一種新型現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒的製作方法

2023-05-20 15:35:31

一種新型現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒的製作方法
【專利摘要】本實用新型涉及一種現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒，其特徵是：檢測試劑盒包括測試條和液滴瓶；測試條有反應槽，反應槽是經孔雀石綠抗體包被過的，液滴瓶內裝有示蹤液，陽性對照液，陰性對照液，顯色液；示蹤液含有預標記的孔雀石綠，能特異地與孔雀石綠抗體結合。本實用新型具有結構簡單，操作易捷，檢測準確，靈敏度高，可用於現場檢測等優點；本實用新型實現在一次實驗中同時測定樣品、陽性對照和陰性對照，從而能更準確地界定檢測結果和有效性。
【專利說明】一種新型現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒
【技術領域】
[0001]本實用新型屬於免疫檢測【技術領域】，特別是涉及一種新型現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒。
【背景技術】
[0002]孔雀石綠，孔雀石綠是一種帶有金屬光澤的綠色結晶體，又名鹼性綠、鹽基塊綠、孔雀綠，其既是殺真菌劑，又是染料，易溶於水，溶液呈藍綠色；
[0003]孔雀石綠的英文名稱為:MalachiteGreenoxalate (別名:Malachite Greenchloride ；N, N, Nj, Nj -TetramethylK -diaminotriphenylcarbenium chloride ；BasicGreen4)，CAS號:569_64_2，分子式:C23H25C1N2，分子量:364.92。孔雀石綠可用作治理魚類或魚卵的寄生蟲、真菌或細菌感染。用作抑菌劑或殺阿米巴原蟲劑；對脂鯉和鯰魚等海產動物來說，有高度毒性、高殘留等副作用。孔雀石綠中的化學功能團三苯甲烷可致癌，很多國家已經禁用，但仍有漁民在防治魚類感染真菌時使用，也有運輸商用作消毒，以延長魚類在長途販運中的存活時間。研究發現，孔雀石綠在魚內殘留時間長，且其具有高毒素、高殘留和致癌、致畸、致突變等副作用，鑑於此，許多國家均將孔雀石綠列為水產養殖禁用藥物。2002年5月中國農業部已將孔雀石綠列入《食品動物禁用的獸藥及其化合物清單》。
[0004]目前，檢測孔雀石綠的主要方法分別為肉眼辨別法，液相色譜法，酶聯免疫法和試紙條檢測法。肉眼檢測，不夠準確，缺乏執法依據；液相色譜法檢測速度慢，檢測成本高，技術要求必需是專業人員，特別是不能現場檢測，嚴重的影響了國家職能部門的執法力度和效率；利用具有高度專一性的抗體設計的孔雀石綠酶聯免疫法(ELISA)也是目前最常用的孔雀石綠檢測方法，該法適合在一般實驗室裡進行，檢測程序較多還需要特殊的讀盤儀器，得由專業技術人員執行，也不適合現場快速檢測；試紙條檢測法，適合現場快速檢測，但因靈敏度低且沒有同時進行陽性和陰性對照，容易造成假陽性或假陰性等缺點。

【發明內容】

[0005]本實用新型為解決上述公知技術中存在的問題而提供一種新型現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒。
[0006]本實用新型的目的是提供一種操作簡單，準確快速，靈敏度高，而且又能進行陽性和陰性對照檢測的現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒。
[0007]本實用新型現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒，包括一個測試條，示蹤液，陽性對照液，陰性對照液；所述的測試條含有多個反應槽，所述的反應槽是事先經孔雀石綠抗體包被，封閉液封閉過的；所述的示蹤液、陽性對照液，陰性對照液是裝在液滴瓶內；所述的示蹤液含有預標記的孔雀石綠能特異地與包被在檢測槽中的孔雀石綠抗體結合。
[0008]本實用新型現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒所採取的技術方案是:
[0009]一種新型現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒，其特徵是:檢測試劑盒包括測試條和液滴瓶；液滴瓶內裝有示蹤液，陽性對照液，陰性對照液，顯色液；測試條含有三個或以上反應槽，可用於同時檢測陽性對照，陰性對照和一個或一個以上的樣品；反應槽是經孔雀石綠抗體抗體包被，封閉液封閉過的；示蹤液含有預標記的孔雀石綠，能特異地與包被在檢測槽中的孔雀石綠抗體或結晶紫抗體結合。
[0010]本實用新型現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒還可以採用如下技術方案:
[0011]所述的現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒，其特徵是:檢測試劑盒還含有裝有顯色液的液滴瓶。
[0012]所述的現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒，其特徵是:檢測試劑盒還含有塑料吸管。
[0013]所述的現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒，其特點是:示蹤液含有預標記的孔雀石綠能直接或間接產生肉眼可見顏色的膠體金、鹼性磷酸酶或過氧化氫酶。
[0014]所述的現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒，其特點是:顯色液是示蹤液中的孔雀石綠標記酶的底物。
[0015]所述的現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒，其特點是:陽性對照液含孔雀石綠，所述孔雀石綠能與示蹤液中預標記的孔雀石綠競爭性地與包被在反應槽中的孔雀石綠抗體結合。
[0016]所述的現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒，其特點是:陰性對照液含有緩衝液，不含孔雀石綠。
[0017]本實用新型具有的優點和積極效果是:
[0018]現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒由於採用了本實用新型的技術方案，與現有技術相比，具有結構簡單，使用方便，不需要儀器就能檢測，檢測靈敏度比免疫層析試紙條高出十倍以上等優點。
[0019]本實用新型實現了在一次現場用免疫檢測實驗中，能同時測定樣品，陽性對照和陰性對照，避免了使用免疫層析試紙條時可能隱藏的假陰性和假失效的結果，因此，能更正確地界定檢測結果及有效性。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0020]圖1是本實用新型現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒結構示意圖。
[0021]圖中，1、測試條，2、示蹤液，3、陽性對照液，4、陰性對照液。
【具體實施方式】
[0022]為能進一步了解本實用新型的內容、特點及功效，茲例舉以下實施例，並配合附圖詳細說明如下:
[0023]參閱附圖1。
[0024]實施例1
[0025]一種新型現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒，包括測試條和液滴瓶；液滴瓶內裝有示蹤液，陽性對照液，陰性對照液；測試條有多個反應槽，反應槽是經孔雀石綠抗體包被，封閉液封閉過的；示蹤液含有膠體金預標記的孔雀石綠。
[0026]示蹤液中膠體金標記的孔雀石綠能特異性地與包被在反應槽中的孔雀石綠抗體口 ?[0027]陽性對照液含孔雀石綠能與示蹤液中膠體金標記的孔雀石綠競爭，消弱膠體金標記的孔雀石綠與包被在反應槽中的孔雀石綠抗體結合；
[0028]陰性對照液含有陰性緩衝液；陰性緩衝液中不含孔雀石綠。
[0029]本實施例的具體實施過程:
[0030]如圖1所示，一種新型現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒，包括:裝在塑料真空袋裡的4條測試條⑴和裝在液滴瓶裡的示蹤液(2)，陽性對照液(3)及陰性對照液⑷各I瓶。
[0031]測試條是成形塑膠條，每個測試條含有8個反應槽可用於同時測定陽性對照，陰性對照以及1-6個待測樣品。反應槽是事先經含l-10ng/ml孔雀石綠抗體的PBS緩衝液包被後，用2% BSA封閉液封閉過的。
[0032]示蹤液是膠體金預標記的孔雀石綠(10ng/ml)溶解在含I % BSA的PBS緩衝液。
[0033]陽性對照液是含0.5ng/ml孔雀石綠，溶解在含I % BSA的PBS緩衝液。
[0034]陰性對照液是含I % BSA的PBS緩衝液，不含孔雀石綠。
[0035]實施例2
[0036]一種新型現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒，包括一個測試條，示蹤液，陽性對照液，陰性對照液，顯色液和塑料吸管；測試條含有多個反應槽，所述的反應槽是事先經孔雀石綠抗體抗體包被，封閉液封閉過的；示蹤液含有預標記的孔雀石綠抗體。
[0037]本實施例的具體實施過程:
[0038]測試條製備:選擇具有固定形狀，含有可盛裝液體的多個反應槽，常溫常壓下化學性質穩定不與待測的樣品及檢測系統中的物質發生化學反應的成形板。所述的反應槽與蛋白類分子有高親和力。用IOOmM Tris-HCl (pH8)緩衝液將孔雀石綠抗體稀釋至0.l_30ug/ml，取100微升(每個槽)添加於測試條的槽中，靜置I小時或以上；洗槽後用150微升(每個槽)2%牛血清蛋白-PBS緩衝液封閉I小時或以上，再次洗槽後，於45度。C烘乾，用鋁箔袋真空包裝，置於冰箱備用。所述的孔雀石綠抗體可以是單克隆的孔雀石綠抗體也可以是多克隆的孔雀石綠抗體，所述的特異性抗體可以從市場購得也可以按公知的抗體製備方法來獲得。
[0039]示蹤液製備:將過氧化氫酶標記的孔雀石綠，用I %牛血清蛋白-PBS緩衝液釋至
0.01-5000ng/ml，無菌過濾後裝在液滴瓶裡，置於冰箱備用。
[0040]陽性對照液製備:所述的陽性對照液含孔雀石綠。將孔雀石綠用1%牛血清蛋白-PBS緩衝液釋成0.01-5ng/ml，無菌過濾後裝在液滴瓶裡，置於冰箱備用。
[0041]陰性對照液製備:所述的陰性對照液含有I %牛血清蛋白-PBS緩衝液，該陰性緩衝液不含孔雀石綠，無菌過濾後裝在液滴瓶裡，置於冰箱備用。
[0042]顯色液製備:將TMB溶解於用50mM檸檬酸緩衝液(pH4.5)，調濃度至0.2mg/ml，再加過氧化氫至0.03%，無菌過濾後裝在避光液滴瓶裡，置於冰箱備用。
[0043]本實施例新型現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒的檢測過程，包含下述幾個步驟:
[0044]I)加樣反應:取一測試條，給每個反應槽作記號，如:反應槽1-8 ;在各反應槽中加入3滴示蹤液，再分別在反應槽I和反應槽2中加入2滴陽性對照液和2滴陰性對照液，用不同的塑料吸管分別吸取不同待測樣品，在反應槽3-8中分別滴加2滴待測樣品，輕晃混勻後室溫下靜置5-30分鐘。
[0045]2)洗滌:倒掉反應槽中液體並用過濾水(或自來水)衝洗反應槽5次或以上；每次衝洗後，將反應槽倒向摔在吸水紙(如衛生紙)上以除去反應槽內水珠。
[0046]3)顯色:在每個反應槽內加入6滴顯色液，輕晃測試條並觀察反應槽中顏色變化，直至陰性反應槽內有清晰的顏色出現，
[0047]4)結果分析:比較各反應槽(陽性對照，陰性對照和各樣品)的顏色深淺程度以確定該被檢樣品是陽性還是陰性。
[0048]由於陽性對照或陽性樣品中孔雀石綠能與示蹤液中預標記的孔雀石綠相互競爭地與反應槽上孔雀石綠抗體結合，而陰性對照不能；因此，正常情況下陽性樣品不顯色，陰性顯色。如果被檢樣品的顏色明顯比陰性對照淺，說明該被檢樣品為陽性；如果被檢樣品的顏色與陰性對照相同或更深說明該被檢樣品為陰性；如果被檢樣品的顏色比陰性對照稍淺，比陽性對照深說明該被檢樣品為陽性，其孔雀石綠濃度低於陽性對照；如果被檢樣品的顏色比陽性對照更淺，說明該被檢樣品為強陽性；如果陽性對照的顏色與陰性對照相同或更深說明該實驗失敗。
[0049]本實施例具有結構簡單，快捷方便，檢測靈敏度高等特點，實現在一次實驗中同時測定樣品，陽性對照和陰性對照，從而能正確地界定檢測結果和有效性。
【權利要求】
1.一種新型現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒，其特徵是:所述檢測試劑盒包括測試條和液滴瓶；所述測試條含有經孔雀石綠抗體包被且經封閉液封閉過的反應槽，所述液滴瓶包括:示蹤液滴瓶、陽性對照液滴瓶和陰性對照液滴瓶。
2.根據權利要求1所述的現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒，其特徵是:測試條含有三個或以上反應槽，可用於同時檢測陽性對照，陰性對照和一個或一個以上的樣品。
3.根據權利要求1所述的現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒，其特徵是:所述檢測試劑盒還含有裝有顯色液的液滴瓶。
4.根據權利要求1所述的現場用高靈敏度孔雀石綠速測試劑盒，其特徵是:所述檢測試劑盒還含有塑料吸管。
【文檔編號】G01N21/78GK203502353SQ201320034175
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年1月23日 優先權日:2013年1月23日
【發明者】鄒潮, 關靖 申請人:鄒潮, 關靖