一種快速測定尿液中肌酐的超聲方法與流程
2023-05-19 14:22:36
本發明屬於尿液樣本的理化檢驗技術領域，具體公開了一種快速測定尿液中肌酐的超聲方法。
背景技術：
肌酐是一種低相對分子質量的含氮化合物，主要由肌肉產生，是肌酸的代謝終產物，每20g肌肉代謝可產生1mg肌酐。肌酐主要由腎小球濾過排出體外。分子式：c4h7n3o，分子量：113.1，白色晶體，熱至約300℃分解，與水1:12混溶，微溶於乙醇，幾乎不溶於乙醚、丙酮和氯仿。
肌酐是臨床常規腎功能指標之一，臨床上主要用於嚴重腎小球病變引起的腎功能不全、腎炎、尿毒症等腎臟疾病的診斷和療效觀察等。血清肌酐升高意味著腎功能的損害，是了解腎臟功能的重要指標，同時對冠狀動脈病變程度、高血壓、糖尿病等有可靠的診斷價值；尿肌酐排出量可作為肌肉量的指標，肌酐的產生量比較恆定，當腎功能損傷不嚴重時，尿中肌酐的排洩量少受尿液濃縮和稀釋的影響，故尿中肌酐濃度的測定常用作尿中其他物質排洩濃度的參照物。肌酐作為重要的腎功能指標，其含量檢測為體外診斷，與供體無接觸，無不良、致死報告，操作簡單、快速，可廣泛應用於臨床，其臨床應用的安全性和可靠性已得到驗證。
肌酐測定的方法較多，目前國內外檢測肌酐含量主要使用化學測定法(鹼性苦味酸法)、高效液相色譜法、酶法等方法。鹼性苦味酸法非特異的色素原幹擾因素較多，需要與陽離子交換樹脂法結合使用；高效液相色譜法不適用於大批量臨床樣本的檢測，通常只能作為肌酐測定的參考方法；酶法雖然特異性較高、準確性較好，但是酶試劑價格昂貴、且不易保存。因此，這些方法都不適合臨床廣泛應用。目前市場上缺乏穩定性好、靈敏度高、特異性強的肌酐檢測試劑，尤其是質量好的自動化檢驗試劑，因此，仍需要對現有的肌酐測定方法進行改進，以提供一種達到臨床要求、實用性強、性價比高，可應用於臨床的肌酐快速測定方法。
技術實現要素：
本發明的目的旨在克服現有技術缺陷，提供一種快速測定尿液中肌酐的超聲方法，該方法能快速、準確檢測尿液中肌酐的含量，測定結果準確、測定幹擾少。
為實現上述技術目的，本發明採用的技術方案如下：
一種快速測定尿液中肌酐的超聲方法，包括如下步驟：
(1)樣品處理，將待測的尿液用甲酸酸化，離心分離，將尿液中的殘渣或者尿道上皮細胞沉澱分離出去，離心後的溶液過0.25μm聚醚碸水相濾膜，進一步將尿液中的殘渣或者尿道上皮細胞從樣品中分離出去，減少對測試結果的幹擾，提高準確性，將過濾後的溶液用純水稀釋5000倍；
(2)標準曲線的配置，用純水配製不同濃度的肌酐標準曲線溶液，根據肌酐溶液的標準濃度與峰高的比值，建立肌酐的線性回歸方程；
(2)對樣品待測液進行測定，將上述稀釋後的樣品用超聲診斷儀分析，測得分析物與峰高的比值，代入一元線性回歸方程，求得樣品待測液中的肌酐的含量。
作為優選，酸化至ph值為2-3；更優的，酸化至ph＝2.5。
作為優選，離心的條件為：在12000r/min的條件下離心10min。
作為優選，在樣品處理前，還包括樣品採集：收集受試者空腹中段晨尿液於接尿管中，於-80℃冰箱中保存；在甲酸酸化前，先將採集後的尿液室溫下解凍，混合均勻。利用空腹中段晨尿液可以避免食品和水的攝入對測試結果的幹擾。
作為優選，定量限為0.20ng/ml，檢出限為0.99ng/ml。
作為優選，所述超聲診斷儀的探頭為凸陣電子掃描探頭，頻率為2-5mhz。
本發明提供的方法克服了現有技術樣品處理方法的不足，針對尿液樣本優化了前處理方法，並用超聲診斷儀進行分析。與現有技術相比本發明方法具有如下優良效果：
a與化學測定法(鹼性苦味酸法)、高效液相色譜法、酶法等方法比較，該方法靈敏度更高，前處理簡單，需要的樣品量少；
b本方法具有操作簡便、快速、準確、靈敏度及重複性好的優點。
附圖說明
圖1為實施例中的標準曲線圖。
具體實施方式
為了使本領域的技術人員可以更好地理解本發明，下面結合實施例對本發明技術方案進一步說明。
實施例
1、樣品採集
收集受試者空腹中段晨尿液於接尿管中，於-80℃冰箱中保存。
2、樣品前處理
室溫下解凍尿液樣品，混合均勻後，取1ml的尿液並加入10ul的甲酸酸化到ph＝2.5，在12000r/min的條件下離心10min，離心的混合物過0.25μm聚醚碸水相濾膜，取10μl處理過的上清液用純水定容50ml。
3、超聲診斷儀測定條件
探頭為凸陣電子掃描探頭，頻率為2-5mhz。
4、標準曲線的配置
分別取配製好的濃度為1、2、5、10、20、50、100、200、500、1500ng/ml的肌酐標準溶液5μl，用超聲診斷儀進行分析，得出肌酐濃度與峰高的關係得到如圖1所示的標準曲線。
肌酐濃度與峰高呈線性關係，線性方程為y＝13.5+4.36c,其相關係數為0.9995。利用加標稀釋得到方法的定量限和檢出限，目標峰10倍信噪比對應的濃度為定量限，3倍信噪比對應的濃度為檢出限。方法的定量限和檢出限分別為0.20ng/ml和0.99ng/ml。
5、本發明方法加標回收率和重複性
選取肌酐含量為低、中、高的三個不同肌酐濃度的病人尿樣，分別在同一時間內測定10次和連續檢測10天，考查方法的日內和日間重複性,測試結果如表1，其中，rsd＝標準差/平均值×100％。
表1測定尿液中肌酐的精密度
從表1，可以看出，本方法的日內和日間精密度(cv％)範圍分別是1.0％-1.5％和1.4％-2.5％，重複性好。
採用尿液基質加標樣品的方法測定回收率。選取病人的尿液樣本，選取三個添加水平(50、100和200ng/ml)加入標準品，每個水平做8個平行試驗，如表四。方法的回收率範圍是97.8％-103.5％(n＝8)。
表四
由表四可以看到，本發明提供的方法的回收率在97.8％-103.5％之間，檢測值與真實值較為接近，回收率較高，靈敏度較高。
以上對本發明提供的一種快速測定尿液中肌酐的超聲方法進行了詳細介紹。具體實施例的說明只是用於幫助理解本發明的方法及其核心思想。應當指出，對於本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以對本發明進行若干改進和修飾，這些改進和修飾也落入本發明權利要求的保護範圍內。