一種無球蟲健康兔的培育方法與流程
2023-04-24 01:41:06 1
本發明涉及兔養殖領域，具體涉及一種無球蟲健康兔的培育方法。
背景技術：
兔子是作為最早用作實驗用途的動物之一，實驗用兔被廣泛應用於生物學、醫學、藥學、營養學、化工、獸醫學、農業科學等領域。隨著科研項目和我國養殖業對各種疫苗的需求增加，我國實驗用兔產量也越來越大，經濟價值和科技附加值越來越高；普通級實驗兔是目前使用數量最多的普通級實驗兔，普通級環境的實驗兔場，由於兔舍環境不夠規範，質量不穩定，主要疫病得不到有效的控制，大量使用抗生素和化學藥品，導致生產成本大幅增加，嚴重影響了實驗兔質量和兔實驗結果。
兔球蟲病是危害兔子最嚴重的一種傳染病，屬寄生性原蟲病，目前世界公認的有11種艾美耳球蟲，多寄生於家兔腸上皮細胞。該病也是家兔各種疾病中最常見、危害最嚴重的疾病之一，具有很高的發病率和死亡率，嚴重影響了養兔業的發展。至今為止，防治兔球蟲病只能依靠抗球蟲藥物，而且球蟲極易對抗球蟲藥性產生耐藥性，防治效果欠佳，而且藥物會在兔機體內長時間殘留造成食品安全隱患。球蟲病的特性導致球蟲的感染率極高，普通養殖場的球蟲感染率達到為100％。在商品兔場幾乎不存在無球蟲健康兔，實驗用兔只有SPF兔才能保證無球蟲感染，普通級和清潔級實驗兔均存在球蟲感染；在SPF兔產量及存活率較低的情況下，兔球蟲病等相關兔試驗開展嚴重受限，而且SPF兔成本很高。兔球蟲病試驗只需健康兔達到無球蟲感染即可，因此急需摸索出一種無球蟲健康兔的培育方法來解決這一難題。同時該方法可為兔養殖生產過程球蟲淨化及防控兔球蟲病提供參考和依據。
佛山市正典生物技術有限公司作為亞洲首家生產雞球蟲病活疫苗企業，公司於2003一直致力於研究雞球蟲病這一世界難題。歷經數載攻堅，在雞球蟲病免疫防治技術上取得多項突破。共申請了5項專利技術，項目成果通過了由廣東省科技廳組織的成果鑑定，技術達到國內領先水平。為了解決兔球蟲病防治這一世界性難題，2013年公司成立兔球蟲病活疫苗研發小組，開始從事兔球蟲病活疫苗的研發工作。由於研發過程需要大量的無球蟲健康兔用於兔實驗，因此研發小組通過不斷探索和努力，研究了一種無球蟲健康兔模型建立的方法。無球蟲健康兔模型的成功建立將大大提高兔球蟲疫苗的研發進度，從而使球蟲疫苗早日問世，以解決長期困擾兔養殖事業的球蟲病。
球蟲病作為一個世界性難題一直未得到有效解決，無論從防治效果還是食品安全的角度考慮，球蟲疫苗都是解決兔球蟲病最有效的的方法。但是，兔球蟲疫苗研發的過程需要用到大量的無球蟲健康兔進行系列研究，如果沒有充足的無球蟲健康兔來源，試驗將很難開展，從而導致球蟲疫苗的研發非常困難和漫長。雖然試驗中可以採用SPF級實驗兔，甚至某些環節必須使用SPF兔進行試驗，但是當前SPF兔供應能力不足而且價格昂貴。而普通級實驗兔對球蟲感染沒有控制要求，其體內攜帶不同種類的球蟲對試驗數據造成嚴重影響，導致其無法滿足兔球蟲系列研究活動的要求，例如對球蟲單一蟲種或特定目標蟲種進行篩選或純化等。
因此，無球蟲健康兔的培育顯得尤為迫切和重要。
技術實現要素：
為解決上述問題，本發明的目的是提供即在於克服現有技術的缺點，提供一種無球蟲健康兔的培育方法。
為實現上述技術目的，本發明採用的技術方案如下：本發明的一種無球蟲健康兔的培育方法，包括如下步驟：
(1)在兔子的日常飲水內添加可溶於水的抗球蟲藥，並採取輪換用藥的方式防止球蟲對單一藥物形成耐藥性；此種方法可短期內快速降低兔產出球蟲卵囊的數量，從而降低淨化難度，目前兔球蟲蟲株基本上都是耐藥株，市面上的抗球蟲藥物很難對球蟲進行徹底殺滅，只能不同程度的減輕其感染強度；
(2)通過對籠具進行火焰消毒以防止從兔體內排出的卵囊自然孢子化後被其重新攝入引起重複循環感染，火焰消毒雖然可以殺死籠具以及環境內存在的卵囊，但球蟲卵囊的排出會持續7～20天，火焰消毒無法保證在卵囊排出後隨時、即刻實施，只能通過1～5天定期間斷性的重複消毒，此種方法無法短時間內淨化徹底；
(3)通過不斷移籠的方式進行淨化：這種方法要求將每隻兔子每天在經過火焰消毒過的籠具內進行不斷移籠，以防止重新攝入自身排出存在於籠具及食具上的卵囊；這種方法效果較好，但是工作量繁重，而且對籠具設備數量需求較大；
(4)上述步驟(1)至步驟(3)中的任一方法都可以不斷減少兔子卵囊排出量，但是單一方法無法徹底淨化，必須交替運用三種方法，以達到徹底淨化兔體內的球蟲，並且縮短淨化時間，製得無球蟲健康兔。
進一步地，在步驟(4)中，將經檢測符合各項健康指標的無球蟲健康兔放置於實驗室內飼養，實驗室應遠離周邊兔場。
進一步地，在步驟(4)中，淨化徹底後的無球蟲健康兔將會安排專人進行飼養、配種、繁殖，並在養殖過程中進行定期監測以防止來自不同途徑的球蟲汙染。
更進一步地，在步驟(4)中，監測兔子體內無球蟲的淨化：連續一個月內每日收集每隻兔子排出的糞便，通過飽和食鹽水漂浮法進行卵囊排查無發現卵囊。
有益效果：本發明可以提供充足的無球蟲健康的試驗用兔，有利於試驗的持續順利開展，降低研發成本。本發明適用於普通養殖場防控球蟲病，減少球蟲病帶來的經濟損失，降低用藥成本。
與現有技術相比，本發明具有如下優點：
(1)本發明可以提供充足的試驗用兔，尤其是兔，有利於試驗的持續順利開展，降低研發成本。無球蟲健康兔培育的方法本身就是一套兔球蟲淨化和防控的可行性方案，將為兔養殖生產中兔球蟲病的防控提供理論和實踐借鑑。
(2)本發明的無球蟲健康兔與SPF兔相比，無球蟲健康兔可保證足量供應而且成本極大降低，對於兔球蟲病的研究有很大的科研意義。本發明可將普通養殖環境中攜帶球蟲的祖代/父母代/商品代健康兔通過一套系統完整的方案將之淨化成不攜帶球蟲的無球蟲健康兔，該無球蟲健康兔可用於兔球蟲病的實驗室研究。
具體實施方式
為使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將對本發明的實施方式作進一步地詳細描述。
實施例1
為了培育無球蟲健康兔，我們充分利用球蟲生活史及球蟲獨特的特性——球蟲自身限制，將普通的球蟲感染兔淨化成無球蟲健康兔。球蟲的自身限制是指感染一次球蟲後，如不再重複感染，球蟲就不會長期寄生於宿主體內，球蟲自動從宿主體內消失的現象。這是由於球蟲經過一段時間的多次裂殖生殖後，所產生的裂殖子都進入了配子生殖階段，最後全部形成卵囊排除體外。因此，兔球蟲病為自身限制性疾病。球蟲的這一特點決定只要可以使兔不重複感染球蟲，就可以將感染球蟲的兔淨化為無球蟲健康兔。
本發明充分利用球蟲的這一特點，採取了多種有效的淨化方法，將普通級或清潔級攜帶球蟲的健康兔淨化成為無球蟲健康兔，從而探索出無球蟲健康兔的培育方法。
本發明的一種無球蟲健康兔的培育方法，包括如下步驟：
1兔子來源
選擇養殖環境較好，經檢測兔球蟲感染程度較輕的養殖場，或普通級/清潔級實驗兔生產單位。
2兔子的選擇
選擇合適數量的可作為後備種兔的青年健康雄兔、雌兔，選取的兔子應無寄生蟲病以及傳染病史。
3兔子的健康檢測
對選取的兔子必須符合以下標準：
3.1外觀指標：兔子應外視健康，飲食慾無異常，無跛腳等。
3.2寄生蟲指標：無外寄生蟲和全部蠕蟲，如蟎蟲、栓尾線蟲等。
3.3傳染性疾病：無兔瘟、巴氏桿菌病、魏氏梭菌病、波氏桿菌病等。
4淨化場地要求
將經檢測符合各項健康指標的後備青年兔放置於實驗室內飼養，實驗室應遠離周邊兔場。兔子飼養籠具應選擇耐清洗消毒的材質以備後續的淨化工作的順利開展。
5兔子球蟲淨化的方法
(1)在兔子的日常飲水內添加可溶於水的抗球蟲藥，並採取輪換用藥的方式防止球蟲對單一藥物形成耐藥性。此種方法可短期內快速降低兔子產出球蟲卵囊的數量，從而降低淨化難度。目前兔球蟲蟲株基本上都是耐藥株，市面上的抗球蟲藥物很難對球蟲進行徹底殺滅，只能不同程度的減輕其感染強度。
(2)通過對籠具進行火焰消毒以防止從兔體內排出的卵囊自然孢子化後被其重新攝入引起重複循環感染。火焰消毒雖然可以殺死籠具以及環境內存在的卵囊，但球蟲卵囊的排出會持續7～20天，火焰消毒無法保證在卵囊排出後隨時、即刻實施，只能通過1～5天定期間斷性的重複消毒，此種方法無法短時間內淨化徹底。
(3)通過不斷移籠的方式進行淨化：這種方法要求將每隻兔子每天在經過火焰消毒過的籠具內進行不斷移籠，以防止重新攝入自身排出存在於籠具及食具上的卵囊。這種方法效果較好，但是工作量繁重，而且對籠具設備數量需求較大。
(4)上述步驟(1)至步驟(3)中的任一方法都可以不斷減少兔子卵囊排出量，但是單一方法無法徹底淨化，必須交替運用三種方法，以達到徹底淨化兔體內的球蟲，並且縮短淨化時間，製得無球蟲健康兔。
將經檢測符合各項健康指標的無球蟲健康兔放置於實驗室內飼養，實驗室應遠離周邊兔場。
6.淨化後無球蟲健康兔標準
淨化後無球蟲健康兔必須符合以上第3項要求，且不攜帶球蟲。監測兔子體內無球蟲的淨化：連續一個月內每日收集每隻兔子排出的糞便，通過飽和食鹽水漂浮法進行卵囊排查無發現卵囊。因為通過相關文獻數據並結合我們研究發現，兔球蟲所有蟲種裡面潛隱期最長的為14天左右，如經過兩個以上最長的潛隱期無發現卵囊則可以確定淨化徹底。
7.無球蟲健康兔群的成功培育
淨化徹底後的無球蟲健康兔將會安排專人進行飼養、配種、繁殖，並在養殖過程中進行定期監測以防止來自不同途徑的球蟲汙染。在種兔體內無球蟲卵囊產生並排出的情況下，其後代將不會感染球蟲，從而形成一個相對獨立封閉的無球蟲健康兔飼養環境，通過不斷的繁殖後代形成無球蟲健康兔種群。
試驗1
1.無球蟲健康兔與SPF兔進行球蟲病試驗數據對比
為了保證培育出的無球蟲健康兔進行球蟲病相關試驗時數據準確、可靠，我們與SPF兔進行了球蟲相關的對比試驗。
1.1試驗方案：選取40～50日齡體重相近的無球蟲健康兔和SPF兔各10隻，各隨機分成2組，每組5隻。第1、2組分別為無球蟲健康兔空白組、SPF兔空白組，第3、4組分別為無球蟲健康兔感染組和SPF兔感染組。感染組的10隻兔子每隻通過灌胃的方式接種腸艾美耳球蟲孢子化卵囊5000個，接種後觀察並記錄兔子精神狀態、飲食慾、球蟲病臨床症狀、排卵囊規律，另外試驗前後對每隻兔子進行稱重以統計增重指標(接種後14天試驗結束)。
1.2試驗結果
感染球蟲卵囊後兩空白組兔子精神狀態、飲食慾正常；兩個感染組兔子在接種後第7天開始出現精神沉鬱、食慾減退的現象；第9天開始排出卵囊並伴隨出現明顯的腸艾美耳球蟲病臨床症狀：精神萎靡，少食或不食，糞便量明顯減少，糞便變形、變軟或拉稀；排卵囊高峰期出現在第11～13天；試驗期間感染組兔子消瘦，試驗前後增重明顯低於空白組。感染前後兔子增重記錄的數據如表1所示：
表1
如表1的數據表明：在兔子增重方面，我們培育出的無球蟲健康兔與SPF兔無明顯差異。
1.3試驗結論
綜合以上試驗結果表明：我們培育出的無球蟲健康兔在進行兔球蟲病研究時，臨床症狀、體重、對球蟲的易感性等方面與SPF兔相比無明顯差異。由此說明我們培育的無球蟲健康兔可用於球蟲病相關的實驗室研究和臨床研究。
以上顯示和描述了本發明的基本原理、主要特徵和本發明的優點。本行業的技術人員應該了解，本發明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發明的原理，在不脫離本發明精神和範圍的前提下，本發明還會有各種變化和改進，本發明要求保護範圍由所附的權利要求書、說明書及其等效物界定。