一種多菌靈降解菌及其應用的製作方法
2023-05-20 11:02:26
專利名稱：一種多菌靈降解菌及其應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種細菌，尤其涉及一種多菌靈降解菌及其應用。
背景技術：
多菌靈是一種高效低毒的光譜內吸性殺菌劑，對葡萄胞菌、鐮刀菌等引起的真菌 病害具有很好的保護和治療作用，廣泛應用於水稻、棉花、蔬菜、果樹、藥材等病害的防治。多菌靈在我國農業生產上得到廣泛應用的同時，它在環境中的殘留引起環境汙染 問題也日趨嚴重。因其化學性質穩定，在環境中半衰期較長(3-6個月)，易產生積累效應， 對微生物、植物、動物以及人體產生危害。研究表明，多菌靈能能引起肝病，還能導致染色體 畸變，幹擾哺乳動物的內分泌，並對精母細胞的減數分裂產生影響。多菌靈很難被水解、熱解和光解等物理方法分解，在生態系統中，微生物對農藥的 分解起著重要作用。因此尋找多菌靈的高效降解菌對於消除多菌靈的環境汙染具有重要的 現實意義。
發明內容
本發明提供了一種降解速度快、降解效率高的多菌靈降解菌。一種多菌靈降解菌，經鑑定命名為假單胞菌(Pseudomonas sp.)CBW，保藏於中 國典型培養物保藏中心(地址為湖北省武漢市珞珈山武漢大學保藏中心)，保藏日期為 2009年11月4日，保藏號為CCTCC No.M209251。該菌株16S rDNA的Genbank登陸號為 GQ454926。該菌株主要生物學特徵為革蘭氏反應陰性，菌體杆狀，無鞭毛，大小約為 (0. 5 μ m 0. 8 μ m) X (1. 5 μ m 2 μ m)(圖1)，接觸酶陽性，氧化酶陽性。本發明還提供了一種含有上述多菌靈降解菌的菌劑，該菌劑的製備方法就是將上 述菌種與常規的附加劑混合均勻後製成水劑。本發明多菌靈降解菌對多菌靈降解效率高，降解速度快，可有效修復多菌靈在土 壤中的汙染。
圖1為多菌靈降解菌CBW的電鏡照片。圖2為本發明多菌靈降解菌對不同濃度的多菌靈的降解曲線圖。
具體實施例方式培養基無機鹽培養基=MgSO4· 7H20 0. 4g、FeSO4 · 7H20 0. 02g、K2HPO4O. 2g、(NH4)2SO4O. 2g、 CaSO4O. 08g、去離子水lOOOmL，混合攪拌均勻，調節pH值為7. 0，高壓蒸汽滅菌(121 °C， 20min)製得。
分離純化培養基在無機鹽培養基中添加20g瓊脂，高壓蒸汽滅菌(12rC，20min) 製得。普通培養基牛肉膏10g、蛋白腖5. 0g、氯化鈉10. 0g、去離子水IOOOmL,混合攪拌 均勻，調節PH值為7.0，高壓蒸汽滅菌(121°C，20min)製得。菌種分離純化(1)取浙江大學華家池校區蚯蚓地土壤5g置於IOOmL三角瓶中，加入50mL無機 鹽培養基，加入多菌靈5mg，置於搖床(30°C，150rpm)中振蕩培養一周。取ImL懸浮液接種 於30mL以10mg/L的多菌靈為唯一碳源和能源的無機鹽培養基中，振蕩培養一周(30°C， 150rpm)。同樣條件培養3次，每次培養均取前一次的培養液作為接種液。(2)將最後一次獲得的培養液稀釋(10_5)後於含20mg/L多菌靈的分離純化培養 基劃線分離篩選，挑取單菌落接種於含10mg/L多菌靈的無機鹽培養基中，置於搖床(30°C， 150rpm)中振蕩培養，觀察菌的生長並測定多菌靈的降解情況。重複上述過程純化3次，選 取能在含多菌靈的無機鹽培養基中生長並且能快速降解多菌靈的單菌落進行鑑定。菌種保 存於斜面培養基上，所用培養基為普通培養基。鑑定命名上述分離純化獲得菌株的主要生物學特徵為革蘭氏反應陰性，菌體杆狀，無鞭 毛，大小約為(0. 5 μ m 0. 8 μ m) X (1. 5 μ m 2. 0 μ m)(圖1)，接觸酶陽性，氧化酶陽性。 最適生長條件為pH = 7. 0，溫度30°C。 其詳細的生理特性如下表1所示+ 生長良好，-不生長；+W 生長緩慢+II+IIIIIII+++I++++++++I+I++I+血染 H 麵 I Q縣截廛經-α-奪由-百mmmi彐 I Q猶截蟹_-α染 H■■M奪由■班雜奪由畝瀣 H W 郟琥珀醯胺酸瑚■鶖M - 綱M-α綱Μ- 鶖具鋂鶖M - U ￥-τ■鶖場- ■鷥奮U ￥-1-驅鷥具縣輯勁勘鄱鰣萊+I+++I+IIIII++I+++++++++++++++血麵截蟹莘染 I Q染 I截 餘-α染 H SJ 較截廛經-α- DI B染 I Q I截畓 I蜜 扭 I Q截蟹具-α■ 7萊奪迓-d■丄H FTH^ 畫 I d腳Ifi-DI J Q瀣 H EEH 獅 I QHm^mmn^M -ι■鶖芴-α■鶖芴- ■鶖踅- -E I J Q+I+I++III+II++++II+II++I+++++血mMm暴08 ^Td瑚截 餘α-奪鋂7 -N瑚截廛經-α-奪鋂7 -N麵繼翬咢P·mmmmmm -α染 H 細 汝 I QN]驅截 -α■親截 餘-α■截廛經-α瑚截廛經-α■截廛經-α■丄奪迓「D■丄奪迓-百■丄奪迓-λmnw -ι■鷥職- -奢迓瀣 U ΨΚ IL-鳥氨酸■鶖 Μ -
權利要求
一種降解多菌靈的假單胞菌(Pseudomonas sp.)CBW，保藏號為CCTCC No.M 209251。
2.一種含有權利要求1所述的假單胞菌CBW的菌劑。
3.根據權利要求2所述的菌劑，其特徵在於所述菌劑為假單胞菌CBW溶於 Na2HPO4-NaH2PO4緩衝液製得的菌懸液。
全文摘要
本發明公開了一種多菌靈降解菌及其應用，該多菌靈降解菌為假單胞菌(Pseudomonas sp.)CBW，保藏號為CCTCC No.M 209251。本發明菌株對多菌靈降解效率高，降解速度快，可有效修復多菌靈在土壤中的汙染。
文檔編號C12N1/20GK101955893SQ200910153928
公開日2011年1月26日 申請日期2009年11月27日 優先權日2009年11月27日
發明者王一奇, 虞雲龍, 高春明 申請人:浙江大學