一種灰樹花多糖提取方法
2023-05-21 02:23:36 1
一種灰樹花多糖提取方法
【專利摘要】本發明涉及醫藥保健領域，特別是涉及一種灰樹花多糖提取方法。本發明提供一種灰樹花多糖提取方法，包括如下步驟：使用酸性水溶液對灰樹花原料進行浸提，浸提完畢後固液分離；使用去離子水對步驟1所得固相物進行浸提，浸提完畢後固液分離；使用鹼性水溶液對步驟2所得固相物進行浸提，浸提完畢後固液分離；將所得的液相物合併，減壓濃縮、透析脫鹽後，噴霧乾燥，即得灰樹花提取物。本發明所提供的灰樹花多糖的提取工藝，可以提高灰樹花提取物的提取收率接近20%，灰樹花多糖的提取率也大大提高，特別是有效成分鹼溶性多糖和酸溶性多糖的提取率大幅度提高。
【專利說明】一種灰樹花多糖提取方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及醫藥保健領域，特別是涉及一種灰樹花多糖提取方法。
【背景技術】
[0002] 灰樹花，（拉丁名Grifola frondosa)，又名貝葉多孔菌、雲蕈、慄子蘑、慄蘑、千佛 菌、蓮花菌、甜瓜板、奇果菌、葉奇果菌，它的頂端類似于波紋而沒有菌傘，通常集簇長在橡 樹的根部，看起來像一群飛舞的蝴蝶。灰樹花最重可達到20千克，因此有"蘑菇之王"之稱。 灰樹花是以義大利人發現的一種蕈類命名的。在亞洲地區，灰樹花是頗受人們歡迎的烹飪 及藥用蘑菇，這不僅因為它含有豐富的蛋白質、碳水化合物、纖維、維生素、多種微量元素和 生物素，有利於人體健康，美味可口也是重要原因之一。美國國家癌症研究院早在1992年 就已證實，灰樹花的萃取物有抵抗愛滋病病毒的功效。日本的難波宏彰博士除在實驗中發 現灰樹花具有抗HIV的作用外，還發現灰樹花對乳腺癌、肺癌、肝癌也有療效；還可改善腫 瘤的化學療法帶來的種種不良反應，如缺乏食慾、嘔吐、噁心、頭髮脫落以及白細胞減少等 等；還可緩解疼痛。此外，研究還證實灰樹花同時具有以下幾種功效：（1)減少胰島素抵抗， 增強人體對胰島素的敏感度，有助於控制血糖；（2)抑制脂肪細胞堆積；（3)降低血壓；（4) 增強免疫力。
[0003] 灰樹花多糖是灰樹花的一種多糖提取物。灰樹花富含鋅、鉀、鈣和錳等礦物質、多 種維生素（B2、D2和煙酸)、纖維素和多種胺基酸。1980年代，人們發現灰樹花的主要活性成 分可以增強免疫系統，是一種多孔菌目中特有的成分--蛋白質連結的多糖化合物P _葡 聚糖。
[0004] 灰樹花還是引人注目的抗癌藥源，一方面，其較高的硒含量有抗禦癌症的作用，尤 其是所含灰樹花多糖（Grifolan),以0 -葡聚糖（glucan)為主，其中抗癌活性最強，帶6條 支鏈的0-(1，3)-葡聚糖佔相當大的比重，據說比已經面市的香燕多糖（Lentinan，日本的 PSK)、雲芝多糖(上海的PSP)等有更強的抗癌能力；同時它又是極好的免疫調節劑。作為中 藥，灰樹花和豬苓等效，可治小便不利、水腫、腳氣、肝硬化腹水及糖尿病等，是非常寶貴的 藥用真菌。
[0005] 據文獻報導，多糖一般是指聚合度超過以上的多聚糖，其分子量通常在數萬至數 百萬，多糖純品實質是一定分子量範圍的均一組分。多糖類抗腫瘤作用與其化學結構高度 相關，真菌多糖分子的立體結構對其活性的影響很大，其中一重或三重螺旋結構所佔比例 較多的活性顯著。灰樹花多糖的抗腫瘤活性與其分子量和分支度密切相關，分支度高而置 換率低或分支度低而置換率高時，抗腫瘤活性均消失。多糖溶解性越好，活性越強。活性表 達的分子量範圍是10000-2000000如果分子量在10000以下，那麼即使是同樣的重複結構 也沒有活性。科學家Nanba (1987)從灰樹花中提取到的純化灰樹花多糖D-組分具有很強 的生物活性，這是一種高度分支化的蛋白聚糖，為酸不溶性、鹼溶性熱水提取物，分子量約 為1400000,蛋白含量為30%的，這是一種具有1-3支鏈的￠-(1,6)-葡聚糖。目前灰樹花 D-組分是目前日本和美國研究和開發的重點。而這種D-組分的葡聚糖是鹼溶性的，一般水 提取物不能提取出來。
【發明內容】
[0006] 鑑於以上所述現有技術的缺點，為了能夠充分提取灰樹花的全部多糖有效成分， 且提取的成分又能夠全部被人體吸收，本發明發明人經過多年研究，提出了一種仿生提取 法，用於解決現有技術中的問題。這種方法的特點是，先用酸性水提取一次，酸性水是模仿 人體胃液的PH值3-4,再用水提取一次後，再用鹼性水提取一次，鹼性水是模仿人體腸液的 PH值8-10,三次提取液混合，提取液濃縮，濃縮液透析脫鹽後，噴霧乾燥。
[0007] 為實現上述目的及其他相關目的，本發明第一方面提供一種灰樹花多糖提取方 法，包括如下步驟：
[0008] (1)使用酸性水溶液對灰樹花原料進行浸提，浸提完畢後固液分離；
[0009] (2)使用去離子水對步驟1所得固相物進行浸提，浸提完畢後固液分離；
[0010] (3)使用鹼性水溶液對步驟2所得固相物進行浸提，浸提完畢後固液分離；
[0011] (4)將步驟1、2、3所得的液相物合併，減壓濃縮、透析脫鹽後，噴霧乾燥，即得灰樹 花提取物。
[0012] 優選的，所述步驟1中，所述酸性水溶液與灰樹花原料的重量比為9. 5-10. 5 :1。
[0013] 優選的，所述步驟1中，所述酸性水溶液為硫酸水溶液。
[0014] 更優選的，所述硫酸水溶液的pH值為3-4。
[0015] 優選的，所述步驟1中，浸提的具體條件為，於90-KKTC下煎煮1. 4-1. 6小時。
[0016] 優選的，所述步驟1、2、3中，固液分離的具體方法為孔徑100目濾過。
[0017] 優選的，所述步驟2中，去離子水與灰樹花原料的重量比為7. 5-8. 5 :1。
[0018] 優選的，所述步驟2中，浸提的具體條件為，於90-KKTC下煎煮1. 4-1. 6小時。
[0019] 優選的，所述步驟3中，所述鹼性水溶液與灰樹花原料的重量比為9. 5-10. 5 :1。
[0020] 優選的，所述步驟3中，所述鹼性水溶液為氫氧化鈉水溶液。
[0021] 更優選的，所述氫氧化鈉水溶液的pH值為8-9。
[0022] 優選的，所述步驟3中，浸提的具體條件為，於90-100°C下煎煮1. 4-1. 6小時。
[0023] 優選的，所述步驟4中，減壓濃縮的具體條件為：真空度0.05-0. 09MPa，溫度為 85-65。。。
[0024] 優選的，所述步驟4中，減壓濃縮時，液體濃縮至比重1. 05 - 1. 10 (60°C)。
[0025] 所述比重指物質乾燥完全密實的重量和4°C時同體積純水的重量的比值，可通過 比重計直接測量。
[0026] 優選的，所述步驟4中，透析脫鹽的具體方法為：將減壓濃縮所得的濃縮液裝入的 透析膜袋子中，放入流水透析池中，透析脫鹽至溶液中性。
[0027] -般需要透析24小時左右以脫去小分子物質。
[0028] 優選的，所述噴霧乾燥的具體條件為：進風溫度控制在172_178°C，出風溫度控制 在 72-78。。。
[0029] 濃縮液噴霧乾燥應在24小時內完成。
[0030] 本發明第二方面提供所述灰樹花多糖提取方法在灰樹花多糖製備領域的應用。
[0031] 本發明第三方面提供一種灰樹花多糖，由所述灰樹花多糖提取方法所製備。
[0032] 本發明所提供的灰樹花多糖的提取工藝，可以提高灰樹花提取物的提取收率接近 20%，灰樹花多糖的提取率也大大提高，特別是有效成分鹼溶性多糖和酸溶性多糖的提取率 大幅度提高。本發明為仿生提取法，模仿人體的消化道環境的酸鹼度，先後用模仿人體胃液 的pH值3-4的水溶液酸提，再用中性水提，再用模仿人體腸液的pH值8-10的水溶液鹼提， 三次提取液混合，提取液濃縮，濃縮液透析脫鹽後，噴霧乾燥。所得的提取物能夠將灰樹花 中可供人體吸收的組分充分提取，極大的提高了灰樹花的提取效率和應用價值。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0033] 圖1顯示為本發明工藝流程圖
【具體實施方式】
[0034] 以下通過特定的具體實例說明本發明的實施方式，本領域技術人員可由本說明書 所揭露的內容輕易地了解本發明的其他優點與功效。本發明還可以通過另外不同的具體實 施方式加以實施或應用，本說明書中的各項細節也可以基於不同觀點與應用，在沒有背離 本發明的精神下進行各種修飾或改變。
[0035] 在進一步描述本發明【具體實施方式】之前，應理解，本發明的保護範圍不局限於下 述特定的具體實施方案；還應當理解，本發明實施例中使用的術語是為了描述特定的具體 實施方案，而不是為了限制本發明的保護範圍；在本發明說明書和權利要求書中，除非文中 另外明確指出，單數形式"一個"、"一"和"這個"包括複數形式。
[0036] 當實施例給出數值範圍時，應理解，除非本發明另有說明，每個數值範圍的兩個端 點以及兩個端點之間任何一個數值均可選用。除非另外定義，本發明中使用的所有技術和 科學術語與本【技術領域】技術人員通常理解的意義相同。除實施例中使用的具體方法、設備、 材料外，根據本【技術領域】的技術人員對現有技術的掌握及本發明的記載，還可以使用與本 發明實施例中所述的方法、設備、材料相似或等同的現有技術的任何方法、設備和材料來實 現本發明。
[0037] 除非另外說明，本發明中所公開的實驗方法、檢測方法、製備方法均採用本技術 領域常規的分子生物學、生物化學、染色質結構和分析、分析化學、細胞培養、重組DNA技 術及相關領域的常規技術。這些技術在現有文獻中已有完善說明，具體可參見Sambrook 等 MOLECULAR CLONING :A LABORATORY MANUAL，Second edition，Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989and Third edition, 2001 ;Ausubel 等，CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY,John ffiley&Sons,New York,1987and periodic updates ；the series METHODS IN ENZYM0L0GY,Academic Press,San Diego ；ffolffe,CHROMATIN STRUCTURE AND FUNCTION, Third edition, Academic Press, San Diego, 1998 ；METH0DS IN ENZYM0L0GY, Vol.304,Chromatin(P. M. Wassarman and A. P. ffolffe,eds.) ,Academic Press,San Diego, 1999 ;和 METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, Vol. 119, Chromatin Protocols(P.B. Becker, ed. )Humana Press，Totowa，1999 等。
[0038] 實施例I
[0039] 稱取灰樹花子實體原料300kg，粗碎，按如下步驟製備灰樹花多糖：
[0040] a)煎煮提取：第一次加灰樹花原料重量10倍量的硫酸水溶液，所述硫酸水溶液使 用食品加工助劑硫酸調製，硫酸水溶液的pH值為3-4,95°C下煎煮I. 5小時後，濾過(孔徑 100目），得濾液1。所得固相物加去離子水8倍量，95°C下煎煮提取1. 5小時，濾過(孔徑 100目），得濾液2 ;所得固相物加灰樹花原料重量10倍量的氫氧化鈉水溶液，使用食品加工 助劑氫氧化鈉調製，所述氫氧化鈉水溶液的PH值8-9,95°C下煎煮提取1. 5小時，濾過(孔徑 100目），得濾液3,合併三次提取液。
[0041] b)提取液濃縮：按照《外循環真空濃縮回收機使用、維護、保養規程》、《藥液濃縮崗 位操作規程》操作，開啟真空泵及循環水冷卻泵，待真空度升至0. 〇4MPa時，向蒸發器中加入 提取液至液面高度在下視鏡中部，繼續抽真空，待真空度至〇. 〇5MPa時，打開蒸汽開關，控 制真空度在0. 06-0. 08MPa之間、溫度65 - 85°C之間，保持液位在視鏡範圍內。
[0042] c)當液體濃縮至比重為1. 10時（60°C)，將濃縮液裝入500D的透析膜袋子中，放 入流水透析池中，透析脫鹽，需要透析24小時脫去小分子物質，且至溶液為中性。
[0043] d)對所得濃縮液進行噴霧乾燥，進風溫度控制在172_178°C，出風溫度控制在 72-78°C。收集灰樹花提取物裝入PE袋中，稱重，得到灰樹花多糖成品119.4kg。
[0044] 對所得的灰樹花多糖成品進行組分分析，其結果如表1所示。
[0045] 實施例2
[0046] 稱取灰樹花子實體原料300kg，粗碎，按如下步驟製備灰樹花多糖：
[0047] a)煎煮提取：第一次加灰樹花原料重量10倍量的硫酸水溶液，所述硫酸水溶液使 用食品加工助劑硫酸調製，硫酸水溶液的PH值為3-4, KKTC下煎煮1. 4小時後，濾過(孔徑 100目），得濾液1。所得固相物加去離子水8倍量，KKTC下煎煮提取1. 4小時，濾過(孔徑 100目），得濾液2 ;所得固相物加灰樹花原料重量10倍量的氫氧化鈉水溶液，使用食品加工 助劑氫氧化鈉調製，所述氫氧化鈉水溶液的PH值8-9,100°C下煎煮提取1. 4小時，濾過(孔 徑100目），得濾液3,合併三次提取液。
[0048] b)提取液濃縮：按照《外循環真空濃縮回收機使用、維護、保養規程》、《藥液濃縮崗 位操作規程》操作，開啟真空泵及循環水冷卻泵，待真空度升至〇. 〇4MPa時，向蒸發器中加入 提取液至液面高度在下視鏡中部，繼續抽真空，待真空度至〇. 〇5MPa時，打開蒸汽開關，控 制真空度在0. 06-0. 08MPa之間、溫度65 - 85°C之間，保持液位在視鏡範圍內。
[0049] c)當液體濃縮至比重為1. 05時（60°C)，將濃縮液裝入500D的透析膜袋子中，放 入流水透析池中，透析脫鹽，需要透析24小時脫去小分子物質，且至溶液為中性。
[0050] d)對所得濃縮液進行噴霧乾燥，進風溫度控制在172-178°C，出風溫度控制在 72-78°C。收集灰樹花提取物裝入PE袋中，稱重，得到灰樹花多糖成品115.6kg。
[0051] 對所得的灰樹花多糖成品進行組分分析，其結果如表1所示。
[0052] 實施例3
[0053] 稱取灰樹花子實體原料300kg，粗碎，按如下步驟製備灰樹花多糖：
[0054] a)煎煮提取：第一次加灰樹花原料重量10倍量的硫酸水溶液，所述硫酸水溶液使 用食品加工助劑硫酸調製，硫酸水溶液的PH值為3_4,90°C下煎煮1. 6小時後，濾過(孔徑 1〇〇目），得濾液1。所得固相物加去離子水8倍量，90°C下煎煮提取1. 6小時，濾過(孔徑 100目），得濾液2 ;所得固相物加灰樹花原料重量10倍量的氫氧化鈉水溶液，使用食品加工 助劑氫氧化鈉調製，所述氫氧化鈉水溶液的PH值8-9,90°C下煎煮提取1. 6小時，濾過(孔徑 100目），得濾液3,合併三次提取液。
[0055] b)提取液濃縮：按照《外循環真空濃縮回收機使用、維護、保養規程》、《藥液濃縮崗 位操作規程》操作，開啟真空泵及循環水冷卻泵，待真空度升至〇. 〇4MPa時，向蒸發器中加入 提取液至液面高度在下視鏡中部，繼續抽真空，待真空度至〇. 〇5MPa時，打開蒸汽開關，控 制真空度在0. 06-0. 08MPa之間、溫度65 - 85°C之間，保持液位在視鏡範圍內。
[0056] c)當液體濃縮至比重為1. 10時（60°C)，將濃縮液裝入500D的透析膜袋子中，放 入流水透析池中，透析脫鹽，需要透析24小時脫去小分子物質，且至溶液為中性。
[0057] d)對所得濃縮液進行噴霧乾燥，進風溫度控制在172_178°C，出風溫度控制在 72-78°C。收集灰樹花提取物裝入PE袋中，稱重，得到灰樹花多糖成品118. 2kg。
[0058] 對所得的灰樹花多糖成品進行組分分析，其結果如表1所示。
[0059] 對比例
[0060] 稱取灰樹花子實體原料300kg，粗碎，按如下步驟製備灰樹花多糖：
[0061] a)煎煮提取：第一次加灰樹花原料重量10倍量的去離子水，95°C下煎煮1. 5小時 後，濾過(孔徑100目），得濾液1。所得固相物加去離子水8倍量，95°C下煎煮提取1. 5小 時，濾過(孔徑100目），得濾液2 ;所得固相物加灰樹花原料重量10倍量的去離子水，95°C 下煎煮提取1. 5小時，濾過(孔徑100目），得濾液3,合併三次提取液。
[0062] b)提取液濃縮：按照《外循環真空濃縮回收機使用、維護、保養規程》、《藥液濃縮崗 位操作規程》操作，開啟真空泵及循環水冷卻泵，待真空度升至〇. 〇4MPa時，向蒸發器中加入 提取液至液面高度在下視鏡中部，繼續抽真空，待真空度至〇. 〇5MPa時，打開蒸汽開關，控 制真空度在0. 06-0. 08MPa之間、溫度65 - 85°C之間，保持液位在視鏡範圍內。
[0063] c)當液體濃縮至比重為1. 10時（60°C)，將濃縮液裝入500D的透析膜袋子中，放 入流水透析池中，透析脫鹽，需要透析24小時脫去小分子物質，且至溶液為中性。
[0064] d)對所得濃縮液進行噴霧乾燥，進風溫度控制在172-178°C，出風溫度控制在 72-78°C。收集灰樹花提取物裝入PE袋中，稱重，得到灰樹花多糖成品69kg。
[0065] 對所得的灰樹花多糖成品進行組分分析，其結果如表1所示。
[0066] 表1(均為重量百分比）
[0067]
【權利要求】
1. 一種灰樹花多糖提取方法，包括如下步驟： (1) 使用酸性水溶液對灰樹花原料進行浸提，浸提完畢後固液分離； (2) 使用去離子水對步驟1所得固相物進行浸提，浸提完畢後固液分離； (3) 使用鹼性水溶液對步驟2所得固相物進行浸提，浸提完畢後固液分離； (4) 將步驟1、2、3所得的液相物合併，減壓濃縮、透析脫鹽後，噴霧乾燥，即得灰樹花提 取物。
2. 如權利要求1所述的一種灰樹花多糖提取方法，其特徵在於，所述步驟1中，所述酸 性水溶液與灰樹花原料的重量比為9. 5-10. 5 :1。
3. 如權利要求1所述的一種灰樹花多糖提取方法，其特徵在於，所述步驟1中，所述酸 性水溶液為硫酸水溶液。
4. 如權利要求1所述的一種灰樹花多糖提取方法，其特徵在於，所述步驟1中，浸提的 具體條件為，於90-100°C下煎煮1. 4-1. 6小時。
5. 如權利要求1所述的一種灰樹花多糖提取方法，其特徵在於，所述步驟2中，去離子 水與灰樹花原料的重量比為7. 5-8. 5 :1。
6. 如權利要求1所述的一種灰樹花多糖提取方法，其特徵在於，所述步驟2中，浸提的 具體條件為，於90-100°C下煎煮1. 4-1. 6小時。
7. 如權利要求1所述的一種灰樹花多糖提取方法，其特徵在於，所述步驟3中，所述鹼 性水溶液與灰樹花原料的重量比為9. 5-10. 5 :1。
8. 如權利要求1所述的一種灰樹花多糖提取方法，其特徵在於，所述步驟3中，所述鹼 性水溶液為氫氧化鈉水溶液。
9. 如權利要求1所述的一種灰樹花多糖提取方法，其特徵在於，所述步驟3中，浸提的 具體條件為，於90-100°C下煎煮1. 4-1. 6小時。
10. 如權利要求1-9任一權利要求所述的灰樹花多糖提取方法在灰樹花多糖製備領域 的應用。
11. 一種灰樹花多糖，由權利要求1-9任一權利要求所述的灰樹花多糖提取方法所制 備。
【文檔編號】C08B37/00GK104277129SQ201310270565
【公開日】2015年1月14日 申請日期:2013年7月1日 優先權日:2013年7月1日
【發明者】周伯揚 申請人:周伯揚