一種用於魚類基因組dna提取的魚鰭組織的製備方法
2023-04-28 08:31:21 3
一種用於魚類基因組dna提取的魚鰭組織的製備方法
【專利摘要】一種用於魚類基因組DNA提取的魚鰭組織的製備方法，它涉及一種用於基因組DNA提取的動物組織的製備方法。它要解決目前魚類魚鰭組織樣品的製備方法對保存條件要求高、不適於野外採樣和不方便攜帶的問題。方法：一、採集新鮮魚鰭組織；二、將魚鰭組織平整置於濾紙上，用另一張濾紙覆蓋；三、將用濾紙覆蓋的魚鰭組織放於陰涼通風處，直至樣品完全乾燥；四、將樣品室溫防潮保存。本發明中方法製備的魚類魚鰭組織樣品可在常溫下長時間保存，無需低溫環境，減少了佔用的空間，降低了保存的成本，操作過程簡潔，樣品便於攜帶，尤其在樣品數量較大的情況下，即可減少工作量，體高工作效率，又同時保證了實驗質量。
【專利說明】—種用於魚類基因組DNA提取的魚鰭組織的製備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種用於基因組DNA提取的動物組織的製備方法。
【背景技術】
[0002]魚類魚鰭組織中有上皮細胞、骨細胞等細胞組織，含有足夠量的基因組DNA，可以用於魚類基因組DNA的提取。
[0003]目前，對魚類用於基因組DNA提取的魚鰭組織樣品在採集後，為了抑制內源核酸酶的活性，防止DNA被降解，一般選擇用95%乙醇固定、在低溫條件或直接在液氮中保存。由於液氮和高濃度乙醇都屬禁運品，上述的保存方法，對保存的條件要求較高，不適合野外操作，使樣品在採集後不便於攜帶。
【發明內容】
[0004]本發明是要解決目前魚類魚鰭組織樣品的製備方法對保存條件要求高、不適於野外採樣和不方便攜帶的問題，而提供一種用於魚類基因組DNA提取的魚鰭組織的製備方法。
[0005]用於魚類基因組DNA提取的魚鰭組織的製備方法，按以下步驟進行:
[0006]一、採集新鮮魚鰭組織；
·[0007]二、將魚鰭組織平整置於濾紙上，用另一張濾紙覆蓋；
[0008]三、將用濾紙覆蓋的魚鰭組織放於陰涼通風處，直至樣品完全乾燥；
[0009]四、將樣品室溫防潮保存，即完成用於魚類基因組DNA提取的魚鰭組織的製備。
[0010]本發明中方法製備的魚類魚鰭組織樣品可在常溫下長時間保存，無需低溫環境，減少了佔用的空間，降低了保存的成本，操作過程簡潔，樣品便於攜帶，尤其在樣品數量較大的情況下，即可減少工作量，體高工作效率，又同時保證了實驗質量。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0011]圖1是鏡鯉、施氏鱘、虹鱒的基因組DNA用0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測結果的電泳圖，其中M為Marker DL2000,1-3為鏡鯉，4_6為施氏鱘，7_9為虹鱒；
[0012]圖2是利用弓丨物HLJ360對鏡鯉進行PCR擴增，得到的擴增圖譜；
[0013]圖3是利用弓丨物HLJE222對鏡鯉進行PCR擴增，得到的擴增圖譜；
[0014]圖4是利用引物HLJSX210對施氏鱘進行PCR擴增，得到的擴增圖譜；
[0015]圖5是利用引物HLJSX215對施氏鱘進行PCR擴增，得到的擴增圖譜；
[0016]圖6是利用弓丨物AF346679對虹鱒進行PCR擴增，得到的擴增圖譜；
[0017]圖7是利用引物AY039634對虹鱒進行PCR擴增，得到的擴增圖譜。
【具體實施方式】
[0018]本發明技術方案不局限於以下所列舉【具體實施方式】，還包括各【具體實施方式】見的任意組合。
[0019]【具體實施方式】一:本實施方式用於魚類基因組DNA提取的魚鰭組織的製備方法，按以下步驟進行:
[0020]一、採集新鮮魚鰭組織；
[0021]二、將魚鰭組織平整置於濾紙上，用另一張濾紙覆蓋；
[0022]三、將用濾紙覆蓋的魚鰭組織放於陰涼通風處，直至樣品完全乾燥；
[0023]四、將樣品室溫防潮保存，即完成用於魚類基因組DNA提取的魚鰭組織的製備。
[0024]本實施方式中的方法對用於魚類基因組DNA提取的魚鰭組織的製備具有操作過程簡潔的特點，尤其在樣品數量較大的情況下，即可減少工作量，體高工作效率，又同時保證了實驗質量。
[0025]【具體實施方式】二:本實施方式與【具體實施方式】一不同的是:步驟三中還可採用矽膠乾燥劑使魚鰭組織的乾燥脫水。其它與【具體實施方式】一相同。
[0026]為驗證本發明的效果，進行以下實驗:
[0027]1.樣品製備:採集新鮮鏡鯉、施氏鱘、虹鱒的魚鰭組織，將魚鰭組織平整置於濾紙上，用另一張濾紙覆蓋，將用濾紙覆蓋的魚鰭組織放於陰涼通風處，直至樣品完全乾燥，將樣品室溫防潮保存三個月。
[0028]2.採用酚氯仿法提取基因組DNA，具體如下:
[0029](I)剪取1.0cmX 1.0cm完全乾燥的樣品，剪碎後，置於1.5mL離心管內，加入400 μ L 的裂解液(200mg/L 蛋白酶 Κ，0.5%SDS, 50mmol/L EDTA, 20mg/L RNase)，55°C 消化2-3h ；
[0030](2)加入400L Tris飽和酚、氯仿、異戊醇混合溶液(25:24:1)，充分混勻10分鐘，然後 12000rpm 離心 IOmin ；
[0031 ] (3 )取上層水相，加入等體積Tri s飽和酚、氯仿、異戊醇混合溶液(25:24:1)，充分混勻10分鐘，然後12000rpm離心IOmin ；
[0032](4)取上層水相，加入等體積氯仿、異戊醇混合溶液(24:1)，充分混勻10分鐘，然後 12000rpm 離心 IOmin ；
[0033](5)取上層水相，加入2倍體積的-20°C無水乙醇，顛倒混勻數次，然後12000rpm離心IOmin ；
[0034](6)所得沉澱即為基因組DNA，棄去管中液體，加入800L70%乙醇洗滌沉澱，然後12000rpm離心5min,棄去管中液體,使沉澱自然乾燥；
[0035](7)加入適量的 IXTE (10mmol/L Tris-Cl, lmmol/L EDTA，ρΗ8.0)緩衝液，4°C保
存備用。
[0036]3.基因組DNA用0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測。
[0037]4.以提取的基因組DNA為模板，分別利用以下引物
[0038]HLJ360 上遊引物:ATGATTTCACTGCTGCTTG
[0039]下遊引物:GTCTGTCGCTCTGTCTGG
[0040]HLJE222 上遊引物:TTGCTGTCACTTCTGCTTCC[0041 ] 下遊引物:CAAAAGACGGCTGGGTAAGA
[0042]HLJSX210 上遊引物:GGGCTGTTGCATAAACGAAT[0043]下遊引物:TTGGTGTGCTTTTGTTGTGA
[0044]HLJSX215 上遊引物:GAAGGTATCCAACTCAATGCAA
[0045]下遊引物:GTGGTCAGAGTCCGTCTGGT
[0046]AF346679 上遊引物:CTCCCCAGAGATCAGACAGG
[0047]下遊引物:CCTCAACATCGGTGAATAGTG
[0048]AY039634 上遊引物:CTGAGACCACAGCACAATGC
[0049]下遊引物:GTTGCCACATGGAAATGGTTGA
[0050]進行PCR擴增反應；
[0051]PCR擴增的反應體系為15 μ L的反應體系，由下列成分組成:
[0052]
【權利要求】
1.一種用於魚類基因組DNA提取的魚鰭組織的製備方法，其特徵在於它按以下步驟進行: 一、採集新鮮魚鰭組織； 二、將魚鰭組織平整置於濾紙上，用另一張濾紙覆蓋； 三、將用濾紙覆蓋的魚鰭組織放於陰涼通風處，直至樣品完全乾燥； 四、將樣品室溫防潮保存，即完成用於魚類基因組DNA提取的魚鰭組織的製備。
2.根據權利要求1所述的一種用於魚類基因組DNA提取的魚鰭組織的製備方法，其特徵在於步驟三中還可採用 矽膠乾燥劑使魚鰭組織的乾燥脫水。
【文檔編號】C12N15/10GK103430936SQ201310403468
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年9月6日 優先權日:2013年9月6日
【發明者】李超, 魯翠雲, 程磊, 鄭先虎, 徐鵬, 孫效文 申請人:中國水產科學研究院黑龍江水產研究所