用於檢測和測定小檗鹼的抗體、方法和試劑盒的製作方法
2023-05-22 17:21:21
用於檢測和測定小檗鹼的抗體、方法和試劑盒的製作方法
【專利摘要】本發明提供包括小檗鹼或其衍生物的半抗原，與賦予抗原性的載體物質結合的前述半抗原的免疫原，與標記試劑結合的前述半抗原的偶聯物(包被原)，以及抗前述免疫原的抗體，該抗體能與完整的小檗鹼中的至少一種結構性抗原決定部位結合。本發明還提供用於檢測或定量樣品中小檗鹼的方法和試劑盒，以及前述偶聯物和前述抗體在檢測或定量小檗鹼中的用途。本發明對小檗鹼具有特異性，可用於樣品中檢測小檗鹼的存在和測定小檗鹼的含量。
【專利說明】用於檢測和測定小檗鹼的抗體、方法和試劑盒
【技術領域】
[0001]本發明涉及小分子半抗原的抗體及其製備方法與應用，特別是涉及小檗鹼及其衍生物的抗體及其製備方法與應用。
【背景技術】
[0002]本發明涉及用於檢測和定量小檗鹼的方法和試劑盒，以及其中使用的半抗原、免疫原、包被原和抗體。
[0003]其中「檢測」是指定性分析物質是否存在。
[0004]其中「測定」是指對物質進行定量分析。
[0005]小檗鹼是一種季銨生物鹼，分子式[C20H18N04]+C1-，分子量371.8。又稱黃連素。存在於黃連以及其它小檗屬植物中。黃色針狀結晶。熔點145°C。可溶於熱水、乙醇、難溶於乙醚、苯。能與氯仿和丙酮等生成複合物。又稱黃連素。常用其鹽酸鹽。黃色結晶性粉末。無臭，味極苦。微溶於水，不溶於醚、氯仿、醇等。
[0006]藥理作用
[0007]現代藥理學研究表明其抗菌譜廣，體外對多種革蘭陽性及陰性菌均具抑菌作用，其中對溶血性鏈球菌、金葡菌、霍亂弧菌、腦膜炎球菌、志賀痢疾桿菌、傷寒桿菌、白喉桿菌等有較強的抑制作用，低濃度時抑菌，高濃度時殺菌。對流感病毒、阿米巴原蟲、鉤端螺旋體、某些皮膚真菌也有一定抑制作用。體外實驗證實黃連素能增強白細胞及肝網狀內皮系統的吞噬能力。痢疾桿菌、溶血性鏈球菌、金葡菌等極易對本品產生耐藥性。本品與青黴素、鏈黴素等並無交叉耐藥性。小檗鹼的鹽酸鹽(俗稱鹽酸黃連素)已廣泛用於治療胃腸炎、細菌性痢疾等，對肺結核、 猩紅熱、急性扁桃腺炎和呼吸道感染也有一定療效。中醫常用黃連、黃柏、三顆針及十大功勞等作清熱解毒藥物，其中主要有效成分即小檗鹼。
[0008]小檗鹼化學結構如下:
[0009]
【權利要求】
1.一種如下通式的免疫原:
2.根據權利要求1的免疫原，R= O，即P1直接與甘草酸羰基碳原子結合。
3.根據權利要求1的免疫原，R是C1-C6取代或未取代的、直鏈或支鏈的、飽和或不飽和的亞烷基。
4.根據權利要求1或3的免疫原，R是C1-C4未取代的、直鏈的、飽和的亞烷基。
5.根據權利要求1的免疫原，其中載體物質為蛋白質、蛋白質片段、合成或天然多肽或半合成多肽、合成或天然聚合物。
6.根據權利要求1或5的免疫原，其中蛋白質、蛋白質片段選自白蛋白、血清蛋白、球蛋白、和脂蛋白。
7.根據權利要求1或5的免疫原，其中蛋白質、蛋白質片段選自牛血清白蛋白、卵清蛋白、牛丙種球蛋白、甲狀腺素結合球蛋白、鎖眼形血藍蛋白(keyhole limpet haemocyanin,KLH)等。
8.根據權利要求1或5的免 疫原，其中合成或天然多肽或半合成多肽是具有足夠數量的可利用氨基的合成聚胺基酸。
9.根據權利要求1或5的免疫原，其中合成或天然聚合物選自碳水化合物、酵母或多糖。
10.抗如權利要求1至9的免疫原的抗體，其中抗體能與完整的甘草酸中的至少一種結構性抗原決定部位結合。
11.製備如權利要求10中的抗體的方法，該方法包括將如權利要求1至9的免疫原重複給予動物而使動物免疫，以及從免疫動物中收集所得到的血清抗體；以及利用免疫學上可接受的細胞系與產生抗體的免疫動物單克隆細胞系融合後產生的細胞系，所製備的單克隆抗體。
12.—種如下結構的偶合物:
13.如權利要求12偶合物，其偶合物固定在固相支持物上。
14.根據權利要求13的固相支持物可為聚苯乙烯或聚氯乙烯等具有一定吸附作用的材料。
15.根據權利要求13或14的固相支持物，優選化學處理高吸附表面的聚苯乙烯酶標板。
16.用於檢測和測定樣品中甘草酸的方法，該方法包括將供試樣品和如權利要求10和11中的抗體一同與如權利要求12至15中的固定在固相支持物的偶聯物接觸，再與標記二抗接觸，檢測或測定標記信號，從校準曲線中推出樣品中甘草酸的存在或含量。
17.根據權利要求16的標記二抗，其標記試劑選自酶、發光物質、放射性物質或它們的混合物。
18.根據權利要求16的二抗，標記試劑是過氧化物酶。
19.根據權利要求16的二抗，標記試劑是辣根過氧化物酶(HRP)。
20.根據權利要求14或15的偶合物，發光物質是生物發光物質、化學發光物質或螢光物質。
21.用於檢測和測定甘草酸的試劑盒，該試劑盒包括如權利要求12至15中任一項的偶聯物或其混合物，以及如權利要求10或11的抗體或其混合物。
【文檔編號】C07K14/765GK103483444SQ201210197148
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2012年6月15日 優先權日:2012年6月15日
【發明者】王慶國, 趙琰, 屈會化, 王雪茜, 續潔琨, 張越, 吳婷婷, 孫慧, 李翼飛 申請人:北京中醫藥大學