一種NOSLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒的製作方法
2023-05-21 09:07:21
一種NOSLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒的製作方法
【專利摘要】一種NOSLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，包括盒體和位於盒體上方的盒蓋，所述盒體具有容置腔，還包括固定座和海綿墊，所述固定座容置在上述容置腔內並縱向開設有6個容置孔和1個容置槽，6個所述容置孔的孔腔內分別容置有NOSLAP-R引物試劑管、NOSLAP-C引物試劑管、NOSLAP-F1引物試劑管、NOSLAP-F2引物試劑管、NOSLAP-Taqman管和陽性對照質粒管；所述容置槽的槽腔內容置有PCR緩衝液試劑瓶；6個所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽的槽腔的底部分別鋪設有所述的海綿墊；所述盒蓋的一側與盒體的開口處轉動連接，另一側向下彎折形成連接部，所述連接部朝向盒體的側壁設有金屬部件，相應的，所述盒體的側壁對應金屬部件處設有磁性部件。本ARMS-qPCR檢測試劑盒結構簡單、密封性強。
【專利說明】-種NOSLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒
【技術領域】
[0001] 本實用新型涉及一種檢測試劑盒，尤其涉及一種N0SLAP基因分型的ARMS-qPCR檢 測試劑盒。
【背景技術】
[0002] 巧死是指自然發生、出乎意料的突然死亡，也叫急死，即看來貌似健康的人或病情 經治療後已穩定或正在好轉的患者，在很短時間發生意想不到的非創傷性死亡。中國也髒 性巧死年齡分布為18-80歲（均值43. 8歲），其中18-39歲的青年和40-59歲的中年巧死 比較常見（43%和39%)，而60-80歲老年巧死較少見（17. 9%)。男女比例為4.3 : 1。有 數據顯示，我國每年死於也髒性巧死的人數多達55萬。也就是說，每天至少有1000多人巧 死。而根據媒體報導，1998年北京室120轉運救治的中青年巧死者80多名，但到了 2011年 該一數字上升為270多名（鞏江等，2013)。
[0003] 巧死的原因很多，臨床上W也血管疾病所引起的巧死最為常見而重要，稱為也髒 性巧死。其中冠也病、急性也肌梗死患者最為多見。急性也肌梗死可W迅速出現休克、昏迷， W致巧死（潘俊宏，2013)。
[0004] 基因的缺陷是也髒性巧死最重要的原因。通過對15842名研究對象採取也電圖檢 查W及基因組關聯分析後發現，Noslap基因的突變可W改變也髒肌肉的收縮時間即QT間 期，進而導致巧死危險上升（Arking et al.2006)。
[0005] Noslap位於第一號染色體的q23. 3,編碼一個一氧化氮合成酶連接蛋白，連接一 氧化氮合成酶及其底物化ao et al. 2009)。近年來，有研究陸續報導此基因的變異體會影 響 QT 間期（Post et al.2007，Lehtinen et al.2008，Eijgelsheim et al.2009),會造成巧 死率提高（Raitakari et al.2009)。對於我們中國人來說，基因型為Noslap rsl0918859G/ A+AA型的人罹患巧死的風險遠大於rsl0918859GG型的人（Huang et al. 2013)，因 此，Noslap rsl0918859位置不同的基因型是預測巧死風險的極好標誌物，檢測Noslap rsl0918859基因型對於提前預防巧死，提高疾病防護風險具有重要的意義。
[0006] 可用於Noslap rsl0918859分型的技術很多，包括如DNA直接測序法、雜交晶片 法、焦磯酸測序法W及變性高效液相色譜法等。其中，DNA測序法為基因分型的金標準，該方 法存在如下缺點；檢測的靈敏度不高，只有大於15%的突變才能檢測到；費時，操作複雜， 對操作人員要求高；非閉管操作，涉及PCR擴增後的操作，因此易被汙染，造成結果的不理 想；通量太小，一次最多只能做24個，很難大規模開展。 實用新型內容
[0007] 本實用新型所要解決的技術問題是針對技術現狀提供一種密封性良好的N0SLAP 基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒。
[0008] 本實用新型解決上述技術問題所採用的技術方案為；一種N0SLAP基因分型的 ARMS-qPCR檢測試劑盒，包括盒體和位於盒體上方的盒蓋，所述盒體具有容置腔，還包括 固定座和海綿墊，所述固定座容置在上述容置腔內並縱向開設有6個容置孔和1個容置 槽，6個所述容置孔的孔腔內分別容置有NOSLAP-R引物試劑管、NOSLAP-C引物試劑管、 N0SLAP-F1引物試劑管、NOSLAP-巧引物試劑管、NOSLAP-I'aqman管和陽性對照質粒管；所述 容置槽的槽腔內容置有PCR緩衝液試劑瓶；6個所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽的槽 腔的底部分別鋪設有所述的海綿墊；
[0009] 所述盒蓋的一側與盒體的開口處轉動連接，另一側向下彎折形成連接部，所述連 接部朝向盒體的側壁設有金屬部件，相應的，所述盒體的側壁對應金屬部件處設有磁性部 件。
[0010] 作為改進，N0SLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒還包括備用容置槽，所述備 用容置槽的槽腔內容置有裝有PCR緩衝液備用試劑瓶，所述備用容置槽的槽腔底部鋪設有 海綿墊，所述備用容置槽與容置槽並列排布在固定座上。
[0011] 優選的，6個所述容置孔在固定座上分兩排平行排列。
[0012] 優選的，6個所述容置孔分別為能容納1. 5m化P管的孔洞，相應的，所述N0SLAP-R 引物試劑管、N0SLAP-C引物試劑管、N0SLAP-F1引物試劑管、N0SLAP-F2引物試劑管、 NOSLAP-I'aqman管和陽性對照質粒管分別採用1. 5m化P管。
[0013] 優選的，所述金屬部件為鐵片，所述磁性部件為磁鐵塊。
[0014] 作為改進，所述磁性部件外凸地設置在盒蓋的側壁，所述連接部設置金屬部件處 開設有凹槽，所述金屬部件設置在該凹槽的槽底，在所述金屬部件與磁性部件吸附在一起 的狀態下，所述磁性部件完全容置在該凹槽的容置空間內。
[0015] 與現有技術相比，本實用新型的優點在於；本ARMS-qPCR檢測試劑盒在盒蓋和盒 體的連接處設置了磁性鎖合機構（即金屬部件和磁性部件），可W保證在盒蓋與盒體閉合 時，保持密封狀態，方便移動和運輸；另外，本ARMS-qPCR檢測試劑盒在N0SLAP rsl0918859 位基因分型時具有敏感性高、特異性強、耗時短等優點；此外，容置孔的孔槽與容置槽的槽 腔底部都鋪設有海綿墊，可W避免試劑管與試劑瓶的底部磕碰破損，保證了各個容器的安 全。
[0016] 本ARMS-qPCR檢測試劑盒適用於N0SLAP基因分型，其結構簡單、設計合理、使用方 便、容易製造，且檢測過程不易受汙染其即保證了試劑盒密封性、安全性，又方便運輸，可W 在給N0SLAP基因分型時方便實驗人員操作，提高了工作效率。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0017] 圖1為本實用新型實施例ARMS-qPCR檢測試劑盒的結構示意圖。
【具體實施方式】
[0018] W下結合附圖實施例對本實用新型作進一步詳細描述。
[0019] 本實施例的N0SLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，如圖1所示，包括盒體1 和位於盒體1上方的盒蓋2,盒體1為上端開口的中空的立方體盒體1，其具有容置腔。盒 蓋2的一側邊與盒體1的開口端的一側壁的頂端轉動連接，例如較接或者通過一層膜連接， 而盒蓋2的相對的一側通過磁性鎖合機構與盒體1連接。盒體1與盒蓋2的具體連接方式 為；盒蓋2的一側與盒體1的開口處轉動連接，另一側向下彎折形成連接部11，連接部11朝 向盒體1的側壁設有金屬部件12--鐵片，相應的，盒體1的側壁對應金屬部件12處設有 磁性部件13-磁鐵塊。磁鐵塊的位置應使盒蓋2蓋合在盒體1上，且盒蓋2的連接部11 貼合在盒體1的側壁上，該磁鐵塊正好與連接部11上的鐵片相對應並吸合。
[0020] 本實施例的盒蓋2與盒體1的連接方式可W保證在盒蓋2與盒體1閉合時，保持 密封狀態，W方便移動和運輸。
[0021] 為了進一步增強本試劑盒的密封性，磁性部件13外凸地設置在盒蓋2的側壁，同 時，連接部11上設置金屬部件12的內壁處開設有凹槽，而金屬部件12固定在該凹槽的槽 底，當金屬部件12與磁性部件13吸附在一起時，磁性部件13完全容置在該凹槽的容置空 間內。此時，因磁性部件13完成容置在了凹槽內，使得盒蓋2和盒體1蓋合時，盒蓋2與盒 體1間無縫隙，增強了密封性。
[0022] 本實施例的N0SLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒還包括固定座14和海綿 墊，固定座14容置在盒體1容置腔內並縱向開設有6個容置孔、1個容置槽和1個備用容 置槽，6個容置孔的孔腔內分別容置有N0SLAP-R引物試劑管4、N0SLAP-C引物試劑管3、 N0SLAP-F1引物試劑管5、N0SLAP-巧引物試劑管e.NOSLAP-I'aqman管8和陽性對照質粒管 7 ;容置槽的槽腔內容置有PCR緩衝液試劑瓶10,備用容置槽的槽腔內容置有PCR緩衝液備 用試劑瓶9。
[0023] 為了防止在運輸過程中，試劑管、試劑瓶與盒體1或固定座14碰撞而破損，6個 容置孔的孔腔的底部、容置槽的槽腔的底部W及備用容置槽的槽腔的底部分別鋪設有海綿 墊。在本實施例中，容置孔、容置槽和備用容置槽都是具有底部的空腔式結構，每個孔腔、槽 腔底部分別鋪設有海綿墊，該樣可W防止發生碰撞，對試劑管、試劑瓶能起到更好的保護和 緩衝作用，W保證各個容器的安全。
[0024] 當然，容置孔、容置槽和備用容置槽可W設計成沒底的穿孔式結構，此時海綿墊可 W為一整塊，其具體鋪設在盒體1內固定座14下方的容置腔內。
[00巧]為了使得本實施例的ARMS-qPCR檢測試劑盒結構更加整齊，6個容置孔在固定座 14上分兩排平行排列，而備用容置槽與容置槽並列排布在固定座14上並位於容置孔的右 側，其中容置槽位於上方。位於上排的3個容置孔內從左至右分別放置N0SLAP-C引物試劑 管3、N0SLAP-F2引物試劑管6和陽性對照質粒管7,位於下排的3個容置孔內從左至右分 別放置N0SLAP-R引物試劑管4、N0SLAP-F1引物試劑管5和N0SLAP-化qman管8。該種排 布格局是根據使用本檢測試劑盒來進行N0SLAP基因分型時的操作步驟來設計的，可W使 得檢測時，操作人員能有條理、有規律地選擇相應的試劑。
[002引 6個容置孔分別為能容納1. 5m化P管（即離也管）的孔洞，相應的，N0SLAP-R引 物試劑管4、N0SLAP-C引物試劑管3、N0SLAP-F1引物試劑管5、N0SLAP-巧引物試劑管6、 N0SLAP-化qman管8和陽性對照質粒管7分別採用1. 5m化P管。
[0027] 6個容置孔中放置的EP管中分別裝有濃度為10 ymol/L的如下引物：
[0028] N0SLAP-R ;5, -AAACAGGAAGTGTGGCCAGA-3,
[0029] N0SLAP-C ;5' -CCTATGGAGACAACAGCCGG-3'
[0030] N0SLAP-F1 ;5' -GTGGTGTCACAGGAAGAGGCT-3'
[0031] N0SLAP-F2 ;5, -GTGGTGTCACAGGAAGAGGCC-3'
[0032] 另外，PCR緩衝液試劑瓶10、PCR緩衝液備用試劑瓶9中盛裝的PCR反應緩衝 酶液混合物包括濃度為 0. 4mmol/L 的 dNTPs，5mmol/L 的 Mg", 2xPCR Buffer, lU/25 y L Goldstar Best "TagaNOSLAP-Taqinan管8 中裝有通用"Tagman探針，序列為；NOSLAP-Taqman: 5' -FAM-CTCTCTTCAAATAAACAGCC-3'，陽性對照質粒管7中裝有陽性對照質粒。
[0033] 使用本實施例的ARMS-qPCR檢測試劑盒進行N0SLAP基因分型的操作方法如下：
[0034] 1)取模板 DNA
[00巧]取病人全血1血，常規提取DNA，取1 y LDNA作為模板。
[0036] 2)反應體系
[0037] 將各反應物質按照如下反應體系進行配比；
[003引反應體系為20y 1，包括qPCR混合液lOy 1，參照引物或者ARMS引物各0. 5y 1(終 濃度0. 5 y M/L)，模板1 y 1 (lOOng)，其餘用d地20補齊。
[0039]
【權利要求】
1. 一種NOSLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，包括盒體（1)和位於盒體（1)上方 的盒蓋（2)，所述盒體（1)具有容置腔，其特徵在於：還包括固定座（14)和海綿墊，所述固 定座（14)容置在上述容置腔內並縱向開設有6個容置孔和1個容置槽，6個所述容置孔的 孔腔內分別容置有N0SLAP-R引物試劑管（4)、N0SLAP-C引物試劑管（3)、N0SLAP-F1引物試 劑管（5)、N0SLAP-F2引物試劑管（6)、N0SLAP-Taqman管⑶和陽性對照質粒管（7);所述 容置槽的槽腔內容置有PCR緩衝液試劑瓶（10) ;6個所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽 的槽腔的底部分別鋪設有所述的海綿墊； 所述盒蓋（2)的一側與盒體（1)的開口處轉動連接，另一側向下彎折形成連接部（11)， 所述連接部（11)朝向盒體（1)的側壁設有金屬部件（12)，相應的，所述盒體（1)的側壁對 應金屬部件（12)處設有磁性部件（13)。
2. 根據權利要求1所述的NOSLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，其特徵在於：還 包括備用容置槽，所述備用容置槽的槽腔內容置有PCR緩衝液備用試劑瓶（9)，所述備用容 置槽的槽腔底部鋪設有海綿墊，所述備用容置槽與容置槽並列排布在固定座（14)上。
3. 根據權利要求1所述的NOSLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，其特徵在於：6 個所述容置孔在固定座（14)上分兩排平行排列。
4. 根據權利要求1所述的NOSLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，其特徵在 於：6個所述容置孔分別為能容納1. 5mlEP管的孔洞，相應的，所述N0SLAP-R引物試劑管 (4)、N0SLAP-C引物試劑管（3)、N0SLAP-F1引物試劑管（5)、N0SLAP-F2引物試劑管（6)、 NOSLAP-Taqman管（8)和陽性對照質粒管（7)分別採用1.5mlEP管。
5. 根據權利要求1所述的NOSLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，其特徵在於：所 述金屬部件（12)為鐵片，所述磁性部件（13)為磁鐵塊。
6. 根據權利要求1所述的NOSLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測試劑盒，其特徵在於：所 述磁性部件（13)外凸地設置在盒蓋（2)的側壁，所述連接部（11)設置金屬部件（12)處開 設有凹槽，所述金屬部件（12)設置在該凹槽的槽底，在所述金屬部件（12)與磁性部件（13) 吸附在一起的狀態下，所述磁性部件（13)完全容置在該凹槽的容置空間內。
【文檔編號】C12Q1/68GK204185476SQ201420642771
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年10月31日 優先權日:2014年10月31日
【發明者】張道允, 鞏子英, 張恆, 羅堅誠, 賈寧 申請人:江蘇所羅門兄弟醫學科技有限公司