短短小芽孢桿菌tw泡騰顆粒劑及製備方法
2023-05-20 08:05:11
專利名稱：短短小芽孢桿菌tw泡騰顆粒劑及製備方法
技術領域：
本發明涉及一種用於防治水稻紋枯病的短短小芽孢桿菌TW泡騰顆粒製劑及製備方法。
背景技術：
由植物病原真菌立枯絲核菌O^hizoctonia solani)引起的水稻紋枯病(Rice sheathblight)是當前為害我國水稻的主要病害。該病常年可造成5% 45%的產量損失， 高發年份減產70%，甚至絕收。目前，水稻紋枯病的防治以農用抗生素井R黴素為主，但是 井岡黴素從70年代廣泛使用至今，抗藥性增強，用藥量也逐步增大，一旦紋枯病爆發很難 用井R黴素在短期內控制紋枯病的危害。特別是目前農民施藥方式多採用低水量細噴霧的 方法，受藥部位主要是水稻的葉面和頸部，而水稻發病多在植株莖杆部位，因而不能達到發 病部位，以致對病害的控制效果不理想。近年來，開發出一些生防細菌和真菌製劑用於防治 稻病，但現有的真菌製劑難以保存，有效期太短；而且藥效難以到達水稻植株莖杆部位，防 治效果不夠理想。
發明內容
本發明的目的是提供一種用於防治水稻紋枯病的短短小芽孢桿菌TW泡騰顆粒劑 及其製備方法，能使活體生防菌有效到達水稻發病部位。短短小芽孢桿菌TW，其拉丁文屬名為Brevikicillus brevis，保藏號為CCTCC NO :M207014(見 ZL200710021509. 4)。本發明所述短短小芽孢桿菌TW泡騰顆粒劑由以下方法製得(1)生防活體菌液的獲得挑取在LB固體培養基上培養好的短短小芽孢桿菌TW菌株單菌落斑，於 5mlPDA(馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基)液體培養液中，30°C振蕩培養16h，得一級種子培養 液；將所得一級種子培養液加入400ml PDA液體培養液中，30°C振蕩培養16h，得二級 種子培養液；在發酵罐中，將所得二級種子培養液接種於以下發酵培養液中大豆粉100g、玉米粉100g、澱粉100g、蔗糖25g、酵母粉25g、碳酸鈣20g和 MnSO4L 0g，補水至20L，攪拌混合；設置發酵條件為溶氧100%，PH 7. 0-7. 2，30°C下發酵48h，得細菌發酵液；(2)泡騰製劑的製備將細菌發酵液與蔗糖按1 2(ml/g)比例混合均勻，得混合物Α;將混合物A與聚 乙烯醇、一水檸檬酸、酒石酸鉀和碳酸氫鈉，按重量比60 5 5 10 20混合，得混合 物B ；將混合物B在球形造粒機KP-350上過篩造粒(篩目大小視產品用途而選擇)，經60°C汽流烘1. 5-池，控制水份重量含量為3-5%，得短短小芽孢桿菌TW菌株的泡騰顆粒劑， 無菌包裝。本短短小芽孢桿菌TW菌株泡騰顆粒劑能有效懸浮於水面，後迅速嘣解，釋放活體 生防菌，使生防菌附著於水稻植株莖杆與水面接觸面，進而有效切斷或空間佔領水稻立枯 絲核病菌對水稻莖杆的初侵，大大提高了生防微生物的防治效果。本泡騰顆粒劑在水中的懸浮率為100%，嘣解率為95%，水稻紋枯病的防治效果 均達80%以上，顯著高於同類活體菌劑，與抗生素農藥井R黴素的防治效果相當，而成本是 抗生素製劑的1/4，且泡騰顆粒菌劑施用方便，成本低。本泡騰顆粒劑可在常溫下保存2-3 年，大大高於當前粉劑或水劑產品的6個月的貨架期；
具體實施例方式實施例1短短小芽孢桿菌TW泡騰顆粒劑的製備(1)生防活體菌液的獲得用無菌芽籤挑取事先在LB固體培養基上劃線培養好的短短小芽孢桿菌TW菌株單 菌落斑，接種於裝有5ml PDA液體培養液的容積為20ml的三角瓶中，於30°C、200rpm條件 下振蕩培養16h，過夜，將上步所得培養液5ml全部接種於裝有400ml PDA培養液的容積為 IOOOml的三角瓶中，200rpm、30°C條件下振蕩培養16h。在容積為30L的發酵罐(型號為鎮 江東方GUS-30)中，將所得的400ml培養液接種於20L發酵培養液中，發酵培養液中固容物 含量為大豆粉100g、玉米粉100g、澱粉100g、蔗糖25g、酵母粉25g、碳酸鈣20g、MnS041.0g， 其餘為水。設置發酵條件為溶氧100%，pH 7. 0-7. 2，攪拌速度為350rpm，發酵溫度30°C， 發酵時間48h ；得細菌發酵液。(2)泡騰製劑的製備將發酵好的發酵液按如下方法加工成泡騰顆粒菌劑先將細菌發酵液與蔗糖按 1 2(ml/g) (V/ff)比例混合均勻，得混合物Α;再把混合物Α、聚乙烯醇、一水檸檬酸、酒石 酸鉀和碳酸氫鈉，按60 5 5 10 20 (W/W)混合，得混合物B ；將混合物B在球形造 粒機KP-350上過篩造粒(篩目大小視產品用途而選擇)，再經60°C汽流烘1.5-2h，水份含 量控制在3-5%之間，無菌包裝，成品活菌總濃度約為lX109 lX101(lCfu/g。實施例2短短小芽孢桿菌TW泡騰製劑對水稻紋枯病的田間防治試驗本試驗地點江蘇省濱海縣。試驗地條件水稻品種為武運粳3號，移栽方式為小苗機插，按常規田間管理。試驗處理方法於水稻分櫱末期，分為三組(每組小區面積為40m2)試驗組每畝用短短小芽孢桿菌TW泡騰製劑500g，與細土 20kg混合均勻撒施。對照藥劑組每畝用5%井R黴素水劑500ml噴霧防治，畝用水量50kg。空白對照組用清水噴霧。試驗設4次重複。30天後進行病害調查，每小區五點取樣，共取樣25穴。病害嚴 重度分級標準為0級不發病；1級基部葉片、葉鞘發病；2級倒第三葉以下各葉葉鞘或葉片發病；
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3級倒第二葉以下各葉葉鞘或葉片發病；4級劍葉葉鞘或葉片發病。水稻分櫱結束，計數各定點小區病害調查穴的基本苗數(方法為水稻分櫱結束， 即農事操作的烤田結束後計數)病情指數={ Σ (各級植株數X級值)/(調查總株數X4)} XlOO ；防治效果％ =(對照病情指數增長值)-(各處理防治後病情指數值-各處理基數 病情指數值)/對照病情指數增長值。田間試驗結果見表1。表1短短小芽孢桿菌TW泡騰製劑對水稻紋枯病的田間防治試驗結果
權利要求
1.一種短短小芽孢桿菌TW泡騰顆粒劑，其特徵是由以下方法製得(1)生防活體菌液的獲得挑取在LB固體培養基上培養好的短短小芽孢桿菌TW菌株單菌落斑，於5ml的PDA液 體培養液中，30°C振蕩培養16h，得一級種子培養液；將所得一級種子培養液加入400ml的PDA液體培養液中，30°C振蕩培養16h，得二級種 子培養液；將所得二級種子培養液接種於以下發酵培養液中大豆粉100g、玉米粉100g、澱粉100g、蔗糖25g、酵母粉25g、碳酸鈣20g和MnSO4L Og, 補水至20L，攪拌混合；設置發酵條件為溶氧100%，pH 7. 0-7. 2，30°C下發酵48h，得細菌發酵液；(2)泡騰製劑的製備將細菌發酵液與蔗糖按1 2(ml/g)比例混合均勻，得混合物Α;將混合物A與聚乙烯 醇、一水檸檬酸、酒石酸鉀和碳酸氫鈉，按重量比60 5 5 10 20混合，得混合物B;將混合物B在球形造粒機上過篩造粒，經60°C汽流烘1. 5-池，得短短小芽孢桿菌TW菌 株的泡騰顆粒劑。
2.根據權利要求1所述的短短小芽孢桿菌TW泡騰顆粒劑，其特徵是控制水份重量含量 為 3-5% ο
3.根據權利要求1所述的短短小芽孢桿菌TW泡騰顆粒劑作為水稻紋枯病防治藥物的應用。
全文摘要
本發明涉及一種短短小芽孢桿菌TW泡騰顆粒劑，由短短小芽孢桿菌TW菌株單菌落斑PDA液體培養液與大豆粉、玉米粉、澱粉、蔗糖、酵母粉、碳酸鈣和MnSO4加水混合，溶氧100％，pH 7.0-7.2，30℃下發酵所得細菌發酵液與蔗糖、聚乙烯醇、一水檸檬酸、酒石酸鉀和碳酸氫鈉按比例混合，過篩造粒，經60℃汽流烘乾而成，成品活菌總濃度約為1×109～1×1010cfu/g。本劑能有效懸浮於水面，後迅速嘣解，釋放活體生防菌，使生防菌附著於水稻植株莖杆與水面接觸面，有效切斷或空間佔領水稻立枯絲核病菌對水稻莖杆的初侵，對水稻紋枯病的防治效果均達80％以上，本泡騰顆粒劑施用方便，成本低，可在常溫保存2-3年。
文檔編號A01N25/12GK102125059SQ201010572008
公開日2011年7月20日 申請日期2010年12月3日 優先權日2010年12月3日
發明者溫學標, 趙福兵 申請人:江蘇蘇濱生物農化有限公司