結核感染t細胞免疫的四聚體檢測方法
2023-05-20 03:55:46
結核感染t細胞免疫的四聚體檢測方法
【專利摘要】本發明公開一種結核感染T細胞免疫的四聚體檢測方法，從全血樣本中分離出外周血單個核細胞，將其與結核桿菌特異性抗原一起孵育，當外周血中存在針對結核桿菌的效應T淋巴細胞時，結核桿菌特異性抗原中的TCR與MHC-多肽複合物結合，藉助生物素-鏈黴親和素系統，將MHC-多肽複合物形成四聚體分子，單個MHC-多肽四聚體分子與T細胞表面的多個TCR結合，以提高了MHC-多肽複合物與TCR的親和力和穩定性；再加入生物素標記的檢測抗體標記有PE螢光染料；最後通過流式細胞儀對特異T細胞進行計數以對結核病進行輔助診斷，本發明檢測靈敏度和準確性和產品特異性高、應用方便簡單，安全可靠。
【專利說明】結核感染T細胞免疫的四聚體檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及生命科學領域，具體為一種針對結核感染T細胞免疫的四聚體檢測方法。
【背景技術】
[0002]目前常用的對結核感染T細胞免疫的檢測方法有痰塗片檢查、痰培養，這種方法的檢測周期長，痰液培養過程操作存在一定的傳染風險；另外，還有X-ray、CT等檢測方法，這些方法如果使用過於頻繁，會對病人有一定的損傷。
【發明內容】
[0003]為了解決核感染T細胞免疫檢測的周期過長、安全性差的問題，本發明提供一種檢測方法，其採用的技術方案為:從全血樣本中分離出外周血單個核細胞，即PBMCs，將其與結核桿菌特異性抗原一起孵育，當外周血中存在針對結核桿菌的效應T淋巴細胞時，結核桿菌特異性抗原中的TCR與MHC-多肽複合物結合，藉助生物素-鏈黴親和素系統，將MHC-多肽複合物形成四聚體分子，單個MHC-多肽四聚體分子與T細胞表面的多個TCR結合，以提高了 MHC-多肽複合物與TCR的親和力和穩定性；再加入生物素標記的檢測抗體標記有PE螢光染料；最後通過流式細胞儀對特異T細胞進行計數以對結核病進行輔助診斷。
[0004]本發明採用以上技術方案的有益效果是:首先，產品中含有能夠和抗原特異性T細胞上TCR結合的4個MHC-多肽分子，使其與TCR的親和力大大提高。因此少量的樣本量，較低的T細胞比例，依然可以使用該產品進行檢測，提高了檢測靈敏度和準確性；其次，利用基因工程手段，在不影響與抗原特異性T細胞結合能力的前提下，將MHC中與CD8分子相作用的區域進行人為突變，打打降低了 MHC與CD8的非特異性結合，提高了產品特異性；再者，能根據客戶的檢測習慣，選用不同的螢光染料進行標記，常用的PE、APC都可方便應用；最後，本方法為體外檢測，方便快捷，無需另外培養痰液，對病人身體無損傷。
【具體實施方式】
[0005]本發明應用結核分枝桿菌特異性抗原對待檢者全血中分離出的T細胞進行體外刺激，感染了結核分枝桿菌的待檢者的T細胞可對這種體外刺激產生特異性的反應，變成特異性效應T細胞，再通過T細胞上的TCR與MHC-多肽複合物四聚體特異結合，對結核特異性效應T細胞進行檢測，並對其反應進行計數，從而判斷待檢者是否感染結核分枝桿菌。具體的方法為:從全血樣本中分離出外周血單個核細胞，即PBMCs，將其與結核桿菌特異性抗原一起孵育，當外周血中存在針對結核桿菌的效應T淋巴細胞時，結核桿菌特異性抗原中的TCR與MHC-多肽複合物結合，藉助生物素-鏈黴親和素系統，將MHC-多肽複合物形成四聚體分子，單個MHC-多肽四聚體分子與T細胞表面的多個TCR結合，以提高了 MHC-多肽複合物與TCR的親和力和穩定性；再加入生物素標記的檢測抗體標記有PE螢光染料；最後通過流式細胞儀對特異T細胞進行計數以對結核病進行輔助診斷。
[0006]本發明可用於結核分枝桿菌感染後特異性T細胞免疫的體外檢測，適用於結核疑似病例的臨床輔助診斷和潛伏感染篩查。
[0007]上述的【具體實施方式】只是示例性的，是為了更好的使本領域技術人員能夠理解本專利，不能理解為是對本專利包括範圍的限制；只要是根據本專利公開的技術方案所做出的技術內容實質相同或等同的任何的變更或修飾，均落入本專利包括的範圍。
【權利要求】
1.一種結核感染T細胞免疫的四聚體檢測方法，其特徵在於:從全血樣本中分離出外周血單個核細胞，即PBMCs，將其與結核桿菌特異性抗原一起孵育，當外周血中存在針對結核桿菌的效應T淋巴細胞時，結核桿菌特異性抗原中的TCR與MHC-多肽複合物結合，藉助生物素-鏈黴親和素系統，將MHC-多肽複合物形成四聚體分子，單個MHC-多肽四聚體分子與T細胞表面的多個TCR結合，以提高了 MHC-多肽複合物與TCR的親和力和穩定性；再加入生物素標記的檢測抗體標記有PE螢光染料；最後通過流式細胞儀對特異T細胞進行計數以對結核病進行輔助診斷。
【文檔編號】G01N33/569GK104422766SQ201310374904
【公開日】2015年3月18日 申請日期:2013年8月26日 優先權日:2013年8月26日
【發明者】李皚 申請人:上海印維實業有限公司