲醇超聲波提取45 90min，超聲波功率800W，溫度45°C，提取完成後過濾，濾液採用旋轉蒸發儀濃縮，恆溫乾燥箱乾燥，即得到小花棘 總提取物； (3)小花棘豆黃酮的分離:將小花棘豆總提取物用水充分溶解；向層析柱中加入1/3體積的去離子水，然後將D-101型大孔吸附樹脂用去離子水轉移至層析柱中，加入70%的乙醇溶液，體積為樹脂體積的2倍，流速為I倍樹脂體積/min，然後用去離子水洗至無醇味後進行小花棘豆總提取物水溶液的梯度洗脫，用10% 100%的乙醇洗脫，收集50% 85%的乙醇洗脫液，經旋轉蒸發儀濃縮，冷凍乾燥儀乾燥，得到棕黃色粉末； (4)小花棘豆黃酮的定性檢測:通過顯色反應和紙層析法鑑定，顯色反應包括鹽酸-鎂試驗、鹼液試驗和螢光試驗；紙層析反應條件為:取待測液10 μ L點在濾紙上，用正丁醇:冰乙酸:水體積比=4: I: 5為展開劑，上行展開5h，取出晾乾，噴1%氯化鋁乙醇溶液，吹乾後紫外燈下觀察，結果表明得到棕黃色粉末為黃酮類物質； (5)小花棘豆黃酮含量的測定:採用NaN02-Al(N03) 3-NaOH顯色方法操作，在500nm或者274nm波長處測定吸光度,結果表明小花棘豆樣品中黃酮含量為16.54mg/kg。
2.權利要求1所述的小花 棘豆黃酮在製備保肝和抗氧化藥物及保健食品中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種小花棘豆黃酮的製備方法及其應用，包括以下步驟(1)小花棘豆粉碎；(2)超聲波協助法提取小花棘豆總提取物；(3)小花棘豆黃酮的分離；(4)小花棘豆黃酮的定性檢測；(5)小花棘豆黃酮含量的測定。本發明具有製備工藝簡單，成本較低的特點，適合推廣和應用。
文檔編號A61P1/16GK103202872SQ201310132590
公開日2013年7月17日 申請日期2013年4月8日 優先權日2013年4月8日
發明者王帥, 馬春暉, 胡建軍, 賈琦珍, 陳根元, 楊麗娟 申請人:塔裡木大學