一種細胞裂解液及其製備工藝的製作方法
2023-05-20 11:50:56
一種細胞裂解液及其製備工藝的製作方法
【專利摘要】本發明提供了一種細胞裂解液及其製備工藝，它由Hepes鈉鹽、Hepes游離酸、氯化鋰、乙二胺四乙酸、十二烷基硫酸鋰、Proclin300、蛋白酶K組成，本發明是1.該裂解液裂解細胞過程，操作簡單、方便、省時省力。2.裂解後的宮頸上皮脫落細胞樣本可直接進行核酸檢測，無需DNA/RNA純化。
【專利說明】一種細胞裂解液及其製備工藝
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物製劑【技術領域】；具體涉及一種細胞裂解液及其製備工藝。
【背景技術】
[0002] 目前，基因組提取及蛋白質研究的一個關鍵步驟就是細胞裂解，不同的樣品其細 胞裂解方式不同，裂解液的選擇也有所差異。目前常見的細胞裂解方法又CTAB法、物理方 法、SDS法等。CTAB發適用於植物組織、真菌等細胞的裂解。物理方法由於對基因組的破壞 力較大而不建議採用此方法。SDS法適合於血液、細胞、動物組織、細菌、酵母等，是一種強力 細胞裂解方式。在實驗者的實際操作過程中，需要嚴格要根據樣品的來源和提取要求選擇 適當的細胞裂解方法。因此這幾種方法普遍存在的問題就是：1、裂解時間長；2、裂解效果 不充分等問題。
[0003] 因此，本發明是在主要解決目前現有技術存在以上不足的基礎上研發出來的。
【發明內容】
[0004] 發明的目的是解決以上技術問題，特別提出一種減少裂解時間，裂解充分、結構簡 單、成本低廉的細胞裂解液及其製備工藝。
[0005] 基於上述目的，本發明所解決的技術問題採用以下技術方案來實現：
[0006] -種細胞裂解液及其製備工藝，它由！fepes鈉鹽、！fepes游離酸、氯化鋰、乙二胺四 乙酸、十二烷基硫酸鋰、Proclin300、蛋白酶K組成，按重量百分比計，其中 a. Η印es 鈉鹽：13-25% ; b. Hepes 游離酸：1. 92-12% ; c. 氯化鋰：40. 88-62% ; d. 乙二胺四乙酸：2. 5-5% ; e. 十二烷基硫酸鋰：56-65% ; f. Proclin300 ：0. 2-2. 5% ； g. 蛋白酶K :1%。
[0007] 進一步，所述以下重量比為： a. Hepes 鈉鹽：13mg/ml ; b. Hepes 游離酸：11. 92mg/ml ; c. 氯化鋰：50. 88mg/ml ; d. 乙二胺四乙酸：3mg/ml ; e. 十二燒基硫酸鋰：60mg/ml ; f. Proclin300 ：0.2ul/m ； g. 蛋白酶 K :lmg/ml。
[0008] 進一步，所述上述產品重量比按以下步驟： a.將標本轉移至離心管，3000rpm離心5分鐘，棄上清； b. 加入2ml裂解稀釋液重懸混勻，3000rpm離心5分鐘，棄上清； c. 加入300ul裂解液，再加入3ul蛋白酶K，重懸混勻； d. 放置恆溫箱65°C裂解，20分鐘左右震蕩一次，1小時後取出，將標本恢復至室溫，取 上清液用於檢測。
[0009] 進一步，所述的蛋白酶K的濃度為20mg/ml。
[0010] 本發明組分的技術原理： Η印es :是一種非離子兩性緩衝液。 氯化鋰：作為一種RNA沉澱劑。 乙二胺四乙酸：變性劑，破壞細胞膜進行裂解細胞。 十二烷基硫酸鋰：陰離子表面活性劑。可用於RNA、DNA離析，蛋白質增溶劑。 Proclin300 :防腐劑。 蛋白酶K:抑制蛋白酶的活性，用於蛋白質的降解。
[0011] 本發明的有益效果是：1.該裂解液裂解細胞過程，操作簡單、方便、省時省力。 2.裂解後的宮頸上皮脫落細胞樣本可直接進行核酸檢測，無需DNA/RNA純化。3.裂解過程 溫和，有效降低了裂解過程中核酸的損傷。4.成本低廉、適於常規試驗中上皮脫落細胞的研 究。
【具體實施方式】
[0012] 以下通過具體的實施方式，進一步闡述本發明。
[0013] 一種細胞裂解液及其製備工藝，它由ifepes鈉鹽、！fepes游離酸、氯化鋰、乙二胺四 乙酸、十二烷基硫酸鋰、Proclin300、蛋白酶K組成，按重量百分比計，其中 a. Η印es 鈉鹽：13-25% ; b. Hepes 游離酸：1. 92-12% ; c. 氯化鋰：40. 88-62% ; d. 乙二胺四乙酸：2. 5-5% ; e. 十二烷基硫酸鋰：56-65% ; f. Proclin300 ：0. 2-2. 5% ； g. 蛋白酶K :1%。
[0014] 實施例1，本發明的細胞裂解液配製配方為， a. Hepes 鈉鹽：13mg/ml ; b. Hepes 游離酸：11. 92mg/ml ; c. 氯化鋰：50. 88mg/ml ; d. 乙二胺四乙酸：3mg/ml ; e. 十二燒基硫酸鋰：60mg/ml ; f. Proclin300 ：0.2ul/m ； g. 蛋白酶 K :lmg/ml。 取自將上述產品重量比按以下步驟製備： a. 將標本轉移至離心管，3000rpm離心5分鐘，棄上清； b. 加入2ml裂解稀釋液重懸混勻，3000rpm離心5分鐘，棄上清；
【權利要求】
1. 一種細胞裂解液及其製備工藝，其特徵在於，它由ifepes鈉鹽、ifepes游離酸、氯化 鋰、乙二胺四乙酸、十二烷基硫酸鋰、Proclin300、蛋白酶K組成，按重量百分比計，其中 a. Η印es 鈉鹽：13-25% ; b. Hepes 游離酸：1· 92-12% ; c. 氯化鋰：40. 88-62% ; d. 乙二胺四乙酸：2. 5-5% ; e. 十二烷基硫酸鋰：56-65% ; f. Proclin300 ：0. 2-2. 5% ； g. 蛋白酶K:l%。
2. 根據權利要求1所述的細胞裂解液，其特徵在於，所述以下重量比為： a. Hepes 鈉鹽：13mg/ml ; b. Hepes 游離酸：11. 92mg/ml ; c. 氯化鋰：50. 88mg/ml ; d. 乙二胺四乙酸：3mg/ml ; e. 十二燒基硫酸鋰：60mg/ml ; f. Proclin300 ：0. 2ul/m ； g. 蛋白酶 K :lmg/ml。
3. 根據權利要求1所述的細胞裂解液製備工藝，其特徵在於，所述上述產品重量比按 以下步驟： a. 將標本轉移至離心管，3000rpm離心5分鐘，棄上清； b. 加入2ml裂解稀釋液重懸混勻，3000rpm離心5分鐘，棄上清； c. 加入300ul裂解液，再加入3ul蛋白酶K，重懸混勻； d. 放置恆溫箱65°C裂解，20分鐘左右震蕩一次，1小時後取出，將標本恢復至室溫，取 上清液用於檢測。
4. 根據權利要求1所述的細胞裂解液及其製備工藝，其特徵在於，所述的蛋白酶K的濃 度為 20mg/ml。
【文檔編號】C12N15/10GK104046614SQ201410274589
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年6月19日 優先權日:2014年6月19日
【發明者】張鷺鷺, 程昀靜, 郭利傑, 李先坤, 李小磊 申請人:科蒂亞(新鄉)生物技術有限公司