一種明日葉快速繁殖方法

2023-04-28 07:54:56 1

專利名稱：一種明日葉快速繁殖方法
技術領域：
本發明涉及植物的繁殖方法，具體涉及一種明日葉的快速繁殖方法，屬於生物技術領域。
背景技術：
明日葉(Angelica keiskei koidzmi),別名八丈草、海峰人參、長壽菜,生命力旺盛，今日摘了明日又長出芽，其命名就是出於這種強韌生命力的特性和日本八丈島的原產地。明日葉的學名是Angdica Uterus,屬名是拉丁語天使的由來,種名是有用的意思,蘊含著藥效卓著之意。明日葉屬水芹科多年生草本植物，其喜好溫暖多溼的氣候，產地以伊豆七島為中心，延伸至伊豆半島前端、三浦半島和紀伊半島等地。有機會造訪伊豆七島或伊豆半島的話，可以看到，明日葉在路旁或庭院中像雜草一樣終年茂盛，似乎與無藥效的植物一樣 沒有什麼特別，在大自然中生長著。之前當地人就懂得利用此藥草，如用以作料理。明日葉含有的天然有機鍺高於名貴人參、靈芝，也高於大棗和大蒜。有機鍺具有淨化血液、使細胞活化的功效，並能溶解附著於血管壁的膽固醇，從而防止血管老化，促進細胞新陳代謝，維持血壓正常。明日葉還含有一般植物很少有的維生素B12，以及豐富的葉綠素、十多種礦物元素、十六種人體所需的胺基酸和黃酮、泛酸、膽鹼等物質。日本醫學《大和本草》《重訂本草綱目啟蒙》(1844)以及中國的《本草綱目》等文獻都有關於明日葉強身健體的重要記載，相關研究發現長期食用和飲用明日葉，對肝炎、糖尿病、高血壓等疾病有良好的療效，尤其在癌症防治及控制方面具有神奇的功效，並且沒有副作用。我國栽培明日葉起始於20多年前，但是至今栽培面積並不大，如此有價值的食藥兩用植物卻沒有很好地得以推廣和種植，其中的一個主要原因是明日葉的繁殖問題。明日葉是多年生草本植物，種子繁殖的植株要2-4年才能結實，種子發芽率也較低，市場上明曰葉壯苗每盆賣到80-100元。因此迫切需要一種新的明日葉繁殖方法來滿足生產和開發的需求。目前有關明日葉組織培養和快速繁殖的報導較少，南京大學李佳等在論文《明日葉的組織培養與快速繁殖》(李佳，張智俊，周長芳，《植物生理學通訊》2006(06))中披露，在添加6-BA和NAA的MS培養基上誘導明日葉的帶芽莖段、葉片及葉柄，其中帶芽莖段產生愈傷組織及叢生芽，而葉片和葉柄經3個月培養未見分化。論文《明日葉的愈傷組織誘導和快速繁殖》(郭治友，羅應，錢紹方《廣東農業科學》2010(7))提出，以葉片、葉柄為外植體在N6培養基上添加6-BA和NAA，誘導近60天得到叢生芽。然而上述方法都是由叢生芽得到再生植株，其具有再生植株生根難、成苗率低、培養周期長的缺點。經檢索，尚未見有從愈傷組織分化出體細胞胚並再生出植株的報導。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是，克服現有明日葉常規繁殖方法的缺陷，提供一種明日葉快速繁殖方法，通過分化出體細胞胚並萌發再生植株的無性繁殖方法，實現明日葉的快速繁殖。
本發明是通過以下技術方案實現的—種明日葉快速繁殖方法，其特徵是，在添加激素的MS培養基上，誘導明日葉的葉片和葉柄產生愈傷組織，並且進一步形成體細胞胚，該體細胞胚經萌髮長出新植株，最後將該新植株在生根培養基上生根。所述的添加激素的MS培養基的組分為0. 5-5mg/L的玉米素、O. 5-lmg/L的NAA以及MS基本培養基。所述的添加激素的MS培養基的ph值為5. 6-6. O。所述的葉柄沒有芽點。所述的葉片和葉柄經過滅菌。所述的葉片和葉柄的滅菌方法為，將切下的明日葉的帶柄葉片分為葉片和葉柄兩部分，經流水衝洗3-5次，用添加洗衣粉的自來水衝洗2次，在75%酒精中滅菌10s，之後將葉片和葉柄經I %次氯酸鈉分別消毒3min和5min，然後用無菌水衝洗3_5次，置於無菌濾紙上吸乾。所述的新植株是指，經體細胞胚萌發的再生植株長到O. 2cm以上。所述的在生根培養基上生根是指，將新植株在1/2MS培養基或MS基本培養基上生根。所述的1/2MS培養基是指MS大量、MS微量、MS有機和鐵鹽均為MS基本培養基含量的一半，餘量為蒸餾水。與現有技術相比較，本發明最大的特點在於不同於現有明日葉採用由叢生芽得到再生植株的繁殖方法，而是首次採用了通過體細胞胚發生途徑再生植株的無性繁殖方法，以葉片、葉柄為外植體，在MS基礎培養基中添加一定濃度的玉米素及NAA，誘導分化出體細胞胚，並且經萌發得到大量再生植株，從而克服了常規明日葉培育繁殖方法中愈傷組織不易分化的不足以及解決了由叢生芽得到再生植株生根難、成苗率低的問題。採用本發明所述方法繁殖明日葉培養周期為20-25d，大大縮短了通過組織培養得到再生植株的時間，實現了明日葉的快速繁殖。本發明具有再生植株生根容易、成苗率高以及培養周期短的優點，對於明日葉快速市場化有極大的推動潛力。
具體實施例方式本發明所述的明日葉快速繁殖方法在添加激素的MS培養基上，誘導明日葉的葉片和沒有芽點的葉柄產生愈傷組織，並且進一步形成體細胞胚，該體細胞胚經萌髮長出O. 2cm以上的再生新植株，最後將該新植株在生根培養基上生根。所述的添加激素的MS培養基的組分為0. 5-5mg/L的玉米素、O. 5-lmg/L的NAA以及MS基本培養基，其ph值為5. 6-6. O。所述的葉片和葉柄經過滅菌，其滅菌方法為，將切下的明日葉的帶柄葉片分為葉片和葉柄兩部分，經流水衝洗3-5次，用添加洗衣粉的自來水衝洗2次，在75%酒精中滅菌10s，之後將葉片和葉柄經I %次氯酸鈉分別消毒3min和5min，然後用無菌水衝洗3_5次， 置於無菌濾紙上吸乾。所述的在生根培養基上生根是指，將新植株在1/2MS培養基或MS基本培養基上生根，該1/2MS培養基是指MS大量、MS微量、MS有機和鐵鹽均為MS基本培養基含量的一半，餘量為蒸餾水。下面結合實施例對本發明的技術方案作具體詳細說明，下列實施例以本發明技術方案為前提，給出了詳細的實施方式和具體的操作過程，但本發明的保護範圍不限於下述的實施例。實施例I具體方案是取明日葉帶柄的葉片，將其分成葉片和葉柄兩部分，該葉柄沒有芽點，在流水中衝洗3-5次，然後在添加了洗衣粉的自來水中衝洗2次，用75%的酒精消毒IOs,葉片和葉柄經I %次氯酸鈉分別滅菌3min和5min後,用無菌水洗3_5次,之後置於無菌濾紙上吸乾。將葉片切成O. 5cm*0. 5cm大小，葉柄切成O. 5cm大小後,轉到添加了 O. 5mg/L的玉米素和O. 5mg/L的NAA、ph值為5. 6的MS基本培養基，即添加激素的MS培養基上誘導愈傷組織的產生，培養溫度25°C，光照時間12h，20-25天從愈傷組織分化出體細胞胚，經 萌髮長出再生的新植株。將O. 2cm以上的再生新植株轉移到生根培養基上生根。該生根培養基是指1/2MS培養基，該1/2MS培養基是指MS大量、MS微量、MS有機和鐵鹽均為MS基本培養基含量的一半，餘量為蒸餾水。最後待新植株長出壯根後，馴化移栽到花盆中。實施例2具體方案是取明日葉帶柄的葉片，將其分成葉片和葉柄兩部分，該葉柄沒有芽點，在流水中衝洗3-5次，然後在添加了洗衣粉的自來水中衝洗2次，用75%的酒精消毒IOs,葉片和葉柄經I %次氯酸鈉分別滅菌3min和5min後,用無菌水洗3_5次,之後置於無菌濾紙上吸乾。將葉片切成O. 5cm*0. 5cm大小，葉柄切成O. 5cm大小後,轉到添加了 3mg/L的玉米素和O. 7mg/L的NAA、ph值為5. 8的MS基本培養基，即添加激素的MS培養基上誘導愈傷組織的產生，培養溫度25°C，光照時間12h，20-25天從愈傷組織分化出體細胞胚，經萌髮長出再生的新植株。將O. 2cm以上的再生新植株轉移到生根培養基上生根。該生根培養基是指1/2MS培養基，該1/2MS培養基是指MS大量、MS微量、MS有機和鐵鹽均為MS基本培養基含量的一半，餘量為蒸餾水。最後待新植株長出壯根後，馴化移栽到花盆中。實施例3具體方案是取明日葉帶柄的葉片，將其分成葉片和葉柄兩部分，該葉柄沒有芽點，在流水中衝洗3-5次，然後在添加了洗衣粉的自來水中衝洗2次，用75%的酒精消毒IOs,葉片和葉柄經I %次氯酸鈉分別滅菌3min和5min後,用無菌水洗3_5次,之後置於無菌濾紙上吸乾。將葉片切成O. 5cm*0. 5cm大小，葉柄切成O. 5cm大小後,轉到添加了 5mg/L的玉米素和lmg/L的NAA、ph值為6. O的MS基本培養基，即添加激素的MS培養基上誘導愈傷組織的產生，培養溫度25°C，光照時間12h，20-25天從愈傷組織分化出體細胞胚，經萌髮長出再生的新植株。將O. 2cm以上的再生新植株轉移到生根培養基上生根。該生根培養基是指MS基本培養基。最後待新植株長出壯根後，馴化移栽到花盆中。本發明首次建立了明日葉通過體細胞胚發生途徑再生植株的無性繁殖方法，通過添加不同的激素對明日葉的葉片及葉柄進行愈傷組織誘導，產生體細胞胚，胚萌發後得到大量的再生植株，從而實現了明日葉的高效快速繁殖。本發明克服了明日葉常規組織培養愈傷組織不易分化，以及由叢生芽得到再生植株生根難、成苗率低的問題，大大縮短了通過組織培養得到再生植株的時間，因而具有非常可觀的潛在市場價值。
權利要求
1.一種明日葉快速繁殖方法，其特徵是，在添加激素的MS培養基上，誘導明日葉的葉片和葉柄產生愈傷組織，並且進一步形成體細胞胚，該體細胞胚經萌髮長出新植株，最後將該新植株在生根培養基上生根。
2.根據權利要求I所述的明日葉快速繁殖方法，其特徵是，所述的添加激素的MS培養基的組分為0. 5-5mg/L的玉米素、O. 5-lmg/L的NAA以及MS基本培養基。
3.根據權利要求2所述的明日葉快速繁殖方法，其特徵是，所述的添加激素的MS培養基的Ph值為5. 6-6.0。
4.根據權利要求I所述的明日葉快速繁殖方法，其特徵是，所述的葉柄沒有芽點。
5.根據權利要求I所述的明日葉快速繁殖方法，其特徵是，所述的葉片和葉柄經過滅菌。
6.根據權利要求5所述的明日葉快速繁殖方法，其特徵是，所述的葉片和葉柄的滅菌方法為，將切下的明日葉的帶柄葉片分為葉片和葉柄兩部分，經流水衝洗3-5次，用添加洗衣粉的自來水衝洗2次，在75%酒精中滅菌10s，之後將葉片和葉柄經1%次氯酸鈉分別消毒3min和5min,然後用無菌水衝洗3_5次,置於無菌濾紙上吸乾。
7.根據權利要求I所述的明日葉快速繁殖方法，其特徵是，所述的新植株是指，經體細胞胚萌發的再生植株長到O. 2cm以上。
8.根據權利要求I所述的明日葉快速繁殖方法，其特徵是，所述的在生根培養基上生根是指，將新植株在1/2MS培養基或MS基本培養基上生根。
9.根據權利要求8所述的明日葉快速繁殖方法，其特徵是，所述的1/2MS培養基是指MS大量、MS微量、MS有機和鐵鹽均為MS基本培養基含量的一半，餘量為蒸餾水。
全文摘要
本發明公開了一種明日葉快速繁殖方法，其在添加激素的MS培養基上，誘導明日葉的葉片和葉柄產生愈傷組織，並且進一步形成體細胞胚，該體細胞胚經萌髮長出新植株，最後將該新植株在生根培養基上生根，所述添加激素的MS培養基的組分為0.5-5mg/L的玉米素、0.5-1mg/L的NAA以及MS基本培養基。本發明克服了現有明日葉組織培養繁殖方法的缺陷，實現了明日葉的快速繁殖，具有培養周期短，再生植株生根容易、成苗率高的優點，可用於明日葉的高效繁殖。
文檔編號A01H4/00GK102657084SQ20121013938
公開日2012年9月12日 申請日期2012年5月7日 優先權日2012年5月7日
發明者曹越平, 薄路花, 金加清 申請人:上海交通大學