鏈黴菌單孢子懸液製備方法
2023-04-24 00:34:36 2
專利名稱：鏈黴菌單孢子懸液製備方法
麟菌單孢預液製備施
絲繊本發明涉及^0單孢預液制^^:領域。
背景s^1 ^^菌是醫用及農用抗生素的M來源，但 生菌株產||^素的
能力較低，因艦野生菌株的孢預糊變，提離株抗生素產量^C^素X4k中 的一項MfF究內容。制^ ^單孢: ^液艦菌^*^^變的一項^^礎性 工作。
目前國內外通常OT的單孢Tl:液製備方法主要^旨棉a^法，此法製備的 單孢預液中單孢T^低，往往含有大量的鵬子、三孢子甚至魏豫細 這^f&Tl^tfi^^^得假陽'M向突變株的概TO高，所得菌^^傳f^常常 出W^素產Myt斷氐至出發菌株產M7jc平的1！^,從而^^^X作皿極大不 便。翻單孢預液誘^T鈔突z頓株的回覆突變，極娥高優良菌株的麟效 率。
發明內容1本發明的目的魏決目前製備方法中單孢:？^*低的問題，,一 種翻微孔濾膜制^^菌單孢預液的方法。 本發明麟的麟菌單孢預液的製備方飾括
第一、保證無菌餅下，於躺塞體中製備菌^st:的斜面線基； 第二、 )|^|菌孢子在無菌剝牛下接種 恪好的斜面培養基上，在生化^#
箱中常規^5 14天，^M上TO生長成熟後備用；
第三、將0. 45 ii m濾皿濾的蒸餾水於高壓滅菌鍋中121。C滅菌20 30min 備用；
第四、向第二步^:新生長成熟的試管中加入10 15ml第三步滅菌後的蒸餾 水，在無菌餅下用接種環輕輕刮下斜面上孢子，將含有孢子的無菌水轉A^滅菌 後的50ml小三角瓶中，用無m^餾水調^ a預液^fRM 20ml，加入5 10 ^t徑3 5mm的無M^，在迴轉式搖床上於150 250r/min ^f牛下 M l 3h; 第五、用5 10rnl無菌ftlt器吸取第四步中經fiW的孢T^液； 第六、在第五步戶腐,器前部加M:徑10 25mm無菌過濾頭，內擬L徑為
1. 0 5. 0 n m的醋酸纖維素艦龍無菌濾膜；
第七、手動加壓使糊器中的孢預液m濾膜並收集於無菌容器內即得單 包
子懸液。
第八、取少動恪好的單孢預液於顯微鏡下觀察，如單孢子率大於98%貝懷 明製備液合格，如單孢子製備報低可細孔徑較小濾膜，建議將第五步戶誠醋酸 纖維素或尼龍無菌濾膜的 W趟為孢子直徑的1 2倍為宜。
本發明的優點和積極效果
本發明開發出一種十魏、簡便、單 包子產率高的鏈黴菌單孢預液製備方法。 採用本發明方法製備的鏈黴菌單孢預液中單孢子率在98%以上。
具體 ^式
第一、保證無菌條件下，於具棉塞試管中製備菌皿適宜的斜面培養基； 第二將鏈黴菌孢子在無菌斜牛下擬中刊恪好的斜面培養基上，在生化培養 箱中常規培養14天，待斜面上離生長成熟後備用；
第三、將0.45um濾膜過濾的蒸餾水於高壓滅菌鍋中12rC滅菌20min備用； 第四、向第二步0^新生長成熟的試管中加入15ml第三步滅菌後的蒸餾水， 在無菌斜牛下用接種環輕輕刮下斜面上孢子，將含有孢子的無菌水轉入經滅菌後的 50ml小三角瓶中，用無ff^餾7jC調Sl^i;液體積至20ml，加入5 10粒直徑3 5咖的無菌^*，在迴轉式搖床上於250r/min條件下打碎lh; 第五、用5 10ml無菌湖器吸取第四步中經J辨的孢賴液； 第六、在第五步戶;f^注射器前部加驢徑10 25咖無菌過濾頭，內裝孔徑為L0 5.0um的醋酸纖維素TO龍無菌濾膜(濾膜的孑L徑以孢子直徑的1 2倍為 宜)，本例中孢子直徑約為1.6um，尼龍無菌濾膜孔徑為3.0um。
第七、手動加壓使^I寸器中的孢預、M31濾膜並收集於無菌容器內即得單孢 報液。
第八、取少穀恪好的單孢 液於顯微鏡下觀察，單 包子率大於98%。 織例2、
4繊黴菌孢子在無菌^#下，常規培養10天；將0. 45 u m濾膜過濾的蒸餾水 於高壓滅菌鍋中12rC滅菌25min;試管中加入10ml第三步滅菌後的蒸餾水；迴轉 式搖床上於200r/min^f牛下 辨2h;醋酸纖維素孑L徑為5 P m,其餘^[牛同實施例 1，戶賴'j備的單孢預液中，單孢子率為99.5%。
鄉例3、
將鏈黴菌孢子在無菌i^牛下，常規培養6天；將0. 45 y m濾膜過濾的蒸餾7jC於 高壓滅菌鍋中121'C滅菌30min;試管中加入10ml第三步滅菌後的蒸餾水；迴轉式 搖床上於150r/min條件下打碎3h;尼龍無菌濾膜孔徑為2 u m，其餘條件同實施例 1，戶賴恪的單孢 液中，單孢子率為98.6%。
權利要求
1、一種鏈黴菌單孢子懸液製備方法，其特徵是該方法包括第一、保證無菌條件下，於具棉塞試管中製備菌株最適宜的斜面培養基；第二、將鏈黴菌孢子在無菌條件下接種於製備好的斜面培養基上，在生化培養箱中常規培養5～14天，待斜面上菌落生長成熟後備用；第三、將0. 45μm濾膜過濾的蒸餾水於高壓滅菌鍋中121℃滅菌20～30min備用；第四、向第二步菌落新生長成熟的試管中加入10～15ml第三步滅菌後的蒸餾水，在無菌條件下用接種環輕輕刮下斜面上孢子，將含有孢子的無菌水轉入經滅菌後的50ml小三角瓶中，用無菌蒸餾水調整孢子懸液體積至20ml，加入5～10粒直徑3～5mm的無菌玻璃珠，在迴轉式搖床上於150～250r/min條件下打碎1～3h；第五、用5～10ml無菌注射器吸取第四步中經打碎的孢子懸液；第六、在第五步所述注射器前部加裝直徑10～25mm無菌過濾頭，內裝孔徑為1.0～5.0μm的醋酸纖維素或尼龍無菌濾膜；第七、手動加壓使注射器中的孢子懸液通過濾膜並收集於無菌容器內即得單孢子懸液。
2、 根據權利要求1戶腿的鏈黴菌單孢^液製備方法，其牛寺徵是第五步戶欣 醋酸纖維素，龍無菌濾膜的孔徑為孢子直徑的1 2倍。
全文摘要
一種製備鏈黴菌單孢子懸液的方法。解決現有製備方法中存在的單孢子製備率低的問題。將121℃滅菌20-30min的無菌水加入到培養有鏈黴菌斜面的試管中，用接種環輕輕刮下孢子，將含有孢子的無菌水轉入三角瓶中，加入玻璃珠，在搖床上打碎，經濾膜過濾後即得到單孢子率在98％以上的單孢子懸液。
文檔編號C12N3/00GK101418278SQ20081015314
公開日2009年4月29日 申請日期2008年11月19日 優先權日2008年11月19日
發明者禕 彭, 譚悠久, 黃永春 申請人:農業部環境保護科研監測所