利用菇渣發酵綠色木黴的生產工藝的製作方法
2023-05-21 09:46:56
專利名稱：利用菇渣發酵綠色木黴的生產工藝的製作方法
技術領域：
本發明是一種生物菌劑的製備方法，屬於農業應用微生物技術領域。
背景技術：
本發明專利是為解決目前化學農藥的頻繁應用，農藥殘留在蔬菜和土壤中不斷積累，而應用綠色木黴對多種真菌土傳病害具有明顯的預防作用。利用有機添加物為載體大量繁殖木黴菌株，進一步鞏固兩者的協同作用，不僅補充土壤養分，增強抑菌效果，而且可以提高拮抗菌在土壤中的生存繁殖能力，減少農藥在土壤中的殘留。
木黴菌對土傳病原菌的生物防治國內外已有大量報導，許多菌株田間生產防效並不理想，原因之一是直接引入客土的拮抗微生物不能很好地在土壤中定殖並成為優勢種群。有機添加物的施入在某種程度上起到「接種」作用，有機物本身已帶有大量微生物，其帶入的活性有機碳源又是微生物增殖的主要原因，因此利用有機添加物培養拮抗菌，不僅可以鞏固拮抗菌在土壤中的定殖，而且增強了抑菌效果。1991年Ophnob報導，把木黴製劑與有機肥同時施用，能使土壤微生物活性明顯提高。1999年劉瓊光報導利用拮抗細菌和土壤添加劑同時施入土壤對菸草青枯病的防治效果，顯著好於兩種單獨施用的效果。1994年上海農科院植保所周新根報導利用由蠶豆粉、無機鹽等製成的「MX」有機添加物，滅菌後分別培養三種拮抗菌株，1％的添加量對辣椒疫病、番茄立枯病、猝倒病具有很好的防效，顯著高於單用。在滅菌土壤中培養4周後拮抗菌的種群密度比單獨施用拮抗菌的處理高50-100倍，且拮抗菌存活時間較長。本研究擬採用一些土傳病害的拮抗木黴菌為拮抗菌株，利用合成有機物為載體大量繁殖。進一步鞏固兩者的協同作用，不僅補充土壤養分，增強抑菌效果，而且可以激活土壤原有拮抗菌的作用。
菇渣是生產食用菌後的下腳料，其含有較高的蛋白質和其他營養成分，可以為微生物生長提供良好營養，木黴菌是食用菌生產過程中主要的汙染菌種，適宜其生長。同時發酵的菇渣可以作為肥料，改良土壤。因此採用菇渣生產木黴菌不僅可以降低生產成本，而且可以有效處理廢棄物，提高木黴菌對土傳病害的防治效果。
發明內容
本發明提供一種利用菇渣生產木黴菌劑的製備方法。包括對多種土傳病害具有較強的拮抗作用的綠色木黴菌。斜面菌種保存，平皿內活化培養，三角瓶液體發酵，種子罐混合發酵後，以菇渣、麥麩等吸附進行固體發酵，乾燥後而製成本菌劑。
1.菌株 用於防治蔬菜土傳病害，從土壤中分離篩選的綠色木黴菌株(Trichoderma viride，編號Tr9801)。
2.原料處理選擇無黴變的菇渣曬乾後粉碎成80目粉狀備用。
3.液體發酵將斜面保存的菌種用PDA培養基活化，接種於500ml三角瓶內裝液體培養基100ml，26℃，180r振蕩培養，3～5d，為液體菌種。以10％(V/V)接種量加入種子發酵罐內發酵培養，發酵溫度25～28℃，通風攪拌，發酵72小時。液體培養基為0.5～1％酵母粉，2～3％澱粉，1％豆漿，0.2～0.5％CaCO3，0.03～0.05％KH2PO4，0.01～0.02％MgSO4，PH為5.5～6.5。菌液導出時孢子含量107～108cfu/ml。
4.固體發酵高壓滅菌後，向固體培養基內加入3～5倍重量的孢子懸浮液，於25～28℃，培養7～10天。固體培養基菇渣90.5％，麩皮5％，2％蔗糖，1％磷酸二氫鉀，1％硫酸鎂，0.4％碳酸鈣，0.1％尿素。
5.培養好的物料在低於50℃的條件下風乾，粉碎，包裝。
本發明的木黴菌株對多種蔬菜的土傳病害如猝倒病、立枯病及枯萎病等具有很好的防治效果，對植株生長具有明顯的促進作用。利用菇渣為營養載體大量繁殖木黴菌株，進一步鞏固兩者的協同作用，不僅補充土壤養分，增強抑菌效果，而且可以提高木黴菌在土壤中的生存繁殖能力，且存活時間較長，減少農藥在土壤中的殘留。本發明的發酵工藝簡單，易於控制，成本低廉。
具體實施例方式
原料處理選擇無黴變的菇渣曬乾後粉碎成80目粉狀備用。
液體培養500ml三角瓶內裝液體培養基100ml，121℃，20分鐘。晾涼後，接種木黴孢子懸浮液10ml，26℃，180r振蕩培養，3～5d，得到液體菌種。以10％(V/V)接種量加入種子發酵罐內發酵培養，發酵溫度25～28℃，通風攪拌，發酵72小時，菌液導出時孢子含量107～108cfu/ml。液體培養基1L5～10克酵母粉，20～30克澱粉，10克豆漿，2～5克CaCO3，0.3～0.5克KH2PO4，0.1～0.2克MgSO4，PH為5.5～6.5。
固體發酵按一定比例配製培養基，滅菌121℃，30分鐘，冷卻後固體培養基放入發酵槽內加入3～5倍重量的液體孢子發酵液，攪拌均勻，於25～28℃，培養7～10天。固體培養基1kg菇渣905克，麩皮50克，20克蔗糖，10克磷酸二氫鉀，10克硫酸鎂，4克碳酸鈣，1克尿素，含水量60％。
培養好的物料在低於50℃的條件下風乾，粉碎，包裝。其孢子量為107～108cfu/g。
權利要求
1.一種木黴菌劑的製備方法，利用菇渣生產木黴菌劑的液固兩相法發酵工藝。其特徵在於，該生產方法是以液固兩相法結合，利用菇渣為生產原料進行固態發酵生產木黴菌。
2.權利要求1所述的木黴菌生產方法，其特徵在於，木黴菌種為綠色木黴(Trichoderma viride，編號為Tr9801)。
3.權利要求1所述的木黴菌生產方法，其特徵在於，原料處理，選擇無黴變的菇渣曬乾後粉碎成80目粉狀備用。
4.權利要求1所述的木黴菌生產方法，其特徵在於，液體發酵，液體培養基為0.5～1％酵母粉，2～3％澱粉，1％豆漿，0.2～0.5％CaCO3，0.03～0.05％KH2PO4，0.01～0.02％MgSO4，PH為5.5～6.5。先在500ml三角瓶內裝液體培養基100ml，26℃，180r振蕩培養，3～5d，為液體菌種。以10％(V/V)接種量加入種子發酵罐內發酵培養，發酵溫度25～28℃，通風攪拌，發酵72小時。
5.權利要求1所述的木黴菌生產方法，其特徵在於，固體發酵，固體培養基菇渣90.5％，麩皮5％，2％蔗糖，1％磷酸二氫鉀，1％硫酸鎂，0.4％碳酸鈣，0.1％尿素。高壓滅菌30～40分鐘，物料冷卻後接入加入3～5倍重量的權利要求4的發酵液，攪拌均勻，於25～28℃，培養7～10天。
6.培養好的物料在低於50℃的條件下風乾，粉碎，包裝。
全文摘要
本發明屬於農業應用微生物技術領域。為解決目前化學農藥的頻繁應用，農藥殘留在蔬菜和土壤中不斷積累，而應用生物製劑綠色木黴對多種真菌土傳病害具有明顯的預防作用，從而制定的一種產孢量大、發酵時間短的生產工藝。技術要點是利用菇渣為原料，液固兩相法發酵生產菌劑。原料易得，成本低廉，工藝簡單。生產的菌劑不僅預防土傳病害，而且可以促進植物生長。廣泛應用於連作重茬嚴重的保護地蔬菜生產引起的土傳病害預防和防治，還可以作為蔬菜育苗的基質，培育壯苗。
文檔編號C12R1/885GK101063088SQ20071005718
公開日2007年10月31日 申請日期2007年4月24日 優先權日2007年4月24日
發明者郝永娟, 王正祥, 王萬立, 劉春豔, 王勇, 楊秀榮 申請人:天津市植物保護研究所