β幹擾素含片及其製備方法

2023-05-21 17:37:31

專利名稱：β幹擾素含片及其製備方法
技術領域：
本發明涉及醫藥生物技術領域，尤其涉及β幹擾素含片及其製造方法。
幹擾素是一類天然存在的蛋白質，共分三類α幹擾素，β幹擾素和γ幹擾素。它們是最早發現的細胞因子，具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調節等生物活性。
β幹擾素(IFN-β)主要通過幹擾病毒RNA或DNA的複製來抑制病毒的生長，並可顯著增強NK細胞的殺傷活性，通過促進MHCⅠ類分子的表達增強CTL對病毒感染細胞的識別和殺傷作用。在臨床上，IFN-β已被用於治療多種疾病，尤其是病毒感染，例如對B型肝炎、C型肝炎、HBV、HPV、HIV、HSV等病毒感染都具有較好的療效。此外，IFN-β還具有一定的抗腫瘤作用，例如對非小細胞型肺癌、乳腺癌、喉癌、結腸癌和腎癌等都具有一定的療效。
目前，臨床上將幹擾素和白細胞介素2用於治療病毒感染和腫瘤的給藥途徑主要為肌肉注射和靜脈注射兩種，雖然大劑量肌肉或靜脈注射的療效是肯定的，存在著以下缺點。劑量大、療程長。例如，β幹擾素的治療劑量一般在300萬IU/人/天以上，給藥周期一般為1至12個月；α幹擾素的治療劑量一般為300至500萬IU/人/天，給藥周期一般為1至6個月；白細胞介素2的治療劑量一般為10至50萬IU/人/天，給藥周期一般為0.5至1個月。因為人體對注射幹擾素和白細胞介素2的耐受性低，很多患者因大劑量注射而產生了嚴重的不良反應，常因此而被迫中止使用注射型幹擾素和白細胞介素2。此外，注射型幹擾素和白細胞介素2價格昂貴，若使用一個療程1至12個月，僅藥品費用就高達上萬元，就目前而言，個人往往難以承受。由於以上原因，許多病人常中途放棄治療而貽誤病情。
所以，一直以來，人們需要一種劑量低、給藥方便，並由此帶來價廉和副作用低等優點的幹擾素新劑型。
經研究發現，α幹擾素經低劑量口服能夠結合細胞表面受體，增強MHC的表達、增加單核細胞和巨噬細胞上IgG的Fc受體數量，增加NK細胞介導的溶解作用，由此引發和擴大系列免疫調節作用，最終達到一種病毒複製並進而消除病毒的功效。已有報導稱口用低劑量α幹擾素對B型肝炎具有明顯的療效(Bocci Ⅴ.《臨床藥代動力學》(Clin pharmacokinet.)21(6):411-417,1991；Paulesu L.等，《國際藥物學雜誌》(Int.J.Pharm.)46:199-202,1988)。基於以上發現，人們已經研製出了α幹擾素的口服劑型。例如，已經有澳大利亞的Namawa細胞α幹擾素含片，系以淋巴瘤細胞為來源，經仙臺病毒誘變產生的天然α幹擾素，有十幾種亞型；以及已公開的中國專利申請95101212.9和中國專利申請95111433.6，其中均涉及了以α幹擾素為主要成份的幹擾素含片及製備方法。
但是，這些幹擾素口服劑型中作為生物活性成份的都是α幹擾素，而以低劑量的β幹擾素作為有效成份與合適的輔料混合製成含片，及其在病毒感染或腫瘤治療中的用途至今還未見報導。所以，人們仍然需要口服劑型的β幹擾素，在發揮其獨特的藥理活性和臨床療效的同時，使其更具備新口服劑型給藥方便、價格低廉、副作用小等優點。
目前，對於β幹擾素經口服可以誘導免疫應答已經有了肯定的報導(NelsonP.A.等，「口用β幹擾素在引發免疫應答方面的作用」(Ann.N.Y.Acad.Sci.)778:145-155,1996)。我們研究還發現，β幹擾素能夠以含片劑型進行口服，利用含片在口腔的局部崩解，在較低劑量時經口腔黏膜吸收，激活局部免疫系統，並進一步放大此免疫激活效應，從而發揮抗腫瘤、抗感染和免疫調節的作用。此外，我們還發現，β幹擾素和α幹擾素或白細胞介素2合用時，對免疫激活作用具有顯著的協同效應。
因此，本發明的目的之一在於提供一種β幹擾素含片，填補已有技術中無口服β幹擾素含片這一空白。具體的說，在獲得和/或加強β幹擾素獨特療效的同時，克服幹擾素高劑量注射療程長、毒性大、病人耐受性差和價格昂貴等缺點。
本發明的另一目的在於提供以上所述β幹擾素含片的製備方法。使得β幹擾素在製備過程中失活少，並且在進人口腔後能夠緩慢釋放。
為了達到所述目的，本發明提供了一種β幹擾素含片，它包含作為有效成份的β幹擾素和藥學上認可的輔料，製成口含片劑型。所述β幹擾素的含量為每片1,000IU至10,000IU,2000IU至5000IU更好。
作為本發明有效成份的β幹擾素指任何重組或天然人β幹擾素。例如瑞士Serono公司，和美國Berlex公司的市售商品。
作為本發明的藥學上認可的輔料，選自例如人血白蛋白、聚乙二醇、乳糖、葡萄糖、澱粉、甘露醇、牛血清蛋白、硬脂酸鎂和糊精。均為市售商品。
在本發明較好的實施方式中，我們發現還可以在所述的β幹擾素含片中加入α幹擾素和白細胞介素2作為增效成份。當它們分別與β幹擾素合用時，具有明顯的增效效應。
用於本發明的α幹擾素可以是任何天然或重組α幹擾素。例如上海生物製品研究所和瀋陽三生藥業有限公司的天然α幹擾素，以及深圳科興生物製品有限公司的重組α幹擾素。其含量為每片100IU至1,000IU；100IU至500IU更好。白細胞介素2可以是任何天然或重組的白細胞介素2，其含量為每片1,000IU至10,000IU；2000IU至5000IU更好。
本發明採用的劑型為舌下含片。
本發明還提供了一種製備β幹擾素舌下含片的方法，該方法包括將無菌β幹擾素與藥學上認可的輔料混合，冷凍乾燥成凍乾粉；將藥學上認可的輔料混合，經過篩，乾燥製備成空白顆粒；採樣倍比混合法將空白顆粒與凍乾粉充分混合；在低溫至常溫條件下直接壓片。
本發明還提供了另一種製備β幹擾素舌下含片的方法，該方法包括將藥學上認可的輔料混合，經過篩，乾燥製備成空白顆粒；將無菌β幹擾素與藥學上認可的輔料製備成溶液；將所述溶液以噴霧法均勻噴灑在空白顆粒上；然後烘乾；在低溫至常溫條件下直接壓片。
在本發明較好的實施方式之一中，本發明提供了一種製備β幹擾素舌下含片的方法，該方法包括將無菌β幹擾素，無菌α幹擾素或白細胞介素2與藥學上認可的輔料混合，冷凍乾燥成凍乾粉；將藥學上認可的輔料混合，經過篩，乾燥製備成空白顆粒；採樣倍比混合法將空白顆粒與凍乾粉充分混合；在低溫至常溫條件下直接壓片。
在本發明另一較好的實施方式中，本發明提供了一種製備β幹擾素舌下含片的方法，該方法包括將藥學上認可的輔料混合，經過篩，乾燥製備成空白顆粒；將無菌β幹擾素，無菌α幹擾素或白細胞介素2與藥學上認可的輔料製備成溶液；將所述溶液以噴霧法均勻噴灑在空白顆粒上；然後烘乾；在低溫至常溫條件下直接壓片。
本發明以β幹擾素為有效成份製成的含片，由於含片劑型在口腔的局部崩解後經口腔黏膜吸收，在較低劑量就能夠激活局部免疫系統，並進一步放大此免疫激活效應，因此本發明在低劑量時就可獲得β幹擾素獨特的抗腫瘤、抗病毒感染和免疫調節的作用。此外，由於α幹擾素和白細胞介素2各自獨特的藥理作用，當它們分別與β幹擾素和合用時，對免疫激活作用還具有顯著的協同效應，大大增強了療效。所以，本發明的具有療效顯著、毒性低、口服方便、價格便宜、等優點。
而且由於本發明選用的輔料，例如白蛋白、甘露醇、聚乙二醇等具有穩定化作用，並製成口含片的形式，因而使得本發明的含片具有穩定性好，能夠在口腔內緩慢釋放等優點此外，由於採用了低溫至常溫的工藝條件，本發明還具有β幹擾素在製備過程中失活少的優點。
以下將結合實施例進一步詳細說明本發明。本發明的優點和有益效果也將由此變得顯而易見。
實施例1取無菌β幹擾素(瑞士Serono公司)3600萬IU(壓片後幹擾素的活性損失為20％)，與100g甘露醇(上海長徵製藥廠)(20％溶液)和20g人血白蛋白(上海生物製品研究所生產的白蛋白注射液)混合，置於不鏽鋼盤中，冷凍乾燥成乾粉。
取硬脂酸鎂(上海藥用輔料廠)100g，糊精(上海藥用輔料廠)18g混合均勻，然後與澱粉(華北製藥廠)400g混合均勻，由此製備成軟材。將溼軟材過20目的篩製備成顆粒。在60℃的烘箱(Hereaus公司)內乾燥顆粒，直至含水量為5-10％。由此製備成空白顆粒。
將β幹擾素凍乾粉與等量的空白顆粒充分混合。將此混合物再與剩餘的空白顆粒充分混合，由此保證β幹擾素在混合物中含量均勻。
預先將壓片機(購自德國克利安公司)的溫度調節在-4-20℃，並在操作過程中保證溫度不超過20℃，將混合物壓片成10,000片。
實施例2取甘露醇(上海長徵製藥廠)100g，硬脂酸鎂(上海藥用輔料廠)80g和糊精(上海藥用輔料廠)150g混合均勻，然後與澱粉(華北製藥廠)450g均勻混合製備成軟材。溼軟材經20目的篩過篩製備成顆粒。在60℃的烘箱(Hereaus公司)內乾燥顆粒，直至含水量為5-10％。由此製備成空白顆粒。
取無菌β幹擾素(瑞士Serono公司)3600IU(壓片後幹擾素的活性損失為20％)與無菌白蛋白(20g)(上海生物製品研究所生產的白蛋白注射液)均勻混合成溶液。
將β幹擾素溶液以噴霧法均勻噴灑在空白顆粒上(噴霧機購自德國克利安公司)。然後在37℃烘乾3-5小時。
預先將壓片機(購自德國克利安公司)的溫度調節在-4-20℃，並在操作過程中保證溫度不超過20℃，將混合物壓片成10,000片。
實施例3取無菌β幹擾素(瑞士Serono公司)(2400IU)和天然α幹擾素(上海生物製品研究所)(240IU)(壓片後幹擾素的活性損失為20％)，與100g甘露醇(上海長徵製藥廠)(20％溶液)和20g人血白蛋白(上海生物製品研究所生產的白蛋白注射液)混合，置於不鏽鋼盤中，冷凍乾燥成乾粉。
取硬脂酸鎂(上海藥用輔料廠)150g，糊精(上海藥用輔料廠)100g混合均勻，然後與澱粉(華北製藥廠)400g混合均勻，由此製備成軟材。將溼軟材過20目的篩製備成顆粒。在60℃的烘箱(Hereaus公司)內乾燥顆粒，直至含水量為5-10％。由此製備成空白顆粒。
將幹擾素凍乾粉與等量的空白顆粒充分混合。將此混合物再與剩餘的空白顆粒充分混合，由此保證幹擾素在混合物中含量均勻。
預先將壓片機(購自德國克利安公司)的溫度調節在-4-20℃，並在操作過程中保證溫度不超過20℃，將混合物壓片成10,000片。
實施例4取甘露醇(上海長徵製藥廠)100g，硬脂酸鎂(上海藥用輔料廠)100g和糊精(上海藥用輔料廠)140g混合均勻，然後與澱粉(華北製藥廠)400g均勻混合製備成軟材。溼軟材經20目的篩過篩製備成顆粒。在60℃的烘箱(Hereaus公司)內乾燥顆粒，直至含水量為5-10％。由此製備成空白顆粒。
取無菌β幹擾素(瑞士Serono公司)2400萬IU和天然α幹擾素(上海生物製品研究所)240萬IU(壓片後幹擾素的活性損失為20％)與20g無菌白蛋白(上海生物製品研究所)均勻混合成溶液。
將幹擾素溶液以噴霧法均勻噴灑在空白顆粒上(噴霧機購自德國克利安公司)。然後在37℃烘乾3-5小時。
預先將壓片機(購自德國克利安公司)的溫度調節在-4-20℃，並在操作過程中保證溫度不超過20℃，將混合物壓片成10,000片。
實施例5根據實施例1或2所述的方法，用PEG2000(上海川沙高南化工廠)代替甘露醇，並加入乳糖，按照以下配方製備β幹擾素含片，共1000片。
組成含量β幹擾素(瑞士Serono公司) 100萬IU人血白蛋白(上海生物製品研究所)2gPEG2000(上海川沙高南化工廠) 5g澱粉(華北製藥廠) 45g硬脂酸鎂(上海藥用輔料廠) 8g乳糖(西安製藥廠) 5g糊精(上海藥用輔料廠) 15g實施例6根據實施例1或2所述的方法，使用牛血清白蛋白代替人血白蛋白，並加入乳糖，按照以下配方製備β幹擾素含片，共1000片。
組成 含量β幹擾素(瑞士Serono公司) 1000萬IU牛血清白蛋白(上海生物試劑商店) 1g乳糖(西安製藥廠)11g甘露醇(上海長徵製藥廠) 10g澱粉(華北製藥廠)45g硬脂酸鎂(上海藥用輔料廠) 5g糊精(上海藥用輔料廠)18g實施例7根據實施例1或2所述的方法，按照以下配方製備β幹擾素含片，共1000片。
組成 含量β幹擾素(瑞士Serono公司) 200萬IU人血白蛋白(上海生物製品研究所) 2g甘露醇(上海長徵製藥廠) 10g澱粉(華北製藥廠)50g硬脂酸鎂(上海葡萄糖廠) 10g糊精(上海葡萄糖廠) 18g實施例8根據實施例3或4所述的方法，使用牛血清白蛋白代替人血白蛋白，不使用澱粉，使用乳糖和葡萄糖，按照以下配方製備β幹擾素含片，共1000片。
組成 含量β幹擾素(瑞士Serono公司) 100萬IU天然α幹擾素(上海生物製品研究 10萬IU所)牛血白蛋白(上海衛輝試劑廠) 4g甘露醇(上海長徵製藥廠) 20g乳糖(四川內江製藥廠)10g葡萄糖(四川內江製藥廠) 25g硬脂酸鎂(上海葡萄糖廠) 5g糊精(上海葡萄糖廠) 16g實施例9根據實施例3或4所述的方法，使用重組α幹擾素代替天然α幹擾素，並加入葡萄糖，按照以下配方製備β幹擾素含片，共1000片。
組成 含量β幹擾素(瑞士Serono公司) 1000萬IU重組α幹擾素(深圳科興生物製品有限公司) 100萬IU人血白蛋白(上海生物製品研究所) 5g甘露醇(上海長徵製藥廠) 10g葡萄糖(四川內江製藥廠) 5g澱粉(華北製藥廠)5g
硬脂酸鎂(上海葡萄糖廠) 8g糊精(上海葡萄糖廠) 12g實施例10根據實施例3或4所述的方法，並加入葡萄糖，按照以下配方製備β幹擾素含片，共1000片。
組成 含量β幹擾素(瑞士Serono公司) 200萬IU天然α幹擾素(上海生物製品研究 20萬IU所)人血白蛋白(上海生物製品研究所) 4g甘露醇(上海長徵製藥廠) 10g葡萄糖(西安製藥廠) 5g澱粉(上海亞東藥業公司) 5g硬脂酸鎂(上海葡萄糖廠) 8g糊精(上海葡萄糖廠) 12g實施例11根據實施例3或4所述的方法，以白細胞介素2代替α幹擾素，按照以下配方製備β幹擾素含片，共1000片。
組成含量β幹擾素(瑞士Serono公司) 100萬IU白細胞介素2(瀋陽三生藥業公司) 100萬IU人血白蛋白(上海生物製品研究所)3g甘露醇(上海長徵製藥廠) 15g澱粉(上海亞東藥業公司) 50g硬脂酸鎂(上海葡萄糖廠) 10g糊精(上海葡萄糖廠) 17g實施例12根據實施例3或4所述的方法，以白細胞介素2代替α幹擾素，不使用澱粉，並加入乳糖，按照以下配方製備β幹擾素含片，共1000片。
組成含量β幹擾素(瑞士Serono公司)1000萬IU白細胞介素2(瀋陽三生藥業公司) 1000萬IU人血白蛋白(上海生物製品研究所) 3g甘露醇(上海長徵製藥廠)15g乳糖(西安製藥廠) 55g硬脂酸鎂(上海葡萄糖廠)10g糊精(上海葡萄糖廠)12g實施例13根據實施例3或4所述的方法，以白細胞介素2代替α幹擾素，按照以下配方製備β幹擾素含片，共1000片。
組成 含量β幹擾素(瑞士Serono公司) 200萬IU白細胞介素2(瀋陽三生藥業公司) 200萬IU人血白蛋白(上海生物製品研究所)5g甘露醇(上海長徵製藥廠) 15g澱粉(上海亞東藥業公司) 45g硬脂酸鎂(上海葡萄糖廠) 10g糊精(上海葡萄糖廠) 15g實施例14根據實施例3或4所述的方法，以白細胞介素2代替α幹擾素，以牛血清白蛋白代替人血清白蛋白，以聚乙二醇(PEG2000)代替甘露醇，按照以下配方製備β幹擾素含片，共1000片。
組成 含量β幹擾素(瑞士Serono公司) 300萬IU白細胞介素2(瀋陽三生藥業公司) 500萬IU牛血白蛋白(上海衛輝試劑廠) 3gPEG2000(上海川沙高南化工廠) 10g澱粉(上海亞東藥業公司) 50g
硬脂酸鎂(上海葡萄糖廠) 10g糊精(上海葡萄糖廠) 22g測試實施例測試1以健康昆明種小鼠(由第二軍醫大學實驗動物中心提供)進行急性毒性實驗，用最大濃度、最大容積0.5ml，對20隻小鼠經灌胃給予本發明的β幹擾素含片。連續觀察7天，未發現任何毒副作用。實驗結果表明，口服β幹擾素含片的最大耐受量是人用劑量，即2000IU/日的50000倍。
測試2取一片本發明含片粉碎，加入5-10ml的RPMI-1640培養基中混合攪拌，然後於4℃放置過夜。然後用50um的濾膜過濾，收集濾液。用常規方法，即WISH法測定其中的幹擾素含量。經測定，其中β幹擾素的含量為標示量的100±10％。
將本發明含片在4至10℃環境下放置2年，經WISH法測定，β幹擾素、α幹擾素和白細胞介素2的活性，活性無明顯變化。
臨床實驗實驗1某患者，男性，50歲，診斷為B型肝炎，病史7年。患者每日晨起後，舌下含服一片本發明實施例7所述的β幹擾素含片(其中的β幹擾素含量為2000IU)，含服10至30分鐘。經半年的治療，ALT水平恢復正常，HBeAg轉陰。
實驗2某患者，女性，33歲，診斷為B型肝炎，病史3年。曾經單獨口服α幹擾素片劑，服用半年而無效。患者每日晨起後，舌下含服一片本發明實施例10所述的β幹擾素含片(其中的β幹擾素含量為2000IU,α幹擾素含量為200IU)，含服10至30分鐘。經一年的治療，ALT水平恢復正常，HBeAg轉陰比較實施例裸鼠40隻，隨機分為5組A組口服生理鹽水，作為對照；B組口服β幹擾素100IU/kg；C組口服β幹擾素100IU/kg和200IU/kg白細胞介素2；D組口服β幹擾素100IU/kg和α幹擾素10IU/kg；E組注射β幹擾素100IU/kg；F組注射β幹擾素10,000IU/kg。連續給藥1周後，檢測裸鼠細胞NK活性。結果如下分組 藥物 給藥途徑 劑量 NK活性％A 生理鹽水 口服 -- 7.9±2.8％B β幹擾素 口服 100IU/kg 19.9±3.3％*#C β幹擾素 口服 100IU/kg 22.8±6.1％*白細胞介素2200IU/kgD β幹擾素 口服 100IU/kg 28.6±6.5％*α幹擾素 10IU/kgE β幹擾素 注射 100IU/kg 8.5±3.0％F β幹擾素 注射 10,000IU/kg 17.7±1.8％**與A比較， P＜0.01#與E比較， P＜0.01由於存在種屬差異，人β幹擾素對小鼠無效，所以不用小鼠來評價人幹擾素的作用。但是由於裸鼠體內缺乏T細胞，所以1NK活性作為免疫指標。實驗結果表明，β幹擾素單用、β幹擾素與白細胞介素2合用或β幹擾素與α幹擾素合用都具有加強免疫功能的作用，而且在合用時具有協同作用。此外，與注射劑型相比，口服同劑量β幹擾素對免疫功能的誘導作用明顯高於注射，其作用與100倍的注射劑量相當。
權利要求
1．一種β幹擾素含片，其特徵在於，它包含β幹擾素和藥學上認可的輔料，所述β幹擾素的含量為每片1,000IU至10,000IU，所述的輔料選自人血白蛋白、牛血清蛋白、聚乙二醇、甘露醇、乳糖、葡萄糖、澱粉、硬脂酸鎂和糊精。
2．根據權利要求1所述的β幹擾素含片，其特徵在於，所述β幹擾素的含量為每片2000IU至5000IU。
3．根據權利要求1所述的β幹擾素含片，其特徵在於，所述β幹擾素的含量為每片2000IU。
4．根據權利要求1所述的β幹擾素含片，其特徵在於，它還包含α幹擾素，其中α幹擾素的含量為每片100IU至1,000IU。
5．根據權利要求4所述的β幹擾素含片，其特徵在於，它還包含0α幹擾素，其中α幹擾素的含量為每片100IU至500IU。
6．根據權利要求4所述的β幹擾素含片，其特徵在於，所述β幹擾素的含量為每片2000IU,α幹擾素的含量為每片200IU。
7．根據權利要求1所述的β幹擾素含片，其特徵在於，它還包含白細胞介素2，其中白細胞介素2的含量為每片1,000IU至10,000IU。
8．根據權利要求7所述的β幹擾素含片，其特徵在於，它還包含白細胞介素2，其中白細胞介素2的含量為每片2,000IU至5,000IU。
9．根據權利要求7所述的β幹擾素含片，其特徵在於，所述β幹擾素的含量為每片2000IU，白細胞介素2的含量為每片2000IU。
10．一種製備如權利要求1所述的β幹擾素含片的方法，其特徵在於，它包括將無菌β幹擾素與藥學上認可的輔料混合，冷凍乾燥成凍乾粉；將藥學上認可的輔料混合，經過篩，乾燥製備成空白顆粒；採樣倍比混合法將空白顆粒與凍乾粉充分混合；在低溫至常溫條件下直接壓片。
11．一種製備如權利要求1所述的幹擾素含片的方法，其特徵在於，它包括將藥學上認可的輔料混合，經過篩，乾燥製備成空白顆粒；將無菌β幹擾素與藥學上認可的輔料製備成溶液；將所述溶液以噴霧法均勻噴灑在空白顆粒上；然後烘乾；在低溫至常溫條件下直接壓片。
全文摘要
本發明提供了一種β幹擾素含片，它包含作為有效成分的低劑量的β幹擾素以及藥學上認可的輔料。本發明還提供了通過在低溫至常溫工藝條件下壓片製備以上含片的方法。該含片適用於病毒感染或腫瘤的治療，具有療效顯著、毒性低、口服方便、價格便宜、性能穩定等優點。
文檔編號A61K9/20GK1227124SQ9810538
公開日1999年9月1日 申請日期1998年2月25日 優先權日1998年2月25日
發明者曹雪濤, 鞠佃文, 陶群 申請人:上海華晨生物技術研究所